SK142997A3

SK142997A3 - A combination of a 5-ht uptake inhibitor with a selective 5-ht1a antagonist

Info

Publication number: SK142997A3
Application number: SK1429-97A
Authority: SK
Inventors: John Evenden; Seth O Thorberg
Original assignee: Astra Ab
Priority date: 1995-04-27
Filing date: 1996-04-23
Publication date: 1998-12-02
Also published as: US6172105B1; KR100419810B1; NO317057B1; ES2175089T3; IL117988A0; NO974921D0; HK1002853A1; US6184218B1; EE03553B1; IS1821B; AU5520296A; RU2183955C2; CN1102386C; SE9501567D0; DE69620878D1; TW458777B; BR9608252A; AR002990A1; JPH11504037A; ZA962982B

Description

Predložený vynález sa týka kombinácií hibítora spätnej absorpcie 5-HT a selektívnej protilátky 5-HT_1Ä, presnejšie (R)-5-karbamoyl-8-f luoro-3-N,N-disubstituovaných-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránov vo forme volnej zásady alebo ich farmaceutický prijatelných solí, spôsobu prípravy kombinácií, farmaceutickej formulácie obsahujúcej uvedené kombinácie, použitia týchto kombinácií, bud pri spoločnej aplikácii alebo oddelene, na zlepšenie liečenia emočných porúch, ako sú depresie, pocity úzkosti a utkvelé nutkavé poruchy (obsessive compulsive disorder, OCD), atď.

Doterajší stav techniky

V súčasnom období sa všeobecne predpokladá, že antidepresíva, vrátane selektívnych inhibítorov spätnej absorpcie 5-HT (Selective 5-HT Reuptake Inhibitors, SSRI), vyžadujú 2 až 4 týždne na dosiahnutie úplného klinického vplyvu. Naproti tomu sa vedlajšie účinky objavujú ihneď, a dokonca sa počas tohto obdobia znižujú. Teda pomalý začiatok pôsobenia antidepresív vedie k obdobiu zranitelnosti u pacientov, ktorí pociťujú vedlajšie účinky, nie však terapeutické pôsobenie drog. Presvedčiť pacienta, aby v liečení počas tohto obdobia pokračoval je často pre ošetrujúceho lekára ťažkou úlohou. A ďalej, pretože začiatok účinnosti ·je pozvoľný, môže u pacientov so samovražednými sklonmi prevládnuť iniciatíva bez prežitia plných opačných symptómov, čo vedie k potenciálu pre samovraždu a častým požiadavkám na hospitalizáciu. Antidepresívum s rýchlym pôsobením by teda bolo nielen užitočné vzhladom k rýchlejšej redukcii symptómov, ale taktiež by bolo prijatelnejšie pre pacientov i lekára a znížilo by potrebu a trvanie hospitalizácie. Bolo dokázané rovnako dlhé obdobie na dosiahnutie plného klinického vplyvu pri liečení iných emočných porúch, ako sú pocity úzkosti a OCD.

V časopise Árch. Gen. Psychiatry, 51, marec 1994, sa uvádza, že beta-blokátor, ako je pindolol, ktorý má taktiež vysokú afinitu k receptorom 5-HT a pôsobí proti odozvám sprostredkovaným 5-HT_1A, vyvoláva rýchle zlepšenie u pacientov s depresiou, ktorí sú liečení inhibítorom spätnej absorpcie serotonínu.

Podstata vynálezu

Antagonizmom akútneho inhibítora absorpcie 5-HT vyvolané zníženie výmeny 5-HT selektívnou protilátkou 5-HT_1Ä

Selektívne inhibítory spätnej absorpcie 5-HT (SSRI) znižujú šírenie impulzov v neurónoch 5-HT prostredníctvom negatívnej spätnej väzby sprostredkovanej kolaterálnymi axónmi 5-HT uvoľňujúcimi 5-HT v raphé nuclei. Selektívne protilátky pôsobia proti zníženiu výmeny 5-HT spôsobenému inhibítormi spätnej absorpcie 5-HT prostredníctvom inhibície somatodentritických autoreceptorov 5-HT. To naznačuje, že blokáda somatodendritických autoreceptorov, t.j

5-HT, môže mať klinický potenciál na zlepšenie účinnosti inhibítora spätnej absorpcie 5-HT) (SSRI) a ponúka nový podklad pre rýchly nástup emočných činností, napríklad antidepresívnych.

selektívna protilátok

Kombinácia

Kombináciou prvej zložky (a), ktorou absorpcie 5-HT s druhou zložkou (b), protilátka 5-HT_1Ä všeobecného vzorca I je inhibítor spätnej ktorou je selektívna

C) v ktorom

R¹ predstavuje n-propyl alebo cyklobutyl,

R² znamená izopropyl, terciárny butyl, cyklobutyl, cyklopentyl alebo cyklohexyl,

R³ predstavuje vodík,

R⁴ znamená vodíka alebo metyl, uvedená protilátka 5-HT_1Ä je vo forme svojho (R)-enantioméru a uvedené zložky (a) a (b) sú vo forme voľnej zásady alebo ich farmaceutický prijateľných solí, nastáva rýchlejší rozbeh akcie a v dôsledku toho účinnejšie liečenie pacientov.

Ako zložka (b) v kombinácii podľa vynálezu môžu byť obsiahnuté nasledujúce protilátky:

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,44

-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Tu uvedené (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrány sú opísané vo WO 95/11891 (PCT/SE94/01010).

(R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3, 4-dihydro-2H-l-benzopyrány sú vo forme voľnej zásady alebo jej farmaceutický prijateľnej soli. Na tvorbu netoxických farmaceutický prijateľných kyslých adičných solí pre zlúčeniny podlá tohto vynálezu sa môžu použit ako organické tak anorganické kyseliny. Ilustračnými kyselinami sú kyselina sírová, dusičná, fosforečná, štavelová, chlorovodíková, mravčia, bromovodíková, citrónová, octová, mliečna, vínna, dibenzylvínna, biacetylvínna, pamoová, etándisulfónová, sulfámová, jantárová, propiónová, glykolová, jablčná, glukónová, pyrohroznová, fenoxyoctová, 4-aminobenzoová, antranilová, salicylová, 4-aminosalicylová, 4-hydroxybenzoová, 3,4-dihydroxybenzoová, 3,5-dihydroxybenzoová, 3-hydroxy-2-naftalénová, nikotínová, metánsulfónová, etánsulfónová, benzénsulfónová, p-toluénsulfónová, sulfanilová, naftalénsulfónová, askorbová, cyklohexylsulfámová, fumarová, maleínová a benzoová. Tieto soli sa môžu lahko pripraviť metódami známymi v odbore.

Tieto (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrány majú vysokú afinitu ku špecifickej podskupine receptora 5-HT_1Ä v CNS a pôsobia ako protilátky na tomto receptore 5-HT^ ^a taktiež vykazujú dostatočnú biologickú dostupnosť pri orálnom podávaní.

Vhodnými inhibítormi spätnej absorpcie 5-HT (SSRI), ktoré sa majú použit, sú norzimeldin, fluoxetin, paroxetin, citalopram, clomipramin, sertralin, fluvoxamin, alaproklat, avšak zložky (a) v kombinácii podľa predloženého vynálezu nie sú obmedzené iba na tieto SSRI.

Kombinácia podľa predloženého vynálezu sa môže vyrobiť v jednej farmaceutickej formulácii, ktorá bude obsahovať ako aktívnu prvú zložku (a), tak aktívnu druhú zložku (b) alebo v dvoch rôznych farmaceutických formuláciách, jednom pre aktívnu prvú zložku (a) a druhom pre aktívnu druhú zložku (b). Farmaceutická formulácia môže byt vo forme tabliet, kapsúl, práškov, zmesi, roztokov alebo v. iných vhodných formách farmaceutických formulácií.

Kombinácia podlá predloženého vynálezu sa môže pripraviť tak, že inhibítor spätnej absorpcie 5-HT je obsiahnutý v rovnakom prípravku ako selektívna protilátka 5-HT_1Ä, ako je opísané vyššie, napríklad miešaním bežným spôsobom.

Predložený vynález taktiež zahrňuje spôsob zlepšenia nábehu terapeutickej akcie spoločným podaním prvej zložky (a), ktorou je inhibítor spätnej absorpcie 5-HT a druhej zložky (b), ktorou je selektívna protilátka 5-HT_1A, ako je opísané v tomto dokumente.

Ďalším uskutočnením predloženého vynálezu je kit obsahujúci prvú zložku (a), ktorou je inhibítor spätnej absorpcie 5-HT a druhej zložky (b), ktorou je selektívna protilátka 5-HT_1Ä, prípadne s návodom na použitie.

Podrobný opis vynálezu

Spôsob prípravy (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituovaných-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránov

() (III)

Príprava (R)-3-amino-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (zlúčenina II) je opísaná vo W093/07135. Obsah tohto dokumentu je týmto ako celok zahrnutý z referenčných dôvodov. Výhodná metóda na zavedenie fluóru je selektívna bromácia aromatického kruhu v ôsmej pozícii. Bromácia sa môže uskutočniť použitím brómu s katalyzátorom alebo bez neho. Môžu sa použiť iné bromačné činidlá, napríklad HOBr a N-brómamidy (predovšetkým N-brómsukcínimid). Vhodnými rozpúšťadlami na bromáciu sú kyselina octová, dioxán a chlórované rozpúšťadlá, napríklad metylénchlorid.

Pred fluoráciou sa musí primárny amín úplne alkylovat skupinami R¹ a R², ako je uvedené vyššie, alebo chrániť vhodnou skupinou, ktorá sa môže odstrániť neskôr, napríklad dibenzylovou skupinou. Zavedenie alkylových skupín na dusík sa môže uskutočniť redukčnou amináciou z vhodného aldehydu alebo ketónu použitím vhodného redukčného činidla, napríklad NaCNBH^, alebo katalytický pomocou H₂ a vhodného katalyzátora obsahujúceho paládium, platinu alebo nikel vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad tetrahydrofuráne (THF), dioxáne, metanole alebo etanole. Zavedenie alkylových skupín sa môže uskutočniť tiež alkyláciou vhodným alkylhalogenidom, napríklad Cl, Br alebo J, alebo aktivovaným alkoholom, napríklad alkylmetánsulfátom alkyltozylátom, vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad dimetylformamide (DMF), acetóne alebo acetonitrile, s vhodnou zásadou, napríklad K₂co₃.

Fluorácia môže potom nastať litiáciou brómu alkyllítnym činidlom, napríklad n-butyllítiom, a nasleduje reakcia s vhodným fluoračným činidlom, výhodne N-fluoro-N-alkyl/arylsulfónamidom, napríklad N-fluorobenzénsulfónimidom. Rozpúšťadlom pri tejto reakcii môžu byť bezvodé alkylétery, napríklad tetrahydrofurán (THF) alebo dietyléter alebo aprotické rozpúšťadlá, napríklad hexán alebo benzén. Teplotný rozsah môže byť od -100 ’C po laboratórnu teplotu, predovšetkým výhodne od -78 do -20 C.

Zlúčeniny sa môžu pripraviť z (R)-3-amino-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (ako je opísané vyššie), potom nasledujú známe metódy, ako redukčná aminácia, N-alkylácia, dimetylácia a konverzia k odstupujúcej skupine Y za získania zlúčeniny IV.

