NO317057B1

NO317057B1 - Kombinasjon av en 5-HT-opptaksinhibitor med en selektiv 5-HT<N>1A</N> antagonist, formulering og kit inneholdende en slik kombinasjon, fremgangsmate for dens fremstilling, og anvendelse derav.

Info

Publication number: NO317057B1
Application number: NO19974921A
Authority: NO
Inventors: Seth Olov Thorberg; John Leslie Evenden
Original assignee: Astrazeneca Ab
Priority date: 1995-04-27
Filing date: 1997-10-24
Publication date: 2004-08-02
Also published as: CZ335697A3; EP0822813A1; EE9700245A; SK282060B6; JPH11504037A; YU25696A; CN1187768A; AU696356B2; US5962514A; EP0822813B1; HUP9801946A2; AR002990A1; US6184218B1; WO1996033710A1; KR100419810B1; NZ306602A; CA2218181A1; RU2183955C2; HK1002853A1; PT822813E

Abstract

Kombinasjon av en første komponent (a) som er en 5-HT-gjennopptaksinhibitor og en annen komponent (b). som er selektiv 5-HT-antagonist av generell formel. (I):. hvor Ri er n-propyl eller cyklobutyl; Rer isopropyl, tertiær butyl, cyklobutyl, cyklopentyl eller cykloheksyl; Rer hydrogen; Rer hydrogen eller metyl; som (R)-enantiomer i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav, fremstillingen derav, farmasøytiske preparater inneholdende nevnte kombinasjon, anvendelse av og metode for emosjonelle forstyrrelser slik som depresjon, angst og OCD med nevnte kombinasjon samt en kit inneholdende kombinasjonen.

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører en kombinasjon av en 5-HT-opptaksinhibitor og en selektiv 5-HT]A antagonist, mer spesielt (R)-5-karbamoyl-8-fluor-3-N,N-disubstituert-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyraner i form av fri base og farmasøytisk akseptable salter derav, fremgangmåte for fremstilling av kombinasjonen, farmasøytisk formulering og kit inneholdende nevnte kombinasjon samt anvendelse av kombinasjonen for behandling av affektive forstyrrelser slik som depresjon, angst, obsessiv kompulsiv forstyrrelse (OCD), osv.

I dag anses det generelt at det tar 2-4 uker for antidepresjonsmidler, inkludert selektive 5-HT-gjenopptaksinhibitorer (SSRTer) å nå full klinisk effekt. I motsetning til dette oppstår bivirkningene umiddelbart og reduseres endog i løpet av denne perioden. Langsom virkningsbegynnelse for antidepresjonsmidler leder således til en sårbar periode for pasienter i hvilken de opplever bivirkninger, men ikke legemidlers terapeutiske effekter. Det er ofte en tung oppgave for vedkommende lege å overtale pasienten å fortsette med behandlingen under denne perioden. Videre, siden virknings-begynnelsen er gradvis kan suicidale pasienter gjenvinne initiativ uten å oppleve full reversering av symptomer hvilket leder til et risikovindu for selvmord og et hyppig behov for sykehusinnleggelse. Et antidepresivt middel med hurtig virkningsbegynnelse ville ikke bare være nyttig på grunn av den hurtigere symptomreduksjonen, men ville også være mer akseptabelt for pasienter og leger og redusere behovet for og varigheten av sykehusinnleggelse. Den samme lange perioden for oppnåelse av full klinisk effekt har blitt vist i behandlingen av andre affektive forstyrrelser slik som angst og OCD.

Tidligere teknikk

I Arch. Gen. Phsychiatry, vol 51, mars 1994 er det beskrevet at en beta-blokker slik som pindolol som også har høy affinitet til 5-HT-reseptorer og antagoniserer 5-HTJA-formidlede responser, induserer en hurtig forbedring av deprimerte pasienter behandlet med serotonin-gjenopptaksinhibitorer.

I Artigas F. et al: "Pindolol Induces a Rapid Improvment of Depressed Patients Treated With Serotonin Reuptake Inhibitors", Arch. Gen Psyciatry 51:248-51 (1994), beskrives bruken av den gunstige virkningen som oppnås ved å kombinere serotoningjenopptaks-inhibitorer (SSRI) med en p-blokker med 5HTiA inhiberende virkning (pindolol). Artikkelen beskriver ikke bruken av de spesifikke antagonistene i foreliggende oppfinnelse og heller ikke kombinasjonspreparater av disse. Artikkelen foreslår det farmasøytiske prinsippet som omtalt heri, men mangler "rene" 5-HTiA-antagonister og må derfor benytte en p-blokker med antatt 5-HTiA-inhiberende virkning. Artikkelen spekulerer likevel i at det faktisk kan være de p-adrenerge effektene som er opphavet til effekten som er funnet.

Oppfinnelsen

Antagonisme av den akutte 5-HT-gjenopptaksinhibitorinduserte nedgang i 5-HT-»turnover» ved hjelp av selektive 5-HT1A antagonister

Selektive 5-HT-gjenopptaksinhibitorer (SSRFer) minsker impulspropagasjonen i 5-HT neuroner via en negativ feedback-reaksjon som sannsynligvis formidles av kollaterale 5-HT aksoner som frigjør 5-HT i «raphé»-kjerner. Ved inhibering av de somatodendritiske 5-HTiA autoreseptorene motvirker de selektive antagonistene nedgangen i 5-HT-turnover forårsaket av 5-HT-gjenopptaksinhibitorer. Dette tyder på at en selektiv blokade av somatodendritisk autoreseptor dvs 5-HT]A antagonist kan ha et klinisk potensiale til å forbedre effektiviteten til 5-HT-gjenopptaksinhibitorer (SSRTer) og tilby ett nytt konsept for hurtig begynnelse av affektive virkninger, f.eks antidepressive virkninger.

Kombinasjonen

Ifølge foreliggende oppfinnelse er det således tilveiebragt en kombinasjon som er kjennetegnet ved at den innbefatter en første komponent (a) som er en 5-HT-gjenopptaksinhibitor og en annen komponent (b) som er en selektiv 5-HTiA antagonist av formelen

hvor

Ri er n-propyl eller cyklobutyl;

R2 er isopropyl, tertiær butyl, cyklobutyl, cyklopentyl eller cykloheksyl;

R3 er hydrogen;

R4 er hydrogen eller metyl;

hvor 5-HTia antagonisten er i form av dens (R)-enantiomer, og hvor komponentene (a) og (b) er i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

Denne kombinasjonen vil gi hurtigere virkningsbegynnelse og følgelig en mer effektiv behandling av pasientene.

Foretrukne og fordelaktige trekk ved foreliggende kombinasjon fremgår fra de medfølgende krav 2-19.

Følgende 5-HTiA antagonister kan innbefattes som komponent (b) i foreliggende kombinasjon: (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cykloheks^ benzopyran,

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran.

(R)-5-karbamoyl-8-fluor-3-N,N-(hsubstituert-amm^ som er angitt heri er beskrevet i WO 95/11891 (PCT/SE94/01010).

(R)-5-karbamoyl-8-fluor-3-N}N-disubstituert-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranene er i form av fri base eller farmasøytisk akseptabelt salt derav. Både organiske og uorganiske syrer kan anvendes for dannelse av ikke-toksiske farmasøytisk akseptable syreaddisjonssalter av forbindelsene ifølge oppfinnelsen. Illustrerende syrer er svovel-syre, salpetersyre, fosforsyre, oksalsyre, saltsyre, maursyre, hydrobromsyre, sitronsyre, eddiksyre, melkesyre, vinsyre, dibenzoylvinsyre, diacetylvinsyre, pamoinsyre, etandisulfonsyre, sulfaminsyre, ravsyre, propionsyre, glukolsyre, eplesyre, glukonsyre, pyrodruesyre, fenyleddiksyre, 4-aminobenzosyre, antranilsyre, salicylsyre, 4-aminosalicylsyre, 4-hydroksybenzosyre, 3,4-dihydroksybenzosyre, 3,5-dihydroksybenzosyre, 3-hydroksy-2-naftoinsyre, nikotinsyre, metansulfonsyre, etansulfonsyre, hydroksyetansulfonsyre, benzensulfonsyre, p-toluensulfonsyre, sulfanilsyre, naftalen-sulfonsyre, ascorbinsyre, cykloheksylsulfaminsyre, fumarsyre, maleinsyre og benzosyre. Disse saltene fremstilles lett ved metoder som er kjent innen teknikken.

Disse (R)-5-karbamoyl-8-fluor-3-N,N-disubstituert-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyraner er i besittelse av en høy affinitet til den spesifikke undergruppen av 5-HTia reseptor i CNS og virker som antagonister på denne 5-HT|A reseptoren, og viser også tilstrekkelig biotilgjengelighet etter oral administrasjon.

Egnede kjente 5-HT-gjenopptaksinhibitorer (SSRTer) som kan benyttes er norzimeldin, fluoksetin, paroksetin, citalopram, clomipramin, sertralin, fluvoksamin, alaproclat, men komponent (a) i kombinasjonen ifølge oppfinnelsen er ikke begrenset til kunne disse SSRTene.

Foreliggende kombinasjon kan fremstilles i én farmasøytisk formulering omfattende både den aktive første komponenten (a) og den aktive andre komponenten (b) eller i to forskjellige farmasøytiske formuleringer, én for den aktive første komponenten (a) og én for den aktive andre komponenten (b). Den farmasøytiske formuleringen kan være i form av tabletter eller kapsler, pulvere, blandinger, oppløsninger eller andre egnede farmasøytiske formuleringsformer.

Foreliggende kombinasjon kan ifølge oppfinnelsen fremstilles ved at en 5-HT-gjenopptaksinhibitor inkorporeres i det samme preparatet som en selektiv 5-HTiA antagonist som definert ovenfor og i de medfølgende krav 1-19, ved f.eks blanding på konvensjonell måte.

For forbedring av terapeutisk virkningsbegynnelse kan det foretas koadministrasjon av en kombinasjon av nevnte første komponent (a) og nevnte andre komponent (b).

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer også anvendelse av kombinasjonen ifølge hvilket som helst av de medfølgende krav 1-19 for fremstilling av et medikament for behandling av affektive forstyrrelser. En aktuell forstyrrelse i denne sammenheng er depresjon.

En ytterligere utførelse av foreliggende oppfinnelse er en kit inneholdende kombinasjonen av en første komponent (a) som er en 5-HT-gjenopptaksinhibitor og en annen komponent (b) som er selektiv 5-HTu antagonist, eventuelt med instruksjoner for bruk.

Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen

Fremgangsmåter for fremstilling av (R)-5-karbamoyl-8-fluor-3-N,N-disubstituert-amino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyraner

Fremstillingen av (R)-3-amino-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (forbindelse II) er beskrevet i WO 93/07135. Den foretrukne fremgangsmåten for innføring av fluor er ved bromering av den aromatiske ringen, på selektiv måte, i 8-stillingen. Bromering kan foretas ved bruk av brom med eller uten en katalysator. Andre bromeringsmidler kan anvendes, f.eks HOBr og N-bromamider (spesielt N-bromsuksinimid). Egnede opp-løsningsmidler for bromering er eddiksyre, dioksan og klorerte oppløsningsmidler f.eks metylenklorid.

