FR2732347A1 - Extrait vegetal, son procede de preparation et ses applications en medecine humaine ou veterinaire - Google Patents

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Abstract

L'invention est relative à de nouveaux extraits végétaux, à leur procédé de préparation et à leur application thérapeutique notamment pour leur activité en tant que facteur de croissance cellulaire. Conformément à l'invention, ces extraits végétaux sont constitués par l'association de deux molécules, protéique et glycoprotéique, qui forment ensemble un complexe moléculaire d'un poids moléculaire de 25 000 daltons. Les substrats employés pour la préparation des extraits de l'invention sont choisis parmi tous les végétaux contenant des matières protéiques et glycoprotéiques, par exemple la pomme de terre, le topinambour, la rave, le radis, le concombre, la courge, la courgette ou la tomate.

Description

EXTRAIT VEGETAL, SON PROCEDE DE PREPARATION ET SES
APPLICATIONS EN MEDECINE HUMAINE OU VETERINAIRE
La présente invention est relative à de nouveaux extraits végétaux, à leur procédé de préparation et à leur application thérapeutique notamment pour leur activité en tant que facteur de croissance cellulaire.
Les substrats employés pour la préparation des extraits de l'invention sont choisis parmi tous les végétaux contenant des matières protéiques et glycoprotéiques. On peut ainsi utiliser dans ce but, des végétaux aussi variés que la pomme de terre. le topinambour, la rave, le radis, le concombre, la courge, la courgette ou la tomate, cette liste n'étant pas exhaustive.
La préparation de ces extraits est réalisée selon les phases successives suivantes:
* réduction en pulpe du végétal choisi
* traitement à froid ou à chaud de la pulpe obtenue par un solvant aqueux ou organique:
* évaporation du solvant jus qu'à obtention d'un degré de concentration déterminé
* purification de l'extrait ainsi obtenu par des méthodes de thermorégulation, de purification au sulfate d'ammonium, de précipitation, de chromatographie sur gel ou résine échangeuse d'ions.
On obtient ainsi le principe actif de l'invention, constitué d'une association de deux molécules protéique et glycoprotéique, d'un poids moléculaire de 25 000 daltons. Ce complexe moléculaire est fortement soluble dans l'eau.
L'exemple non limitatif suivant illustre l'invention : 1 000 g de courge fraiche et saine sont broyés afin d'obtenir une purée fine. Cette purée est traitée avec 500 g d'eau à froid pendant deux heures. La bouillie (El) obtenue est soumise alors soit à une centrifugation, soit à une filtration afin de recueillir la pulpe (E2). On procéde ensuite à la purification de l'extrait ainsi obtenu par thermocoagulation en présence d'alcool, d'acide caprilique et d'acide acétique. Après ultrafiltration, on recueille un extrait constitué par le principe actif de l'invention.
Selon une variante, la fraction E2 peut être purifiée par chromatographie sur résine de silice Rhône Poulenc, sur résine Rohm and Haas ou sur résine Pharmacia.
Les résultats des essais toxicologiques et pharmacologiques qui ont été effectués ont permis de mettre en évidence la bonne tolérance du complexe moléculaire de l'invention ainsi que ses intéressantes propriétés.
Etude toxicologique
Les essais effectués aussi bien tri vEw que in vitro ont mis en lumière la faible toxicité et la bonne tolérance du principe actif de l'invention.
a. Etude de la toxicité cellulaire tri vitro:
Rouge neutre et Mir : à la dose de 600 microgrammes/ml aucune toxicité n'a été observée sur le milieu de culture.
b. Les essais suivants ont été effectués in vivo:
L'administration intrapéritonéale de 0,4 ml d'une solution à 7,5 g/litre, à un lot de souris comprenant 25 mâles et 25 femelles n'a provoqué aucun décès après 7 jours.
L'administration par la voie sous-cutanée de 1 ml de la solution précédente à un lot de souris comprenant 25 mâles et 25 femelles n'a également provoqué aucun décès au bout de 7 jours.
Etude pharmacologique
Les résultats des essais pharmacologiques qui sont rapportés ci-après ont mis en évidence les intéressantes propriétés du principe actif de l'invention.
1. Activité mitogène.
La détermination de cette activité a été effectuée tri vitro avec ou sans sérum, à diverses concentrations et sur divers types cellulaires.
Rouge neutre et MTF : les résultats obtenus sont sensiblement les mêmes pour les deux souches cellulaires.
Sans sérum, à 30 microgrammes/ml on obtient une augmentation de 133 % de la prolifération cellulaire par rapport au milieu de culture cellulaire témoin.
En présence de 5 % de sérum et de 20 microgrammes/ml on obtient une augmentation de la prolifération cellulaire de 246 %.
En présence de 10 % de sérum et de 45 microgrammes/ml, la prolifération cellulaire est augmentée de 292,3 %.
L'activité mitogène maximale a été obtenue à 50 microgrammes/ml sans sérum et 100 microgrammes/ml en présence de 2 à 5 % de sérum.
2. Activité inhibitrice cellulaire.
L'étude de cette activité in vitro sur diverses souches cellulaires (rouge neutre et MlT) à mis en évidence un effet important et inattendu quand le produit de l'invention est présent à hautes doses.
Ainsi, l'introduction dans le milieu de culture d'une solution contenant 600 microgrammes/ml du principe actif de l'invention, provoque une inhibition totale de la croissance cellulaire.
3. Action sur le métabolisme.
Cette étude in vivo à mis en évidence une nette action sur le métabolisme des animaux d'expérience. Ainsi, l'administration en injection intrapéritonéale, à un lot de 20 cobayes mâles de 250 g, de 0,2 ml d'une solution à 7,5 g/litre à raison de deux injections espacées d'une semaine, produit après 25 jours, par rapport au lot témoin non traité, un gain de poids moyen de 8,25 %.
Les essais comprables effectués sur des cobayes et des lapins après administration orale, ont montré des gains de poids respectivement de 7,98 % et 7,85 %, par rapport aux lots témoins non traités.
L'étude toxicologique effectuée in vitro et in vivo, qui vient d'être rapportée, à mis en évidence la faible toxicité du principe actif de l'invention et sa bonne tolérance locale et générale.
L'étude pharmacologique réalisée in vitro et in vivo à mis en lumière ses intéressantes propriétés.
L'activité mitogène : par son action stimulante sur les processus de division cellulaire, il concourt à une meilleure trophicité du tissu conjonctif et peut être avantageusement administré en chirurgie, traumatologie et dermatologie, aussi bien par la voie locale que générale.
L'activité inhibitrice cellulaire par son pouvoir cytostatique, il intervient favorablement dans le domaine des antitumoraux et anticancéreux.
Par son action de stimulation sur le métabolisme, il sera avantageusement administré toutes les fois qu'on se trouvera confronté à des problèmes de déficit pondéral.
Le médicament de l'invention pourra donc se présenter sous des formes adaptées pour l'administration orale, parentérale, rectale ou locale.

