SK13222001A3

SK13222001A3 - Kompozícia obsahujúca derivát rezorcinolu

Info

Publication number: SK13222001A3
Application number: SK1322-2001A
Authority: SK
Inventors: Eric William Collington
Original assignee: Pfizer Inc.
Priority date: 1999-03-22
Filing date: 2000-03-14
Publication date: 2002-08-06
Also published as: PA8492001A1; NZ513453A; HRP20010696A2; CN1344152A; PL350905A1; WO2000056279A1; EP1165031B1; IL144848A0; CA2366623C; CA2366623A1; ZA200106681B; CZ298939B6; AU2823000A; HN2000000033A; HK1044478B; AU765209B2; PE20001567A1; CN1213726C; CO5160291A1; ES2241580T3

Description

Oblasť techniky

Vynález sa vzťahuje na použitie derivátu rezorcinolu, t.j. 4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanolu, ako prostriedku na zosvetlenie kože.

Doterajší stav techniky

Výrazy „prostriedok na zosvetlenie a „prostriedok na depigmentáciu používané v tejto prihláške sú navzájom zameniteľné.

Farba kože človeka je určená komplexom postupných bunečných procesov prebiehajúcich vo zvláštnej populácii buniek nazývaných melanocyty. Melanocyty sa vyskytujú v spodnej časti epidermu, a ich funkciou je syntetizovať pigment melanín, ktorý chráni povrch tela pred škodlivými účinkami ultrafialového žiarenia.

Pri vystavení kože ultrafialovému žiareniu akým je slnečné svetlo, melanocyty zvyšujú svoju produkciu melanínu. Melanín sa ukladá v melanozómoch, čo sú vezikuly, vyskytujúce sa v bunke. Melanozómy prenikajú z bunky a dostávajú sa na povrch kože v keranocytoch, v ktorých melanozómy obsahujúce melanín ukladajú. Konečným výsledkom je, že viditeľné vrstvy kože majú hnedé sfarbenie obvykle označované ako „trieslové. Vizuálne patrná tmavosť kože je úmerná množstvu melanínu syntetizovaného melanocytmi a prevedeného do keratínocytov.

Mechanizmus vzniku pigmentácie kože, t.j. melanogenézie je zvlášť zložitý proces ktorý schematicky zahŕňa nasledujúce hlavné stupne: tyrosín -> L-Dopa -> dopachinón -> dopachróm -> melaníny. Prvé dve reakcie uvedenej série sú katalyzovaná enzýmom tyrosinázou. Aktivita tyrosinázy vedúca na tvorbu melanínu záverečne vedúcej na sfarbenie pokožky je podporovaná účinkom hormónu stimulujúceho α-melanocyty alebo UV-žiarením. Je už dobre známe, že k pigmentačnému účinku nejakej substancie dochádza, keď táto substancia pôsobí priamo na vitalitu epidermálnych melanocytov v ktorých melanogenézia obvykle prebieha a/alebo keď interferuje s jedným zo stupňov biosyntézy melanínu. Účinné zlúčeniny použité v rôznych spôsoboch a kompozíciách podľa vynálezu inhibujú tyrosinázu a tým inhibujú alebo znižujú biosyntézu melanínu.

Velmi potrebné sú prostriedky umožňujúce obnovu kože určitých depozitných plôch ako sú škvrny alebo pehy na normálny vzhľad. Na uvedený účel už bolo vyvinuté a sú známe spôsoby a na trhu je dostupných viac prostriedkov na tento účel. Príklady týchto spôsobov zahŕňajú a) spôsob orálneho podávania vysokých dávok vitamínu C (kyseliny L-askorbovej) ktorý má vysokú schopnosť redukovať; b) spôsob zahŕňajúci parenterálne podávanie glutatiónu; c) spôsob, pri ktorom sa podáva peroxid, ako je peroxid vodíka, peroxid zinku, peroxid sodíka a podobne, kde sa predpokladá bieliaci účinok na melanín; a d) spôsob, kde vitamín C alebo cysteín sa podáva topicky vo forme masti, krému alebo umývača alebo v podobnej forme. Pri vitamíne C dochádza na problémy so stabilitou, kde vitamín C je v systémoch obsahujúcich vodu natolko nestabilný že dochádza na zmeny farby a na zápach. Tiólové zlúčeniny ako glutatión a cysteín nemajú uspokojivý depigmentačný účinok pretože na vývoj tohto účinku dochádza velmi pomaly.

V súčasnej dobe sa ako depigmentačné prostriedky najviac používajú prostriedky obsahujúce hydrochinón a jeho deriváty, najmä étery ako je hydrochinón (monometyl) éter. Je však známe, že uvedené zlúčeniny aj keď sú účinné, majú vedľajšie účinky ktoré môžu byť škodlivé. Hydrochinón, ktorého použitie je obmedzené na koncentráciu 2 %, má účinky ako dráždivé tak cytotoxické voči melanocytom.

V U.S. patente č. 4,526,179 sú opísané určité estery hydrochinónu s mastnými kyselinami, ktoré majú vhodnú účinnosť a sú menej dráždivé a majú lepšiu stabilitu ako hydrochinón.

V japonskej patentovej prihláške č. 27909/86 sú opísané ďalšie deriváty hydrochinónu, ktoré nevykazujú nedostatky ktoré má hydrochinón ale majú relatívne nižšiu účinnosť.

