SK12882000A3 - Médium a spôsob na propagáciu a multiplikáciu vírusov - Google Patents

Médium a spôsob na propagáciu a multiplikáciu vírusov Download PDF

Info

Publication number
SK12882000A3
SK12882000A3 SK1288-2000A SK12882000A SK12882000A3 SK 12882000 A3 SK12882000 A3 SK 12882000A3 SK 12882000 A SK12882000 A SK 12882000A SK 12882000 A3 SK12882000 A3 SK 12882000A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
medium
viruses
virus
cells
environment
Prior art date
Application number
SK1288-2000A
Other languages
English (en)
Inventor
Pierre Heimindinger
Original Assignee
Aventis Pasteur
Merial S. A. S.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Aventis Pasteur, Merial S. A. S. filed Critical Aventis Pasteur
Publication of SK12882000A3 publication Critical patent/SK12882000A3/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
    • A61K39/13—Poliovirus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
    • C12N5/0043—Medium free of human- or animal-derived components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/76—Undefined extracts from plants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/24011—Flaviviridae
    • C12N2770/24111—Flavivirus, e.g. yellow fever virus, dengue, JEV
    • C12N2770/24151—Methods of production or purification of viral material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32611—Poliovirus
    • C12N2770/32634—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/32011—Picornaviridae
    • C12N2770/32611—Poliovirus
    • C12N2770/32651—Methods of production or purification of viral material
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

