SK282675B6 - Použitie genetickej modifikácie v géne pre beta3 podjednotku ľudského G-proteínu na diagnostiku chorôb - Google Patents

Použitie genetickej modifikácie v géne pre beta3 podjednotku ľudského G-proteínu na diagnostiku chorôb Download PDF

Info

Publication number
SK282675B6
SK282675B6 SK1573-98A SK157398A SK282675B6 SK 282675 B6 SK282675 B6 SK 282675B6 SK 157398 A SK157398 A SK 157398A SK 282675 B6 SK282675 B6 SK 282675B6
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
leu
ala
ser
gly
asp
Prior art date
Application number
SK1573-98A
Other languages
English (en)
Other versions
SK157398A3 (en
Inventor
Winfried Siffert
Original Assignee
Winfried Siffert
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Winfried Siffert filed Critical Winfried Siffert
Publication of SK157398A3 publication Critical patent/SK157398A3/sk
Publication of SK282675B6 publication Critical patent/SK282675B6/sk

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Použitie genetickej modifikácie v géne pre beta3 podjednotku ľudského G-proteínu na diagnostiku chorôb je založené na stanovení nukleotidovej bázy v pozícii 825 v SEQ ID NO:1, kde, ak sa nachádza tymín, je prisúdené zvýšené riziko vzniku ochorenia súvisiaceho s disreguláciou G-proteínu.ŕ

