SK281124B6 - (s)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-4,6,7,8-tetrahydro- -5(1h)-chinolón, spôsoby jeho prípravy, farmaceutické prostriedky, ktoré ho obsahujú a jeho použitie - Google Patents

Abstract

Opisuje sa (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)- -4,6,7,8-tetrahydro-5(1H)-chinolón, ktorý je látkou otvárajúcou draslíkové kanály a je vhodný napríklad na liečenie inkontinencie moču. Ďalej sa opisujú spôsoby jeho prípravy, farmaceutické prostriedky, ktoré ho obsahujú, a jeho použitie na prípravu liečiv.ŕ

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka novej zlúčeniny, ktorá je vhodná na liečenie nestability močového mechúra u cicavcov, ako je človek. Konkrétnejšie sa vynález týka (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónu (zlúčeniny), použitia tejto zlúčeniny na liečenie inkontinencie moču u cicavcov (vrátane človeka), spôsobov prípravy tejto zlúčeniny a farmaceutických prostriedkov, ktoré túto zlúčeninu obsahujú.

Doterajší stav techniky

Doterajšie liečenie inkontinencie moču je všeobecne nesprávne, založené na liečivách, ktoré boli pôvodne vyvinuté na iné indikácie. Do jednej skupiny týchto liečiv patria látky blokujúce vápnikový kanál, ako je nifedipin, ktoré boli pôvodne vyvinuté, a primáme sa používajú ako kardiovaskulárne činidlá.

Nifedipin patrí do štruktúrnej skupiny zlúčenín známych ako dihydropyridíny. Táto štruktúrna skupina sa široko skúmala a v súčasnej dobe sú pomerne dobre stanovené štruktúrne požiadavky na účinnosť pri blokovaní vápnika. Teda, ako je opísané v kapitole 14.1 učebnice lekárskej chémie, Comprehensive Medicinal Chemistry, zväzok 3, editor John C. Emmett, vydal Pergamon Press roku 1990, tieto zlúčeniny majú 1,4-dihydropyridínový kruh, ktorý optimálne obsahuje arylovú skupinu v polohe 4 a esterové skupiny v polohách 3 a 5. Odstránenie esterových skupín alebo ich nahradenie acetylovými skupinami alebo kyanoskupinami je spojené so znížením účinnosti. Všeobecne majú tieto zlúčeniny metylové skupiny v polohách 2 a 6.

Grinshteins a kol., Khim. Geterotsikl. Soedin. (6), 1118 až 20, 1967, opisujú zlúčeniny 3-kyano-4-fenyl-2,7,7-trimetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón a 3-etanoyl-4-fenyl-2,7,7-trimetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón. Vitolinya a kol., Khim.-Farm. Zh., 15(1), 39 - 42, 1981, opisujú výskumy účinku niektorých 4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónov s esterovou skupinou alebo kyanoskupinou v polohe 3 na kardiovaskulárny systém a na hladké svaly čriev. O 3-kyano-4-fenyl-2,7,7-trimety 1-4,6,7,8-tetrahydro-5(1H)-chinolónu sa uvádza, že vykazuje hypotenzné vlastnosti a je schopný blokovať spazmogénny účinok ako acetylcholínu, tak chloridu bámatého na hladké svaly čriev.

DE 2003148 opisuje skupinu 1,4-dihydropyridinových derivátov, vrátane určitých 4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónov, ktoré obsahujú v polohe 3 esterovú skupinu alebo ketoskupinu a o ktorých sa uvádza, že vykazujú široké a mnohostranné spektrum farmakologického pôsobenia. Medzi hlavné účinky, o ktorých sa uvádza, že ich tieto zlúčeniny vykazujú, patria silné svalové spazmolytické účinky, ktoré sú evidentné v hladkom svalstve gastrointestinálneho traktu, urogenitálneho traktu a dýchacieho systému. Uvádza sa, že ďalšie hlavné účinky spočívajú v pôsobení na srdce (účinky „poskytujúce úľavu srdcu“) a v znižovaní krvného tlaku u zvierat s normálnym tlakom a s vysokým tlakom, takže sa môžu použiť ako antihypertenzné činidlá.

Podstata vynálezu

Je známe, že tkanivo močového mechúra je dráždivé a že inkontinenciu moču môžu spôsobovať nekontrolovateľné alebo nestabilné sťahy močového mechúra. Našla sa však zlúčenina, ktorá je neočakávane schopná relaxovať hladké svaly močového mechúra, čím zabraňuje nekontro lovaným alebo nestabilným sťahom močového mechúra, alebo ich zmierňuje. Táto zlúčenina teda môže byť vhodná pri liečení naliehavých inkontinencií, ktoré zahŕňajú napríklad nestabilitu detruzora, ktorá môže byť následkom cystitídy, uretritídy, nádorov, kameňov, obštrukcií divertikulov alebo vývodných ciest a hyperreflexie detruzora, ktorá môže byť následkom mŕtvice, demencie, Parkinsonovej choroby, suprasakrálneho poranenia miechy alebo suprasakrálncho ochorenia miechy.

Tiež sa neočakávane zistilo, že táto zlúčenina otvára draslíkový kanál. Je známe, že zlúčeniny otvárajúce draslíkový kanál môžu tým, že spôsobujú otvorenie draslíkového kanála, spôsobiť relaxáciu hladkých svalov. Hoci tento vynález nie je viazaný teóriou, v súlade s tým sa predpokladá, že táto zlúčenina spôsobuje otváranie draslíkových kanálov v bunkách močového mechúra, čim relaxuje tkanivo hladkých svalov močového mechúra, a zabraňuje tak nekontrolovaným sťahom močového mechúra, ktoré môžu spôsobovať inkontinenciu moču, alebo ich zmierňuje. Nurse D. A., Restorick J. M. a Mundy A. R., British Joumal of Urology, (1991), 68, 27 - 31, opisujú, že o cromakalime, ktorý je dobre známy ako látka otvárajúca draslíkový kanál, sa zistilo, že je účinný v predbežných klinických pokusoch pri liečení inkontinencie moču.

V súlade s tým vynález opisuje zlúčeninu (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmcty l-4,6,7,8-tetrahydro-5( 1 H)-chinolón a jeho farmaceutický prijateľné soli.

Treba zobrať do úvahy, že táto zlúčenina môže vykazovať polymorfizmus a môže tvoriť solváty. Rozumie sa, že vynález zahŕňa akúkoľvek polymorfiiú formu, alebo solvát alebo ich zmesi, ktorá je vhodná na relaxáciu hladkého svalstva močového mechúra, pričom v odbore je dobre známe, ako stanoviť, či je zlúčenina schopná relaxovať hladké svalstvo močového mechúra pomocou štandardných testov opísaných ďalej. Stereochémia tejto zlúčeniny sa najskôr označila ako (-) a potom sa zistilo, že absolútna stereochémia je (S). Môže byť teda výhodné použiť túto zlúčeninu vo forme, ktorá je charakterizovaná tým, že obsahuje napríklad aspoň 95 %, 98 % alebo 99 % enantiomérneho nadbytku (S)-(-)-formy.