Før fluorering må det primære aminet være fullstendig alkylert med Ri og R2 som angitt ovenfor eller beskyttet med en egnet gruppe som kan fjernes senere, f.eks dibenzyl. Innføring av alkylgruppene på nitrogen kan gjøres ved reduktiv aminering fra det passende aldehyd eller keton ved bruk av et egnet reduksjonsmiddel f.eks NaCNBH3 eller katalytisk med H2 og en egnet katalysator inneholdende palladium, platina eller nikkel i et egnet oppløsningsmiddel f.eks tetrahydrofuran (THF), dioksan, metanol eller etanol. Innføring av alkylgruppene kan også foretas ved alkylering med det passende alkylhalogenid f.eks Cl, Br eller I, eller ved hjelp av en aktivert alkohol f.eks alkyl-mesylat eller -tosylat i et egnet oppløsningsmiddel f.eks dimetylformamid (DMF), aceton eller acetonitril med en egnet base f.eks K2CO3.

Fluorering kan deretter utføres ved litiering av bromforbindelsen med en alkyllitium-reagens f.eks n-butyllitium og fulgt av omsetning med et egnet fluoreringsmiddel fortrinnsvis et N-fluor-N-alkyl-/arylsulfonamid f.eks N-fluorbenzensulfonimid. Opp-løsningsmidlet for denne reaksjonen kan være vannfrie alkyletere f.eks tetrahydrofuran (THF) eller dietyleter, eller ikke-protiske oppløsningsmidler f.eks heksan eller benzen. Temperaturområdet kan variere fra -100°C til romtemperatur, men fortrinnsvis fra

-78°C til -20°C.

Forbindelsene kan fremstilles fra forbindelsen (R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (som beskrevet ovenfor) fulgt av kjente metoder slik som reduktiv aminering, N-alkylering, demetylering og omdannelse til avspaltningsgruppen Y for oppnåelse av forbindelse IV.

Forbindelsene av formel I kan fremstilles i overensstemmelse med følgende fremgangsmåter: i, omdannelse direkte av forbindelsene av formel IV

hvor Y er en avspaltningsgruppe slik som trifluormetansulfonat (OSO2CF3), halogenid f.eks Cl, Br eller I, ved en katalytisk cyklus under anvendelse av et overgangsmetall (M) med null valens slik som Pd eller Ni, som kan genereres in situ og gjennomgår en oksydativ addisjon til aryl-Y-bindingen. Behandling med karbonmonoksyd fulgt av aminering med det riktige aminet (amoniakk eller metylamin) gir forbindelsene av formel I hvoretter de, om ønsket, omdannes til et salt.

ii, Forbindelsene av formel IV omdannes alternativt til forbindelsene av formel V

hvor Z er Cl, Br, OH eller Orp, hvor Rp er C|-C6 alkyl, ved en katalytisk cyklus under anvendelse av et overgangsmetall av null valens, med evne til å gjennomgå oksydativ addisjon til aryl-Y-bindinger f.eks aryl-OS02CF3-bindingene. Aryl-CO-metall-Y-komplekset dannes ved behandling med karbonmonoksyd (CO).

Ytterligere reagenser er en alkohol slik som metanol, etanol, et tertiært amin slik som et trialkylamin f.eks trietylamin i et inert organisk oppløsningsmiddel fortrinnsvis et polart aprotisk oppløsningsmiddel slik som dimetylformamid (DMF), dimetylsulfoksyd (DMSO), dioksan, tetrahydrofuran (THF), aceton, acetonitril osv. Reaksjonen utføres normalt ved en temperatur mellom +40 og +120°C og et trykk mellom 100 og 500 kPa (ii). Dette etterfølges eventuelt av hydrolyse og behandling med et tionylhalogenid f.eks tionylklorid, for oppnåelse av det tilsvarende syrehalogenidderivatet.

Forbindelsene av formel V amineres (iib) med det passende aminet (amoniakk eller metylamin) i et oppløsningsmiddel f.eks toluen, metylenklorid, benzen, vann ved tilbakeløpstemperatur eller mellom 0 og 100°C for oppnåelse av forbindelsene av formel

I.

Farmasøytiske formuleringer

Foreliggende oppfinnelse tilveiebringer en farmasøytisk formulering som er kjennetegnet ved at de aktive bestanddelene er kombinasjonen som definert i hvilket som helst av de medfølgende krav 1-19 eventuelt i forbindelse med fortynningsmidler, eksipienser og/eller inerte bærere.

Forbindelsene i foreliggende kombinasjonen vil normalt administreres oralt, rektalt eller ved injeksjon, i form av farmasøytiske formuleringer omfattende den aktive bestanddel enten som en fri base eller et farmasøytisk akseptabelt ikke-toksisk syreaddisjonssalt, f.eks hydrokloridet, hydrobromidet, laktatet, acetatet, fosfatet, sulfatet, sulfamatet, skratet, tartratet, oksalatet og lignende i en farmasøytisk akseptabel doseringsform. Doseringsformen kan være en fast, halvfast eller flytende formulering. Vanligvis vil de aktive substansene utgjøre mellom 0,1 og 99 vekt-% av formuleringen, mer spesielt mellom 0,5 og 20 vekt-% for formuleringer beregnet for injeksjon og mellom 0,2 og 50 vekt-% for formuleringer egnet for oral administrasjon.

For fremstilling av farmasøytiske formuleringer av kombinasjonen ifølge oppfinnelsen i form av doseringsenheter for oral anvendelse, kan de utvalgte forbindelsene blandes med en fast eksipiens, f.eks laktose, sakkarose, sorbitol, mannitol, stivelser slik som potetstivelse, maisstivelse eller amylopektin, cellulosederivater, et bindemiddel slik som gelatin eller polyvinylpyrrolidon, desintegreirngsmidler f.eks natriumstivelseglykolat, tverrbundet PVP, tverr-karamellosenatrium og et smøremiddel slik som magnesiumstearat, kalsiumstearat, polyetylenglykol, vokser, paraffhi og lignende, og deretter presses til tabletter. Dersom belagte tabletter er ønsket kan kjernene, fremstilt som beskrevet ovenfor, belegges med en konsentrert sukkeroppløsning som kan inneholde f.eks gummi arabicum, gelatin, talk, titandioksyd og lignende. Tablettene kan alternativt belegges med en polymer som er kjent for fagfolk på området, oppløst i et lett flyktig organisk oppløsningsmiddel eller blanding av organiske oppløsningsmidler. Fargestoffer kan tilsettes til disse beleggene for lett å kunne skjelne mellom tabletter som inneholder forskjellige aktive substanser eller forskjellige mengder av de aktive forbindelsene.

For formulering av myke gelatinkapsler kan de aktive substansene sammenblandes med f.eks en vegetabilsk olje eller polyetylenglykol. Harde gelatinkapsler kan inneholde granuler av de aktive substansene ved bruk av hvilke som helst av de ovennevnte eksipiensene for tabletter f.eks laktose, sakkarose, sorbitol, mannitol, stivelser (f.eks potetstivelse, maisstivelse eller amylopektin), cellulosederivater eller gelatin. Væsker eller halvfaste stoffer av legemidlet kan også fylles i harde gelatinkapsler.

Doseringsenheter for rektal anvendelse kan være oppløsninger eller suspensjoner eller kan fremstilles i form av suppositorier omfattende de aktive substansene i en blanding med en nøytral fettbase, eller rektale gelatinkapsler omfattende de aktive substansene i blanding med vegetabilsk olje eller paraffinolje. Flytende formuleringer for oral anvendelse kan være i form av siruper eller suspensjoner, f.eks oppløsninger inneholdende fra ca 0,2 til ca 20 vekt-% av de aktive substansene som heri er beskrevet, idet resten utgjøres av sukker og blanding av etanol, vann, glyserol og propylenglykol. Slike flytende formuleringer kan eventuelt inneholde fargestoffer, aromastoffer, sakkarin og karboksymetylcellulose som et fortykningsmiddel eller andre eksipienser som er kjent for fagfolk innen teknikken.

Oppløsninger for parenterale anvendelser ved injeksjon kan fremstilles i en vandig oppløsning av et vannoppløselig farmasøytisk akseptabelt salt av de aktive substansene, fortrinnsvis i en konsentrasjon fra ca 0,5 til ca 10 vekt-%. Disse oppløsningene kan også inneholde stabiliseringsmidler og/eller buffermidler og kan hensiktsmessig tilveie-bringes i forskjellige doseringsenhetampuller.

Egnede daglige doser av de aktive forbindelsene i kombinasjonen ifølge oppfinnelsen ved terapeutisk behandling av mennesker er ca 0,01-100 mg/kg kroppsvekt ved peroral administrasjon og 0,001-100 mg/kg kroppsvekt ved parenteral administrasjon. De daglige dosene av den aktive 5-HTiA antagonisten kan meget vel være forskjellig fra de daglige dosene av 5-HT-gjenopptaksinhibitoren, men dosene kan også være de samme for begge de aktive forbindelsene.

Fremstilling av utgangs materialer for 5-HTiA-antagonistene

FREMSTILLING 1

(R)-3-amino-8-lfuor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-3-amino-8-brom-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-amino-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (25 g, 0,14 mol; fremstilt som

beskrevet i WO 93/07135) og vannfritt natriumacetat (34 g, 0,42 mol) ble oppløst i eddiksyre (500 ml). Brom (23,4 g, 0,15 mol), oppløst i eddiksyre (500 ml), ble tilsatt dråpevis ved romtemperatur. Tilsetningen av brom fortsatte i ca 7 dager. Oppløsnings-midlet ble fjernet i vakuum og resten ble oppløst i natriumhydroksyd (25 %)/dietyleter (eksoterm reaksjon, blandingen ble avkjølt i et isbad). Lagene ble separert og den alkaliske vannfasen ble ekstrahert tre ganger med dietyleter. De kombinerte eterlagene ble tørket (Na2S04) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga 35,5 g av en oljeaktig rest. Oljen ble oppløst i dietyleter og oppløsningen ble avkjølt med et isbad (0°C). Hel, oppløst i dietyleter, ble tilsatt dråpevis inntil suspensjonen ble sur

(kontrollert med pH-papir). Krystallene ble filtrert og deretter omkrystallisert fra metanol hvilket ga tittelforbindelsen i et 70 % utbytte (28,5 g). Smp 281-282°C. Hcl-saltet ble skilt mellom dietyleter og 2 M NH3 (vandig) og den frie basen ble oppnådd ved ekstraksjoner av den alkaliske vannfasen med dietyleter. [a] d = +40°C (C = 0,1, Hel salt i MeOH). GC-MS (70 eV) M+l = 259 (53 %).

b) (R)-8-brom-3-(N,N-diben2ylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-amino-8-brom-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (11,5 g, 44 mmol) ble oppløst i 400 ml vannfri acetonitril og til reaksjonsblandingen ble benzylbromid (13 ml, 110 mmol), vannfritt kaliumkarbonat (malt) (16 g, 116 mmol) samt en katalytisk mengde Kl tilsatt og deretter ble oppvarming foretatt til 85°C i 48 timer.

Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert to ganger med eter. De kombinerte eterporsj onene ble behandlet med saltoppløsning, tørket (MgS04), filtrert og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum hvilket ga den urene resten. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: CH2CI2) ga 15 g (78 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje. [a]<21>D = -15,5° (C = 0,1, CHC13). GC-MS (70 eV) M = 437 (15 %).

c) (R)-3-(N,N-dibenzylamino)-8-nuor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-brom-3-(N,N-dibenzylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (4,35 g, 9,9 mmol) ble oppløst i 45 ml vannfri THF og avkjølt til -78°C. Til dette ble 1,6 M N-BuLi oppløsning (6,8 ml, 10,9 mmol) tilsatt dråpevis og ble omrørt ved -78°C i 1 time. N-fluorbenzensulfonimid (3,8 g, 11,9 mmol), oppløst i 30 ml vanfri THF, ble tilsatt dråpevis i løpet av 45 min og ble omrørt ved -78°C i 1 time. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 3 ml mettet NH4C1 fulgt av 9 ml av en oppløsning omfattende 2 g av NH2OHxHCl og 8 g Na2C03 i 100 ml H2O og reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur. En 2 M NH3-oppløsning ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble ekstrahert to ganger med eter, behandlet med saltoppløsning, tørket (Na2SC>4), filtrert, og inndampet i vakuum hvilket ga råproduktet. Rensing av 8-fluorforbindelsen (ønsket) fra 8-hydrogenforbindelsen (15 %) ble utført ved en grov kromatografi (elueringsmiddel: 25 % CH2Cl2/heksan) hvilket ga 1,78 g. Råproduktet ble kromatografert på nytt på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 3 % aceton/heksan) hvilket ga 1,50 g (40 %

utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje. [a]<21>D = -112,1° (C = 0,1, CHC13). GC-MS (7+ eV) M = 377 (37 %).

d) (R)-3-amino-8-lfuor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N,N-dibenzylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (13,0 g,

34,4 mmol) ble oppløst i 265 ml metanol og 115 ml THF. Til dette ble 10 % Pd/C (4 g) og ammoniumformeat (51,5 g, 0,817 mol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 50°C i 2,5 timer. Reaksjonsblandingen ble filtrert og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, resten ble opptatt i en 2 M oppløsning av NaOH og deretter ekstrahert to ganger med eter. De kombinerte eterporsjonene ble behandlet med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga 6,2 g (91 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje. [cc]2ID = -15,3° (C = 1, CHCI3). GC-MS (70eV)M = 197(51 %).

FREMSTILLING 2

(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-trifluormetyIsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-8-brom-3-(N-isopropylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N-isopropylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (4,02 g, 18,2

mmol; fremstilt som beskrevet i WO 93/07135) og vannfritt natriumacetat ble oppløst i eddiksyre (80 ml). Til den omrørte blanding ble brom (0,93 ml, 18,2 mol), oppløst i eddiksyre (40 ml), tilsatt dråpevis i løpet av 1,5 timer.

Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, opptatt i 2 M NaOH oppløsning og ekstrahert to ganger med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble behandlet med saltopp-løsning, tørket (Na2S04), filtrert, og oppløsningsmidlet ble fjeret i vakuum hvilket ga råproduktet. Hydrokloridsaltet ble fremstilt ved oppløsning av den rene basen i dietyleter og tilsetning av et overskudd av en eterisk HCl-oppIøsning hvi lekt ga et hvitt fast stoff. Saltet ble omkrystallisert to ganger fra etanol/dietyleter hvilket ga 3,8 g (62 % utbytte). Smp 257-8°C. [a]<21>D = -97,7° (C = 0,1, CHC13).

Den frie basen ble fremstilt fra hydrokloirdsaltet til oppnåelse av en olje. GC-MS (70 eV)M = 301 (100%).

b) (R)-8-brom-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-brom-3-(N-isopropylamino)-5-metoksy-3,5-dihydro-2H-l-benzopyran (3,8 g, 11,3 mmol) ble oppløst i vannfri metanol (80 ml) og til dette ble det tilsatt propanal (8,1 ml, 0,113 mol). Reaksjonsblandingen ble avkjølt (isbad), deretter ble natriumcyanborhydrid (1,3 g, 20,3 mmol) tilsatt, pH-verdien ble justert til 5, og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over.

Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, restene ble opptatt i 1 M oppløsning av Na2C03 og deretter ekstrahert to ganger med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble behandlet med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 7 % etylacetat/heksan) ga 3,75 g (97 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[cc]<21>d = - 82,5° (C = 0,1, CHC13). GC-MS (70 eV) M = 343 (29 %).

Hydrokloridsaltet ble fremstilt ved oppløsning av basen i dietyleter og drypping av et overskudd av en enterisk HCl-oppløsning. Saltet ble omkrystallisert fra etanol/dietyleter hvilket ga et hvitt fast stoff, smp 177-9°C.

c) (R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-brom-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (2,3 g, 6,72 mmol) ble oppløst i vannfri THF (25 ml) og avkjølt til -78°C. Til dette ble det dråpevis tilsatt en 1,6 M n-BuLi oppløsning (4,83 ml, 7,73 mmol) og omrøring ble foretatt ved -78°C i 1 time. N-fluorbenzensulfonimid (2,55 g, 8,06 mmol), oppløst i vannfri THF (15 ml), ble tilsatt dråpevis over 20-30 min og omrøring ble foretatt ved

-78°C i 4 timer. Reaksjonen ble stoppet ved tilsetning av 1 ml av en mettet vandig NH4Cl-oppløsning fulgt av 3 ml av en oppløsning omfattende 2 g NH2OHXHCI og 8 g Na2C03 i 100 ml H2O og reaksjonsblandingen fikk oppvarmes til romtemperatur. En 2 M NH3-oppløsning ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble ekstrahert, to ganger, med dietyleter, behandlet med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert, og inndampet i vakuum og dette ga råproduktet. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: kloroform) ga 1,0 g (53 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje. [a]<2l>D =-89,2°

(C = 0,1, CHC13) GC-MS (70 eV) M = 281 (32 %).

Hydrokloridsaltet ble fremstilt ved oppløsning av den rene basen i dietyleter og drypping av et overskudd av en eterisk HCl-oppløsning hvilket et hvitt fast stoff (sintrer ved 80°C).

d) (R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-propylainino)-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-hydroklorid (1,03 g, 3,24 mmol) ble oppløst i vannfri CH2C12 (30 ml) og avkjølt til -40°C. Til denne oppløsningen ble Bbr3 (0,77 ml, 8,1 mmol) oppløst i vannfri CH2CI2 (5 ml), tilsatt dråpevis. Kjølebadet ble fjernet og etter 3 timer ved romtemperatur var reaksjonen fullstendig.

Reaksjonsblandingen ble helt ut på en is/2 M NH3-oppløsning og blandingen ble ekstrahert, to ganger, med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble behandlet med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum hvilket ga den urene resten.

Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 20 % etylacetat/heksan) ga 0,84 g (97 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje. [a]21D = -94,2° (C = 0,1, CHC13). GC-MS (70 eV) M = 267 (26 %).

Hydrokloirdsaltet ble fremstilt ved oppløsning av den rene basen i dietyleter og drypping av et overskudd av en eterisk HCl-oppløsning. Saltet ble omkrystallisert fra CHCydietyleter/etylacetat hvilket ga et hvitt fast stoff. Smp: 220-2°C.

e) (R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,71 g, 2,66 mmol) og collidin (0,49 ml, 3,72 mmol) ble oppløst i vannfri CH2C12 (25 ml) og avkjølt til -40°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (0,54 ml, 3,2 mmol) ble tilsatt dråpevis og det hele fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur, og etter å ha nådd 0°C var reaksjonen ferdig. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2CI2 og vasket med en mettet vandig NaHCCVoppløsning, tørket (MgSCU), filtrert, og inndampet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: CH2CI2) ga

0,82 g (77 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje. [a]<2I>D = -85,5° (C = 0,1, CHC13). GC-MS (70 eV) M = 399 (6 %).

EKSEMPEL 1

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-N-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran

a) (R)-3-N-cyklopentylamino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-amino-8-lfuor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,5 g, 7,6 mmol),

eddiksyre (0,45 g, 7,6 mmol) og cyklopentanon (2,5 g, 3 mmol) ble oppløst i 30 ml

metanol. Natriumcyanoborhydrid (0,8 g, 13 mmol) ble tilsatt under omrøring i porsjoner i løpet av noen minutter. Omrøring ble fortsatt i 3 timer. En GC-prøve viste 100 % av et nytt produkt. Oppløsningsmidlet ble inndampet og vann, 2 M NH3 og EtOAc ble tilsatt. Det organiske laget ble separert og vasket med vann. Laget ble tørket med Na2S04 og inndampet hvilket ga 1,3 g (64 % utbytte) av en fargeløs olje. GC/MS med molkeyl-toppen ved 265 bekreftet tittelforbindelsen.

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

(R)-3-N-cyklopentylamino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,3 g, 5 mmol), eddiksyre (0,3 g, 5 mmol) og propionaldehyd (1,5 g, 25 mmol) ble oppløst i 30 ml metanol. Natriumcyanoborhydrid (0,8 g, 13 mmol) ble tilsatt under omrøring i porsjoner i løpet av noen minutter og omrøring ble fortsatt. Etter 3 timer viste en GC-prøve 100 % av et nytt produkt. Oppløsningsmidlet ble inndampet og vann, 2 molar NH3 og EtOAc ble tilsatt. Det organiske laget ble separert og vasket nøytralt med vann. Laget ble tørket med Na2S04 og inndampet og dette ga 1 g (65 % utbytte) av en fargeløs olje. GC/MS med molekyltopp 307 bekreftet tittelforbindelsen.

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H- 1-benzopyran

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylammo)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihyd^-2H-l-benzopyran (1 g, 5 mmol) ble oppløst i 25 ml CH2CI2. Et overskudd av eterisk HC1 ble tilsatt for å danne HCl-saltet. En oppløsning av BBr3 (4 g, 15 mmol) i 10 ml CH2C12 ble preparert og tilsatt dråpevis i løpet av 10 minutter under omrøring (is-bad). Reaksjonsblandingen fikk nå romtemperatur under fortsatt omrøring i 6 timer og blandingen ble helt ut i isvann og gjort alkalisk ved tilsetning av ammoniakk. Det organiske laget ble separert, tørket med Na2SC>4 og inndampet og dette ga en mørk brun olje. Kromatografi (Si02, diisopropyleter og heksan 1 + l) ga en 1,1 g av en fargeløs olje. HCl-saltet ble fremstilt fra basen og eterisk HC1 og omkrystallisert fra acetonitril hvilket ga 0,85 g (52 % utbytte), smp 220-221°C.

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy- 3,4-dihydro-2H-l -benzopyran

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-3,4-benzopyran (0,7 g, 3 mmol) ble oppløst i 25 ml CH2CI2 og trietylamin (0,3 g, 3 mmol) ble tilsatt. Oppløsningen av trifluormetansulfonsyreanhydrid (1 g, 4 mmol) i 5 ml CH2CI2 ble tilsatt dråpevis i løpet av 10 min (-20°C). Omrøring ble fortsatt i 1 time.

