SI9300616A - Enzyme inhibitors - Google Patents

Enzyme inhibitors Download PDF

Info

Publication number
SI9300616A
SI9300616A SI9300616A SI9300616A SI9300616A SI 9300616 A SI9300616 A SI 9300616A SI 9300616 A SI9300616 A SI 9300616A SI 9300616 A SI9300616 A SI 9300616A SI 9300616 A SI9300616 A SI 9300616A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
isothiourea
ethyl
methyl
amino
group
Prior art date
Application number
SI9300616A
Other languages
English (en)
Inventor
Edward Patrick Garvey
Gerald Joseph Tanoury
Jeffrey Alan Oplinger
Eric Steven Furfine
Original Assignee
Wellcome Found
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GB929224948A external-priority patent/GB9224948D0/en
Priority claimed from GB939315159A external-priority patent/GB9315159D0/en
Priority claimed from GB939319663A external-priority patent/GB9319663D0/en
Application filed by Wellcome Found filed Critical Wellcome Found
Publication of SI9300616A publication Critical patent/SI9300616A/sl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/30—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/32—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/33—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D207/333—Radicals substituted by oxygen or sulfur atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/13—Amines
    • A61K31/155—Amidines (), e.g. guanidine (H2N—C(=NH)—NH2), isourea (N=C(OH)—NH2), isothiourea (—N=C(SH)—NH2)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/38—Heterocyclic compounds having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/02—Non-specific cardiovascular stimulants, e.g. drugs for syncope, antihypotensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C335/00—Thioureas, i.e. compounds containing any of the groups, the nitrogen atoms not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C335/30—Isothioureas
    • C07C335/32—Isothioureas having sulfur atoms of isothiourea groups bound to acyclic carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/28—Radicals substituted by singly-bound oxygen or sulphur atoms
    • C07D213/32—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/08—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member
    • C07D277/12—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having one double bond between ring members or between a ring member and a non-ring member with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/18—Nitrogen atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D277/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings
    • C07D277/02—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings
    • C07D277/20—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D277/32—Heterocyclic compounds containing 1,3-thiazole or hydrogenated 1,3-thiazole rings not condensed with other rings having two or three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D277/38—Nitrogen atoms
    • C07D277/40—Unsubstituted amino or imino radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/06—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to the ring carbon atoms
    • C07D333/14—Radicals substituted by singly bound hetero atoms other than halogen
    • C07D333/18—Radicals substituted by singly bound hetero atoms other than halogen by sulfur atoms

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Description

THE WELLCOME FOUNDATION LIMITED
Inhibitorji encimov
Predloženi izum se nanaša na izotiosečninske derivate, na postopke za njihovo izdelovanje, na farmacevtske sestavke, ki jih vsebujejo in na njihovo uporabo pri zdravljenju, še posebno na njihovo uporabo kot inhibitorjev dušikov oksid sintaze.
Od zgodnjih 1980-tih je znano, da je vaskularna sprostitev, povzročena z acetilholinom, odvisna od prisotnosti endotelija in to delovanje pripisujemo labilnemu humoralnemu faktorju, imenovanemu iz endotelija - izveden relaksacijski faktor (EDRF). Aktivnost dušikovega oksida (NO), kot vazodilatatorja, je dobro znana preko sto let in NO je aktivna sestavina amil nitrita, gliceril nitrita in drugih nitro vazodilatatorjev. Nedavna identifikacija EDRF kot NO sovpada z odkritjem biokemijske poti, po kateri je NO sintetiziran iz amino kisline L-arginina z encimom NO sintazo.
NO je endogeni stimulator topne gvanilatne ciklaze in je vpleten v številne biološke učinke, poleg v endotelijsko-odvisno sprostitev, ki vključuje citotoksičnost fagocitnih celic in celica-do-celice komunikacijo v centralnem živčnem sistemu (glej Moncada et al, Biochemical Pharmacology, 38, 1709-1715 (1989) in Moncada et al, Pharmacological Review, 43,109-142 (1991)). Sedaj mislimo, daje lahko prekomerna NO produkcija vpletena v številna stanja, še posebno stanja, ki vključujejo sistemsko hipotenzijo, kot je septični (toksični) Šok in terapija z določenimi citokini.
Sintezo NO iz L-arginina lahko inhibira L-argininski analog L-N-monometil-arginin (L-NMMA) in predlagana je bila terapevtska uporaba L-NMMA za zdravljenje septičnega šoka in drugih tipov sistemske hipotenzije (WO 91/04024 in GB-A2240041). Terapevtska uporaba določenih drugih inhibitorjev NO sintaze, poleg L-NMMA, je bila za enak namen predlagana tudi v WO 91/04024 in v EP-A0446699.
Nedavno je postalo očitno, da obstajajo vsaj trije tipi encimov NO sintaz, kot sledi:
(i) konstitutivni, od Ca++/kalmodulina odvisen encim, lociran v endoteliju, ki sprošča NO kot odziv na receptor ali fizikalno stimulacijo.
(ii) konstitutivni, od Ca++/kalmodulina odvisen encim, lociran v možganih, ki sprošča NO kot odziv na receptor ali fizikalno stimulacijo.
(iii) Od Ca++ neodvisen encim, ki je induciran po aktivaciji v vaskularni gladki mišici, makrofagih, endotelialnih celicah in številnih drugih celicah, z endotoksinom in citokini. Ko je enkrat izražena, ta inducibilna NO sintaza sintezira NO dolgo časa.
NO sproščen s konstitutivnimi encimi deluje kot prestavljalni mehanizem, ki je podlaga več fiziološkim odzivom. Funkcija NO, proizvedenega z inducibilnim encimom, je,kot citotoksična molekula za borbo proti tumorskim celicam in vdiralnim mikroorganizmom (Wright et al.. Card. Res. 26, 48-57 (1992) in Moncada et al, Pharmaccological Review, 43, 109-142 (1991)). Zdi se tudi, da lahko škodljivi učinki prebitka NO produkcije, še posebno patološka vazodilatacija in poškodba tkiva, v veliki meri izhajajo iz učinkov NO sintetiziranega z inducibilno NO sintazo.
