CZ335697A3

CZ335697A3 - Směs 5-HT inhibitoru se selektivním 5-HT 1A antagonistem a farmaceutický prostředek, který je obsahuje

Info

Publication number: CZ335697A3
Application number: CZ973356A
Authority: CZ
Inventors: John Evenden; Seth-Olov Thorberg
Original assignee: Astra Aktiebolag
Priority date: 1995-04-27
Filing date: 1996-04-23
Publication date: 1998-06-17
Also published as: US6172105B1; NO974921D0; TW458777B; AU5520296A; PL323083A1; SK142997A3; DK0822813T3; SE9501567D0; EE03553B1; IL117988A0; TR199701254T1; DE69620878D1; KR100419810B1; NO317057B1; DE69620878T2; KR19990008068A; EP0822813A1; RU2183955C2; PL183997B1; CA2218181A1

Description

SE SELEKTIVNÍ PROTILÁTKOU 5-HT_1A

Oblast techniky:

Předkládaný vynález se vztahuje ke sloučenině inhibitoru zpětné absorpce 5-HT a selektivní protilátky 5-HTi_A, přesněji (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituovanýchamino-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranů ve formě volné báze nebo jejich farmaceuticky přijatelných solí, procesu přípravy jejich sloučeniny, farmaceutickému složení obsahujícímu uvedené sloučeniny, použití této sloučeniny buď při společné aplikaci nebo odděleně pro zlepšení léčení emočních poruch, jako jsou deprese, pocity úzkosti a utkvělé nutkavé poruchy (obsessive compulsive disorder, OCD) atd.

Dosavadní stav techniky

V současné době se obecně předpokládá, že antidepresiva, včetně selektivních inhibitorů zpětné absorpce 5-HT (Selective 5-HT Reuptake Inhibitors, SSRI), potřebují 2-4 týdny pro dosažení plného klinického vlivu. Naproti tomu se vedlejší vlivy objevuji ihned, a dokonce se během tohoto období snižují. Tedy pomalý začátek působení antidepresiv vede k období zranitelnosti u pacientů, kteří pociťují vedlejší účinky, ne však terapeutické působení drog. Přesvědčit pacienta, aby v léčeni během tohoto období pokračoval, to je často pro ošetřujícího lékaře těžký úkol. A dále, poněvadž počátek účinnosti je pozvolný, může u pacientů se sebevražednými sklony převládnout iniciativa bez prožití plných opačných symptomů, což vede k potenciálu pro sebevraždu a častým požadavkům na hospitalizaci. Antidepresivum s rychlým působením by tedy bylo nejenom užitečné vzhledem k rychlejší redukci symptomů, ale rovněž by bylo přijatelnější pro pacienty i lékaře a snížilo by potřebu a trvání hospitalizace. Bylo prokázáno stejně dlouhé období pro dosažení plného klinického vlivu při léčení jiných emočních poruch, jako jsou pocity úzkosti a OCD.

• · · · • ·

Λ , Dosavadní stav techniky

V časopise Arch. Gen. Phsychiatry, vol. 51, březen 1994, je uvedeno, že betablokátor, jako je pindolol, jenž má rovněž vysokou afinitu k receptorům 5-HT a působí proti odezvám zprostředkovaným 5-HTia, vyvolává rychlé zlepšení u pacientů s depresí, kteří jsou léčeni inhibitorem zpětné absorpce serotoninu.

Podstata vynálezu

Opačným působením akutního inhibitoru absorpce 5-HT vyvolané snížení výměny 5HT selektivní protilátkou 5-HTm

Selektivní inhibitory zpětné absorpce 5-HT (SSRI) snižují šíření impulsů v neuronech

5-HT prostřednictvím negativní zpětné vazby pravděpodobně zprostředkované kolaterálními axony 5-HT uvolňujícími 5-HT v raphé nuclei. Selektivní protilátky působí proti snížení výměny 5-HT způsobenému inhibitory zpětné absorpce 5-HT prostřednictvím inhibice somatodendritických autoreceptorů 5-HT. To naznačuje, že selektivní blokáda somatodendritických autoreceptorů, tj. protilátek 5-HT, může mít klinický potenciál pro zlepšení účinnosti inhibitorů zpětné absorpce 5-HT (SSRI) a nabízí nový podklad pro rychlý rozběh emočních činností, například antidepresivních.

• · · · • · • ·

Sloučenina

Sloučením první složky (a), což je inhibitor zpětné absorpce 5-HT s druhou složkou (b), což je selektivní protilátka 5-HTi_Ase vzorcem

kde

Ri je n-propyl nebo cyklobutyl;

R₂ je isopropyl, terciární butyl, cyklobutyl, cyklopentyl nebo cyklohexyl;

R₃ je vodík;

R4 je vodík nebo metyl;

uvedená protilátka 5-HTia je ve formě svého (R)-enantiomeru a uvedené složky (a) a (b) jsou ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí, dojde k rychlejšímu rozběhu akce a v důsledku toho k účinnějšímu léčení pacientů.

Jako složka (b) ve sloučenině podle tohoto vynálezu mohou být obsaženy následující protilátky:

(R)-3(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H1-benzopyran (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran • · · · • · · · • · (R)-5-karbamoyl-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamíno)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-propylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Zde uvedené (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3,4-dihydro2H-l-benzopyrany jsou popsány ve WO 95/11891 (PCT/SE94/01010).

(R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3,4-dihydro-2H-lbenzopyrany jsou ve formě volné báze nebo její farmaceuticky přijatelné soli. Pro tvorbu nejedovatých farmaceuticky přijatelných kyselých adičnich solí pro sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být použity jak organické, tak anorganické kyseliny. Ilustrativní kyseliny jsou kyseliny sírová, dusičná, fosforečná, šťavelová, chlorovodíková, mravenčí, bromovodíková, citrónová, octová, mléčná, vinná, dibenzylvinná, biacetylvinná, pamoová [v originále: pamoic], etandisulfonová, sulfamová [v originále: sulfamic], jantarová, propionová, glykolová, jablečná, glukonová, pyrohroznová, fenoxyoctová, 4• · · · • · aminobenzoová, antranilová, salicylová, 4-aminosalicylová, 4-hydroxybenzoová, 3,4dihydroxybenzoová, 3,5-dihydroxybenzoová, 3-hydroxy-2-naftoová, nikotinová, metansulfonová, etansulfonová, benzensulfonová, p-toluensulfonová, sulfanilová, naftalensulfonová, askorbová, cyklohexylsulfamová, fumarová, maleinová a benzoová. Tyto soli lze snadno připravit v oboru známými metodami.

Tyto (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3,4-dihydro-2H-lbenzopyrany mají vysokou afinitu ke specifické podskupině receptoru 5-HTia v CNS a působí jako protilátky na tomto receptoru 5-HTia, a rovněž vykazují dostatečnou biologickou dostupnost po orálním podávání.

Vhodné inhibitory zpětné absorpce 5-HT (SSRI), které mají být použity, jsou norzimeldin, fluoxetin, paroxetin, citalopram, clomipramin, sertralin, fluvoxamin, alaproklat, avšak složky (a) ve sloučenině podle předkládaného vynálezu nejsou omezeny pouze na tyto SSRI.

Sloučenina podle předkládaného vynálezu může být vyrobena v jednom farmaceutickém složení, které bude obsahovat jak aktivní první složku (a), tak aktivní druhou složku (b) nebo ve dvou různých farmaceutických složeních, jednom pro aktivní první složku (a) a druhém pro aktivní druhou složku (b). Farmaceutické složení může být ve formě tablet, kapslí, prášku, směsí, roztoků, nebo jiných vhodných formách farmaceutických složení.

Sloučenina podle předkládaného vynálezu může být připravena tak, že inhibitor zpětné absorpce 5-HT je obsažen ve stejném přípravku jako selektivní protilátka 5-HT_1A, jak je popsáno výše, například mícháním konvenčním způsobem.

Předkládaný vynález rovněž zahrnuje metodu zlepšení náběhu terapeutické akce společnou administrací první složky (a), což je inhibitor zpětné absorpce 5-HT a druhé složky (b), což je selektivní protilátka 5-HTja, jak je popsáno v tomto dokumentu.

·· ···· «· ·· ·· · · • · · ···« ···· • · ·· · · · · · · · · • · · · · ·«· ···· · · · ···· · · ··

Další formou předkládaného vynálezu je souprava obsahující sloučeninu první složky (a), což je inhibitor zpětné absorpce 5-HT a druhé složky (b), což je selektivní protilátka 5HTia, případně s návodem k užití.

• · · · • ·

Podstata vynálezu

Metody přípravy (R)-5-karbamoyl-8-fluoro-3-N,N-disubstituované-amino-3.4dihydro-2H-1 -benzopyranů

	á
AA 1 NH₂		A_na
OMe	OMe	X
(II)		(lil)

Příprava (R)-3-amino-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranů (sloučenina II) je popsána ve WO93/07135. Obsah tohoto dokumentuje tímto zahrnut ve svém celku z referenčních důvodů. Vhodná metoda pro vložení fluoruje selektivní bromace aromatického kruhu v osmé pozici. Bromace může být realizována užitím bromu s katalyzátorem nebo bez něj. Mohou být použita jiná bromační činidla, např. HOBr a Nbromoamidy (zvlášť N-bromosukcinimid). Vhodná rozpouštědla pro bromaci jsou kyselina octová, dioxan a chlorová rozpouštědla, např. metylén chlorid.

Před fluorací musí být primární amin plně alkylován skupinami Ri a R2, jak je uvedeno výše, nebo chráněn vhodnou skupinou, kterou lze odstranit později, např. dibenzylovou. Zavedení alkylových skupin na dusík může být provedeno redukční aminací z vhodného aldehydu nebo ketonu s použitím vhodného redukčního činidla, např. NaCNBH₃, nebo katalyticky pomocí H₂ a vhodného katalyzátoru obsahujícího paladium, platinu nebo nikl ve vhodném rozpouštědle, např. tetrahydrofuranu (THF), dioxanu, metanolu nebo etanolu. Zavedení alkylových skupin může být rovněž provedeno alkylací vhodným alkylhalogenidem, např. Cl, Br nebo J, nebo aktivovaným alkoholem, např. alkylmetansulfanátem nebo alkyl-tosylatem ve vhodném rozpouštědle, např. dimetylformamidu (DMF), acetonu nebo acetonitrilu s vhodnou bází, např. K2CO3.

. Fluorace může nastat lithiací sloučeniny bromu alkyl-lithným činidlem, např. nbutyllithiem, a následuje reakce s vhodným fluoračním činidlem, nejlépe N-fluoro-N • · · · · • · · · • · • · alkyl/arylsulfonamidem, např. N-fluorobenzensulfonimidem. Rozpouštědlem pro tuto reakci mohou být bezvodé alkyl étery, např. tetrahydrofuran (THF) nebo dietyléter nebo neprotická rozpouštědla, např. hexan nebo benzen. Teplotní rozsah může být od -100°C k pokojové teplotě, ale nejvhodnější je od -78°C do -20°C.

Sloučeniny mohou být připraveny z (R)-3-amino-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyranu, (jak je popsáno výše), poté následují známé metody, jako redukční aminace, N-alkylace, dimetylace a konverze k odstupující skupině Y pro získání sloučeniny IV.