Zlúčenina podľa vynálezu sa dá pripraviť pomocou spôsobov, medzi ktoré patria spôsoby známe v odbore chémie na prípravu štruktúrne analogických zlúčenín. Takéto spôsoby prípravy (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónu tvoria ďalšie uskutočnenie vynálezu a ilustrujú ich nasledujúce spôsoby. Takýto spôsob sa dá všeobecne uskutočniť dekarboxyláciou zodpovedajúcej (S)-(-)-formy karboxylovej kyseliny vzorca (II) o o (n) á

Dekarboxylačná reakcia sa dá vhodne uskutočňovať pri zvýšenej teplote napríklad v rozmedzí od 50 °C do 250 °C, výhodne v rozmedzí od 190 °C do 220 °C bez kyslého katalyzátora, najmä 130 °C až 185 °C (napríklad s použitím vyhrievacieho plášťa) a výhodne v rozmedzí od 90 °C do 120 °C s kyslým katalyzátorom. Dekarboxylačná reakcia nekatalyzovaná kyselinou sa dá uskutočňovať v nezriedenej tavenine alebo v inertnom rozpúšťadle s vhodnou teplotou varu, ako je difenyléter alebo N-metylpyrolidín-2-ón. Výhodným rozpúšťadlom je N-metylpyrolidín-2-ón. Medzi vhodné rozpúšťadlá na dekarboxyláciu katalyzovanú kyselinou patria alkoholy, napríklad metanol alebo etanol, di2 metylsulfoxid, aromatické uhlovodíky ako je toluén, étery, ako je napríklad 1,2-dimetoxyetán alebo diglym a N-metylpyrolidín-2-ón. Ako kyslý katalyzátor je účelné použiť koncentrovanú kyselinu sírovú, kyselinu fosforečnú, kyselinu chlorovodíkovú, kyselinu bromovodíkovú, kyselinu jodovodíkovú, silné organické kyseliny, ako je kyselina trifluóroctová a organické sulfónové kyseliny, ako je kyselina metánsulfónová alebo p-toluénsulfónová. Reakcia sa dá účelne uskutočňovať bez riedidiel pri teplote zodpovedajúcej teplote topenia materiálu alebo vyššej.

(S)-(-)-forma karboxylovej kyseliny vzorca (II) sa účelne pripraví rozštiepením zodpovedajúcej racemickej karboxylovej kyseliny vzorca (II). Účelným spôsobom rozštiepenia zlúčeniny vzorca (II) je vytvorenie rozštiepenej soli kyseliny, napríklad s použitím (S)-(-)-a-metylbenzylamínu. Soľ sa izoluje a potom sa okyslí, čím sa uvoľní rozštiepená karboxylová kyselina vzorca (II). Prekryštalizovanie sa výhodne uskutočňuje pri teplote 75 °C alebo nižšej a výhodne bez trepania.

Alternatívne sa dá surová racemická zlúčenina vzorca (I) rozštiepiť s použitím chirálnej kolóny a vzniká zlúčenina vzorca (I)

Pokiaľ nie sú komerčne dostupné, dajú sa materiály nutné na tieto spôsoby, ako sú opísané ďalej, pripraviť pomocou postupov vybraných zo štandardných postupov organickej chémie, postupov, ktoré sú analogické syntéze známych, štruktúrne podobných zlúčenín alebo postupov, ktoré sú analogické s pred týmto opísaným postupom alebo postupom opísaným v príkladoch.

Medziprodukt vzorca (II) sa dá pripraviť, ako je znázornené na schéme I.

Schéma I

V schéme I sa ester kyseliny acetoctovej všeobecného vzorca (III) alebo jeho hemiacetál, v ktorom zvyšok ORa predstavuje zvyšok alkoholu, ktorý tvorí ester, ktorý sa dá štiepiť v mierne zásaditých podmienkach, ako je napríklad 2-kyanoetoxyester, podrobí reakcii s 3-kyanobenzaldehydom a 1, 3-cyklohexándiónom za vzniku alkoholu všeobecného vzorca (IVa). Dehydratáciou alkoholu sa získa ester všeobecného vzorca (IV), ktorý sa dá zmydelniť a vzniká kyselina vzorca (II).

Medziprodukt vzorca (II) sa dá alternatívne pripraviť ako je znázornené v schéme II.

Schéma II

(III)

(II)

V schéme II sa ester kyseliny acetoctovej všeobecného vzorca (III) alebo jeho hemiacetál, v ktorom zvyšok ORa predstavuje zvyšok alkoholu, ktorý tvorí ester, ktorý sa dá ľahko štiepiť kyselinou, ako je napríklad izobomylester, podrobí reakcii s 3-kyanobenzaldehydom a 1,3-cyklohexándiónom pri vzniku alkoholu všeobecného vzorca (IVa). Dehydratáciou alkoholu sa získa ester všeobecného vzorca (IV), ktorý sa dá zmydelniť za vzniku kyseliny vzorca (II),

Kyslo katalyzovanou dehydratáciou a hydrolýzou zlúčeniny všeobecného vzorca (IVa), napríklad za podmienok podobných podmienkam opísaným v príkladoch, sa získa zlúčenina vzorca (II). Kyslým katalyzátorom na prípravu zlúčeniny všeobecného vzorca (IV) zo zlúčeniny všeobecného vzorca (IVa) môže byť ľubovoľný z uvedených kyslých katalyzátorov a výhodne je ním kyselina p-toluénsulfónová. Kyslým katalyzátorom na prípravu zlúčeniny vzorca (II) zo zlúčeniny všeobecného vzorca (IVa) je výhodne kyselina p-toluénsulfónová. Reakcia sa výhodne uskutočňuje v prítomnosti inertného rozpúšťadla, ako je toluén alebo kyselina octová. S cieľom zabrániť dekarboxylácii je rozpúšťadlo výhodne bezvodné, napríklad je ním ľadová kyselina octová.

Pre ďalšiu minimalizáciu dekarboxylácie je potrebné teplotu reakcie udržiavať na maximálne 104 °C, výhodne v rozmedzí od 100 °C do 104 “C, najmä 102 °C až 104 °C.

Izobomylester sa dá pripraviť reesterifikačnou reakciou izobomeolu a etyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu a 2-kyanoetylhemiacetál 2-kyanoetyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu reesterifikačnou reakciou 3-hydroxypropionitrilu a etyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu.

Spôsoby prípravy zlúčeniny vzorca (I) a medziproduktov na jej prípravu tvorí ďalšie uskutočnenie vynálezu.

Farmaceutický prijateľné soli sa dajú získať s použitím štandardných postupov dobre známych v odbore, napríklad reakciou zlúčeniny podľa vynálezu s vhodnou kyselinou

SK 281124 Β6 alebo zásadou poskytujúcou fyziologicky prijateľný protiión.

Pri použití na liečenie inkontinencic moču sa zlúčenina podľa vynálezu všeobecne podáva vo forme vhodného farmaceutického prostriedku, ktorý obsahuje túto zlúčeninu spolu s farmaceutický prijateľným riedidlom alebo nosičom, pričom je prostriedok prispôsobený konkrétnemu vybranému spôsobu podania. Takéto prostriedky tvoria ďalšie uskutočnenie vynálezu.

Podľa ďalšieho uskutočnenia teda vynález opisuje farmaceutický prostriedok, ktorý obsahuje zlúčeninu podľa vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ, ako sú už definované a farmaceutický prijateľné riedidlo alebo nosič.

Prostriedky sa dajú získať použitím bežných postupov a nosných a pomocných látok a spojív a môžu byť v rade rôznych dávkovacích foriem. Môžu byť napríklad vo forme tabliet, kapsúl, roztokov alebo suspenzií na orálne podanie, vo forme čapíkov na rektálne podanie, vo forme sterilných roztokov alebo suspenzií na podanie intravenózne, intravezikuláme, subkutánne alebo intramuskulárne injekciou alebo infúziou, alebo vo forme náplasti na transdermálne podanie.

Opisuje sa tiež spôsob liečenia inkontinencie moču, pri ktorom sa cicavcovi, ktorý také liečenie potrebuje, podá účinné množstvo zlúčeniny podľa vynálezu alebo jej farmaceutický prijateľnej soli.

Ošetrenie s použitím zlúčeniny podľa vynálezu môže byť liečebné alebo terapeutické, ako v prípade podania tejto zlúčeniny po vzniku alebo rozvinutí inkontinencie moču u pacienta. Ošetrenie môže byť tiež profylaktické alebo prospektivne, keď sa táto zlúčenina podá v prípade očakávania, že by sa inkontinencia moču mohla rozvinúť napríklad u pacienta, ktorý trpel inkontinenciou v minulosti.

Podľa ďalšej realizácie vynález opisuje použitie zlúčeniny podľa vynálezu na výrobu liečiva na liečenie inkontinencie moču.

