CZ465199A3 - Rozpustné prekurzory paclitaxelu a způsoby jejich přípravy - Google Patents

Abstract

Nové 2'-oniové soli paclitaxelu působíjako prekursory u pacientů, kterýmijsou savci, a poskytují tak paclitaxel in vivo. Řešení poskytuje způsoby syntézy těchto oniových solí a také se týká způsobů léčení pacientů trpících nemocí reagující na paclitaxel podávánímúčinného množství oniové soli. Řešení dále poskytuje farmaceutické přípravky obsahující nové soli, kteréjsou vhodné pro podávání pacientům, kteří potřebují léčení paclitaxelem.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká sloučenin, které působí jako předléky (prekurzory) protinádorového činidla paclitaxelu a která jsou v podstatě rozpustná ve vodě, a dále se týká farmaceutických přípravků obsahujících takové prekurzory a léčení pomocí těchto přípravků.

Dosavadní stav techniky

Paclitaxel je přírodní diterpenový produkt izolovaný z pacifického tisu (Taxus brevifolia). Je to člen taxanové rodiny terpenů. Poprvé ho izolovali v roce 1971 Wani a kol.

(J. Amer. Chem. Soc. 93: 2325, 1971), kteří také charakterizovali jeho strukturu pomocí chemických metod a pomocí rentgenové krystalografie.

Paclitaxel byl schválen pro klinické použití v USA k léčení rakoviny vaječníků rezistentní vůči standardní léčbě (Markmann a kol., Yale Journal of Biology and Medicine, 64: 583, 1991, McGuire a kol., Ann. Intern. Med. 111: 273, 1989). Je účinný v chemoterapii některých typů neoplázií včetně neoplázií prsu (Holmes a kol., J. Nat. Cancer Inst. 83: 1797, 1991) a byl také schválen k léčení rakoviny prsu. Je potenciálním kandidátem pro léčení neoplázií kůže (Enzig a kol.,

Proč. Am. Soc. Clin. Oncol. 20: 46), rakoviny plic a karcinomů hlavy a krku (Forastire a kol., Sem. Oncol. 20: 56, 1990) .

Tato sloučenina se také jeví jako potenciální činidlo k léčení • · • · » · · * · • · polycystické nemoci ledvin (Woo a kol., Nátuře 368: 750, 1994) a malárie.

Paclitaxel je slabě rozpustný ve vodě, a to právě představuje značný problém ve vývoji vhodných přípravků pro injekce a infúzní přípravky užitečné v protinádorové terapii. Některé přípravky paclitaxelu pro intravenózní infúze byly formulovány pomocí CREMOPHOR EL™ (polyetoxylovaný ricínový olej) jakožto nosiče vzhledem k nerozpustnosti paclitaxelu ve vodě. Tak např. paclitaxel používaný v klinických testech pod záštitou NCI byl formulován v 50% CREMOPHOR EL™ a 50% dehydratovaném alkoholu. Avšak CREMOPHOR EL™ sám, pokud se podává intravenózně, je toxický a například u psů způsobuje vasodilataci, ztížené dýchání, letargii, hypotenzi a smrt. Má se za to, že je alespoň z části zodpovědný za reakci alergického typu pozorovanou při podávání paclitaxelu.

Ve snaze o zvýšení rozpustnosti paclitaxelu a o vývoj klinicky bezpečnějších přípravků byly prováděny studie s cílem syntetizovat analogy paclitaxelu, kde poloha 2' a/nebo 7 je derivatizovaná skupinami, které zvyšují rozpustnost ve vodě. Tyto snahy vedly k vytvoření sloučenin vhodných jako předléky, které byly rozpustnější než původní „rodičovské” sloučeniny, a které po aktivaci vykazovaly cytotoxické vlastnosti. K jedné důležité skupině takových předléků patří 2'-oniové soli paclitaxelu a docetaxelu, zvláště pak 2'-methylpyridiniumacetátové (2'-MPA) soli (viz Nicolaou a kol., Angew. Chem. Int. Engl.

33: 1583-1587, 1994) .