V U.S. patente č. 5, 449, 518 sú opísané deriváty 2,5dihydroxyfenylkarboxylovej kyseliny ako prostriedky na depigmentáciu kože.

V európskej patentovej prihláške EP 341664A1 sú opísané určité deriváty rezorcinolu ako inhibítory tyrosinázy a prostriedky na depigmentáciu kože.

Použitie topických prostriedkov na depigmentáciu s vhodnou účinnosťou a bez nežiaducich vedľajších účinkov je zvlášť žiadúce v nasledujúcich prípadoch: pri . regionálnej hyperpigmentácii vyvolanej hyperaktivitou melanocytov ako je idiopatická melazma objavujúca sa buď v tehotenstve (maskované tehotenstvo alebo chloazma) alebo sekundárne po estrogénprogesterónovej antikoncepcii; pri lokálnej hyperpigmentácii vyvolanej benígnou hyperaktivitou a proliferáciou melanocytov ako je lentigo senilis alebo pečeňové škvrny; pri vedľajšej hyperpigmentácii po fotosenzibilizácii pri hojení rán a jazvení; a pri určitých formách leukodermy ako je vitiligo, kde pokiaľ nemôže dôjsť na repigmentáciu poškodenej kože, zostatkové zóny normálnej kože sa depigmentujú a celkový povrch kože je potom homogénne biely.

Zlúčenina vzorca (I), t.j. 4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanol, a jej farmaceutický prijateľné soli ktoré sa používajú v rôznych spôsoboch podľa vynálezu a v kompozíciách podľa vynálezu, sú vhodné na liečbu hore opísaných dermatologických stavov a tiež na liečbu ďalších dermatologických stavov z ktorých niektoré sú opísané ďalej v tomto opise prihlášky vynálezu, pacienta vyžadujúceho liečenie zo zdravotných alebo z kozmetických dôvodov vedúce na zosvetlenie kože alebo na redukciu pigmentácie kože vyvolanej daným stavom.

4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanol a jeho farmaceutický prijatelné soli sú tiež vhodné na liečenie zápalových chorôb ako je psoriáza a akné a na liečbu lupín.

Podstata vynálezu

Vynález sa vzťahuje na použitie 4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanolu vzorca (I)

OH

Vynález sa tiež vzťahuje na použitie farmaceutický prijateľných solí zlúčeniny vzorca (I).

Vynález sa ďalej vzťahuje na farmaceutickú kompozíciu na topickú aplikáciu na zosvetlenie kože alebo na redukciu pigmentácie kože človeka, . ktorá obsahuje také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijatelné soli, ktoré je účinné na zosvetlenie kože alebo na zníženie pigmentácie kože a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa tiež vzťahuje na spôsob zosvetlovania kože alebo zníženie pigmentácie človeka ktorý zahŕňa podávanie danému pacientovi takého množstva zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijatelné soli ktoré je účinné na zosvetlenie kože alebo na zníženie pigmentácie kože.

Vynález sa tiež vzťahuje na topickú farmaceutickú kompozíciu na inhibíciu tyrosinkinázy človeka ktorá obsahuje také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijatelné soli ktoré, je účinné na inhibíciu tyrosinkinázy a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa rovnako vzťahuje na spôsob inhibicie tyrosinkinázy človeka ktorý zahŕňa podávanie danému pacientovi také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijatelné soli ktoré je účinné na inhibíciu tyrosinkinázy.

Vynález sa tiež vzťahuje na topickú farmaceutickú kompozíciu na zosvetlenie kože alebo na zníženie pigmentácie kože človeka, ktorá obsahuje také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijatelné soli ktoré je účinné na inhibíciu tyrosinkinázy a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa tiež vzťahuje na spôsob zosvetlenia kože alebo redukcie pigmentu človeka, ktorý zahŕňa podávanie danému pacientovi také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľné soli, ktoré je účinné na inhibíciu tyrosinkinázy.

Vynález sa tiež vzťahuje na farmaceutickú kompozíciu na topické alebo transdermálne podanie na liečbu zápalovej choroby človeka ako je psoriáza, dermatitída alebo akné alebo lupiny, ktorá obsahuje také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľné soli ktoré je účinné na liečenie danej choroby alebo stavu a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa tiež vzťahuje na spôsob liečenia zápalových chorôb človeka ako je psoriáza, dermatitída alebo akné alebo lupiny, ktorý zahŕňa podávanie danému pacientovi také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľné soli ktoré je účinné na liečenie danej choroby alebo stavu.

Vynález sa tiež vzťahuje na farmaceutickú kompozíciu na topické alebo transdermálne podanie na liečbu zápalovej choroby človeka ako je psoriáza, dermatitída alebo akné alebo lupiny, ktorá obsahuje také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľné soli ktoré je účinné na inhibíciu tyrosinkinázy a farmaceutický prijateľný nosič.

Vynález sa tiež vzťahuje na spôsob liečenia zápalových chorôb človeka ako je psoriáza, dermatitída alebo akné alebo lupiny, ktorý zahŕňa podávanie danému.pacientovi také množstvo zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľné soli ktoré je účinné na inhibíciu tyrosinkinázy.

