SK182599A3

SK182599A3 - Soluble prodrugs of paclitaxel

Info

Publication number: SK182599A3
Application number: SK1825-99A
Authority: SK
Inventors: George Digenis; Kenneth H Kortright
Original assignee: Baker Norton Pharma
Priority date: 1997-06-20
Filing date: 1997-06-20
Publication date: 2000-07-11
Also published as: JP2002505682A; EP1001769B1; HUP0002521A2; HUP0002521A3; AU3574097A; EP1001769A1; WO1998058927A1; IL133585A0; CA2294606A1; EP1001769A4; ATE219363T1; DE69713526D1

Description

Rozpustné prekurzory paclitaxelu

Oblasť techniky

Vynález sa týka zlúčenín, ktoré pôsobia ako prekurzory protirakovinového prostriedku paclitaxelu a ktoré sú v zásade rozpustné vo vode, ako aj farmaceutických kompozícií obsahujúcich také prekurzory a spôsobov liečby pomocou takých kompozícii.

Doterajší stav techniky

Paclitaxel je prírodný diterpénový produkt izolovaný z tisu krátkolistého (Taxus brevifolia). Patrí do taxánovej rodiny terpénov. Prvýkrát ho izolovali v roku 1971 Wani a kol. (J. Am. Chem. Soc, 93:2325, 1971), ktorí charakterizovali jeho štruktúru chemickými a rôntgenovými kryštalografickými metódami.

Paclitaxel bol schválený na klinické použitie pri liečbe odolnej rakoviny vaječníkov v Spojených štátoch (Markman a koľ, Yale Joumal of Biology and Medicíne, 64:583,1991; McGuire a koľ, Ann. Intern. Med., 111:273,1989). Je účinný pri chemoterapii na niekoľko typov neoplaziem vrátane prsníkových (Holmes a kol., J. Nat. Cancer Inst., 83:1797,1991) a tiež bol schválený na liečbu rakoviny prsníkov. Je potenciálnym kandidátom na liečbu neoplaziem v koži (Einzig a kol., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol., 20:46) a karcinómov hlavy a krku (Forastire et al. Sem. Oncol., 20:56,1990). Táto zlúčenina vykazuje aj potenciál na liečbu polycystickej obličkovej choroby (Woo a kol., Náture, 368:750,1994), rakoviny pľúc a malárie.

Paclitaxel je len mierne rozpustný vo vode a toto spôsobilo výrazné problémy vo vývoji vhodných injektovateľných a infúznych prípravkov užitočných pri protirakovinovej chemoterapii. Niektoré prípravky paclitaxelu na IV infúziu boli vyvinuté s použitím látky CREMOPHOR EL™ (polyetoxylovaný ricínový olej) ako nosiča liečiva vzhľadom na nerozpustnosť paclitaxelu vo vode. Napríklad paclitaxel používaný v klinických testoch pod záštitou NCI bol formulovaný v 50% CREMOPHOR EL™ a 50 % bezvodého alkoholu. Keď sa však CREMOPHOR EL™ podáva intravenózne, je sám osebe toxický a spôsobuje vazodilatáciu, sťažené dýchanie, letargiu, hypotenziu a smrť u psov. Tiež sa predpokladá, že je zodpovedný za reakcie alergického typu pozorované počas podávania paclitaxelu.

V snahe zvýšiť rozpustnosť paclitaxelu a vyvinúť bezpečnejšie klinické prípravky sa uskutočnili štúdie orientované na syntézu analógov paclitaxelu, kde poloha 2' a/alebo 7 je derivatizovaná skupinami, ktoré zvyšujú rozpustnosť vo vode. Tieto snahy viedli k prekurzorom liečiv, ktoré sú rozpustnejšie vo vode ako pôvodná zlúčenina a ktoré po aktivácii vykazujú cytotoxické vlastnosti. Do jednej dôležitej skupiny takých prekurzorov patria 2*-óniové soli paclitaxelu a docetaxelu, konkrétne 2’-metylpyridínium acetátové (2-MPA) soli (pozrite Nicolaou a kol., Angew. Chim. Int. Engl., 33:1583-1587,1994).

