BG63214B1 - Приложение на мутация в гена на човешката g-протеинова бета 3-субединица за диагностициране на заболявания - Google Patents

Приложение на мутация в гена на човешката g-протеинова бета 3-субединица за диагностициране на заболявания Download PDF

Info

Publication number
BG63214B1
BG63214B1 BG102878A BG10287898A BG63214B1 BG 63214 B1 BG63214 B1 BG 63214B1 BG 102878 A BG102878 A BG 102878A BG 10287898 A BG10287898 A BG 10287898A BG 63214 B1 BG63214 B1 BG 63214B1
Authority
BG
Bulgaria
Prior art keywords
sir
ala
protein
leu
gly
Prior art date
Application number
BG102878A
Other languages
English (en)
Other versions
BG102878A (bg
Inventor
Winfried Siffert
Original Assignee
Winfried Siffert
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Winfried Siffert filed Critical Winfried Siffert
Publication of BG102878A publication Critical patent/BG102878A/bg
Publication of BG63214B1 publication Critical patent/BG63214B1/bg

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Изобретението се отнася до използване на генетична промяна в гена на човешкия G-протеин 3-подединица за диагностика на заболявания.

Description

Изобретението се отнася до метод за диагностика на заболявания с помощта на генетичен анализ, по-специално на анализ на гени за субединици на човешките свързващи гуаниннуклеотид протеини (G-протеини).
Предшестващо състояние на техниката
Хетеротримерните свързващи гуаниннуклеотид протеини (G-протеини) имат изключително значение при вътрешноклетьчната трансдукция на сигнали. Те спомагат за предаването на външноклетъчни сигнали след стимулацията на хормонални и други рецептори, които след активирането на рецепторите претърпяват конформационна промяна. Това води до активиране на G-протеини, които впоследствие могат да активират или възпират вътрешноклетьчни ефектори (например йонни канали, ензими). Хетеротримерните G-протеини са съставени от три субединици, а именно субединици α, β и γ. Досега с помощта на биохимични и молекулярно-биологични методи е доказано съществуването на няколко различни а-субединици, на 5 β-субединици и на около 12 γ-субединици (Bimbaumer, L. и Bimbaumer, М. Signal trandsduction by G proteins: 1994 edition. J. Recept. Res. 15:213β252, 1995; Offermanns, S. and Schultz, G. Complex information processing by the transmembrane signaling system involving G proteins. Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 350:329-338,1994; Numberg, B., Gudermann, T., and Schultz, G. Receptors and G proteins as primery components of transmembrane signal transduction. Part 2. G proteins: structure and function. J. Mol. Med. 73:123-132, 1995; Neer, E. J. Heterotrimeric G proteins: Organizers of Transmembrane Signals. Cell 80:249-257, 1995; Rens-Domiano, S. and Hamm, Η. E. Structural and functional relationships of heterotrimeric Gproteins. FASEB J. 9:1059-1066, 1995).
Същност на изобретението
Медиираното от рецептори активиране на определени субединици може да бъде възпряно чрез предварителна обработка с пертусистоксин (РТХ). Към тях се числят по-специално α-изоформите ail, ai2 и ai3, както и различни о-субединици. Тези G-протеини се наричат и “чувствителни към РТХ G-протеини”.
Установено е, че една мутация в гена на човешката G-протеинова бЗ-субединица е подходяща за диагностика на заболявания. Тази мутация е подходяща най-вече за определяне на риска от заболяване от болест, свързана с погрешното управление на G-протеините.
Друг обект на изобретението е метод за определяне на относителния риск от заболявания, свързани с неправилно управление на Gпротеина при лице, подложено на пробни тестове, състоящ се в това, че се сравнява генетичната последователност на човешката G-протеинова 63-субединица на лицето, подложено на пробни тестове с генетичната последователност SEQ ID NO: 1 и в случай, че на позиция 825 е налице тимин (Т), за лицето, подложено на пробни тестове, се определя висок риск от заболяване.