Původci bylo zjištěno, že je obtížné připravit v podstatě čistou 2'-oniovou sůl paclitaxelu, paclitaxel-2'-MPA, a že výtěžky čisté soli při použití syntetických způsobů dle dosavadního stavu techniky (vědecké a patentové literatury) jsou velmi nízké. To je primárně způsobeno tím, že tyto syntézy poskytují nejvýš 65 až 70 % soli ve směsi s paclitaxelem (a malým množstvím nečistot). Po separaci od paclitaxelu metodou HPLC v rozpouštědlu obsahujícím nadbytek acetátových iontů (např. amoniumacetátu) se sůl rychle rozkládá vlivem koncentrace promývacího činidla v HPLC na paclitaxel a lze izolovat jen velmi malé množství 2'-MPA. Malý výtěžek čisté oniové soli předléku je hlavním nedostatkem při vývoji těchto produktů do komerčně životaschopných farmaceutických přípravků, protože výchozí materiál paclitaxelu je mimořádně drahý a není schůdné užívat značná množství paclitaxelu k výrobě jen malých množství čistého nebo v podstatě čistého předléku jako koncového produktu.

Jsou tudíž potřebné zlepšené předléky paclitaxelu, které jsou jak vysoce rozpustné ve vodě tak i stabilní a lze je připravit relativně snadno s vysokým výtěžkem a čistotou.

Podstata vynálezu

Původcem byly připraveny a testovány na stabilitu a rozpustnost určité předléky paclitaxelu, které jsou 2'-oniové soli podobné 2'-MPA paclitaxelu, ale které mají neočekávané výhodné vlastnosti, které se neprojevují u dosud známých 2'-oniových solí paclitaxelu. Patří k nim 2'-methylpyridiniummesylát(tj. 2'-methylpyridiniummetansulfonat), fosfát a bikarbonát. Je možné připravit injikovatelné nebo perorální farmaceutické přípravky obsahující vodné roztoky nových oniových solí a volitelně další farmaceuticky přijatelné přísady. Tyto přípravky se podávají pacientům např. intravenózní (IV) infúzí, bolusovou injekcí nebo perorálně k léčení rakovin a nádorů responsivních na paclitaxel.

Detailní popis vynálezu

Strukturní vzorec paclitaxelu je uveden na následujícím obrázku.

• · • · · · • · · ·

Paclitaxel

Jak bylo již diskutováno v části Dosavadní stav techniky, byly prováděny pokusy (zejména Nicolaou a kol.) vytvořit rozpustné deriváty paclitaxelu, které jsou in vivo hydrolyzovány na aktivní lék, vytvářením oniových solí v poloze 2' původní sloučeniny. Oniová sůl, která byla, jak nasvědčuje dosavadní stav techniky, nejvýhodnější jak z hlediska farmakologické aktivity tak i vzhledem k relativnímu nedostatku toxicity (za známou toxicitou paclitaxelu) byla 2'methylpyridiniumacetátová (2'-MPA) sůl paclitaxelu.

Způsoby syntézy 2'-MPA soli popsané ve stavu techniky vedou k výtěžku suchého prášku s nejvyšší čistotou 65 až 70 %, přičemž zbytek představuje paclitaxel a další nečistoty. Při pokusech o čištění produktu pomocí HPLC užitím acetátového pufru se 2'-MPA eluovaný z kolony v přítomnosti nadbytku acetátu rychle rozkládá a je možné nakonec získat jen velmi malé množství čistého produktu. Původci byly proto navrženy a syntetizovány nové rozpustné 2'-oniové soli paclitaxelu jakožto rozpustné předléky paclitaxelu, které na rozdíl od 2'-MPA mohou být syntetizovány a purifikovány s vysokým výtěžkem bez velkých problémů. Tyto soli mají následující strukturní vzorec:

• · · ·

Zvláště zajímavá je, a to jak z hlediska fyzikálních tak i farmakologických vlastností, sloučenina podle vzorce I, kde X’ je mesylátová skupina (CH₃SO₃ ^_) , tj . oniová sůl s následující strukturou:

Paclitaxel-2-methylpyridiniummesylát

Soli podle vzorce I se syntetizují z paclitaxelu následujícím obecným postupem:

1. Paclitaxel a 2-fluoro-l-methylpyridiniumtosylát (2-FMPT) se rozpustí v podstatě suchém organickém rozpouštědle, např. methylenchloridu.