Keďže táto zlúčenina spôsobuje otváranie bunkových draslíkových kanálov, môže byť tiež vhodná ako terapeutické činidlo pri liečení iných stavov alebo ochorení, pri ktorom je žiaduce pôsobenie terapeutického činidla, ktoré otvára draslíkové kanály alebo je o ňom známe, že spôsobuje zlepšenie. Medzi také stavy alebo ochorenia patrí vysoký tlak, astma, periférna cievna choroba, pravé zlyhanie srdca, zlyhanie srdca hromadením krvi, angína, ischemická choroba srdca, cerebrovaskulárna choroba, glaukóm, obličková kolika, poruchy spojené s obličkovými kameňmi, syndróm dráždivého tračníka, plešatosť mužského typu, predčasné pôrodné sťahy a peptické vredy.

Dávka zlúčeniny, ktorá sa podáva, sa nutne líši v závislosti od princípov dobre známych v odbore, pričom sa prihliada na spôsob podania, závažnosť inkontinencie a veľkosti a veku pacienta. Všeobecne sa zlúčenina podáva teplokrvnému živočíchovi (ako je človek) tak, že dostane účinnú dávku, všeobecne dennú dávku viac ako 0,005, napríklad v rozmedzí približne 0,01 až približne 10 mg/kg telesnej hmotnosti. Výhodne sa zlúčenina podáva orálne v tomto rozmedzí dávok.

Odborníkovi je zrejmé, že zlúčenina podľa vynálezu sa dá podávať spoločne s ďalšími terapeutickými alebo profylaktickými činidlami alebo/a liečivami, ktoré s ňou nie sú medikálne nekompatibilné.

Pôsobenie zlúčeniny podľa vynálezu ako látky relaxujúcej hladké svalstvo, vhodnej ako terapeutické činidlo na ošetrenie inkontinencie moču v dôsledku toho, že spôsobuje otváranie draslíkových kanálov a hyperpolarizuje membránový potenciál v hladkom svalstve detruzora močového mechúra, sa dá preukázať použitím vhodne zosta vených testov in vitro, ako je test opísaný ďalej. Zlúčenina podľa vynálezu vykazuje v tomto teste hodnotu IC₅₀ 4,2 μΜ. Hodnota „IC₅o“ je dobre známy termín a označuje koncentráciu testovanej zlúčeniny, ktorá spôsobuje 50 % zníženie sťahov tkaniva močového mechúra in vitro, ako je opísané v nasledujúcom teste.

Samce albinických morčiat (Hartley) s hmotnosťou 450 až 500 g sa usmrtia asfyxiou spôsobenou oxidom uhličitým a rýchlo sa nechajú vykrvácať. Otvorí sa spodná časť brušnej dutiny a izoluje sa močový mechúr. Mechúr sa očistí od okolitého spojivového a tukového tkaniva a časť nad vyústením močovodov sa oddelí a premyje sa v puírovacom roztoku (Krebs-Henseleit) nasledujúceho zloženia: 118,0 mM chloridu sodného, 4,7 mM chloridu draselného, 1,2 mM síranu horečnatého, 1,2 mM dihydrogenfosforečnanu draselného, 2,5 mM chloridu vápenatého, 25,0 mM hydrogenuhličitanu sodného a 11,1 mM D-glukózy. Roztok sa zohreje na teplotu 37 °C a prebubláva sa 95 % kyslíka a 5 % oxidu uhličitého. Pri intenzívnom prebublávani by mal mať roztok pH blízko hodnoty 7,4.

Klenba premytého močového mechúra sa odreže a oddelí. Zvyšná časť mechúra sa umiestni na gázu do Petriho misky obsahujúcej pufŕovací roztok. Nožnicami sa urobí pozdĺžny rez v strede ventrálnej časti na otvorenie mechúra. Pásy odrezané z okraja klenby a spodnej časti sa odstránia. Zvyšná stredná časť detruzora sa rozreže na dva horizontálne pásy šírky približne 2,0 mm. Tieto dva pásy sa ešte ďalej rozpolia v strede dorzálnej časti, čím sa vytvoria štyri pásy podobných rozmerov. Každý pás teda obsahuje ako dorzálnu, tak ventrálnu stranu mechúra.

Dva konce každého pásu sa upevnia na sklenú nosnú tyčinku a transduktor posunu sily (Grass model FR03) čiernym hodvábnym prepletaným stehom (4-0).

Transduktory sa pripoja na polygraf (Grass model 7E), ktorý je kalibrovaný 5 mV/cm a linearita kalibrácie sa overí hmotnosťami 5 a 0,5 gramov. Analógové signály elektrických výstupov z polygrafii sa digitalizujú pomocou systému spracovania signálu Modular Inštrument Micro 5000 s použitím softvéru Biowindow Data Acquisition Software, prevádzkovaného pod operačným systémom Microsoft OS/2 na IBM-kompatibilnom osobnom počítači.

Pásy detruzora na sklenej tyčinke sa umiestnia do 20 ml tkanivového kúpeľa a nechajú sa ekvilibrovať s predbežným zaťažením 2 g. V priebehu nasledujúcej ekvilibračnej doby 45 až 60 minút sa tkanivo premýva v 15-minútových intervaloch čerstvým pufrovacím roztokom, pričom sa, v prípade potreby, pred premytím tenzia upraví na 2 g. Po ekvilibračnej dobe sa aplikuje povzbudzovacia dávka 15 mM chloridu draselného (celková koncentrácia v kúpeli). Tkanivo sa premyje po 10 minútach a potom sa premyje ešte dvakrát v 15 minútových intervaloch, pričom sa pred každým premytím tenzia upraví na 2 g.

Keď sa tkanivo po poslednom premytí relaxuje do stabilného stavu, opäť sa aplikuje 15 mM chloridu draselného. Len čo myogénna aktivita tkaniva dosiahne stabilný stav, získajú sa pomocou systému Biowindows Data Acquisition Systém údaje základnej hodnoty, spriemerovaním 5 minút myogénnych dát získavaných pri 32 Hz. Len čo sa stanoví základná hodnota, dávkuje sa experimentálna zlúčenina kumulatívnym spôsobom s prírastkom polovice logaritmickej jednotky. Kontaktný čas je pre každú dávku 10 minút, pričom konečných 5 minút je čas, keď sa získavajú údaje odpovede na dávku. Pokiaľ 30 μΜ testovanej zlúčeniny neodstráni mechanickú aktivitu detruzora, dávkuje sa potom 30 μΜ cromakalimu, látky, o ktorej sa predpokladá, že otvára draslíkové kanály, na stanovení maximálnej odpovede. Účinok zlúčeniny v každej dávke sa vyjadri ako per cento maximálnej inhibičnej odpovede, ktoré sa ďalej normalizuje s ohľadom na zodpovedajúci účinok kontroly s nosným prostredím zlúčeniny. Normalizovaná odpoveď sa potom použije na odvodenie hodnoty IC₅₀ relaxačnej účinnosti testovanej zlúčeniny pomocou aplikácie Marquardtovej nelineárnej interaktívnej techniky zakreslovania krivky do štandardnej funkcie dávka-odpoveď.

Schopnosť zlúčeniny otvárať draslíkové kanály v hladkom svale detruzora sa dá ďalej demonštrovať druhým testom in vitro. Tento druhý test in vitro je podobný opísanému testu, pokiaľ ide o prípravu tkaniva a získavania údajov. Urobili sa však nasledujúce rozdiely. V tomto druhom teste sa sťahu pásov detruzora počas povzbudzovania a po ekvilibračnom čase dosiahne 80 mM miesto 15 mM chloridu draselného (celková koncentrácia v kúpeli). Po tejto vysokej stimulácii chloridom draselným je v tkanive evidentná trvalá tenzia, keďže vápnikové kanály citlivé na napätie sa otvorili na umožnenie prítoku vápnika do buniek a na vznik tonickej tenzie. Táto tenzia sa celkom odstráni 300 μΜ papaverínu, ktorý sa v tomto teste použije na stanovenie maximálnej odpovede.