Description

Oblasť techniky
Predložený vynález sa týka spôsobu diagnózy chorôb genetickou analýzou, obzvlášť analýzou génov na podjednotky ľudských guanín nukleotid-väzbových proteínov (G-proteínov).
Doterajší stav techniky
Heterotriméme guanín nukleotid-väzbové proteíny (G-proteíny) majú mimoriadny význam vo vnútrobunkovej signálovej transdukcii. Sprostredkúvajú prenos signálov medzi bunkami po stimulácii hormónových receptorov a iných receptorov, ktoré sa podrobia konformačnej zmene po aktivácii receptora. Toto vedie k aktivácii G-proteínov, ktoré môžu následne aktivovať alebo inhibovať vnútrobunkové afektory (napr. iónové kanály, enzýmy). Heterotriméme G-proteíny sa skladajú z troch podjednotiek, α, β a y podjednotiek. Dosiaľ bolo detegovaných niekoľko rozličných a podjednotiek, 5 β podjednotiek a okolo 12 y podjednotiek, a to biochemickými a molekulárnymi biologickými metódami (Bimbaumer, L. and Birmbaumer, M.: Signál transduction by G proteins: edition 1994, J. Recept. Res. 15: 213 - 252, 1995; Offermanns, S. and Schultz, G.: Complex information processing by the transmembrane signaling systém involving G proteins, Naunyn Schmiedebergs Árch. Pharmacol. 350: 329 - 338, 1994; Niimberg, B., Gudermann, T. and Schultz, G.: Receptors and G proteins as primary components of transmembrane signál transduction. Part 2. G proteins: structure and function. J. Mol. Med. Ί3: 123 - 132, 1995; Neer, E. J.: Heterotrimeric G proteins: Organizers of Transmembrane Signals. Celí 80: 249 - 257, 1995; Rens-Domiano, S. and Hamm, H. E.: Structural and fúnctional relationships of heterotrimeric G-proteins. FASEBJ.9-. 1059- 1066,1995).
Receptorom sprostredkovaná aktivácia určitých a podjednotiek sa môže blokovať predbežným spracovaním s toxínom čierneho kašľa (PTX). Tieto podjednotky zahŕňajú najmä a izoformy ail, ai2 a ai3, a rozličné oa podjednotky. G-proteíny týchto typov sa označujú aj ako PTX-citlivé G-proteíny.
Zistili sme, že genetická modifikácia v géne na β3 podjednotky ľudských G-proteínov je vhodná na diagnostiku chorôb. Táto genetická modifikácia je obzvlášť vhodná na stanovenie rizika vyvinutia nepravidelností spojených s G-proteínovou disreguláciou.
Tento vynález sa ďalej týka spôsobu stanovenia relatívneho rizika vyvinutia nepravidelností spojených s G-proteínovou disreguláciou pri subjekte, ktorý zahŕňa porovnanie génovej sekvencie na β3 podjednotku ľudských G-proteínov subjektu s génovou sekvenciou SEQ ID NO: : 1, a v prípade, že tymín (T) sa nachádza v pozícii 825, prisúdenie zvýšeného rizika rozvoja choroby subjektu.
Genetická modifikácia, ktorá bola nájdená, je umiestnená v géne β podjednotky ľudského G-proteínu. Tento gén bol opísaný Levinom a i. (Proc. Natl. Acad. Sci USA, 87 (1990) 2329 - 2333). Kódová oblasť má Ser kodón (TCC) v pozícii 275, kým subjekty so zvýšeným rizikom choroby, spojeným s G-proteínovou disreguláciou majú kodón TCT, ktorý má podobne kódy na Ser, v tejto pozícii. Genetická modifikácia je základná substitúcia v pozícii 825, v ktorej cytozín (C) je nahradený tymínom (T). Ale táto zmena bázy je „tichá“ na aminokyselinovej úrovni, t. j. to nevedie k zavedeniu inej aminokyseliny do tejto pozície. Sekvencia nájdená v subjektoch so zvýšeným rizikom choroby je opísaná v SEQ IĎ NO: 1 v súpise sekvencií.
Genetická modifikácia, ktorá bola nájdená, sa obyčajne vyskytuje v heterozygotnej forme.
Nepravidelnosti spojené s G-proteínovou disreguláciou sú stanovené ako choroby, pri ktorých G-proteín je zahrnutý v transdukcii signálu a nevykonáva svoju funkciu fyziologickým spôsobom.
Disregulácia môže mať množstvo príčin, napríklad modifikáciu v štrukturálnom géne alebo modifikované vyjadrenie génu.
Nepravidelnosti zahŕňajú kardiovaskulárne choroby, metabolické poruchy a imunologické choroby.