Zlúčeniny ďalej uvedených všeobecného vzorca spôsobov:

I sa môžu pripraviť podlá

i) priamou

konverziou zlúčenín všeobecného vzorca IV

(IV) pričom Y je odstupujúca skupina, ako trifluórmetansulfonát (OSO₂CF₃), halogenid, napríklad Cl, Br alebo J, pomocou katalytického cyklu s použitím bezvalenčného prechodového kovu (M), ako je Pd alebo Ni, ktoré sa môžu generovať in situ a podrobujú sa oxidačnej adícii k arylovej väzbe Y. Spracovaním pomocou oxidu uhoľnatého a amináciou vhodným amínom (čpavkom alebo metylamínom) vzniká zlúčenina všeobecného vzorca I, ktorá sa v prípade potreby prevedie na soľ.

ii) Alternatívne sa môžu zlúčeniny všeobecného vzorca IV previesť na zlúčeniny všeobecného vzorca V

v ktorom Z znamená Cl, Br, OH alebo ORP, kde rP je alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, pomocou katalytického cyklu s použitím bezvalenčného prechodového kovu, so schopnosťou podrobiť sa oxidačnej adícii k arylovej väzbe Y, napríklad väzbe aryl-OSO₂CF₃. Komplex aryl-CO-kov-Y vzniká spracovaním pomocou oxidu uhoľnatého.

Ďalšími činidlami sú alkoholy, ako metanol, etanol, terciárne amíny, ako trialkylamín, napríklad trietylamín, v inertnom organickom rozpúšťadle, výhodne v polárnom aprotickom rozpúšťadle, ako je dimetylformamid (DMF), dimetylsulfoxid (DMSO), dioxán, tetrahydrofurán (THF), acetón, acetonitril atď. Reakcia sa bežne uskutočňuje pri teplotách medzi +40 a +120 °C a pri tlaku medzi 100 a 500 kPa (ii). Prípadne nasleduje hydrolýza a spracovanie pomocou tionylhalogenidu, napríklad tionylchloridu, za získania zopdovedajúceho derivátu kyseliny halogenovodíkovej.

Zlúčeniny všeobecného vzorca V sa aminujú (ii^) vhodným amínom (čpavkom alebo metylamínom) v rozpúšťadle,' napríklad toluéne, metylénchloride, benzéne, vode, pri refluxnej teplote medzi 0 a 100 °C za získania zlúčeniny všeobecného vzorca I.

Farmaceutické formulácie

Podľa predloženého vynálezu sa zlúčeniny v tejto kombinácii môžu podávať orálne, rektálne alebo injekčné, vo forme farmaceutických formulácií obsahujúcich aktívnu zložku buď ako voľnú zásadu alebo jej farmaceutický prijateľnú netoxickú adičnú soľ, napríklad hydrochlorid, hydrobromid, laktát, octan, fosfát, síran, sulfamát, citrát, vínan, šťavelan a podobne, vo farmaceutický prijateľnom dávkovaní. Dávkovanie môže byt vo forme pevnej, polotekutej alebo tekutej. Účinná látka tvorí zvyčajne 0,1 až 99 % hmotnostných formulácie, špecifickejšie 0,5 až 20 % hmotnostných formulácie určenej na injekcie a medzi 0,2 a 50 % hmotnostných formulácie vhodnej na orálne podávanie.

Na výrobu farmaceutických formulácií v kombinácii podľa predloženého vynálezu vo forme dávkových jednotiek na orálnu aplikáciu sa môžu vybrané zlúčeniny zmiešať s pevným excipientom, napríklad laktózou, sacharózou, manitolom, škrobmi, napríklad zemiakovým škrobom, kukuričným škrobom alebo amylopektínom, derivátmi celulózy, spojivom, ako je želatína alebo polyvinylpyrolidón, dezintegrátormi napríklad sodný glykolát škrobu, zosietovaným PVP, cross-karamelózou sodíka, a lubrikantmi, napríklad stearátom horečnatým, stearátom vápenatým, polyetylénglykolom, voskami, parafínom a podobne, a potom lisovať do tabliet. Ak sa požadujú tablety vo forme dražé, potom sa jadro pripravené podľa vyššie opísaného postupu môže bučí potiahnuť koncentrovaným roztokom cukru, ktorý môže obsahovať napríklad arabskú gumu, želatínu, mastenec, oxid titaničitý a podobne. Alternatívne sa môžu tablety potiahnuť pre odborníkov v odbore známymi polymérmi, rozpustenými v ľahko prchavých organických rozpúšťadlách alebo v zmesi rozpúšťadiel. Do týchto poťahov sa môžu pridávať farbivá, aby sa dali ľahko rozoznať tablety obsahujúce rôzne účinné látky alebo množstvá aktívnych zlúčenín.

Pre formulácie vo forme mäkkých želatínových kapsúl sa môžu účinné látky zmiešať·napríklad s rastlinným olejom alebo polyetylénglykolom. Tvrdé želatínové kapsule môžu obsahovať granuly účinnej látky s použitím ktoréhokoľvek z uvedených excipientov pre sacharózy, sorbitu, manitolu, škrobu, kukuričného škrobu vyššie tablety, napríklad laktózy, škrobov (napríklad zemiakového alebo amylopektínu), derivátov celulózy alebo želatíny. Tvrdé želatínové kapsule sa môžu taktiež plniť liečivom v tekutej alebo polotekutej forme.

Dávkovými jednotkami na rektálnu aplikáciu môžu byt roztoky alebo suspenzie alebo sa môžu pripraviť vo forme čípkov obsahujúcich účinné zložky v zmesi s neutrálnou tukovou bázou, alebo želatínových rektálnych kapsúl v zmesi s rastlinným olejom alebo parafínovým olejom. Tekuté formulácie na orálnu aplikáciu môžu byt vo forme sirupov alebo suspenzií, napríklad roztokov obsahujúcich od približne 0,2 % do približne 20 % hmotnostných účinnej látky, ktorá je tu opísaná, zvyšok je cukor a zmes etanolu, vody, glycerolu a propylénglykolu. Prípadne môžu takéto tekuté formulácie obsahovať farbiace činidlá, ochutovadlá, sacharín a karboxymetylcelulózu, ako zahusťovadlo alebo iné excipienty známe v odbore.

Roztoky na parenterálnu injekčnú aplikáciu sa môžu pripraviť vo vodnom roztoku vo vode rozpustnej farmaceutický prijatelnej soli, výhodne v koncentrácii od približne 0,5 % do 10 % hmotnostných. Tieto roztoky môžu tiež obsahovať stabilizujúce činidlá alebo pufrovacie činidlá a môžu sa bežne dodávať v ampuliach s rôznymi dávkovými jednotkami.

Vhodnými dennými dávkami účinných látok v kombinácii podlá tohto vynálezu pri liečení ludí sú dávky približne 0,01 až 100 mg/kg hmotnosti pri parenterálnom podaní. Denné dávky účinnej protilátky 5-HT_1A sa môžu velmi odlišovať od dávok inhibítora absorpcie 5-HT, ale môžu byt tiež totožné pre obidve zlúčeniny.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príprava východiskových materiálov pre protilátky 5-HT_1A

Príprava 1 (R)-3-amino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-3-amino-8-bromo-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-amino-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (25 g, 0,14 mol), pripravený ako je opísané vo W093/07135) a bezvodý octan sodný (34 g, 0,42 mol) sa rozpustili v kyseline octovej (500 ml) Bróm (23,4 g, 0,15 mol) rozpustený v kyseline octovej (500 ml) sa pridával po kvapkách pri laboratórnej teplote. Pridávanie brómu trvalo približne 7 dní. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v hydroxide sodnom (25 %)/dietylétere (exotermická reakcia, zmes sa chladila v ľadovom kúpeli). Vrstvy sa oddelili a alkalická vodná fáza sa trikrát extrahovala dietyléterom. Spojené éterové vrstvy sa vysušili (Na₂SO₄) a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím vzniklo 35,5 g olejovitého zvyšku. Olej sa rozpustil v dietylétere a roztok sa chladil na ladovom kúpeli (teplota 0 ’C). Kyselina chlorovodíková rozpustená v dietylétere sa pridávala po kvapkách až do kyslej reakcie suspenzie (kontrolované pomocou pH papierika). Kryštály sa potom odfiltrovali s rekryštalizovali z metanolu, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve vo výťažku 70 % (28,5 g). Teplota topenia: 281 až 282 ‘C. Hydrochloridová sol sa rozdelila medzi dietyléter a 2 M NH₃(aq) a volná zásada sa získala extrakciou alkalickej vodnej fázy pomocou dietyléteru. = +40 ’ (C = 0,1, hydrochloridová sol v MeOH). GC-MS (70eV) M + 1 = 259 (53 %).

b) (R) -8-bromo-3- (N,N-dibenzylamino) -5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (R)-3-amino-8-bromo-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (11,5 g, 44 mmol), sa rozpustil v 400 ml bezvodého acetonitrilu a k reakcii sa pridal benzylbromid (13 ml, 110 mmol), bezvodý uhličitan draselný (mletý) (16 g, 116 mmol) a katalytické množstvo KJ, zmes sa potom zahrievala pri teplote 85 ’C počas 48 hodín.

Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, podiely sa zachytili v roztoku 2 M NH₃ a potom dvakrát extrahovali éterom. Spojené podiely éteru sa spracovali solankou, vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent:

CH₂C1₂) poskytla 15 g (výťažok 78 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme číreho oleja. [a]²¹D = +15,5 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 437 (15 %) .

c) (R) -3 - (N,N-dibenzylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-d ihydro-2H-1-benzopyrán uvedenej v názve, (R)-8-bromo-3-(N,N-dibenzylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (4,35 g, 9,9 mmol), sa rozpustil v 45 ml bezvodého THF a ochladil na teplotu -78 °C. K tejto zmesi sa po kvapkách pridalo 1,6 M roztoku n-BuLi (6,8 ml, 10,9 mmol) a zmes sa miešala pri teplote -78 °C počas jednej hodiny. Po kvapkách sa v priebehu 45 minút pridával N-fluorobenzénsulfonimid (3,8 g, 11,9 mmol) rozpustený v 30 ml bezvodého THF a zmes sa miešala pri teplote -78 C počas jednej hodiny. Reakcia sa zastavila pridaním 3 ml nasýteného NH₄C1 a následne pridaním 9 ml roztoku zloženého z 2 g NH₂OH x HC1 a 8 g Na₂CO₃ v 100 ml H₂O, reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Pridal sa 2 M roztok NH₃ a produkt sa dvakrát extrahoval éterom, spracoval so solankou, vysušil (Na₂SO₄), prefiltroval a odparil vo vákuu, čím sa získal surový produkt, čistenie zlúčeniny 8-fluoro (požadovanej) od 8-hydrogen (15 %) sa uskutočnilo chromatografiou surového produktu (eluent: 25 %

CH₂Cl₂/hexán), ktorá poskytla 1,78 g. Surový produkt sa znova chromatografoval na oxide kremičitom (eluent: 3 % acetón/hexán), za získania 1,50 g (výťažok 40 %) zlúčeniny _D = -112,1 ' vo forme číreho oleja. [a]²¹ « (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 377 (37 %).

d) (R)-3-amino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N,N-dibenzylamino) -8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (13,0 g, 34,4 mmol) sa rozpustil v 265 ml metanolu a 115 ml THF. K tejto zmesi sa pridalo 10 % Pd/C (4 g) a mravčan amónny (51,5 g, 0,817 mmol). Reakčná zmes sa zahrievala pri teplote 50 °C počas 25, hodín. Produkt sa odfiltroval a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky sa zachytili v 2 M roztoku NaOH a potom sa dvakrát extrahovali éterom.