Sloučeniny podle vzorce I mohou být připraveny podle dále naznačených metod:

i, přímou konverzí sloučenin podle vzorce IV • · • · • ·

(iv) • · · · • · • ·

ΙΟ kde Υ je odstupující skupina, jako trifluorometan sulfonát (OSO2CF3), halogenidy, např. Cl, Br nebo J pomocí katalytického cyklu s použitím bezvalenčního přechodového kovu (M), jako je Pd nebo Ni, které mohou být generovány in šitu, a prochází oxidační adicí k arylové vazbě Y. Zpracováním pomocí oxidu uhelnatého a aminaci vhodným aminem (čpavkem nebo metylaminem) vzniká sloučenina podle vzorce I, která je v případě potřeby převedena na sůl.

ii, Alternativně mohou být sloučeniny podle vzorce IV převedeny na sloučeniny podle vzorce V

R

kde Z je Cl, Br, OH nebo OR_P, kde Rpje alkyl Ci-C₆, pomocí katalytického cyklu s použitím bezvalenčního přechodového kovu, se schopností prodělat oxidační adici k arylové vazbě Y, např. vazbě aryl-OSOjCF; Komplex aryl-CO-kov-Y vzniká zpracováním pomocí oxidu uhelnatého (CO).

Další činidla jsou alkoholy, jako metanol, etanol, terciární aminy, jako trialkylamin např. trietylamin v inertním organickém rozpouštědle, nejlépe polárním aprotickém rozpouštědle, jako je dimetylformamid (DMF), dimetylsulfoxid (DMSO), dioxan, tetrahydrofuran (THF), aceton, acetonitril atd. Reakce normálně probíhá při teplotách mezi +40°C až +120°C a při tlaku mezi 100 a 500 kPa (ii). Případně následuje hydrolýza a zpracování pomocí thionylhalogenidu, např. thionylchloridu, pro získání odpovídajícího derivátu kyseliny halogenidu.

Sloučeniny podle vzorce V jsou aminovány (ii_b) vhodným aminem (čpavkem nebo metylaminem) v rozpouštědle, např. toluenu, methylen chloridu, benzenu, vodě při refluxní teplotě nebo mezi 0°C až 100°C pro získání sloučeniny podle vzorce I.

• * • ·

Farmaceutická složení

Podle předkládaného vynálezu budou sloučeniny v této kombinaci podávány orálně, rektálně nebo v injekci, ve formě farmaceutických složení obsahujících aktivní složku buď jako volnou bázi nebo její farmaceuticky přijatelnou nejedovatou kyselou adiční sůl, např. hydrochlorid, hydrobromid, laktát, octan, fosfát, síran, sulfamát [sulphamate], citrát, vinan, šťavelan a podobně ve farmaceuticky přijatelném dávkování. Dávkování může být ve formě pevné, polotekuté nebo tekuté. Aktivní substance obvykle tvoří 0,1 až 99% hmotnostních složení, přesněji 0,5 až 20% hmotnostních složení určeného do injekcí a mezi 0,2 a 50% hmotnostních složení vhodného pro orální administraci.

Pro výrobu farmaceutických složení ve sloučenině podle předkládaného vynálezu ve formě jednotek pro dávkování pro orální aplikaci mohou být vybrané sloučeniny smíchány s pevným excipientem, např. laktózou, sacharózou, sorbitem, mannitem, škroby, např. bramborovým škrobem, kukuřičným škrobem nebo amylopektinem, deriváty celulózy, pojivém jako je želatina nebo polyvinylpyrolidin, disintegranty, např. škrobnatým glykolátem sodíku [sodium starch glycolate], síťovaným PVP, křižně karamelovaným sodíkem [sodium starch glycolate] a lubrikanty, např. stearanem hořečnatým, stearanem vápenatým, polyetylén glykolem, vosky, parafinem a podobně, a potom lisovány do tablet. Pokud jsou požadovány tablety jako dražé, pak jádro připravené podle výše popsaného postupu může být pokryto koncentrovaným cukerným roztokem, který může obsahovat např. arabskou gumu, želatinu, mastek, oxid titaničitý a podobně. Alternativně mohou být tablety pokryty v oboru známými polymery, rozpuštěny ve snadno těkavých organických rozpouštědlech nebo směsi organických rozpouštědel. Do těchto povlaků mohou být přidána barviva, aby bylo možno snadno rozpoznat tablety obsahující různé aktivní látky nebo různé množství aktivních sloučenin.

Pro dávkování ve formě měkkých želatinových kapslí mohou být aktivní látky smíchány například s rostlinným olejem nebo polyetylén glykolem. Tvrdé želatinové kapsle mohou obsahovat granule aktivní látky s použitím kteréhokoli z výše uvedených excipientů pro tablety, např. laktózu, sacharózu, sorbit, mannit, škroby (např. bramborový škrob, • to kukuřičný škrob nebo amylopektin), deriváty celulózy nebo želatinu. Tvrdé želatinové kapsle mohou být plněny rovněž drogou v tekuté nebo polotekuté formě.

Jednotkami dávkování pro rektální aplikaci mohou být roztoky nebo suspenze nebo mohou být připraveny ve formě čípků obsahujících aktivní složky ve směsi s neutrální tukovou bází, nebo želatinových rektálních kapslí ve směsi s rostlinným olejem nebo parafínovým olejem. Tekuté formulace pro orální aplikaci mohou být ve formě sirupů nebo suspenzí, např. roztoků obsahujících od přibližně 0,2% do přibližně 20% hmotnostních aktivní látky, která je zde popsána, zbytek je cukr a směs etanolu, vody, glycerolu a propylen glykolu. Případně mohou takovéto tekuté formulace obsahovat zbarvující činidla, ochucovadla, sacharín a karbometyl celulózu jako zahušťovadlo nebo jiné excipienty známé v oboru.

Roztoky pro parenterální aplikaci injekcí mohou být připraveny ve vodném roztoku vodou rozpustné farmaceuticky vhodné soli aktivních látek, nejlépe v koncentraci od přibližně 0,5% do 10% hmotnostních. Tyto roztoky mohou rovněž obsahovat stabilizující činidla nebo tlumící činidla a mohou být snadno poskytovány v ampulích s různými dávkami.

Vhodné denní dávky aktivních sloučenin v kombinaci podle tohoto vynálezu při léčení lidí jsou přibližně 0,01-100 mg/kg váhy při parenterální administraci. Denní dávky aktivní protilátky 5-HTi_Ase mohou velmi lišit od denních dávek inhibitoru absorpce 5-HT, ale rovněž mohou být totožné pro obě aktivní sloučeniny.

Příprava výchozích materiálů k protilátkám 5-HTia

Příprava 1 (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

a) (R)-3 -anfino-8-bromo-5 -methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-amino-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (25 g, 0,14 mol; připraven, jak je popsáno ve WO93/07135), a bezvodý octan sodný (34 g, 0,42 mol) byly rozpuštěny v kyselině octové (500ml). Bróm (23,4 g, 0,15 mol) rozpuštěný v kyselině octové (500ml) byl přidáván po kapkách při pokojové teplotě. Přidávání brómu trvalo přibližně 7 dní. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo rozpuštěno v hydroxidu sodném (25%)/dietyléteru (exotermická reakce, směs byla chlazena v lázni s ledem). Vrstvy byly odděleny a alkalická vodní fáze byla třikrát extrahována dietyléterem. Sloučené éterové vrstvy byly vysušeny (Na₂SO4) a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo 35,5 g olejnatého rezidua. Olej byl rozpuštěn v dietyléteru a roztok byl chlazen v lázni s ledem (0°C). HCI rozpuštěná v dietyléteru byla přidávána po kapkách, až se suspenze stala kyselou (kontrolováno pomocí pH papíru). Krystaly byly filtrovány a potom rekrystalizovány z metanolu, čímž vznikla sloučenina uvedená v titulu při 70% výtěžnosti (28,5 g). Mp: 281-282°C. Sůl HCI byla rozdělena mezi dietyléter a 2M NH₃ (aq) a volná báze byla získána extrakcí alkalické vodní fáze pomocí dietyléteru. [a]²¹ _D = +40 (0=0,1, sůl HCI v MeOH). GC-MS (70eV) M+l= 259 (53%).

b) (R)-8-bromo-3-(N,N-dibenzylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-amino-8-bromo-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (11,5 g, 44 mmol) byl rozpuštěn v 400 ml bezvodého acetonitrilu a k reakci byl přidán benzyl bromid (13 ml,

110 mmol), bezvodý uhličitan draselný (mletý) (16 g, 116 mmol) a katalytické množství KJ, potom byla látka vyhřátá na 85°C na dobu 48 hodin.

Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, podíly byly zachyceny v roztoku 2 M NH₃ a potom dvakrát extrahovány éterem. Sloučené podíly éteru byly zpracovány solným roztokem, vysušeny (MgSCU), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž

4· ···· • · ·· · * · · • · · · · 4 · · * * » • · · * · V · » • * ·♦ *» r · · ♦ > - · * · · · r * j. « •··· 1 4· 4··· «a · vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: CH2CI2) dala 15 g (78% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [cc]²¹d = +15,5°(C=0,l, CHCI3) GC-MS (70eV) M=437 (15%).

c) (R)-3-(N,N-dibenzylamino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-8-bromo-3-(N,N-dibenzylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (4,3 5g, 9,9 mmol) byl rozpuštěn v 45 ml bezvodého THF a ochlazen na -78°C. K tomu bylo po kapkách přidáno 1,6 M roztoku n-BuLi (6,8 ml, 10,9 mmol) a látka byla míchána při 78°C po dobu 1 hodiny. Po kapkách byl po 45 minut přidáván N-fluorobenzensulfonimid (3,8 g, 11,9 mmol), rozpuštěný v 30 ml bezvodého THF a látka byla míchána při -78°C po dobu 1 hodiny. Reakce byla zastavena přidáním 3 ml nasyceného NH₄C1, poté 9 ml roztoku složeného z 2 g NH₂0H x HC1 a 8 g Na₂CO₃ ve 100 ml H₂O, reakce byla realizována při pokojové teplotě. Byl přidán roztok 2 M NH₃ a produkt byl dvakrát extrahován éterem, zpracován solným roztokem, vysušen (Na2SO₄), filtrován a vypařen do vakua, čímž vznikl surový produkt. Purifikace sloučeniny 8-fluoro (hledané) od sloučeniny 8-hydrogen (15%) byla provedena hrubou chromatografií (eluent: 25% CH₂C12/hexan), která dala 1,78 g. Hrubý produkt byl znovu chromatografován na křemení (eluent: 3% aceton/hexan), s výsledkem 1,50 g (40% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [a]²¹ _D = -112,l°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M-377 (37%).

d) (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-3-(N,N-dibenzylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (13,0 g, 34,4 mmol) byl rozpuštěn v 265 ml metanolu a 115 ml THF. K této látce bylo přidáno 10% Pd/C (4 g) a mravenčan amonný (51,5 g, 0,817 mmol). Produkt byl vyhřát na 50°C po dobu 2,5 h. Produkt byl filtrován a rozpouštědlo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny ve 2 M roztoku NaOH a potom dvakrát extrahovány éterem. Sloučené podíly éteru byly zpracovány solným roztokem, vysušeny (Na₂SO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo 6,2 g (91% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [a]²¹ _D = -15,3°(C=1, CHC1₃) GC-MS (70eV) M=197 (51%).