2. K předchozí směsi se přidá triethylamin nebo jiné činidlo tvořící kvarterní sloučeninu.

3. Směs se míchá nebo protřepává při teplotě místnosti a odpaří se do sucha, výhodně pod vakuem. Suchý zbytek se rozpustí ve druhém organickém rozpouštědle, čímž vznikne roztok vhodný pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC), např. acetonitrilu, a směs se rozdělí chromatografií s reverzním poměrem fází užitím směsi téhož rozpouštědla a vody jako první pohyblivé fáze pro iniciační období, během kterého se eluují všechny fáze kromě těch, které obsahují požadovaný konečný produkt oniové soli.

4. Frakce obsahující požadované oniové soli jsou pak eluovány pomocí druhé pohyblivé fáze obsahující roztok NaX (kde X je definováno podle vzorce I) ve stejné směsi voda/organické rozpouštědlo jako byla první pohyblivá fáze,

5. Frakce obsahující požadované oniové soli jsou pak sebrány, koncentrovány a usušeny (např. lyofilizací) za vzniku zbytku koncového produktu. Toto reziduum je možné dále purifikovat extrakcí vhodnými polárními organickými rozpouštědly, jako je např. methylenchlorid. Aby produkt precipitoval, přidává se nepolární rozpouštědlo (např. hexan).

6. Rozpouštědla se odpaří a zbytek se vysuší, čímž se získá purifikovaný produkt.

Předkládaný vynález se týká také způsobu léčení pacienta, kterým je savec, majícího nádor, rakovinu nebo jinou nemoc responsivní na paclitaxel, kterýžto způsob spočívá v tom, že se pacientovi podává farmaceutický přípravek obsahující množství předléku oniové soli paclitaxelu podle předkládaného vynálezu účinné k léčení nemoci. K nemocem, které je možné léčit přípravky a způsoby podle vynálezu patří rakoviny, nádory, malignity, nekontrolovaná proliferace tkáně nebo buněk, ke které došlo druhotně po poranění tkáně, polycystická nemoc ledvin a malárie. K rakovinným onemocněním, která lze léčit podle vynálezu, patří hepatocelulární karcinom a jaterní ·· ···· ·· ···· ·* • · φ · · · · · · t · ··· ···» • · · · » ······ ···· · * ·· ·· ·· ··

Ί metastázy, rakoviny gastrointestinálního traktu, pankreatu, prostaty a plic a také Kaposiho sarkom.

Předlék podle předkládaného vynálezu je podáván IV infúzí, neintravenózní injekcí, intraperitoneálně nebo bolusovou injekcí. Předlék se také může pacientovi podávat perorálně ve vhodné lékové formě buďto samostatně nebo společně s činidlem zesilujícím biologickou dostupnost, kteréžto činidlo se podává a) méně než 0,5 hodiny před nebo méně než 0,5 hodiny po a nebo nebo dohromady, b) 0,5 až 72 hodin před podáním cílového činidla, nebo c) jak a) tak b).

Činidlo zesilující biologickou dostupnost je vybráno ze skupiny, která obsahuje cyklosporiny A až Z, (Me-Ile-4)cyklosporin, dihydrocyklosporin A, dihydrocyklosporin C, acetylcyklosporin A, genistein a příbuzné isoflavonoidy, quercetin, calphostin, ceramidy, morfin a anatagonisty morfinu. K výhodným činidlům zesilujícím biologickou dostupnost patří cyklosporin A, cyklosporin C, cyklosporin D, cyklosporin F, dihydrocyklosporin A, dihydrocyklosporin C a acetylcyklosporin A.