Zlúčenina vzorca (I), t.j. 4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanol môže existovať v rôznych diastereomérnych formách. Vynález zahŕňa všetky stereoizoméry 4-(2,4dihydroxyfenyl)cyklohexanolu a ich zmesi a všetky farmaceutické kompozície a spôsoby liečenia opísané hore ktoré ich obsahujú alebo v ktorých sa používajú.

Vzorec (I) zahŕňa tiež zlúčeniny majúce hore uvedený vzorec až na skutočnosť, že jeden alebo viac atómov vodíka, uhlíka alebo iných atómov je nahradených ich izotopmi. Tieto zlúčeniny môžu byť vhodné vo výskume a ako diagnostické prostriedky vo farmakokinetických štúdiách metabolizmu a v stanoveniach väzby.

Podrobný opis vynálezu

Zlúčeninu vzorca (I) môžeme pripraviť podľa nižšie uvedenej reakčnej schémy a nasledujúceho opisu.

Schéma

Zlúčeninu vzorca (1) na hore uvedenej schéme môžeme pripraviť zavedením chrániacich skupín na obchodno dostupný 4brómrezorcinol. Vhodnú chrániacu skupinu ako je metoxymetylová skupina (MOM) môžeme zaviesť obvyklými spôsobmi všeobecne známymi pracovníkom v tomto odbore. Alkyláciu 4brómrezorcinolu môžeme napríklad uskutočniť použitím dvoch ekvivalentov metoxymetylchloridu v prítomnosti diizopropylamínu v halogénovanom rozpúšťadle pri tepote od asi 0 °C do teploty miestnosti.

Zlúčenina vzorca (2) je známa a je obchodne dostupná. Zlúčeninu vzorca (3) môžeme pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca (1) s butillítiom za prítomnosti Ν,Ν,Ν',Ν'tetrametyletyléndiamínu v éterovom rozpúšťadle s následným prídavkom zlúčeniny (2) . Dehydratáciou zlúčeniny vzorca (3.) za štandarných podmienok, napríklad zahrievaním zlúčeniny vzorca (3) pri asi 110 °C v Dean-Starkovom destilačnom zariadení za prítomnosti kyseliny gáforsulfónovej vo vhodnom rozpúšťadle (napríklad v toluéne) sa získa zlúčenina vzorca (4). Hydrogenáciou za štandardných podmienok, napríklad pomocou plynného vodíka a palládia na aktívnom uhlí v etanole sa získa zlúčenina vzorca (5) . Žobraním chrániacich skupín za vhodných podmienok sa získa rezorcinol vzorca (6). Zlúčeninu vzorca (6) môžeme ďalej derivátizovať štandardnými spôsobmi v odbore všeobecne známymi na derivát rezorcinolu vzorca (I). Zlúčeninu vzorca (I) môžeme pripraviť napríklad redukciou zlúčeniny vzorca (6) redukčným prostriedkom ako je tetrahydroboritan sodný vo vhodnom rozpúšťadle ako je etanol pri teplote v rozmedzí od 0 °C do teploty miestnosti.

Zlúčenina vzorca (I) je sama o sebe málo kyslá a môže tvoriť soli s bázami obsahujúcimi farmaceutický prijatelné katióny. Príklady týchto solí zahŕňajú soli alkalických kovov a soli kovov alkalických zemín a predovšetkým soli sodné a draselné. Uvedené soli sa pripravujú obvyklými spôsobmi. Chemické bázy vhodné ako činidlá na prípravu farmaceutický prijateľných solí zlúčeniny podľa vynálezu s bázami sú bázy tvoriace so zlúčeninou vzorca (I) netoxické soli. Uvedené netoxické soli zahŕňajú soli obsahujúce farmaceutický prijatelné katióny ako je sodík, draslík, vápnik, horčík atď. Uvedené soli môžeme lahko pripraviť spracovaním zodpovedajúcej kyslej zlúčeniny s vodným roztokom obsahujúcim požadované farmaceutický prijateľné katióny a odparením získaného roztoku do sucha, výhodne za zníženého tlaku. Alternatívne ich môžeme pripraviť zmiesením roztoku kyslej zlúčeniny v alkanole s roztokom alkoxidu alkalického kovu v alkanole a odparením získaného roztoku do sucha. V obidvoch prípadoch sa výhodnejšie použijú stechiometrické množstvá reaktantov aby sa zaistil kvantitatívny priebeh reakcie a maximálny výťažok požadovaného konečného produktu.

Zlúčenina podľa vynálezu, t.j. 4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanol a jeho farmaceutický prijateľné soli (ďalej onačované ako „účinné zlúčeniny na použitie podľa vynálezu sú vhodné na liečenie porúch pigmentácie ľudí zahŕňajúcich solárne lentigo aj lentigo simplex (vrátane stareckých/pečeňových škvŕn), melazma/chloazma s pozápalovou hyperpigmentáciou. Uvedené zlúčeniny redukujú hladiny melanínu v koži inhibíciou tvorby melanínu, a to či je už melanín produkovaný konštitučné alebo odozvou na ožiarenie UV lúčmi (ako pri vystavení slnečným lúčom). Účinné zlúčeniny na použitie podľa vynálezu môžeme teda použiť na redukciu obsahu melanínu v koži v nepatologických prípadoch s cielom vyvolať svetlejší odtieň kože podľa priania zákazníka. Uvedené zlúčeniny môžeme tiež použiť v kombinácii s prostriedkami na „peeling (zahŕňajúcich prostriedky na použitie na tvár obsahujúce kyselinu glykólovú alebo kyselinu trichlóroctovú) na získanie svetlejšieho odtieňa kože a na prevenciu repigmentácie.