Typické látky blokujúce vápnikové kanály, ako je nifedipín, nimodipín, isradipín a verapamil, sú v oboch testoch v dôsledku ich blokovacieho pôsobenia na vápnikové kanály schopné relaxovať a znižovať myogénnu aktivitu pásov detruzora morčaťa. Všetky z uvedených látok blokujúcich vápnikové kanály sú však účinnejšie v druhom teste s použitím 80 mM chloridu draselného ako v prvom teste s použitím 15 mM chloridu draselného. Oproti tomu, kým látka, o ktorej sa predpokladá, že otvára draslíkové kanály, cromakalim, vykazuje v prvom teste silnú relaxačnú účinnosť s hodnotou IC_S0 v rozmedzí 0,6 až 0, 9 μΜ, vykazuje táto látka v druhom teste pri koncentráciách až 30 μΜ nepatrnú relaxačnú účinnosť. Skutočnosť, že zlúčenina podľa vynálezu vykazuje vyššiu relaxačnú účinnosť v prvom teste ako v druhom teste teda svedčí o tom, že táto zlúčenina pôsobí ako látka otvárajúca draslíkové kanály. Táto zlúčenina vykazuje v tomto druhom teste hodnotu IC₅₀ 41,1 μΜ.

Schopnosť tejto zlúčeniny pôsobiť na tkanivo močového mechúra ako látka otvárajúca draslíkové kanály sa dá ďalej demonštrovať štandardným testom, ktorý meria účinok testovaných zlúčenín na odtok rubídia (⁸⁶Rb) alebo draslíka (⁴²K) z tkaniva.

Odborníkovi je ďalej zrejmé, že sa dá účinnosť zlúčeniny podľa vynálezu demonštrovať pomocou štandardných testov in vivo. Ďalej je uvedený opis takéhoto štandardného testu, ktorým sa dá stanoviť účinnosť testovanej zlúčeniny, a okrem toho či testovaná zlúčenina vykazuje pri orálnom podaní selektivitu pre močový mechúr bez podstatných kardiovaskulárnych účinkov.

Samce krýs (Wistar) s hmotnosťou 400 - 500 g sa anestetizujú intraperitoneálnou dávkou 50 mg/kg Nembutalu. Každej kryse sa vyholí brušná oblasť a predná i zadná časť krku a na kožu sa aplikuje povidon-jód. Pre katetrizáciu karotídy sa ľavá krčná tepna odkryje pomocou ventrálneho cervikálneho rezu. Odkrytá oblasť sa umyje 2 % roztokom lidokain-hydrochloridu na relaxáciu cievy. Katéter, naplnený 0,9 % fyziologickým roztokom, sa zavedie približne 2,4 cm do artérie, takže sa jeho špička dostane do aortálneho oblúka. Distálny koniec katétra sa vyvedie na povrch na zadnej časti krku, naplní sa heparínom (1000 jednotiek/ml) a tepelne sa zatvorí. Pre katetrizáciu močového mechúra sa mechúr odkryje pomocou rezu v strednej časti brucha. Brušným svalom sa prestrčí trokar približne 1 cm od hornej časti rezu a potom sa subkutánne prestrkáva až sa objaví nad kožou na zadnej strane krku. Trokarom sa prestrčí katéter naplnený fyziologickým roztokom. Malý otvor v klenbe močového mechúra sa vytvorí kauterom Accu-Temp. Katéter sa umiestni do mechúra a upevní sa podviazaním hodvábom 4-0. Katéter sa premyje fyziologickým roztokom a zaznamená sa priechodnosť. Vonkajší koniec katétra sa tepelne zatvorí na zabránenie unikania moču. Brušné svaly a koža sa zošijú. Obidva katétre sa navlečú do upínacieho gombíka z nehrdzavejúcej ocele (Instech), ktorý sa potom prišije k subkutánnemu svalu v mieste vyvedenia na povrch. Koža sa nad gombíkom zatvorí zošitím. Zvieratá sa nechajú prebrať z anestézie.

- 48 hodín po chirurgickom zákroku sa každá z krýs umiestni do metabolickej klietky a napojí sa upínacím gombíkom na pružinový upevňujúci a otáčavý systém (Instech), čím sa zabráni poškodeniu katétrov a zvieratám sa umožní voľný pohyb v klietke. Katéter z karotídy sa napojí na transduktor tlaku Gould P23XL na meranie tlaku krvi. Katéter z močového mechúra sa napojí na čerpadlo na infúziu fyziologického roztoku a na transduktor tlaku pomocou hadíc PE50 a štvorcestného uzatváracieho kohútika. Pod klietku sa umiestnia váhy s horným plnením so zbernou nádobou na meranie výdaja moču.

Krysy sa odvážia, urobí sa imitácia orálnej dávky (zavedie sa dávkovacia ihla, ale nevytlačí sa žiadna kvapalina) a začne sa s transvezikálnou infúziou fyziologického roztoku (0,18 ml/min), v ktorej sa pokračuje počas celého pokusu. Zmeny v tlaku krvi, srdcovej frekvencii, intravezikálnom tlaku a výdaji moču sa zaznamenávajú na záznamovom systéme Grass Polyfrapf alebo Gould TA4000. Zvieratá sa nechajú ekvilibrovať až sa močenie stabilizuje (približne 45 - 90 minút). V tomto okamihu sa zaznamená základná hodnota každého pokusného parametra a krysám- sa orálne podá príslušná dávka testovanej zlúčeniny (v nosnom prostredí tvorenom 75 % PEG 400 vo fyziologickom roztoku) v takých koncentráciách, že objem tvorí 1 ml/kg telesnej hmotnosti. Účinky zlúčeniny na pokusné parametre sa sledujú počas piatich hodín po podaní.

Výsledky pokusov týkajúce sa intervalu medzi sťahmi a tiež srdcová frekvencia sa vyjadria ako priemer + štandardná odchýlka merania percenta zmeny od základnej hodnoty, pričom každé zviera si slúži ako vlastná kontrola. MAP sa vyjadrí ako priemer + štandardná odchýlka merania zmeny mm Hg (1 mm Hg = 133,3220 Pa) od základnej hodnoty.

Zlúčenina podľa vynálezu je účinná v opísaných testoch, pričom je účinná a selektívna pre močový mechúr bez podstatných kardiovaskulárnych účinkov, pri orálnej dávke napríklad 3 mg/kg v opísanom teste in vivo.

Vynález ilustrujú nasledujúce príklady, ktorými sa však rozsah vynálezu v žiadnom smere neobmedzuje. V týchto príkladoch, pokiaľ sa neuvádza inak, platí že:

i) operácie sa uskutočňujú pri teplote miestnosti, t. j. pri teplote v rozmedzí 18-25 °C, ii) organické roztoky sa sušia nad bezvodným síranom horečnatým, odparovanie rozpúšťadla sa uskutočňuje na rotačnej odparke pri zníženom tlaku (600 - 4000 Pa) s teplotou kúpeľa až 60 °C, iii) termín „chromatografia“ označuje flash chromatografiu; termín „chromatografia s obrátenými fázami“ označuje flash chromatografiu na oktadecylsilánom (ODS) potiahnutom nosiči s priemerom častíc 32 - 74 pm, známom ako „PREP-40-ODS“ (Art 731740-100 od firmy Bodman Chemicals, Aston, PA, USA), chromatografia na tenkej vrstve (TLC) sa uskutočňuje na silikagélových doskách, iv) priebeh reakcií sa všeobecne sledoval pomocou chromatografie na tenkej vrstve a reakčné časy sú uvedené iba na ilustráciu,

SK 281124 Β6

v) teploty topenia nie sú korigované, uvedené teploty topenia sú hodnoty získané pre materiály pripravené, ako je opísané, v prípade niektorých príprav môže polymorfizmus spôsobovať izoláciu materiálov s odlišnými teplotami topenia, vi) konečné produkty vykazovali uspokojivé NMR-spektrá (protónová nukleárna magnetická rezonancia), vii) výťažky sú uvedené iba na ilustráciu a nejde nutne o výťažky, ktoré sa dajú dosiahnuť starostlivým uskutočnením postupu; pokiaľ sa požadovalo viac materiálu, prípravy sa opakovali, viii) pokiaľ sú uvedené údaje NMR, sú vo forme hodnôt delta pre hlavné diagnostické protóny, uvedené v ppm, vzťahujúce sa na tctrametylsilán (TMS) ako vnútorný štandard, stanovené pri 300 MHz s použitím perdeuterodimetylsulfoxidu ako rozpúšťadla, sú používané bežné skratky pre tvar signálu, väzobné konštanty (coupling constants, J) sú uvedené v Hz, Ar tam, kde je toto označenie uvedené, predstavuje aromatický protón, ix) chemické symboly majú ich obvyklý význam,

x) pomery rozpúšťadiel sa uvádzajú ako pomery objem/objem (v/v) a xi) meranie hmotnostnej spektrometrie (MS) sa uskutočňovalo s energiou elektrónov 70 elektrónvoltov spôsobom chemickej ionizácie (Cl) s použitím priamo exponovanej sondy; kde je to uvedené, bola ionizácia urobená nárazom elektrónov (eleetron impact, EI) rýchlymi neutrálnymi časticami (fast atóm bombardment, FAB); uvádzajú sa hodnoty pre m/z; všeobecne sa uvádzajú iba ióny, ktoré indikujú východiskovú hmotu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1 (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón

Miešaný roztok 3,93 g (10,85 mmol) kyseliny (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej v 24 ml N-metylpyrolidin-2-ónu sa umiestni do vopred zohriateho olejového kúpeľa s teplotou 210 °C na 20 minút. Ochladená reakčná zmes sa potom vyleje do 200 ml vody a extrahuje sa dvakrát etyléterom. Zmiešané éterové extrakty sa premyjú dvakrát vodou, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú a rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa špinavobiela pevná látka. Chromatografickým spracovaním s použitím zmesi metylénchloridu a éteru v pomere 9 : 1 ako elučného činidla a triturovaním so zmesou etyléteru a hexánu sa získa 3, 42 g (79 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky s teplotou topenia 187- 189 °C.

NMR: 1,88 - 1,91 (m, 2H, CH₂), 2,21 - 2,25 (m, 2H, CH₂), 2,53 - 2,64 (m, 2H, CH₂), 4,68 (d, 1H. J = 5,3 Hz, CH),

5,61 (d, 1H, J = 5,3 Hz, CH), 7,50 - 7,54 (m, 2H, Ar), 7,61 až 7,66 (m, 2H, Ar), 9,42 (s, 1H, NH)

Hmotnostná spektrometria: m/z = 319 (M+l) [<x]_D ²³ ~ -606,8° (c = 0,665, metanol)

Analýza C₁₇H₁₃F₃N₂O: vypočítané: 64,14 % C, 4,12 % H, 8,80 %N; nájdené: 64,07 % C, 4,24 % H, 8,78 % N.

¹⁹F-NMR analýzou tohto materiálu v prítomnosti chirálneho posunového činidla (R)-(-)-l-(9-antryl)-2,2,2-trifluóretanolu-dn (v deuterochloroforme pri -30 °C) sa zistí, že (S)-(-)-enantiomér je prítomný v približne 99 % enantiomémom nadbytku.

Intermediáma kyselina (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochmolín-3-karboxylová sa pripraví takto:

a) (+)-izobomyl-4,4,4-trifluóracetoacetát

Zmes 160,28 g (870 mmol) etyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu a 86,81 g (563 mmol) (+)-izobomeolu sa mieša pri teplote 130 °C (teplota kúpeľa) 18 hodín pod 10 cm Vigreauxovou kolónou, ktorá umožňuje oddestilovávanie etanolu. Teplota kúpeľa sa potom zvýši na teplotu 150 °C na oddestilovanie zvyškového etanolu. Izoluje sa ho celkom 29 ml (88 % teórie). Zvyšná zmes sa potom ftakcionuje pri zníženom tlaku, čím sa získa 124,6 g (76 %) (+)-izobomyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu vo forme bezfarebného oleja s teplotou varu 84 až 92 °C pri tlaku 53 Pa.

NMR (deuterochloroform): 0,82 - 1,17 (m, 11H, CH₃, CH₂), 1,55 - 1,84 (m, 5H, CH₂, CH), 3,72 (s, CH₂ diketoformy), 4,74 - 4,81 (m, 1H, -OCH), 5,59 (s, CH enolformy), 11,97 (s, OH enol-formy)

b) (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylát

Miešaná zmes 82,6 g (282,8 mmol) (+)-izobomyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu, 31,7 g (282,8 mmol) 1,3-cyklohexándiónu, 37,1 g (282,8 mmol) 3-kyanobenzaldehydu a 54,4 g (706,3 mmol) octanu amónneho v 2070 ml etanolu sa zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 4 hodín. Po odstránení vyzrážaného 9-(3-kyanofenyl)-3,4,6,7,9,10-hexahydro-l,8-(2H,5H)-akridíndiónu filtráciou sa filtrát zahustí vo vákuu. Chromatografickým spracovaním s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 7 : 3 ako elučného činidla sa získa 92 g (63 %) (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,-

7.8- oktahydrochinolín-3-karboxylátu vo forme bielej pevnej látky topiacej sa za rozkladu pri teplote 209 až 213 °C. NMR: 0,63 - 0,73 (m, 9H, CH₃), 0,86 - 1,64 (m, 7H, CH₂, CH), 1,84 - 1,88 (m, 2H, CH₂), 2,03 - 2,07 (m, 2H, CH₂), 2,34 - 2,63 (m, 2H, CH₂), 2,64 - 2,72 (m, 1H, CH), 3,92 až 3,96 (d, 1H, CH), 4,10 - 4,16 (m, 1H, CH), 7,22 - 7,25 (d, 1H, OH), 7,39 - 7,45 (m, 2H, Ar), 7,49 (s, 1H, Ar), 7,57 až

7,61 (m, 1H, Ar), 8,11 - 8,13 (d, 1H, Ar)

Hmotnostná spektrometria: m/z = 517 (M+l) Analýza C₂₈H_3IF₃N₂O₄: vypočítané: 65,10 %C, 6,05 %H, 5,42 %N; nájdené: 64,93 % C, 6,05 % H, 5,22 %N.

c) Kyselina 4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,-

6.7.8- hexahydrochinolín-3-karboxylová

Miešaná zmes 8,5 g (16,5 mmol) (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,-

7.8- oktahydrochinolín-3-karboxylátu, 1,05 g (5,5 mmol) kyseliny p-toluénsulfónovej a 170 ml toluénu sa zohrieva do varu pod spätným chladičom počas 3 hodín. Reakčnú zmes tvorí nerozpustná živica, ktorá obsahuje požadovanú kyselinu, a toluénový roztok. Aby sa zabránilo dekarboxylácii, reakčná zmes sa zohrieva iba toľko, aby sa dosiahlo mierneho varu pod spätným chladičom. Po odstránení rozpúšťadla sa zvyšok roztrepe medzi etylacetát a vodu. Etylacetátový roztok sa premyje vodou, oddelí sa a dvakrát sa extrahuje nasýteným vodným hydrogenuhličitanom sodným. Miešané spojené hydrogenuhličitanové extrakty sa ochladia v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridáva koncentrovaná kyselina chlorovodíková, až je roztok veľmi kyslý. Zmes sa extrahuje éterom a éterová vrstva sa vysuší, prefiltruje a zahustí vo vákuu, čím sa získa žltá olejovitá živica. Triturovaním so zmesou metylénchloridu a hexánu sa získa 1,8 g (31 %) požadovanej karboxylovej kyseliny vo forme špinavobielej pevnej látky. Tento materiál je

SK 281124 Β6 identický pokiaľ ide o údaje získané NMR a chromatografiou na tenkej vrstve (na silikagéli s použitím 10 % metanolu v chloroforme obsahujúceho niekoľko kvapiek kyseliny octovej ako elučného činidla) s materiálom opísaným a charakterizovaným v časti i) príkladu 1.

Etylacetátová vrstva sa vysuší a odparí, čím sa získa nečistý (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórnietyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylát, ktorý bol identický so skôr pripravenou a charakterizovanou vzorkou. Jedná sa o bielu pevnú látku s teplotou topenia 179 až 180 °C.

NMR: 0,61 - 0,72 (m, 9H, CH₃), 1,00 - 2,6 (m, 13H, CH₂, CH), 4,45 - 4,57 (m, 1H, CH), 4,88 - 4,92 (d, 1H, CH), 7,46 až 7,55 (m, 3H, Ar), 7,65 - 7,69 (m, 1H, Ar), 9,70 - 9,71 (d, ΙΗ,ΝΗ)

Hmotnostná spektrometria (chemická ionizácia, CH₄): 517 (M+l)

Analýza C₂gH₂₉F₃N₂O₄: vypočítané: 67,46 % C, 5,86 % H, 5,62 %N; nájdené: 67,29 % C, 5,99 % H, 6,71 %N.