Kardiovaskulárne choroby, ktoré by sa mohli spomenúť, sú: hypertenzia, hypertenzia v tehotenstve (gestóza), koronárna srdcová choroba, lokalizovaná a/alebo všeobecná ateroskleróza, zúženie ciev, restenóza po revaskulámych procedúrach (napr. PTCA s cievnymi implantáciami alebo bez nich), tendencia k mŕtvici alebo trombóze a zvýšené hromadenie trombocytov.
Ako metabolické poruchy sa môžu spomenúť: metabolický syndróm, inzulínová rezistencia a hyperinzulinémia, cukrovka typu II, cukrovkové komplikácie (napr. nefropatia, neuropatia, relinopatia atď.), poruchy lipidného metabolizmu, poruchy centrálnej chemorecepcie (znášanlivosť CO2, znášanlivosť acidózy, náhla dojčenská smrť (SIDS)).
Ako imunologické choroby sa môžu spomenúť: poškodená odolnosť imunitnej citlivosti tela (utváranie imunoglobulínov, agresivita T-buniek a NK-buniek), poškodená všeobecná tendencia k proliferácii, zahŕňajúca schopnosť liečenia rán, tendencia k rozvoju tumorov a proliferácia zahŕňajúca metastázový potenciál alebo malígne transformované bunky, trvanie latentnej periódy po infekcii HIV do stavu, keď choroba sa klinicky prejaví, Kaposiho sarkóm, tendencia k cirhóze pečene, znášanlivosť transplantátu a odmietnutie transplantátu.
Použitie genetických mutácii podľa vynálezu je osobitne vhodné na stanovenie rizika vzniku hypertenzie.
Ďalej sa vynález týka vytvárania transgénnych zvierat prechovávajúcich opísané genetické mutácie. Transgénne zvieratá tohto typu majú veľký význam osobitne ako modely zvierat na výskum a terapiu opísaných nepravidelností. Spôsoby generovania transgénnych zvierat sú odborníkom všeobecne známe.
Pri spôsobe podľa vynálezu na stanovenie pomerného rizika rozvoja choroby sa zo subjektu odoberie telový materiál obsahujúci genetickú informáciu o subjekte. Toto sa uskutoční spravidla odobratím krvi a následným izolovaním nukleovej kyseliny.
Štruktúra génu na β3 podjednotku G-proteínu sa stanoví z nukleovej kyseliny izolovanej zo subjektu a porovná sa so sekvenciou indikovanou v SEQ ID NO: 1.
Štruktúra génu môže byť stanovená sekvenovaním nukleovej kyseliny. Toto sa môže uskutočniť buď priamo z genómovej DNA, alebo po amplifíkácii nukleovej kyseliny, napríklad PCR technikou.
Štruktúra génu sa môže stanoviť na genómovej úrovni alebo ešte na mRNA alebo cDNA úrovni.
Výhodne sa stanoví sekvenovaním po PCR amplifíkácii z cDNA. Printery vhodné na PCR môže odborník ľahko určiť zo sekvencií opísaných v SEQ ID NO: 1. Postup je výhodne taký, že v každom prípade sa vyberie primér viažuci reťazec a komplementárny reťazec pred príslušnou pozíciou báz 825 a za ňou.
Ale na porovnanie génov sa môžu použiť taktiež iné spôsoby, napríklad selektívna hybridizácia alebo vhodné mapovanie s reštrikčnými enzýmami. Uvedená zmena bázy C -> T v pozícii 825 vedie k strate miesta štiepenia reš2 trikčného enzýmu Dsa I, ktorý sa používa takisto na detegovanie tohto genetického polymorfizmu.
Ak subjekt má tymín (T) v pozícii 825, treba mu pripísať väčšie riziko vzniku ochorenia ako subjektu s cytozínom (C) v tejto polohe.
Vynález je ďalej ilustrovaný týmito príkladmi.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Detekcia genetickej modifikácie u hypertonikov sekvenovaním
Zvýšená citlivosť na aktiváciu PTX-senzitívnych G-proteínov bola detegovaná pri predbežných výskumoch na pacientoch s podstatným zvýšením krvného tlaku. Táto detekcia bola možná v imortalizovaných bunkách z pacientov majúcich ako fenotypový marker zvýšenú aktivitu Na/H meniča. Zvýšená citlivosť aktivácie PTX-citlivých G-proteínov má dôležité dôsledky na bunkové funkcie. Tieto zahŕňajú zvýšené vytváranie vnútrobunkových molekúl prenášajúcich informácie (napr. inozitol 1,4,5-trisfosfát), zvýšené uvoľňovanie vnútrobunkových Ca2+ iónov, zvýšené vytváranie imunoglobulínov a zvýšený stupeň rastu buniek. Pretože tieto zmeny môžu byť detegované v imortalizovaných bunkách a po dlhodobej kultivácii buniek, môže sa predpokladať, že táto modifikácia je geneticky fixovaná (Rosskopf, D., Frômter, E., Siffert, W.: Hypertensive sodium-proton exchanger phenotype persists in immortalized lymphoblasts from essential hypertensive patients - a celí culture model for human hypertension. J. Clin. Invest. 