• · · · • · • · • · • ·

Příprava 2 (R)- 8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-propylamino-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3.4dihydro-2H-1 -benzopyran

a) (R)-8-bromo-3-(N-isopropylamino 5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-3-(N-isopropylamino 5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (4,02 g, 18,2 mmol; příprava je popsána v WO93/07135) a bezvodý octan sodný byly rozpuštěny v kyselině octové (80 ml). K promíchanému roztoku byl po dobu 1,5 h po kapkách přidáván bróm (0,93 ml, 18,2 mmol) rozpuštěný v kyselině octové (40 ml).

Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny ve 2 M roztoku NaOH a potom dvakrát extrahovány dietyléterem. Sloučené podíly éteru byly zpracovány solným roztokem, vysušeny (Na2SO4), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chlorovodíková sůl byla připravena rozpuštěním čisté báze v dietyléteru a přidáním většího množství éterového roztoku HCI, čímž vznikla bílá pevná látka. Sůl byla dvakrát rekrystalizována z etanolu/dietyléteru, čímž vzniklo 3,8 g produktu (62% výtěžnost) Mp: 257-8°C [a]²¹ _D = -97,7°(C=0,l, CHC1₃).

Volná báze byla připravena z chlorovodíkové soli ve formě oleje. GC-MS (70eV) M=301 (100%).

b) (R)-8-bromo-3-(N-isopropyl-N-propylamino 5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-8-bromo-3-(N-isopropylamino 5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (3,8 g, 11,3 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém metanolu (80 ml) a do roztoku byl přidán propanal (8,1 ml, 0,113 mmol). Produkt byl zchlazen (ledová lázeň), potom byl přidán cyanoborohydrid sodný (1,3 g, 20,3 mmol), hodnota pH byla upravena na 5, a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě.

Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny v 1 M roztoku Na2CO₃ a potom dvakrát extrahovány dietyléterem. Sloučené podíly éteru byly zpracovány solným roztokem, vysušeny (Na2SO4), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum.

• · • · · · • · • · · · * · · · ···· · ·· ···· ·· ··

Chromatografie na křemení (eluent: 7% octan etylnatý/hexan) dala 3,75 g (97% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [a]²¹o = -82,5°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M-343 (29%).

Chlorovodíková sůl byla připravena rozpuštěním báze v dietyléteru a přidáním většího množství éterového roztoku HC1, čímž vznikla bílá pevná látka. Sůl byla rekrystalizována z etanolu/dietyléteru, čímž vznikla bílá pevná látka. Mp: 177-9°C.

c) (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-propylamino 5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-8-bromo-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (2,3 g, 6,72 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém THF (25 ml) a zchlazen na 78°C. Do roztoku bylo po kapkách přidáno 1,6 M roztoku n-BuLi (4,83 ml, 7,73 mmol) a látka byla míchána při -78°C po dobu 1 hodiny. Po kapkách byl po dobu 20-30 minut přidáván N-fluorobenzensulfonimid (2,55 g, 8,06 mmol), rozpuštěný v bezvodém THF (15 ml) a látka byla míchána při -78°C po dobu 4 hodin. Reakce byla zastavena přidáním 1 ml nasyceného vodného roztoku NH4CI, poté 3 ml roztoku složeného z 2 g NH₂0H x HC1 a 8 g Na₂CO₃ ve 100 ml H₂O, reakce byla realizována při pokojové teplotě. Byl přidán 2 M roztok NH₃ a produkt byl dvakrát extrahován dietyléterem, zpracován solným roztokem, vysušen (Na₂SC>4), filtrován a vypařen do vakua, čímž vznikl surový produkt. Chromatografie na křemení (eluent:chloroform) dala 1,0 g. (53% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [cc]²¹d = -89,2°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=281 (32%).

Chlorovodíková sůl byla připravena rozpuštěním čisté báze v dietyléteru a přidáním většího množství éterového roztoku HC1, čímž vznikla bílá pevná látka (slinuje při 80°C).

d) (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (1,03 g, 3,24 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém CH₂C1₂ (30 ml) a zchlazen na • · • · · · • · • ·

40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán BBr₃ (0,77 ml, 8,81 mmol) rozpuštěný v bezvodém CH2CI2 (5 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a po 3 hodinách na pokojové teplotě byla reakce úplná.

Produkt byl nalit na roztok ledu/2 M NH₃ a směs byla dvakrát extrahována dietyléterem. Sloučené podíly éteru byly zpracovány solným roztokem, vysušeny (Na2SO4), filtrovány a rozpouštědlo bylo vypařeno do vakua, čímž vznikl surový produkt.

Chromatografie na křemení (eluent: 20% octan etylnatý/hexan) dala 0,84 g. (97% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [oc]²¹d = -94,2°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=267 (26%).

Chlorovodíková sůl byla připravena rozpuštěním čisté báze v dietyléteru a přikapáním většího množství éterového roztoku HCI. Sůl byla rekrystalizována z CHCI3 / dietyléteru / octanu etylnatého, čímž vznikla bílá pevná látka. Mp: 220-2°C

e) (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4-dihydro2H-l-benzopyran (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-propylamino)-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (0,71 g, 2,66 mmol) a kollidin (0,49 ml, 3,72 mmol) byly rozpuštěny v bezvodém CH2CI2 (25 ml) a zchlazeny na -40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán anhydrid trifluorometansulfonátu (0,54 ml, 3,2 mmol), a nechali jsme látku dojít na teplotu okolí. Reakce byla ukončena po dojití na 0°C. Produkt byl rozředěn CH2CI2 a promýván vodným roztokem NaHCO₃, vysušen (MgSO₄), filtrován a odpařen do vakua, čímž vznikl surový produkt.

Chromatografie na křemení (eluent: 20% CH2CI2) dala 0,82 g. (77% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [oí.]²¹d = -85,5°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=399 (6%).

Příklad 1 (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro-2H1-benzopyran

• · · ·

a) (R)-3-N-cyklopentylamino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran • · · ·

(R)-3-N-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,5 g, 7,6 mmol), kyselina octová (0,45 g, 7,6 mmol) a cyklopentan (2,5 g, 3 mmol) byly rozpuštěny v metanolu. Za míchání byl v dávkách po několika minutách přidán cyanoborohydrid sodný (0,8 g, 13 mmol). Míchání trvalo 2 hodiny. Vzorek GC (gas chromatography, plynová chromatografie) vykázal 100% nového produktu. Rozpouštědlo bylo odpařeno a byla přidána voda, 2 M NH₃ a EtOAc. Organická vrstva byla oddělena a promývána vodou. Vrstva byla vysušena Na₂SO₄ a odpařena, čímž vzniklo 1,3 g (64% výtěžnost) produktu ve formě bezbarvého oleje. Měření GC/MS s molekulárním pikem 265 potvrdilo sloučeninu uvedenou v titulku.

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-N-cyklopentylamino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,3 g, 5 mmol), kyselina octová (0,3 g, 5 mmol) a propionaldehyd (1,5 g, 25 mmol) byly rozpuštěny v 30 ml metanolu. Za míchání byl v dávkách po několika minutách přidán cyanoborohydrid sodný (0,8 g, 13 mmol) a míchání pokračovalo. Vzorek GC vykázal po 3 hodinách 100% nového produktu. Rozpouštědlo bylo odpařeno a byla přidána voda, 2 M NH₃ a EtOAc. Organická vrstva byla oddělena a promývána vodou do neutrálního stavu. Vrstva byla vysušena Na₂SO₄ a odpařena, čímž vzniklo 1 g (65% výtěžnost) produktu ve formě bezbarvého oleje. Měření GC/MS s molekulárním pikem 307 potvrdilo sloučeninu uvedenou v titulku.

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-(N-cyklopentyI-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (1 g, 5 mmol) byl rozpuštěn v 25 ml CH2CI2. Do roztoku bylo přidáno větší množství HCL v éteru, aby vznikla sůl HC1. Byl připraven roztok BBr₃ (4 g, 15 mmol) v 10 ml CH2CI2 a po kapkách přidáván do roztoku po dobu 10 minut za stálého míchání (v ledové lázni). Reagovaná směs byla ponechána, aby se ohřála na pokojovou teplotu během stálého míchání po dobu 6 hodin a směs byla vylita do ledové vody a učiněna zásaditou přidáním čpavku. Organická vrstva byla oddělena, vysušena Na2SO4 a odpařena, čímž vznikl tmavě hnědý olej.

Chromatografie (SÍO2, diisopropyléter a hexan 1+1) dala 1,1 g bezbarvého oleje. Chlorovodíková sůl byla připravena z báze a HC1 v éteru a rekrystalizována z acetonitrilu, čímž vzniklo 0,85 g produktu (52% výtěžnost). Mp: 220-221°C.

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-

3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (0,7 g, 3 mmol) byl rozpuštěn v 25 ml CH2CI2 a byl přidán trietylamin (0,3 g, 3 mmol).

Do roztoku byl po kapkách po dobu 10 minut (-20°C) přidáván roztok anhydridu trifluorometansulfonátu (1 g, 4 mmol) v 5 ml CH₂C1₂. Míchání trvalo 1 hodinu. Reakční směs byla vylita do ledové vody a upravena na hodnotu pH 8 přidáním čpavku a extrakcí éterem. Organická vrstva byla oddělena, vysušena Na2SO₄ a odpařena, čímž vznikl tmavě hnědý olej.

Chromatografie (SiO₂, CH₂C1₂ + hexan, 1+3) dala 0,5 g bezbarvého oleje. Měření GC/MS s molekulárním pikem 425 potvrdilo sloučeninu uvedenou v titulku.

e) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-metylkarbamoyl-3,4-dihydro2H-1-benzopyran (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (0,5 g, 1 mmol) byl rozpuštěn v 15 ml 1,4-dioxanu. Do roztoku byl přidán octan II paládia (10 mg), l,3-bis(difenylfosfino)-propan (20 mg) a metylamin (0,15 g, 5 mmol) a směs byla přes noc míchána v atmosféře oxidu uhelnatého při 70°C.

Odpaření a chromatografie (SÍO2, dietyléter + hexan, 1+3) dala konečnou sloučeninu ve formě bezbarvého oleje. Bylo připraveno 0,24 g soli HCL (65% výtěžnost) ve formě bílých krystalků. Mp 108°C.