Claims (7)

REVENDICATIONS
1. Extrait végétal constitué par une association de deux molécules, protéique et glycoprotéique. qui forment ensemble un complexe moléculaire d'un poids moléculaire de 25 000 daltons.
2. Extrait selon la Revendication 1, caractérisé en ce que le complexe moléculaire est fortement soluble dans l'eau.
3. Procedé de préparation de l'extrait selon la Revendication 1, caractérisé en ce que le substrat utilisé est constitué par tous les végétaux contenant des matières protéiques et glycoprotéiques, tels la pomme de terre, le topinambour, la rave, le radis, le concombre, la courge, la courgette ou la tomate.
4. Procédé selon la Revendication 3, caractérisé en ce que l'extrait est purifié par thermocoagulation en présence d'alcool, d'acide caprilique et d'acide acétique, suivie d'une ultrafiltration.
5. Procédé selon la Revendication 3, caractérisé en ce que l'extrait est purifié par chromatographie.
6. Médicament à usage humain ou vétérinaire, caractérisé en ce qu'il contient à titre de principe actif, l'extrait végétal selon l'une des
Revendications 1 et 2.
7. Médicament selon la Revendication 6, caractérisé en ce qu'il est présente sous une forme appropriée à l'administration orale, parentérale, topique ou rectale.
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