Účinné zlúčeniny na použitie podľa vynálezu môžeme tiež použiť v kombinácii so slnečnými filtrami (s filtrami na žiarenie UVA alebo UVB) na prevenciu repigmentácie, na ochranu pred stmavnutím indukovaným slnečným alebo UV žiarením alebo na zvýšenie ich schopnosti redukovať množstvo melaninu kože a ich bieliaceho účinku. Uvedené zlúčeniny môžeme kombinovať s kyselinou retinoovou alebo s jej derivátmi alebo so všetkými zlúčeninami ktoré inťeragujú s receptormi kyseliny retinoovej a urýchľujú alebo zvyšujú účinky zlúčenín na použitie podľa vynálezu na zníženie obsahu melaninu v koži alebo bieliaceho účinku na kožu.

Účinné zlúčeniny na použitie podľa vynálezu môžeme tiež použiť v kombinácii s kyselinou askorbovou a jej derivátmi, s ďalšími produktami na báze kyseliny askorbovej (ako je askorbát horečnatý) alebo s inými produktami ktoré majú antioxidačné vlastnosti (ako je resveratrol) na urýchlenie alebo zvýšenie schopnosti zlúčenín vhodných na použitie podľa vynálezu redukovať obsah melaninu v koži alebo zvýšiť ich bieliaci účinok.·

Vynález sa vzťahuje ako na spôsoby zosvetlovania kože alebo zníženie pigmentácie kože, kde zlúčeniny vhodné na použitie podľa vynálezu a jedna alebo viac účinných zložiek opísaných hore sa podávajú spoločne obsiahnuté v jednej farmaceutickej kompozícii, tak na spôsoby, kde sa uvedené zlúčeniny podávajú samostatne vo vhodnom podávacom režime navrhnutom na osožnú kombinačnú terapiu. Vhodný režim podávania liečiv, dávka každého podávaného liečiva a špecifické intervaly medzi dávkami jednotlivých liečiv sú závislé na špecifickej kombinácii účinných prostriedkov, stavu pacienta a podstate a závažnosti poruchy alebo stavu určeného na liečbu. Uvedené ďalšie účinné zložky sa obvykle podávajú v dávkach menších alebo rovnakých ktoré sú účinné v jednozložkových prípravkoch určených na topické podanie. Dávky uvedených účinných zložiek povolené FDA na podanie človeku sú verejne dostupné.

Účinné zlúčeniny na použitie podlá vynálezu sa všeobecne podávajú vo forme farmaceutickej kompozície obsahujúcej uvedenú zlúčeninu spoločne s farmaceutický prijateľným vehikulom alebo riedidlom. Uvedená kompozícia sa všeobecne pripraví obvykle používanými spôsobmi s použitím tuhých alebo tekutých vehikúl alebo riedidiel vhodných na dané topické podanie, vo forme roztokov, gélov, krémov, želé, pást, umývačov, mastí, balzámov a podobne. Ako vehikulum môžeme napríklad použiť roztok voda-alkohol, emulzie typu olej-voda alebo voda-olej, emulgovaný gél alebo dvojfázový systém. Výhodne sú kompozície podľa vynálezu vo forme umývačov, krémov, pleťových mliek, gélov, masiek, mikrosfér alebo nanosfér alebo vezikulárnych disperzií. V prípade vezikulárnych disperzií lipidy tvoriace vezikuly môžu byť ako iontového tak neiontového typu, alebo to môže byť zmes obidvoch typov.

Výraz „množstvo zlúčeniny vzorca (I) umožňujúci zosvetlenie kože alebo zníženie pigmentácie použitý v tomto texte a podobné výrazy znamenajú koncentrácie zlúčeniny ktoré umožňujú stanoviteľné zosvetlenie kože alebo redukciu pigmentácie človeka, zistiteľné niektorým zo známych spôsobov stanovenia.

Výraz „účinné množstvo zlúčeniny vzorca (I) na inhibíciu tyrosinázy použitý v tomto texte a podobné výrazy znamenajú množstvá alebo koncentrácie zlúčeniny ktoré umožňujú stanovitelnú inhibíciu aktivity tyrosinázy zistiteľnú niektorým zo známych spôsobov stanovenia.

Výraz „množstvo zlúčeniny vzorca (I) schopné liečiť zápalovú chorobu ako je psoriáza, dermatitída alebo akné alebo na liečbu lupov použitý v tomto texte alebo podobné výrazy, znamenajú množstvo zlúčeniny alebo koncentráciu zlúčeniny umožňujúcu stanovitelné zmiernenie, redukciu, elimináciu, spomalenie alebo prevenciu niektorého zo symptómov alebo stavu spojeného alebo vyvolaného uvedenou chorobou alebo stavom človeka, ktoré môžeme stanoviť niektorým zo známych spôsobov stanovenia.

V kompozíciách na depigmentáciu podlá vynálezu je koncentrácia účinných zlúčenín vhodných na použitie podlá výnálezu všeobecne v rozmedzí 0,01 až 10 %, výhodne je v rozmedzí 0,1 až 10 % vzladom na celkovú hmotnosť kompozície.