Oblasť techniky
Vynález sa týka prostredia na propagáciu a multiplikáciu vírusov a spôsobu propagácie a multiplikácie vírusov na bunkách v kultúre, najmä na výrobu vakcín.
DoteraiSi stav techniky
Výroba vírusových vakcín, či jednoducho zoslabených, inaktivovaných, subjednotiek alebo rekombinantov, zahŕňa produkciu vírusov vo veľkom meradle.
Táto výroba sa môže uskutočňovať v závislosti od povahy vírusu na rôznych nosičoch, ktoré umožňujú replikáciu vírusu; tak napríklad pre väčšinu bežne obchodne dostupných protichrípkových vakcín, sa proliferácia vírusu uskutočňuje na nasadených slepačích vajciach, zatiaľ čo pre niektoré vakcíny proti japonskej encefalitíde sa táto operácia uskutočňuje na myších mozgoch.
Používanie takýchto nosičov naráža na mnoho problémov: dostupnosť, reprodukovateľnosť, avšak hlavne bezpečnosť vplyvom možných znečistení vírusmi, myoplazmou alebo akýmikoľvek inými nežiaducimi elementmi pochádzajúcimi z nosiča. Vzrastá teda úsilie o opúšťanie takýchto nosičov a kdekoľvek je to možné, používajú sa bunkové kultúry, ktoré sa infikujú malým množstvom vírusu, ktorý sa má produkovať, a ktorý sa potom udržuje v podmienkach, ktoré podporujú replikáciu vírusu vo vnútri infikovaných buniek ako aj propagáciu infekcie z jednej bunky na druhú. Vyprodukované vírusy sa potom zhromaždia bud z kultivačného prostredia, ktoré je bunkovým kúpeľom, ked ide o intracelulárne vírusy, ktoré bunku opustia (čo má hlavne tú výhodu, že umožnia uskutočňovať niekoľko zberov vírusu s rovnakou kultúrou buniek) alebo spracovaním buniek samotných, ked ide o intracelulárne vírusy.
Pre tieto spôsoby sú nutné bunkové kultúry dobrej kvality; mnohé doterajšie vývojové práce sa teda zaoberajú zlepšovaním bunkových kultúr a najmä použitých kultivačných prostredí. Na obmedzenie nebezpečenstva znečistenia buniek myoplazmou, vírusmi, činidlami hovädzej spongióznej encefalopatie alebo
PV-1288-00,79/Täfl 2.11.2000 akýmikoľvek inými neobvyklými prenosnými činidlami, sa navrhovalo použitie kultivačných prostredí bez séra a dokonca bez proteínov (zverejnená prihláška vynálezu číslo WO 96/15231). Je opísané použitie bunkového kultivačného prostredia bez zvieracieho séra, obsahujúceho však rastlinné extrakty (francúzsky patentový spis číslo FR 2 732347).
Pri používaní takýchto prostredí na kultiváciu buniek, vzrastá bezpečnosť produktov získaných použitím takto produkovaných buniek.
Avšak ak ide o výrobu vírusov tvoriacich súčasť vakcinovaných prostriedkov, postupy, ktoré nasledujú po tejto fáze kultivácie buniek, by mali tiež sami vykazovať maximálny stupeň bezpečnosti.
Zvyčajne (napríklad americký patentový spis číslo 4 525 349) keď sa používajú bunky v kultivačnom prostredí na produkciu vírusov, len čo sa raz uskutočnia kultivačné fázy, odstráni sa prostredie, ktoré bolo použité na kultiváciu buniek a nahradí sa novým prostredím, v ktorom sa bunky určitú dobu kúpu na premytie: toto nové prostredie sa potom odstráni: tento proces premývania buniek sa môže prípadne niekoľkokrát opakovať.
Potom sa do bunkovej kultúry zavedie nové prostredie, ktoré najskôr umožní, aby bunky prežili a boli infikované vírusmi a po druhé je treba mať k dispozícii prvky, ktoré postačia ako nosiče na replikáciu týchto vírusov. Avšak, ako je známe z literatúry („Protein-free culture of Vero cells: A substráte for replication of human pathogenic viruses“ Celí Biology International, zv. 17, č. 9, str. 885 až 895, 1993), i keď sa bunky kultivujú v prostredí bez proteínu, kultivačné prostredie použité podľa /