Inhibitorji NO sintaze, do sedaj predlagani za terapevtsko uporabo in še posebno L-NMMA, so neselektivni v tem, da inhibirajo tako encime konstitutivni, kot tudi inducibilno NO sintazo. Uporaba takšnega neselektivnega inhibitorja NO sintaze zahteva veliko previdnost, da se izognemo potencialno resnim posledicam prekomerne inhibicije encima konstitutivne NO sintaze, vključno s hipertenzijo, trombozo, CNS toksičnostjo in poškodbo tkiva. Še posebno je bilo v primeru terapevtske uporabe L-NMMA za zdravljenje septičnega šoka priporočeno, da moramo pacientu med zravljenjem nenehno opazovati krvni tlak. Ker imajo neselektivni inhibitorji NO sintaze terapevtsko uporabnost pod pogojem, da podvzamemo ustrezne varnostne ukrepe, bi tako imeli inhibitorji NO sintaze, ki so selektivni v smislu, da inhibirajo encim inducibilno NO sintazo do znatno večje mere, kot encim konstitutivna NO sintaza, še večjo terapevtsko korist in bi bili veliko lažji za uporabo.
Priprava in biološke lastnosti izotiosečnin so opisane v literaturi (Schroeder, Chem. Revs., 1955, 55, 181; Doherty et al, J. Am.Chem. Soc., 1957, 79, 5667; in Brand in Brand, Org. Synth., 1942, 22, 59; Smirk et al, Brit. Med. J. 1941, 510-11; J.Physiol., 1942, 100, 474-483; Lancet, 1942, 301-303; J. Physiol. 1943, 101, 379-388; Fastier, Brit. J. Pharmacol., 1948, 3, 198). Sedaj smo ugotovili, da so izotiosečnine inhibitorji NO sintaze in so uporabne pri zdravljenju sistemske hipotenzije, in še posebno, zdravljenju septičnega šoka. Poleg tega imajo številne izmed teh spojin, v primerjavi z encimoma konstitutivnima NO sintazama, selektivnost za encim inducibilno
NO sintazo.
Potemtakem predloženi izum zagotavlja postopek za zdravljenje stanj, ki zahtevajo inhibicijo encima dušikov oksid sintaze, ki obsega dajanje sesalcu, ki jo potrebuje, učinkovite količine izotiosečninskega derivata, ki ima inhibitorni učinek proti encimu NO sintazi, ali njegove farmacevtsko sprejemljive soli. Še v enem vidiku predloženi izum zagotavlja uporabo izotiosečnine, ki ima inhibitorni učinek proti encimu NO sintazi, za izdelovanje zdravila za zdravljenje stanj, kjer obstaja prednost v inhibiranju encima NO sintaze.
Natančneje, zagotovljen je postopek za zdravljenje sistemske hipotenzije in/ali septičnega šoka, ki obsega dajanje sesalcu, ki ga potrebuje, učinkovite količine izotiosečninskega derivata, ki ima inhibitorni učinek proti encimu NO sintazi, ali njegove farmacevtsko sprejemljive soli. V nadaljnjem vidiku je zagotovljena uporaba izotiosečninskega derivata, ki ima inhibitorni učinek proti encimu NO sintazi, za izdelovanje zdravila za zdravljenje sistemske hipotenzije in/ali septičnega šoka.
Nadaljnja stanja, kjer obstaja prednost v inhibiranju NO produkcije iz L-arginina, vključujejo zdravljenje s citokini, kot so TNF, IL-1 in IL-2 ali zdravljenje s citokininducirajočimi sredstvi, npr. 5,6-dimetilksantenon ocetno kislino, in kot adjuvantom v kratkotrajni imunosupresiji pri transplantantnem zdravljenju. Poleg tega so lahko spojine, ki inhibirajo NO sintezo, uporabne pri zmanjševanju NO koncentracije pri pacientih, ki bolehajo za vnetnimi stanji, pri katerih prebitek NO prispeva k patofiziologiji stanja, npr. sindromu odrasle respiratorne izčrpanosti (ARDS) in miokarditisu.
Obstaja tudi dokaz, da je lahko encim NO sintaza vpleten v degeneracijo hrustanca, ki poteka pri avtoimunskih in/ali vnetnih stanjih, kot so artritis, revmatoidni artritis, kronična črevesna bolezen in sistemska lupusna eritematoza (SLE). Menijo tudi, da je lahko encim NO sintaza spleten v inzulinsko-odvisen diabetes melitis. Zatorej še nadaljnji vidik predloženega izuma zagotavlja izotiosečninski derivat ali njegovo sol pri izdelovanju zdravila za uporabo v citokinski ali citokinsko-inducirajoči terapiji, kot adjuvanta v kratkotrajni imunosupresiji v transplantantni terapiji, za zdravljenje pacientov, ki bolehajo za vnetnimi stanji, pri katerih prebitek NO prispeva k patofiziologiji stanja, pri avtoimunskih in/ali vnetnih indikacijah in pri inzulinskoodvisnem diabetesu melitisu.
Še nadaljnji vidik zagotavlja postopek za zdravljenje škodljivih učinkov povezanih s citokinsko terapijo kratkotrajne imunosupresije pri transplantantni terapiji pacientov, ki bolehajo za vnetnimi stanjih, pri katerih prebiten NO prispeva k patofiziologiji stanja, avtoimunskih in/ali vnetnih indikacij in inzulinsko-odvisnega diabetesa melitis, ki obsega dajanje sesalcu, ki takšno zdravljenje potrebuje, učinkovite količine izotiosečninskega derivata, ki ima inhibitoren učinek proti encimu NO sintazi ali njegove farmacevtsko sprejemljive soli.
Kot uporabljamo tukaj, navedba zdravljenje pacienta vključuje profilakso; izraz sesalec vključuje človeka ali žival.
Prednostne izotiosečnine vključujejo tiste s formulo (I)
HN' (I) ali njihove soli, kjer je
R (1) C114hidroksikarbilna skupina; ali (2) 5- ali 6-členski heterociklični obroč; ali (3) 9-členski biciklični heterociklični obročni sistem pri čemer je vsaka skupina R v danem primeru substituirana z eno ali dvema skupinama neodvisno izbranima izmed:
(a) halo;
(b) -XR\kjerje
X kisik, C(O)m, pri čemer je m 1 ali 2, S(0)n, pri čemer je O, 1 ali 2, ali NR2, pri čemer je R2 vodik, C^alkil ali C3^cikloalkil, ali je R2 vezan na R1, da tvori C^alkilensko skupino;
R1 vodik ali C^alkil, C26alkenil; C3^cikloalkil, C7 9-aralkil, C6_10aril ali 5- ali
6-členska heterociklična skupina, pri čemer je vsaka skupina v danem primeru substituirana z eno ali dvema skupinama neodvisno izbranima iz C13alkila, hidroksi, C13alkoksi, amino, C13alkilamino, halo, nitro, ali skupine C(O)m,R2b, pri čemer je m’ 1 ali 2 in je R2b vodik ali ClJ(alkil; ali je R1 skupina NR3R4 pri čemer sta R3 in R4 enaka ali različna in je vsak vodik ali CMalkil ali sta R3 in R4 povezana, da tvorita C2 6alkilensko skupino;
NH (c) skupine (Y)w-Q-S-------- P™ ^6ΠΐεΓ Xnh2
Y kisik, S(O)n, pri čemer je n, kot je definirano predhodno, ali NR5, pri čemer je R5 vodik ali ClJ(alkil;
w 0 ali 1;
Q C2j)hidrokarbil ali je imino dušik vezan na skupino R ali na skupino Q, da tvori 5- ali 6-členski heterocikličen obroč;
(d) skupine A, pri čemer je A heterocikličen obročni sistem, v danem primeru
NH substituiran s skupino (Y)w-Q-S-v s pridržkom, da R ni metil.