Nedávno sme zistili, že paclitaxelová óniová soľ 2-MPA paclitaxel sa ťažko pripravuje v zásade čistej forme a výťažky čistej soli podľa syntéz navrhovaných vo vedeckej a patentovej literatúre sú veľmi nízke. Dôvodom je predovšetkým to, že tieto syntézy neposkytujú viac ako 65 - 70 % soli v zmesi s paclitaxelom (a malé množstvá iných nečistôt). Po oddelení od paclitaxelu pomocou HPLC v rozpúšťadle obsahujúcom nadbytok acetátového iónu (napr. octanu amónneho) sa soľ pri nakoncentroVaní z HPLC eluentu rýchlo rozkladá na paclitaxel a možno izolovať len veľmi malé množstvo 2-MPA. Slabý výťažok čistej prekurzorovej óniovej soli je veľkou prekážkou vývoja takého produktu ako komerčne praktického farmaceutika, pretože paclitaxelová východisková látka je mimoriadne drahá a nie je praktické používať značné množstvá paclitaxelu na výrobu nepatrných množstiev čistého alebo v zásade čistého prekurzorového konečného produktu.

Sú teda potrebné zlepšené prekurzory paclitaxelu, ktoré sú vysoko rozpustné vo vode, stabilné a dajú sa relatívne jednoducho pripraviť vo vysokom výťažku a čistote.

I

Podstata vynálezu

Pripravili sme a otestovali rozpustnosť a stabilitu istých prekurzorov paclitaxelu, ktorými sú 2-óniové soli podobné ako paclitaxel 2-MPA z doterajšieho stavu techniky, ale ktoré majú neočakávané priaznivé vlastnosti, ktoré známe 2‘óniové soli paclitaxelu nevykazujú. Patrí medzi ne 2’-metylpyridínium mezylát, fosfát a bikarbonát.

Z vodných roztokov nových óniových solí a voliteľne dodatočných farmaceutický prijateľných prísad možno pripraviť injektovateľné alebo orálne farmaceutické kompozície. Tieto kompozície možno podávať pacientom napríklad intravenóznou (IV) infúziou, bolusovou injekciou alebo orálne pri liečbe rakovín a nádorov reagujúcich na paclitaxel.

Podrobný opis vynálezu

Paclitaxel má nasledujúci štruktúrny vzorec:

Paclitaxel

Ako je uvedené v úvodnej časti, uskutočnili sa pokusy (najmä Nicolaou a kol.) vytvoriť rozpustné deriváty paclitaxelu, ktoré sa hydrolyzujú in vivo na aktívne liečivo, vytvorením óniových solí v polohe 2* pôvodnej zlúčeniny. Óniová soľ, ktorá je indikovaná v doterajšom stave techniky ako najvýhodnejšia z hľadiska svojej farmakologickej aktivity ako aj pre nízku toxicitu (neprevyšujúcu známu toxicitu paclitaxelu), je 2'-metylpyridínium acetátová (2-MPA) soľ paclitaxelu.

Postupy uvedené v doterajšom stave techniky na syntézu soli 2-MPA dávajú suchý prášok, ktorý nemá vyššiu čistotu ako 65 - 70%, pričom zvyšok prášku pozostáva z paclitaxelu a iných menších nečistôt. Pri pokuse o čistenie produktu pomocou HPLC pomocou acetátového tlmivého roztoku sa však 2*-MPA, ktorý sa eluuje z kolóny za prítomnosti nadbytku acetátu, rýchlo rozkladá a možno získať iba nepatrné množstvá čistého produktu. Preto sme syntetizovali nové rozpustné paclitaxelové 2*-óniové soli ako rozpustné prekurzory pre paclitaxel, ktoré na rozdiel od 2'-MPA možno syntetizovať a vyčistiť vo vysokých výťažkoch a bez veľkých ťažkostí. Tieto soli majú nasledujúci štruktúrny vzorec:

d) kde X'je CH3SO3; H2PO4 alebo HCO₃‘.

Osobitne zaujímavá z hľadiska svojich fyzikálnych aj farmakologických vlastností je zlúčenina vzorca I, kde X'je mezylátová skupina (CH3SO3*). teda óniová soľ s nasledujúcou štruktúrou:

Paclitaxel-2'-metylpyridínium mezylát

Soli vzorca I možno syntetizovať z paclitaxelu podľa nasledujúceho všeobecného postupu:

1. Paclitaxel a 2-fluór-l-metylpyridínium tozylát (2-FMPT) sa rozpustia v prakticky suchom organickom rozpúšťadle, napr. dichlórmetáne.