• · • · · · • ·

Příklad 2 (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

a) Metyl(R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro2H-1 -benzopyran-5-karboxylát (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5- trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (2,4 g, 6,0 mmol), trietylamin (1,3 g, 12,9 mmol), 1,3bis(difenylfosfino)-propan (95 mg, katalytické množství), octan II paládia (48 mg, katalytické množství) a DMF/MeOH (30 ml, 3:1) byly smíchány v 50 ml kádince s kulatým dnem a třemi hrdly. Kádinka byla evakuována a potom byl vpuštěn CO (postup byl opakován dvakrát). Reakční směs byla míchána při 70°C po dobu 7,5 hodin. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo rozpuštěno v dietyléteru / nasyceném NaHCOs. Vrstvy byly odděleny a vodní fáze byla jedenkrát extrahována éterem. Smíšené éterové vrstvy byly vysušeny (MgSO4) a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vznikl surový produkt, jenž byl vyčištěn světelnou chromatografií [v originále: flash chromatography] (SiO₂, hexan/EtOAC, 9:1), čímž vzniklo 1,3 g sloučeniny uvedené v titulku (71% výtěžnost).

b) (R)-8-fluoro-3-(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran

Metyl(R)-8-fluoro-3 -(N-isopropyl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (1,3 g, 4,2 mmol) a KOH (0,52 g, 8,4 mmol) byly smíchány v metanolu (6 ml) a refluxovány po dobu 2,5 hodiny. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Reziduum bylo rozpuštěno ve vodě a učiněno kyselým přidáním 2 M HC1. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Reziduum bylo rozpuštěno v SOCI2 (30 ml) a refluxováno po dobu 2,5 hodiny. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Reziduum bylo rozpuštěno v CH₂C1₂ a rozpouštědlo bylo opět odstraněno in vacuo (to bylo opakováno třikrát, aby byl odstraněn přebytek SOC1₂. Reziduum bylo potom rozpuštěno v dietyléteru * · ·· · · · · · · ♦ · • « · · ♦ · · · ···· · ·· · · · · ·· ·· (50 ml) Roztok byl zchlazen na -30°C před probubláním NH? (g). Byla přidána voda, vrstvy byly odděleny a vodní fáze byla extrahována éterem. Smíšené éterové vrstvy byly vysušeny (K2CO3) a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vznikl surový produkt, jenž byl vyčištěn světelnou chromatografií (SiO₂, EtOAc/hexan, 1:1), Čímž vzniklo 1,0 g sloučeniny uvedené v titulku (80% výtěžnost). Rekrystalizace z EtOAc/hexanu dala krystaly s Mp: 139-140°C.

• · · · • « • · • · · · · · · · · • · ·· · · · · · · * · • · ··· · · · #··· · ·· ···· ·· ··

Příklad 3 (R)-3-(N-tert-butvl-N-n-propylamino)-5-karbamoyl-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

a) (R)-8-fluoro-5-methoxy-3-[N-(4-methoxybenzyliden)-amino]-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (7,85 g, 39,8 mmol), 4-methoxybenzaldehyd (5,42 g, 39,8 mmol), bezvodý uhličitan draselný (10,1 g) a absolutní EtOH (200 ml) byly míchány přes noc při refluxní teplotě. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a byl přidán éter (500 ml). Po míchání po dobu 15 minut byla sůl odfiltrována a roztok byl koncentrován in vacuo, čímž vznikla bělavá pevná látka (12,4 g). Rekrystalizace z i-Pr₂O/hexanu dala 10,8 g (86% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvých jehliček. Mp: 96,8-97,3°C. [oc]²¹ _D = +20,l°(Ol, CHC13) GC-MS (70eV) M-315 (58%).

b) (R)-8-fluoro-3-hydroxylamino-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran

3-chloroperoxybenzoová kyselina (85%, 7,6 g, 37,6 mmol) byla přidána v dávkách k promíchanému a zchlazenému roztoku (+4°C) (R)-8-fluoro-5-methoxy-3-[N-(4methoxybenzyliden)-amino]-3,4-dihydro-2H-l -benzopyran (10,8 g, 34 mmol) a metylén chloridu (65 ml). Směs byla míchána přes noc při pokojové teplotě. Precipitovaná 3chlorobenzoová kyselina byla odfiltrována a čirý žlutý filtrát byl koncentrován in vacuo. Olejnaté reziduum s roztokem hydroxylamin hydrochloridu (2,83 g, 40,8 mmol) a bezvodého metanolu (60 ml) a výsledný roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu 2 hodin. Rozpouštědlo bylo odpařeno, čímž vznikl hustý oranžový olej. Do oleje byla přidána voda, hodnota pH byla upravena na 8-9 pomocí nasyceného vodného Na₂CO3 a směs byla promyta éterem (3 x 150 ml). Organické fáze byly smíseny, promyty solným roztokem, vysušeny (Na₂SO4), filtrovány a koncentrovány in vacuo. Surový produkt byl podroben světelné chromatografii na křemení s EtOAc (15 až 50%) v hexanu jako eluentu. Výsledný nečistý produkt byl podroben světelné chromatografii na křemení s EtOAc - CHCI3 (1: 99) jako eluent, čímž vzniklo 6,45 g (89% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě • · «· · « · · · · · · • · · · · ««· ···· · ·· ···· ·· · · bezbarvé krystalické pevné látky. Mp: 111-113°C. [cc]²¹d = +66,4°(C=1,3, CHC13) GC-MS (70eV) M=213 (56%).

c) (R)-3-tert-butylamino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-8-fluoro-3 -hydroxylamino-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (6,30 g,

29,6 mmol), bezvodý síran sodný (20 g) a aceton (500 ml) byly refluxovány pod dusíkem po dobu čtyř dní, dokud TLC (thin layer chromatography, chromatografie na tenké vrstvě) nevykázala úplnou reakci. Sůl byla odfiltrována, k filtrátu byl přidán éter (300 ml) a roztok, stále obsahující jemně suspendovanou sůl, byl filtrován přes filtr ze sintrovaného skla (stupeň 4). Čirý filtrát byl koncentrován in vacuo. Byl přidán suchý (síto 3 angstromy) benzen (50 ml) a výsledný roztok byl koncentrován in vacuo (nakonec vývěvou). Skelné reziduum bylo rozpuštěno v suchém (síto 3 angstromy) benzenu (150 ml) v dusíku a roztok byl zchlazen v ledové lázni (+4°C). Do rozmíchaného roztoku byl přidán MeMGBr v Et₂O (3,0 M, 32,0 ml, 96 mmol) rychlostí, která udržela vnitřní teplotu pod +5°C (reakce je exotermická). Po ukončení adice (30 minut) byl roztok míchán při +4°C po dobu 0,5 hodiny. Chladicí lázeň byla odstraněna a o 15 minut později byl roztok nalit na nasycený NaHCO₃ a led (celkem 300 ml). Směs byla opakovaně promývána éterem (3 x 150 ml). Organické fáze byly smiseny, promyty solným roztokem, vysušeny (Na₂SO4), filtrovány a koncentrovány in vacuo. Světelná chromatografie na křemení [eluent: EtOAc (2 a 10%) v CHCh] dala 2,9 g derivátu tert-butyl hydroxylaminu. Tento byl rozpuštěn v CS₂ v dusíku a roztok byl míchán při pokojové teplotě po dobu 4,5 hodiny. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vznikl oranžový olej. Byl přidán aceton (cca 50 ml) a roztok byl krátkou dobu (15 minut) míchán při pokojové teplotě (aby byla precipitována elementární síra), potom byl filtrován a koncentrován, Čímž byl získán olej. Světelná chromatografie na křemení [eluent: EtOAc (10 až 25%) v hexanu] dala 2,34 g (31% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě žlutého oleje. [a]²¹D = -82,8°(C=1, CHC13) GC-MS (70eV) M=253 (53%).

d) (R)-3 -(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5 -methoxy-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran • · · · • · • · • · ·· · · · · · · · · • · · · · ··· ···· · ·· ···· ·· ·· (R)-3-butylamino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (2,20 g, 8,7 mmol), allyl bromid (7,5 ml, 87 mmol), jemně mletý bezvodý uhličitan draselný (6,0 g, 43 mmol) a suchý DMF (6,0 ml) byly míchány pod dusíkem při teplotě 65°C. Analýza GC po 70 hodinách prokázala částečnou konverzi výchozí látky (67% produktu vs. 30% výchozí látky). V této fázi byla reakce přerušena. Sůl byla odsáta, promyta malou dávkou DMF a byl koncentrován čirý filtrát. Takto získaný olej byl rozdělen mezi nasycený vodný Na₂CO3 a dietyléter (4 x 70 ml). Organické fáze byly smíseny, promyty solným roztokem, vysušeny (MgSO₄), filtrovány a koncentrovány in vacuo. Světelná chromatografíe na křemení [eluent: aceton (2 a 15%) v hexanu] dala 0,80 g výchozí látky a 1,47 g allylovaného produktu (výtěžnost 87%> na základě znovu získané výchozí látky) ve formě bezbarvého oleje. [a]²¹ _D = -77,6°(C=0,8, CHC13) GC-MS (70eV) M=293 (40%).

Allylovaný produkt (1,30 g) byl smíchán s DMF (50 ml) a 5% Rh na oxidu hlinitém (0,090 g) a hydrogenován za běžného tlaku a teploty (21°C). po 5 hodinách byla reakce úplná podle měření GC a TLC. Katalyzátor byl odfiltrován na Celíte, podložka byla omyta malými dávkami DMF a filtrát byl koncentrován in vacuo. Světelná chromatografíe surového produktu na křemení [eluent: EtOAc (0 a 3%) v CH2CI2] dala 1.27 g (97% výtěžnost] nasycené sloučeniny. GC-MS (70eV) M=295 (28%).

[cc]²¹ _d (báze) = -83,4°(C=0,9, CHC13).

Báze byla rozpuštěna v suchém dietyléteru, roztok byl zchlazen ledovou lázní a do promíchaného roztoku bylo přidáno větší množství éterového roztoku HC1. Sůl byla odfiltrována, promyta suchým dietyléterem a vysušena in vacuo při 50°C, čímž vzniklo 1,39 g (98% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bílých krystalků.

Mp: 175-176°C.

e) (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran hydrochlorid (1,3 g, 3,9 mmol) v suchém metylén chloridu (40 ml) byl zchlazen pod dusíkem v lázni suchý led-EtOH na teplotu -50°C. Po kapkách (během 1 minuty) byl • · přidán do výše popsaného promíchaného roztoku tribromid bóru (0,75 ml, 7,8 mmol). Pět minut po ukončení přidávání tribromidu bóru byla lázeň se suchým ledem nahrazena lázní s ledem (+4°C). Po míchání po dobu 4 hodin při stejné teplotě byl roztok nalit na led (100 g) a pro upravení hodnoty pH na 8-9 byl přidán pevný NaHCO₃. Jakmile led roztál, byla směs extrahována éterem (4 x 75 ml). Éterové extrakty byly smíseny, promyty solným roztokem, vysušeny (Na2SO₄), filtrovány a koncentrovány in vacuo, čímž vzniklo 1,1 g (96% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bledě žlutého oleje.