Reaksjonsblandingen ble helt ut i isvann og pH-verdien ble justert til 8 ved tilsetning av ammoniakk og ekstrahert med eter. Det organiske laget ble separert, tørket med Na2S04 og inndampet og dette ga en brun olje. Kromatografi (Si02, CO2CI2 + heksan, 1 + 3) ga 0,5 g (44 % utbytte) av en fargeløs olje. GC/MS med molekyltopp 425 bekreftet tittelforbindelsen.

e) (R)-3-(N-cyklpenry]-N-n-propylamino)-8-f1uor-5-N-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,5 g, 1 mmol) ble oppløst i 15 ml 1,4-dioksan. Palladium II acetat (10 mg), l,3-bis(difenylfosfino)propan (20 mg) og metylamin (0,15 g, 5 mmol) ble tilsatt og blandingen ble omrørt i karbonmonoksydatmosfære over natten ved 70°C. Inndampning og kromatografi (Si02, dietyleter + heksan 1 + 3) ga sluttforbindelsen som en fargeløs olje. HCl-saltet ble fremstilt hvilket ga 0,24 g (65 % utbytte) av hvite krystaller, smp 108°C.

EKSEMPEL 2

(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) Metyl-(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-trifluormetansulfonyloksy 2H-1-benzopyran (2,4 g, 6,0 mmol), trietylamin (1,3 g, 12,9 mmol), l,3-bis(difenyl-fosfino)propan (95 mg, katalytisk mengde), palladium(II)acetat (48 mg, katalytisk mengde) og DMF/MeOH (30 ml, 3:1) ble blandet i en 50 ml trehalset, rundbunnet kolbe. Kolben ble evakuert fulgt av inntak av CO (gjentatt to ganger). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved 70°C i 7,5 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble oppløst i dietyleter/mettet NaHC03. Lagene ble separert og vannfasen ble ekstrahert en gang med eter. De kombinerte eterlagene ble tørket (MgSO^ og opp-løsningsmidlet ble fjernet i vakuum hvilket ga et råprodukt som ble renset ved flashkromatografi (Si02, heksan/EtOAc, 9:1) til oppnåelse av 1,3 g av tittelforbindelsen (71 % utbytte).

b) (R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

Metyl-(R)-8-fluor-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (1,3 g, 4,2 mmol) og KOH (0,52 g, 8,4 mmol) ble blandet i metanol (6 ml) og tilbakeløpskokt i 2,5 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i vann og gjort sur ved tilsetning av 2 M HC1. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i SOCI2 (30 ml) og tilbakeløpskokt i 2,5 timer. Opp-løsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Resten ble oppløst i CH2CI2 og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum på nytt (gjentatt tre ganger) for å fjerne overskuddet av SOCl2. Resten ble deretter oppløst i dietyleter (50 ml). Oppløsningen ble avkjølt til -30°C før NH3 (g) ble boblet gjennom den. Vann ble tilsatt, lagene ble separert og vannfasen ble ekstrahert med eter. De kombinerte eterlagene ble tørket (K2CO3) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga et råprodukt som ble renset ved flashkromatografi (Si02, EtOAc/heksan, 1:1) til oppnåelse av 1,0 g av tittelforbindelsen (utbytte 80 %). Omkrystallisering fra EtOAc/heksan ga krystaller med smp: 139-140°C.

EKSEMPEL 3

(R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-8-fluor-5-metoksy-3-[N-(4-metoksybenzylideii)-amino]-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

(R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (7,85 g, 39,8 mmol), 4-metoksybenzaldehyd (5,42 g, 39,8 mmol), vannfritt kaliumkarbonat (10,1 g) og absolutt EtOH (200 ml) ble omrørt natten over ved tilbakeløpstemperatur. Oppløsningsmidlet ble inndampet i vakuum og eter (500 ml) ble tilsatt. Etter omrøring i 15 min ble saltet frafiltrert og oppløsningen ble konsentrert i vakuum hvilket ga et gråhvitt fast stoff (12,4

g). Omkrystallisering fra i-Pr20-heksan ga 10,8 g (86 % utbytte) av tittelforbindelsen som fargeløse nåler. Smp: 96,8-97,3°C. [oc]<21>D = +20,1° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70

eV)M = 315(58%).

b) (R)-8-fluor-3-hydroksylamino-5-etoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

3-klorperoksybenzosyre (85 %; 7,6 g, 37,6 mmol) ble tilsatt i porsjoner til en omrørt og

avkjølt oppløsning (+4°C) av (R)-8-fluor-5-metoksy-3-[N-(4-metoksybenzyliden)-amino]-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (10,8 g, 34 mmol) og metylenklorid (65 ml). Blandingen ble omrørt natten over ved romtemperatur. Utfelt 3-klorbenzosyre ble frafiltrert og det klare gule filtratet ble konsentrert i vakuum. Den oljeaktige resten ble opptatt i en oppløsning av hydroksylarmnhydroklorid (2,83 g, 40,8 mmol) og vannfri metanol (60 ml) og den resulterende oppløsning ble omrørt ved romtemperatur i 2 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet hvilket ga en tykk orangefarget olje. Vann ble tilsatt til oljen, pH-verdien ble justert til 8-9 med mettet vandig Na2C03 og blandingen ble vasket med eter (3 x 150 ml). De organiske fasene ble kombinert, vasket med salt-oppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Råproduktet ble flashkromatografert på silisiumdioksyd med EtOAc (15 til 50 %) i heksan som elueringsmiddel. Det resulterende urene produktet ble flashkromatografert nok en gang på silisiumdioksyd med EtOH-ChCb (1:99) som elueringsmiddel og dette ga 6,45 g (89 % utbytte) av tittelforbindelsen som et fargeløst krystallinsk fast stoff. Smp: 111-113°C.

[a]<21>D = + 66,4° (C = 1,3; CHCI3). GC-MS (70 eV) M = 213 (56 %).

c) (R)-3-tert-butylamino-8-lfuor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-fluor-3-hyd^ksylamino-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (6,30 g, 29,6

mmol), vannfritt natriumsulfat (20 g) og aceton (500 ml) ble tilbakeløpskokt under nitrogen i 4 dager inntil TLC viste en fullstendig reaksjon. Saltet ble frafiltrert, eter (300 ml) ble tilsatt til filtratet og oppløsningen, som fremdeles inneholdt finsuspendert salt, ble filtrert gjennom en sintret glassfilter (kvalitet 4). Det klare filtratet ble konsentrert i vakuum. Tørr (sikter 3Å) benzen (50 ml) ble tilsatt og den resulterende oppløsning ble konsentrert i vakuum (til slutt på pumpe). Glassresten ble oppløst i tørr (sikter 3Å) benzen (150 ml) under nitrogen og oppløsningen ble avkjølt på et is-bad (+4°C). MeMgBr i Et20 (3,0 M; 32,0 ml, 96 mmol) ble tilsatt til ovennevnte oppløsning i en mengde som holdt den indre temperaturen under +5°C (reaksjonen er eksoterm). Etter at tilsetningen var fullført (30 min) ble oppløsningen omrørt ved +4°C i 0,5 timer. Kjølebadet ble fjernet og 15 min senere ble oppløsningen helt på mettet NaHC03 og is (300 ml totalt). Blandingen ble vasket gjentatte ganger med eter (3 x 150 ml). De organiske fasene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum. Flashkromatografi på silisiumdioksyd [elueringsmiddel: EtOAc (2 og 10 %) i CHCI3] ga 2,9 g av tert-butylhydroksyaminderivatet. Sistnevnte ble oppløst i CS2 (100 ml) under nitrogen og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur i 4,5 timer. Oppløsningsmidlet ble inndampet i vakuum og dette ga en orangefarget olje. Aceton (ca 50 ml) ble tilsatt og oppløsningen ble omrørt i en kort tid (15 min) ved romtemperatur (for å utfelle elementært svovel), deretter filtrert og konsentrert hvilket ga en olje. Flashkromatografi på silisiumdioksyd [elueringsmiddel: EtOAc (10 til 25 %) i heksan] ga 2,34 g (31 % totalt utbytte) av tittelforbindelsen som en gul olje. [a]<2>,o = -82,8° (C = 1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 253 (53 %).

d) (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-tert-butylamino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-benzopyran (2,20 g, 8,7 mmol), allylbromid (7,5 ml, 87 mmol), finmalt vannfritt kaliumkarbonat (6,0 g, 43 mmol) og tørr DMF (6,0 ml) ble omrørt under nitrogen ved 65°C. Etter 70 timer viste GC-analyse delvis omdannelse av utgangsmaterialet (67 % produkt i forhold til 30 % utgangsmateriale). Ved dette trinnet ble reaksjonen stoppet. Saltet ble suget av, vasket med små porsjoner DMF og det klare filtratet ble konsentrert. Den således oppnådde oljen ble skilt mellom mettet vandig Na2C03 og dietyleter (4 x 70 ml). De organiske fasene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket (MgS04), filtrert og konsentrert

i vakuum. Flammekromatografi på silisiumdioksyd [elueringsmiddel: aceton (2 og 15 %) i heksan] ga 0,80 g utgangsmateriale og 1,47 g (87 % utbytte basert på gjenvunnet utgangsmateriale) av det allylerte produktet som en fargeløs olje. [a]<2l>D = -77,6° (C <= >0,8, CHC13). GC-MS (70 eV) M = 293 (40 %).

Det allylerte produktet (50 ml) ble blandet med DMF (50 ml) og 5 % Rh på aluminium-oksyd (0,090 g) og hydrogenert ved omgivelsestrykk og -temperatur (21°C). Etter 5 timer var reaksjonen fullstendig ifølge GC og TLC. Katalysatoren ble frafiltrert på celitt, puten ble vasket med små porsjoner DMF og filtratet ble konsentrert i vakuum. Flashkromatografi på silisiumdioksyd av råproduktet [elueringsmiddel: EtOAc (0 og 3 %) i CH2C12] ga 1,27 g (97 % utbytte) av den mettede forbindelsen. [ct]<2I>D (base) <= >83,4° (C = 0,9; CHC13).

Basen ble oppløst i tørr dietyleter, oppløsningen ble avkjølt på et isbad og et overskudd av eterisk HC1 ble tilsatt til den omrørte oppløsningen. Saltet ble frafiltrert, vasket med tørr dietyleter og tørket i vakuum ved 50°C hvilket ga 1,39 g (98 % utbytte) av tittelforbindelsen, som hvite krystaller. Smp: 175-176°C.

e) (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

(R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3)4-dihydro-2H-l-benzopyranhydroklorid (1,3 g, 3,9 mmol) i tørr metylenklorid (40 ml) under nitrogen ble avkjølt på et tørris-EtOH-bad til -50°C. Bortribromid (0,75 ml, 7,8 mmol) ble tilsatt dråpevis (i løpet av 1 min) til den omrørte oppløsningen ovenfor. 5 minutter etter at tilsetningen av bortribromid var fullført ble tørrisbadet endret til en isbad (+4°C). Etter omrøring i 4 timer ved den samme temperaturen ble oppløsningen helt på is (100 g) og fast NaHC03 ble tilsatt for å justere pH-verdien til 8-9. Da isen hadde smeltet ble blandingen ekstrahert med eter (4 x 75 ml). Eterekstraktene ble kombinert, vasket med saltoppløsning, tørket (Na2S04), filtrert og konsentrert i vakuum hvilket ga 1,1 g (96 % utbytte) av tittelforbindelsen som en blekgul olje.