Kompozície podlá vynálezu môžu prípadne obsahovať zvlhčovači prostriedok, povrchovo aktívny prostriedok, keratolytikum, protizápalový prostriedok, komplexotvorný prostriedok, antioxidačný prostriedok,konzervačný prostriedok alebo slnečný filter alebo ich kombinácie.

Schopnosť účinných zlúčenín používaných podľa vynálezu inhibovať tyrosinázu môžeme stanoviť niektorým z nižšie uvedených spôsobov.

1. Stanovenie aktivity tyrosinázy (DOPA oxidázy) na bunkovom lyzáte:

Pri stanovení a v porovnávacom hodnotení s použitím bunkového lyzátu sa použije bunková línia ľudského melanómu SKMEL188 (získaná z Memoriál Sloan-Kettering). Pri stanovení sa hodnotené zlúčeniny a L-dihydroxyfenylalanín (L-DOPA) (100 μς/ιηΐ) inkubujú s bunkovým lyzátom obsahujúcim ľudskú tyrosinázu a po 8 hodinách sa uskutoční vyhodnotenie pri 405 nm. Účinnosť zlúčenín pri stanovení s DOPA oxidázou veľmi dobre koreluje s účinnosťou stanovenou s'pomocou tyrosínhydroxylázy s použitím ³H-tyrosínu ako substrátu. 4(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanol má v hore uvedenom stanovení IC50 0,2 μΜ.

2. Stanovenie melanínu v primárnych ľudských melanocytoch:

Hodnotené zlúčeniny sa inkubujú s primárnymi ľudskými melanocytmi v prítomnosti α-melanocyty stimulujúceho hormónu (a-MSH) 2-3 dni. Potom sa bunky rozložia hydroxidom sodným a natrium-dodecylsulfátom (SDS) a vyhodnotia sa signály zodpovedajúce melanínu pri 405 nm. Alternatívne sa k bunkám pridá ¹⁴C-DOPA s inhibítormi tyrosinázy a ¹⁴C-melanín nerozpustný v kyseline sa kvanitatívne stanoví scintilačným počítačom. Hodnota IC50 vyjadruje inhibičnú účinnosť zlúčeniny v syntéze nového melanínu stimulovanej a-MSH.

3. Stanovenie s tyrosinkinázou (TK):

TK stanovenie môžeme uskutočniť s použitím prečistenej tyrosinkinázovej domény c-met, erb-B2 alebo IGF-r. Pri stanovení sa použije špecifická protilátka proti fosforylovanému tyrosínovému zvyšku. Kolorimetrické signály sa generujú pomocou chrenovej peroxidázy ktorá sa konjuguje s protilátkou.

4. Model ekvivalentnej ľudskej kože:

Zmes ľudských melanocytov a keratínocytov sa kultivuje v medzifáze vzduch-tekutina. Tkanivová kultúra vytvorí trojrozmernú štruktúru ktorá sa histologický a mikroskopicky podobá epidermu kože. Na horný povrch buniek sa nanesie hodnotená zlúčenina čim sa stimuluje topické podanie liečiva. Po trojdennej inkubácii s hodnotenými zlúčeninami (10 pm) sa bunky intenzívne premyjú a prevedú sa na lyzát na stanovenie DOPA-oxidázy.

5. Stanovenie IL-1 (stanovenie interleukínu-1):

Na hodnotenie vplyvu skúšanej zlúčeniny na sekréciu IL-1 na modeli ekvivalentnom ľudskej koži môžeme použiť IL-l-ELISA stanovenie (systém R&D). IL-Ια je protizápalový cytokín a má svoju úlohu v zápale kože indukovanom UV žiarením.

6. Štúdia in vivo:

V štúdii môžeme použiť čierne alebo tmavo hnedé morčence s homogénne sfarbenou kožou- Zvieratám sa podáva dvakrát denne roztok testovanej zlúčeniny (5% v etanole:propylénglykolu 70:30) a vehikulá päť dní v týždni po dobu 4-8 týždňov. V tejto štúdii sa zistilo, že 4-(2,4dihydroxyfenyl)cyklohexanol pôsobí depigmentáciu kože.

Vynález je ďalej opísaný nasledujúcim príkladom. Vynález však nie je nijako obmedzený špecifickými podrobnosťami uvedenými v tomto príklade. Spektrá protónovej jadrovej magnetickej rezonancie (^XH NMR) sú merané v roztokoch d₆-DMSO, CDCI3 alebo d₄-MeOH a polohy pikov sú vyjadrené v dieloch na milión dielov (ppm) vzhľadom na tetrametylsilanu (TMS). Tvary pikov sú označované nasledovne: s, singlet; d, dublet; t, triplet; q, kvartet; m, multiplet; b, široký.