[cc]²¹ _d = -91,7°(C=l,0, CHC13) GC-MS (70eV) M=281 (6%).

f) (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5- trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (1,0 g, 3,6 mmol) a 2,4,6 kollidin (0,52 ml, 3,9 mmol) byly rozpuštěny v bezvodém metylén chloridu (40 ml) a zchlazeny na teplotu -30°C. Po kapkách (během 20 minut) byl přidán anhydrid trifluorometansulfonátu (0,66 ml, 3,9 mmol) rozpuštěný v bezvodém metylén chloridu (10 ml). Roztok byl ponechán, aby se ohřál na pokojovou teplotu a po přechodu na 0°C byla reakce dokončena. Produkt byl zředěn metylén chloridem a promyt nasyceným vodným NaHCO₃ (50 ml). Vodní fáze byla reextrahována éterem (2 x 40 ml). Smíšené organické fáze byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a koncentrovány in vacuo, čímž vznikl surový produkt. Světelná chromatografie na křemení [eluent: EtOAc-hexan (3:97)] dala 1,40 g (95% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

[α]²¹ο = -73,7°(C-1,1, CHC13) GC-MS (70eV) M=413 (1%).

g) Metyl (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran-5-karboxylát (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino-8-fluoro-5- trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (1,4 g, 3,3 mmol) a trietylamin (1,0 ml, 7,4 mmol) byly rozpuštěny v roztoku DMF/MeOH (6:2, 30ml) a potom odplyněny, poté byl napuštěn oxid uhelnatý (4x). Pod mírným přetlakem oxidu uhelnatého byly přidány octan II paládia (0,030 • ♦ · · • ·

g) a l,3-bis(difenylfosfino)propan (0,060 g) a reakční směs byla odplyněna a znovu vystavena oxidu uhelnatému. Produkt byl ohřát na 70°C (v olejové lázni) v atmosféře oxidu uhelnatého za intenzivního míchání po dobu 12 hodin. GC vykázala neúplnou reakci (68% produktu vs. 21% výchozí látky), roztok byl zchlazen a potom filtrován přes Celíte. Byl přidán další octan II paládia (0,030 g) a l,3-bis(difenylfosfino)propan (0,060 g) a reakce pokračovala stejně, jak je popsáno výše. Po dalších 3 hodinách měření GC vykázalo mírně zlepšený poměr (77% vs. 12%) a produkt byl ponechán, aby zchladl. Následující den bylo rozpouštědlo odstraněno in vacuo. Zbývající červenohnědý olej byl zachycen do nasyceného vodného NaHCO₃ a potom extrahován EtOAc (3 x 50 ml). Smíšené organické fáze byly promyty solným roztokem, vysušeny (MgSO^, filtrovány a koncentrovány in vacuo, čímž vznikl surový ester. Světelná chromatografie na křemení [eluent: EtOAc (15 a 30%) v hexanu] dala 0,178 g (89% výtěžnost na základě znovu získané výchozí látky) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[cc]²¹ _d = -121,l°(C=0,9, CHC13) GC-MS (70eV) M=323 (14%).

h) (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)- 5-karbamoyl-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Metyl (R)-3-(N-tert-butyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran5-karboxylát (0,84 g, 2,6 mmol), metanol (10 ml) a 1,7 M vodného NaOH (3,0 ml, 5,2 mmol) byly refluxovány po dobu 3 hodin. Čirý roztok byl zchlazen, metanol byl odstraněn, vodní zbytky byly dvakrát promyty éter-hexanem (1:1), potom okyseleny 2 M HC1 (pH -<

2). Voda byla odpařena in vacuo a zbývající sůl byla sušena ve vakuu při 50°C po dobu 2 hodin. Byl přidán suchý metylén chlorid (20 ml) a thionylchlorid (3,0 ml, 41 mmol), směs byla refluxována pod dusíkem po dobu 11 hodin. Těkavé látky byly odpařeny, byl přidán další suchý metylén chlorid a odpařen. Tento postup byl ještě jednou opakován. Surový kyselý chlorid byl rozpuštěn (suspendován) v suchém metylén chloridu (50 ml) a po kapkách přidán do rozmíchaného koncentrovaného vodného čpavku (40 ml) chlazeného v ledové lázni. Směs byla ponechána, aby se ohřála na teplotu okolí, organické fáze byly separovány, a vodní fáze byla promyta metylén chloridem (100 ml) a éterem (50 ml). Organické části byly smíseny, vysušeny (MgSO₄), filtrovány a koncentrovány in vacuo, čímž vznikl surový amid. Světelná chromatografie na křemení [eluent: EtOAc-hexan (4:5)] dala • · · · • ·

0,73 g (91% výtěžnost) (R)-3-(N-tert-butyl-N-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran-5-karboxamidu ve formě pevné látky.

Mp: 70-75°C [oc]²¹d = -132,4°(C=l,0, CHC13) GC-MS (70eV) M=308 (3%).

Báze byla rozpuštěna v suchém éteru, roztok byl chlazen v lázni se suchým ledem (20°C) a do promíchaného roztoku bylo přidáno větší množství éterového roztoku HC1. Sůl byla odfiltrována, promyta suchým éterem a vysušena in vacuo při 50°C, čímž vzniklo 0,78 g (96% výtěžnost) soli hydrochloridu ve formě bílých krystalků.

Mp: 120°C, slinuje

Příklad 4 (R)-5-karbamoyl-3 -(Ν,Ν-dicyklobutylamino)- 8-fluoro-3.4-dihydro-2H-1 -benzopyran

a) (R)-3-(N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran a (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,67 g, 8,47 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém metanolu (20 ml) a do roztoku byl přidán cyklobutanon (5,0 g, 71,3 mmol). Produkt byl zchlazen (ledová lázeň), potom byl přidán cyanoborohydrid sodný (0,96 g, 15,3 mmol) a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě. Po 24 hodinách byla hodnota pH byla kyselinou octovou upravena na 4-5 a produkt byl míchán ještě jeden den.

Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny v roztoku 2 M NH₃ a potom třikrát extrahovány dietyléterem. Smíšené podíly éteru byly vysušeny (Na2SO4), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum.

Chromatografie na křemení (eluent: 15% dietyl acetát/hexan pro dialkylovaný produkt následovaný etyl acetátem pro monoalkylovaný produkt) dala 1,01 g (48% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje. [GC-MS (70 eV) M = 251 (6%)] a 0,71 g (27% výtěžnost) monoalkylované sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[GC-MS (70 eV) M = 251 (6%)] dialkylované sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[a]²¹ _D = -101,0°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=305 (3%).

• *

b) (R)-8-fluoro-3-(N,N-dicyklobutylamino)-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-8-fluoro-3-(N,N-dicyklobutylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran hydrochlorid (0,77g, 2,26 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém CH₂C1₂ (20 ml) a zchlazen na 40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán BBr₃ (0,54 ml, 5,7 mmol) rozpuštěný v bezvodém CH₂C1₂ (3 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a po 2 hodinách na pokojové teplotě byla reakce úplná.

Produkt byl nalit na roztok ledu/2 M NH₃ a směs byla dvakrát extrahována dietyléterem. Smíšené podíly éteru byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vznikl surový produkt.

Chromatografie na křemení (eluent: 50% octan etylnatý/hexan) dala 0,58 g (89% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bílé pevné látky.

[a]²¹ _D = -114,4°(C = 0,1, CHC13) GC-MS (70eV) M=291 (2%).

c) (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-5- trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (0,59 g, 2,02 mmol) a kollidin (0,37 ml, 2,8 mmol) byly rozpuštěny v bezvodém CH₂C1₂ (40 ml) a zchlazeny na -40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán anhydrid trifluorometansulfonátu (0,41 ml, 2,4 mmol), a látku jsme nechali dojít na teplotu okolí. Reakce byla ukončena po dojití na 0°C. Produkt byl rozředěn CH₂C1₂ a promýván vodným roztokem NaHCO₃, vysušen (MgSCh), filtrován a odpařen do vakua, čímž vznikl surový produkt.

Chromatografie na křemení (eluent: CH₂C1₂) dala 0,84 g. (99% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[cc]²¹d = -90,9°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=423 (3%).

Metyl (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran-5karboxylát • · * · ·· * * * · ♦ · • · · » « · · ·>··· · • · · · · * · · • « · · t ·· ···· * ♦ ·· (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4-dihydro2H-l-benzopyran (0,82 g, 1,94 mmol) byl rozpuštěn v roztoku DMF s metanolem (6:2, 15 ml) a odplyněn, potom byl napuštěn oxid uhelnatý (3x). Pod mírným přetlakem oxidu uhelnatého byly přidány octan II paládia (14 mg), l,3-bis(difenylfosfmo)propan (25 mg) a trietylamin (0,60 ml, 4,3 mmol) a reakční směs byla odplyněna a znovu vystavena oxidu uhelnatému. Produkt byl ohřát na 70°C v atmosféře oxidu uhelnatého za intenzivního míchání po dobu 5,5 hodin. Produkt byl ponechán, aby zchladnul a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Zbytky byly zachyceny do 2 M NH₃ a potom extrahovány, dietyléterem. Smíšené éterové podíly byly vysušeny (MgSOJ, filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: 12,5% octan etylnatý / hexan) dala 501 mg (78% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[oc]²¹d = -138,2°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=333 (4%).

e) (R)-5-karbamoyl-3-(N,N-dicyklobutylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Metyl (R)-3-(N,N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran-5karboxylát (490 mg, 1,47 mmol) byl refluxován s roztokem 6 M HC1 (20 ml) po dobu 3,5 hodiny. Roztok byl zchlazen, koncentrován do sucha in vacuo. Potom byl přidán bezvodý toluen a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo (4 x).

K bílé pevné látce byl přidán thionyl chlorid (15 ml) a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě. Přebytečný thionyl chlorid byl odstraněn in vacuo, byl přidán bezvodý toluen a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo.

Kyselý chlorid byl rozpuštěn v CH2CI2 (20 ml) a po kapkách přidán ke zchlazenému roztoku (ledová lázeň) koncentrovaného NH₃ (20 ml). Roztok byl po dobu 30 minut míchán při pokojové teplotě. Fáze QLCbbyla oddělena a vodní podíl byl reextrahován s CH2CI2 (3

x). Smíšené podíly CH₂Cl₂byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a odpařeny in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: octan etylnatý) dala 430 mg (92% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bílé pevné látky. Mp: 141,2142,2°C.

• · · · · · • · · ···· · · · ·· · · · · ‘ · * « « «· · · · · · » * · • · · · * · ♦ · «·«· i « ♦ *««· · · [α]²¹ _ο = -151,5°(C=O,1, CHC13) GC-MS (70eV) M=318 (3%).

Sůl hydrochloridu byla připravena rozpuštěním čisté báze v éteru a odebráním přebytečného éterového roztoku HC1. Sůl byla promyta dietyléterem, čímž vznikla bílá pevná látka. Mp: 120°C, slinuje.

Příklad 5 (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

a) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran (R)-3-(N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (1,01 g, 4,02 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém metanolu (20 ml) a do roztoku byl přidán npropionaldehyd (3,0 ml, 40,2 mmol). Po 1 hodině byl produkt zchlazen (ledová lázeň), potom byl přidán cyanoborohydrid sodný (0,46 g, 7,24 mmol). Hodnota pH byla kyselinou octovou upravena na 4-5 a produkt byl přes víkend míchán při pokojové teplotě.

Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny ve roztoku 2 M NH₃a potom třikrát extrahovány dietyléterem. Smíšené podíly éteru byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum.

Chromatografie na křemení (eluent: 11% dietyl acetát/hexan) dala 0,95 g (80% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[a]²¹ _D = -95,4°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=293 (1%).

b) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran hydrochlorid (1,0 g, 3,03 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém CH2CI2 (25 ml) a zchlazen na -40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán BBr₃ (0,72 ml, 7,6 mmol) rozpuštěný * » · · * ♦ • · v bezvodém CH₂C1₂ (4 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a po 2 hodinách na pokojové teplotě byla reakce úplná.

Produkt byl nalit na roztok ledu/2 Μ NH3 a podíl CH₂C1₂ byl oddělen, vodní vrstva byla extrahována (dvakrát) dietyléterem. Smíšené podíly CH₂C1₂ byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno ín vacuo, čímž vznikl surový produkt.

Chromatografie na křemení (eluent: 25% octan etylnatý/hexan následovaný 50% octanem etylnatým / hexanem) dala 0,83 g (98% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě gumovité látky.