doterajšieho stavu techniky v tomto stupni multiplikácie a propagácie vírusu spravidla obsahuje zárodočné teľacie sérum alebo na obmedzenie problémov so znečistením, aspoň ľudský albumín. Použitie ľudského albumínu v tomto stupni spôsobu výroby vírusových vakcín sa považuje bez rizika pre kvalitu vakcíny. Avšak v záujme úplného vylúčenia všetkého nebezpečenstva i teoretického, by bolo žiaduce mať prostredie, ktoré je vhodné na propagáciu a multiplikáciu vírusov na nosiči pozostávajúcom z bunkového kultivačného prostredia, ktoré je bez ľudského alebo zvieracieho proteínu i rekombinantného pôvodu, ale ktoré predsa len umožňuje produkčné výsledky, ktoré sú kompatibilné s priemyselnými požiadavkami nezvyšovať náklady výroby vakcín obsahujúcich vírusy, pestované na bunkových kultúrach.
PV-1288-00,79/Tä/12.11.2000
Úlohou vynálezu je najmä vyvinúť takéto prostredie. Úlohou vynálezu je tiež vyvinúť také prostredie a spôsob propagácie a multiplikácie vírusov, ktorý prípadne umožní inaktiváciu vírusu.
Podstata vynálezu
Podľa tohto vynálezu prostredie na propagáciu a multiplikáciu vírusov na bunkách v kultivačnom prostredí sa zakladá na tom, že je bez ľudského a zvieracieho proteínu i rekombinantného pôvodu a obsahuje extrakty z rastlín.
Podľa jedného uskutočnenia vynálezu obsahuje prostredie na propagáciu a multiplikáciu vírusov proteíny alebo glykoproteíny extrahované zo zemiakov a z uhoriek, ktoré majú mitogénny potenciál a molekulovú hmotnosť 1000 až 200 000 daltonov.
Podľa iného uskutočnenia vynálezu obsahuje prostredie rastlinné hydrolyzáty.
Podľa ešte iného uskutočnenia vynálezu sú proteíny alebo glykoproteíny extrahované zo zemiakov.
Vynález sa tiež týka proteínov a glykoproteínov získaných tak, že sa
- rastliny premývajú a melú,
- produkt sa riedi vo vodnom prostredí,
- získaná zmes sa tepelne koaguluje a
- produkt sa čistí chromatografiou.
Podľa vynálezu sa rastlinné hydrolyzáty získajú chemickou a/alebo
I enzymatickou hydrolýzou surových materiálov, ako je bavlník, sójové bôby, pšenica alebo ryža. Predovšetkým dobré výsledky sa dosahujú s produktmi radu HyPep™ (obchodné produkty spoločnosti Quest International), najmä s produktmi obsahujúcimi vysoký podiel peptidov s molekulovou hmotnosťou nižšou ako 1000 daltonov.
Podľa vynálezu je prostredie na propagáciu a multiplikáciu vírusov predovšetkým vhodné na multiplikáciu vírusov na bunkách Vera.
Vynález sa tiež týka prostredia na propagáciu a multiplikáciu vírusov predovšetkým vhodného na multiplikáciu vírusov japonskej encefalitídy, vírusov detskej obmy a besnoty.
PV-1288-00,79/Tš/12.11.2000
Podľa vynálezu spôsob výroby vírusových vakcín, pri ktorom sa vírusy produkujú v bunkovej kultúre sa zakladá na tom, že sa fáza propagácie a multiplikácie vírusu uskutočňuje v prítomnosti prostredia, ktoré je bez ľudského a zvieracieho proteínu i rekombinantného pôvodu, a ktoré obsahuje rastlinné extrakty.
Vynález bližšie objasňuje nasledujúci podrobný opis.
Prostredie alebo médium a spôsob podľa vynálezu je vhodné na produkciu všetkých vírusov, ktoré sú schopné replikácie v bunkovom kultivačnom prostredí. Môžu to byť najmä vírusy, ktoré patria do nasledujúcich rodín: orthomyxovírus, para myxovírus, reovírus, picomavírus, flavivírus, arenavírus, herpesvírus, poxvírus a adenovírusy. Môžu to byť tiež rekombinantné vírusy. Vynález je najmä vhodný na produkciu vírusov, ktoré môžu tvoriť časť vakcínových prostriedkov a najmä vakcín pre ľudí, u ktorých sú bezpečnostné požiadavky maximálne. Môžu to byť predovšetkým vírusy detskej obmy, besnoty, japonskej encefalitídy, žltej zimnice, ružienky, mumpsu, Dengovej horúčky alebo osýpok, vírusy rôznych foriem žltačky, AIDS alebo kiahní, skupina vírusov spôsobujúcich opary, vírusy chorôb spôsobených respiračným syncytiálnym vírusom, cytomegalovírus, EBV, rotavírusy alebo vírus chrípky.
Vynález je predovšetkým vhodný na produkciu vírusov, ktoré sú pôvodcami detskej obmy, besnoty, japonskej encefalitídy, ružienky, kiahní, žltačky typu A, chrípky, Dengovej horúčky, osýpok alebo mumpsu.
Bunkami, ktoré sa môžu použiť na výrobu vírusov podľa vynálezu sú všetky bunky, ktoré sa môžu multiplikovať v kultivačnom prostredí, a ktoré sú prístupné pre vírus, ktorý sa má produkovať. Môžu to byť bunky Vero, CV-1, LLC-MK2, MDCK, MDBK, WI-38, MRC5 (ľudské fibroblasty) alebo bunky BHK21. Predovšetkým dobré výsledky sa dosahujú s kultúrami buniek Vero alebo MRC5.