92: : 2553 - 2559, 1993; Rosskopf, D., Hartung, K., Hense, I, Siffert, W: Enhanced immunoglobulin formation of immortalized B cells Írom hypertensive patients. Hypertension 26: 432 - 435, 1995; Rosskopf, D., Schroder, K. - J., Siffert, W.: Role of sodium-hydrogen exchange in the proliferation of immortalized lymphoblasts from patients with essential hypertension and normotensive subjects. Cardiovasc. Res. 29: 254 - 259, 1995; Siffert, W., Rosskopf, D., Moritz, A., Wieland, T., Kaldenberg-Stasch, S., Kettler, N., Hartung, K., Beckmann, S., Jakobs, K. H.: Enhanced G protein activation in immortalized lymphoblasts from patients with essential hypertension. J. Clin. Invest. 96: 759 -766,1995).
RNA bola pripravená štandardnými spôsobmi z línií imortalizovaných buniek z hypertonikov a bola transkribovaná do cDNA použitím reverznej transkriptázy. Použijúc polymému reťazovú reakciu (PCR) cDNA kódujúcu podjednotku β3 G-proteínu bola amplifikovaná a sekvenovaná. Nasledujúce oligonukleotidové priméry boli využité na PCR:
5'- TGG GGG AGA TGG AGC AAC TG a 5'- CTG CTG AGT GTG TTC ACT GCC.
Porovnaním so sekvenciou uverejnenou Levinom a i. (Levine, M. A. Smallwood, P. M., Moen, P. T. Jr., Helman, L. J., Ahn, T. G.: Molecular cloning of β3 subunit, a third form of the G protein β-subunit polypeptide. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87(6): 2329 - 2333, 1990) bol nájdený rozdiel v cDNA z buniek hypertonikov: nukleotid 825 cytozín (C) v oblasti kódujúcej sekvencie je nahradený tymínom (T) (nukleotid 1 zodpovedá báze A v ATG štartovacom kodóne). Táto zámena bázy vedie k tichému polymorfizmu, t. j. aminokyselina zakódovaná zodpovedajúcim tripletom bázy (serín) nie je zmenená pri porovnaní s originálnou sekvenciou. Nájdená DNA sekvencia je opísaná v SEQ ID NO: 1.
Príklad 2
Detekcia genetickej modifikácie u hypertonikov reštriktívnou enzýmovou analýzou
Obrázok znázorňuje porovnanie génov z normotonikov a hypertonikov reštriktívnou enzýmovou analýzou. V tomto prípade cDNA kódujúca β3 z buniek normotonikov (NT) a hypertonikov (HT), ktorá sa amplifikovala pomocou PCR, bola vystavená reštriktívnej enzýmovej analýze použitím enzýmu Dsa I. Produkty reakcie boli frakcionované v agarózovom géli, výsledok je znázornený na obrázku.
Úplné obmedzenie β3 cDNA z buniek normotonikov po digescii s Dsa I je jasne zrejmé z obrázka. cDNA z buniek hypertonikov je len čiastočne oddelené pomocou Dsa I. Nehľadiac na produkty delenia, ktoré sú očakávané, je tam aj nedelený produkt PCR. Referenčné fragmenty (markery) sú zakreslené naľavo a napravo na porovnanie rozmerov. Štyri z piatich tu znázornených DNA sekvencií z hypertonikov ukazujú zámenu bázy opísanú a sú heterozógne pre túto modifikáciu.
SÚPIS SEKVENCIÍ (1) VŠEOBECNÁ INFORMÁCIA:
(i) PRIHLASOVATEĽ:
(A) MENO: BASF Aktiengesellschaň (B) ULICA: Carl-Bosch-Strasse 38 (C) MESTO: Ludwigshafen (E) ŠTÁT: Spolková republika Nemecko (F) POŠTOVÉ SMEROVACIE ČÍSLO: D-67056 (G) TELEFÓN: 0621/6048526 (H) FAX: 0621/6043123 (I) TELEX: 1762175170 (ii) NÁZOV PRIHLÁŠKY: Spôsob diagnóstikovanin a nepravidelnosti analýzou génov (iii) POČET SEKVENCIÍ: 2 (iv) POČÍTAČOVO ČITATEĽNÁ FORMA (A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) POČÍTAČ: IBM PC kompatibilný (C) OPERAČNÝ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS:
(D) SOFTVÉR: Patentln Release #1.0, Verzia #1.25 (EPA) (2) INFORMÁCIA PRE SEQ ID NO: 1:
(i) SEKVENČNÉ CHARAKTERISTIKY:
(A) DĹŽKA: 1517 bázových párov (B) TYP: Kyselina nukleová (C) VETVENIE: Dvojité (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) MOLEKULOVÝ TYP: cDNA pre mRNA (iii) HYPOTETICKÝ: NO (iv) PROTIVNEM: NO (vi) PÔVODNÝ PRAMEŇ:
(A) ORGANIZMUS: Homo sapicns (ix) ZNAKY:
(A) NÁZOV/KĽÚČ: CDS (B) POLOHA: 1..1024 (xi) SEKVENČNÝ OPIS: SEQ ID NO: 1:
ATG GGG
Met Gly
CAG ATT
Gin íle
CTG GTG Leu Val
CGG ACG
Arg Thr so
ACT GAT Thr Asp
GAG ATG Glu Met
GCA GAT Ala Asp
TCT GGC Ser Gly
TTA AGG Leu Arg
TCT AAG Ser Lys
GAG CAA Glu Gin
GCC AGG
Ala Arg
CTA GAG Leu Glu
GGA CAC
Gly Bis
CTG CTG Leu Leu
CTG CGT Leu Arg
AAA GCC Lys Ala
GTG GTG Val Val
CTG GCC Leu Ala ss
GTA AGT Val Ser
CAG GAA Gin Glu
TGT GCT Cys Ala 25
GCA CGA Gly Arg
AAG ATT Lys íle
GCC TCG Ala Ser
GCG GAG CAG Ala Glu Gin
GAC GTT ACT
Asp Val Thr
ATG
Het
ATG Met
GTC CAG Val Gin
TAC GCC Tyr Ala
CAA GAT Gin Asp
CTC Leu
CTG
Leu 30
CGG
Arg
CAC
His
GGG AAG
Gly Lys
AAG AAG Lys Lys
GCA GAG Ala Glu
ACG CGG Thr Arg
TGG GCC
Trp Ala
CTG ATC Leu íle
4
192
240
GTC TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTC CAC GCC ATC CCA CTG CGC 296
Vsi Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala íle Pro Leu Arg
«5 90 95
TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG 336
Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val
100 10S 110
GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ATG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC 394
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser íle Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT 437
Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala Kla Thr Gly
130 135 140
TAT CTC TCC TGC TGC ccc TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC 430
Tyr Leu Ser Cye Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn íle Val Thr Ser
145 150 155 160
TCC GGG GAC ACC ACG TGT GCC TTG TGG GAC ATT GAG ACT GGG CAG CAG 528
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp íle Glu Thr GLy Gin Gin
1G5 170 17S
AAG ACT GTA TTT GTG GGA CAC ACG GGT GAC TGC ATG AGC CTG GCT GTG 5? 6
Lys Thr Val Phe Val Gly His Thr Gly Asp Cys Het Ser Leu Ala Val
180 ias 190
TCT CCT GAC TTC AAT CTC TTC ATT TCG GGG GCC TGT GAT CCC AGT GCC 6 2 4
Ser Pro Asp Phe Asn Leu Phe íle Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala
195 200 205
AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC 6 7 2
Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly
210 21S 220
CAC GAG TCG GAC ATC AAC GCC ATC TGT TTC TTC CCC AAT CGA CAG GCC 720
His Glu Ser Asp íle Asn Ala íle Cys Phe Phe Pro Asn Gly Glu_ Ala
225 '230 23S 240
ATC TGC ACG GGC TCG GAT GAC GCT TCC TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG 768
íle Cys Thr Gly ser ASp Asp Ala ser Cya Arg Leu Phe Asp Leu Arg
245 250 255
GCA GAC CAC GAG CTG ATC TCC TTC TCC CAC GAG AGC ATC ATC TGC GGC Θ16
Ala Asp Gin Glu Leu íle Cys Phe Ser His Glu Ser íle íle Cys Gly
250 265 270
ATC ACG TCT GTG GCC TTC TCC CTC AGT GGC CGC CTA CTA TTC CCT GGC 864
íle Thr Ser Val Ala Phe Ser Leu Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly
275 280 285
TAC GAC GAC TTC AAC TGC AAT GTC TGG GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT 912
Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Val Trp Asp Ser Met Lys Ser G1U Arg
290 295 300
GTG GGC ATC CTC TCT GGC CAC GAT AAC AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC 960
Val Gly íle Leu Ser Gly His Asp Asn Arg Val Ser Cys Leu Gly Val
303 310 315 320
ACA GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC ACA GGT TCC TCG GAC AGC TTC CTC 1008
Thr Ala Asp Gly Het Ala Val Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu
325 330 335
AAA ATC TGG AAC TGA G GAGCCTGGAG AAAGGGAAGT GGAAGGCAGT i GAACACACTC 1064
Lys íle Trp Asn *
340
Tys
Asp íle Thr
Tyr Asp
290 Val Gly 305
Thr Ala
Lys íle
Thr Gly
Gin Glu
260
Ser Val
275
Asp Phe íle Leu
Asp Gly
Trp Asn
340
Ser
245
Leu íle
Ala Phe
Asn Cys
Ser Gly
310
Met Ala
325
Asp Asp
Cys
Ser
Asn
295
His
Ala
Phe
Leu
260
Val
Asp
Val Ala
Ser Cys
250
Ser His
265
Ser Gly Trp Asp Asn Arg Thr Gly
330
Arg Leu
Glu Ser
Arg Leu
Ser Het
300 val Ser 315 Ser Trp