2. Do uvedenej zmesi sa pridá trietylamín alebo iné činidlo tvoriace kvartéme zlúčeniny.

3. Zmes sa mieša alebo trepe pri teplote miestnosti a odparí sa dosucha s výhodou za vákua. Suchý zvyšok sa rozpustí v druhom organickom rozpúšťadle, aby sa získal roztok vhodný na vysokovýkonnú kvapalinovú chromatografiu (HPLC), napríklad v acetonitrile, a chromatografuje sa na reverznej fáze pomocou zmesi rovnakého rozpúšťadla a vody ako prvej mobilnej fázy v priebehu prvotnej fázy, počas ktorej sa eluujú všetky frakcie iné ako tie, ktoré obsahujú požadovaný konečný produkt óniovej soli.

4. Frakcie obsahujúce požadovanú óniovú soľ sa potom eluujú pomocou druhej mobilnej fázy obsahujúcej roztok NaX (kde X má význam podľa vzorca I) v tej istej zmesi vody a organického rozpúšťadla ako v prvej mobilnej fáze.

5. Frakcie obsahujúce óniovú soľ sa skombinujú, nakoncentrujú a vysušia (napríklad lyofilizáciou), čím sa získa odparok konečného produktu. Tento odparok možno ďalej čistiť extrakciou vhodnými polárnymi organickými rozpúšťadlami, napríklad dichlórmetánom. Produkt sa vyzráža pridaním nepolárneho rozpúšťadla (napríklad hexánu).

6. Rozpúšťadlá sa odparia a zvyšok sa vysuší, čím sa získa vyčistený produkt.

Predložený vynález zahŕňa aj spôsob liečby pacienta - cicavca postihnutého nádorom, rakovinou alebo iným chorobným stavom reagujúcim na liečbu paclitaxelom podávaním farmaceutickej kompozície obsahujúcej na liečenie choroby účinné množstvo prekurzora paclitaxelu - óniovej soli podľa predloženého vynálezu tomuto pacientovi. Medzi choroby reagujúce na paclitaxel, ktoré možno liečiť podľa vynálezu, patria rakoviny, nádory, zhubné nádory, nekontrolovaná proliferácia tkaniva alebo buniek po zranení tkaniva, polycystická obličková choroba a malária. Medzi rakoviny, ktoré možno liečiť, patrí hepatocelulárny karcinóm, pečeňové metastázy, rakoviny gastrointestinálneho traktu, pankreasu, prostaty a pľúc a Kaposiho sarkóm.

Prekurzory podľa vynálezu možno podávať IV infúziou, neintravenóznou injekciou, intraperitoneálne a injekciou bolusu. Prekurzory možno podávať pacientovi aj orálne vo vhodnej liekovej forme samotné alebo spolu s prostriedkom podporujúcim orálnu biologickú dostupnosť podaným buď (a) menej ako 0,5 hodiny pred nimi, spolu s nimi alebo menej ako 0,5 hodiny po nich, (b) asi 0,5 až 72 hodín pred nimi, alebo (c) súčasne (a) aj (b). Taký prostriedok podporujúci biologickú dostupnosť môže byť vybraný zo skupiny pozostávajúcej z cyklosporínov A až Z, (Me-lle-4)-cyklosporín, dihydrocyklosporín A, dihydrocyklosporín C, acetylcyklosporin A, genisteín a príbuzné izoflavonoidy, kvercetín, kalfostín, ceramidy, morfín a morfínové analógy. Medzi výhodné podporné prostriedky patrí cyklosporín A, cyklosporín C, cyklosporín D, cyklosporín F, dihydrocyklosporín A, dihydrocyklosporín C a acetylcyklosporin A.