[a]21D = -91,7° (C = 1,0; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 281 (6 %).

f) (R)-3-(N-tert-butyl-N-D-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l -benzopyran

(R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-lfuor-5-hydro^

(1,0 g, 3,6 mmol) og 2,4,6-collidin (0,52 ml, 3,9 mmol) ble oppløst i vannfritt metylenklorid (40 ml) og avkjølt til 30°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (0,66 ml, 3,9 mmol) oppløst i vannfritt metylenklorid (10 ml) ble tilsatt dråpevis i løpet av 20 min. Opp-løsningen fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur og etter å ha nådd 0°C var reaksjonen fullstendig. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med metylenklorid og vasket med mettet vandig NaHC03 (50 ml). Den vandige fasen ble ekstrahert på nytt med eter (2 x 40 ml). De kombinerte organiske fasene ble tørket (MgS04), filtrert og konsentrert i vakuum hvilket ga en uren rest. Flashkromatografi på silisiumdioksyd [elueringsmiddel: EtOAc-heksan (3:97)] ga 1,40 g (95 % utbytte) av tittelforbindelsen som en fargeløs olje.

[a]<2>,D = -73,7° (C = 1,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 413 (1 %).

g) Meryl-(R)-3-(N-tetr-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-S-karboksylat

(R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran (1.4 g, 3,3 mmol) og trietylamin (1,0 ml, 7,4 mmol) ble oppløst i en oppløsning av DMF/MeOAc (6:2; 30 ml) og deretter avgasset fulgt av inntak av karbonmonoksyd (4 x). Med et svakt positivt trykk av karbonmonoksyd ble palladium(II)-acetat (0,030 g) og l,3-bis(difenylfosfino)propan (0,060 g) tilsatt og reaksjonsblandingen ble avgasset og utsatt for karbonmonoksyd en gang til. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 70°C (oljebadtemperatur) under karbonmonoksydatmosfære under sterk omrøring i 12 timer. GC viste en ufullstendig reaksjon (68 % produkt i forhold til 21 % utgangsmateriale), oppløsningen ble avkjølt og deretter filtrert gjennom celitt. Mer palladium(II)-acetat (0,030 g) og 1,3 bis(difenylfosfino)propan (0,060 g) ble tilsatt og reaksjonen ble gjenopptatt som beskrevet ovenfor. Etter ytterligere 3 timer viste GC en svak forbedring av forholdet (77 % mot 12 %) og reaksjonsblandingen fikk avkjøles. Neste dag ble oppløsningsmidlet fjernet i vakuum. Den gjenværende rødbrune oljen ble opptatt i mettet vandig NaHCOj og deretter ekstrahert med EtOAc (3 x 50 ml). De kombinerte organiske fasene ble vasket med saltoppløsning, tørket (MgS04), filtrert og konsentrert i vakuum hvilket ga den urene esteren. Flashkromatografi på silisiumdioksyd [elueringsmiddel: EtOAc (15 og 30 %) i heksan] ga 0,178 g utgangsmateriale

og 0,842 g (89 % utbytte basert på gjenvunnet utgangsmateriale) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]<2t>D = .121,1° (C = 0,9; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 323 (14 %).

h) (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-8-fluor-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (0,84 g, 2,6 mmol), metanol (10 ml) og 1,7 M vandig NaOH (3,0 ml, 5,2 mmol) ble tilbakeløpskokt i 3 timer. Den klare oppløsningen ble avkjølt, metanolen ble avdrevet, de vandige restene ble vasket to ganger med eter-heksan (1:1), deretter surgjort med 2 M HC1 (pH < 2). Vannet ble inndampet i vakuum og det gjenværende saltet ble tørket i vakuum ved 50°C i 2 timer. Tørr metylenklorid (20 ml) og tionylklorid (3,0 ml, 41 mmol) ble tilsatt, blandingen ble tilbakeløpskokt under nitrogen i 11 timer. De flyktige stoffene ble inndampet, mer tørr metylenklorid ble tilsatt og inndampet. Dette ble gjentatt en gang til. Det urene syrekloridet ble oppløst (suspendert) i tørr metylenklorid (50 ml) og tilsatt dråpevis til omrørt konsentrert vandig ammoniakk (40 ml) avkjølt på et isbad. Blandingen fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur, den organiske fasen ble separert og den vandige fasen ble vasket med metylenklorid (100 ml) og eter (50 ml). De organiske porsjonene ble kombinert, tørket (MgS04), filtrert og konsentrert og dette ga det urene amidet. Flashkromatografi på silisiumdioksyd [elueringsmiddel: EtOAc-heksan (4:5)] ga 0,73 g (91 % utbytte) av (R)-3-(N-tert-butyl-N-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksamid som et fast stoff, smp: 70-75°C.

[a]<21>D = -132,4° (C = 1,0; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 308 (3 %).

Basen ble oppløst i tørr eter, oppløsningen ble avkjølt på et tørrisbad (-20°C) og et overskudd av eterisk HC1 ble tilsatt til den omrørte oppløsning. Saltet ble frafiltrert, vasket med tørr eter og tørket i vakuum ved 50°C hvilket ga 0,78 g (96 % utbytte) av hydrokloirdsaltet som hvite krystaller.

Smp: 120°C, sintrer.

EKSEMPEL 4

(R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutanamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-3-(N-cykloburylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

og

(R)-3-(N,N-dicyklobutanamino)-8-nuor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,67 g, 8,47 mmol) ble oppløst i vannfri metanol (20 ml) og til dette ble cyklobutan (5,0 g, 71,3 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt (isbad), deretter ble natriumcyanoborhydrid (0,96 g, 15,3 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Etter 24 timer ble pH-verdien justert til 4-5 med eddiksyre og reaksjonsblandingen ble omrørt en dag til.

Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert tre ganger med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (Na2SOij), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum hvilket ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 15 % etylacetat/heksan for dialkylert produkt fulgt av etylacetat for monoalkylert produkt) ga 1,01 g (48 % utbytte) av den monoalkylerte tittelforbindelsen som en klar olje [GC-MS (70 eV) M = 251

(6 %)] og 0,71 g (27 % utbytte) av den dialkylerte tittelforbindelsen som en klar olje.

[<x]<2l>D = -101,0° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 305 (3 %).

b) (R)-8-nuor-3-(N,N-dicyklobutylamino)-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-8-fluor-3-(N,N-dicyklobutylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-hydroklorid (0,77 g, 2,26 mmol) ble oppløst i vannfri CH2CI2 (20 ml) og avkjølt til -40°C. Til denne oppløsningen ble BBr3 (0,54 ml, 5,7 mmol) oppløst i vannfri CH2CI2 (3 ml), tilsatt dråpevis. Kjølebadet ble fjernet og etter 2 timer ved romtemperatur var reaksjonen fullstendig.

Reaksjonsblandingen ble helt ut på en is/2 M NH3-oppløsning og blandingen ble ekstrahert, to ganger, med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgSOii), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum hvilket ga en uren rest.

Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 50 % etylacetat/heksan) ga 0,58 g (89 % utbytte) av tittelforbindelsen som et hvitt fast stoff. Smp: 170-2°C.

[a]<21>D = _i 14,4° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 291 (2 %).

c) (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-5-trilfuormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran

(R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (0,59 g, 2,02 mmol) og collidin (0,37 ml, 2,8 mmol) ble oppløst i vannfri CH2C12 (40 ml) og avkjølt til -40°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (0,41 ml, 2,4 mmol) ble tilsatt dråpevis og fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur, og etter å ha nådd 0°C var reaksjonen fullstendig. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2C12 og vasket med en mettet vandig NaHC03-oppløsning, tørket (MgSCU), filtrert, og inndampet i vakuum hvilket ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: CH2C12) ga 0,84 g (99 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]<21>D = -90,9° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 423 (3 %).

d) Metyl-(R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-3-(N,N-d^cykloburylamino)-8-fluor-5-tirfluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,82 g, 1,94 mmol) ble oppløst i en oppløsning av DMF/metanol (6:2,15 ml) og deretter avgasset fulgt av inntak av karbonmonoksyd (x3). Med et svakt positivt trykk av karbonmonoksyd ble palladium(H)-acetat (14 mg), l,3-bis(difenylfosfino) propan (25 mg) og trietylamin (0,60 ml, 4,3 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble avgasset og utsatt for karbonmonoksyd en gang til. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 70°C under karbonmonoksydatmosfære med sterk omrøring i 5,5 timer.

Reaksjonsblandingen fikk avkjøles og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert, to ganger, med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgSC^), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 12,5 % etylacetat/heksan) ga 501 mg (78 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]<21>D = -138,2° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 333 (4 %).

e) (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (490 mg, 1,47 mmol) ble tilbakeløpskokt med en 6 M oppløsning av HC1 (20 ml) i 3,5 timer. Oppløsningen ble avkjølt, konsentrert til tørrhet i vakuum og vannfri toluen ble tilsatt og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum (x4).

Til det hvite faste stoffet ble det tilsatt tionylklorid (15 ml) og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Overskuddet av tionylklorid ble fjernet i vakuum, vannfri toluen ble tilsatt og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum.

Syrekloridet ble oppløst i CH2CI2 (20 ml) og tilsatt dråpevis til en avkjølt oppløsning (isbad) av konsentrert NH3 (20 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 30 min. Cr^Cb-fasen ble separert og den vandige porsjonen ble ekstrahert på nytt med CH2CI2 (x3). De kombinerte CF^Ch-porsjonene ble tørket (MgSOiO, filtrert, og inndampet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: etylacetat) ga 430 mg (92 % utbytte) av et hvitt fast stoff. Smp: 141,2-142,2°C.

[a]<21>D = -151,5° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 318 (3 %).

Hydrokloridsaltet ble fremstilt ved oppløsning av den rene basen i eter og drypping av et overskudd av en eterisk HCl-oppløsning. Saltet ble vasket med dietyleter og dette ga et hvitt fast stoff. Smp: 120°C, sintrer.

EKSEMPEL 5

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-3-(N-cykloburyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1- benzopyran (R)-3-(N-cykloburylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (1,01 g, 4,02 mmol) ble oppløst i vannfri metanol (20 ml) og til dette ble n-propionaldehyd (3,0 ml, 40,2 mmol) tilsatt. Etter 1 time ble reaksjonsblandingen avkjølt (isbad), og deretter ble natriumcyanoborhydrid (0,46 g, 7,24 mmol) tilsatt. pH-verdien ble justert til 4-5

med eddiksyre og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur over weekenden. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert tre ganger med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgSO-O, filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 11 % etylacetat/heksan) ga 0,95 g (80 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[<x]<21>d = -95,4° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 293 (1 %).

b) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

(R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranhydroklorid (1,0 g, 3,03 mmol) ble oppløst i vannfri CH2CI2 (25 ml) og avkjølt til -40°C. Til oppløsningen ble BBr3 (0,72 ml, 7,6 mmol), oppløst i vannfri CH2C12 (4 ml), tilsatt dråpevis. Kjølebadet ble fjernet og etter 2 timer ved romtemperatur var reaksjonen fullstendig.

Reaksjonsblandingen ble helt ut på en is/2 M NH3-oppløsning og CH2Cl2-deIen ble separert, det vandige laget ekstrahert på nytt, to ganger, med CH2C12. De kombinerte CH2Cl2-porsjonene ble tørket (MgS04), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 25 % etylacetat/heksan fulgt av 50 % etylacetat/heksan) ga 0,83 g (98 % utbytte) av tittelforbindelsen som en gummi.