Farmaceutický přípravek obsahující jako účinnou látku nový předlék podle předkládaného vynálezu je formulován do jakékoliv lékové formy přijatelné pro perorální, injekční nebo intravenózní podávání. Každá léková forma obsahuje účinné množství předléku (jednu z nových 2'-oniových solí paclitaxelu) a farmaceuticky inertní přísady např. konvenční excipienty, vehikula, plnidla, pojidla, rozvolňovadla, rozpouštědla, solubilizující činidla, sladidla, barviva a další neúčinné přísady, které se obyčejně přidávají do lékových forem pro perorální podávání. Vhodnou lékovou formou pro perorální podávání je např. konvenční forma jako tablety, tobolky, systémy caplets a gelcaps, pilulky, nebo tekuté formy, suspenze a elixíry, prášek, pastilky, mikronizované částice nebo osmotické dávkovači systémy nebo injikovatelné a intravenózní lékové formy včetně isotonických solných roztoků nebo roztoků dextrózy obsahujících vhodné pufry a konzervační přísady. Mnoho takových lékových forem, pomocných látek a inertních přísad je v oboru známo a jejich výčty jsou uvedeny ve standardních příručkách jako je např. „Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. vydání, 1985.

Následně jsou uvedeny některé výhody při použití nového předléku při léčení:

1. Lék, který se má podávat, může existovat ve formě vodného farmaceutického roztoku uchovávaného ve sterilních viálkách, nebo se může uchovávát v lahvičkách jako lyofilizovaný prášek, který po naředění fyziologickým roztokem nebo 5% roztokem dextrózy ve vodě nebo jiným fyziologicky kompatibilním roztokem lze podat pacientovi jako intravenózní infúzi.

2. Lék, který se má podávat, lze uchovávat jako tekutý roztok, který se zmrazí, a po rozmražení a několikahodinovém tání na teplotu místnosti se přímo podává pacientovi.

3. Lék lze uchovávat ve vacích Duplex™ (McGaw Laboratories) tak, že po rozlomení pečeti se prášek smísí s rozpouštědlem, obvykle normálním fyziologickým roztokem nebo 5 % dextrózou ve vodě, a pak se přímo podává pacientovi.

4. Jelikož roztok léku neobsahuje Cremophor ani jiné solubilizační činidlo kromě fyziologického roztoku nebo roztoku dextrózy, není potřeba žádné premedikace pomocí antíalergických léků (steroidy, antihistaminika, H₂ blokátory) .

5. Předpokládá se, že se lék podáví IV s dobou infúze až 120 hodin s dávkováním 100 až 300 mg/m² na dávku podávanou jedenkrát za 1 až 3 týdny. Výhodné dávkování je 200 mg/m² po dobu 3 hodin (je však známo, že dávky je třeba individuálně upravit v závislosti na klinickém stavu pacienta).

6. Jelikož rozpustnost paclitaxel-2'-MPM a dalších nových solí je mnohem vyšší než paclítaxelu, podává se s každou dávkou mnohem menší objem tekutiny, než u paclítaxelu, což dovoluje podávat nový lék i pacientům, kteří trpí nemocí • · · · spojenou se zvětšeným objemem jako je např. městnavé selhání srdce, nemoci ledvin nebo nadměrná sekrece steroidů nadledvinek.

7. Vyšší rozpustnost ve vodě dovoluje, aby byl lék podáván ve vyšší koncentraci do místa nemoci (např. jako intraperitoneální injekce) nebo přímo do místa očekávané angiogeneze (postangioplastické poškození).

8. Předléky 2'-MPM soli jsou biologicky dostupné po perorálním podání a lze je podávat perorálně jednou nebo několikrát za den, a pokud je třeba, tak se zesilovačem biologické dostupnosti nebo i bez něho, aby bylo zajištěno, že je dosaženo odpovídající hladiny paclitaxelu (>0,07 μΜ).

9. Předlék lze užít při pomocné léčbě různých rakovinných onemocnění (rakovina prsu, močového měchýře, vaječníků, plic, jícnu a Kaposiho sarkomu) v nízkých dávkách a při krátkých infúzních časech (1 až 3 hodiny), neboť paclitaxel je buňkami nádoru přijímán rychleji, jelikož není chráněn Cremophorem, který je normálně potřeba k solubilizaci předléku.

10. Předlék může být stabilizován uvnitř implantovatelných biodegradovatelných polymerů a chirurgicky umístěn přímo do místa nádoru nebo do jeho blízkosti, kde se bude předlék pomalu uvolňovat a poskytne tak požadovanou lokální koncentraci paclitaxelu.

11. Jelikož rychlost přenosu paclitaxelu z předléku do jaterních mikrosomů se může lišit od paclitaxelu předtím vystaveného Cremphporu, rychlost a rozsah tvorby metabolitů (např. metabolitů M4 a M5 paclitaxelu) se může lišit od podání samotného paclitaxelu.