NH, kot je predhodno definirano; ali (e) C16alkilne, C2 6alkenilne ali alkinilne ali C3^cikloalkilne skupine;
ali je eden izmed ogljikovih atomov v R vezan na imino dušikov atom v spojini s formulo (I), da tvori 5- ali 6-členski heterocikličen obroč;
Ustrezno je R:
(1) C^alkil;
(2) C28alkenil ali alkinil;
(3) skupina -(CH2)p-^^-(CH2)qCH3, pri čemer je p 0 do 4 in je q 0 do 3; ali (4) 5- ali 6-členski heterociklični obroč, pri čemer je vsak v danem primeru substituiran z eno ali dvema skupinama, ki sta lahko enaki ali različni, izbrani izmed (a) halo;
(b) OR2b, pri čemer je R2b kot je definirano predhodno;
(c) C(O)mR2b, pri čemer sta m in R2b kot je definirano predhodno;
(d) S(O)nR6, pri čemer je n, kot je definirano predhodno, in je R6 C14alkil, v danem primeru substituiran z eno ali dvema skupinama neodvisno izbranima iz amino ali C(O)mR2b, kot je definirano predhodno;
(e) NR7R8, pri čemer sta R7 in R8 vsak neodvisno izbrana izmed vodika,
CMalkila, C^alkenila, C14alkoksialkila;
ali sta R7 in R8 vezana skupaj, da tvorita 5- ali 6-členski heterocikličen obroč;
(f) fenilni obroč ali 5- ali 6-členski heterociklični obroč, vsak v danem primeru substituiran s skupino OR2b, kot je predhodno definirano, ali s skupino
NH
Q-Snh2 pri čemer je Q, kot je definirano predhodno; ali je imino dušik vezan na skupino Q, da tvori tiazolni ali tiazolinski obroč; ali (g) C14alkil, kadar je R heterocikličen obroč;
ali je eden izmed ogljikovih atomov v R vezan na imino dušik v spojini s formulo (I), da tvori tiazolni ali tiazolinski obroč.
Najbolj ustrezno je R (1) C^alkil;
(2) C2^alkenil;
(3) skupina -(CH2)^^-(CH2)qCH3, pri čemer je p 1 ali 2 in je q O ali 1; ali (4) 5- ali 6-členski heterociklični obroč, ki vsebuje en ali dva dušikova atoma.
pri čemer je vsak v danem primeru substituiran z eno ali dvema skupinama, ki sta lahko enaki ali različni, izbranima izmed (a) halo, prednostno bromo;
(b) skupine OR2b’, kjer je R2b’ vodik ali metil;
(c) skupine C(O)mR2b’, kjer sta m in R2b’ kot je definirano predhodno (d) skupine SR9, kjer je R9 metil ali etil;
(e) skupine NR7bR8b, kjer sta R7b in RSb vsak neodvisno izbrana izmed vodika ali C14alkila, prednostno vodika, metila ali etila;
(f) fenilnega obroča, v danem primeru substituiranega s skupino OR2b’ ali
kotje definirano predhodno;
(g) 5- ali 6-členskega heterocikličnega obroča, ki vsebuje en ali dva heteroatoma, neodvisno izbrana izmed dušika ali kisika; ali (h) CM-alkiIa, prednostno metila ali je eden izmed ogljikovih atomov v R vezan na imino dušik v spojini s formulo (I), da tvori tiazolni ali tiazolinski obroč.
Formula (I) vključuje izotiosečninske derivate s formulo (IA), (IB) in (IC)
(IA)
HtN· (IB)
NH
N—1
(IC) pri čemer je R’ C^alkilenska skupina ali C, galkenilenska ali alkinilenska skupina, pri čemer vsaka v danem primeru vsebuje fenilni obroč, 5- ali 6-členski heterociklični obroč ali skupino X, kot je predhodno definirano, in črtkana črta predstavlja dvojno ali enojno vez.
Formula I vključuje tudi spojine s formulo (II)
SR3
HNi
NH, (II) ali njihove soli, pri čemer je Ra C^hidrokarbil ali 5- ali 6-členski heterociklični obroč ali 9-členski biciklični heterociklični obročni sistem, pri čemer je vsak v danem primeru substituiran s halo ali z eno ali dvema skupinama-XaRla, pri čemer je Rla vodik, C^alkil, C3^cikloalkil, C7 9aralkil, C640aril, ali 5- ali 6-členska heterociklična skupina, pri čemer je vsak v danem primem substituiran s C13alkilom, C13alkoksi, amino, halo ali nitro ali je Rla skupina NR3aR4a, pri čemer sta R33 in R4a enaka ali različna in je vsak vodik ali C13alkil ali sta R3a in R4a vezana, da tvorita C^alkilensko skupino in je Xa kisik, C(O)ma, pri čemer je ma 1 ali 2, S(O)na, pri čemer je na 0,1 ali 2 ali NR23, kjer je R23 vodik, C^alkil ali C3^cikloalkil ali R23 vezan na Rla, da tvorita C2 6alkilensko skupino, ali s skupino jKCH^UHN<^^^NH2 kjer je t O do 4 in je χν3 O ali 1, Ya je kisik, žveplo in NR7a, pri čemer je R7a vodik ali C^alkil;
ali Ra veže žveplov atom na enega izmed dušikovih atomov v spojini s formulo (I), da tvori 5- ali 6-členski heterociklični obroč, s pridržkom, da Ra ni metil.
Ena prednostna skupina spojin so tiste, kjer R ni metil, etil, propil ali izopropil.