Bunková kultivácia sa môže uskutočňovať rôznymi spôsobmi: s použitím kultivátora buniek, valcových fliaš, Rouxových baniek, zariadenia Multitrays™ a CellCubes™ Na priemyselné účely sa dáva prednosť pestovaniu buniek v bunkových kultivátoroch s použitím mikronosičov, ktorými sú napríklad guľôčky Cytodex™.
Kultiváciu buniek je možné uskutočniť za rôznych podmienok, najmä s ohľadom na použité prostredie; podľa vynálezu je spôsob možný i keď použité kultivačné prostredie pre rastovú fázu buniek obsahuje sérum alebo aspoň ľudské alebo zvieracie proteíny; v tom prípade je ale nutné dôkladné premytie buniek pred
PV-1288-00,79/ΤϊΛ 2.11.2000 ich infikovaním, aby sa nestratila výhoda spôsobu podľa vynálezu, ktorou je vylúčenie nebezpečenstva znečistenia. Prednosť sa však dáva použitiu kultúr získaných z kultivačného prostredia, ktoré je bez proteínov ľudského alebo zvieracieho pôvodu.
V závislosti od použitých buniek a od vírusov, ktoré sa majú produkovať, sa môže líšiť najvýhodnejší okamih infekcie vírusu očkovacou látkou vírusu. Všeobecne sa táto operácia uskutočňuje skôr uprostred alebo ku koncu exponenciálnej rastovej fázy; skutočne sa ukázalo, že za týchto podmienok sú získané výsledky obzvlášť uspokojivé.
Podľa vynálezu je kultivačné prostredie použité na propagáciu a multiplikáciu vírusu bez ľudských a zvieracích alebo rekombinantných proteínov, obsahuje však proteíny alebo glykoproteíny extrahované zo zemiakov alebo z uhoriek, ktoré majú mitogénny potenciál a molekulovú hmotnosť 1000 až 200 000 daltonov a/alebo hydrolyzáty rastlinných extraktov. Toto prostredie je médiom, ktoré môže obsahovať všetky alebo časť prvkov bežne používaných na rozmnožovanie vírusov, ako je médium HAM F 12, ktoré je však doplnené rastlinnými extraktmi získanými napríklad tak, že sa
- redukuje rastlinná dreň,
- získaná dreň sa spracováva rozpúšťadlom,
- rozpúšťadlo sa odparí,
- získaný extrakt sa čistí chromatografiou.
Mytogénny potenciál proteínov alebo glykoproteínov, ktoré sú vhodné na účely podľa vynálezu, je možné vyhodnotiť predovšetkým použitím testov na analýzu rastu buniek a mitogénnej aktivity, ako je vyfarbovací test M.T.T.
Rastlinné extrakty, vhodné podľa vynálezu, sú najmä extrakty opísané vo francúzskom patentovom spise číslo FR 2 732347. Je možné tiež použiť obchodné produkty GCR1003, TCR1005 alebo BCR1008 (spoločnosť Biomedia) samotné alebo v kombinácii alebo produkt Prolifix (tej istej spoločnosti), ktorý obsahuje všetky živné produkty bežného kultivačného prostredia HAM F 12 doplneného vhodnými rastlinnými extraktmi.
Alternatívne je možné použiť bežné kultivačné prostredie a HAM F 12 doplneného rastlinnými hydrolyzátmi, ako sú produkty HyPep™, v množstve 5 g/l.
PV-1288-00,79/TS/l 2.11.2000
Tiež je možné použiť kultivačné prostredie obsahujúce tak proteíny alebo glykoproteíny získané tepelnou koaguláciou rastlinnej drene, ako aj vyššie uvedené rastlinné hydrolyzáty.
Okrem toho je možné pridať do tohto prostredia, ktorýkoľvek iný prvok, ktorý môže zlepšiť alebo uľahčiť jednu z nasledujúcich operácií vedúcich k produkcii vakcíny, pokiaľ je možná mierna modifikácia tohto prostredia bez zmien jeho vlastností.
Vynález objasňujú, nijak však neobmedzujú nasledujúce príklady praktického uskutočnenia.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Výroba vakcín proti japonskej encefalitíde
Na výrobu vírusov, ktoré sú príčinou japonskej encefalitídy, sa použijú bunky Vero. Použité bunky sú odvodené od kmeňa, ktorého distribúciou sa zaoberá organizácia ATCC (American Type Culture Collection) pod číslom ATCC-CCL 81VERO F 1415, ktorý je v 124 pasáži a bol prevedený zvyčajným spôsobom do pasáže 137. Žiadaným produktom je vírus kmeňa P3 v 88. pasáži dodávanej NVSI.