Dole uvedený príklad je určený len pre znázornenie vynálezu a rozsah vynálezu nijako neobmedzuje.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Medziprodukt 1

1,3-di(metoxymetoxy)-4-brombenzén

Do banky s guľovým dnom objemu 250 ml vysušenej v sušiarni a opatrenej magnetickým miešadlom sa vnesie v atmosfére argónu 4-brómrezorcinol (9,45 g, 50 mmol) a CH2CI2 (50 ml) . Suspenzia sa počas miešania ochladí na 0 °C a naraz sa injekčnou striekačkou pridá diizopropylamín (19,1 ml, 110 mmol). Červený roztok sa mieša ďalších minút a potom sa po kvapkách, injekčnou striekačkou, pridá metyl (chlórmetyl) éter (10,7 ml, 120 mmol) pričom sa zaistí aby vnútorná teplota neprevýšila 10 °C. Získaný žltý roztok sa potom dá cez noc ohriať na teplotu miestnosti. Potom sa do reakčnej banky naleje roztok hydroxidu amónneho (50 ml, 50%) a reakčná zmes sa mieša 1 hodinu. Potom sa zmes vyleje do deliaceho lievika a fázy sa oddelia. Vodná fáza sa potom extrahuje CH2CI2 (3 x 30 ml) a spojené organické podiely sa premyjú soľným roztokom (20 ml) , vysušia sa bezvodovým síranom horečnatým, sfiltrujú sa a zahustením vo vákuu sa získa oranžový olej. Prečistením rýchlou chromatografiou na stĺpci (SÍO2, etylacetát /petroléter 1:1 obj./obj.) sa vo forme bledo žltého oleja získa požadovaný titulný produkt (10,7 g, 77 %) . δ_Η(CDC1₃) 7,42 (1H, d), 6,88 (1H, d), 6,64 (1H, dd) , 5,24 (2H, s), 5,15 (2H, s), 3,53 (3H, s), 3,48 (3H, s).

Medziprodukt 2

1-hydroxy-l-(2,4-dihydroxyfenylbis(metoxymetyléter))cyklohexan-4-on-etylénketal

Do banky s gulovým dnom objemu 250 ml vysušenej v sušiarni a opatrenej magnetickým miešadlom sa vnesie v atmosfére argónu 4-bróm-rezorcinol-bis-(metoxymetyl)éter (2,00 g, 7,2 mmol) a THF (50 ml). Potom sa injekčnou striekačkou pridá v jednej dávke N,N,N',N'-tetrametyléndiamín (2,3 ml, 15,2 mmol) a miešaný roztok sa ochladí na -78 °C. Potom sa injekčnou striekačkou pridá po kvapkách butyllítium (9,5 ml, 15,2 mmol) 1,6 mol/1 v hexáne). Získaný žltý roztok sa mieša 1 hodinu pri -78 °C a potom sa pomaly pridá injekčnou striekačkou 1,4-cyklohexandiónmonoetylénketal (1,35 g, 8,7 mmol) vo forme roztoku v THF (25 ml). Získaný roztok sa mieša 1 hodinu pri -78 °C a potom sa nechá cez noc ohriať na teplotu miestnosti. Pridá sa kyselina chlorovodíková (20 ml, 2 mol/1) a reakčná zmes sa intenzívne mieša 15 minút. Potom sa pridá etyl-acetát (100 ml) a zmes sa vleje do deliaceho lievika. Fáza sa oddelí a vodná fáza sa extrahuje etyl-acetátom (3x20 ml). Spojené organické podiely sa premyjú solným roztokom (20 ml) , vysušia sa bezvodovým síranom horečnatým, sfiltrujú sa a zahustením sa získa oranžový olej ktorý sa prečistí rýchlou chromatografiou na stĺpci (SiO₂, etyl-acetát/petroléter 45:55 obj./obj.). Titulný produkt sa získa vo forme bezfarebného

oleja (1,	42 g,	56	%) ;	m/z	(ES⁺)	337	(M-H₂O	+ H)⁺;	δ_Η (C;	DC1₃)
1,61-1,64	(2H,	m) ,	2,00	-2,18	(6H,	m) ,	3,44	(3H, s),	3,48	(3H,
s), 3,90-	3,97	(4H,	m) ,	5,11	(2H,	s) ,	5,24	(2H, s),	6, 64	(IH,
dd), 6,82	(IH,	d) ,	7,20	(IH,	d) .

Medziprodukt 3

1-(2,4-dihydroxyfenylbis(metoxymetyléter) cyklohex-l-en-4-on-etylénketal

1-hydroxy-l-(2,4-dihydroxyfenylbis(metoxymetyléter))cyklohexan-4-on-etylénketal (1,40 g, 3,95 mmol) sa vnesie do banky s guľovým dnom objemu 50 ml opatrenej magnetickým miešadlom a destilačnou aparatúrou podľa Dean-Starka. Pridá sa toluén (30 ml) a potom kyselina gáforsulfónová (10 mg). Roztok sa potom za miešania zahrieva pri teplote spätného toku 1 hodinu. Vodná fáza sa potom extrahuje etyl-acetátom (2 x 15 ml) a spojené organické podiely sa premyjú soľným roztokom (15 ml), vysušia sa bezvodovým síranom horečnatým, sfiltrujú sa a zahustením vo vákuu sa získa oranžový olej ktorého prečistením rýchlou chromatografiou na stĺpci (SÍO2, etylacetát /petroléter 45:55 obj./obj.) sa vo forme bezfarebného oleja získa požadovaný titulný produkt (0,94 g). δ_Η (CDCI3)

1,84	(2H, t),	2,41-2,43	(2H,	m), 2,56-2,62 (2H,	m), 3,47 (6H,
s) ,	3,98-4,02	(4H, m),	5,13	(4H, s), 5,58-5,63	(1H, m), 6,64
(1H,	dd), 6,78	(1H, d),	7,08	(1H, d).