Izolovaný (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylát sa podrobí podobným podmienkam, ako je opísané v príklade

l.c), čím sa získa ďalších 1,1 g kyseliny 4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej s celkovým výťažkom 2,9 g (49 %).

d) Soľ kyseliny (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej s S-(-)-a-metylbenzylamínom

Do miešanéhp roztoku 28,2 g (77,84 mmol) racemickej kyseliny 2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej v 211 ml n-butanolu sa pridá 1000 ml toluénu a potom roztok 9,4 g (77,84 mmol) S-(-)-a-metylbenzylamínu v 198 ml toluénu. Zmes sa nechá stáť pri teplote miestnosti cez noc a potom sa výsledná zrazenina odfiltruje, premyje sa toluénom a etyléterom, čím sa získa 32 g bielej soli. Piatimi prekryštalizovaniami zo zmesi toluénu a n-butanolu v pomere 3 : 1, so zohrievaním zmesi až sa soľ rozpustí, sa získa 7,77 g uvedenej soli vo forme bielej pevnej látky, ktorá mäkne a stáva sa sklovitou pri teplote 112 až 115 °C a tekutá tavenina je z nej pri teplote 148 -150 °C.

NMR; 1,36 - 1,38 (d, 3H, CH₃), 1,75 - 1,88 (m, 2H, CH₂), 2,19 - 2,23 (m, 2H, CH₂), 2,49 - 2,61 (m, 2H, CH₂), 3,35 až 3,42 (m, vymeň., voda), 4,24 - 4,26 (q, 1H, J = 6,8 Hz, CH), 4,91 (s, 1H, CH), 7,16 - 7,60 (m, 9H, Ar) Hmotnostná spektrometria: m/z = 363 (M+l) [a]D = -180,5° (c = 1,075, metanol, 23 °C) % enantiomémy nadbytok zistený ¹⁹F-NMR v deuterochloroforme

Analýza C₂₆H₂₄F₃N₃O₃. 1,0 C₄H₉OH . 0,5 H₂O: vypočítané: 63,59 % C, 6,23 % H, 7,42 % N; nájdené: 63,66 % C, 6,15 % H, 7,06 % N.

Ďalším experimentovaním sa zistilo, že maximálna teplota počas prekryštalizovania má byť 75 °C na zabránenie dekarboxylácii a že v priebehu prekryštalizovania nemá prebiehať trepanie, inak je enantioméme obohatenie nízke.

e) Kyselina (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylová

Do miešanej suspenzie 7,5 g (15,5 mmol) soli kyseliny (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-1,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej s S-(-)-a-metylbenzylamínom v 150 ml vody, chladenej v ľadovom kúpeli, sa po kvapkách pridáva koncentrovaná kyselina chlorovodíková, až je zmes veľmi kyslá. Zmes sa dvakrát extrahuje etyléterom a éterové vrstvy sa zmiešajú, vysušia, prefiltrujú a rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa žltá pena. Triturovaním s dichlórmetánom sa získa 4,9 g (88 %) uvedenej karboxylovej kyseliny vo forme bledožltej pevnej látky s teplotou topenia 206 - 208 °C.

NMR: 1,74 - 1,95 (m, 2H, CH₂), 2,18 - 2,32 (m, 2H, CH₂), 2,54 - 2,73 (m, 2H, CH₂), 4,92 (s, 1H, CH), 7,47 - 7,52 (m, 3H, Ar), 7,64 - 7,68 (m, 1H, Ar), 9,60 (s, 1H, NH), 13,07 (s, 1H, COOH)

Hmotnostná spektrometria: m/z = 363 (M+l)

Intermediáma kyselina 4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylová opísaná v príklade l.c) sa môže alternatívne pripraviť ako je opísané v príklade 6.

f) 2-kyanoetylhemiacetál 2-kyanoetyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu

Zmes 30 ml (205 mmol) etyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu a 7,11 g (100 mmol) 3-hydroxypropionitrilu sa mieša pri teplote 150 °C (teplota kúpeľa) 18 hodín pod lOcm Vigreauxovou kolónou, ktorá umožňuje oddestilovávanie etanolu. Zvyšná zmes sa potom frakcionuje pri atmosférickom tlaku. O frakcii destilovanej pri teplote 222 - 228 °C (11,71 g) sa pomocou NMR a hmotnostnej spektrometrie zistí, že obsahuje približne 50 mol % 2-kyanoetylhemiacetálu 2-kyanoetyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu.

NMR (deuterochloroform): 2,43 - 2,65 (m, 2H), 2,76 - 2,99 (m, 4H), 3,78 - 3,82 (m, 1H), 4,13 - 4,15 (m, 1H), 4,33 až

4,57 (m, 2H), 5,96 (s, 1H, OH)

g) 2-kyanoetyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,7,8-oktahydrochmolín-3-karboxylát

Miešaná zmes materiálu z príkladu lf spolu so 7,34 g (56 mmol) 3-kyanobenzaldehydu, 6,83 g (56 mmol) 1,3-cyklohexándionu a 13,10 g (170 mmol) octanu amónneho v 400 ml etanolu sa mieša za varu pod spätným chladičom 10 hodín. Ochladený roztok sa prefiltruje na odstránenie vyzrážaného 9-(3 -kyanofeny 1)-3,4,6,7,9,10-hexahydro-1,8-(2H,5H)-akridíndiónu. Filtrát sa odparí do sucha a zvyšok sa podrobí chromatografii s použitím zmesi metylénchloridu, zmesi etylacetátu a metylénchloridu v pomere 1 : 1 a etylacetátu ako elučného činidla, čím sa získa 4,14 g 2-kyanoetyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-1,2,3,4,5,6,7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylátu. NMR: 1,86 - 1,90 (m, 2H, CH₂), 1,94 - 2,18 (m, 2H, CH₂), 2,31 - 2,38 (m, 1H, alifatický), 2,50 - 2,72 (m, 3H, alifatický), 2,82 (d, 1H, alifatický, J = 11,9), 3,35 (široký s, 1H, alifatický), 3,94 - 4,02 (m, 2H, alifatický), 7,37 - 7,59 (m, 5H, Ar, OH), 8,16 (s, ΙΗ,ΝΗ)

Hmotnostná spektrometria: m/z = 434 (M+l)

h) 2-kyanoetyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-1 ,-

4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylát

Zmes 4,14 g (9,6 mmol) 2-kyanoetyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylátu, 0,61 g (3,2 mmol) kyseliny p-toluénsulfónovej a 100 ml toluénu sa mieša a zohrieva do varu pod spätným chladičom s použitím Dean-Starkovej aparatúry 2 hodiny. Reakčná zmes, ktorú tvorí tmavá olejovitá fáza a toluénová fáza, sa ochladí a vyleje na chromatografický stĺpec s priemerom 3,81 cm obsahujúci 90 g silikagélu. Zmes sa na stĺpci premyje malým množstvom etylacetátu. Elúciou etyléterom a triturovaním výslednej pevnej látky s etyléterom sa získa 2,84 g (72 %) uvedeného esteru vo forme žltooranžovej pevnej látky s teplotou topenia 148 až 151,5 °C.