Farmaceutickými kompozíciami obsahujúcimi nové prekurzory ako účinné látky môžu byť farmaceutický prijateľné orálne, injektovateľné alebo IV liekové formy. Každá lieková forma obsahuje účinné množstvo prekurzora (jednej z nových paclitaxel-2-óniových solí) a farmaceutický inertné zložky, napr. konvenčné vehikulá, pomocné látky, plnivá, spojivá, dezintegrátory, rozpúšťadlá, solubilizačné prostriedky, sladidlá, farbivá a akékoľvek iné inaktívne zložky, ktoré sa bežne pridávajú do farmaceutických liekových foriem na orálne podanie. Medzi vhodné orálne liekové formy patria tablety, kapsule, kaplety, gelcaps, pilulky, kvapalné roztoky, suspenzie alebo elixíry, prášky, pastilky, mikronizované častice a osmotické podávacie systémy. Medzi injektovateľné IV liekové formy patria izotonické fyziologické roztoky alebo roztoky obsahujúce vhodné tlmivé roztoky a konzervačné látky. Mnoho takých liekových foriem a pomocných látok a zoznamy neaktívnych zložiek pre ne je známych v danej oblasti techniky a sú uvedené v štandardných monografiách, napríklad Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. vydanie (1985).

Nasledujú niektoré výhody používania jedného z nových prekurzoľov ako' liečiva:

1. Liečivo, ktoré sa má podávať, môže existovať ako vodný farmaceutický roztok uložený v sterilnej ampulke alebo ako balený lyofilizovaný prášok, ktorý možno po zriedení normálnym fyziologickým roztokom alebo 5 % dextrózou vo vode alebo inými fyziologicky kompatibilnými roztokmi podávať intravenóznou infúziou pacientom.

2. Liečivo, ktoré treba podávať, sa môže uchovávať v kvapalnom roztoku, ktorý sa zmrazí a po rozmrazení a ohriatí na teplotu miestnosti v priebehu niekoľkých hodín ho možno priamo podávať pacientovi.

3. Liečivo možno skladovať vo vreckách Duplex™ (McGaw Laboratories), takže po rozlomení uzáveru sa prášok môže zmiešať s rozpúšťadlom, ktorým je obyčajne normálny fyziologický roztok alebo 5 % dextróza vo vode, a priamo podávať pacientovi.

4. Keďže roztok liečiva neobsahuje Cemophor ani akýkoľvek solubilizačný prostriedok iný ako fyziologický alebo dextrózový roztok, bežne nie je potrebná premedikácia protialergickými liekmi (steroidy, antihistamín, H₂ blokátor).

5. Predpokladá sa, že liečivo sa bude podávať IV s infúznym časom asi 1 až asi 120 hodín v dávke asi 100 až asi 300 mg/m² na dávku podávanú približne každé 1 až 3 týždne. Výhodnou dávkou je asi 200 mg/m² v priebehu asi 3 hodín (dávky môže byť samozrejme potrebné individuálne upraviť na základe klinického stavu pacienta).

6. Keďže rozpustnosť soli paditaxel-2*-MPM a ďalších nových solí je oveľa vyššia ako rozpustnosť paclitaxelu, s každou dávkou možno podávať menšie množstvo tekutín ako pri paclitaxeli, čo umožňuje použitie tohto liečiva u pacientov s chorobami súvisiacimi so zväčšovaním objemu, napríklad kongestívne zlyhanie srdca, obličková choroba alebo nadmerné vylučovanie nadobličkových steroidov.

7. Vyššia rozpustnosť vo vode umožní, aby sa liečivo podávalo vo vysokých koncentráciách na miesto ochorenia (napr. intraperitoneálnymi injekciami) alebo priamo na miesto očakávanej angiogenézy (postangioplastické zranenie).

8. Prekurzor 2-MPM je orálne biologicky dostupný a môže sa podávať orálne raz alebo niekoľkokrát denne, v prípade potreby s prostriedkom podporujúcim biologickú dostupnosť alebo bez neho, aby sa dosiahli adekvátne hladiny paclitaxelu (>0,07 μΜ).

9. Prekurzor bude užitočný pri pomocnej liečbe rôznych rakovín (prsníka, mechúra, vaječníkov, pľúc, pažeráka a Kaposiho sarkómu) v nízkych dávkach a pri krátkych infúznych časoch (1 až 3 hodiny), keďže rakovinové bunky budú absorbovať •r paclitaxel rýchlejšie, pretože nie sú chránené Cremophorom, ktorý je potrebný na solubilizáciu prekurzoru.

10. Prekurzor možno stabilizovať implantovateľnými biologicky odbúrateľnými polymérmi a chirurgicky umiestniť na miesto postihnuté rakovinou alebo do jeho blízkosti, kde sa bude prekurzor pomaly uvoľňovať a zabezpečí adekvátne lokálne koncentrácie paclitaxelu.