Medziprodukt 4

1- (2,4-dihydroxyfenylbis(metoxymetyléter))cyklohexan-4-on-etylénketal

1-(2, 4-dihydroxyfenylbis(metoxymetyléter))cyklohex-l-en-4-on-etylénketal(0, 950 g, 2,83 mmol) a palládium (200 mg, 10% na uhlíku) sa zmiešajú v atmosfére vodíka 15 hodín. Potom sa zmes sfiltruje cez vrstvu Celitu s premytím etyl-acetátom. Filtrát sa odparí do sucha a vo forme bezfarebného oleja sa tak získa titulný produkt (0,955 g, 100

%)	. δ_Η (CDC1₃)	1,67-1,87	(8H,	m) ,	2,90-2,99	(1H,	m), 3,46 (3H,
s)	, 3,48 (3H,	s) , 3,97	(4H,	s) ,	5,12 (2H,	s) ,	5,18 (2H, s),
6,	65 (1H, dd),	6,78 (1H,	d),	7,12	(1H, d).

Medziprodukt 5

4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanon

Do banky s guľovým dnom sa vnesie 1-(2,4-dihydroxyfenylbis(metoxymetyléter)cyklohexan-4-on-etylénketal (1,30 g, 3,9 mmol) a metanol (15 ml) . K získanému roztoku sa za miešania pridá v jednej dávke vodná HCI (15 ml 1 mol/1) . Po jednohodinovom miešaní pri teplote miestnosti sa reakčná zmes prevedie do deliaceho lievika, fázy sa oddelia a vodná fáza sa extrahuje etyl-acetátom (3 x 20 ml). Spojené organické podiely sa premyjú soľným roztokom a rozpúšťadlo sa odparí. Mierne vlhký surový produkt sa spojí s metanolom (30 ml) a s kyslou iontomeničovou živicou (4 g) . Získaná zmes sa zahrieva za miešania 5 hodín pri teplote spätného toku. Potom sa zmes sfiltruje cez vrstvu Celitu, premyje sa etyl-acetátom a odstránením rozpúšťadla vo vákuu sa získa oranžový olej. Prečistením rýchlou chromatografiou sa stĺpci (SiO₂, etylacetát/petroléter 1:1 obj./obj.) sa vo forme bieleho prášku získa požadovaný titulný produkt (0,54 g, 68 %); m/z (ES”) 411 (2M-1); δ_Η (CD₃OD) 1,94 (2H, ddd) , 2,16-2,23 (2H, m), 2,41 (2H, dt), 2,62 (1H, t), 2,63 (1H, t), 6,24 (1H, dd) , 6,31 (1H, d), 6, 92 (1H, d) .

(anti)-4-(2,4-dihydroxyfenyl)cyklohexanol

Do banky s guľovým magnetickým miešadlom dnom objemu 25 ml opatrenej sa vnesie 4-(2,4dihydroxyfenyl)cyklohexanol (18 mg). Potom sa pridá etanol (5 ml) a potom tetrahydroboritan sodný (3,3 mg) a reakčná zmes sa mieša 16 hodín. Pridá sa vodná HC1 (20 ml, 1 mol/1) a potom etyl-acetát (20 ml), organická fáza sa oddelí a premyje so soľným roztokom (15 ml), vysuší sa horečnatým, sfiltruje sa a potom sa

Prečistením zvyšku rýchlou chromatografiou na stĺpci (SiO₂, etyl-acetát/petroléter 60:40 obj./obj.) sa vo forme bieleho prášku získa požadovaný titulný produkt (14 mg, 78 %); m/z (ES') 267 ((M+60)-1); δ_Η (CD₃OD) 1,38-1,56 (4H, m), 1,85-1,88 (2H, m), 2,04-2,07 (2H, m), 2,80 (1H, tt), 3,58-3,65 (1H, m), 6,24-6,29 (2H, m), 6,90 (1H, d).

bezvodovým síranom zahustí vo vákuu.

Všetky hore citované patenty, patentové prihlášky a publikácie sú úplne včlenené do tohto opisu odkazom.

Musíme uviesť, že vynález nie je obmedzený na špecifické uskutočnenia opísané vyššie, ktoré sú určené pre jednoduché znázornenie jednotlivých aspektov vynálezu, ale že vynález zahŕňa funkčne ekvivalentné spôsoby a zložky. Pracovníkom v odbore budú na základe hore uvedeného opisu okrem opísaných spôsobov iste zrejmé aj rôzne modifikácie vynálezu. Rozumie sa, že uvedené modifikácie sú zahrnuté v rámci pripojených patentových nárokov.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutická kompozícia pre topické podanie určená na zosvetlenie kože alebo na zníženie pigmentácie kože človeka vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu vzorca (I)