Prednostne spojine s formulo (I) vključujejo:
S-(2-aminoetil)izotiosečniho
S-(2-(dimetilamino)propil)izotiosečnino
S-(2-metil-2-propenil)izotiosečnino
S,S’-etilenbis(izotiosečnino)
S,S’-pentametilenbis(izotiosečnino)
S-(2-(dimetilamino)etil)izotiosečnino
2-amino-2-tiazolin
S,S’-heksametilenbis(izotiosečnino)
S,S’-heptametilenbis(izotiosečnino)
S-benzilizotiosečnino
S-(2-morfolinoetil)izotiosečnino
S-(6-metil-2-(metiltio)-4-pirimidinil)izotiosečnino
S,S’-(l,4-fenilenbis(metilen)diizotiosečnino
S-tercbutilizotiosečnino
S-(4-etilbenzil)izotiosečnino
S-((metiltio)metil)izotiosečnino
S-(3-bromopropil)izotiosečnino
S-(2-bromoetil)izotiosečnino
S-(3-metil-2-butenil)izotiosečnino
S-alilizotiosečnino
S-(3-aminopropil)izotiosečnino
S,S’-(l,3-fenilenbis(metilen))diizotiosečnino
S,S’-(2-metilen-l,3-propandiil)diizotiosečnino
S,S’-(2-butin-l,4-diil)diizotiosečnino
S,S’-(l,3-fenilenbis(l,2-etandiil)diizotiosečnino
S,S’-(l,4-fenilenbis(l,2-etandiil)diizotiosečnino
2- amino-5-metiltiazol
S-((2-amino-4-tiazolil)metil-L-cistein
3- ((2-amino-4-tiazolil)metil-L-alanin
2-amino-4-metiltiazol
2-amino-4,5-dimetiltiazol
S-(2-(lH-pirol-l-il)etil)izotiosečnino
S-(3-hidroksipropil)izotiosečnino
S-(2-(fenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnino
4- ((2'amino-4-tiazolil)metil)-L-homoalanin
N,N-l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-metilizotiosečnino)
N,N-(-,3-fenilenbis(metilen))bis(S-etilizotiosečnino)
5- (2-(5-((amidinotio)metil)-2-tienil)etil)izotiosečnino
S-(3-(4-((amidinotio)metil)fenil)propil)izotiosečnino
S-(3-(5-(2-amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnino
S-(2-(4-fluorofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-bromofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-metilfenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-etoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-metoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2-bromofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2-fluorofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-nitrofenil)etil)izotiosečnino
S-(3-(lH-pirol-l-il)propil)izotiosečnino
S-(2-(2-klorofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2,5-dimetilfenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-etoksi-3-metoksifenil)etil)izotiosečnino in njihove soli.
Posebno prednostne spojine vključujejo S,S’-(l,3-fenilenbis(l,2-etandiil)diizotiosečnino, S,S’-(l,4-fenilenbis(l,2-etandiil)diizotiosečnino, S-(2-(5-amidinotio) metil)-2-tienil)etil)izotiosečnino, S-(3-(5-(2-amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnino in S-(2’-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnino.
Druge prednostne spojine za zdravljenje septičnega šoka so S-etilizotiosečnina, S-propilizotiosečnina in S-izopropilizotiosečnina, posebno S-etilizotiosečnina in S-izopropilizotiosečnina in še posebno S-etilizotiosečnina.
Z izrazom hidrokarbilna skupina mislimo skupino, ki vsebuje le ogljikove in vodikove atome, toda lahko vsebuje dvojne in/ali trojne vezi, in ki je lahko ciklične ali aromatske narave.
Z izrazom heterociklični obroč mislimo ciklično spojino, ki vsebuje 1 do 3 heteroatome izbrane izmed kisika, žvepla in dušika, in prednostno izmed dušika ali žvepla.
Z izrazom halo mislimo fluoro, kioro, bromo ali jodo, in prednostno bromo.
Spojine s formulo (I) lahko vključujejo številne asimetrične centre v molekuli, odvisno od natančnega pomena različnih skupin in mišljeno je, da formula (I) vključuje vse možne izomere.
V nadaljnjem vidiku se predloženi izum nanaša na izotiosečnino s formulo (I) drugačno od benzilizotiosečnine, S,S-(l,4-fenilenbis(metilen))diizotiosečnine in S-(2-(dimetilamino)etil)izotiosečnine ali njihove farmacevtsko sprejemljive soli, ki imajo inhibitorni učinek proti encimu NO sintazi, za uporabo v medicini.
V še enem vidiku se predloženi izum nanaša na nove spojine s formulo (IA), (IB) in (IC), kot so definirane predhodno. Takšne spojine vključujejo:
S,S’-(l,4-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnino
S-(2(lH-pirol-l-il)etil)izotiosečnino
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-cistein
-y-(2’-amino-4-tiazolil)-L-homoalanin
S,S’-(l,2-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnino /3-(2’-amino-4’-tiazolil)-L-alanin
S-(2’-amino-5’-(R,S)-tiazoliniImetil)-L-cistein
4-((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-homoalanin
N,N-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-metilizotiosečnino)
N,N-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-etilizotiosečnino)
S-(3-(4-((amidinotio)metil)fenil)propil)izotiosečnino
S-(2-(5-((amidinotio)metil)-2-tienil)etil)izotiosečnino
S-(3-(5-(2-amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnino
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-D-cistein
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-(D,L)-homocistein
S-(2-(2-amino-4-tiazolil)etil)-L-cistein
S-(2-(4-fluorofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-bromofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-metilfenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-etoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(4-metoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2-bromofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2-fluorofenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(3-nitrofenil)etil)izotiosečnino
S-(3-(lH-pirol-l-il)propil)izotiosečnino
S-(2-(4-etoksi-3-metoksifenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2,4,6-trimetilfenil)etil)izotiosečnino
S-(2-(2,6-dimetoksifenil)etil)izotiosečnino in njihove soli.
Predloženi izum vključuje izotiosečnine v obliki soli, še posebno kislinskih adicijskih soli. Ustrezne soli vključujejo tiste, tvorjene tako z organskimi kot anorganskimi kislinami. Takšne kislinske adicijske soli so običajno farmacevtsko sprejemljive, čeprav so lahko soli ne-farmacevtsko sprejemljivih soli uporabne pri pripravi in čiščenju zadevnih spojin. Tako prednostne soli vključujejo tiste, tvorjene iz klorovodikove, bromovodikove, žveplove, citronske, vinske, fosforjeve, mlečne, piruvične, ocetne, trifluoroocetne, jantarne, oksalne, fumarne, maleinske, oksaloocetne, metansulfonske, etansulfonske, p-toluensulfonske, benzensulfonske, in izetionske kisline. Soli izotiosečnin lahko pripravimo s presnovo ustrezne spojine v obliki proste baze z ustrezno kislino.