[a]<2>,D = -80,5° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 279 (0,2 %).

c) (R)-3-(N-cykloburyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3}4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,80 g, 2,86 mmol) og collidin (0,53 ml, 4,0 mmol) ble oppløst i vannfri CH2CI2 (30 ml) og avkjølt til -40°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (0,60 ml, 3,6 mmol) ble tilsatt dråpevis og det hele fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur, og etter å ha nådd 0°C var reaksjonen fullført. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2CI2

og vasket med mettet vandig NaHCC<3-oppløsning, den vandige blandingen ble ekstrahert på nytt, to ganger, med CH2CI2, de kombinerte Cr^Ch-porsjonene ble tørket (MgSCv), filtrert, og inndampet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: CH2Cl2) ga 1,01 g (86 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]<2>,D = -78,6° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 411 (1 %).

d) Metyl-(R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propyIamino)-8-nuor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,00 g, 2,43 mmol) ble oppløst i en opppløsning av DMF/metanol (6:2,20 ml) og deretter avgasset fulgt av inntak av karbonmonoksyd (x3). Med et svakt positivt trykk av karbonmonoksyd ble palladium(II)-acetat (18 mg), 1,3-bis(difenylfosfino)propan (25 mg) og trietylamin (0,75 ml, 5,3 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble avgasset og på nytt utsatt for karbonmonoksyd. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 70°C under karbonmonoksydatmosfære med sterk omrøring i 6 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Restene ble opptatt i 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert, to ganger, med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgSC^), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum hvilket ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 15 % etylacetat/heksan) ga 0,73 mg (94 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]<2I>D = -130,1° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 321 (2 %).

e) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propyIamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (0,71 mg, 2,21 mmol) ble tilbakeløpskokt med en 6 M oppløsning av HC1 (30 ml) i 3,5 timer. Oppløsningen ble avkjølt, konsentrert til tørrhet i vakuum og vannfri toluen ble tilsatt og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum (x4).

Til det hvite faste stoffet ble det tilsatt tionylklorid (20 ml) og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Overskuddet av tionylklorid ble fjernet i vakuum, vannfri toluen ble tilsatt og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum.

Syrekloridet ble oppløst i CH2CI2 (30 ml) og tilsatt dråpevis til en avkjølt oppløsning (isbad) av konsentrert NH3 (30 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 40 minutter. Cl^C^-fasen ble separert og den vandige delen ble ekstrahert på nytt med CH2CI2 (x3). De kombinerte Cl^C^-porsjonene ble tørket (MgS04), filtrert, og inndampet i vakuum hvilket ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: etylacetat) ga 622 mg (92 % utbytte) av et hvitt halvkrystallinsk fast stoff. En porsjon ble omkrystallisert fra etylacetat/heksan og dette ga et lett hvitt fast stoff. Smp 107-9°C.

[aj<21>D = -133,0° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 306 (0,5 %).

EKSEMPEL 6

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-8-fluor-3-(N-isopropylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,62 g, 8,21 mmol) ble

oppløst i vannfri metanol (20 ml) og til dette ble aceton (6,0 ml, 82,1 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt (isbad) og deretter ble natriumcyanoborhydrid (0,92 g, 14.8 mmol) tilsatt, pH-verdien ble justert til 4-5 med eddiksyre og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert tre ganger med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgS04), filtrert, og oppløsnings-midlet fjernet i vakuum og dette ga den urene resten som ble benyttet som den var i den neste reaksjonen.

GC-MS (70 eV) M = 239 (81 %).

b) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-iluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

(R)-8-fluor-3-(N-isopropylamino)-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (1,96 g, 8,19 mmol) ble oppløst i vannfri metanol (20 ml) og til dette ble cyklobutanon (6,1 ml, 81.9 mmol) tilsatt. Reaksjonsblandingen ble avkjølt (is-bad) og deretter ble natriumcyanoborhydrid (2,0 g, 16,4 mmol) tilsatt, pH-verdien ble justert til 4-5 med eddiksyre, 3 Å-molekylsikter ble tilsatt og reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Etter 24 timer ble pH-verdien på nytt justert til 4-5 og reaksjonsblandingen ble omrørt i ytterligere 3 dager. Reaksjonsblandingen ble filtrert, oppløsningsmiddel ble

fjernet i vakuum, restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert tre ganger med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgS04), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 10 % etylacetat/heksan) ga 1,60 g (77 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]<21>D = -95,1° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 293 (3 %).

c) (R)-3-(N-cykIobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H- 1-benzopyran

(R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranhydroklorid (1,76 g, 5,34 mmol) ble oppløst i vannfri CHjCU (45 ml) og avkjølt til -40°C. Til oppløsningen ble BBr3 (1,3 ml, 13,4 mmol), oppløst i vannfri CH2CI2 (7 ml) tilsatt dråpevis. Kjølebadet ble fjernet og etter 2 timer ved romtemperatur var reaksjonen fullstendig.

Reaksjonsblandingen ble helt ut på en is/2 M NH3-oppløsning og CH2Ch-delen ble separert, det vandige laget ekstrahert på nytt, to ganger, med CH2CI2. De kombinerte CH2Cl2-porsjonene ble tørket (MgSCv), filtrert, og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum hvilket ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 30 % etylacetat/heksan) ga 1,46 g (98 % utbytte) av tittelforbindelsen som en gummi.

[a]<21>D = -95,7° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 279 (0,7 %).

Hydrokloirdsaltet ble fremstilt ved oppløsning av den rene basen i eter og drypping av et overskudd av en eterisk HCl-oppløsning. Saltet ble vasket med dietyleter og dette ga et hvitt fast stoff, smp: 120°C, sintrer.

d) (R)-3-(N-cykloburyl-N-isopropylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy 3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,36 g, 4,87 mmol) og collidin (0,90 ml, 6,8 mmol) ble oppløst i vannfri CH2CI2 (50 ml) og avkjølt til -40°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (1,05 ml, 6,1 mmol) ble tilsatt dråpevis og fikk oppvarmes til omgivelsestemperatur, og etter å ha nådd 0°C var reaksjonen fullstendig. Reaksjonsblandingen ble fortynnet med CH2CI2 og vasket med en vandig NaHC03-oppløsning, den vandige blandingen ble ekstrahert på nytt, to ganger, med CH2CI2, de kombinerte CH2Cl2-porsjonene ble tørket (MgS04),

filtrert, og inndampet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 70 % heksan/CH2CI2) ga 1,67 g (83 % utbytte) av tittelforbindelsen som en svakt gulfarget olje.

[ct]2ID = -86,8° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 411 (0,3 %).

e) Metyl-(R)-3-(N-cyklobutyI-N-isopropylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,65 g, 4,01 mmol) ble oppløst i en oppløsning av DMF/ metanol (6:2, 30 ml) og deretter avgasset fulgt av inntak av karbonmonoksyd (x3). Med et svakt positivt trykk av karbonmonoksyd ble palladium(II)-acetat (30 mg), 1,3-bis (difenylfosifno)propan (55 mg) og trietylamin (1,25 ml, 8,8 mmol) tilsatt og reaksjonsblandingen ble avgasset og utsatt for karbonmonoksyd en gang til. Reaksjonsblandingen ble oppvarmet til 70°C under karbonmonoksydatmosfære med sterk omrøring i 6 timer. Reaksjonsblandingen fikk avkjøles og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Restene ble opptatt i en 2 M oppløsning av NH3 og deretter ekstrahert, to ganger, med dietyleter. De kombinerte eterporsjonene ble tørket (MgSCvj), filtrert, og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: 8 % etylacetat/heksan) ga 1,18 mg (92 % utbytte) av tittelforbindelsen som en klar olje.

[a]2,D = -139,1° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 321 (3 %).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-lfuor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (1,16 g, 3,61 mmol) ble tilbakeløpskokt med en 6 M oppløsning av HC1 (30 ml) i 3,5 timer. Oppløsningen ble avkjølt, konsentrert til tørrhet i vakuum og vannfri toluen ble tilsatt og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum (x4).

Til den hvite gummien ble tionylklorid (35 ml) tilsatt og oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Overskuddet av tionylklorid ble fjernet i vakuum, vannfri toluen tilsatt og oppløsningsmidlet fjernet i vakuum.

Syrekloridet ble oppløst i CH2C12 (50 ml) og tilsatt dråpevis til en avkjølt oppløsning (isbad) av konsentrert NH3 (50 ml). Reaksjonsblandingen ble omrørt ved romtemperatur i 40 min. CH2Cl2-fasen ble separert og den vandige delen ble ekstrahert på nytt med CH2CI2 (x3). De kombinerte CH2Cl2-porsjonene ble tørket (MgS04), filtrert, og inndampet til vakkum og dette ga en uren rest. Kromatografi på silisiumdioksyd (elueringsmiddel: etylacetat) ga 1,06 g (95 % utbytte) av et hvitt skum. Skummet ble krystallisert ved bruk av Cf^Ch/heksan og dette ga et hvitt fast stoff. Smp: 127,8-128,4°C.

[a]<21>D = -143,0° (C = 0,1; CHC13). GC-MS (70 eV) M = 306 (0,3 %).

Hydrokloridsaltet ble fremstilt ved oppløsning av den rene basen i eter og drypping av et overskudd av en eterisk HCl-oppløsning. Saltet ble vasket med dietyleter hvilket ga et hvitt fast stoff. Smp: 120°C, sintrer.

EKSEMPEL 7

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopenryl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-3-(N-cyk[opentylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Til en oppløsning av (R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (2,5 g, 12 mmol), cyklopentanon (3,3 g, 36 mmol) og HOAc (0,7 g, 12 mmol) i metanol (25 ml) ble NaCNBH3 (2,5 g, 40 mmol) tilsatt i porsjoner ved romtemperatur. Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over hvilket ga et kvantitativt utbytte av tittelforbindelsen.

GC/MS (70 eV) M = 265 (30 %).

Til en oppløsning av (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i metanol (25 ml) ble propanol (2 g, 36 mmol) og NaCNBH3 (2 g, 40 mmol) tilsatt. Oppløsningen ble omrørt natten over hvilket ga den ønskede forbindelsen i et 97 % utbytte ifølge GC. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble opparbeidet ved ekstraksjon og dette ga 3,7 g av tittelforbindelsen som en fargeløs olje.

GC/MS (70 eV) M = 307 (40 %).

c) (R)-3-(N-cyklopenryl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H- 1-benzopyran

HCl-saltet av (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran ble fremstilt ved tilsetning av et overskudd av eterisk HC1 i en eterisk oppløsning av basen. Oppløsningsmidlet ble inndampet i vakuum og resten oppløst i 48 % vandig HBr (50 ml). Oppløsningen ble omrørt ved 120°C i 1,5 timer. Oppløsningen ble nøytralisert ved forsiktig tilsetning av kons. ammoniakk. Ekstraksjonsopparbeidelse ga en brun olje som ble filtrert gjennom en plugg av silisiumdioksyd (etylacetat som elueringsmiddel). Tittelforbindelsen ble isolert (3,7 g) som en svakt gulfarget olje. GC/MS (70 eV) M = 293 (40 %).

d) (R)-3-(N-cyklopenryl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy- 3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hyd^oksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ble oppløst i dietyleter (100 ml). Trietylamin (3 g, 30 mmol) og blandingen ble avkjølt til -20°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (4,2 g, 15 mmol), oppløst i dietyleter (20 ml), ble tilsatt dråpevis (5 min). Etter omrøring i 30 min ble den mørkebrune blandingen helt i vann. Det organiske laget ble separert. Flashkromatografi (etylacetat som elueringsmiddel) ga 3,7 g av tittelforbindelsen som en gul olje i et 96 % utbytte.