12. Díky polaritě 2'-MPM soli a tvorbě mesylátových sloučenin po podání pacientovi, tvoří se konjugáty obsahující sulfhydryl, které inteferují s glykoporteinem P 1290 nebo jinými transportními molekulami. To vede k vyšší intracelulární koncentraci protirakovinného léku, který je přenášen touto pumpou. Z tohoto důvodu lze předpokládat, že protinádorová účinnost 2'-MPM po IV nebo perorálním podání bude vyšší než u paclitaxelu, zvláště u nádorů s multilékovou rezistencí.

Následující příklady ilustrují nové předléky - oniové soli podle vynálezu a způsoby jejich přípravy. Příklady nejsou určeny k tomu, aby vynález jakkoliv omezily nebo výlučně stanovily specificky výchozí materiál, reagencie, reakční podmínky, purifikační postupy nebo jakékoliv další detaily, které je třeba užít při provedení předkládaného vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Paxlitaxel-2'-methylpyridiniummesylát

V 50 ml kádince s kulatým dnem se rozpustilo 360,2 mg paclitaxelu (0,422 mmol) a 155,4 mg (0,5549 mmol, 1,31 ekvivalentu) 2-fluor-l-methylpyridiniumtosylátu (FMPT) v 15 ml suchého methylenchloridu. Reakční směs se míchala v dusíkové atmosféře a k této reakční směsi se přidalo 150 μΐ (1,076 mmol, 2,55 ekvivalentu) triethylaminu (TEA). Bezbarvý roztok tak změnil barvu na slabě žlutou. Reakční směs se míchala 70 minut pří teplotě místnosti a pak se odpařila do sucha.

Zbytek (surový paclitaxel-2'-metypyridiniumtosylát) se rozpustil v 5 ml acetonitrilu a 1,25 ml tohoto roztoku bylo rozděleno chromatografií (celkem 4 injekce) pomocí systému Waters 600E HPLC s ocelovou kolonou Waters μ Bondapak (19x300 mm C18, průtok 10 ml/min). Pohyblivá fáze obsahovala 76 % acetonitrilu a 24 % vody po prvních 12 minut. Vše kromě požadovaného produktu bylo eluováno a pak byl eluován produkt rozokem 76% acetonitrilu a 24% 7,5mmol mesylátu sodného (NaCH.SO,) .

Všechny frakce obsahující produkt byly sebrány a lyofilizovány. Zbytek byl extrahován 200 ml methylenchloridu. Roz• · • · · · • · · · • · • ·

pouštědlo bylo odpařeno na 50 ml a přidalo se 50 ml hexanu, aby se produkt precipitoval. Všechna rozpouštědla se pak odpařila a zbytek byl sušen 1 hodinu pod vakuovou pumpou, aby se získal produkt, paclitaxel-2'-MPM v podobě tuhé bílé hmoty, 402 mg (92 %), m.p. se rozkládá při 119 °C. Čistota produktu podle HPLC byla 98%.

Příklad 2

Charakterizace paclitaxel-2'-MPM

Rozpustnost: Deionizovaná voda (0,5 ml) se přidala ke třem vzorkům 2'-MPM (1,54 mg, 0,97 mg, a 0,80 mg) a nádobky se sonikovaly 1 minutu. Byl tak získán roztok ze dvou vzorků (0,97 mg, a 0,80 mg), zatímco třetí vzorek potřeboval doplnit 0,1 ml vody, aby vznikl volně tekoucí roztok. Horní limit rozpustnosti nebyl dosud dosažen.

Extrakce: Tři vzorky (1,2, 1,0 a 0,98 mg) byly rozpuštěny ve vodě (1 ml) a silně míchány s CH₂C1_ (1 ml). Organická fáze byla přenesena do čisté, vytárované viálky a zakoncentrována in vacuo. Zbytek byl zvážen a porovnán s teoretickým vstupem, aby se otestovala účinnost extrakční procedury. Průměrný výtěžek extrakce byl 44 % teoretického.