Ker je za izotiosečnine v smislu izuma možno, da jih dajemo kot surovo kemikalijo, je prednostno, da jih predstavimo kot farmacevtski pripravek. Po nadaljnjem vidiku se predloženi izum nanaša na farmacevtski pripravek, ki vsebuje izotiosečnino v smislu predloženega izuma ali njeno farmacevtsko sprejemljivo sol ali solvat, skupaj z enim ali več njenimi farmacevtsko sprejemljivimi nosilci in v danem primeru eno ali več drugimi terapevtskimi sestavinami, npr. antibiotikom, in/ali volumnom nadomestitvene tekočine. Nosilec (c) mora biti sprejemljiv v smislu, da je kompatibilen z drugimi sestavinami pripravka in ni škodljiv za njegovega recipienta.
Pripravki vključujejo tiste, primerne za oralno, parenteralno (vključno subkutano, intradermalno, intramuskulamo, intravenozno in intraartikularno), rektalno in lokalno (vključno dermalno, bukalno, sublingualno in intraokularno) dajanje, čeprav je lahko najbolj primerna pot odvisna od primera stanja in motnje recipienta. Pripravke lahko primerno predstavimo v enotski dozirni obliki in lahko jih pripravimo po kateremkoli izmed postopkov dobro znanimi v farmacevtski stroki. Vsi postopki vključujejo stopnjo vzpostavitve spojine s formulo (I) ali njene farmacevtsko sprejemljive soli ali solvata (aktivne sestavine) v stik z nosilcem, ki sestoji iz ene ali več dodatnih sestavin. Na splošno pripravke pripravimo z enotno in neposredno vzpostavitvijo aktivne sestavine v stik s tekočimi nosilci ali drobno zmletimi trdnimi nosilci ali obemi in nato, če je potrebno, oblikovanjem produkta v želeno formulacijo.
Pripravke v smislu predloženega izuma, primerne za oralno dajanje, lahko predstavimo v diskretnih enotah, kot so kapsule, kahete ali tablete, pri čemer vsaka vsebuje predhodno določeno količino aktivne sestavine; kot prašek ali granule; kot raztopino ali suspenzijo v vodni tekočini ali ne-vodni tekočini. Ali kot olje-v-vodi tekočo emulzijo ali voda-v-olju tekočo emulzijo. Aktivno sestavino lahko predstavimo tudi kot veliko pilulo,kašo ali pasto.
Tableto lahko naredimo s stiskanjem ali modeliranjem, v danem primeru z eno ali več dodatnimi sestavinami. Stisnjene tablete lahko pripravimo s stiskanjem v primernem stroju, aktivne sestavine v prosto-tekoči obliki kot je prašek ali granule, v danem primeru zmešane z vezivom, mazivom, inertnim razredčilom, mazivnim, površinsko aktivnim ali dispergirnim sredstvom. Modelirane tablete lahko pripravimo z modeliranjem v primernem stroju, zmesi uprašene spojine, navlažene z inertnim tekočim razredčilom. Tablete lahko v danem primeru prevlečemo ali zarežemo in jih lahko formuliramo tako, da zagotovimo počasno ali nadzorovano sproščanje aktivne sestavine, ki je v tableti.
Pripravki za parenteralno dajanje vključujejo vodne in nevodne sterilne injekcijske raztopine, ki lahko vsebujejo antioksidante, pufre, bakteriostatike in raztopljene snovi, ki napravijo pripravek izotoničen s krvjo namenjenega recipienta; in vodne in nevodne sterilne suspenzije, ki lahko vključujejo suspendirna sredstva in gostilna sredstva. Pripravke lahko predstavimo v enotskih dozirnih ali več-dozirnih posodah, npr. zataljenih ampulah in fiolah in jih lahko hranimo v zamrznjeno-posušenem (liofiliziranem) stanju, ki zahteva le dodatek sterilnega tekočega nosilca, npr. slanice, vode za injekcijo, neposredno pred uporabo. Alternativno lahko pripravke predstavimo za kontinuirno infuzijo.
Nepripravljene injekcijske raztopine in suspenzije lahko pripravimo iz sterilnih praškov granul in tablet predhodno opisane vrste.
Pripravke za rektalno dajanje lahko predstavimo kot supozitorij z običajnimi nosilci, kot je kakavovo maslo ali polietilen glikol.
Pripravki za lokalno dajanje v usta, npr. bukalno ah sublingualno vključujejo pastile, ki vsebujejo aktivno sestavino v aromatizirani osnovi, kot je saharoza in akacija ali tragant, in pastile, ki vsebujejo aktivno sestavino v osnovi, kot je želatina in glicerin ali saharoza in akacija.
Prednostne enotske dozirne formulacije so tiste, ki vsebujejo učinkovito dozo aktivne sestavine, kot je navedeno v nadaljevanju, ali njen ustrezen del.
Razumeti je, da lahko poleg sestavin posebno navedenih zgoraj, lahko pripravki v smislu izuma vključujejo druga sredstva, ki so običajna v stroki, pri čemer upoštevamo tip zadevnega pripravka, npr. tisti primerni za oralno dajanje lahko vključujejo aromatizirna sredstva.
Za vsako izmed predhodno omenjenih stanj, lahko spojine v smislu izuma dajemo oralno ali preko injekcije v dozi od okoli 0,1 do okoli 250 mg/kg na dan. Dozirno območje za odrasle ljudi je splošno od 5 mg do 17,5 g/dan, prednostno 5 mg do 2 g/dan in najbolj prednostno 10 mg do 1 g/dan. Tablete ali druge oblike predstavitve, zagotovljene v diskretnih enotah, lahko ustrezno vsebujejo količino spojine v smislu izuma, ki je učinkovita pri takšni dozi ali večkratni dozi, npr. enotah, ki vsebujejo 5 mg do 500 mg, običajno okoli 10 mg do 200 mg.
Spojine s formulo (I) prednostno dajemo oralno ali z injekcijo (intravenozno ali subkutano). Natančna količina spojine, ki jo dajemo pacientu je odgovornost lečečega zdravnika. Seveda pa je uporabljena doza odvisna od številnih faktorjev, ki vključujejo starost in spol pacienta, natančne motnje, ki jih zdravimo, in njihovo resnost. Torej lahko pot dajanja variira v odvisnosti od stanja in njegove resnosti.
Predloženi izum zagotavlja tudi postopke za pripravo novih spojin, kot so definirane predhodno, analogno tistim, znanim v stroki za pripravo izotiosečninskih derivatov.