Установената мутация е разположена в гена на човешката G-протеинова 63-субединица. Този ген е описан от Levine et al. (Proc. Natl. Acad. Sci USA, Vol 87, стр. 2329-2333, (1990). Кодиращият обсег е в позиция 275 Ser-Codon (ТСТ), докато лица, подложени на пробни тестове и показали повишен риск от заболяване, което е свързано с погрешно управление на G-протеина, имат на тази позиция също кодиращия за Ser Codon ТСТ. Мутацията е обмен на бази в позиция 825, при което Cytosin (С) се замества с Thymin (Т). На аминокиселинно ниво този обмен на бази е все пак “ням”, т.е. не води до вграждането на друга аминокиселина в тази позиция. Откритата при лица, подложени на пробни тестове и имащи повишен риск от заболяване, последователност е представена в SEQ ID N0:1 от секвенционния листинг.
Мутацията се появява по правило в хетерозиготна форма.
Под болести, свързани с погрешно управление на G-пртеина, следва да се разбират такива заболявания, при които G-протеинът е включен в трансдукцията на сигнали и не изпълнява своята функция по физиологичен начин.
Погрешното управление може да се дъл жи на редица причини, например промяна в структурния ген или променена генетична експресия.
В случая става дума за заболявания на сърдечно-свдовата система, за смущения на обмяната на веществата и за имунни заболявания.
Като заболявания на сърдечно-съдовата система могат да се посочат: хипертонията, хипертонията при бременност (гестоза, “hypertensions in pregnancy”), коронарните сърдечни заболявания, локализираната и/или генерализираната артеросклероза, стенозите на кръвоносните съдове, рестенозите след реваскуларизиращи съдови операции (напр. РТСА със и без стент-имплантация), склонността към апоплексия, към тромбоза и повишеното натрупване на тромбоцити.
Като смущения в обмяната на веществата могат да се посочат: метаболичния синдром, инсулиновата резистентност и хиперинсулинемията, Тур П-Diabetes mellitus, усложненията при диабета (напр. нефропатията, невропатията, ретинопатията и др.), смущенията на обмена на мастните вещества, нарушената централна хеморецепция (СО2-толерантност, ацидозната толерантност, внезапната смърт при децата (SIDS)).
Като имунни заболявания могат да се посочат: нарушената устойчивост на телесната имунна реакция (образуването на имуноглобулини, агресивността на Т-клетките и на NK-клетките), нарушената обща склонност към пролиферация, вкл. способността на заздравяване на рани, склонността към образуване на тумори и пролиферация, вкл. потенциала към метастазиране на злокачествено трансформирани клетки, продължителността на латентния период след HIV-инфекция до клиничното развитие на заболяването, Kaposi-Sarkom, склонността към цироза на черния дроб, толерантността при трансплантации и отхвърлянето на трансплантанти.
Използването на мутацията съгласно изобретението е особено подходящо за определяне на риска от заболяване от хипертония.
Друг обект на изобретението е създаването на трансгенни животни, носещи посочената генетична мутация. Такива трансгенни животни са от голямо значение преди всичко като животински модели за изследване и терапия на посочените заболявания. Методите за създаване на трансгенни животни са общоизвестни за специалистите.
При метода за определяне на относителния риск от заболявания съгласно изобретението на лице, подложено на пробни тестове, се взима материал от тялото, съдържащ генетична информация за лицето. Това се постига по правило чрез взимане на кръв и изолирането от нея на нуклеинова киселина.
От изолираната нуклеинова киселина на лицето, подложено на пробни тестове, се определя генната структура на G-протеинова β3субединица и се сравнява с посочената в SEQ ID N0:1 последователност.
Определянето на генната структура може да се извърши чрез секвениране на нуклеинова киселина. То може да се извърши или директно от геномната ДНК, или след амплификация на нуклеиновата киселина например с помощта на PCR-техника.
Генната структура може да се извърши на геномно равнище или също и на шРНК или на сДНК равнище.