Nádrž bunkového kultivátora s objemom 15 litrov sa naplní médiom Iscove, doplneným teľacím sérom obsahujúcim mikronosiče Cytodex 1™ v množstve 3,5 g/l. Médium sa naočkuje očkovacou látkou buniek Vero v množstve 200 000 buniek na 1 ml.
Kultúra sa amplifikuje a subkultivuje dvakrát týždenne každý 4. a 5. deň. Koncentrácia získaných buniek je 2x10® až 3x106 na 1 ml. Získaná bunková suspenzia sa potom prepláchne médiom na propagáciu vírusu s cieľom maximálne odstrániť zvyšné teľacie sérum.
Na vyskúšanie média podľa vynálezu v porovnaní s médiom podľa stavu techniky sa uskutočňuje paralelný proces v niekoľkých rovnakých bunkových kultivátoroch s dvoma rôznymi médiami:
- médium podľa vynálezu pozostávajúce z média HAM F 12 (Life Technologies Gibco) doplneného médiom Prolifix II (Biomedia) v desaťnásobnej koncentrácii
PV-1288-00, 79/TSZI 2.11.2000 oproti ich katalógu z roku 1996 v pomeroch 1 objem 10-násobne skoncentrovaného Prolifixu II na 10 objemov HAM F 12.
- médium podľa stavu techniky pozostávajúce z média Iscove (Life Technologies Gibco) doplneného ľudským albumínom na dosiahnutie konečnej 0,3 % koncentrácie albumínu v médiu.
Po prepláchnutí sa do každého bunkového kultivátora zavedie vírusová očkovacia látka v množstve zodpovedajúcom MOI (Multiplicity Of Infection) 1/6000.
Obsahy bunkových kultivátorov sa potom nechajú miešať 3 dni pri teplote 37 °C, pričom sa uskutoční 1. zber za spätného získania média na propagáciu vírusu, ktoré sa stalo vírusovou suspenziou, ktorá sa vráti do každého bunkového kultivátora s rovnakým množstvom čerstvého média rovnakej povahy; každých 24 hodín sa zberá až do získania 5 zberov. Každý zber sa prefiltruje cez filter s najnižšou hodnotou 0,22 gm a uloží sa pri teplote + 5 °C až do zmiešania so 4 ďalšími zbermi z rovnakého bunkového kultivátora.
Po uskutočnení 5 zberov sa zbery zmiešajú a táto zmes sa skoncentruje filtráciou 100-násobne. Zmes pozostávajúca z piatich zberov z rovnakého bunkového kultivátora tvorí šaržu.
Na zistenie množstva produkovaných vírusov sa uskutoční test infekčnej aktivity každej vyrobenej šarže. Test sa uskutočňuje dvoma rôznymi spôsobmi: buď infekčnou aktivitou nameranou na bunkovej vrstve alebo infekčnou aktivitou nameranou v myšiach intracerebrálnou inokuláciou myší, pozorovaním zvierat 14 dní a vypočítaním LD50. .
Výsledky sa vyjadrujú ako log 10 infekčných častíc na liter bunkového kultivátora. Stredná hodnota, získaná titráciou pre rôzne vyprodukované šarže s použitím média podľa vynálezu, je 8,84, zatiaľ čo stredná hodnota, získaná zo šarží vyprodukovaných použitím média podľa doterajšieho stavu techniky je 7,85. Stredné hodnoty výsledkov získaných titráciou v prípade myší pre šarže podľa vynálezu je 9,22, zatiaľ čo stredná hodnota zo šarží, vyprodukovaných pomocou média podľa stavu techniky, je 9,30. Dospelo sa teda k neočakávanému poznatku, že výsledky, získané s médiom podľa vynálezu, sú rovnocenné s výsledkami získanými s médiom podľa stavu techniky, pričom by sa dalo očakávať, že deficit albumínu, ktorý je považovaný za významný protein pri transporte elementov živín vo vnútri bunky, povedie ku značnému poklesu množstva produkovaných vírusov.
PV-1288-00,79/Tí/12.11.2000
Získané šarže sa potom inaktivujú formaldehydovým roztokom v množstve zodpovedajúcom konečnej koncentrácii v zmesi 1/4000 a ponechajú sa pri teplote miestnosti 14 dní za stáleho miešania. Overenie inaktivácie pomocou kontrol protokolu odporúčaného WHO (Technical Bulletin 771 z roku 1988) ukázalo, že vyrobené šarže spĺňajú odporúčania WHO.
Tieto inaktivované šarže sa čistia iónovou výmennou chromatografiou a filtráciou gélu na odstránenie všetkých obsiahnutých vírusových proteínov a zvyšných nečistôt, ktoré sú vo vakcínach nežiaduce. Získaná zmes sa formuluje na produkciu vakcínových dávok. Dobrá akosť vyrobených vakcín sa overuje testom imunogenicity v myšiach podľa odporúčaní WHO pre vakcíny proti japonskej encefalitíde, ktorý je založený na určení množstva neutralizujúcich protilátok, produkovaných v imunizovaných myšiach. Pretože aktivita vakcín, vyrobených spôsobom podľa vynálezu, nie je nižšia ako vakcín podľa stavu techniky, je potvrdená možnosť použitia spôsobu podľa vynálezu na produkciu vírusovej vakcíny za podmienok zvýšenej bezpečnosti s vynechaním albumínu.