Tako lahko spojine s formulo (I) ali njihove zaščitene derivate, pripravimo s presnovo tiosečnine s spojino RL(L’)r, pri čemer je R kot je definiran predhodno, L in L’ sta oba odhodni skupini, npr. halo atom, kot je bromo, in r je 0 ali 1, čemur sledi odstranitev zaščite, če je to potrebno.
Podrobneje (i) spojine s formulo (IA)
HN
(IA) kot so definirane zgoraj, lahko pripravimo s presnovo tiosečnine s spojino LR’L’, pri čemer so L,L’ in R’ kot je definirano zgoraj. Ustrezno reakcijo izvedemo v polarnem topilu, kot je etanol, pri temperaturi od 20 °C do temperature refluksa topila.
Spojine s formulo LR’L’ so tržno razpoložljive ali jih lahko pripravimo iz ustreznega diola, HO-R’-OH, ustrezno z reakcijo v polarnem topilu, kot je diklorometan v prisotnosti halogenirnega sredstva, kot je ogljikov tetrabromid in trifenilfosfin.
Spojine s formulo HO-R’-OH so tržno razpoložljive ali jih lahko pripravimo z v stroki znanimi postopki.
(ii) Spojine s formulo (IB)
(IB) kot so definirane zgoraj, lahko pripravimo z odstranitvijo zaščite spojini s formulo (IB1) pri čemer je R’ in črtkana črta, kot je definirano zgoraj, in sta P in P’ enaka ali različna in sta oba zaščitni skupini, kot je benzil, benzoiloksikarbonil ali tercbutoksikarbonil. Reakcijo lahko izvedemo v trifluoroocetni kislini pri neekstremni temperaturi od -20 °C do 100 °C, kot je 0 °C v prisotnosti spiralnih molekul, kot je tianizol in 1,2-etanditiol.
Kadar črtkana črta predstavlja enojno vez in je substituent v položaju -4, lahko spojine s formulo (IB1) pripravimo iz spojine s formulo (IB2) (IB2) pri čemer so R’, P in P’ kot je definirano predhodno. Redukcijo azida do amina in ciklizacijo do tiazolina lahko izvedemo v tetrahidrofuranu v prisotnosti trifenilfosfina.
Spojine s formulo (IB2) lahko pripravimo iz spojin s formulo (IB3)
N/6S-
ΜΗΡ (ΙΒ3) pri čemer so R, P in P’ kot je predhodno definirano, s premestitvijo tozilata z azidnim anionom v polarnem topilu, kot je dimetilformamid pri neekstremni temperaturi od -20 °C do 200 °C,kot je temperatura refluksa topila.
Spojine s formulo (IB3) lahko pripravimo iz spojin s formulo (IB4)
(IB4) pri čemer so R’, P’ in P kot je definirano predhodno, z adicijo tiocianatnega aniona, da dobimo obročno - odprt alkoksid, ki ga lahko ujamemo kot tožil derivat (IB3) z adicijo para - toluensulfonil klorida. Spojine s formulo (IB4) lahko prirpavimo z strokovnjaku znanimi postopki.
Kadar črtkana črta predstavlja enojno vez in je substituent v položaju-5, lahko spojine s formulo (IB1) pripravimo iz spojine s formulo (IB5)
Ts
N,(ΊΒ5) z nadomestitvijo tozilata s tiocianatnim anionom (Tetrahedron Asymmetry 1992, 749-752), ki jo lahko izvedemo v polarnem topilu, kot je etanol pri neekstremnih temperaturah, od -20 °C do 200 °C, kot je temperatura refluksa topila, čemur sledi ciklizacija s postopki analognimi tistim, opisanimi za pripravo spojin s formulo (IB) iz tistih s formulo (IB2). Spojine s formulo (IB5) lahko pripravimo iz ustreznega epoksida z odprtjem obroča z azidnim anionom, čemur sledi ujetje alkoksida s paratoluensulfonil kloridom v polarnem topilu kot je dimetilformamid pri neekstremnih temperaturah od -20 °C do 200 °C, kot je 100 °C (Tetrahedron Lett. 1990, 31, (2), 221).
Kadar črtkana črta predstavlja dvojno vez in je substituent na tiazolnem obroču v položaju-5, lahko spojine s formulo (IB1) pripravimo s ciklizacijo kloroacetalov s formulo (IB6)
(IB6) pri čemer so R’, P in P’ kot je definirano predhodno, in je R10 C^alkilna skupina s tiosečnino. Reakcijo lahko izvedemo v polarnem topilu, kot je aceton ali etanol pri ne-estremni temperaturi od -20 °C do 200 °C (Chem. Abs. 54:14230d).
Spojine s formulo (IB6) lahko pripravimo iz sulfuril klorida in aldehidov s formulo (IB7)
P—<
tOHP (IB7) pri čemer so R’, P in P’ kot je definirano predhodno (Proč. Indian. Acad. Sci. 1941, 14A, 630-5; Chem. Abs. 36: 410z). Spojine s formulo (IB7) so tržno razpoložljive ali jih lahko pripravimo s strokovnjaku znanimi postopki.
Kadar črtkana črta predstavlja dvojno vez in je substituent na tiazolnem obroču v položaju-4, lahko spojine s formulo (IB1) pripravimo z v stroki znanimi postopki, npr. a-N-benziloksikarbonil-/3-(2’-amino-4’-tiazolil)alanin benzil ester (Synthetic Communications 1990,20 (30), 3097-3102).
(iii) Spojine s formulo (IC)
(IC) lahko pripravimo:
(a) kadar črtkana črta predstavlja enojno vez in je substituent v položaju-4, s postopki analognimi tistim, opisanimi za pripravo spojin s formulo (IB) iz tistih s formulo (IB4).
(b) Kadar črtkana črta predstavlja enojno vez in je substituent v položaju-5 tiazolinskega obroča, s postopki analognimi tistim, opisanimi za pripravo spojin s formulo (IB) iz tistih s formulo (IB5).
(c) Kadar črtkana črta predstavlja dvojno vez in je substituent v položaju-4 tiazolnega obroča s presnovo spojine s formulo (ICI)
s tiosečnino. Ustrezno lahko ciklizacijsko reakcijo izvedemo v polarnem topilu, kot je aceton pri ne-ekstremni temperaturi od -20 °C do 200 °C, kot je 20 °C.
Spojine s formulo (ICI) lahko pripravimo iz spojin s formulo HO2C-R’-CO2H, pri čemer je R’ kot je predhodno definirano, s postopki znanimi v stroki (J. Chem. Soc. 1940,1304-7; Chem. Abs. 35:1133).