За предпочитане е определянето чрез секвениране след PCR-амплификация на сДНК. Подходящите за PCR-реакция примери могат лесно да се извлекат от специалиста от представените в SEQ ID N0:1 последователности. Препоръчително е да се действа така, че да се избере съответно по един щранг и противоположен щранг от свързващи примери преди и след съществената основна (базисна) позиция 825.
Генетичното сравнение може да се извърши и по други методи, например чрез селективната хибридизация или чрез съответното картиране (изобразяване на карта) с рестрикционни ензими. Основният (базисен) обмен С -» Т в посочената позиция 825 води до загуба на една пресечна точка за рестрикционния ензим Dsa I, което също служи за доказване на този генетичен полиморфизъм.
В случай, че лицето, подложено на пробни тестове, е носител на тимин (Т) в позиция 825, се определя повишен риск от заболяване в сравнение с лице, носител на Cytosin (С) в тази позиция.
Примери
Изобретението се пояснява със следните примери.
Пример 1. Доказване на мутация при хипертоници чрез секвениране.
При предварителни изследвания е доказана повишената способност за активиране на чувствителните към РТХ G-протеини при пациенти с есенциална хипертония. Това доказателство се получава в имортализирани клетки на такива пациенти, имащи като фенотипичен маркер повишена активност на Na/Н-обменителя. Повишената способност за активиране на чувствителните към РТХ G-протеини има важни последици за клетъчната функция. Тук се числят повишеното образуване на вътрешноклетъчни молекули “second messenger” (напр. инозитол-1,4,5-трисфосфат), повишеното освобождаване на вътрешноклетъчни Сан-йони, повишеното образуване на имунни глобулини и ускореното нарастване на клетките. Тъй като тези промени трябва да се докажат в имортализирани клетки и след дълга продължителност на клетъчната култура, може да се изходи оттам, че тази промяна е генетично фиксирана (Rosskopf, D., Fromter, Е. and Siffett, W. Hypertensive sodium-proton exchanger phenotype persists in immortalized lymphoblasts from essential hypertensitive patients-a cell culture model for human hypertension. J. Clin. Invest. 92:2553-2559, 1993; Rosskopf, D., Hartung, K., Hense, J., and Siffert, W. Enhanced immunoglobulin formation of immortalized B cells from hypertensive patients. Hypertension 26:432-435, 1995; Rosskopf, D., Schroder, K.-J., and Siffert, W. Role of sodiumhydrogen exchange in the proliferation of immortalised lymphoblasts from patients with essential hypertension and normotensive subjects. Cardiovasc. Res. 29:254-259, 1995; Siffert, W„ Rosskopf, D., Moritz, A., Wieland, T., KaldenbergStasch, S., Kettler, N., Hartung, K., Beckmann, S., and Jakobs, K. H. Enhanced G protein activation in immortalized lymphoblasts from patients with essential hypertension. J. Clin. Invest. 96:759-766, 1995).
От имортализирани клетъчни линии на хипертоници по стандартен метод се получава РНК, локализирана в сДНК с помощта на обратна транскриптаза. Чрез полимеразна верижна реакция (PCR), кодиращата G-протеина субединица на сДНК се амплифицира и секвенира. За PCR-реакцията са използвани следните олигонуклеотидни праймери:
5’-TGG GGG AGA TGG AGC AAC TG и 5’-CTG CTG AGT GTG TTC ACT GCC.
В сравнение c публикуваната от Levine et al последователност (Levine, M. A., Smallwood, P. M., Moen, P. T., Jr., Helman, L. J., and Ahn, T. G. Molecular cloning of β3 subunit, a third 5 from of the G protein β-subunit polypeptide. Proc. Natl. Acad. Sci„ USA 87(6):2329-2333, 1990) в сДНК от клетките на хипертоници се открива следното отклонение: нуклеотид 825 цитозин (С) в границите на кодиращата последовател10 ност се заменя от тимин (Т) (нуклеотид 1 съответства на основата А на старткодона ATG). Този обмен на бази води до ням полиморфизъм, т.е. кодираната чрез съответния основен триплет аминокиселина (серин) не се променя 15 спрямо оригиналната последователност. Откритата ДНК-последователност е описана в SEQ ID N0:1.
Пример 2. Доказване на мутация при хипертоници чрез анализ с рестрикционни ен20 зими.