11. Keďže rýchlosť prísunu paclitaxelu z prekurzora do hepatických mikrozómov sa môže líšiť od paclitaxelu predtým vystaveného účinku Cremophoru, rýchlosť a rozsah produkcie metabolitov (napr. metabolitov paclitaxelu M4 a M5) nemusí byť rovnaká ako pri samotnom paclitaxeli.

12. Vzhľadom na polaritu soli 2-MPM a vytváranie mezylátového komponentu po jeho podaní pacientovi sa vytvoria konjugáty obsahujúce sulfhydryl, ktoré môžu interferovať s P 1290 kD glykoproteínom alebo inými transportérovými molekulami. To povedie k vyšším vnútromolekulovým hladinám protirakovinových liečiv, ktoré podliehajú tejto pumpe. Z tohto dôvodu sa dá očakávať, že protinádorová účinnosť

2-MPM po IV alebo ďrálnom podaní môže byť vyššia ako účinnosť paclitaxelu, najmä pri nádoroch odolných voči viacerým liečivám.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady ilustrujú nové prekurzory vo forme óniových solí podľa vynálezu a spôsoby ich prípravy. Tieto príklady však nemajú akýmkoľvek spôsobom obmedzovať rozsah vynálezu alebo stanovovať špecifické východiskové látky, činidlá, reakčné podmienky, 'postupy čistenia alebo akékoľvek iné podrobnosti, ktoré sa musia výlučne používať, aby sa vynález realizoval.

Príklad 1

Paclitaxel-ž’-metylpyridinium mezylát

V 50 ml banke s okrúhlym dnom sa rozpustilo 360,2 mg (0,422 mmol) paclitaxelu a 155,4 mg (0,5549 mmol, 1,31 ekvivalentu) 2-fluór-1-metylpyridinium tozylátu (FMPTj v 15 ml suchého dichlórmetánu. Reakčná zmes sa miešala pod dusíkovou atmosférou a pridalo sa 150 μΙ (1,076 mmol, 2,55 ekvivalentu) trietylamínu (TEA). Bezfarebný roztok nadobudol svetložltú farbu. Reakčná zmes sa miešala 70 minút pri teplote miestnosti a potom sa odparila dosucha.

Zvyšok (surový paclitaxel-2’-metylpyridínium tozylát) sa rozpustil v 5 ml acetonitrílu a 1,25 ml tohto roztoku sa chromatografovalo (celkovo 4 nástreky) na HPLC systéme Waters 600E pomocou oceľovej kolóny Waters N Bondapak (19 x 300 mm C18, prietok 10 ml/min). Mobilná fáza bola 76 % acetonitrílu a 24 % vody počas prvých 12 minút. Eluovalo sa všetko okrem požadovaného produktu a potom sa eluoval produkt pomocou 76 % acetonitrílu a 24 % 7,5 mmol mezylátu sodného (NaCH₃SO₃).

Všetky frakcie obsahujúce produkt sa skombinovali a lyofilizovali. Zvyšok sa extrahoval 200 ml dichlórmetánu. Rozpúšťadlo sa odparilo na objem 50 ml a pridalo sa približne 50 ml hexánu, aby sa vyzrážal produkt. Všetky rozpúšťadlá sa odparili a zvyšok sa vysušil na výveve v priebehu jednej hodiny, čím sa získal požadovaný produkt, paclitaxel-2'-MPM, vo forme bielej tuhej látky, 402 mg (92%), t. t. s rozkladom pri 119 °C. Čistota produktu podľa HPLC je 98 %.

Príklad 2

Charakteristiky paclitaxelu 2-MPM

Rozpustnosť: Deionizovaná voda (0,5 ml) sa pridala do troch vzoriek 2'-MPM (1,54 mg, 0,97 mg a 0,80 mg) a banka sa vystavila pôsobeniu ultrazvuku na približne jednu (1) minútu. Roztok sa získal u dvoch vzoriek (0,97 a 0,80 mg), zatiaľ čo najväčšia vzorka vyžadovala ďalších 0,1 ml, aby sa získal voľne tečúci roztok. Horná medza tejto rozpustnosti ešte nebola dosiahnutá.