Spojené podiely éteru sa spracovali solankou, vysušili (Na₂SO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získalo 6,2 g (výťažok 91 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja. [a]²¹D = -15,3 · (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 197 (51 %).

Príprava 2 (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-propylamino)-5-trif luórmetylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-8-bromo-3-(N-i zopropylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (R)-3-(N-izopropylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (4,02 g 18,2 mmol, príprava opísaná vo W093/07135) a bezvodý octan sodný sa rozpustili v kyseline octovej (80 ml). K roztoku sa za miešania počas 1,5 hodín prikvapkával bróm (0,93 ml, 18,2 mmol) rozpustený v kyseline octovej (40 ml).

Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky sa zachytili v 2 M roztoku NaOH a potom sa dvakrát extrahovali dietyléterom. Spojené podiely éteru sa spracovali solankou, vysušili (Na₂SO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový produkt. Hydrochloridová sol sa pripravila rozpustením čistej zásady v dietylétere a pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HCI, čím sa získala biela pevná látka. Sol sa dvakrát rekryštalizovala z etanolu/dietyléteru, čím sa získalo 3,8 g produktu (výťažok 62 %). Teplota topenia: 257 až 258 ’C. [a]²¹D = -97,7 ’ (C = 0,1, CHCl₃).

Volná zásada sa pripravila z hydrochloridovej soli vo forme oleja. GC-MS (70eV) M = 301 (100 %).

b) (R)-8-bromo-3-(N-izopropyl-N-propylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-bromo-3-(N-izopropylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l

-benzopyrán (3,8 g, 11,3 mmol) sa rozpustil v bezvodom metanole (80 ml) a do roztoku sa pridal propanal (8,1 ml, 0,113 mol). Reakčná zmes sa ochladila (ľadový kúpeľ), potom sa pridal kyanborohydrid sodný (1,3 g, 20,3 mmol), hodnota pH sa upravila na 5 a roztok sa cez noc miešal pri laboratórnej teplote.

Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky sa zachytili v 1 M roztoku Na₂CO₃ a potom sa dvakrát extrahovali dietyléterom. Spojené podiely éteru sa spracovali soľankou, vysušili (Na₂SO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 7 % octan etylový/hexán) poskytla 3,75 g (výtažok 97 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme číreho oleja. [σ]²·^ = -82,5 ° (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 343 (29 %).

Hydrochloridová soľ sa pripravila rozpustením čistej zásady v dietylétere a pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HC1, čím sa získala biela pevná látka. Soľ sa rekryštalizovala z etanolu/dietyléteru, čím sa získala biela pevná látka. Teplota topenia: 177 až 179 ’C.

c) (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-propylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-bromo-3-(N-izopropyl-N-propylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (3,2 g, 6,72 mmol) sa rozpustil v bezvodom THF (25 ml) a ochladil na teplotu -78 ’C. Do roztoku sa po kvapkách pridalo 1,6 M roztoku n-BuLi (4,83 ml, 7,73 mmol) a zmes sa miešala pri teplote -78 ’C počas jednej hodiny. Po kvapkách sa v priebehu 20 až 30 minút pridával N-fluorobenzénsulfonimid (2,55 g, 8,06 mmol), rozpustený v bezvodom THF (15 ml) a zmes sa miešala pri teplote -78 ’C počas 4 hodín. Reakcia sa zastavila pridaním 1 ml nasýteného NH₄C1, a následne pridaním 3 ml roztoku zloženého z 2 g NH₂OH x HCl a 8 g Na₂CO₃v 100 ml H₂O, reakčná zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu. Pridal sa roztok 2 M NH₃ a produkt sa dvakrát extrahoval dietyléterom, spracoval selankou, vysušil (Na₂SO₄), prefiltroval a odparil vo vákuu, čím sa získal surový produkt. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent:chloroform) poskytla 1,0 g (výťažok 53 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja. [a]²¹D = -89,2 ’ (C = 0,1, CHClg) GC-MS (70eV) M = 281 (32 %) .

Hydrochloridová sol sa pripravila rozpustením čistej zásady v dietylétere a pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HC1, čím sa získala biela pevná látka (ktorá sa speká pri teplote 80 ’C).

d) (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-propylamino)-5-hydroxy-3,4-di hydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-propylamino)-5-metoxy-3,4-di hydro-2H-l-benzopyrán (1,03 g, 3,24 mmol) sa rozpustil v bezvodom CH₂C1₂ (30 ml) a ochladil na teplotu -40 “C. Do roztoku sa po kvapkách pridal BBr₃ (0,77 ml, 8,81 mmol) rozpustený v CH₂Cl₂ (5 ml). Chladiaci kúpei sa odstránil a po troch hodinách pri laboratórnej teplote bola reakcia ukončená.

Produkt sa nalial do roztoku ladu/2 M NH₃ a zmes sa dvakrát extrahovala dietyléterom. Spojené podiely éteru sa spracovali solankou, vysušili (Na₂SO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu, čím sa získal surový produkt.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 20 % octan etylový/hexán) poskytla 0,84 g (výťažok 97 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja. [a]²¹D = -94,2 ° (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 267 (26 %).

Hydrochloridová sol sa pripravila rozpustením čistej zásady v dietylétere a prikvapkaním väčšieho množstva éterového roztoku HCl. Sol sa rekryštalizovala z CHCl₃/dietyléteru/octanu etylového, čím sa získala pevná biela látka. Teplota topenia: 220 až 222 ’C.

e) (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-propylamino) -5-trif luórmetylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-f luoro-3-(N-izopropyl-N-propylamino) -5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,71 g, 2,66 mmol) a kolidín (0,49 ml, 3,72 mmol) sa rozpustili v bezvodom CH₂Cl₂ (25 ml) a ochladili na teplotu -40 ’C. Do roztoku sa po kvapkách pridal anhydrid trifluórmetansulfonátu (0,54 ml, 3,2 mmol) a teplota zmesi sa nechala vystúpiť na laboratórnu teplotu. Reakcia sa ukončila po vystúpení teploty na 0 ’C. Reakčná zmes sa zriedila CH₂C1₂ a premývala vodným roztokom NaHCO₃, vysušila (MgSO₄), prefiltrovala a odparila vo vákuu, čím sa získal surový produkt.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 20 % CH₂C1₂) poskytla 0,82 g (výťažok 77 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja. [α]²¹θ = -85,5 · (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 399 (6 %).

Príklad 1 (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-f luoro-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-3-N-cyklopentylamino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-N-amino-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,5 g, 7,6 mmol), kyselina octová (0,45 g, 7,6 mmol) a cyklopentán (2,5 g, 3 mmol) sa rozpustili v metanole. Za miešania sa v dávkach po niekolkých minútach pridal kyanoborohydrid sodný (0,8 g, 13 mmol). V miešaní sa pokračovalo počas 2 hodín. Vzorka GC (plynová chromatografia) vykazoval 100 % nového produktu. Rozpúšťadlo sa odparilo a pridala sa voda. 2 M NH-j a EtOAc. Organická vrstva sa oddelila a premyla vodou. Vrstva sa vysušila Na₂SO₄ a odparila, čím sa získalo 1,3 g (výťažok 64 %) produktu vo forme bezfarebného oleja. Meranie GC/MS s molekulárnym pikom 265 potvrdilo zlúčeninu uvedenú v názve.

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-N-cyklopentylamino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (1,3 g, 5 mmol), kyselina octová (0,3 g, 5 mmol) a propiónaldehyd (1,5 g, 25 mmol) sa rozpustili v 30 ml metanolu. Za miešania sa v dávkach v priebehu niekoľkých minút pridal kyanoborohydrid sodný (0,8 g, 13 mmol) a v miešaní sa pokračovalo. Vzorka GC vykázala po 3 hodinách 100 % nového produktu. Rozpúšťadlo sa odparilo a pridala sa voda, 2 M NH₃a EtOAc. Organická vrstva sa oddelila a premývala vodou do neutrálnej reakcie. Vrstva sa vysušila Na₂SO₄ a odparila, čím sa získalo 1 g (výťažok 65 %) produktu vo forme bezfarebného oleja. Meranie GC/MS s molekulárnym pikom 307 potvrdilo zlúčeninu uvedenú v názve.

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1 g, 5 mmol) sa rozpustil v 25 ml CH₂C1₂. Do roztoku sa pridalo väčšie množstvo HC1 v étere, aby sa vytvorila hydrochloridová soľ. Pripravil sa roztok BBr₃(4 g, 15 mmol) v 10 ml CH₂C1₂ a po kvapkách sa pridával do roztoku počas 10 minút za stáleho miešania (v ľadovom kúpeli). Teplota reakčnej zmesi sa nechala vystúpiť na laboratórnu teplotu pri stálom miešaní počas 6 hodín a zmes sa vyliala do ľadovej vody a zalkalizovala pridaním čpavku. Organická vrstva sa oddelila, vysušila Na₂SO₄ a odparila, čím sa získal tmavohnedý olej.

Chromatografia (SiO₂, diizopropyléter a hexán, 1:1) poskytla 1,1 g bezfarebného oleja. Hydrochloridová soľ sa pripravila zo zásady a HCl v étere a rekryštalizovala z acetonitrilu, čím sa získalo 0,85 g produktu (výťažok 52 %). Teplota topenia: 220 až 221 ‘C.

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,7 g, 3 mmol) sa rozpustil v 25 ml CH₂C1₂ a pridal sa trietylamín (0,3 g, 3 mmol).

Do roztoku sa po kvapkách v priebehu 10 minút (teplota -20 ’C) pridával roztok triflorometansulfonátu (1 g, 4 mmol) v 5 ml CH₂C1₂· V miešaní sa pokračovalo počas jednej hodiny. Reakčná zmes sa potom naliala do ladovej vody a upravila na hodnotu pH 8 pridaním čpavku a extrakciou éterom. Organická vrstva sa oddelila, vysušila Na₂SO₄ a odparila, čím sa získal tmavohnedý olej.

Chromatografia (SiO₂, CH₂C1₂ + hexán, 1:3) poskytla 0,5 g bezfarebného oleja. Meranie GC/MS s molekulárnym pikom 425 potvrdilo zlúčeninu uvedenú v nadpise.

e) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-f luoro-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,5 g, 1 mmol) sa rozpustil v 15 ml 1,4-dioxánu. Do roztoku sa pridal octan paladnatý (10 mg), 1,3-bis(difenylfosfino)propán (20 mg) a metylamín (0,15 g, 5 mmol) a zmes sa miešala cez noc v atmosfére oxidu uhoľnatého pri teplote 70 ’C. Odparením a chromatografiou (SiO₂, dietyléter + hexán, 1 : 3) sa získala finálna zlúčenina vo forme bezfarebného oleja. Pripravilo sa 0,24 g hydrochloridovej soli (výťažok 65 %) vo forme bielych kryštálov. Teplota topenia: 108 ’C.