На схемата е представено генетично сравнение на нормотоници и хипертоници чрез анализ с рестрикционни ензими. В случая амплифицираната с помощта на PCR и кодираща 25 G3 сДНК от клетки на нормотоници (NT) и на хипертоници (НТ) се подлага на анализ с рестрикционния ензим Dsa I. Продуктите от реакцията се отделят в агарозен гел, както е представено на схемата. На схемата ясно се вижда 30 пълната рестрикция на G3 сДНК от клетките на нормотоници по Verdau с Dsa I. сДНК от клетките на хипертоници се рестриктира само частично от Dsa I. Освен очакваните рестрикционни продукти, се получава и нерестрикци35 онен PCR-продукт. Отляво и отдясно са нанесени референтни фрагменти (маркери) за сравнение на размера. Четири от петте представени тук ДНК-последователности на хипертоници показват описания по-горе обмен на бази и 40 са хетерозиготни за тази промяна.
Секвенционен листинг (1) ОБЩА ИНФОРМАЦИЯ:
(i) ЗАЯВИТЕЛ:
(А) ИМЕ: BASF Aktiengesellschaft (В) УЛИЦА: Карл-Бош-Щрасе 38 (С) МЯСТО: Лудвигсхафен (E) ДЪРЖАВА: Федерална република Германия (F) ПОЩЕНСКИ КОД: D-67056 (G) ТЕЛЕФОН: 0621/6048526 (H) ТЕЛЕФАКС: 0621:6043123 (I) ТЕЛЕКС: 1762175170 (ii) НАИМЕНОВАНИЕ HA
ИЗОБРЕТЕНИЕТО: Метод за диагностика на заболявания с помощта на генетичен анализ (iii) БРОЙ НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТИТЕ: 2 (iv) КОМПЮТЪРНО-ЧИТАЕМА ФОРМА:
(A) УСТРОЙСТВО: флопи диск (B) КОМПЮТЪР: IBM PC compatible (C) РАБОТНА СИСТЕМА: PC-DOS/MSDOS (D) СОФТУЕР: Patentin Release # 1.0, версия # 1.25 (ЕРА) (2) ИНФОРМАЦИЯ ЗА SEQ ID N0:1 (i) ХАРАКТЕРИСТИКА НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА (A) ДЪЛЖИНА: 1517 основни чифтове (двойки) (B) ВИД: нуклеинова киселина (C) ФОРМА НА ВЕРИГАТА: двойна (D) ТОПОЛОГИЯ: линеарна (ii) ВИД НА МОЛЕКУЛАТА: eDNS към mRNS (iii) ХИПОТЕТИЧНОСТ: не (iv) АНТИЧУВСТВИТЕЛНОСТ: не (ν) ПЪРВОНАЧАЛЕН ПРОИЗХОД:
(А) ОРГАНИЗЪМ: Homo sapiens (ix) ОСОБЕНОСТИ:
(A) ИМЕ/КЛЮЧ: CDS (B) ПОЛОЖЕНИЕ: I 1024 (xi) ОПИСАНИЕ НА ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА: SEQ ID N0:1
ATG GGG GAG ATG GAG CAA CTG CGT CAG GAA GCG GAG CAG CTC AAG AAG 48
Met Gly Glu Met Glu Gin Leu Arg Gin Glu Ala Glu Gin Leu Lys Lys
1 5 10 15
CAG ATT GCA GAT GCC AGG AAA GCC TGT OCT GAC GTT XCT CTG GCA GAG $6
Gin lie Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Vai Thr Leu Ala Glu
20 25 30
CTG GTG TCT GGC CTA GAG GTG GTG GGA CGA GTC CAG ATG CGG ACG CGG 144
Leu Vai Ser Gly Leu Glu Vai Vai Gly Arg Vai Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
CGG ACG TTA AGG GGA CAC CTG GCC AAG ATT TAC GCC ATG CAC TGG GCC 192
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys lie Tyr Ala Met His Trp Ala
50 55 60
ACT GAT TCT AAG CTG CTG GTA AGT GCC TCG CAA GAT GGG AAG CTG ATC 240
Thr Asp Ser Lys Leu Leu Vai Ser Ala Ser Glx AS? Gly Lys Leu He
65 70 75 80
GTG TGG GAC AGC TAC ACC ACC AAC AAG GTG CAC GCC ATC CCA CTG CGC 238
Vai Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Vai His Ala He Pro Leu Arg
85 90 95
TCC TCC TGG GTC ATG ACC TGT GCC TAT GCC CCA TCA GGG AAC TTT GTG 336,.
Ser Ser Trp Vai Met Thr cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Asn Phe Vai
100 105 110
GCA TGT GGG GGG CTG GAC AAC ACG TGT TCC ATC TAC AAC CTC AAA TCC 334
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser He Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 :25
CGT GAG GGC AAT GTC AAG GTC AGC CGG GAG CTT TCT GCT CAC ACA GGT 432
Arg Glu Gly Asn Vai Lys Vai Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
TAT CTC TCC TGC TGC CGC TTC CTG GAT GAC AAC AAT ATT GTG ACC AGC 480
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn He Vai Thr Ser
145 150 155 160
TCG GGG GAC ACC ACG TGT GCC TTG TGG GAC ATT GAG ACT GGG CAG CAG 528
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp lie Glu Thr Gly Gin Gin
165 170 175
AAG ACT GTA TTT GTG GGA CAC ACG GGT GAC TGC ATG AGC CTG GCT GTG 576
Lys Thr Vai Phe Vai Gly His Thr Gly Asp Cys Met Ser Leu Ala Vai
180 185 190
TCT CCT GAC TTC AAT CTC TTC ATT TCG GGG GCC TGT GAT GCC AGT GCC 624