GC/MS (70 eV) M = 425 (10 %).

e) Meryl-(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-tirfluormetylsulfonyloksyd-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (3,7 g, 8,7 mmol), DMF (50 ml), trietylamin (2,5 g, 25 mmol), metanol (4 g, 130 mmol), palladium(H)acetat (100 mg, 0,45 mmol) og 1,3-bis(difenylfosfino)propan (200 mg, 0,48 mmol) ble anbragt i en rundbunnet kolbe. Oppløsningen ble omrørt ved 75°C i en atmosfære av karbonmonoksyd i 4 timer. Etter inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum og utsettelse av råproduktet for flashkromatografi ble 2,5 g (86 % utbytte) av tittelforbindelsen isolert som en fargeløs olje. GC/MS (70 eV) M = 335 (20 %).

0 (R)-S-(karbamoyl-3-(N-cyklopentyI-N-n-propylamino)-8-lfuor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluorO,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (1,4 g, 4 mmol) ble hydrolysert (6 M HC1, tilbakeløpskokt i 2 timer) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Den urene syren ble behandlet med SOCh (romtemperatur i 5 min) til dannelse av syrekloridet som etter fjerning av overskudd SOCh i vakuum ble tilsatt til kons. ammoniakk til dannelse av amidet. Råproduktet ble isolert og renset ved flashkromatografi. HCl-saltet ble fremstilt ved tilsetning av et overskudd av eterisk HC1 i en eterisk oppløsning av den rene basen for oppnåelse av tittelforbindelsen (0,5 g, utbytte 35 %) som hvite krystaller. Smp: 85°C, dekomp.

[ot]<2l>D (base) = -91° (C = 0,1; CH2C12). GC-MS (70 eV) M = 320 (25 %).

EKSEMPEL 8

(R)-S-karbamoyl-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R}-3-(N-cykloheksylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Til en oppløsning av (R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,45 g, 2,2 mmol), cykloheksanon (0,7 g, 7,2 mmol) og HOAc (0,14 g, 2,3 mmol) i metanol (25 ml) ble NaCNBH3 (0,5 g, 8 mmol) tilsatt i porsjoner ved romtemperatur. Oppløsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over til oppnåelse av et kvantiativt utbytte av tittelforbindelsen

GC/MS (70 eV) M = 279 (30 %).

b) (R)-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran

Til oppløsningen av (R)-3-(N-cykloheksylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i metanol (25 ml) ble propanal (1,3 g, 23 mmol) ogNaCNBH3 (0,15 g, 2,3 mmol) tilsatt. Oppløsningen ble omrørt natten over hvilket ga den ønskede forbindelsen 1 et 97 % utbytte ifølge GC. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og resten ble opparbeidet ved ekstraksjon hvilket ga 0,7 g av tittelforbindelsen som en fargeløs olje. GC/MS (70 eV) M = 321 (40 %).

c) (R)-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

HCl-saltet av (R)-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopyran ble fremstilt ved tilsetning av et overskudd av eterisk HC1 i en eterisk oppløsning av basen. Oppløsningsmidlet ble inndampet i vakuum og resten oppløst i 48 % vandig HBr (20 ml). Oppløsningen ble omrørt ved 120°C i 1,5 timer. Oppløsningen ble nøytralisert ved forsiktig tilsetning av kons. ammoniakk. Ekstraksjonsopparbeidelse ga en brun olje som ble filtrert gjennom en plugg av silisiumdioksyd (etylacetat som elueringsmiddel). Tittelforbindelsen ble isolert (0,6 g) som en svakt gulfarget olje. GC/MS (70 eV) M = 307 (40 %).

d) (R)-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyl oksy-3,4-dihydro-2H-l -benzopyran

(R)-3-(N-cykIoheksyl-N-n-propylammo)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ble oppløst i dietyleter (30 ml) og trietylamin (0,8 g, 8 mmol) ble tilsatt og blandingen ble avkjølt til -20°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (0,8 g, 2,8 mmol), oppløst i dietyleter (10 ml), ble tilsatt dråpevis (5 min). Etter omrøring i 30 min ble den mørkebrunfargede blandingen helt i vann. Det organiske laget ble separert. Flashkromatografi (EtOAc/heksan 1 + 1 som elueringsmiddel) ga 0,8 g av tittelforbindelsen som en gul olje.

GC/MS (70 eV) M = 439 (20 %).

e) Metyl-(R)-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-3-(N-cykloheksyl)-N-n-propylarnino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,8 g, 1,8 mmol) (4), DMF (30 ml), trietylamin (0,5 g, 5 mmol), metanol (0,8 g, 13 mmol), palladium(H)acetat (30 mg, 0,14 mmol) og 1,3 bis(difenylfosfino)propan (60 mg, 0,14 mmol) ble anbragt i en rundbunnet kolbe. Oppløsningen ble omrørt ved 75°C i en atmosfære av karbonmonoksyd i 4 timer. Etter inndampning av oppløsningsmidlet i vakuum og utsettelse av råproduktet for flashkromatografi ble 0,6 g (76 % utbytte) av tittelforbindelsen isolert som en fargeløs olje. GC/MS (70 eV) M = 349 (30 %).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-lfuor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N-cykloheksyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-di^^ 5-karboksylat (5) (0,6 g, 1,7 mmol) ble underkastet alkalisk hydrolyse (2 % KOH i EtOH, tilbakeløpskokt i 2 timer). Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum og den urene syren ble behandlet med SOCI2 (romtemperatur i 5 min) til dannelse av syrekloridet som etter fjerning av overskudd SOCl2 i vakuum ble tilsatt til kons. ammoniakk for dannelse av amidet. Råproduktet ble isolert og renset ved flashkromatografi. HCl-saltet ble fremstilt ved tilsetning av et overskudd av eterisk HC1 i en eterisk oppløsning av den rene basen for oppnåelse av tittelforbindelsen (86 mg, utbytte 14 %) som hvite krystaller. Smp: 75°C dekomp.

[a]<21>D = -73° (C = 0,2; CH2C12). GC-MS (70 eV) M = 334 (35 %).

EKSEMPEL 9

(R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Til en oppløsning av (R)-3-amino-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,7 g, 3,4 mmol), cyklopentanon (0,7 g, 8,3 mmol) og HOAc (0,2 g, 3,5 mmol) i metanol (25 ml), ble NaCNBH3 (0,7 g, 10 mmol) tilsatt i porsjoner ved romtemperatur. Opp-løsningen ble omrørt ved romtemperatur natten over. Metanolen ble inndampet. Resten ble oppløst i EtOAc og vasket med vann. Det organiske laget ble tørket med Na2S04 og oppløsningsmidlet ble inndampet hvilket ga 0,9 g (100 % utbytte) av tittelforbindelsen som en fargeløs olje. GC viste 99,6 renhet.

GC/MS (70 eV) M = 265 (30 %).

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cykloburylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran

Til en oppløsning av (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,9 g, 3,4 mmol), HOAc (0,22 g, 3,6 mmol) og cyklobutanon (2 g, 30 mmol) i metanol (25 ml), ble NaCNBH3 (1 g, 16 mmol) tilsatt i porsjoner ved romtemperatur. Etter omrøring i 4 dager viste GC 37 % produkt. pH-verdien ble justert til 5

(HOAc) og ytterligere (1 g, 15 mmol) cyklobutanon ble tilsatt. Etter omrøring i ytterligere 6 dager viste GC 64 % omdannelse. Oppløsningsmidlet ble inndampet og resten opparbeidet ved ekstraksjon. Flashkromatografi (EtOAc/P-eter, 1 + 1) ga 0,53 g (53 % utbytte) av tittelforbindelsen som en fargeløs olje.

GC/MS (70 eV) M = 319 (3 %).

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-1-benzopy ran

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-5-metoksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,53 g, 1,6 mmol) ble oppløst i 47 % HBr (15 ml) og omrørt ved 120°C i 1,5 timer. Oppløsningen ble avkjølt ved tilsetning av is og alkalisert med 14 M ammoniakk. Ekstraksjonsopparbeidelse ga 0,5 g av tittelforbindelsen som en svakt brunfarget olje. IR inneholdt et typisk OH-bånd ved 3654 cm"<1>.

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-5-trilfuormetylsulfonyl oksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-5-hydroksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ble oppløst i en blanding av dietyleter og metylenklorid (90 + 1+, 20 ml) og trietylamin (0,7 g, 7 mmol) ble tilsatt og blandingen ble avkjølt til -20°C. Trifluormetansulfonsyreanhydrid (0,85 g, 3 mmol), oppløst i dietyleter (10 ml), ble tilsatt dråpevis (5 min). Etter omrøring i 30 min ble den mørkebrunfargede blandingen helt i vann. Oppløsningsmidlet ble inndampet. Resten ble oppløst i heksan og behandlet med aktivt trekull. Filtrering gjennom celitt og inndampning av oppløsningsmidlet ga 0,67 g av tittelforbindelsen som en fargeløs olje.

GC/MS (70 eV) M = 437 (1 %).

e) Metyl-(R)-3-(N-cyklopent>l-N-cyklobur\lamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat

(R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-5-trifluormetylsulfonyloksy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,67 g, 1,5 mmol) (4), DMF (20 ml), trietylamin (0,6 g, 6 mmol), metanol (0,8 g, 12,7 mmol), palladium(H)acetat (22 mg, 0,1 mmol) og 1,3-bis(difenylfosfino)propan (44 mg, 0,1 mmol) ble anbragt i en rundbunnet kolbe. Oppløsningen ble omrørt ved 75°C i en atmosfære av karbonmonoksyd i 4 timer. Oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum, resten ble oppløst i dietyleter og behandlet med

aktivt trekull. Inndampning av oppløsningsmidlet ga 380 mg av tittelforbindelsen som en ufarget olje.

GC/MS (70 eV) M = 347 (3 %).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-flu6r-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

Metyl-(R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5-karboksylat (1,4 g, 4 mmol) ble hydrolysert (6 M HC1, tilbakeløpskokt i 2 timer) og oppløsningsmidlet ble fjernet i vakuum. Etter tørking i luft ved romtemperatur natten over ble det urene aminosyrehydrokloridet behandlet med SOCh (romtemperatur i 5 min) for dannelse av syrekloridet som etter fjerning av overskudd SOCI2 i vakuum ble oppløst i CH2CI2 og tilsatt til kons. ammoniakk for dannelse av amidet. Det urene produktet ble isolert og renset ved flashkromatografi hvilket ga 220 mg av en ufarget olje som krystalliserte ved henstand. Omkrystallisering fra en blanding av dietyleter og heksan ga hvite krystallser av tittelforbindelsen.

Utbytte: 110 mg, Smp: 138-140°C.

[a]<2>,D = -146° (C = 0,2; CH2C12).