Extrakcia: Tri vzorky (1,2,1,0 a 0,98 mg) sa rozpustili vo vode (1 ml) a intenzívne sa miešali s CH2CI2 (1 ml). Organická fáza sa preniesla do čistej predváženej ampulky a nakoncentrovala sa vo vákuu. Zvyšok sa odvážil a porovnal s teoretickým vstupom, aby sa vyhodnotila účinnosť extrakčného postupu. Priemerný výťažok tejto extrakcie bol približne 44 % teoretickej hodnoty.

Stabilita vo vodnom prostredí: Stabilita prekurzora v H₂O a 0,2 M NaCI sa skúmala pri teplote miestnosti a s chladením. Vzorky v H₂O (0,54 mg v 2 ml) a NaCI

10· * ť % t (0,57 mg v 2 ml) sa skúmali pri teplote miestnosti v dvojminútových intervaloch (0 až 12 minút), 2 hodiny a 24 hodín. Údaje pre H2O pri teplote miestnosti ukázali, že liečivo bolo po 2 hodinách pomerne nezmenené, pričom koncentrácia produktu po 24 hodinách klesla na 56 %. Pri 4 °C sa koncentrácia produktu nezmenila ani po 24 a 48 hodinách, ale po 72 hodinách klesla na 90 %. Fyziologický roztok nevykazuje žiadne zjavné zmeny v priebehu prvých désiatich minút pri teplote miestnosti, po 2 hodinách pokles o 1 až 2 % a po 24 hodinách zníženie na 70 %. Pri 4 °C bola koncentrácia produktu nezmenená po 24 hodinách, po 48 hodinách bola 91 % a po 72 hodinách klesla na 88 %.

Príklad 3

Stabilita paclitaxel 2’-metylpyridínium acetátu

Óniová soľ paclitaxel-2’-MPA bola pripravená metódou podľa Nicolaou a kol., Angew. Chim. Int. Engl., 33:1583-1587 (1944). Roztok 2,40 mg/ml soli paclitaxel-2'MPA sa pripravil rozpustením soli (10,2 mg) v roztoku vody (3,024 ml) a polyetylénglykolu (1,234 ml). Vzorky tohto roztoku sa zmrazili. Zmrazené vzorky sa pomaly ohriali na teplotu miestnosti a homogenizovali sa s CH₃CN (50 μΙ). Alikvotná časť (50μΙ) sa odobrala a zriedila na konečný objem 200 μΙ pomocou deionizovanej H₂O a analyzovala sa pomocou HPLC (20 μΙ vstrek).

Podmienky analýzy boli nasledovné:

Vydak RP C18 (#218TP54) 4,6 mm x 250 mm (5 mikrónov) % MeOH/80 mM NH₄OAc

1,5 ml/min

254 nm f

min

Kolona: Mobilná fáza: Prietok: Vlnová dĺžka I

Trvanie:

Výsledky:

Čerstvo pripravený roztok derivátu 2-MPA (0,53 mg/ml) v CH3CN poskytol signál HPLC s troma veľkými píkmi:

pík 2'-MPA v čase 28-30 minút (75 %) pík paclitaxelu v čase 38-40 minút (15 %) neznámy pík v čase 42 minút (10 %)

Stabilita (teplota miestnosti)

	1 hodina	6 hodín	18 hodín	42 hodín	66 hodín	90 hodín
% 2-MPA	78%	78%	69	73%	79%	73%
% Paclitaxelu	14%	14%	*	17%	13%	15%
% neznámej látky	8%	8%	*	10%	8%	12%

* eluované spolu, dali veľký široký pík.

Stabilita (4 °C)

	1 hodina	6 hodín	18 hodín	42 hodín	66 hodín	2 týždne
% 2-MPA	85%	75%	73%	79%	73%	79%
% Paclitaxelu	15%	11%	10%	9%	11 %	9%
% neznámej látky	*	14%	17%	12%	16%	10%

* neeuloval sa žiadny pík

Ako je uvedené v príklade 2,2-MPM óniová soľ bola výrazne stabilnejšia ako soľ 2-MPA vo vodnom roztoku pri 4°C (s chladením). Zatiaľ čo soľ MPA degradovala po 18 hodinách pri tejto teplote na 73 %, soľ MPM ostala nezmenená pri 4 °C po 24 hodinách a dokonca aj po 72 hodinách degradovala len na 88 až 91 %.