Ser Pro Asp Phe Asn Leu Phe lie Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala
195 200 205
AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC 672
Lys Leu Trp Asp Vai Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly
672
AAG CTC TGG GAT GTG CGA GAG GGG ACC TGC CGT CAG ACT TTC ACT GGC
Lys Leu Trp Asp Vai Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly
210 215 220
CAC GAG TCG GAC ATC AAC GCC ATC TGT TTC TTC CCC AAT GGA GAG GCC
His Glu Ser Asp He Asn Ala Zle Cys Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala
225 230 235 240
ATC TGC ACG GGC TCG GAT GAC GCT TCC TGC CGC TTG TTT GAC CTG CGG
lie Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser Cys Arg Leu Phe Asp Leu Arg
245 250 255
GCA GAC CAG GAG CTG ATC TCC TTC TCC CAC GAG AGC ATC ATC TGC GGC
Ala Asp Gin Glu Leu lie Cys ?he Ser His Glu Ser lie lie Cys Gly
260 265 270
ATC ACG TCT GTG GCC TTC TCC CTC AGT GGC CGC CTA CTA TTC GCT GGC
lie Thr Ser Vai Ala Phe Ser Leu Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly
275 280 28S
TAC GAC GAC TTC AAC TGC AAT GTC TGG GAC TCC ATG AAG TCT GAG CGT
Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Asn Vai Trp Asp Ser Het Lys Ser Glu Arg
290 295 300
GIG GGC ATC CTC TCT GGC CAC GAT AAC AGG GTG AGC TGC CTG GGA GTC
Vai Gly Zle Leu Ser Gly His Asp Ask Arg Vai Ser cys Leu Gly Vai
305 310 315 320
ACA GCT GAC GGG ATG GCT GTG GCC ACA GGT TCC TGG GAC AGC TTC CTC
Thr Ala Asp Gly Met Ala Vai Ala Thr Gly Ser Trp Asp Ser Phe Leu
325 330 335
AAA ATC TGG AAC TGA G GAGGCTGGAG AAAGGGAAGT GGAAGGCAGT GAACACACTC
Lys lie Trp Asn *
340
720
768
816
864
912
960
1003
1064
AGCAGCCCCC TGCCCGACCC CATCTCATTC AGGTGTTCTC TTCTATATTC CGGGTGCCAT TCCCACTAAG СТТГСТССТГ TGASGGCAGT GGGGAGCATG GGACTGTGCC TTTQGGAGGC AGCATCAGSG ACACAGGGQC AAAGAACTGC CCCATCTCCT CCCATGOCCT TCCCTCCCCA CAGTCCTCAC AGCCTCTCCC TTAATGAGCA AGGACAACCT GCCCCTCCCC AGCCCTTTGC AGGCCCAGCA GACTTGAGTC TGAGGCCCCA GGCCCTAGGA TTCCTCCCCC AGAGCCACTA CCTTTGTCCA GGCCTGGGTG GTATAGGGCG TTTGGCCCTG TGACTATGGC TCTGGCACCA CTAGGGTCCT GGCCCTCTTC TTATTCATGC TTTCTCCTTT TTCTACCTTT TTTTCTCTCC TAAGACACCT GCAATAAAGT GTAGCACCCT GGT
1124
1184
1244 i304
1364
1424
1484
1517 (i) ХАРАКТЕРИСТИКА HA ПОСЛЕДОВАТЕЛНОСТТА (A) ДЪЛЖИНА: 341 аминокиселини (B) ВИД: аминокиселина (D) ТОПОЛОГИЯ: линеарна (ii) ВИД НА МОЛЕКУЛАТА: протеин (xi) ОПИСАНИЕ НА ПОСЛЕДОВА ТЕЛНОСТТА: SEQ ID N0:2:
Met 1 Gly Glu Met Glu 5 Gin Leu arg uxn uxu axa uxu »xn Leu Lys Lys
10 15
Gin lie Ala Asp Ala Arg Lys Ala Cys Ala Asp Val Thr Leu Ala Glu
20 25 30
Leu Vai Ser Gly Leu Glu Val Val Gly Arg Val Gin Met Arg Thr Arg
35 40 45
Arg Thr Leu Arg Gly His Leu Ala Lys lie Tyr Ala Met His Trp Ala
50 55 80
Thr Asp Ser Lys Leu Leu Val Ser Ala Ser Gin Asp Gly Lys Leu Zle
65 70 75 80
Vai Trp Asp Ser Tyr Thr Thr Asn Lys Val His Ala Zle Pro Leu Arg
85 90 95
Ser Ser Trp val Met Thr Cys Ala Tyr Ala Pro Ser Gly Aen Phe Val
100 105 110
Ala Cys Gly Gly Leu Asp Asn Met Cys Ser He Tyr Asn Leu Lys Ser
115 120 125
Arg Glu Gly Asn Val Lys Val Ser Arg Glu Leu Ser Ala His Thr Gly
130 135 140
Tyr Leu Ser Cys Cys Arg Phe Leu Asp Asp Asn Asn Zle Val Thr Ser
145 150 155 160
Ser Gly Asp Thr Thr Cys Ala Leu Trp Asp lie Glu Thr Gly Gin Gin
165 170 175
Lys Thr Vai Phe Vai Gly His Thr Gly Asp Cys Met Ser Leu Ala Vai
180 185 190
Ser Pro Asp Phe Asn Leu Phe lie Ser Gly Ala Cys Asp Ala Ser Ala
195 200 205
Lys Leu Trp Asp Vai Arg Glu Gly Thr Cys Arg Gin Thr Phe Thr Gly
210 215 220
Sis Glu Ser Asp Xie Asn Ala He eye Phe Phe Pro Asn Gly Glu Ala
225 236 235 240
He Cys Thr Gly Ser Asp Asp Ala Ser Cys Arg Lee Phe Asp Leu Arg
245 250 255
Ala Asp Gin Glu Leu He Cys Phe Ser His Glu Ser lie He Cys Gly
260 265 270
lie Thr Ser Vai Ala Phe Ser Leu Ser Gly Arg Leu Leu Phe Ala Gly
275 280 285
Tyr Asp Asp Phe Asn Cys Ash Vai Trp Asp Ser Met Lys Ser Glu Arg
290 295 300
Vai Gly He Leu Ser Gly His Asp Asn Arg Vai Ser Cys Leu Gly Vai
305 310 315 320
Thr Ala Asp Gly Het Ala Vai Ala Thr Gly Ser Trp Ser РЪе Lee
325 330 335
Lys He Trp Asn *
340