FARMAKOLOGI

Testmetoder

(i) 5-HTjA reseptorbindingsanalyse

For å evaluere affiniteten for 5-HTiA-reseptoren kan den nedenfor beskrevne analyse som benytter rottehjeme anvendes.

Vevpreparering: Cerebral cortex og hippocampus fra Sprague-Dawley-rotter dissikeres og homogeniseres i 15 ml iskald 50 mm Tris-HCl-buffer, pH 7,5, inneholdende 4,0 mm CaCh og 5,7 mm ascorbinsyre («buffer A») med et Ultra-Turrax-apparat (Janke & Kunkel, Staufen, FRG) i 10 sek. Etter sentrifugering i 12,5 min ved 17.000 omdr/min (39.800 x g i en Beckman-sentrifuge med en avkjølt JA-17-rotor (Beckman, Palo Alto, CA, USA)), resuspenderes pelletene i buffer A og homogenisering og sentrifugering gjentas. Hver pellets suspenderes i 5 ml iskald 0,32 M sukrose og homogeniseres i 5 sek. De homogeniserte prøvene holdes frosset ved -70°C. Ved benyttelse blir de fortynnet med buffer A til 8 mg ved/ml og homogeniseres i 10 sek. Vevhomogenatene inkuberes i 10 min ved 37°C og tilføres deretter 10 um paragylin fulgt av reinkubasjon i 10 min.

Bindingsanalysen fulgte den som er beskrevet av Perutka, J., Neurochem. 47,529-540,

(1986). I det vesentlige så måler denne analysen et gitt konkurransemolekyls evne til å inhibere bindingen av <3>H-8-OH-DPAT til 5-HTiA-reseptorer. Inkubasjonsblandingen (2 ml) inneholdt <3>H-8-OH-DPAT (0,25 til 8 nm), den ønskede konsentrasjon av test

(konkurrent) -forbindelse og 5 mg/ml vevhomogenat i 50 mm Tris-HCl-buffer, pH 7,5, inneholdende 4,0 mm CaCl2 og 5,7 mm ascorbinsyre. Seks forskjellige konsentasjoner av <3>H-8-OH-DPAT analyseres. Bindingsforsøk startes ved tilsetning av vevhomogenat og etterfølges av inkubasjon ved 37°C i 10 min. Inkubasjonsblandingene filtreres gjennom Whatman GF/B-glassfiltere med en Brandel-cellehøster (Gaithersburg, MD, USA). Filtrene vaskes to ganger med 5 ml iskald 50 mm Tris-HCl buffer, pH 7,5, og telles med 5 ml Ultima Gold™ (Packard) i en Beckman LS 3801 scintillasjonsteller. Hcke-spesifikk binding måles ved tilsetning av 10 fim 5-HT til reaksjonsblandingen. Bindingsdata prosesseres ved ikke-lineær minste kvadraters datamaskinanalyse (Munson and Rodbard, Anal. Biochem. 107,220-239 (1980).

(ii) Antagonisme av 8-OH-DPAT-indusert minsking av S-HT-syntese via blokkade av presynaptiske 5-HTiA-reseptorer

Syntesehastigheten for 5-hydroksytryptamin (5-HT:serotonin) og dopamin/noradrenalin (DA/NA) måles som akkumuleringen av 5-hydroksytryptofan (5-HTP) og 3,4-dihydroksyfenylalanin, (DOPA) respektivt i 30 min etter inhibering av aromatisk L-aminosyredekarboksylase med m-hydroksybenzylhydrazin 2HC1 (100 mg/kg p.i.); innkjøpt fra Sigma. Testsubstansen administreres 75 min før, 8-OH-DPAT 60 min før og m-hydroksybenzylhydrazin<*>2HCl 30 min før rottene ble avlivet. Områdene i hjernen som skulle undersøkes dissekeres hurtig, fryses på tørris og lagres ved -70°C inntil analyse. ;DOPA, 5-HTP og deres metabolitter ekstraheres fra hjernevev med perklorsyre, inneholdende en indre standard (isoprenalin). Supernatanten fra hjernehomogenatet injiseres i et væskekromatografisk system omfattende en forkolonne og en analytisk kolonne. Katekol- og indolaminene detekteres ved kolometrisk oksydasjon. ;(iii) Antagonisme av den akutt 5-HT-gjenopptaksinhibitore (SSRI) -induserte minsking i 5-HT-turnover med selektive 5-HT1A-antagonister Dyr ;Sprague-Dawley-hannrotter (B&K International AB, Sollentuna, Sverige), med en vekt på 180-220 g, oppbevares 5 pr bur under kontrollert temperatur (21°C) og fuktighet med en 12 timers lys-mørke-syklus (tennes 6 a.m.). F6r og vann er fritt tilgjengelig. De holdes under disse betingelsene i minst 4 dager før eksperimentering. Forbindelsen administreres oralt (po) eller subkutant (sc). ;5-HT-turnover ;Grupper av 5 rotter administreres med 5-HTiA-antagonistene 15 min før injeksjonen av 5-HT-gjenopptaksinhibitoren (f.eks norzimeldin = (Z)-3-(4-bromfenyl)-N-metyl-3-(3-pyridyl)-allylamin, dihydrokloridmonohydrat). m-hydroksybenzylhydrazin<*>2HCl (NSD 1015) ble injisert 30 min senere og rottene ble avlivet med en guilliotin 30 min etter injeksjon av gjenopptaksinhibitoren (NSD 1015). Hjerner fjernes hurtig og de dissekerte områdene fryses umiddelbart på tørris. Prøvene lagres ved -70°C inntil analyse.

De endogene forbindelsene, 5-HT og 5-HTja, i forskjellige hjerneområder bestemmes ved bruk av høyytelse-væskekromatografi (HPLC) med elektrokjemisk detektering ifølge metoden til Magnusson (J. Chromatogr. 1980; 221:237-247). Den mobile fasen er 0,1 M fosfatbuffer (pH 2,5): metanol:acetonitril - 89:9:2 v/v inneholdende en 1 nm oktylsulfat. De frossede prøvene veies og homogeniseres i 0,1 M perklorsyre, inneholdende 2,5 nm natriumbisulfitt, 1 nm etylendiamintetraeddiksyre (EDTA). Supernatantene injiseres direkte på en Supelcosil Cig (3 um) kolonne, forbundet med en detektor (ESA Coulochem 5100A), innstilt til 0,05/0,30 V. Katekol- og indolaminene detekteres med kolometrisk oksydasjon.

Figur 1 viser at blokkering av 5-HTiA-somatodendritiske reseptorer med selektiv antagonist slik som (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-5-N-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (eksempel 1; NDL 249) forøker på doseavhengig måte den antidepressive effekten til 5-HT-opptaksblokkerere ved å sette seretoninerge terminaler i stand til å frigjøre mer 5-HT og derved bevirke en basis for en hurtig begynnelse av terapeutiske virkninger.

Claims

1. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter en første komponent (a) som er en 5-HT-gjenopptaksinhibitor og en annen komponent (b) som er selektiv 5-HTiA antagonist av formelen hvor Ri er n-propyl eller cyklobutyl; R2 er isopropyl, tertiær butyl, cyklobutyl, cyklopentyl eller cykloheksyl; R3 er hydrogen; R4 er hydrogen eller metyl; idet nevnte 5-HTiA-antagonist er i form av dens (R)-enantiomer, og nevnte komponenter (a) og (b) er i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

2. Kombinasjon ifølge krav 1, karakterisert ved at den selektive 5-HTiA-antagonist er (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

3. Kombinasjon ifølge krav 1, karakterisert ved at den selektive 5-HTiA-antagonisten er (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

4. Kombinasjon ifølge krav 1, karakterisert ved at den selektive 5-HTiA-antagonist er (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

5. Kombinasjon ifølge krav 1, karakterisert ved at den selektive 5-HTiA-antagonist er (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

6. Kombinasjon ifølge krav 1, karakterisert ved at den selektive 5-HTjA-antagonist er (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

7. Kombinasjon ifølge krav 1, karakterisert ved at den selektive 5-HTiA-antagonist er (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av fri base eller farmasøytisk akseptable salter derav.

8. Kombinasjon ifølge hvilket som helst av kravene 1-7, karakterisert ved at 5-HT-gjenopptaksinhibitoren er fluoksetin.

9. Kombinasjon ifølge hvilket som helst av kravene 1-7, karakterisert ved at 5-HT-gjenopptaksinhibitoren er paroksitin.

10. Kombinasjon ifølge hvilket som helst av kravene 1-7, karakterisert ved at 5-HT-gjenopptaksinhibitoren er citalopram.

11. Kombinasjon ifølge hvilket som helst av kravene 1-7, karakterisert ved at 5-HT-gjenopptaksinhibitoren er clomipramin.

12. Kombinasjon ifølge hvilket som helst av kravene 1-7, karakterisert ved at 5-HT-gjenopptaksinhibitoren er sertralin.

13. Kombinasjon ifølge hvilket som helst av kravene 1-7, karakterisert ved at 5-HT-gjenopptaksinhibitoren er fluvoksamin.

14. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter den selektive 5-HTiA antagonisten (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av dens friebase eller farmasøytisk akseptable salter derav og 5-HT-gjenopptaksinhibitoren fluoksetin.

15. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter den selektive 5-HTiA antagonisten (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av dens friebase eller farmasøytisk akseptable salter derav og 5-HT-gjenopptaksinhibitoren paroksetin.

16. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter den selektive 5-HTiA antagonisten (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av dens friebase eller farmasøytisk akseptable salter derav og 5-HT-gjenopptaksinhibitoren citalopram.

17. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter den selektive 5-HTiA antagonisten (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l -benzopyran i form av dens friebase eller farmasøytisk akseptable salter derav og 5-HT-gjenopptaksinhibitoren clomipramin.

18. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter den selektive 5-HTiA antagonisten (R)-5-karbamo<y>l-3-(N}N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l -benzopyran i form av dens friebase eller farmasøytisk akseptable salter derav og 5-HT-gjenopptaksinhibitoren sertralin.

19. Kombinasjon, karakterisert ved at den innbefatter den selektive 5-HT]A antagonisten (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluor-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran i form av dens friebase eller farmasøytisk akseptable salter derav og 5-HT-gjenopptaksinhibitoren fluvoksamin.

20. Anvendelse av kombinasjonen ifølge hvilket som helst av kravene 1-19 for fremstilling av et medikament for behandling av affektive forstyrrelser.

21. Anvendelse av kombinasjonen ifølge krav 20 for fremstilling av et medikament for behandling av depresjon.

22. Farmasøytisk formulering, karakterisert ved at de aktive bestanddelene er kombinasjonen som definert i hvilket som helst av kravene 1-19 eventuelt i forbindelse med fortynningsmidler, eksipienser og/eller inerte bærere.

23. Fremgangsmåte for fremstilling av kombinasjonen ifølge krav 1, karakterisert ved at en 5-HT-gjenopptaksinhibitor inkorporeres i det samme farmasøytiske preparatet som en selektiv 5-HT-iA-antagonist som definert i hvilket som helst av kravene 1-19.

24. Kit, karakterisert ved kombinasjonen av en første komponent (a) som er en 5-HT-gjenopptaksinhibitor og en annen komponent (b) som er selektiv 5-HTiA-antagonist ifølge krav 1 eventuelt med instruksjoner for bruk.