Príklad 2 (R)-8-Fluoro-3-(N-izopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-di hydro-2H-l-benzopyrán

a) Metyl-(R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-n-propylamino)-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (2,4 g, 6,0 mmol), trietylamín (1,3 g, 12,9 mmol), 1,3-bis(difenylfosfino)-propán (95 mg, katalytické množstvo, octan paladnatý (48 mg, katalytické množstvo) a DMF/MeOH (30 ml, 3 : 1) sa zmiešali v 50 ml trojhrdle baničke s guíatým dnom. Banička sa evakuovala a potom sa napustil CO (postup sa opakoval dvakrát). Reakčná zmes sa miešala pri teplote 70 ’C počas 7,5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v dietylétere/nasýtenom NaHCOg. Vrstvy sa oddelili a vodná fáza sa jedenkrát extrahovala éterom. Spojené éterové vrstvy sa vysušili (MgSO₄) a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový produkt, ktorý sa vyčistil rýchlou chromatografiou (SiO₂, hexán/EtOAc, 9 : 1), čím sa získalo 1,3 g zlúčeniny uvedenej v názve (výťažok 71 %).

b) (R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Metyl-(R)-8-fluoro-3-(N-izopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (1,3 g, 4,2 mmol) a KOH (0,52 g, 8,4 mmol) sa zmiešalo v metanole (6 ml) a refluxovalo počas 2,5 hodiny. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil vo vode a okyslil pridaním 2 M HC1. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v SOCI2 (30 ml) a refluxoval počas 2,5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Zvyšok sa rozpustil v CH₂C1₂ a rozpúšťadlo sa opäť odstránilo vo vákuu (toto sa opakovalo trikrát, aby sa odstránil prebytok SOC1₂). Zvyšok sa potom rozpustil v dietylétere (50 ml). Roztok sa ochladil na teplotu -30 ’C pred prebublávaním NH₃ (g) Pridala sa voda, vrstvy sa oddelili a vodná fáza sa extrahovala éterom. Spojené éterové vrstvy sa vysušili (K₂CO₃) a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový produkt, ktorý sa vyčistil rýchlou chromatografiou (SiO₂, EtOAc/hexán, 1:1), za získania 1,0 g zlúčeniny uvedenej v názve (výťažok 80 %). Rekryštalizácia z EtOAc/hexánu poskytla kryštály s teplotou topenia 139 až 140 ’C.

Príklad 3 (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-8-fluoro-5-metoxy-3-[N-(4-metoxybenzylidén)-amino)]-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-amino-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (7,85 g, 39,8 mmol), 4-metoxybenzaldehyd (5,42 g, 39,8 mmol), uhličitan draselný (10,1 g) a absolútny EtOH (200 ml) sa miešali cez noc pri teplote refluxu. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a pridal sa éter (500 ml). Po miešaní počas 15 minút sa sol odfiltrovala a roztok sa zahustil vo vákuu, čím sa získala belavá pevná látka (12,4 g). Rekryštalizácia z i-Pr₂0/hexánu poskytla 10,8 g (výťažok 86 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebných ihličiek. Teplota topenia: 96,8 až 97,3 ’C. [a]²¹D = +20,1 ' (C = 1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 315 (58 %).

b) (R)-8-f luoro-3-hydroxylamino-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

3-chlórperoxybenzoová kyseliny (85 %, 7,6 g, 37,6 mmol) sa za miešania v dávkach pridala k ochladenému roztoku (+4 ’C) (R)-8-fluoro-5-metoxy-3-[N-(4-metoxybenzylidén)-amino)]-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (10,8 g, 34 mmol) a metylénchloridu (65 ml). Zmes sa miešala cez noc pri laboratórnej teplote. Vyzrážaná 3-chlórbenzoová kyselina sa odfiltrovala a číry žltý filtrát sa zahustil vo vákuu. Olejový zvyšok sa vytrepal do roztoku hydroxylamínhydrochlorid (2,83 g, 40,8 mmol) a bezvodého metanolu (60 ml) a výsledný roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Rozpúšťadlo sa odparilo, čím vznikol hustý oranžový olej. Do oleja sa pridala voda, hodnota pH sa upravila na 8 až 9 pomocou nasýteného vodného Na₂CO₃ a zmes sa premyla éterom (3 x 150 ml). Organické fázy sa spojili, premyli soľankou, vysušili (Na₂SO₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu. Surový produkt sa podrobil rýchlej chromatograf ii na oxide kremičitom s EtOAc (15 až 50 %) v hexáne ako eluente. Výsledný nečistý produkt sa druhý raz podrobil rýchlej chromatografii na oxide kremičitom s EtOAc - CHC1₃(1 : 99) ako eluent, čím sa získalo 6,45 g (výťažok 89 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebnej kryštalickej pevnej látky. Teplota topenia: 111 až 113 °C. [a]²¹D = +66,4 ’ (C = 1,3, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 213 (56 %).

c) (R)-3-terc.butylamino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-f luoro-3-hydroxylamino-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-ben^zoPY^rán (6,30 g, 29,6 mmol), bezvodý síran sodný (20 g) a acetón (500 ml) sa refluxovali štyroch dní, pokým sa pomocou vrstve) nevykázalo ukončenie pod dusíkovou atmosférou počas TLC (chromatografiou na tenkej reakcie. Soľ sa odfiltrovala, k filtrátu sa pridal éter (300 ml) a roztok, stále obsahujúci jemne suspendovanú soľ, sa filtroval cez filter zo sintrovaného skla (stupeň 4). Číry filtrát sa zahustil vo vákuu. Pridal sa suchý (sito 3 A) benzén (50 ml) a výsledný roztok sa zahustil vo vákuu (napokon vývevou). Sklovitý zvyšok sa rozpustil v suchom (sito 3 A) benzéne (150 ml) v dusíku a roztok sa ochladil na ľadovom kúpeli (+4 ’C). Do roztoku sa za miešania pridal MeMgBr v Et₂O (3,0 M, 32 ml, 96 mmol) rýchlosťou, ktorá udržala vnútornú teplotu pod 5 ’C (reakcie je exotermická). Po ukončení adície (30 minút) sa roztok, miešal pri teplote +4 ’C počas 0,5 hodiny. Chladiaci kúpeľ sa odstránil a o 15 minút nalial na nasýtený NaHCO₃ a ľad (celkom opakováne premývala éterom (3 x 150 ml), zmiešali a premyli soľankou, vysušili neskôr sa roztok 300 ml). Zmes sa Organické fázy sa (Na₂SO₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu. Rýchla chromatograf ia na oxide kremičitom (eluent: EtOAc (2 a 10 %) v CHC1₃) poskytla 2,9 g derivátu terc.butylhydroxylamínu. Tento sa rozpustil v CS₂ v dusíku a roztok sa miešal pri laboratórnej teplote počas 4,5 hodín. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím vznikol oranžový olej. Pridal sa acetón (cca 50 ml) a roztok sa krátko (15 minút) miešal pri laboratórnej teplote (aby sa vyzrážala elementárna síra), potom sa prefiltroval a zahustil, čím sa získal olej. Rýchla chromatografia na oxide kremičitom (eluent: EtOAc (10 až 25 %) v hexáne) poskytla 2,34 g (výťažok 31 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme žltého Oleja. [a]²¹D = -82,8 ’ (C =1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 253 (53 %).

d) (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-terc.butylamino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (2,20 g, 8,7 mmol), alylbromid (7,5 ml, 87 mmol), jemne rozomletý bezvodý uhličitan draselný (6,0 g, 43 mmol) a suchý DMF (6,0 ml) sa miešali pod dusíkom pri teplote 65 ’C. Analýza GC po 70 hodinách vykázala čiastočnú konverziu východiskovej látky (67 % produktu oproti 30 % východiskovej látky). V tejto fáze sa reakcia prerušila. Sol sa odsala, premyla malou dávkou DMF a číry filtrát sa zahustil. Takto získaný olej sa rozdelil medzi nasýtený vodný Na₂CO₃ a dietyléter (4 x 70 ml). Organické fázy sa spojili, premyli solankou, vysušili (MgS0₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu. Rýchla chromatografia na oxide kremičitom (eluent: acetón (2 a 15 %) v hexáne) poskytla 0,80 g východiskovej látky a 1,47 g alylovaného produktu (výťažok 87 % na základe znovuzískanej východiskovej látky), vo forme bezfarebného oleja. [a]²¹D = -77,6 ⁰ (C = 0,8, CHC1₃)

GC-MS (70eV) M = 293 (40 %).

Alylovaný produkt (1,,30 g sa zmiešal s DMF (50 ml) a 5 % Rh na oxide hlinitom (0,090 g) a hydrogenoval sa pri normálnom tlaku a teplote (21 ’C). Po 5 hodinách bola reakcia ukončená podlá stanovenia GC a TLC. Katalyzátor sa odfiltroval na Celíte, podložka sa omyla malými dávkami DMF a filtrát sa zahustil vo vákuu. Rýchla chromatografia surového produktu na oxide kremičitom (eluent: EtOAc (0 a 3 %) v CH₂C1₂) poskytla 1,27 g (výťažok 97 %) nasýtenej zlúčeniny. GC-MS (70eV) M = 295 (28 %). [a]²¹D (zásada) = -83,4 ’ (C = 0,9, CHC1₃).

Zásada sa rozpustila v suchom dietyléter, roztok sa ochladil ľadovým kúpeľom a za miešania sa pridalo väčšie množstvo éterového roztoku HCI. Sol sa odfiltrovala, premyla suchým diétyléterom a vysušila vo vákuu pri teplote 50 ’C, čím sa získalo 1,39 g (výťažok 98 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bielych kryštálov. Teplota topenia 175 až 176 ’C.

e) (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán hydrochlorid (1,3 g, 3,9 mmol) v suchom metylénchloride (40 ml) sa ochladil pod dusíkom v kúpeli suchý ľad - EtOH na teplotu -50 ’C. Po kvapkách sa za miešania počas jednej minúty pridal do vyššie uvedeného roztoku tribromid boru (0,75 ml, 7,8 mmol). Päť minút po ukončení pridávania tribromidu boru sa kúpeľ so suchým ľadom nahradil kúpeľom s ľadom (+4 ’C). Po miešaní počas 4 hodín pri rovnakej teplote sa roztok nalial na ľad (100 g) a na upravenie hodnoty pH na 8 až 9 sa pridal pevný NaHC0₃. Keď sa ľad roztopil, zmes sa extrahovala éterom (4 x 75 ml). Éterové extrakty sa zmiešali, premyli solankou, vysušili (Na₂SO₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu, čím sa získalo 1,1 g (výťažok 96 %) zlúčeniny uvedenej v názve. [aJ^Q = -91,7 ’ (C = 1,0, CHC1₃), GC-MS (70eV) M = 281 (6 %).

f) (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (1,0 g, 3,6 mmol) a 2,4,6-kolidínu (0,52 g, 3,9 mmol) sa rózpustilo v bezvodom metylénchloride (40 ml) a ochladilo na teplotu -30 'C. Po kvapkách sa počas 20 minút pridal anhydrid trifluórmetansulfonátu (0,66 ml, 3,9 mmol) rozpustený v bezvodom metylénchloride (10 ml). Roztok sa nechal zahriať na laboratórnu teplotu a po dosiahnutí 0 ’C sa reakcia ukončila. Produkt sa zriedil metylénchloridom a premyl nasýteným vodným NaHCO₃ (50 ml). Vodná fáza sa reextraho24 vala éterom (2 x 40 ml). Spojené organické fázy sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu, čím sa získal surový produkt. Rýchla chromatografia na oxide kremičitom (eluent: EtOAc-hexán (3 : 97)) poskytla 1,40 g (výťažok 95 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebného oleja. [a]²¹D = -73,7 ’ (C = 1,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 413 (1 %).