Claims (12)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    AGCAGCCCCC TGCCCGACCC CATCTCATTC TCCCACTAAG CTTTCTCCTT TGAGGGCAGT AGCATCAGGG ACACAGGGGC AAAGAACTGC CAGTCCTCAC AGCC7CTCCC TTAATGAGCA AGGCCCAGCA GACT7GAGTC TGAGGCCCCA CCTTTGTCCA GGCCTGGGTG GTATAGGGCG CTAGGGTCCT GGCCCTCTTC TTATTCATGC TAAGACACCT GCAATAAAGT GTAGCACCCT
    ACGTGTTCTC TTCTATATTC CGGGTGCCAT 1124 GGGGAGCATG GGACTGTGCC TTTGGGAGGC 1194 CCCATCTCCT CCCATGGCCT TCCCTCCCCA 1244 AGGACAACCT GCCCCTCCCC AGCCCTTTGC 1304 GGCCCTAGGA TTCCTCCCCC AGAGCCACTA 1364 TTTGGCCCTG TGACTATGGC TCTGGCACCA 1424 TTTCTCCTTT TTCTACCTTT TTTTCTCTCC 1464 GGT 1517 (2) INFORMÁCIA PRE SEQID NO: 2:
    (i) SEKVENČNÉ CHARAKTERISTIKY:
    (A) DĹŽKA: 341 aminokyselín (B)TYP: Aminokyselina (D) TOPOLÓGIA: lineárna (ii) MOLEKULOVÝ TYP: Proteín (xi) SEKVENČNÝ OPIS: SEQ ID NO: 2:
    Met 1 Gly Glu Met Glu 5 Gin Leu Arg Gin Glu Ala 10 Glu Gin Leu Lys 15 Lys Gin íle Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu 20 25 30 Leu Val Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg 35 40 45 Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys íle Tyr Ala Met His Trp Ala 50 55 60 Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu íle 65 70 75 80 Val Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala íle Pro Leu Arg 85 90 95 Ser Ser Trp Val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Val 100 105 110 Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser íle Tyr Asn Leu Lys Ser 115 120 125 Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly 130 135 140 Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn íle Val Thr Ser 145 150 155 160 Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp íle Glu Thr Gly Gin Gin 165 170 175 Lys Thr Val Phe Val Gly His Thr Gly Asp Cys Met Ser Leu Ala Val 180 185 190 Ser Pro Asp Phe Asn Leu Phe íle Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala 195 200 205 Lys Leu Trp Asp Val Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly 210 215 220 His Glu Ser Asp íle Asn Ala íle Cys Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala 225 230 235 240
    Phe Asp íle íle
    270 Leu Phe 265 Lys Ser
    Cys Leu
    Asp Sec
    Leu Arg
    255
    Cys Gly
    Ala Gly
    Glu Arg
    Gly Val
    320
    Phe Leu
    335
    1. Použitie genetickej modifikácie v géne pre β3 podjednotku ľudského G-proteínu na in vitro diagnostiku chorôb.
  2. 2. Použitie genetickej modifikácie v géne pre β3 podjednotku ľudského proteínu na stanovenie rizika rozvoja ochorenia spojeného s disreguláciou G-proteínu.
  3. 3. Použitie podľa nároku 2, kde genetická modifikácia je v kodóne pre aminokyselinu 275 v SEQ ID NO: 1.
  4. 4. Použitie podľa nároku 3, kde je cytozín nahradený tymínom v pozícii 825 v SEQ ID NO: 1.
  5. 5. Použitie podľa nároku 2, kde ochorenie predstavuje kardiovaskulárnu chorobu, metabolickú poruchu alebo imunologickú chorobu.
  6. 6. Použitie podľa nároku 2, kde ochorenie predstavuje hypertenziu.
  7. 7. Spôsob stanovenia relatívneho rizika vyvinutia ochorení subjektu spojených s G-proteínovou disreguláciou, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa porovnanie génovej sekvencie pre β3 podjednotku ľudského G-proteínu subjektu s génovou sekvenciou SEQ ID NO: 1, a v prípade že sa v pozícii 825 nachádza tymín, prisúdenie zvýšeného rizika vzniku choroby subjektu.
  8. 8. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že porovnanie génov sa vykonáva sekvenovaním.
  9. 9. Spôsob podľa nároku 8, vyznačujúci sa tým, že génová sekvencia, ktorá zahŕňa pozíciu 825, je amplifikovaná pred sekvenovaním.
  10. 10. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že porovnanie génov sa vykonáva hybridizáciou.
  11. 11. Spôsob podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že porovnanie génov sa vykonáva štiepením pomocou reštrikčných enzýmov.
  12. 12. Spôsob podľa nároku 11, vyznačujúci sa t ý m , že sa používa reštrikčný enzým Dsal.
SK1573-98A 1996-05-14 1997-05-02 Použitie genetickej modifikácie v géne pre beta3 podjednotku ľudského G-proteínu na diagnostiku chorôb SK282675B6 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19619362A DE19619362A1 (de) 1996-05-14 1996-05-14 Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen
PCT/EP1997/002250 WO1997043442A1 (de) 1996-05-14 1997-05-02 VERWENDUNG EINER GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE HUMANE G-PROTEIN β3-UNTEREINHEIT ZUR DIAGNOSTIK VON ERKRANKUNGEN