Claims (12)

1. Приложение на мутация в гена на човешката G-протеинова субединица за диагностика на заболявания, свързани с неправилно управление на G-протеина.
2. Приложение на мутация в гена на човешката G-протеинова субединица съгласно претенция 1, характеризиращо се с това, че се използва мутантна Р3-субединица на G-протеина.
3. Приложение съгласно претенция 2, характеризиращо се с това, че генетичната промяна е в кода за аминокиселина 275 в SEQ ID N0:1.
4. Приложение съгласно претенция 2, характеризиращо се с това, че на позиция 825 в SEQ ID N0:1 е налице заместване на цитозин с тимин.
5. Приложение съгласно претенция 2, характеризиращо се с това, че посочените заболявания са заболявания на сърдечно-съдовата система, смущение в обмяната или имунно заболяване.
6. Приложение съгласно претенция 2, характеризиращо се с това, че болестта е хипертония.
7. Метод за определяне на относителния риск от заболяване от болести, свързани с погрешно управление на G-протеин за лице, подложено на пробни тестове, характеризиращ се с това, че се сравнява генетичната последователност за човешката G-протеинова рЗ-субединица на лицето, подложено на пробни тестове с генетичната последователност от SEQ ID N0:1 и в случай, че на позиция 825 е налице тимин (Т), за лицето, подложено на пробни тестове, се определя повишен риск от заболяване.
8. Метод съгласно претенция 7, характеризиращ се с това, че генетичното сравнение се извършва чрез секвениране.
9. Метод съгласно претенция 8, характеризиращ се с това, че преди секвенирането се амплифицира един генетичен участък, който съдържа позиция 825.
10. Метод съгласно претенция 7, характеризиращ се с това, че генетичното сравнение се извършва чрез хибридизация.
11. Метод съгласно претенция 7, характеризиращ се с това, че генетичното сравнение се извършва чрез разделяне с рестрикционни ензими.
12. Метод съгласно претенция 11, ха7 рактеризиращ се с това, че се използва рестрикционният ензим Dsa I.
Приложение: 1 фигура
BG102878A 1996-05-14 1998-10-29 Приложение на мутация в гена на човешката g-протеинова бета 3-субединица за диагностициране на заболявания BG63214B1 (bg)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19619362A DE19619362A1 (de) 1996-05-14 1996-05-14 Verwendung einer Genveränderung im Gen für humanes G-Protein beta-3-Untereinheit zur Diagnostik von Erkrankungen
PCT/EP1997/002250 WO1997043442A1 (de) 1996-05-14 1997-05-02 VERWENDUNG EINER GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE HUMANE G-PROTEIN β3-UNTEREINHEIT ZUR DIAGNOSTIK VON ERKRANKUNGEN