[oc]²¹d = -80,5°(C = 0,1, CHC13) GC-MS (70eV) M=279 (0,2%).

c) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (0,80 g, 2,86 mol) a kollidin (0,53 ml, 4,0 mmol) byly rozpuštěny v bezvodém CH₂C1₂ (30 ml) a zchlazeny na -40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán anhydrid trifluorometansulfonátu (0,60 ml, 3,6 mmol) a látku jsme nechali dojít na teplotu okolí. Reakce byla ukončena po dojití na 0°C. Produkt byl rozředěn CH₂C1₂ a promýván nasyceným vodným roztokem NaHCO₃, vodní vrstva byla dvakrát reextrahována s CH₂C1₂, smísené vrstvy CH₂C1₂ byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a odpařeny in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum.

Chromatografie na křemení (eluent: CH₂C1₂) dala 1,01 g. (86% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[cc]²¹ _d = -78,6°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=411 (1%).

d) Metyl (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran- 5 -karboxylát (R)-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (1,00 g, 2,43 mmol) byl rozpuštěn v roztoku DMF s metanolem (6:2, 20 ml) a odplyněn, potom byl napuštěn oxid uhelnatý (3x). Pod mírným přetlakem oxidu uhelnatého byly přidány octan II paládia (18 mg), l,3-bis(difenylfosfino)propan (25 • · ft

4» ·· • » * · · • » · • · * · • · * » ·· « • · mg) a trietylamin (0,75 ml, 5,3 mmol) a reakční směs byla odplyněna a znovu vystavena oxidu uhelnatému. Produkt byl ohřát na 70°C v atmosféře oxidu uhelnatého za intenzivního míchání po dobu 6 hodin. Produkt byl ponechán, aby vychladl a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Zbytky byly zachyceny do roztoku 2 M NH₃ a potom extrahovány, dvakrát, dietyléterem. Smíšené éterové podíly byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: 15% octan etylnatý / hexan) dala 0,73 mg (94% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[a]²¹ _D = -130,l°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=321 (2%).

e) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Metyl (R)-3 -(N-cyklobutyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (0,71 mg, 2,21 mmol) byl refluxován s roztokem 6 M HC1 (30 ml) po dobu 3,5 hodiny. Roztok byl zchlazen, koncentrován do sucha in vacuo. Potom byl přidán bezvodý toluen a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo (4 x).

K bílé pevné látce byl přidán thionyl chlorid (20 ml) a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě. Přebytečný thionyl chlorid byl odstraněn in vacuo, byl přidán bezvodý toluen a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo.

Kyselý chlorid byl rozpuštěn v CH2CI2 (30 ml) a po kapkách přidán ke zchlazenému roztoku (ledová lázeň) koncentrovaného NH₃ (30 ml). Roztok byl po dobu 40 minut míchán při pokojové teplotě. Fáze CH₂Cl₂byla oddělena a vodní podíl byl reextrahován s CH2CI2 (3 x). Smíšené podíly CH₂Cl₂byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a odpařeny in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: octan etylnatý) dala 622 mg (92% výtěžnost) bílé semikrystalické látky. Podíl byl rekrystalizován z octanu etylnatého / hexanu, čímž vznikla křehká bílá pevná látka. Mp: 107-9°C.

[a]²¹o = -133,0°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=306 (0,5%).

• · · · • · · * ···♦ • · · · · · · · · ^w * • 4 · · ·► · ···· 4 ♦ · · · · · · ·· ·

Příklad 6 (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

a) (R)-8-fluoro-3-(N-isopropylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (1,62 g, 8,21 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém metanolu (20 ml) a do roztoku byl přidán aceton (6,0 ml, 82,1 mmol). Produkt byl zchlazen (ledová lázeň), potom byl přidán cyanoborohydrid sodný (0,92 g, 14,8 mmol), hodnota pH byla kyselinou octovou upravena na 4-5 a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě.

Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny v roztoku 2 M NH₃ a potom třikrát extrahovány dietyléterem. Smíšené podíly éteru byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum, které bylo použito v následující reakci.

GC-MS (70eV) M=239 (81%).

b) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-8-fluoro-3-(N-isopropylamino)-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (1,96 g, 8,19 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém metanolu (20 ml) a do roztoku byl přidán cyklobutanon (6,1 g, 81,9 mmol). Produkt byl zchlazen (ledová lázeň), potom byl přidán cyanoborohydrid sodný (2,0 g, 16,4 mmol), hodnota pH byla kyselinou octovou upravena na 4-5, bylo přidáno molekulární síto 3 angstromy a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě. Po 24 hodinách byla hodnota pH kyselinou octovou upravena opět na 45a produkt byl míchán ještě 3 dny.

Produkt byl filtrován, rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, zbytky byly zachyceny v roztoku 2 M NH₃ a potom třikrát extrahovány dietyléterem. Smíšené podíly éteru byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum.

• · • · · ·

Chromatografie na křemení (eluent: 10% etyl acetát/hexan) dala 1,60 g (77% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[oc]²¹d = -95,l°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=293 (3%).

c) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran hydrochlorid (1,76 g, 5,34 mmol) byl rozpuštěn v bezvodém CH2CI2 (45 ml) a zchlazen na -40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán BBr₃ (1,3 ml, 13,4 mmol) rozpuštěný v bezvodém CH2CI2 (7 ml). Chladicí lázeň byla odstraněna a po 2 hodinách na pokojové teplotě byla reakce úplná.

Produkt byl nalit na roztok ledu/2 M NH₃, podíl CH₂C1₂ byl oddělen, vodní vrstva byla dvakrát reextrahována CH2CI2. Smíšené podíly CH₂C1₂ byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum.

Chromatografie na křemení (eluent: 30% octan etylnatý/hexan) dala 1,46 g. (98% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě gumovité látky.

[a]²¹ _D = -95,7°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=279 (0,7%).

Chlorovodíková sůl byla připravena rozpuštěním čisté báze v éteru a přikapáním většího množství éterového roztoku HCl. Sůl byla promyta dietyléterem, čímž vznikla bílá pevná látka.

Mp: 120°C, slinuje.

d) (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-5- trifluoromethylsulfonyloxy-

3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (1,36 g, 4,87 mmol) a kollidin (0,90 ml, 6,8 mmol) byly rozpuštěny v bezvodém

CH₂C1₂ (50 ml) a zchlazeny na -40°C. Do roztoku byl po kapkách přidán anhydrid trifluorometansulfonátu (1,05 ml, 6,1 mmol), a látku jsme nechali dojít na teplotu okolí.

Reakce byla ukončena po dojití na 0°C. Produkt byl rozředěn CH₂C1₂ a promýván vodným • · • · · · c · • · • · ·· · ···· · · · • « · · · · ♦ · • · ·· · · · · · · ♦ i · · · · · · <

···· · ·· · · ·· · · · · roztokem NaHCO₃, vodní podíl byl reextrahován CH₂C1₂ dvakrát, smísené podíly CH₂C1₂ byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a odpařeny do vakua, čímž vzniklo surové reziduum.

Chromatografie na křemení (eluent: 70% hexan / CH₂C1₂) dala 1,67 g. (83% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě nažloutlého oleje.

[a]²¹ _D = -86,8°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=411 (0,3%).

e) Metyl (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (1,65 g, 4,01 mmol) byl rozpuštěn v roztoku DMF s metanolem (6:2, 30 ml) a odplyněn, potom byl napuštěn oxid uhelnatý (3x). Pod mírným přetlakem oxidu uhelnatého byly přidány octan II paládia (30 mg), l,3-bis(difenylfosfino)propan (55 mg) a trietylamin (1,25 ml, 8,8 mmol) a reakční směs byla odplyněna a znovu vystavena oxidu uhelnatému. Produkt byl ohřát na 70°C v atmosféře oxidu uhelnatého za intenzivního míchání po dobu 6 hodin. Produkt byl ponechán, aby zchladl a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Zbytky byly zachyceny do roztoku 2 M NH₃ a potom extrahovány, dvakrát, dietyléterem. Smísené éterové podíly byly vysušeny (MgSO₄), filtrovány a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: 8% octan etylnatý / hexan) dala 1,18 mg (92% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě čirého oleje.

[a]²¹ _D - -139,l°(C=0,l, CHC13) GC-MS (70eV) M=321 (3%).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)- 8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Metyl (R)-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran-5-karboxylát (1,16 mg, 3,61 mmol) byl refluxován s roztokem 6 M HCI (30 ml) po dobu 3,5 hodiny. Roztok byl zchlazen, koncentrován do sucha in vacuo. Potom byl přidán bezvodý toluen a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo (4 x).

• · · · • · • ·

K bílé gumovité látce byl přidán thionyl chlorid (35 ml) a roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě. Přebytečný thionyl chlorid byl odstraněn in vacuo, byl přidán bezvodý toluen a rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo.

Kyselý chlorid byl rozpuštěn v CH₂C1₂ (50 ml) a po kapkách přidán ke zchlazenému roztoku (ledová lázeň) koncentrovaného NH3 (50 ml). Roztok byl po dobu 40 minut míchán při pokojové teplotě. Fáze CH₂Cl₂byla oddělena a vodní podíl byl reextrahován s CH₂C1₂ (3 x). Smíšené podíly CH₂Cl₂byly vysušeny (MgSCU), filtrovány a odpařeny in vacuo, čímž vzniklo surové reziduum. Chromatografie na křemení (eluent: octan etylnatý) dala 1,06 g (95% výtěžnost) bílé pěny. Pěna byla krystalizována pomocí CH₂C1₂ / hexanu, čímž vznikla bílá pevná látka. Mp: 127,8-128,4°C.

[oc]²¹d - -143,0°(C=0,l, CHCE) GC-MS (70eV) M=306 (0,3%).

Příklad 7 (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l benzopyran • · · · » · • · • · « · • · · · · · · ···· « * · · · · ··· • · · · · ♦ · · ♦ · · ·» · ·

a) (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

K roztoku (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranu (2,5 g, 12 mmol), cyklopentanonu (3,3 g, 36 mmol) a HOAc (0,7 g, 12 mmol) v metanolu (25 ml) byl po dávkách za pokojové teploty přidán NaCNBH₃ (2,5 g, 40 mmol). Roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě, čímž vzniklo určité množství sloučeniny uvedené v titulku.

GC-MS (70eV) M=265.

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

K roztoku (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 benzopyranu v metanolu (25 ml) byly přidány propanal (2 g, 36 mmol) a NaCNBH₃ (2 g, 40 mmol). Roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě, čímž vznikla žádaná sloučenina při 97% výtěžnosti podle měření GC. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo zpracováno extrakcí tak, že vzniklo 3,7 g sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

GC-MS (70eV) M= 307 (40%).

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Chlorovodíková sůl (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyranu byla připravena přidáním většího množství éterového roztoku HC1 do éterového roztoku báze. Rozpouštědlo bylo odpařeno in vacuo a reziduum bylo rozpuštěno v 48% roztoku HBr ve vodě (50 ml). Roztok byl míchán při 120°C po dobu 1,5 hodiny. Roztok byl neutralizován pečlivým přidáním koncentrovaného čpavku. Zpracování extrakcí dalo hnědý olej, který byl filtrován přes křemennou zátku (jako eluent byl použit octan etylnatý). Sloučenina uvedená v titulku byla izolována ve formě nažloutlého oleje.

GC-MS (70eV) M= 293 (40%).