g) Metyl-(R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,4 g, 3,3 mmol) a trietylamín (1,0 ml, 7,4 mmol) sa rozpustili v roztoku DMF/MeOH (6 : 2, 30 ml) a potom odplynili, následne sa napustil oxid uhoľnatý (4 x). Pri miernom pretlaku oxidu uhoľnatého sa pridal octan paladnatý (0,030 g) a 1,3-bis(difenylfosfino)propán (0,060 g) a reakčná zmes sa odplynila a znova vystavila oxidu uhoľnatému. Produkt sa zahrieval pri teplote 70 °C (v olejovom kúpeli) za intenzívneho miešania počas 12 hodín. GC vykázala neúplnú reakciu (68 % produktu oproti 21 % východiskovej látky), roztok sa ochladil a potom prefiltroval cez Celíte. Pridal sa ďalší octan paladnatý (0,030 g) a l,3-(difenylfosfino)propán (0,060 g) a reakcia pokračovala ako je opísané vyššie. Po ďalších 3 hodinách merania GC vykázalo mierne zlepšený pomer (77 % oproti 12 %) a produkt sa nechal vychladnúť. Nasledujúci deň sa rozpúšťadlo odstránilo vo vákuu. Zostávajúci červenohnedý olej sa zachytil do nasýteného vodného NaHCO₃ a potom sa extrahoval EtOAc (3 x 50 ml). Spojené organické fázy sa premyli solankou, vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu, čím sa získal surový produkt. Rýchla chromatografia na oxide kremičitom (eluent: EtOAc (15 a 30 %) v hexáne) poskytla 0,178 g (výťažok 89 % na základe znovu získanej východiskovej látky) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -121,1 (C = 0,9, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 323 (14 %).

h) (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-8-fluoro-3,4-di- hydro-2H-l-benzopyrán

Metyl-(R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (0,84 g, 2,6 mmol), metanol (10 ml) a 1,7 M vodného NaOH (3,0 ml, 5,2 mmol) sa refluxovali počas 3 hodín. Číry roztok sa ochladil, metanol sa odstránil, vodné zvyšky sa dvakrát premyli zmesou éteru a hexánu v pomere 1 : 1, potom sa okyslili 2 M HCl (pH = < 2). Voda sa odparila vo vákuu a zostávajúca sol sa vysušila vo vákuu pri teplote 50 C počas 2 hodín. Pridal sa suchý metylénchlorid (20 ml) a tionylchlorid (3,0 ml, 41 mmol), zmes sa refluxovala pod dusíkom počas 11 hodín. Prchavé podiely sa odparili, pridal sa ďalší suchý metylénchlorid a odparil sa. Tento postup sa zopakoval ešte jedenkrát. Surový kyslý chlorid sa rozpustil (suspendoval) v suchom metylénchloride (50 ml) a po kvapkách sa pridal do rozmiešaného koncentrovaného vodného čpavku (40 ml) chladeného v ľadovom kúpeli. Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu, organické fázy sa separovali a vodná fáza sa premyla metylénchloridom (100 ml) a éterom (50 ml). Organické časti sa zmiešali, vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a zahustili vo vákuu, čím sa získal surový produkt. Rýchla chromatografia na oxide kremičitom (eluent: EtOAc - hexán v pomere 4:5) poskytla 0,73 g (výťažok 91 %) (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino )-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxamidu vo forme pevnej látky. Teplota topenia: 70 až 75 ’C.

[a]²¹D = -132,4 ’ (C = 1,0, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 308 (3 %).

Zásada sa rozpustila v suchom étere, roztok a ochladil v kúpeli so suchým ladom (teplota -20 ’C) a do premiešaného roztoku sa pridalo väčšie množstvo éterového roztoku HCl. Sol sa odfiltrovala, premyla suchým éterom a vysušila vo vákuu pri teplote 50 ’C, čím sa získalo 0,78 g (výťažok 96 %) hydrochloridovej soli vo forme bielych kryštálov.

Teplota topenia 120 ’C (spéká sa).

Príklad 4 (R) -5-karbamoyl-3- (N, N-dicyklobutylamino) -8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-3-(N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-d ihydro-2H-1-benzopyrán a (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-amino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,67 g, 8,47 mmol) sa rozpustil v bezvodom metanole (20 ml) a do roztoku sa pridal cyklobutanón (5,0 g, 71,3 mmol). Reakčná zmes sa ochladila (ladový kúpeľ), potom sa pridal kyanoborohydrid sodný (0,96 g, 15,3 mmol) a roztok sa cez noc miešal pri laboratórnej teplote. Po 24 hodinách sa hodnota pH upravila kyselinou octovou na 4 až 5 a reakčná zmes sa miešala ešte jeden deň.

Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky sa zachytili v roztoku 2 M NH₃ a potom sa trikrát extrahovali dietyléterom. Spojené podiely éteru sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok.

Chromatografia na oxide hexán pre dialkylovaný monoalkylovaný produkt) kremičitom (eluent: 15 % dietylacetátprodukt, nasledovaný etylacetátom pre poskytla 1,01 g (výťažok 48 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja. [GC-MS (70eV)

M = 251 (6 %)] a 0,71 g (výťažok 27 %) monoalkylovanej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja. [GC-MS (70eV) M = 251 (6 %] dialkylovanej zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -101,0 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 305 (3 %).

b) (R)-8-fluoro-3-(N,N-dicyklobutylamino)-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Hydrochlorid (R)-8-fluoro-3-(N,N-dicyklobutylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (0,77 g, 2,26 mmol) sa rozpustil v bezvodom CH₂C1₂ (20 ml) a ochladil na teplotu 40 “C. Do roztoku sa po kvapkách pridal BBr₃ (0,54 ml, 5,7 mmol) rozpustený v bezvodom CH₂C1₂ (3 ml). Chladiaci kúpeľ sa odstránil a po 2 hodinách pri laboratórnej teplote sa reakcia ukončila.

Produkt sa nalial na roztok ľadu /2 M NH₃ a zmes sa dvakrát extrahovala dietyléterom. Spojené podiely éteru sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový produkt.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 50 % octan etylový/hexán) poskytla 0,58 g (výťažok 89 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej pevnej látky.

[a]²¹D = -114,4 · (C = 0,1, CHCl-j) GC-MS (70eV) M = 291 (2 %).

c) (R) -3- (N, N-dicyklobutylamino) -8-fluoro-5-trifluorometylsulf onyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R) -3 - (N, N-dicyklobutylamino) -8-f luoro-5-hydroxy-3,4-dihyd ro-2H-l-benzopyrán (0,59 g, 2,02 mmol) a kolidín (0,37 ml, 2,8 mmol) sa rozpustili v bezvodom CH₂C1₂ (40 ml) a ochladili na teplotu -40 ^eC. Do roztoku sa po kvapkách pridal anhydrid trifluorometansulfonátu (0,41 ml, 2,4 mmol) a teplota reakčnej zmesi sa nechala vystúpiť na laboratórnu teplotu. Reakcia sa ukončila po vystúpení teploty na 0 C. Produkt sa zriedil CH₂C1₂ a premýval vodným roztokom NaHCO₃, vysušil ((MgSO₄), prefiltroval a zahustil vo vákuu, čím sa získal surový produkt.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: CH₂C1₂) poskytla 0,84 g (výťažok 99 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -90,9 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 423 (3 %).

d) Metyl-(R) -3- (N,N-dicyklobutylamino) -8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R) -3- (N, N-dicyklobutylamino) -8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,82 g, 1,94 mmol) sa rozpustil v roztoku DMF s metanolom (6 : 2, 15 ml a odplynil, potom sa napustil oxid uhoľnatý (3 x). Pri miernom pretlaku oxidu uhoľnatého sa pridali octan paladnatý (14 mg), 1,3-bis-(difenylfosfino)propán (25 mg) a trietylamín (0,60 ml, 4,3 mmol) a reakčná zmes sa odplynila a znova vystavila oxidu uhoľnatému. Reakčná zmes sa zahriala na teplotu 70 °C v atmos28 fére oxidu uhoľnatého za intenzívneho miešania počas 5,5 hodín. Produkt sa nechala vychladnúť a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Zvyšky sa zachytili do 2 M NH₃ a potom extrahovali dietyléterom. Spojené éterové podiely sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatograf ia na oxide kremičitom (eluent: 12,5 % octan etylový/hexán) poskytla 501 mg (výtažok 78 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -138,2 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 333 (4 %).

e) (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1-ben zopyrán

Metyl- (R) - 3- (N ,N-dicyklobutylamino) -8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (490 mg, 1,47 mmol) sa refluxoval s roztokom 6 M HCl (20 ml) počas 3,5 hodiny. Roztok sa ochladil, zahustil do sucha vo vákuu. Potom sa pridal bezvodý toluén a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu (4 x).

K pevnej bielej látke sa pridal tionylchlorid (15 ml) a roztok cez noc miešal pri laboratórnej teplote. Prebytočný tionylchlorid sa odstránil vo vákuu, pridal sa bezvodý toluén a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu.

Kyslý chlorid sa rozpustil v CH₂C1₂ (20 ml) a po kvapkách sa pridal k ochladenému roztoku (ľadový kúpeľ) koncentrovaného NH₃ (20 ml). Roztok sa miešal počas 30 minút pri laboratórnej teplote. Fáza CH₂C1₂ sa oddelila a vodný podiel sa reextrahoval s CH₂C1₂ (3 x). Spojené podiely CH₂C1₂ sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a odparili vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: octan etylový) poskytla 430 mg (výtažok 92 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bielej pevnej látky. Teplota topenia: 141,2 až 142,2 ’C. [a]²¹D = -151,5 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 318 (3 %).

Hydrochloridová soľ sa pripravila rozpustením čistej zásady v étere a prikvapkaním nadbytku éterového roztoku HCl.

Sol sa premyla dietyléterom, čím sa získala biela pevná látka. Teplota topenia: 120 ’C (speká sa).

Príklad 5 (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-f luoro-5-metoxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklobutylamino)-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,01 g, 4,02 mmol) sa rozpustil v bezvodom metanole (20 ml) a do roztoku sa pridal n-propiónaldehyd (3,0 ml, 40,2 mmol). Po jednej hodine sa reakčná zmes ochladila (ladový kúpel), potom sa pridal kyanoborohydrid sodný (0,46 g, 7,24 mmol). Hodnota pH sa kyselinou octovou upravila na 4 až 5 a zmes sa miešala pri cez víkend pri laboratórnej teplote. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky za zachytili v roztoku 2 M NH₃ a potom trikrát extrahovali dietyléterom. Spojené podiely éteru sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatograf ia na oxide kremičitom (eluent: 11 % dietylacetát/hexán) poskytla 0,95 g (výťažok 80 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -95,4 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 293 (1 %).

b) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-f luoro-5-hydroxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-f luoro-5-metoxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyrán (1,0 g, 3,03 mmol) sa rozpustil v bezvodom CH₂C1₂ (25 ml) a ochladil na teplotu -40 ’C. Do roztoku sa po kvapkách pridal BBr₃ (0,72 ml, 7,6 mmol) rozpustený v bezvodom CH₂C1₂ (4 ml). Chladiaci kúpel sa odstránil a po 2 hodinách pri laboratórnej teplote sa reakcia ukončila. Reakčná zmes sa naliala do roztoku ľadu /2 M NH₃ a podiel CH₂Cl₂ sa oddelil, vodná vrstva sa dvakrát extrahovala dietyléterom. Spojené podiely CH₂C1₂ sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový produkt. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 25 % octan etylový/hexán, nasledovaný 50 % octan etylový/hexán) poskytla 0,83 g (výťažok 98 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme gumovitej látky.