Príklad 4

Paclitaxel-2'-metylpyridínium fosfát

Rovnaký postup ako v príklade 1 sa používa pri soli 2-MPM až po bod vstreknutia surového Z-metylpyridínium tozylátu do HPLC kolóny. 18 mg tozylátu sa vstreklo do kolóny nasledovne:

Podmienky kolóny:

Prísun gradientu rozpúšťadla počnúc 50 % CH₃CN a 50 % 5 mM NaH2PO₄ až po 70 % CH3CN v priebehu 15 minút.

Kolóna: Hotová kolóna Vydac 2,2 x 25 cm (10 mikrónov)

Prietok: 9,0 ml/min

Vlnová dĺžka: 254 nm

Paclitaxel sa eluoval po 2,55 minútach. Óniová soľ paclitaxel-2'metylpyridínium fosfát (X’ = H2PO4· vo vzorci 1) sa eluovala po 14,60 minútach.

Ukázalo sa teda, že sa poskytujú spôsoby, ktoré dosahujú rôzne ciele vynálezu a ktoré sú dobre adaptované na splnenie podmienok praktického použitia.

Keďže v rámci vyššie uvedeného vynálezu možno realizovať rôzne možné uskutočnenia a vo vyššie uvedených uskutočneniach možno urobiť rôzne zmeny, treba chápať, že záležitosti tu opísané sa majú interpretovať ako ilustratívne a nie v obmedzujúcom zmysle.

To, čo sa nárokuje ako nové a čoho patentová ochrana sa požaduje, je definované v nasledujúcich nárokoch.

Claims

1. Paclitaxel-2’-metylpyridínium mezylát.

2. Paclitaxel-2’-metylpyridínium fosfát.

3. Paclitaxel-2‘-metylpyridínium bikarbonát.

4. Spôsob prípravy 2-óniovej soli paclitaxelu vzorca kde X^- je CH3SO3·, H2PO4’ alebo HCO3', vyznačujúci sa tým, že obsahuje nasledujúce kroky:

a) vytvorenie zmesi rozpustením paclitaxelu a 2-halogén-1-óniovej tozylátovej soli v prakticky suchom organickom rozpúšťadle;

b) pridanie činidla tvoriaceho kvartérne zlúčeniny do zmesi;

c) miešanie alebo trepanie zmesi a jej odparenie, aby sa získal suchý odparok;

d) rozpustenie suchého odparku v druhom organickom rozpúšťadle, čím sa získa roztok vhodný na vysokovýkonnú kvapalinovú chromatografiu (HPLC);

e) chromatografovanie roztoku HPLC na reverznej fáze na HPLC kolóne pomocou zmesi uvedeného druhého rozpúšťadla a vody ako prvej mobilnej fázy počas úvodného obdobia, v priebehu ktorého sa z kolóny eluujú všetky frakcie okrem tej, ktorá obsahuje požadovaný konečný produkt óniovej soli; a

f) eluovanie frakcií obsahujúcich požadovaný produkt óniovej soli z kolóny pomocou druhej mobilnej fázy - roztoku NaX v zmesi tohto druhého rozpúšťadla a vody, kde X má vyššie uvedený význam.

5. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedeným 2-halogén-óniovým tozylátom je 2-fluór-1-metylpyridínium tozylát.

6. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že prakticky suchým organickým rozpúšťadlom je dichlórmetán.

7. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedeným činidlom tvoriacim kvartérne zlúčeniny je trietylamín.

8. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že uvedeným druhým organickým rozpúšťadlom je acetonítril.

9. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že X* je CH3SO3'.

10. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že X' je H2PO/.

11. Spôsob podľa nároku 4 vyznačujú» sa tým, že X' je HCO₃.

12. Spôsob podľa nároku 4, vyznačujúci sa tým, že všetky frakcie eluované z HPLC kolóny, ktoré obsahujú požadovaný produkt óniovej soli, sa skombinujú, nakoncentrujú a vysušia, čím sa získa odparok konečného produktu.

13. Spôsob podľa nároku 12, vyznačujúci sa tým, že odparok konečného produktu sa vyčistí extrakciou vhodným polárnym organickým rozpúšťadlom a následným pridaním nepolámeho rozpúšťadla, čím sa vyzráža vyčistený konečný produkt óniovej soli.

14. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že uvedeným polárnym rozpúšťadlom je dichlórmetán a uvedeným nepolárnym rozpúšťadlom je hexán.

15. Spôsob podľa nároku 13, vyznačujúci sa tým, že uvedené polárne a nepoláme rozpúšťadlo sa po vyzrážaní vyčisteného konečného produktu odparí a uvedený vyčistený konečný produkt sa potom vysuší.

16. Spôsob liečby pacienta - cicavca trpiaceho na chorobný stav reagujúci na paclitaxel, vyznačujúci sa tým, že obsahuje podanie na liečbu choroby účinného množstva 2*-óniovej soli paclitaxelu s nasledujúcim vzorcom pacientovi:

kde X'je CH3SO3·, Η₂ΡΟ₄' alebo HCO₃'.

17. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že X* je CH3SO3'.

18. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že X' je H2PO4'.

19. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že X* je HCO3*.

20. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že uvedený chorobný stav je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: rakoviny, nádory, zhubné nádory, nekontrolovaná tkanivová alebo bunková proliferácia po zranení tkaniva, polycystická obličková choroba a malária.

21. Spôsob podľa nároku 20, vyznačujúci sa tým, že uvedenou chorobou je rakovina vybraná zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: hepatocelulárny kardnóm, pečeňové metastázy, rakoviny gastrointestinálneho traktu, pankreasu, prostaty a pľúc, a Kaposiho sarkóm.

22. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že uvedená óniová soľ sa podáva pacientovi súbežne s účinným množstvom orálneho prostriedku zvyšujúceho biologickú dostupnosť vybraného zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: cyklosporíny A až Z, (Me-lle-4)-cyklosporin, dihydrocyklosporín A, dihydrocyklosporín C a acetylcyklosporin A.

23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že uvedený prostriedok zlepšujúci biologickú dostupnosť je vybraný zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: cyklosporín A, cyklosporín C, cyklosporín D, cyklosporín F, dihydrocyklosporín A, dihydrocyklosporín C a acetylcyklosporín A.

24. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že zlepšujúci prostriedok sa podáva buď

a) asi 0,5 až 72 hodín pred,

b) menej ako 0,5 hodiny pred, spolu alebo menej ako 0,5 hodiny po alebo

c) asi 0,5 až 72 hodín pred a súčasne menej ako 0,5 hodiny pred, spolu alebo menej ako 0,5 hodiny po podaní óniovej soli.

25. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že uvedená óniová soľ sa pacientovi podáva orálne.

26. Spôsob podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že uvedená óniová soľ sa pacientovi podáva intravenózne.

27. Lieková forma, vyznačujúca sa tým, že obsahuje 2*-óniovú soľ paclitaxelu vzorca kde X’je CH3SO3·, H₂PO₄' alebo HCO₃‘.

28. Lieková forma podľa nároku 27, vyznačujúca sa tým, že X* je CH3SO3'.

29. Lieková forma podľa nároku 27, vyznačujúca sa tým, že X' je H2PO4'.

30. Lieková forma podľa nároku 27, vyznačujúca sa tým, že Xľ je HCO3'.

31. Lieková forma podľa nároku 27, vyznačujúca sa tým. že je vhodná na orálne podanie a je vybraná zo skupiny pozostávajúcej z nasledujúcich: tablety, kapsule, kaplety, gelcaps, pilulky, kvapalné roztoky, suspenzie alebo elixíry, prášky, pastilky, mikronizované častice a osmotické podávacie systémy.

32. Lieková forma podľa nároku 27, vyznačujúca sa tým, že je vhodná na intravenózne podávanie a obsahuje vodný roztok uvedenej óniovej soli.

33. Lieková forma podľa nároku 32, vyznačujúca sa tým, že uvedeným vodným roztokom je izotonický fyziologický roztok alebo roztok dextrózy.

34. Spôsob liečby pacienta - cicavca trpiaceho chorobným stavom reagujúcim na paclitaxel so zabránením alebo znížením hypersenzitivity a alergických reakcií vyznačujúci sa tým, že obsahuje podanie na liečenie choroby účinného množstva paclitaxel-2'-óniovej soli podľa nároku 4 pacientovi.