• · · · • ·

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5- trifluoromethylsulfonyloxy-

3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran byl rozpuštěn v dietyléteru (100 ml). Byl přidán trietylamin (3 g, 30 mmol). Roztok byl ochlazen na -20°C. Po kapkách byl po dobu 5 minut přidáván anhydrid trifluorometansulfonátu (4,2 g, 15 mmol) rozpuštěný v dietyléteru (20 ml). Po míchání po dobu 30 minut byla tmavě hnědá směs vylita do vody. Organická vrstva byla oddělena.

Světelná chromatografie (octan etylnatý jako eluent) dala sloučeninu uvedenou v titulku ve formě žlutého oleje při 69% výtěžnosti.

GC-MS (70eV) M= 425 (10%).

e) Metyl (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (3,7 g, 8,7 mmol), DMF (50 ml), trietylamin (2,5 g, 25 mmol), metanol (4 g, 130 mmol), octan II paládia (100 mg, 0,45 mmol) a 1,3bis(difenylfosfino)propan (200 mg, 0,48 mmol) byly umístěny v baňce s kulatým dnem. Roztok byl míchán při 75°C v atmosféře oxidu uhelnatého po dobu 4 hodin. Po odpaření rozpouštědla in vacuo a zpracování surového produktu světelnou chromatografií bylo izolováno 2,5 g (86% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

GC-MS (70eV) M= 335 (20%).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Metyl (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (1,4 g, 4 mmol) byl hydrolyzován (6 M HCI, refluxovaná po dobu hodin). Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo.

Surová kyselina byla zpracována SOCI2 (při pokojové teplotě po dobu 5 minut), čímž vznikl kyselý chlorid, jenž byl po odstranění přebytku SOCI2 in vacuo přidán do • · • · · · • · « · ·* · · · ···· • · · · · · · ···· · ·· ··«· ·· · · koncentrovaného čpavku, čímž vznikl amid. Surový produkt byl izolován a vyčištěn světelnou chromatografií. Sůl HCL byla připravena přidáním většího množství éterového roztoku HC1 do éterového roztoku čisté báze, čímž vznikla bílá pevná látka. Sůl byla rekrystalizována z etanolu/dietyléteru, čímž vznikla sloučenina uvedená v titulku (0,5 g, 35% výtěžnost) ve formě bílých krystalů. Mp: 85°C.

[cc]²¹ _d (báze) = -91°(C=0,2, CH₂C1₂) GC-MS (70eV) M=320 (25%).

Příklad 8 (R)-5-karbamoyl-3 -(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran

a) (R)-3-(N-cyklohexylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

K roztoku (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranu (0,45 g, 2,2 mmol), cyklohexanonu (0,7 g, 7,2 mmol) a HOAc (0,14 g, 2,3 mmol) v metanolu (25 ml) byl po dávkách za pokojové teploty přidán NaCNBH₃ (2,5 g, 8 mmol). Roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě, čímž vzniklo určité množství sloučeniny uvedené v titulku.

GC-MS (70eV) M=279 (30%).

b) (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

K roztoku (R)-3-(N-cyklohexylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyranu (0,45 g, 2,2 mmol) v metanolu (25 ml) byl po dávkách za pokojové teploty přidán propanal (1,3 g, 23 mmol) a NaCNBH₃ (0,15 g, 2,3 mmol). Roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě, čímž vznikla žádaná sloučenina při výtěžnosti 97% podle měření GC. Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo a reziduum bylo zpracováno extrakcí, čímž vzniklo 0,7 g sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

GC-MS (70eV) M=321 (40%).

c) (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8.-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran • * * · v·· ♦ · · ···· · ·♦ · ♦ ·· · ♦ · ·

HC1 sůl (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H1 -benzopyranu byla připravena přidáním většího množství éterového roztoku HC1 do éterového roztoku báze. Rozpouštědlo bylo odpařeno in vacuo a reziduum bylo rozpuštěno v 48% roztoku HBr (20 ml). Roztok byl míchán při 120°C po dobu 1,5 hodiny. Roztok byl neutralizován pečlivým přidáním koncentrovaného čpavku. Zpracování extrakcí dalo hnědý olej, který byl filtrován přes křemennou zátku (jako eluent byl použit octan etylnatý). Sloučenina uvedená v titulku byla izolována ve formě nažloutlého oleje.

GC-MS (70eV) M= 307 (40%).

d) (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran byl rozpuštěn v dietyléteru (30 ml). Dále byl přidán trietylamin (0,8 g, 8 mmol). Roztok byl ochlazen na -20°C. Po kapkách byl po dobu 5 minut přidáván anhydrid trifluorometansulfonátu (0,8 g, 2,8 mmol) rozpuštěný v dietyléteru (10 ml). Po míchání po dobu 30 minut byla tmavě hnědá směs vylita do vody. Organická vrstva byla oddělena.

Světelná chromatografie (EtOAC / hexan 1+1 jako eluent) dala 0,8 g sloučeniny uvedené v titulku ve formě žlutého oleje.

GC-MS (70eV) M= 439 (20%).

e) Metyl (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran- 5 -karboxylát (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (0,8 g, 1,8 mmol) (4), DMF (30 ml), trietylamin (0,5 g, 5 mmol), metanol (0,8 g, 13 mmol), octan II paládia (30 mg, 0,14 mmol) a l,3-bis(difenylfosfino)propan (60 mg, 0,14 mmol) byly umístěny v kádince s kulatým dnem. Roztok byl míchán při

75°C po dobu 4 hodin v atmosféře oxidu uhelnatého. Po odpaření rozpouštědla in vacuo a podrobení surového produktu světelné chromatografií bylo izolováno 0,6 g sloučeniny uvedené v titulku (76% výtěžnost) ve formě bezbarvého oleje.

• · · · • ·

GC-MS (70eV) M= 349 (30%).

f) (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

Metyl (R)-3-(N-cyklohexyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (5) (0,6 g, 1,7 mmol) byl podroben alkalické hydrolýze (2% KOH v EtOH, refluxovaný po dobu 2 hodin). Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Surová kyselina byla zpracována SOCI2 (při pokojové teplotě po dobu 5 minut), čímž vzniknul kyselý chlorid, jenž byl po odstranění přebytečného SOC1₂ in vacuo přidán do koncentrovaného čpavku, čímž vznikl amid. Surový produkt byl izolován a vyčištěn světelnou chromatografií.

Sůl HCL byla připravena přidáním většího množství éterového roztoku HCI do éterového roztoku čisté báze, čímž vznikla sloučenina uvedená v titulku (86 mg, 14% výtěžnost) ve formě bílých krystalů. Mp: 75°C.

[a]²⁰ _D (báze) = -73°(C=0,2, CH₂C1₂) GC-MS (70eV) M=334 (35%).

Přiklad 9 (R)-5-karbamoyl-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran

a) (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran

K roztoku (R)-3-amino-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-l-benzopyranu (0,7 g, 3,4 mmol), cyklopentanonu (0,7 g, 8,3 mmol) a HOAc (0,2 g, 3,5 mmol) v metanolu (25 ml) byl po dávkách za pokojové teploty přidán NaCNBHj (0,7 g, 10 mmol). Roztok byl přes noc míchán při pokojové teplotě. Metanol byl odpařen. Reziduum bylo rozpuštěno v EtOAc a promyto vodou. Organická vrstva byla vysušena Na₂SO₄ a rozpouštědlo bylo odpařeno, čímž vzniklo 0,9 g (100% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje. GC zjistila čistotu 99,6.

GC-MS (70eV) M=265 (30%).

• · · · • · « ·

b) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-1 - benzopyran

K roztoku (R)-3-(N-cyklopentylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyranu (0,9 g, 3,4 mmol), HOAc (0,22 g, 3,6 mmol) a cyklobutanonu (2 g, 30 mmol) v metanolu (25 ml) byl po dávkách za pokojové teploty přidán NaCNBH₃ (1 g, 16 mmol). Po míchání po dobu 4 dnů zjistila GC 37% produktu. Hodnota pH byla upravena na 5 (HOAc) a byl přidán další cyklobutanon (1 g, 15 mmol). Po míchání po dobu dalších 6 dnů zjistila GC 64% produktu. Rozpouštědlo bylo odpařeno a reziduum zpracováno extrakcí. Světelná chromatografie (EtOAc/P-éter, 1+1) dala 0,53 g (53% výtěžnost) sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

GC-MS (70eV) M=319 (3%).

c) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-methoxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran (0,53 g, 1,6 mmol) byl rozpuštěn v 47% roztoku HBr (15 ml) a byl míchán při 120°C po dobu 1,5 hodiny. Roztok byl zchlazen přidáním ledu a alkalizován 14 M čpavku. Zpracování extrakcí dalo 0,5 g sloučeniny uvedené v titulku ve formě nahnědlého oleje. IR měření ukázalo typický pás OH při 3654 cm¹.

d) (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-

3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-hydroxy-3,4-dihydro-2H-lbenzopyran byl rozpuštěn ve směsi dietyléteru a metylén chloridu (90+10, 20 ml) a do roztoku byl přidán trietylamin (0,7 g, 7 mmol) a směs byla ochlazena na -20°C. Po kapkách byl po dobu 5 minut přidáván anhydrid trifluorometansulfonátu (0,85 g, 3 mmol) rozpuštěný v dietyléteru (10 ml). Po míchání po dobu 30 minut byla tmavě hnědá směs vylita do vody.

Rozpouštědlo bylo odpařeno a reziduum rozpuštěno v hexanu a zpracováno aktivním uhlím.

• ♦ • · · · • · • · • · «

Filtrace přes celit a odpaření rozpouštědla dalo 0,67 g sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

GC-MS (70eV) M= 437 (1%).

e) Metyl (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l b enzopyran- 5 -karboxylát (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-5-trifluoromethylsulfonyloxy-3,4dihydro-2H-l-benzopyran (0,67 g, 1,5 mmol) (4), DMF (20 ml), trietylamin (0,6 g, 6 mmol), metanol (0,8 g, 13 mmol), octan II paládia (22 mg, 0,1 mmol) a 1,3bis(difenylfosfino)-propan (44 mg, 0,1 mmol) byly umístěny v kádince s kulatým dnem. Roztok byl míchán při 75°C po dobu 4 hodin v atmosféře oxidu uhelnatého. Rozpouštědlo bylo odpařeno in vacuo, reziduum rozpuštěno v dietyléteru a zpracováno aktivním uhlím. Odpaření rozpouštědla dalo 380 mg sloučeniny uvedené v titulku ve formě bezbarvého oleje.

GC-MS (70eV) M= 347 (3%).

f) (R)-5-karbamoyI-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-

1-benzopyran

Metyl (R)-3-(N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 benzopyran-5-karboxylát (1,4 g, 4mmol) byl hydrolyzován (6 M HCI, refluxovaná po dobu 2 hodin). Rozpouštědlo bylo odstraněno in vacuo. Po sušení na vzduchu přes noc byl surový kyselý amino hydrochlorid zpracován SOCbfpři pokojové teplotě po dobu 5 minut), čímž vznikl kyselý chlorid, jenž byl po odstranění přebytku SOChin vacuo rozpuštěn v CH2CI2 a přidán do koncentrovaného čpavku, čímž vznikl amid. Surový produkt byl izolován a vyčištěn světelnou chromatografií, čímž vzniklo 220 mg bezbarvého oleje, jenž krystalizoval během ustalování.