Stabilita ve vodě: Stabilta předléku v H₂O a 0,2M NaCl byla zkoušena jak při teplotě místnosti tak v podmínkách lednice. Vzorky ve vodě (0,54 mg ve 2 ml) a v NaCl (0,57 mg ve 2 ml) při teplotě místnosti byly zkoumány ve dvouminutových intervalech ( 0 až 12 minut) a pak za 2 a za 24 hodin. Údaje pro H₂O při teplotě místnosti ukazují, že předlék zůstal po 2 hodiny prakticky nezměněn a koncentrace produktu poklesla na 56 í- za 24 hodin. Ve 4°C byla po 24 a po 48 hodinách koncentrace produktu nezměněna, ale poklesla na 90 % po 72 hodinách. Solný roztok nejevil žádné změny prvních 10 minut při teplotě místnosti, pak 1 až 21 pokles po 2 hodinách a pak snížení na • · « « · · • · · · • · · · · • ♦ · · · ···· ·· · · ··

70 %	po 24	hodinách.	Ve	4 °C byla koncentrace	produktu	ne zrně
něna	po 24	hodin, po	48	hodinách poklesla na	91 % a po	72
hodinách poklesla na	88	o, o ·

Příklad 3

Stabilita paclitaxel-2'-methylpyridiniumacetátu

Oniová sůl paclítaxel-2'-MPA byla připravena postupem, který popsali Nicolaou a kol., Angew. Chim. Int. Engl. 33: 1583-1587, 1994. Roztok paclitaxel-2'-MPA o koncentraci

2,40 mg/ml byl připraven rozpuštěním soli (10,2 mg) v roztoku polyetyenglykolu (1,234 ml) ve vodě (3,024 ml). Vzorky tohoto roztoku byly zamraženy. Zmrzlé vzorky byly pomalu rozmraženy na teplotu místnosti a homogenizovány s CH₃CN (50 μΐ) . Byl odebrán alikvot 50 μΐ a naředěn na výsledný objem 200 μΐ deionizovanou H₂O a analyzován pomocí HPLC (20 μΐ injekce).

Podmínky analýzy byly následující:

Kolona: Vydak RP C18 (218TP54), 4, 6 mm x250 mm (5μιη)

Mobilní fáze: 50% MeOH/80 mM NH4OAc

Rychlost průtoku: 1,5 ml/min

Vlnová délka: 254 nm

Doba běhu: 45 minut

Výsledky

Čerstvě připravený roztok derivátu 2'-MPA (0,53 mg/ml) v CHjCN poskytl záznam z HPLC se třemi hlavními vrcholy:

vrchol 2'-MPA po 28 až 30 minutách (75 %) vrchol paclitaxelu po 38 až 40 minutách (15 %) vrchol neznámého původu ve 42 minutách (10 %)

Stabilita (při teplotě místnosti)

	1 hodina	6 hodin	18 hodin	42 hodin	66 hodin	90 hodin
2'-MPA	78 %	78 %	69 %	73 %	79 %	73 %
paclitaxel	14 %	14 %	*	17 %	13 %	15 %
neznámý	8 %	8 %	*	10 %	8 %	12 %

*eluovány společně, poskytly široký vrchol

Stabilita (4°C)

	1 hodina	6 hodin	18 hodin	42 hodin	66 hodin	200 hodin
2'-MPA	85 %	75 %	73 %	79 %	73 %	79 %
paclitaxel	15 %	11 %	10 %	9 %	11 %	9 %
neznámý	*	14 %	17 %	12 %	16 %	10 %

* neprojevil se žádný vrchol

Jak bylo uvedeno v příkladu 2, 2'-MPM oniová sůl byla významně stabilnější než 2'-MPA sůl ve vodném roztoku ve 4°C (lednice). Zatímco MPA sůl při této teplotě degradovala na 73 I po 18 hodinách, MPM sůl zůstala nezměněna po 24 hodin a dokonce i po 72 hodinách degradovala jen na 88 až 91 i.