[a]²¹D = -80,5 ^e (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 279 (0,2 %).

c) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R) - 3 - (N-cyklobutyl-N-n-propy lamino) - 8 - f luoro- 5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,80 g, 2,86 mol) a kolidín (0,53 ml 4,0 mmol) sa rozpustili v bezvodom CH₂C1₂ (30 ml) a ochladili na teplotu -40 C. Do roztoku sa po kvapkách pridal anhydrid trifluorometansulfonátu (0,60 ml, 3,6 mmol) a teplota reakčnej zmesi sa nechala vystúpiť na laboratórnu teplotu. Reakcia bola ukončená po vystúpení teploty na 0 °C. Zmes sa zriedila CH₂C1₂ a premývala nasýteným vodným roztokom NaHCO₃, vodná vrstva sa dvakrát reextrahovala s CH₂C1₂, spojené vrstvy CH₂C1₂ sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a odparili vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: CH₂C1₂) poskytla 1,01 g (výťažok 86 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -78,6 · (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 411 (1 %).

d, Metyl- (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,0 g, 2,43 mmol) sa rozpustil v roztoku DMF s metanolom (6 : 2, 20 ml) a odplynil, potom sa napustil oxid uhoľnatý (3 x). Pri miernom pretlaku oxidu uhoľnatého sa pridal octan paladnatý (18 mg), 1,3-bis(difenylfosfino)propán (25 mg) a trietylamín (0,75 ml, 5,3 mmol) a reakčná zmes sa odplynila a znova vystavila oxidu uhoľnatému. Zmes sa zahriala na teplotu 70 ’C v atmosfére oxidu uhoľnatého za intenzívneho miešania počas 6 hodín. Reakčná zmes sa nechala vychladnúť a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Zvyšky sa zachytili do roztoku 2 M NH₃ a potom dvakrát extrahovali dietyléterom. Spojené éterové podiely sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 15 % octan etylový/hexán) poskytla 0,73 mg (výťažok 94 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -130,1 (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 321 (2 %).

e) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Metyl-(R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (0,71 mg, 2,21 mmol) sa refluxoval s roztokom 6 M HCl (30 ml) počas 3,5 hodiny. Roztok sa ochladil, zahustil do sucha vo vákuu. Potom sa pridal bezvodý toluén a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu (4 x).

K pevnej bielej látke sa pridal tionylchlorid (20 ml) a roztok cez noc miešal pri laboratórnej teplote. Prebytočný tionylchloird sa odstránil vo vákuu, pridal sa bezvodý toluén a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu.

Kyslý chlorid sa rozpustil v CH₂C1₂ (30 ml) a po kvapkách sa pridal k ochladenému roztoku (ladový kúpe!) koncentrovaného NH₃ (30 ml). Roztok sa miešal počas 40 minút pri laboratórnej teplote. Fáza CH₂C1₂ sa oddelila a vodný podiel sa reextrahoval s CH₂C1₂ (3 x). Spojené podiely CH₂C1₂ sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a odparili vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatografia na oxide 'kremičitom (eluent: octan etylový) poskytla 622 mg (výťažok 92 %) bielej semikryštalickej látky. Podiel sa rekryštalizoval z octanu etylového/hexánu, čím sa získala krehká biela pevná látky. Teplota topenia: 107 až 109 ’C.

[a]²¹D = -133,0 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 306 (0,5 %).

Príklad 6 (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-8-fluoro-3-(N-izopropylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (R)-3-amino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,62 g, 8,21 mmol) sa rozpustil v bezvodom metanole (20 ml) a do roztoku sa pridal acetón (6,0 ml, 82,1 mmol). Produkt sa ochladil (ladový kúpel), potom sa pridal kyanoborohydrid sodný (0,92 g, 14,8 mmol), hodnota pH sa upravila kyselinou octovou na 4 až 5 a roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote.

Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky za zachytili v roztoku 2 M NH₃ a potom trikrát extrahovali dietyléterom. Spojené podiely éteru sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok, ktorý sa použil v nasledujúcej reakcii.

GC-MS (70eV) M = 239 (81 %).

b) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-8-fluoro-3-(N-i zopropylamino)-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán (1,96 g, 8,19 mmol) sa rozpustil v bezvodom metanole (20 ml) a do roztoku sa pridal cyklobutanón (6,1 g, 81,9 mmol). Produkt sa ochladil (ľadový kúpeľ), potom sa pridal kyanoborohydrid sodný (2,0 g, 16,4 mmol), hodnota pH sa upravila kyselinou octovou na 4 až 5, pridalo sa molekulárne sito 3 A a roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote. Po 24 hodinách sa hodnota pH opäť upravila kyselinou octovou na 4 až 5 a produkt sa miešal ešte počas 3 dní.

Produkt sa prefiltroval, rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, zvyšky za zachytili v roztoku 2 M NH₃ a potom trikrát extrahovali dietyléterom. Spojené podiely éteru sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 10 % etylacetát/hexán) poskytla 1,60 mg (výťažok 77 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -95,1 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 293 (3 %).

c) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán hydrochlorid (1,76 g, 5,34 mmol) sa rozpustil v bezvodom CH₂C1₂ (45 ml) a ochladil na teplotu -40 ‘C. Do roztoku sa po kvapkách pridal BBr₃ (1,3 ml, 13,4 mmol) rozpustený v bezvodom CH₂C1₂ (7 ml). Chladiaci kúpe! sa odstránil a po dvoch hodinách pri laboratórnej teplote bola reakcia ukončená.

Produkt sa nalial do roztoku ladu/2 M NH₃, podiel CH₂C1₂sa oddelil, vodná vrstva sa dvakrát reextrahovala CH₂C1₂. Spojené podiely CH₂C1₂ sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 30 % octan etylový/hexán) poskytla 1,46 g (výťažok 98 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme gumovitej látky.

[a]²¹D = -95,7 · (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV)M = 279.(0,7 %).

Hydrochloridová sol sa pripravila rozpustením čistej zásady v étere a prikvapkaním väčšieho množstva éterového roztoku HCl. Sol sa premyla dietyléterom, čím vznikla biela pevná látka.

Teplota topenia 120 °C, speká sa.

d) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,36 g, 4,87 mmol) a kolidín (0,90 ml, 6,8 mmol) sa rozpustili v bezvodom CH₂C1₂ (50 ml) a ochladili na teplotu -40 ’C. Do roztoku sa po kvapkách pridal anhydrid trifluórmetansulfonátu (1,05 ml, 6,1 mmol) a teplota reakčnej zmesi sa nechala vystúpiť na laboratórnu teplotu. Reakcia sa ukončila po vystúpení teploty na 0 “C. Reakčná zmes sa zriedila CH₂C1₂ a premývala vodným roztokom NaHCO₃, vodný podiel sa dvakrát reextrahoval CH₂C1₂, spojené podiely CH₂C1₂sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a odparili vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok.

Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 70 % hexán/CH₂C1₂) poskytla 1,67 g (výťažok 83 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme nažtlého oleja.

[a]²¹D = -86,8 ’ (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 411 (0,3 %).

e) Metyl-(R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (1,65 g,

4,01 mmol) sa rozpustil v roztoku DMF s metanolom (6 : 2, 30 ml) a odplynil, potom sa napustil oxid uhoľnatý (3 x). Pri miernom pretlaku oxidu uhoľnatého sa pridal octan paladnatý (30 mg), l,3-bis(difenylfosfino)propán (55 mg) a trietylamín (1,25 ml, 8,8 mmol) a reakčná zmes sa odplynila a znova vystavila oxidu uhoľnatému. Zmes sa zahrievala pri teplote 70 ’C v atmosfére oxidu uhoľnatého za intenzívneho miešania počas 6 hodín, nechala sa vychladnúť a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Zvyšky sa zachytili do roztoku 2 M NH₃a potom dvakrát extrahovali dietyléterom. Spojené éterové podiely sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali odstránilo vo vákuu, čím sa získal surový grafia na oxide kremičitom (eluent: 8 % octan etylový/hexán) poskytla 1,18 mg (výťažok 92 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme číreho oleja.

[a]²¹D = -139,1 · (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 321 (3 %).

a rozpúšťadlo sa zvyšok. Chromáto35

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino) -8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Metyl-(R )-3-( N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (1,16 mg, 3,61 mmol) sa refluxoval s roztokom 6 M HCl (30 ml) počas 3,5 hodín. Roztok sa ochladil, zahustil do sucha vo vákuu. Potom sa pridal bezvodý toluén a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu (4 x).

K biele gumovitej látke sa pridal tionylchlorid (35 ml) a roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote. Prebytočný tionylchlorid sa odstránil vo vákuu, pridal sa bezvodý toluén a rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu.

Kyslý chlorid sa rozpustil v CH₂C1₂ (50 ml) a po kvapkách pridal k ochladenému roztoku koncentrovaného NH₃ (50 ml). Roztok sa miešal počas 40 minút pri laboratórnej teplote. Fáza CH₂C1₂ sa oddelila a vodný podiel sa trikrát reextrahoval s CH₂C1₂. Spojené podiely CH₂C1₂ sa vysušili (MgSO₄), prefiltrovali a odparili vo vákuu, čím sa získal surový zvyšok. Chromatografia na oxide kremičitom (eluent: 8 % octan etylový) poskytla 1,06 mg (výťažok 95 %) bielej peny. Pena sa kryštalizovala pomocou CH₂Cl₂/hexánu,čím sa získala biela pevná látka. Teplota topenia 127,8 až 128,4 ’C.

[ct]²¹D = -143,0 · (C = 0,1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M = 306 (0,3 %)

Hydrochloridová sol sa pripravila rozpustením čistej zásady v étere a odobraním prebytočného éterového roztoku HCl. Sol sa premyla dietyléterom, čím sa získala biela pevná látka. Teplota topenia 120 ’C (speká sa).

Príklad 7 (R) -5-karbamoyl-3- (N-cyklopentyl-N-n-propylamino) -8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)- 3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán

K roztoku (R)-3-amino-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (2,5 g, 12 mmol), cyklopentanónu (3,3 g, 36 mmol) a HOAc (0,7 g, 12 mmol) v metanole (25 ml) sa po dávkach pri laboratórnej teplote pridal NaCNBH^ (2,5 g, 40 mmol). Roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote, čim vzniklo určité množstvo zlúčeniny uvedenej v názve. GC-MS (70eV) M = 265.

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

K roztoku (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu v metanole (25 ml) sa pridal propanal (2 g, 36 mmol) a NaCNBH-j (2 g, 40 mmol). Roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote, čím vznikla požadovaná zlúčenina vo výťažku 97 %, podľa merania GC. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a zvyšok sa spracoval extrakciou tak, že vzniklo 3,7 g zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 307 (40 %).

c) (R )-3-( N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-f luoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Hydrochloridová soľ (R)-3-(N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu sa pripravila pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HC1 do éterového roztoku zásady. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v 48 % roztoku HBr vo vode (50 ml). Roztok sa miešal pri teplote 120 ’C počas 1,5 hodiny. Roztok sa neutralizoval opatrným pridávaním koncentrovaného čpavku. Spracovanie extrakciou poskytlo hnedý olej, ktorý sa filtroval cez kremennú zátku (ako eluent sa použil octan etylový). Zlúčenina uvedená v názve sa izolovala vo forme nažitého oleja. GC-MS (70eV) M = 293 (40 %).

d) (R) - 3- (N-cyklopentyl-N-propylamino) -8-f luoro-5-trif luorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R) - 3 - (N-cyklopentyl-N-propylamino) -8 -f luoro- 5-hydroxy- 3,437

-dihydro-2H-l-benzopyrán sa rozpustil v dietylétere (100 ml). Pridal sa trietylamín (3,0 g, 30 mmol). Roztok sa ochladil na teplotu -20 ’C. Po kvapkách sa počas 5 minút pridával anhydrid trifluorometansulfonátu (4,2 g, 15 mmol) rozpustený v dietylétere (20 ml). Po miešaní počas 30 minút sa tmavohnedá zmes vyliala do vody. Organická vrstva sa oddelila.