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BG102878A BG102878A (bg) 1999-05-31
BG63214B1 true BG63214B1 (bg) 2001-06-29

Family

ID=7794252

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BG102878A BG63214B1 (bg) 1996-05-14 1998-10-29 Приложение на мутация в гена на човешката g-протеинова бета 3-субединица за диагностициране на заболявания

Country Status (23)

Country Link
US (2) US6242181B1 (bg)
EP (1) EP0939833B1 (bg)
JP (1) JP2000509990A (bg)
KR (1) KR20000010988A (bg)
CN (1) CN1218515A (bg)
AT (1) ATE212066T1 (bg)
AU (1) AU732535B2 (bg)
BG (1) BG63214B1 (bg)
BR (1) BR9709245A (bg)
CA (1) CA2252921C (bg)
CZ (1) CZ292691B6 (bg)
DE (2) DE19619362A1 (bg)
EA (1) EA199800959A1 (bg)
HU (1) HUP9903661A3 (bg)
IL (1) IL126511A (bg)
NO (1) NO985280L (bg)
NZ (1) NZ332279A (bg)
PL (1) PL185779B1 (bg)
SK (1) SK282675B6 (bg)
TR (1) TR199802300T2 (bg)
UA (1) UA56164C2 (bg)
WO (1) WO1997043442A1 (bg)
ZA (1) ZA974102B (bg)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19637518A1 (de) * 1996-09-13 1998-04-09 Winfried Siffert PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung
AU3304499A (en) * 1998-02-20 1999-09-06 City Of Hope Association of the serotonin transport (htt) gene with cardiovascular disease and longevity
WO2000015785A2 (de) * 1998-09-10 2000-03-23 Winfried Siffert GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE Gβ3-UNTEREINHEIT DES HUMANEN G-PROTEINS
US20030129616A1 (en) * 2000-02-03 2003-07-10 Winfried Siffert Use of a mutation in the gene for the beta3-subunit of human g-protein
JP4140329B2 (ja) * 2002-09-25 2008-08-27 財団法人名古屋産業科学研究所 高血圧のリスク診断方法
EP2463384A3 (en) 2010-12-07 2013-03-13 Medtronic, Inc. Diagnostic kits, genetic markers and methods for SCD or SCA therapy selection
WO2019191010A1 (en) * 2018-03-27 2019-10-03 Aardvark Therapeutics Inc. Personalized treatment method for congestive heart failure

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE19637518A1 (de) * 1996-09-13 1998-04-09 Winfried Siffert PTX-sensitive G-Proteine, ihre Herstellung und Verwendung
WO2000015785A2 (de) * 1998-09-10 2000-03-23 Winfried Siffert GENVERÄNDERUNG IM GEN FÜR DIE Gβ3-UNTEREINHEIT DES HUMANEN G-PROTEINS