SK 281124 Β6

NMR: 1,79 - 1,99 (m, 2H, CH₂), 2,19 - 2,3 (m, 2H, CH₂), 2,50 - 2,74 (m, 2H, CH₂), 2,85 (t, 2H, CH₂), 4,15 - 4,27 (m, 2H, CH₂), 4,94 (s, 1H, CH), 7,47 - 7,63 (m, 3H, Ar), 7,65 až 7,67 (m, 1H, Ar), 9,84 (s, 1H, NH)

Hmotnostná spektrometria: m/z = 416 (M+l) Analýza C₂₁Hi₆F₃N₃O₃:

vypočítané: 60,72 % C, 3,88 % H, 10,12 % N; nájdené: 60,63 % C, 3,80 % H, 9,89 % N.

i) Kyselina 4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,-

6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylová

Do miešanej suspenzie 2,80 g (6,74 mmol) 2-kyanoetyl-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylátu v 8,5 ml 1,2-dimetoxyetánu, chladenej v ľadovom kúpeli, sa v priebehu 10 minút po kvapkách pridá vopred ochladený roztok 0,80 g (20,0 mmol) hydroxidu sodného v 6,5 ml vody. Keď sa východiskový ester rozpustí, získa sa tmavohnedý roztok. Roztok sa mieša pri teplote miestnosti 2 hodiny, potom sa žltohnedý roztok nariedi 16 ml vody, vráti sa späť do ľadového kúpeľa a pri miešaní sa k zmesi pridajú 2 ml koncentrovanej kyseliny chlorovodíkovej. Vyzráža sa hnedý olej, ktorý pri miešaní tuhne a vzniká krémovo sfarbená pevná látka. Táto pevná látka sa odfiltruje a premyje sa studenou vodou. Tento materiál sa suší cez noc pri teplote 50 °C a tlaku 13,33 Pa, čím sa získa 2,33 g (95 %) uvedenej karboxylovej kyseliny, topiacej sa pri rozklade (pričom sa vyvíja plyn) pri teplote 209 - 211 °C.

NMR: 1,75 - 1,88 (m, 1H, CH₂), 1,89 - 1,95 (m, 1H, CH₂), 2,18 - 2,32 (m, 2H, CH₂), 2,54 - 2,73 (m, 2H, CH₂), 4,92 (s, 1H, CH), 7,47 - 7,54 (m, 3H, Ar), 7,65 - 7,67 (m, 1H, Ar),

9,62 (s, 1H, NH), 13,10 (s, 1H, CO2H)

Hmotnostnáspektrometria: m/z = 363 (M+l) Analýza C₁₈H₁₃F₃N₂O₃:

vypočítané: 59,67 % C, 3,62 % H, 7,73 % N; nájdené: 59,53 % C, 3,84 % H, 7,69 % N.

Príklad 2 (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón

Produkt z príkladu 1 sa pripraví vo väčšom rozsahu takto:

Miešaný roztok 50,5 g (139,4 mmol) kyseliny (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej v 325 ml N-metylpyrolidin-2-ónu sa rýchlo zohreje s použitím vyhrievacieho plášťa za 20 minút na teplotu 180 °C (merané vnútorným teplomerom) a potom sa udržiava na tejto teplote ďalších 20 minút. Ochladená reakčná zmes sa vyleje do 1200 ml vody a extrahuje sa dvakrát etylacetátom. Zmiešané extrakty sa premyjú dvakrát vodou, vysušia sa síranom horečnatým, prefiltrujú a rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa špinavobiela pevná látka. Chromatograflckým spracovaním s použitím zmesi metylénchloridu a etylacetátu v pomere 85 :15 ako elučného činidla a prekryštalizovaním z acetonitrilu sa získa 32,85 g (74 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej pevnej látky, ktorá je identická ako produkt z príkladu 1.

Príklad 3

Intermediámy (+)-izobomyl-4,4,4-trifluóracetoacetát (z príkladu la sa pripraví vo väčšom rozsahu takto:

Zmes 2,75 kg (14,91 mol) etyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu a 1,53 kg (9,93 mol) (+)-izobomeolu sa mieša pri teplote 105 °C (merané vnútorným teplomerom) 20 hodín pod destilačným nadstavcom, ktorý umožňuje oddestilovávanie etanolu. Teplota sa potom počas 10 hodín postupne zvýši na 155 °C na oddestilovanie zvyškového etanolu. Izoluje sa ho celkom 650 ml (114 % teórie). Zvyšná zmes sa potom fŕakcionuje pri zníženom tlaku, čím sa získa 2,21 kg (76 %) (+)-izobomyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu vo forme bezfarebného oleja, ktorý je identický ako produkt z príkladu la.

Príklad 4

Intermediámy (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmctyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylát (z príkladu lb) sa pripraví vo väčšom rozsahu takto:

Miešaná zmes 830,6 g (2,86 mol) (+)-izobomyl-4,4,4-trifluóracetoacetátu, 320,7 g (2,86 mol) 1,3-cyklohexándionu, 375,0 g (2,86 mol) 3-kyanobenzaldehydu a 551,0 g (7,15 mol) octanu amónneho v 15,0 1 etanolu sa zohrieva do varu pod spätným chladičom 8 hodín. Zmes sa prefiltruje na odstránenie 9-(3-kyanofenyl)-3,4,6,7,9,10-hexahydro-l,8-(2H,5H)-akridíndiónu. Filtrát sa vo vákuu zahustí na polovičný objem. Prvá časť požadovaného produktu (657,0 g, 44,5 %) sa izoluje filtráciou a premyje sa etyléterom. Filtráty a premývacie kvapaliny sa zahustia vo vákuu, zvyšok sa trituruje s etyléterom a prefiltruje, čím sa získa druhá časť produktu (225,0 g 15,2 %). Tento zmiešaný materiál sa použije bez ďalšieho čistenia. Vzorka sa chromatograficky vyčistí s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 7 ; 3 ako elučného činidla, čím sa získa (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluónnetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,5,6,7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylát vo forme bielej pevnej látky, ktorá je identická s látkou pripravenou v príklade lb.

Príklad 5

Príprava kyseliny 4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-l,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej (z príkladu lej vo väčšom rozsahu sa uskutoční takto:

Miešaná zmes 800,0 g (1,55 mol) (+)-izobomyl-4-(3-kyanofeny])-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-1,2,3,4,5,6,-

7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylátu, 148,0 g (0,78 mol) kyseliny p-toluénsulfónovej a 7,5 1 ľadovej kyseliny octovej sa zahreje použitím vykurovacieho plášťa za 1 hodinu a 15 minút na teplotu 100 °C. Zmes sa udržiava 6 hodín na teplote 102 - 104 °C, keď chromatografia na tenkej vrstve na silikagéli s použitím zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 6 : 4 ako elučného činidla svedčí o tom, že reakcia je skončená. Na minimalizáciu dekarboxylácie sa reakčná zmes zohrieva iba toľko, aby sa dosiahlo maximálnej teploty 104 °C. Po odstránení rozpúšťadla sa zvyšok roztrasie medzi etylacetát a vodu. Etylacetátový roztok sa premyje vodou, oddelí sa a trikrát sa extrahuje nasýteným vodným hydrogenuhličitanom sodným. Miešané spojené hydrogenuhličitanové extrakty sa ochladia v ľadovom kúpeli a po kvapkách sa pridáva koncentrovaná kyselina chlorovodíková, až je roztok veľmi kyslý. Zmes sa extrahuje etyléterom a zmiešané extrakty sa vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a zahustia vo vákuu, čím sa získa žltá pena. Triturovaním so zmesou metylénchloridu a hexánu sa získa 289,0 g (51,5 %) uvedenej karboxylovej kyseliny vo forme bledožltej pevnej látky. Tento materiál je identický pokiaľ ide o údaje získané NMR a chromatografiou na tenkej vrstve (na silikagéli s použitím 10 % metanolu v chloroforme obsahujúceho niekoľko kvapiek kyseliny octovej ako elučného činidla) s materiálom opísaným a charakterizovaným v časti i) príkladu 1.

Etylacetátová vrstva sa vysuší síranom horečnatým, prefiltruje a odparí vo vákuu, čím sa získa 490 g nečistého (±)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(ÍH)-chinolonu vo forme voskovej bledožltej pevnej látky.

Tento materiál sa ďalej označuje ako „Racemát“.

Príklad 6

Intermediáma kyselina (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-οχο-1,4,5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylová (z príkladu le) sa pripraví vo väčšom rozsahu takto:

Do miešanej suspenzie 68,0 g (140,6 mmol soli kyseliny (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-5-oxo-1,4,5,6,-

7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej s S-(-)-a-metylbenylamínom v 700 ml vody, chladenej v ľadovom kúpeli, sa po kvapkách pridáva koncentrovaná kyselina chlorovodíková, až je zmes veľmi kyslá. Zmes sa štyrikrát extrahuje etyléterom a zmiešané extrakty sa vysušia síranom horečnatým, prefiltrujú a rozpúšťadlo sa odstráni, čím sa získa 50,6 g (99 %) žltej peny. Triturovaním so zmesou metylénchloridu a hexánu sa získa čistá vzorka uvedenej karboxylovej kyseliny vo forme bledožltej pevnej látky, ktorá je identická s produktom z príkladu le.