Rýchla chromatografia (octan etylový ako eluent) poskytla zlúčeninu uvedenú v názve vo forme žltého oleja s výťažkom 69 %. GC-MS (70eV) M = 425 (10 %).

e) Metyl-(R)-3-(N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (3,7 g, 8,7 mmol),

DMF (50 ml), trietylamín 130 mmol), octan paladnatý nylfosfino)propán (200 mg, (2,5 g, 25 mmol), metanol (4 g, (100 mg, 0,45 mmol) a l,3-bis(dife0,48 mmol) sa umiestnili v baničke s okrúhlym dnom. Roztok sa miešal vo vákuu pri teplote 75 ’C v atmosfére oxidu uhoľnatého počas 4 hodín. Po odparení rozpúšťadla vo vákuu a spracovaní surového produktu rýchlou chromatograf iou sa izolovalo 2,5 g (výťažok 86 %) zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 335 (20 %).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Metyl-(R)-3-(N-cyklopentyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (1,4 g, 4 mmol) sa hydrolyzoval (6 M HC1, refluxoväné počas 2 hodín). Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Surová kyselina sa spracovala s SOC1₂ (pri laboratórnej teplote počas 5 minút), čím vznikol kyslý chlorid, ktorý sa po odstránení prebytku SOC1₂ vo vákuu pridal do koncentrovaného roztoku čpavku, čím vznikol amid. Surový produkt sa izoloval a vyčistil rýchlou chromatografiou. Hydrochloridová soľ sa pripravila pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HCl do éterového roztoku čistej zásady, čím vznikla biela pevná látka. Soľ sa rekryštalizovala z etanolu/-dietyléteru, čím sa získala zlúčenina uvedená v názve (0,5 g, výťažok 35 %) vo forme bielych kryštálov. Teplota topenia 85 ’C.

[a]²¹D (zásada) = -91 ⁰ (C = 0,2, CH₂C1₂) GC-MS (70eV) M = 320 (25 %).

Príklad 8 (R) -5-karbamoyl-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino) -8-f luoro-3,4-d ihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-3-(N-cyklohexylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyrán

K roztoku (R)-3-amino-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (0,45 g, 2,2 mmol), cyklohexanónu (0,7 g, 7,2 mmol) a HOAc (0,14 g, 2,3 mmol) v metanole (25 ml) sa po dávkach pri laboratórnej teplote pridal NaCNBH₃ (0,5 g, 8 mmol). Roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote, čím vzniklo určité množstvo zlúčeniny uvedenej v názve. GC-MS (70eV) M = 279 (30 %).

b) (R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

K roztoku (R)-3-(N-cyklohexylamino)-8-f luoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (0,45 g, 2,2 mmol) v metanole (25 ml) sa po dávkach pri laboratórnej teplote pridal propanal (1,3 g, 23 mmol) a NaCNBH₃ (0,15 g, 2,3 mmol). Roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote, čím vznikla požadovaná zlúčenina vo výťažku 97 %, podľa merania GC. Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu a zvyšok sa spracoval extrakciou, čím vzniklo 0,7 g zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 321 (40 %).

c) (R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Hydrochloridová sol (R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu sa pripravila pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HC1 do éterového roztoku zásady. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu a zvyšok sa rozpustil v 48 % roztoku HBr (20 ml). Roztok sa miešal pri teplote 120 ‘C počas 1,5 hodiny. Roztok sa neutralizoval opatrným pridávaním koncentrovaného čpavku. Spracovanie extrakciou poskytlo hnedý olej, ktorý sa filtroval cez kremennú zátku (ako eluent sa použil octan etylový). Zlúčenina uvedená v názve sa izolovala vo forma nažitého oleja. GC-MS (70eV) M = 307 (40 %).

d) (R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán sa rozpustil v dietylétere (30 ml). Ďalej sa pridal trietylamín (0,8 g, 8 mmol). Roztok sa ochladil na teplotu -20 C. Po kvapkách sa počas 5 minút pridával anhydrid trifluorometansulfonátu (0,8 g, 2,8 mmol) rozpustený v dietylétere (10 ml). Po miešaní počas 30 minút sa tmavohnedá zmes vyliala do vody. Organická vrstva sa oddelila. Rýchla chromatografia (EtOAc/hexán 1+1 ako eluent) poskytla 0,8 g zlúčeniny uvedenej v názve vo forme žltého oleja. GC-MS (70eV) M = 439 (20 %).

e) Metyl-(R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-5-trifluorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,8 g, 1,8 mmol), (4) DMF (30 ml), trietylamín (0,5 g, 5 mmol), metanol (0,8 g, 13 mmol), octan paladnatý (30 mg, 0,14 mmol) a l,3-bis(difenylfosfino)propán (60 mg, 0,14 mmol) sa umiestnili v baničke s okrúhlym dnom. Roztok sa miešal pri teplote 75 °C v atmosfére oxidu uhoľnatého počas 4 hodín. Po odparení rozpúšťadla vo vákuu a podrobení surového produktu rýchlej chromatografii sa izolovalo 0,6 g zlúčeniny uvedenej v názve (výťažok 76 %) , vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 349 (30 %).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Metyl-(R)-3-(N-cyklohexyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (5) (0,6 g, 1,7 mmol) sa podrobil alkalickej hydrolýze (2 % KOH v EtOH, refluxovaný počas 2 hodín). Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Surová kyselina sa spracovala s SOC1₂ (pri laboratórnej teplote počas 5 minút), čím vznikol kyslý chlorid, ktorý sa po odstránení prebytočného SOC1₂ vo vákuu pridal do koncentrovaného roztoku čpavku, čím vznikol amid. Surový produkt sa izoloval a vyčistil rýchlou chromatografiou.

Hydrochloridová sol sa pripravila pridaním väčšieho množstva éterového roztoku HCI do éterového roztoku čistej zásady, čím vznikla zlúčenina uvedená v názve (86 mg, výťažok 14 %) vo forme bielych kryštálov. Teplota topenia 75 ’C.

[α]²¹θ (zásada) = -73 · (C = 0,2, CH₂C1₂) GC-MS (70eV) M = 334 (35 %) .

Príklad 9 (R) -5-karbamoyl-3- (N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino) -8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

a) (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

K roztoku (R)-3-amino-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (0,7 g, 3,4 mmol), 8,3 mmol) a HOAc (0,2 g, 3,5 mmol) dávkach pri laboratórnej teplote cyklopentanónu (0,7 g, v metanole (25 ml) sa po pridal NaCNBH·, (0,7 g, mmol). Roztok sa miešal cez noc pri laboratórnej teplote.

Metanol sa odparil. Zvyšok sa rozpustil v EtOAc a premyl vodou. Organická vrstva sa vysušila Na₂SO₄ a rozpúšťadlo sa odparilo, čím vzniklo 0,9 g (výťažok 100 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bezfarebného oleja. Pomocou GC sa stanovila čistota

99.6 %. GC-MS (70eV) M = 265 (30 %)

b) (R)- 3-(N-cyklopenty 1-N-cyklobuty lamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán

K roztoku (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-metoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyránu (0,9 g, 3,4 mmol), HOAc (0,22 g,

3.6 mmol) a cyklobutanónu (2 g, 30 mmol) v metanole (25 ml) sa po dávkach pri laboratórnej teplote pridal NaCNBHg (1 g, 16 mmol). Po miešaní počas 4 dní sa pomocou GC stanovilo 37 % produktu. Hodnota pH sa upravila na 5 (HOAc) a pridal sa ďalší cyklobutanón (1 g, 15 mmol). Po miešaní počas ďalších 6 dní sa pomocou GC stanovilo 64 % produktu. Rozpúšťadlo sa odparilo a zvyšok sa spracoval extrakciou. Rýchla chromatografia (EtOAc/P- éter, 1:1) poskytla 0,53 g (výťažok 53 %) zlúčeniny uvedenej v názve vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 319 (3 %)

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-f luoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R) - 3 - (N-cyklopenty 1-N-cyklobuty lamino )-8-fluoro-5 -metoxy3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,53 g, 1,6 mmol) sa rozpustil v 47 % roztoku HBr (15 ml) a miešal sa pri teplote 120 °C počas 1,5 hodiny. Roztok sa ochladil pridaním ladu a zalkalizoval 14 M čpavku. Spracovanie extrakciou poskytlo 0,5 g zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bledo hnedého oleja. IR meranie ukázalo typický pás OH pri'3654 cm“¹.

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-f luoro-5-trif luorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán sa rozpustil v zmesi dietyléteru a metylénchloridu (90 + 10, 20 ml) a do roztoku sa pridal trietylamín (0,7 g, 7 mmol) a zmes sa ochladila na teplotu -20 ’C. Po kvapkách sa počas 5 minút pridával anhydrid trifluorometansulfonátu (0,85 g, 3 mmol) rozpustený v dietylétere (10 ml). Po miešaní počas 30 minút sa tmavo hnedá zmes vyliala do vody. Rozpúšťadlo sa odparilo a zvyšok sa rozpustil v hexáne a spracoval s aktívnym uhlím. Filtrácia cez celit a odparenie rozpúšťadla poskytlo 0,67 g zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 437 (1 %)

e) Metyl- (R) -3- (N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino) -8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino )-8-f luoro-5-trif luorometylsulfonyloxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán (0,67 g,

1,5 mmol) (4), DMF (20 ml), trietylamín (0,6 g, 6 mmol), metanol (0,8 g, 13 mmol), octan paladnatý (22 mg, 0,1 mmol) a 1,3-bis(difenylfosfino)propán (44 mg, 0,1 mmol) sa umiestnili v baničke s guľatým dnom. Rozpúšťadlo sa odparilo vo vákuu, zvyšok sa rozpustil v dietylétere a spracoval s aktívnym uhlím. Odparenie rozpúšťadla poskytlo 380 mg zlúčeniny uvedenej v názve, vo forme bezfarebného oleja. GC-MS (70eV) M = 347 (3 %)

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino) -8-f luoro-3 , 4-dihydro-2H-l-benzopyrán

Metyl- (R) -3- (N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino) -8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán-5-karboxylát (1,4 g, 4 mmol) sa hydrolyzoval (6 M HCl, refluxovaná počas 2 hodín). Rozpúšťadlo sa odstránilo vo vákuu. Po vysušení na vzduchu cez noc sa surový kyslý aminohydrochlorid spracoval s SOC1₂ (pri laboratórnej teplote počas 5 minút), čím vznikol kyslý chlorid, ktorý sa po odstránení prebytku SOC1₂ vo vákuu rozpustil v CH₂C1₂a pridal do koncentrovaného čpavku, čím vznikol amid. Surový produkt sa izoloval a vyčistil rýchlou chromatografiou, čím sa získalo 220 mg bezfarebného oleja, ktorý kryštalizoval počas státia.

Rekryštalizácia zo zmesi dietyléteru a hexánu poskytla biele kryštály zlúčeniny uvedenej v názve. Výťažok: 110 mg. Teplota topenia: 138 až 140 ’C. [a]²⁰D = -146 ’ (C = 0,2, ch₂ci₂).

Farmakológia

Testovacie metódy (i) Skúška väzby receptora 5-HT_1Ä

Na zistenie afinity receptora 5-HTj_A sa môže použiť nižšie opísaná skúška s použitím mozgu krysy.