Also Published As

Publication number Publication date
DE19619362A1 (de) 1997-11-20
NO985280D0 (no) 1998-11-12
AU732535B2 (en) 2001-04-26
PL330014A1 (en) 1999-04-26
CN1218515A (zh) 1999-06-02
AU2890297A (en) 1997-12-05
US6242181B1 (en) 2001-06-05
ZA974102B (en) 1998-11-13
NZ332279A (en) 2000-04-28
EA199800959A1 (ru) 1999-06-24
US20020142311A1 (en) 2002-10-03
KR20000010988A (ko) 2000-02-25
HUP9903661A2 (hu) 2000-03-28
CZ369698A3 (cs) 1999-08-11
JP2000509990A (ja) 2000-08-08
TR199802300T2 (xx) 1999-02-22
IL126511A0 (en) 1999-08-17
ATE212066T1 (de) 2002-02-15
IL126511A (en) 2003-11-23
CA2252921C (en) 2008-07-08
SK157398A3 (en) 2000-01-18
BG102878A (bg) 1999-05-31
HUP9903661A3 (en) 2000-09-28
UA56164C2 (uk) 2003-05-15
CZ292691B6 (cs) 2003-11-12
BR9709245A (pt) 1999-08-10
SK282675B6 (sk) 2002-11-06
PL185779B1 (pl) 2003-07-31
NO985280L (no) 1998-11-12
EP0939833B1 (de) 2002-01-16
CA2252921A1 (en) 1997-11-20
DE59706027D1 (de) 2002-02-21
WO1997043442A1 (de) 1997-11-20
EP0939833A1 (de) 1999-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tullio-Pelet et al. Mutant WD-repeat protein in triple-A syndrome
Furuya et al. Genetic polymorphism of CYP2C9 and its effect on warfarin maintenance dose requirement in patients undergoing anticoagulation therapy
Gécz et al. Characterization of the human glutamate receptor subunit 3 gene (GRIA3), a candidate for bipolar disorder and nonspecific X-linked mental retardation
Wu et al. Polymorphism of human Ia antigens generated by reciprocal intergenic exchange between two DR β loci
JP4164128B2 (ja) 脊髄小脳運動失調タイプ６の疾病の大規模遺伝子型表現及び診断テスト
Nakajima-Taniguchi et al. Novel missense mutation in α-tropomyosin gene found in Japanese patients with hypertrophic cardiomyopathy
Chiu et al. A genetic marker at the glucokinase gene locus for type 2 (non-insulin-dependent) diabetes mellitus in Mauritian Creoles
JP2003514538A (ja) 哺乳動物毒物学的反応マーカー
Acland et al. A novel retinal degeneration locus identified by linkage and comparative mapping of canine early retinal degeneration
US20040248092A1 (en) Methods of screening for parkinsons's disease
US6458542B1 (en) Method of screening for susceptibility to drug-induced cardiac arrhythmia
JP2003510349A (ja) 線条体機能に必要な遺伝子、その使用、およびそれを調節するための化合物
Wan et al. Conserved Chromosomal Location and Genomic Structure of Human and Mouse Fatty-Acid Amide Hydrolase Genes and Evaluation ofclasperas a Candidate Neurological Mutation
BG63214B1 (bg) Приложение на мутация в гена на човешката g-протеинова бета 3-субединица за диагностициране на заболявания
US20160282350A1 (en) Methods of diagnosing cancer
US20090269814A1 (en) Method of Analyzing a BRCA2 Gene in a Human Subject
US20040152106A1 (en) Gene necessary for striatal function, uses thereof, and compounds for modulating same
US20040081981A1 (en) Method of detecting risk factor for onset of diabetes
US6251853B1 (en) PTX sensitive G proteins, the production and use thereof
US6458541B1 (en) BDNF polymorphism and association with bipolar disorder
US20030157493A1 (en) BDNF polymorphism and association with bipolar disorder
WO2001027312A2 (en) Drug target isogenes: polymorphisms in the m1 muscarinic acetylcholine receptor gene
Van der Merwe Genetic heterogeneity in South African facioscapulohumeral muscular dystrophy (FSHD) families
Candille High-resolution linkage and physical mapping of the mouse nob gene
WO2001025194A2 (en) Drug target isogenes: polymorphisms in the 5-hydroxytryptamine (serotonin) receptor 1b gene