Příklad 4

Paclitaxel-2'-methylpiridiniumfosfát

Pokud se týká 2'-MPM soli, byl použit stejný postup jako v příkladu 1, až po injkecí surového 2'-methylpyridiniumtosylátu do kolony HPLC. 18 mg tosylátu bylo injikováno do kolony za následujících podmínek:

Podmínky v koloně: Gradient rozpouštědla od 50% CH_?CN a 50% 5 mM NaH_PO₄ do 70% CH'CN po dobu 15 minut

Kolona: Vydac prep. 2,2 mm x 25 cm (10pm) • 4 4444

• · · · •444 44 44

Mobilní fáze: Rychlost průtoku: Vlnová délka:

50% MeOH/80 mM NH4OAc 9, 0 ml/min 2 54 nm

Paclitaxel byl eluován po 2,55 minutách. Oniová sůl paclitaxel-2'-methylpyridiniumfosfát (X~= H₂PO₄ ve vzorci 1) byla eluována po 14,60 minutách.

Bylo tak ukázáno, že vynález poskytuje způsoby, které vedou k různým předmětům podle předkládaného vynálezu, a které splňují podmínky průmyslové využitelnosti.

Jelikož je možné uskutečnit různá provedení předkládaného vynálezu a výše uvedená provedení vynálezu lze různě modifikovat, je zřejmé, že zde uvedené příklady slouží pouze k ilustraci a vynález v žádném smyslu neomezují.

Předmět vynálezu je vymezen následujícími patentovými nároky.

Claims (28)

1. NÁROKY

   1. Paclitaxel-2'-methylpyridiniummesylát.
2. 2. Paclitaxel-2'-methylpyridiniumfosfát.
3. 3 . Paclitaxel-2 ' -methylpyridiniumbikarbonát.
4. 4. Způsob přípravy 2'-oniové soli paclitaxelu mající vzorec:

   kde X' je CH₃SO₃’, H₂PO₄~ nebo HCO₃', vyznačující se tím, že obsahuje kroky, kdy se:

   a) vytvoří směs rozpuštěním paclitaxelu a 2-halo-loniumtosylátové soli v podstatě suchém organickém rozpouštědle,

   b) přidá ke směsi činidlo vytvářející kvarterní sloučeniny,

   c) směs se míchá nebo protřepává a pak se odpaří, aby zůstal suchý zbytek,

   d) suchý zbytek s rozpustí ve druhém organickém rozpouštědle a vytvoří se tak roztok vhodný pro vysokoúčinnou kapalinovou chromatografii (HPLC), « · • · 99

   e) roztok se dělí na koloně HPLC s reverzním poměrem fází užitím směsi druhého rozpouštědla a vody jako první pohyblivé fáze po iniciační období, během kterého všechny ostatní frakce kromě těch, které obsahují požadovaný konečný produkt oniové soli, se eluují z kolony,

   f) frakce obsahující požadovaný produkt oniové soli se eluují z kolony užitím roztoku NaX ve směsi druhého rozpouštědla a vody jakožto druhé pohyblivé fáze, kde X je definováno výše.
5. 5. Způsob podle nároku 4vyzn,a čující se tím, že 2-halo-oniumtosylát je 2-fluoro-l-methylpyridiniumtosylát.
6. 6. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že v podstatě suché organické rozpouštědlo je methylenchlorid.
7. 7. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že činidlo tvořící kvarterní sloučeniny je triethylamin.
8. 8. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, druhé organické rozpouštědlo je acetonitril.
9. 9. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že X' je CHjSCg-.
10. 10. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že X' je H₂PO₄.
11. 11. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že X' je HCO₃.
12. 12. Způsob podle nároku 4vyznačující se tím, že všechny frakce, které se eluují z kolony HPLC a které obsahují požadovaný produkt oniové soli se sbírají, koncentrují a suší, čímž vznikne zbytek konečného produktu.
13. 13. Způsob podle nároku 12 vyznačuj ící se tím, že zbytek konečného produktu se dále purifikuje extrakcí vhodným polárním organickým rozpouštědlem a následným přidáním nepolárního rozpouštědla, čímž se vysráží purifikovaný koncový produkt oniové soli.
14. 14. Způsob podle nároku 13 vyznačuj ící se tím, že polární rozpouštědlo je methylenchlorid a nepolární rozpouštědlo je hexan.
15. 15. Způsob podle nároku 13 vyznačuj ící se tím, že polární a nepolární rozpouštědla se odpaří po vysrážení purifikovaného konečného produktu a konečný produkt se pak usuší.
16. 16. Způsob léčení pacienta, kterým je savec, trpícího nemocí reagující na paclitaxel vyznačující se tím, že obsahuje podání pacientovi pro léčbu účinné množství 2'-oniové soli paclitaxelu následujícího vzorce:

    kde X' je CH,SO₃’, H₃PO₄ nebo HCO₃'.