Príklad 2
Porovnanie rôznych prostredí podľa vynálezu
Na porovnávacie vyskúšanie rôznych prostredí sa použije 150 cm3 baniek naplnených 50 ml média Iscove, doplneného 4 % teľacieho séra. Toto prostredie sa naočkuje bunkami Vera v množstve 250 000 buniek/cm3. Banky sa nechajú stáť 4 až 5 dní pri teplote 37 °C, pričom sa pokropia médiom na propagáciu a multiplikáciu vírusov.
Použitými médiami sú:
- prostredie A, ktoré je médiom podľa stavu techniky, pozostávajúce z média Iscove (Life Technologies Gibco), ktoré je doplnené ľudským albumínom na konečnú koncentráciu albumínu 0,3 %,
- prostredie B, pozostávajúce z média HAM F 12, ktoré je doplnené nasledujúcimi mitogénnymi molekulami:
* BCR 1008 v množstve 10‘3 g/l, * TCR 1005 v množstve 10-4 g/l, * GCR 1003 v množstve 10-4 g/l,
PV-1288-00.79/TS/I2.11.2000
- prostredie C, pozostávajúce z uvedeného média (HAM F 12, doplnené BCR
1008, TCR 1005 a GCR 1003), avšak obsahujúce tiež 1 g/l produktu HyPep
4602, ktorý pozostáva z gluténového hydrolyzátu (produkt spoločnosti Questel
International),
- prostredie C', ktoré je totožné s prostredím C, avšak s obsahom HyPep 4602 5 g/i,
- prostredie D, pozostávajúce z média HAM F 12, doplnené HyPep 4602 v množstve 1 g/l, avšak bez mitogénnych molekúl BCR 1008, TCR 1005 alebo GCR 1003,
- prostredie DS', ktoré je totožné s prostredím D, avšak s obsahom HyPep 4602 5 g/l.
Po prepláchnutí sa do každej banky zavedie očkovacia látka vírusu japonskej encefalitídy, totožná s očkovacou látkou z predchádzajúceho príkladu, v množstve zodpovedajúcom MO11/6000.
Obsahy baniek sa potom nechajú stáť 3 dni pri teplote 37 °C pred uskutočnením prvého zberu. Ďalšie zbery sa uskutočňujú rovnako ako podľa predchádzajúceho príkladu.
Testy na stanovenie infekčného titra sa uskutočňujú na bunkách BHK21 s nasledujúcimi výsledkami vyjadrenými ako TCIDso/ml (log 10);
prostredie A 4,6
prostredie B 5,1
prostredie C 5,0
prostredie C' 5,6
prostredie D 5,4
prostredie D' 6,3
Tieto výsledky potvrdzujú, že prostredie podľa vynálezu umožňuje získať výťažky, ktoré sú rovnako dobré, ak nie lepšie, ako prostredie podľa doterajšieho stavu techniky, obsahujúce albumín.
Príklad 3
Výroba vakcíny proti besnote
PV-1288-00,79/TSZI2.11.2000
V kultivátore s obsahom dvoch litrov sa pripraví kultúra buniek Vero v konvenčnom prostredí a po premytí sa bunky infikujú vírusom besnoty s MO11/1000 a udržujú sa v prostredí, ktoré je totožné s prostredím opísaným v príklade 1 (teda médium HAM F 12 doplnené Profilixom™ II); ten istý pokus sa uskutoční úplne rovnakým spôsobom v inom kultivátore toho istého objemu, s jediným rozdielom, že médium na propagáciu a multiplikáciu vírusov je podľa doterajšieho stavu techniky a obsahuje ľudský albumín. Zbery sa konajú postupne 4., 5., 6. a 7. deň po infikovaní. Súčty, uskutočnené pri zberoch získaných s použitím prostredia podľa vynálezu, umožňujú získať porovnateľné výsledky pre obidve prostredia; infekčné titre získaných vírusov sú podobne totožné.
Tieto výsledky tak dokazujú možnosť pestovania vakcíny proti besnote na bunkách.
Príklad 4
Výroba vakcíny proti detskej obrne
Uskutočnia sa testy výroby vírusu polyomyelitis typu 1 na kultúre buniek Vero. Infekčné titre vírusov, získané s použitím prostredia na propagáciu a multiplikáciu vírusov podľa vynálezu, ktoré majú zloženie podľa príkladu 1, sú rovnocenné s priemerom infekčných titrov získaných pri zberoch uskutočnených s prostredím použitým na výrobu bežne obchodne dostupných vakcín.
/
Priemyselná využiteľnosť
Výroba vakcíny proti rôznym vírusom s použitím prostredia bez ľudského albumínu.