Publications (2)

Publication Number Publication Date
SK157398A3 SK157398A3 (en) 2000-01-18
SK282675B6 true SK282675B6 (sk) 2002-11-06

Family

ID=7794252

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1573-98A SK282675B6 (sk) 1996-05-14 1997-05-02 Použitie genetickej modifikácie v géne pre beta3 podjednotku ľudského G-proteínu na diagnostiku chorôb

Country Status (23)

Country Link
US (2) US6242181B1 (sk)
EP (1) EP0939833B1 (sk)
JP (1) JP2000509990A (sk)
KR (1) KR20000010988A (sk)
CN (1) CN1218515A (sk)
AT (1) ATE212066T1 (sk)
AU (1) AU732535B2 (sk)
BG (1) BG63214B1 (sk)
BR (1) BR9709245A (sk)
CA (1) CA2252921C (sk)
CZ (1) CZ292691B6 (sk)
DE (2) DE19619362A1 (sk)
EA (1) EA199800959A1 (sk)
HU (1) HUP9903661A3 (sk)
IL (1) IL126511A (sk)
NO (1) NO985280D0 (sk)
NZ (1) NZ332279A (sk)
PL (1) PL185779B1 (sk)
SK (1) SK282675B6 (sk)
TR (1) TR199802300T2 (sk)
UA (1) UA56164C2 (sk)
WO (1) WO1997043442A1 (sk)
ZA (1) ZA974102B (sk)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19637518A1 (de) * 1996-09-13 1998-04-09 Winfried Siffert PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung
AU3304499A (en) * 1998-02-20 1999-09-06 City Of Hope Association of the serotonin transport (htt) gene with cardiovascular disease and longevity
JP2002525051A (ja) * 1998-09-10 2002-08-13 ジフェルト，ビンフリート ヒトｇタンパク質のｇベータ３サブユニットのための遺伝子内の遺伝子変更
WO2001057246A1 (de) * 2000-02-03 2001-08-09 Winfried Siffert VERWENDUNG EINER GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE β3-UNTEREINHEIT DES HUMANEN G-PROTEINS
JP4140329B2 (ja) 2002-09-25 2008-08-27 財団法人名古屋産業科学研究所 高血圧のリスク診断方法
EP2463384A3 (en) 2010-12-07 2013-03-13 Medtronic, Inc. Diagnostic kits, genetic markers and methods for SCD or SCA therapy selection
WO2019191010A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-03 Aardvark Therapeutics Inc. Personalized treatment method for congestive heart failure

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19637518A1 (de) * 1996-09-13 1998-04-09 Winfried Siffert PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung
JP2002525051A (ja) * 1998-09-10 2002-08-13 ジフェルト，ビンフリート ヒトｇタンパク質のｇベータ３サブユニットのための遺伝子内の遺伝子変更