(d) Kadar črtkana črta predstavlja dvojno vez in je substituent v položaju-5 tiazolnega obroča s postopki analognimi tistim, opisanimi za pripravo spojine s formulo (IB) iz spojine s formulo (IB6).
Delovanje spojin s formulo (I) kot inhibitorjev encimov izolirane NO sintaze smo prikazali proti encimom NO sintaze izoliranimi iz človeške placente, možganskih in citokinsko-induciranih karcinomnih celic.
Predloženi izum bomo opisali le za primer:
Primer 1
Priprava S.SVlAfenilenbisfl^-etandiil)) diizotiosečnina dihidrobromida
Raztopino 1,4-fenilendiocetne kisline (10,0 g, 51,5 mmol) v tetrahidrofuranu (200 ml) po kapljicah dodamo k 0 °C mešani suspenziji litijevega aluminijevega hidrida (3,91 g, 103 mmol) v tetrahidrofuranu (30 ml). Zmes segrevamo do refluksa 3 ure in jo nato ohladimo do 0 °C. Prebiten litijev aluminijev hidrid pogasimo s počasnim dodajanjem vode (4,0 ml), 15 % natrijevega hidroksida (4,0 ml) in vode (12 ml). Suspenzijo mešamo z magnezijevim sulfatom 5 minut, jo filtriramo in koncentriramo. Surovo olje prečistimo s silikagelno kromatografijo (etilacetat/heksani gradient, 50-100 %), da zagotovimo intermediatni diol (7,38 g, 86 %), kot bistro, brezbarvno olje. Raztopino tega olja v diklorometanu (200 ml) pri 0 °C obdelamo z ogljikovim tetrabromidom (32,4 g, 97,7 mmol) in trifenilfosfinom (25,6 g, 97,7 mmol). Predno dodamo pentan (500 ml), zmes mešamo pri 20 °C 4 ure. Po stanju 15 ur, raztopino oddekantiramo od rjavo-obarvane trdne snovi, jo koncentriramo in prečistimo s silikagelno kromatografijo (etilacetat/heksani gradient 0-20 %), da dobimo 1,4fenilenbis(l,2-etandiil) dibromid (8,2 g, 64 %) kot olje. Raztopino dibromida (4,0 g, 13,7 mmol) in tiosečnine (2,09 g, 27,4 mmol) v absolutnem etanolu (100 ml) refluktiramo 2 uri, ohladimo in koncentriramo do suhega. Surovo trdno snov prekristaliziramo iz etanola, da dobimo l,4-fenilenbis(l,2-etandiil))ditiosečnino dihidrobromid (2,89 g, 47 %) kot belo kristalinično trdno snov. Tal. = 234-236 °C.
Ή NMR (200 MHz, D2O) δ 7,26 (s, 4H), 3,38 (t, J=7,0 Hz, 4H), 3,01 (t, J=7,0 Hz, 4H).
Anal. izrač. za C^H^B^N^: C 32,44; H 4,54; Br 35,97; N 12,61; S 14,43.
Ugot.: C 32,45; H 4,59; Br 35,89; N 12,51; S 14,35.
Primer 2
Priprava S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-cisteina
K raztopini 2-amino-4-klorometiltiazola (Spraque J.M. et al. J. Am. Chem. Soc. 1946, 68, 2155-2159) (1,0 g, 5,4 mmol) in L-cistein hidroklorida (804 mg, 5,1 mmol) v dimetilformamidu (10 ml) dodamo kalijev karbonat (2,5 g). Suspenzijo mešamo 18 ur pri 22 °C. Nastalo zmes koncentriramo do suhega, ponovno raztopimo v vodo in napolnimo na ionsko izmenjevalno kolono (Dowex 50X8, močno kislo). Produkt eluiramo z gradientom amonijevega hidroksida (0,1 N do 0,5N). Združene produktne frakcije delno koncentriramo in liofiliziramo, da dobimo S-(2’-amino-4’tiazolilmetil)-L-cistein (1,04 g, 87 %) kot rumeno rjavo obarvano elektrostatično trdno snov.
*H NMR (300 MHz, D2O) δ 6,5 (s, IH), 3,8 (m, IH), 3,6 (s, 2H), 3,05-2,85 (m, 2H). Masni spekter (CI) 234 (M + 1, 71 %).
Primer 3
Priprava 7-(2’-amino-4,-tiazolil)-L-homoalanin (3-((2-amino-4-tiazolil)metil-L-alanina)
7-(2’-amino-4’-tiazoliI)-L-homoalanin pripravimo iz a-N-t-butoksikarbonil-y-(2’amino-4’-tiazolil)-L-homoalanin benzil estra (Patt et al. Synth. Commun. 1990, 20 (20), 3097-3102) v 9,6 % dobitku po postopku primera 6.
Ή NMR (D2O) δ 6,5 (s, IH), 3,9 (t, J=6,4 Hz), 2,75 (m, 2H), 2,2 (m, 2H).
Anal. izrač. za C7HnN3O2S.C2HF3O2.0,3 H2O: C 29,31; H 2,89; N 8,54; S 6,52.
Ugot.: C 29,37; H 3,02; N 8,53; S 6,63.
Primer 4
Priprava S.SVl.S-fenilenbisfl^-etandiiDdiizotiosečnina dihidrobromida
S,S’-(l,3-fenilenbis(l,2.-etandiil))diizotiosečnina dihidrobromid pripravimo po postopku primera 1 iz 1,3-fenilendiocetne kisline (Aldrich). Prekristalizacija iz etanola da belo kristalinično trdno snov (tal.194-190 °C).
Ή NMR (200 MHz, D2O) δ 7,4-7,2 (m, 4H), 3,39 (t, J=6,9 Hz, 4H), 3,02 (t,J=6,9 Hz, 4H).
Anal. izrač. za C^H^B^N^: C 32,44; H 4,54; Br 35,97; N 12,61; S14,43.
Ugot.: C 32,52; H 4,49; Br 36,04; N 12,61; S 14,35.
Primer 5
Priprava S.SVl^-fenilenbisfl^-etandiiDdiizotiosečnina dihidrobromida
S,S’-(l,2-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnina dihidrobromid pripravimo iz 1,2fenilendiocetne kisline (Aldrich) v 30 % celotnem dobitku kot rumeno peno po postopku primera 1.
jH NMR (300 Mhz, D2O) δ 7,29 (s, 4H), 3,38 (t, J=7,0 Hz, 4H), 3,09 (t, J=7,0 Hz). Prekristalizacija iz etanola da analitski vzorec, tal.=205-207 °C.