OH alebo jej farmaceutický prijateľnú sol v množstve účinnom na zosvetlenie kože alebo na zníženie pigmentácie kože a farmaceutický prijateľný nosič.
2. Kompozícia podľa nároku 1 vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje slnečný filter.
3. Kompozícia podlá nároku 1 vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje rezveratrol alebo inú účinnú zložku ktorá má antioxidačné účinky.
4. Kompozícia podľa nároku 1 vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje kyselinu retinoovú alebo derivát kyseliny retinoovej.
5. Kompozícia podľa nároku 1 vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje kyselinu glykolovú, kyselinu trichlóroctovú alebo iný prostriedok na peeling kože.
6. Kompozícia podľa nároku 1 vyznačujúca tým, že je vo forme roztoku vody-alkoholu, emulzie typu olej vo vode, emulzie typu voda v oleji, emulzného gélu alebo vo forme dvojfázového systému.
7, Kompozícia podľa nároku 1 tým, že je vo forme umývača, pasty, masti, balzámu, masky, vezikulárnej disperzie.

vyznačujúca sa krému, mlieka, gélu, želé, mikrosfér, nanosfér alebo
8. Spôsob zosvetľovania kože kože človeka vyznačujúc podávanie zlúčeniny vzorca (I) alebo zníženia pigmentácie i sa t ý m, že zahŕňa

OH

OH alebo jej farmaceutický prijateľné soli danému pacientovi, v množstve účinnom na zosvetlenie kože alebo zníženia pigmentácie kože.
9. Spôsob podľa nároku 8 vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ je spracovaná do formy roztoku vody-alkoholu, emulzie typu olej vo vode, emulzie typu voda v oleji, emulzného gélu alebo do formy doj fázového systému.
10. Spôsob podlá nároku 8 vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľná soľ je spracovaná do formy umývača, krému, mlieka, gému, želé, pasty, masti, balzámu, masky, mikrosfér, nanosfér alebo vezikulárnej disperzie.
11. Farmaceutická kompozícia pre na inhibíciu tyrosinázy človeka, v y tým, že obsahuje zlúčeninu vzorca (I) topické podanie určená značujúca sa alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ v množstve účinnom na inhibíciu tyrosinázy a farmaceutický prijatelný nosič.
12. Kompozícia podľa nároku 11 vyznačujúca sa t ý m, že je vo forme roztoku vody-alkoholu, emulzie typu olej vo vode, emulzie typu voda v oleji, emulzného gélu alebo vo forme dvojfázového systému.
13. Kompozícia podľa nároku 11 vyznačujúca sa t ý m, že je vo forme umývača, krému, mlieka, gélu, želé, pasty, masti, balzámu, masky, mikrosfér, nanosfér alebo vezikulárnej disperzie.
14. Spôsob inhibície tyrosinázy človeka vyznačuj ú c i sa t ý m, že zahŕňa podávanie zlúčeniny vzorca (I)

OH alebo jej farmaceutický prijatelné soli danému pacientovi v množstve účinnom na inhibíciu tyrosinázy.
15. Spôsob podlá nároku 14 vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľná sol je spracovaná do formy roztoku vody-alkoholu, emulzie typu olej vo vode, emulzie typu voda v oleji, emulzného gélu alebo do formy dvojfázového systému.
16. Spôsob podľa nároku 14 vyznačujúci sa tým, že zlúčenina vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľná sol je spracovaná do formy umývača, krému, mlieka, gélu, želé, pasty, masti, balzámu, masky, mikrosfér, nanosfér alebo vezikulárnej disperzie.
17. Farmaceutická kompozícia pre topické podanie určená na zosvetlenie kože alebo na zníženie pogmentácie kože človeka, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu vzorca (I)

OH

OH alebo jej farmaceutický prijateľnú sol v množstve účinnom na inhibíciu tyrosinázy a farmaceutický prijateľný nosič.
18. Spôsob zosvetľovania kože alebo zníženia pigmentácie kože človeka vyznačujúci sa tým, že zahŕňa podávanie zlúčeniny vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijatelné soli danému pacientovi v množstve účinnom na inhibíciu tyrosinázy.
19. Farmaceutická kompozícia na topické alebo transdermálne podanie na liečenie zápalového ochorenia alebo lupín človeka, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú sol v množstve účinnom na liečbu uvedeného ochorenia a farmaceutický prijateľný nosič.
20·. Kompozícia podľa nároku 19 vyznačujúca sa tým, že uvedeným zápalovým ochorením je psoriáza, dermatitída alebo akné.
21. Spôsob liečenia zápalového ochorenia alebo lupín človeka vyznačujúci sa tým, že zahŕňa podávanie zlúčeniny vzorca (I)

OH

OH alebo jej farmaceutický prijateľné soli danému pacientovi v množstve účinnom na liečenie uvedeného ochorenia.
22. Spôsob podľa nároku 21 vyznačujúci sa tým, že uvedeným zápalovým ochorením je psoriáza, dermatitída alebo akné.
23. Farmaceutická kompozícia transdermálne podanie na liečenie človeka, vyznačujúca sa zlúčeninu vzorca (I) na topické alebo zápalového ochorenia tým, že obsahuje alebo jej farmaceutický prijateľnú sol v množstve účinnom na inhibíciu tyrosinázy a farmaceutický prijateľný nosič.
24. Spôsob liečenia zápalového ochorenia človeka vyznačujúci sa tým, že zahŕňa podávanie zlúčeniny vzorca (I) q|_| alebo jej farmaceutický prijateľné soli danému pacientovi v množstve účinnom na inhibíciu tyrosinázy.
25. Spôsob podľa nároku 24 vyznačujúci sa tým, že uvedeným zápalovým ochorením je psoriáza, dermatidída alebo akné.