Príklad 7

Zlúčenina uvedená v názve, (S)-(-)-4-(3-kyanofenyl)-2-triíluórmetyl-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón, sa izoluje z vyčisteného Racemátu preparatívnou chirálnou chromatografiou.

2,95 g surového Racemátu - materiálu získaného spojením produktov zo šiestich reakcií v rovnako veľkom rozsahu, ako sa opísali v príklade 5, sa chromatograficky vyčistí s použitím zmesi metylénchloridu a etylacetátu v pomere 85 : 15 ako elučného činidla, čím sa získa 580,8 g vyčisteného Racemátu, ktorý sa delí, ako je opísané ďalej. Izolácia tohto materiálu počas úvodného čistenia nebola optimalizovaná.

Preparatívna chirálna chromatografia 580,8 g vyčisteného Racemátu sa uskutoční na kolóne CHIRALPACK^rAD™ (amylózový nosič, 10 x 50 cm, elučné činidlo: zmes hexánu a etanolu v pomere 85 : 15). Zásobný roztok vzorky sa pripraví najskôr rozpustením zlúčeniny v etanole a potom riedením tohto roztoku hexánom až sa dosiahne konečného zloženia rozpúšťadla, ktoré je ekvivalentné zloženiu elučného činidla. Konečná koncentrácia vzorky v pripravenom zásobnom roztoku je 6 g/liter. Každý chromatografícký cyklus sa uskutočňuje injekčným nanesením 500 ml zásobného roztoku a eluovaním s rýchlosťou prietoku 200 ml/minútu. (S)-(-)-enantiomér (zlúčenina uvedená v názve) je prvou pikou, ktorá sa z kolóny vymýva, (+)-enantiomér sa vymýva ako druhá. Odparením eluátu vo vákuu sa izoluje (S)-(-)-enantiomér (281,0 g, enantiomémy nadbytok 99,7 %, chemická čistota 98,6 %) vo forme špinavobielej pevnej látky. Prekryätalizovaním z 1000 ml acetonitrilu sa získa 261,7 g zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielej kryštalickej pevnej látky, identickej v každom smere s materiálom pripraveným ako sa opísalo v príklade 1.

Príklad 8

Nasledujúce príklady ilustrujú reprezentatívne farmaceutické dávkovacie formy obsahujúce zlúčeninu podľa vynálezu (ďalej označovanú „zlúčenina X“), na terapeutické alebo profylaktické použitie u človeka:

(a) tableta

	mg/tabletu
zlúčenina X	50,0
manitol, USP	223,75
nátrium-croskarmelóza	6,0
kukuričný škrob	15,0
hydroxypropylmetylcelulóza, USP	2,25
stearát horečnatý	3,0

(b) kapsula mg/kapsulu zlúčenina X 10,0 manitol, USP 488,5 nátrium-croskarmelóza 15,0 stearát horečnatý 1,5

Uvedené formulácie sa dajú získať pomocou bežných postupov dobre známych v odbore farmácie. Tablety sa dajú poťahovať činidlami chrániacimi účinnú látku pred pôsobením žalúdočných štiav pomocou bežných spôsobov, napríklad na vytvorenie povlaku z acetát-ftalátu celulózy.

Claims (21)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón a jeho farmaceutický prijateľné soli.
2. 2. Spôsob prípravy (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónu, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa dekarboxyláciu kyseliny (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-5-oxo-l,4,-

   5,6,7,8-hexahydrochinolín-3-karboxylovej.
3. 3. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa dekarboxylácia uskutočňuje pri teplote v rozmedzí od 190 °C do 220 °C.
4. 4. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa dekarboxylácia uskutočňuje v inertnom rozpúšťadle s vhodnou teplotou varu.
5. 5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že sa ako inertné rozpúšťadlo použije N-metylpyrolidin-2-ón.
6. 6. Spôsob podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že sa dekarboxylácia uskutočňuje v prítomnosti kyslého katalyzátora.
7. 7. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujú cď sa tým, že sa dekarboxylácia uskutočňuje pri teplote v rozmedzí od 90 °C do 120 °C.
8. 8. Spôsob podľa nároku 6, v y z n a é u j ú c i sa tým, že kyslým katalyzátorom je koncentrovaná kyselina sírová alebo kyselina p-toluénsulfónová.
9. 9. Spôsob podľa nároku 6, vyznačujúci sa tým, že sa kyselinou katalyzovaná dekarboxylácia uskutočňuje v prítomnosti rozpúšťadla vybraného zo skupiny zahrnujúcej alkoholy, dimetylsulfoxid, aromatické uhľovodíky, étery a N-metylpyrolidin-2-ón.
10. 10. Spôsob prípravy (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónu, vyznačujúci sa tým, že sa

    i) ester kyseliny acetoctovej všeobecného vzorca (III) alebo jeho hemiacetál errU_0R? , v ktorom zvyšok ORa predstavuje zvyšok alkoholu, podrobí reakcii s octanom amónnym, 3-kyanobenzaldehydom a

    1,3-cyklohexándiónom za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (IVa) a

    ii) buď sa dehydratuje zlúčenina všeobecného vzorca (IVa) za vzniku zlúčeniny všeobecného vzorca (IV)

    ORa a zlúčenina všeobecného vzorca (IV) sa zmydelní za vzniku kyseliny vzorca (II)

    ΌΗ alebo sa zlúčenina všeobecného vzorca (IVa) podrobí kyselinou katalyzovanej dehydratácii a hydrolýze za vzniku kyseliny vzorca (II), iii) zlúčenina vzorca (II) sa rozštiepi na enantioméry prekryštalizovaním vo forme soli s S-(-)-a-metylbenzylamínom z rozpúšťadla a iv) rozštiepená zlúčenina vzorca (II) sa dekarboxyluje.
11. 11. Spôsob prípravy podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorom zvyšok ORa predstavuje zvyšok alkoholu, ktorý tvorí ester, ktorý sa dá rozštiepiť v mierne zásaditých podmienkach.
12. 12. Spôsob podľa nároku 11, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorom zvyšok Ra znamená 2-kyanoetylovú skupinu.
13. 13. Spôsob prípravy podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorom zvyšok ORa tvorí ester, ktorý sa dá štiepiť v kyslých podmienkach.
14. 14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že sa použije zlúčenina všeobecného vzorca (III), v ktorom zvyšok Ra znamená izobomylovú skupinu.
15. 15. Spôsob prípravy podľa nároku 10, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa reakciu (+)-izobomyl-4-(3-kyanofenyl)-2-trifluórmetyl-2-hydroxy-5-oxo-l,2,3,4,-

    5,6,7,8-oktahydrochinolín-3-karboxylátu v prítomnosti kyseliny p-toluénsulfónovej a v podstate bezvodného rozpúšťadla.
16. 16. Spôsob podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že sa ako rozpúšťadlo použije ľadová kyselina octová.
17. 17. Spôsob podľa nároku 15 alebo 16, vyznačujúci sa tým, že sa reakcia uskutočňuje pri teplote 100 až 104 °C.
18. 18. Spôsob podľa nároku 17, vyznačujúci sa tým, že sa reakcia uskutočňuje pri teplote 102 až 104 °C.
19. 19. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofcnyl)-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolón podľa nároku 1 alebo jeho farmaceutický prijateľnú soľ a farmaceutický prijateľné riedidlo alebo nosič.
20. 20. Použitie (S)-(-)-2-trifluórmetyl-4-(3-kyanofenyl)-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónu podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie inkontinencie moču.
21. 21. Použitie (S)-(-)-2-trifluórmctyl-4-(3-kyanofenyl)-4,6,7,8-tetrahydro-5(lH)-chinolónu podľa nároku 1 na výrobu liečiva na liečenie astmy.