Also Published As

Publication number Publication date
TR199802300T2 (xx) 1999-02-22
AU2890297A (en) 1997-12-05
US20020142311A1 (en) 2002-10-03
CN1218515A (zh) 1999-06-02
BR9709245A (pt) 1999-08-10
DE59706027D1 (de) 2002-02-21
AU732535B2 (en) 2001-04-26
JP2000509990A (ja) 2000-08-08
EP0939833B1 (de) 2002-01-16
BG63214B1 (bg) 2001-06-29
PL185779B1 (pl) 2003-07-31
CA2252921A1 (en) 1997-11-20
CZ292691B6 (cs) 2003-11-12
ATE212066T1 (de) 2002-02-15
CA2252921C (en) 2008-07-08
ZA974102B (en) 1998-11-13
NO985280L (no) 1998-11-12
DE19619362A1 (de) 1997-11-20
US6242181B1 (en) 2001-06-05
HUP9903661A2 (hu) 2000-03-28
SK157398A3 (en) 2000-01-18
HUP9903661A3 (en) 2000-09-28
UA56164C2 (uk) 2003-05-15
BG102878A (en) 1999-05-31
EP0939833A1 (de) 1999-09-08
WO1997043442A1 (de) 1997-11-20
NZ332279A (en) 2000-04-28
EA199800959A1 (ru) 1999-06-24
NO985280D0 (no) 1998-11-12
IL126511A0 (en) 1999-08-17
KR20000010988A (ko) 2000-02-25
PL330014A1 (en) 1999-04-26
IL126511A (en) 2003-11-23
CZ369698A3 (cs) 1999-08-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Velazquez et al. A protein tyrosine kinase in the interferon αβ signaling pathway
Linton et al. Dual bidirectional promoters at the mouse dhfr locus: cloning and characterization of two mRNA classes of the divergently transcribed Rep-1 gene
US5514545A (en) Method for characterizing single cells based on RNA amplification for diagnostics and therapeutics
Messer et al. Polymorphic structure of the tumor necrosis factor (TNF) locus: an NcoI polymorphism in the first intron of the human TNF-beta gene correlates with a variant amino acid in position 26 and a reduced level of TNF-beta production.
AU693944B2 (en) Allelic variation of the serotonin 5HT2C receptor
McGregor et al. Molecular cloning of the cDNA for human TrkC (NTRK3), chromosomal assignment, and evidence for a splice variant
US6551812B1 (en) Compositions and methods relating to the peroxisomal proliferator activated receptor-α mediated pathway
WO1998039410A1 (en) IλB $i(KINASES)
Taparowsky et al. Oncogene-mediated multistep transformation of C3H10T1/2 cells
US6458542B1 (en) Method of screening for susceptibility to drug-induced cardiac arrhythmia
EP1644528A2 (en) Variants of human taste receptor genes
Wan et al. Conserved Chromosomal Location and Genomic Structure of Human and Mouse Fatty-Acid Amide Hydrolase Genes and Evaluation ofclasperas a Candidate Neurological Mutation
Martindale et al. Comparative genomic sequence analysis of the Williams syndrome region (LIMK1-RFC2) of human chromosome 7q11. 23
SK282675B6 (sk) Použitie genetickej modifikácie v géne pre beta3 podjednotku ľudského G-proteínu na diagnostiku chorôb
US20160282350A1 (en) Methods of diagnosing cancer
Shimizu et al. Report of the fifth international workshop on human chromosome 21 mapping 1994
US6576444B2 (en) IRAK3 polynucleotides
US5869247A (en) Natural resistance associated macrophage protein and uses thereof
US6251853B1 (en) PTX sensitive G proteins, the production and use thereof
CA2248144C (en) Horse endothelin-b receptor gene and gene products
US20070042433A1 (en) Neuregulin protein regulation of synaptic proteins
Lappalainen et al. Allelic variation of the serotonin 5HT 2c receptor
JP2005176601A (ja) Ｃｙｐ２ｄ６変異遺伝子
WO2000075294A1 (en) Glycogenin, glycogenin pseudogenes, and uses thereof to determine risk for developing type 2 diabetes