Claims (7)

  1. NOVÉ PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie kultivačného prostredia, ktoré je bez ľudského alebo zvieracieho proteínu i rekombinantného pôvodu, a ktoré obsahuje rastlinné extrakty na propagáciu a multiplikáciu vírusov v bunkovej kultúre.
  2. 2. Použitie podľa nároku 1 prostredia obsahujúceho mitogénne proteíny alebo glykoproteíny extrahované zo zemiakov alebo z uhoriek.
  3. 3. Použitie podľa nároku 1 alebo 2 rastlinných extraktov získaných tak, že sa
    - rastliny premývajú a melú,
    - produkt sa riedi vo vodnom prostredí,
    - získaná zmes sa tepelne koagutuje a
    - produkt sa čistí chromatografiou.
  4. 4. Použitie podľa nároku 1 až 3 kultivačného prostredia obsahujúceho hydrolyzáty rastlinných výťažkov.
  5. 5. Použitie podľa nároku 1 až 4 ako nosiče na propagáciu a multiplikáciu vírusov bunky Vera.
    )
  6. 6. Použitie podľa nároku 1 až 5 na produkciu vírusov japonskej encefalitídy, besnoty, detskej obrny, žltačky typu A, chrípky, Dengovej horúčky, mumpsu, kiahní a ružienky.
  7. 7. Použitie podľa nároku 1 až 6 na produkciu vírusov japonskej encefalitídy na vakcíny pre ľudí.
SK1288-2000A 1998-03-13 1999-03-15 Médium a spôsob na propagáciu a multiplikáciu vírusov SK12882000A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9803333A FR2775983B1 (fr) 1998-03-13 1998-03-13 Milieu et procede de propagation et de multiplication virales
PCT/FR1999/000578 WO1999047648A2 (fr) 1998-03-13 1999-03-15 Milieu et procede de propagation et de multiplication virales