Príprava tkaniva: Cerebrálny cortex a hippocampus z krýs Sprague-Dawley sa rozrezali a homogenizovali v 15 ml 50 mM tlmivého roztoku Tris-HCl, pH 7,5, ktorý obsahuje 4,0 mM CaCl₂a 5,7 mM kyseliny askorbovej (pufor A) pomocou prístroja Ultra-Turrax (Janke & Kunkel, Staufen, Nemecko) počas 10 sekúnd). Po centrifugácii počas 12,5 minút pri 17 000 ot/min (398000 x g v centrifúge Beckman s chladeným rotorom JA-17 (Beckman, Palo Alto, Kaliformnia, USA)), sa pelety suspendovali v 5 ml ľadovo chladnej 0,32 M sacharóze a homogenizovali počas 10 s. Homogenizované vzorky sa uschovávali zmrazené pri teplote -70 ’C. pri použití sa zriedili pomocou pufra A na 8 mg tkaniva/ml a homogenizovali počas 10 s. Homogenizované vzorky tkaniva sa inkubovali počas 10 minút pri teplote 37 ’C a potom dodávali s 10 μπι pargylinu a následne reinkubovali počas 10 minút.

Nasledujúca skúška väzby vychádza z článku J. Peroutka, Neurochem. 47, 529 až 540, (1986). Táto skúška v podstate meria schopnosť určitej konkurujúcej molekuly zabraňovať väzbe ³H-8-OH-DPAT k receptorom 5-HT1A. Inkubačná zmes (2 ml) obsahovala ³H-8-OH-DPAT (0,25 až 8 nM), požadovaná koncentrácia skúšobnej (konkurujúcej) zlúčeniny a homogenizovaný preparát 5 mg/ml v pufre Tris-HCl, pH 7,,5, obsahujúceho 4,0 mM CaCl2 a 5,7 mM kyseliny askorbovej. Analyzovalo sa 6 rôznych koncentrácií ³H-8-OH-DPAT. Skúšky väzby začínajú pridaním homogeni44 zovaného tkanivového preparátu a nasleduje homogenizácia počas 10 minút pri teplote 37 ’C. Inkubačná zmes sa filtrovala cez sklenené filtre Whatman GF/B pomocou zariadenia Brandel Celí Harvester (Gaitherburg, Maryland, USA). Filtre sú dvakrát vymyté 5 ml ladovo chladného 50 mM puf ra Tris-HCl, pH 7,5 a merajú sa s 5 ml Ultima Gold™ (Packard) v scintilačnom Nešpecifická väzba sa meria pridaním zmesi. Väzbové údaje sa spracovávajú analýzou na najmenšie štvorce (Munson 109. 220 až 239 (1980) ) .

citaci Beckman LS 3801. 10 μη 5-HT k reakčnej nelineárnou počítačovou a Rodbard, Anál. Biochem.

(ii) Antagonizmus ³H-8-OH-DPAT vyvolaný znížením syntézy 5-HT prostredníctvom blokády presynaptických receptorov 5-HT_1Ä.

Rýchlosť syntézy 5-hydroxytryptamínu (5-HT: serotín) sa meria ako akumulácia 5-hydroxytryptofánu (5-HT) a rýchlosť syntézy dopamínu/noradrenalínu (DA/NA) sa meria ako akumulácia (DOPA) 3,4-dihydroxyfenylalanínu, (5-HTP), počas 30 minút po inhibícii aromatickej dekarboxylázy L-aminokyseliny pomocou m-hydroxybenzylhydrazínu*2HCl (100 mg/kg i.p.); zakúpený u firmy Sigma. Skúšobná látka sa podávala 75 minút, ³H-8-OH-DPAT 60 minút a m-hydroxybenzylhydrazín 2 HCI 30 minút pred zabitím krýs. Časti mozgu, určené na skúmanie sa rýchle rozrezali, zmrazili suchým ladom a uložili pri teplote -70 ’C až do skúmania.

DOPA, 5-HTP a ich metabolity sa extrahovali z mozgového tkaniva pomocou kyseliny chloristej, zodpovedajúcej vnútornému štandardu (Isoprenalin). Po povrchu plávajúca časť z homogenátu mozgu sa vstrekne do kvapalného chromatografického systému obsahujúceho predkolónu a analytickú kolónu. Katecholamíny a indolamíny sa detegujú koulometrickou oxidáciou.

(iii) Antagonizmus akútneho inhibítora spätnej absorpcie 5-HT (SSRI) vyvolaný znížením výmeny 5-HT prostredníctvom selektívnych protilátok 5-HT_1A

Zvieratá

Samce krýs Spraque-Dawley (B & K International AB, Sollentuna, Švédsko), vážiace 180 až 200 g sú umiestnené v klietkach po 5 pri regulovanej teplote (21 ’C) a vlhkosti s 12 hodinovým cyklom svetlo/tma (rozsvieti sa o šiestej ráno). Potrava a voda sú volne k dispozícii. Sú chované v týchto podmienkach najmenej štyri dni pred experimentom. Zlúčeniny sa podávajú perorálne (po) alebo subkutánne (sc).

Výmena 5-HT

Skupinám po 5 krysách sa podáva protilátka 5-HT_1Ä 15 minút pred injekciou inhibítora spätnej absorpcie 5-HT (napr. norzimeldinu = (Z)-3-(4-brómfenyl)-N-metyl-3-(3-pyridyl)alylamínu, dihydrochlorid monohydrátu). m-Hydroxybenzylhydrazín 2 HC1 (NSD 1015) sa podával injekciou o 30 minút neskôr a krysy sa zabili gilotínou 30 minút po injekcii inhibítora spätnej absorpcie (NSD 1015). Mozgy sa rýchle rozrezali a rozrezané oblasti sa ihneď zmrazili suchým ladom. Vzorky sa uložili pri teplote -70 ’C až do skúšky.

Endogénne zlúčeniny, 5-HT a 5-HT_1A v rôznych oblastiach mozgu sa stanovili použitím vysokoúčinnej kvapalinovej chromatografie s (HPLC) s elektromagnetickou detekciou podlá metódy Magnussona (J. Chromatogr. 1980, 221. 237 - 247). Mobilnou fázou je fosfátový pufer 0,1 M (hodnota pH 2,5) : metanol :

acetonitril v pomere oktylsulfátu. Zmrazené kyseliny chloristej, sodného, 1 nM

Plávajúce časti cosil c,o (3 μΜ), spojeného s detektorom : 9 : 2 (obj/obj, obsahujúci 1 nM vzorky sa vážia a homogenizujú v 0,1 M' obsahujúcej 2,5 nM hydrosiričitanu kyseliny etyléndiaminotetraoctovej (EDTA).

sa podávajú priamo injekciou na kolónu Super₁₈ μη/, spojeného s detektorom (ESA Coulochem 5100A) nastaveným na 0,05/0,30 V. Katecholamíny a indolamíny sa detegujú pomocou voltmetrickej oxidácie.

Obrázok 1 ukazuje, že pri blokovaní somatodendritických receptorov selektívnou protilátkou, ako je (R)-3-(N-cyklopen46 tyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-N-metylkarbamoyl-3, 4-dihydro-2H-l-benzopyrán (Príklad 1, NDL 249) sa v závislosti od dávky zvyšuje antidepresívna účinnosť blokátorov spätnej absorpcie 5-HT umožnením, aby serptoniniergenické zakončenia uvoľnili väčšie množstvá 5-HT a tým vytvorili základ pre rýchly nábeh teraputickej akcie.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Kombinácia prvej zložky (a), ktorou je inhibítor spätnej absorpcie 5-HT a druhej zložky (b), ktorou je selektívna protilátka 5-HT_1A všeobecného vzorca v ktorom

R¹ predstavuje n-propyl alebo cyklobutyl,

R² znamená izopropyl, terciárny butyl, cyklobutyl, cyklopentyl alebo cyklohexyl,

R³ predstavuje vodík,

R⁴ znamená vodíka alebo metyl, uvedená protilátka 5-HT_1A je vo forme svojho (R)-enantioméru a uvedené zložky (a) a (b) sú vo forme volnej zásady alebo ich farmaceutický prijatelných solí.
2. Kombinácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že selektívnou protilátkou 5-HT_1A je (R)-3-(N-terc.butyl-N-n-propylamino) -5-karbamoyl-8-f luoro-3, 4-dihydro-2H-l-benzopyrán vo forme volnej zásady alebo jej farmaceutický prijatelných solí.
3. Kombinácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že selektívnou protilátkou 5-HT_1A je (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-f luoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán vo forme voľnej zásady alebo jej farmaceutický prijateľných solí.
4. Kombinácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že selektívnou protilátkou 5-HT_1A je (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán vo forme voľnej zásady alebo jej farmaceutický prijateľných solí.
5. Kombinácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že selektívnou protilátkou 5-HT_1A je (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-izopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán vo forme voľnej zásady alebo jej farmaceutický prijateľných solí.
6. Kombinácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že selektívnou protilátkou 5-HT_1A je (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán vo forme voľnej zásady alebo jej farmaceutický prijateľných solí.
7. Kombinácia podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že selektívnou protilátkou 5-HT_1A je (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyrán vo forme voľnej zásady alebo jej farmaceutický prijateľných solí.
8. Kombinácia podľa niektorého z nárokov 1 až 7, vyznačujúca sa tým, že inhibítorom spätnej absorpcie 5-HT je fluoxetine, paroxitine, citalopram, clomipramine, sertraline alebo fluvoxamine.
9. Použitie kombinácie podľa niektorého z nárokov 1 až 8, na výrobu liečiva na liečenie emočných porúch.
10. Použitie kombinácie podľa nároku 9, na výrobu liečiva na liečenie depresie.
11. Spôsob liečenia emočných porúch podávaním ktorejkoľvek z kombinácií podľa niektorého z nárokov l až 8 pacientovi trpiacemu týmito poruchami.
12. Spôsob liečenia depresie podávaním ktorejkoľvek z kombinácií podľa niektorého z nárokov l až 8, pacientovi trpiacemu touto poruchou.
13. Farmaceutická formulácia na použitie pri liečení emočných porúch, vyznačujúca sa tým, že účinnými zložkami je kombinácia podľa niektorého z nárokov 1 až 8 zvyčajne spolu s rozpúšťadlami, excipientmi a/alebo internými nosičmi.
14. Farmaceutická formulácia podľa nároku 13 na použitie pri liečení depresie.
15. Spôsob prípravy kombinácie podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že inhibítor spätnej absorpcie 5-HT je začlenený v tej istej farmaceutickej formulácii ako selektívna protilátka ^5_HT1A P°dia niektorého z nárokov 1 až 8.
16. Spôsob prípravy kombinácie podlá nároku 1, vyznačujúci sa tým, že inhibítor spätnej absorpcie 5-HT je vo farmaceutickej formulácii a selektívna protilátka 5-HT_1A podlá niektorého z nárokov 1 až 8 je vo farmaceutickej formulácii.
17. Kit, vyznačujúci sa tým, že obsahuje kombináciu prvej zložky (a), ktorou je inhibítor spätnej absorpcie 5-HT, a druhej zložky (b), ktorou je selektívna protilátka 5-HT_1A, podlá nároku 1, prípadne s návodom na použitie.
18. Spôsob na zlepšenie nábehu terapeutickej aktivity vyznačujúci sa tým, že sa spoločne podáva kombinácia prvej zložky (a), ktorou je inhibítor spätnej absorpcie 5-HT, a druhej zložky (b), ktorou je selektívna protilátka 5-HT_1A podlá nároku 1.

η>γ ΊΧ-π - 77-