    17 . tím, že Způsob podle X' je CH3SO3. nároku 16 v y znač u j i c i s e 18 . tím, že Způsob podle X' je H₂PO₄. nároku 16 v y znač U j í c í s e 19. tím, že Způsob podle X je HCOů. nároku 16 v y znač U j i c i s e 20 . Způsob podle nároku 16 v y znač U j i c i s e tím, že nemoc je vybrána ze skupiny obsahuj ící rakoviny, nádory, malignity, nekontrolovanou proliferaci buněk : v důsled-

    ku poškození tkáně, polycystickou nemoc ledvin a malárii.
17. 21. Způsopb podle nároku 20 vyznačuj ící se tím, že nemoc je rakovina vybraná ze skupiny obsahující hepatocelulární karcinom, jaterní metastázy, rakoviny gastrointestinálního traktu, pankreatu, prostaty a plic a Kaposiho sarkom.
18. 22. Způsob podle nároku 16 vyznačuj ící se tím, že oniová sůl se pacientovi podává současně s účinným množstvím činidla zesilujícího perorální biologickou dostupnost, které je vybráno ze skupiny obsahující cyklosporiny A až Z, (Me-Ile-4)-cyklosporin, dihydrocyklosporin A, dihydrocyklosporin C a acetycyklosporin A.
19. 23. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že činidlo zesilující perorální biologickou dostupnost je vybráno ze skupiny obsahující cyklosporin A, cyklosporin C, cyklosporin D, cyklosporin F, dihydrocyklosporin A, dihydrocyklosporin C a acetycyklosporin A.

    • *· ·

    9 4 9·
20. 24. Způsob podle nároku 22 vyznačující se tím, že zesilující činidlo je podáno buďto

    a) 0,5 až 72 hodin před,

    b) méně než 0,5 hodiny před, současně nebo méně než 0,5 hodiny po, nebo

    c) jak 0,5 až 72 hodin před a opět méně než 0,5 hodiny před, současně nebo méně než 0,5 hodiny po podání oniové soli.
21. 25. Způsob podle nároku 16 vyznačuj ící se tím, že oniová sůl se pacientovi podává perorálně.
22. 26. Způsob podle nároku 16 vyznačuj ící se tím, že oniová sůl se pacientovi podává intravenózně.
23. 27. Léková forma vyznačující se tím, že obsahuje 2'-oniovou sůl paclitaxelu mající vzorec:

    o

    ACH₃ o >T

    kde X- je CH3SO3 ', H2PO4' nebo HCO₃. 28 . Léková forma podle nároku 27 v y znač u j i c i s e tím, že X je CH3SO3'. 29. Léková forma podle nároku 27 v y znač u j i c i s e tím, že X' je H2PO4.

    ·* ···· • · » ·
24. 30. Léková forma podle nároku 27 vyznačující s e tím, že X je HCO₃~.
25. 31. Léková forma podle nároku 27 vhodná pro perorální podávání vyznačující se tím, že je vybrána ze skupiny obsahující tablety, tobolky, systémy caplets” a gelcaps, pilulky, nebo tekuté formy, suspenze nebo elixíry, prášek, pastilky, mikronizované částice nebo osmotické dávkovači systémy.
26. 32. Léková forma podle nároku 27 vhodná pro intravenózní podávání vyznačující se tím, že obsahuje vodný roztok oniové soli.
27. 33. Léková forma podle nároku 32 vyznačuj ící s e tím, že vodný roztok isotonický roztok soli nebo roztok dextrózy.
28. 34. Způsob léčení pacienta, kterým je savec, trpícího nemocí reagující na paclitaxel, při současném zabránění nebo redukci alergické nebo hypersenzitivní reakce vyznačující se tím, že obsahuje podání pacientovi pro léčbu účinné množství 2'-oniové soli paclitaxelu podle nároku 4.