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK12882000A3 true SK12882000A3 (sk) 2001-05-10

Family

ID=9524203

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1288-2000A SK12882000A3 (sk) 1998-03-13 1999-03-15 Médium a spôsob na propagáciu a multiplikáciu vírusov

Country Status (16)

Country Link
EP (1) EP1062324A2 (sk)
JP (1) JP2002506636A (sk)
KR (1) KR20010072556A (sk)
CN (1) CN1301297A (sk)
AU (1) AU752577B2 (sk)
BR (1) BR9908744A (sk)
CA (1) CA2322619A1 (sk)
EA (1) EA200000934A1 (sk)
FR (1) FR2775983B1 (sk)
HU (1) HUP0101081A3 (sk)
IL (1) IL138250A0 (sk)
NZ (1) NZ506872A (sk)
PL (1) PL343557A1 (sk)
SK (1) SK12882000A3 (sk)
TR (1) TR200002641T2 (sk)
WO (1) WO1999047648A2 (sk)

Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2000083657A (ja) * 1998-07-13 2000-03-28 Chemo Sero Therapeut Res Inst 日本脳炎ウイルスワクチン
AT409379B (de) 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
ES2328466T3 (es) * 2001-03-27 2009-11-13 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Composiciones y metodos utiles para la infeccion por hcv.
JP2005532057A (ja) * 2002-07-09 2005-10-27 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド 細胞を培養するための動物性タンパク質非含有培地
GB0304799D0 (en) 2003-03-03 2003-04-09 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel method
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
EP2522717B1 (en) 2006-01-04 2014-04-02 Baxter International Inc Oligopeptide-free cell culture media
JP5458536B2 (ja) * 2008-09-17 2014-04-02 不二製油株式会社 乳酸の製造方法及び乳酸発酵用添加剤
CN107043739A (zh) * 2017-04-24 2017-08-15 浙江美保龙生物技术有限公司 一种Vero细胞培养液添加剂及其制备方法、使用方法
CN107129963A (zh) * 2017-04-24 2017-09-05 浙江美保龙生物技术有限公司 一种df‑1细胞培养液添加剂及其制备方法、使用方法

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5498537A (en) * 1994-03-09 1996-03-12 Cellco, Inc. Serum-free production of packaged viral vector
FR2732347A1 (fr) * 1995-03-30 1996-10-04 Bio Media Extrait vegetal, son procede de preparation et ses applications en medecine humaine ou veterinaire
CA2258501C (en) * 1997-04-16 2004-01-20 Feva N.V. Vegetable extract, method for preparation thereof and its applications in human and veterinary medicine

Also Published As

Publication number Publication date
JP2002506636A (ja) 2002-03-05
FR2775983A1 (fr) 1999-09-17
BR9908744A (pt) 2000-12-26
TR200002641T2 (tr) 2000-11-21
FR2775983B1 (fr) 2000-11-10
WO1999047648A2 (fr) 1999-09-23
IL138250A0 (en) 2001-10-31
PL343557A1 (en) 2001-08-27
CA2322619A1 (en) 1999-09-23
AU752577B2 (en) 2002-09-26
CN1301297A (zh) 2001-06-27
HUP0101081A3 (en) 2003-04-28
EP1062324A2 (fr) 2000-12-27
KR20010072556A (ko) 2001-07-31
AU2735299A (en) 1999-10-11
NZ506872A (en) 2002-03-01
HUP0101081A2 (hu) 2001-07-30
EA200000934A1 (ru) 2001-02-26
WO1999047648A3 (fr) 1999-11-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5845178B2 (ja) ワクチン生産のためのポリオウイルスの高力価での生産
JP6244294B2 (ja) 細胞を培養するための動物性タンパク質非含有培地
AU2001236042B9 (en) Cell usable in serum-free culture and suspension culture and process for producing virus for vaccine by using the cell
HU225791B1 (en) Method for large scale production of virus antigen
KR20070060049A (ko) 인플루엔자 백신의 제조방법
SK12882000A3 (sk) Médium a spôsob na propagáciu a multiplikáciu vírusov
CZ20003327A3 (cs) Prostředí pro propagaci a multiplikaci virů a způsob propagace a multiplikace virů
MXPA00008511A (es) Medio y metodo para la propagacion y multiplicacion viral
CN105408469A (zh) 禽类胚胎细胞的制备
McIntosh et al. Growth of a clonal cell line of Helicoverpa zea (Lepidoptera: Noctuidae) in suspension culture and replication of its homologous baculovirus HzSNPV
Soleimani et al. Evaluation of Adventitious Agents in MMR & Oral Poliomyelitis Vaccines
CN107603942A (zh) 用于流感疫苗生产的mdck细胞株