Rekrystalizace ze směsi dietyléteru a hexanu dala bílé krystalky sloučeniny uvedené v titulku Výtěžek: 110 mg. Mp: 138-140°C.

Claims

Zkušební metody (i) Zkouška vazby receptorů 5-HTi_A

Pro zjištění afinity receptorů 5-HTi_Amůže být použita níže popsaná zkouška s použitím mozku krysy.

Příprava tkáně: Cerebrálni cortex a hippocampus z krys Sprague-Dawley jsou rozřezány a homogenizovány v 15 ml ledového 50 mM tlumicího roztoku Tris-HCl, pH 7,5, který obsahuje 4,0 mM CaCh a 5,7 mM kyseliny askorbové („buffer A“) pomocí přístroje Ultra-Turrax (Janke & Kunkel, Staufen, Německo) po dobu 10 sekund. Po centrifugaci po dobu 12,5 minut při 17 000 ot/min (39800 x gv centrifuze Beckman s chlazeným rotorem JA-17 (Beckman, Palo Alto, Kalilfomie, USA)) jsou pelety suspendovány v 5 ml ledově chladné 0,32 M sacharóze a homogenizovány po dobu 10 s. Homogenizované vzorky jsou uchovány zmrazené na teplotě -70°C. Při použití jsou zředěny pomocí bufferu A na 8 mg tkáně / ml a homogenizovány po dobu 10 s. Homogenizované vzorky tkáně jsou inkubovány po dobu 10 minut při 37°C a potom dodávány s 10 pm pargylinu, a následuje reinkubace po dobu 10 minut.

Následující zkouška vazby vychází z článku Peroutka, J. Neurochem. 47, 529-540, (1986). Tato zkouška v podstatě měří schopnost určité konkurující molekuly zabraňovat vazbě ³H-8-OH-DPAT k receptorům 5-HT_1A. Inkubační směs (2 ml) obsahovala Ή-8-0ΗDPAT (0,25 až 8 nM), žádaná koncentrace zkušební (konkurující) sloučeniny a homogenizovaný preparát 5 mg / ml v bufferu Tris-CHl, pH 7,5, obsahujícího 4,0 mM CaCL a 5,7 mM kyseliny askorbové. Je analyzováno 6 různých koncentrací ³H-8-OHDPAT. Zkoušky vazby začínají přidáním homogenizovaného tkáňového preparátu a následuje homogenizace po dobu 10 minut při 37°C. Inkubační směs je filtrována přes skleněné filtry Whatman GF/B pomocí zařízení Brandel Cell Harvester (Gaitherburg, Maryland, USA). Filtry jsou dvakrát vymyty 5 ml ledově chladného 50mM bufferu TrisCHl, pH 7,5 a změřeny 5 ml Ultima Gold™ (Packard) ve scintilační čítači Beckman LS • · • · • · • · • · • · · · • 4

3801. Nespecifická vazba je měřena přidáním 10 pm 5-HT k reakční směsi. Vazební data jsou zpracována nelineární počítačovou analýzou na nejmenší čtverce (Munson a Rodbard, Anal. Biochem. 107, 220-239, (1980)).

(ii) Antagonismus 8-OH-DPAT vyvolaný snížením syntézy 5-HT prostřednictvím blokády presynaptických receptorů 5-HTi_A.

Rychlost syntézy 5-hydroxytryptaminu (5-HT: serotonin) je měřena jako akumulace 5-hydroxytryptophanu (5-HTP) a rychlost syntézy dopaminu / noradrenalinu (DA / NA) je měřena jako akumulace (DOPA) 3,4-dihydroxyfenylalaninu, (5-HTP), během 30 minut po inhibici aromatické dekarboxylázy L-amino kyseliny pomocí m-hydroxybenzylhydrazinu 2 HC1 (100 mg / kg i.p.); zakoupen u firmy Sigma. Zkušební látka je podávána 75 minut, 8OH-DPAT 60 minut a m-hydroxybenzylhydrazin 2 HC1 30 minut před zabitím krys. Části mozku, určené ke zkoušce jsou rychle rozřezány, zmrazený suchým ledem a uloženy při 70°C až do zkoušky.

DOPA, 5-HTP a jejich metabolity jsou extrahovány z mozkové tkáně pomocí kyseliny chloristé, odpovídající internímu standardu (Isoprenalin). Po povrchu plovoucí část z homogenátu mozku je vstříknuta do tekutiny chromatografu skládajícího se z předběžného a analytického válce. Katechol- a indolaminy jsou detekovány koulometrickou oxidací.

(iii) Antagonismus akutního inhibitoru zpětné absorpce 5-HT (SSRI) vyvolaný snížením výměny 5-HT prostřednictvím selektivních protilátek 5-HTi_A.

Zvířata

Samci krys Sprague-Dawley (B&K International AB, Sollentuna, Švédsko), vážící

180-220 g, jsou umístěni v klecích po 5 v kontrolované teplotě (21°C) a vlhkosti s 12 hodinovým cyklem světlo / tma (rozsvěcí se v šest ráno). Potrava a voda jsou volně k dispozici. Jsou chováni v těchto podmínkách nejméně čtyři dny před experimentem.

Sloučeniny jsou podávány orálně (po) nebo subkutánně (sc).

Výměna 5-HT

Skupinám po 5 krysách je podávána protilátka 5-HTia 15 minut před injekcí inhibitoru zpětné absorpce 5-HT (např. norzimeldinu = (Z)-3-(4-bromofenyl)-N-metyl-3-(3pyridylj-allylaminu, dihydrochlorid monohydrátu). m-hydroxybenzylhydrazin 2 HC1 (NSD 1015) byl podán injekcí 30 minut později a krysy byly zabily gilotinou 30 minut po injekci inhibitoru zpětné absorpce (NSD 1015). Mozky jsou rychle rozřezány a rozřezané oblasti jsou ihned zmrazený suchým ledem. Vzorky jsou uloženy při -70°C až do zkoušky.

Endogenní sloučeniny, 5-HT a 5-HT1A v různých oblastech mozku, jsou stanoveny užitím kapalné chromatografíe s vysokým výkonem (high performance liquid chromatography, HPLC) s elektromagnetickou detekcí podle metody Magnussona (J. Chromatogr. 1980; 221: 237-247). Pohyblivou fází je fosfátový buffer 0,1 M (hodnota pH 2,5): metanol: acetonitril - 89 : 9 : 2 v/v, obsahující 1 nM octylsulfátu. Zmrazené vzorky jsou váženy a homogenizovány v 0,1 M kyseliny chloristé, obsahující 2,5 nM hydrosiřičatanu sodného, 1 nM kyseliny etyléndiamintetraoctové (EDTA). Plovoucí části jsou podávány injekcí přímo do válce Supercosil Cis (3 μΜ), spojeného s detektorem (ESA Coulochem 5100A), nastaveným na 0,05 / 0,30 V. Katechol- a indolaminy jsou detekovány koulometrickou oxidací.

Obrázek 1 ukazuje, že při blokování somatodendritických receptorů selektivní protilátkou, jako je (R)-3-(N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-5-N-metylkarbamoyl-

3,4-dihydro-2H-l-benzopyran (Příklad 1; NDL 249) dávkově závislý přírůstek antidepresivní účinnosti blokátorů zpětné absorpce 5-HT umožněním, aby serptoniniergická zakončení uvolnila větší množství 5-HT a tím vyvolala bázi pro rychlý náběh terapeutické akce.

(b), což je selektivní protilátka 5-HTia, podle vzorce kde

Ri je n-propyl nebo cyklobutyl;

Říje isopropyl, terciární butyl, cyklobutyl, cyklopentyl nebo cyklohexyl;

Rs je vodík;

R4 je vodík nebo metyl;

uvedená protilátka 5-HTi_A je ve formě svého R-enantiomeru a uvedené složky (a) a (b) jsou ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.
2. Kombinace podle nároku 1, kde pro selektivní protilátku 5-HTi_Aje (R)-3-(N-tertbutyl-N-n-propylamino)-8-karbamoyl-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.
3. Kombinace podle nároku 1, kde pro selektivní protilátku 5-HTia je (R)-5karbamoyl-3-(N-N-dicyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-1 -benzopyran ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.

• · ·· · ···· · · ·> 9 ·« *· * ♦ · · • * ·· · · · ·«'» · • » ··· * ·««· « ·· · · · * · · · 9
4. Kombinace podle nároku 1, kde pro selektivní protilátku 5-HTi_A je (R)-5karbamoyl-3-(N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.
5. Kombinace podle nároku 1, kde pro selektivní protilátku 5-HTi_Aje (R)-5karbamoyl-3-(N-N-cyklobutyl-N-isopropylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.
6. Kombinace podle nároku 1, kde pro selektivní protilátku 5-HTj_A je (R)-5karbamoyl-3-(N-N-cyklopentyl-N-n-propylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.
7. Kombinace podle nároku 1, kde pro selektivní protilátku 5-HTj_A je (R)-5karbamoyl-3-(N-N-cyklopentyl-N-cyklobutylamino)-8-fluoro-3,4-dihydro-2H-l-benzopyran ve formě volné báze nebo jejích farmaceuticky přijatelných solí.
8. Kombinace podle kteréhokoli z nároků 1-7, kde inhibitor zpětné absorpce 5-HT jsou látky fluoxetine, paroxitine, citalopram, clomipramine, sertraline nebo fluvoxamine.
9. Použití kombinace podle kteréhokoli z nároků 1-8 pro výrobu léků pro léčbu emočních poruch.
10. Použití kombinace podle nároku 9 pro výrobu léků pro léčbu deprese.
11. Metoda léčení emočních poruch podáváním kterékoli z kombinací definovaných v nárocích 1-8 pacientovi trpícímu těmito poruchami.

• v • · · «· t * ·· ·· » « · · « ·

JUDr. Iv - — — 3-K

Advol·-: ·.>:> a íkiuiuui kancelář

160 ϋ'ι krah: O :<:> nice sv. Jiří 9

P.O. BO.X 27Ό, lni) 4 i t-rana 6 51

Česka republika
12. Metoda léčení deprese podáváním kterékoli z kombinací definovaných v nárocích

1-8 pacientovi trpícímu depresí.
13. Farmaceutické složení pro užití při léčení emočních poruch, kde aktivní látkou je kombinace definovaná v kterémkoli z nároků 1-8 případně ve spojení s rozpouštědly, excipienty nebo inertními nosiči.
14. Farmaceutické složení podle nároku 13 pro užití při léčení deprese.
15. Proces přípravy kombinace podle nároku 1, kde inhibitor zpětné absorpce 5-HT je začleněn do stejného farmaceutického složení jako selektivní protilátka 5-HT_{l v}jak je definovaná v kterémkoli z nároků 1-8.
16. Proces přípravy kombinace podle nároku 1, kde inhibitor zpětné absorpce 5-HT je ve farmaceutickém složení a selektivní protilátka 5-HT_]Ajak je definovaná v kterémkoli z nároků 1-8 je ve farmaceutickém složení.
17. Souprava obsahující kombinaci první složky (a), což je inhibitor zpětné absorpce

5-HT, a druhé složky (b), což je selektivní protilátka 5-HT]_A podle nároku 1, případně s návodem k použití.
18. Metoda pro zlepšení náběhu terapeutické aktivity společnou administrací první složky (a), což je inhibitor zpětné absorpce 5-HT, a druhé složky (b), což je selektivní protilátka 5-HT_iA popsaná v nároku 1.