Anal.izrač. za C12H2QBr2N4S2: C 32,44; H 4,54; Br 35,97; N 12,61; S 14,43. Ugot.: C 32,47; H 4,58; Br 35,92; N 12,58; S 14,43.
Primer 6
Priprava 8-(2,-amino-4,-tiazolil)aIanin (3-(2-amino-4-tiazolil)-L-alanina)
K mešani raztopini a-N-t-butoksikarbonil-/3-(2’-amino-4’-tiazolil)alanin benzil estra (1,47 g) (Patt et al., Synth. Commun. 1990, 20 (20), 2097-3102) v diklorometanu (15 ml) pri -88 °C pod atmosfero dušika dodamo trietil silan (3 ml) čemur sledi trifluoroocetna kislina (3 ml). Pred koncentriranjem raztopino 1 uro segrevamo do sobne temperature. Ostanek obdelamo z ocetno kislino (30 ml), 20 % Pd/C (2,0 g) in 1,4-cikloheksandienom (20 ml). Zmes 2 uri sonificiramo od sobne temperature do 33 °C in filtriramo preko celite-a, speremo z vodo. Filtrat koncentriramo in ponovno raztopimo v 30 ml ocetne kisline in obdelamo z 2,0 g svežega 20 % Pd/C in 2 ml 1,4cikloheksandienom. Po sonificiranju dve uri suspenzijo filtriramo preko celite-a. Ta postopek dodajanja svežega katalizatorja ponovimo 3-krat, predno surov produkt prečistimo s ponovitveno semi-prep. reverzno fazno kromatografijo (C-18, elucija z 10 % metanolom/vodo, ki vsebuje 0,1 % trifluoroocetne kisline. Liofilizirane produktne frakcije dajo 337 mg (18 %) /3-(2’-amino-4’-tiazolil)-L-alanina kot lepljivo steklu-podobno trdno snov.
*H NMR (D2O) δ 6,6 (s, IH), 4,0 (t, J=7,6 Hz, IH), 3,15 (m, 2H). Masni spekter (Cl) 188 (M+l).
Anal. izrač. za C12H12N3F9OgS: C 27,23; H 2,29; N 7,94; S 6,06.
Ugot.: C 27,22; H 2,42; N 7,8; S 5,67.
Primer 7
Priprava S,S,-(2,6-piridilenbis(metilen))diizotiosečnine
K raztopini 2,6-piridindimetanola (5,0 g, 35,9 mmol) v diklorometanu (200 ml) pri 0 °C dodamo ogljikov tetrabromid (23,83 g, 71,9 mmol) in trifenilfosfin (18,85 g, 71,9 mmol). Raztopino mešamo 6 ur ob segrevanju do 20 °C. Dodamo pentan (300 ml). Raztopino pustimo stati pri 20 °C 16 ur, predno jo filtriramo, da odstranimo trdne nečistoče. Filtrat koncentriramo do. olja, ki ga prečistimo s silikagelno kromatografijo (heksani, nato 10 % etil acetat/heksani), da dobimo 2,6-piridindibromid (4,47, 47 %) kot sivo belo prašnato trdno snov. K raztopini 2,6-piridindibromida (3,94 g, 14,87 mmol) v etanolu (100 ml) dodamo tiosečnino (2,26 g, 29,74 mmol) in nastalo suspenzijo mešamo pri refluksu 2 uri. Raztopino koncentriramo do suhega, da dobimo S,S’(2,6-piridilenbis(metilen))diizotiosečnino (5,3 g, 83,9 %) kot bel prah.
*H NMR (200 MHz, DMSO) S 7,95 (t, J=7,6 Hz, IH), 7,51 (d, J=7,8 Hz, 2H), 4,65 (s,4H).
Anal. izrač. za C9H15N5S2Br2.0,6 H2O: C 25,26; H 3,81; N 16,36; S 14,98; Br 37,34. Ugot.: C 25,3; H 3,78; N 16,25; S 14,94; Br 37,38.
Primer 8
Priprava S-(2,-amino-5,-(R.S)-tiazolinilmetiri-L-cisteina
K raztopini 2-amino-5-jodometiltiazolina (4,44 g, 12 mmol) (Creeke & Mellor, Tet. Lett. 1989, 30 (33), 4435-4438) in L-cistein hidroklorida (1,76 g, 10,0 mmol) v dimetilformamidu (75 ml) dodamo kalijev karbonat (5,0 g 36 mmol). Suspenzijo mešamo 72 ur pri 22 °C in refluktiramo 30 minut. Dodamo acetonitril in zmes filtriramo. Pridobljene trdne snovi večkrat speremo s toplim metanolom. Razredčenje z metanolnimi raztopinami z etanolom da belo oborino, ki jo odstranimo s filtracijo. Koncentriran filtrat (olje) prevzamemo v metanol/etanol in obdelamo z etanolnim vodikovim kloridom, dokler ni več opaziti nadaljnjega obarjanja in zmes filtriramo. Olje, ki ga dobimo s koncentriranjem filtrata, prečistimo z ionsko izmenjevalno kromatografijo (Dowex 50X8, močno kislo), eluiramo z 0,lN amonijevim hidroksidom. Ninhidrin pozitivne frakcije združimo in liofiliziramo, da dobimo 0,453 g rahlo rumeno rjavo obarvano trdno snov, kontaminirano z dimetilformamidom. To trdno snov prečistimo s preparativno HPLC (C18 reverzna faza, metanol:voda:trifluoroocetna kislina/5:95:0,l), da dobimo 0,36 g S-(2’-amino-5’(R,S)-tiazolinilmetil)-L-cisteina kot trifluoroacetatno sol. TLC (amonijev hidroksid:metanol/l:50) Rf = 0,5. Ή NMR (200 MHz, D2O) δ 4,37-4,24 (m, IH), 4,11-3,87 (m, 3H), 3,27-3,13 (m, 2H), 3,05-2,97 (m, 2H). Masni spekter (FAB) 236,0 (M+l, 48%).
Anal. izrač. za C?H13N3O2S2.3 (C2HF3O2): C 27,04; H 2,79; N 7,28; S 11,11. Ugot.: C 27,32; H 2,91; N 7,41; S 11,17.
Primer 9
Priprava 4((2-amino-4-tiazolil)metil-L-homoalanina
4-((2-amino-4-tiazolil)metil)-Na:-t-Boc-L-homoalanin t-butil ester pripravimo po postopku Patt et al, (Synth. Commun. 1990, 20 (20), 3097-3102) v 45 % celotnem dobitku (1,3 g) iz N-t-Boc-L-2-aminoadipinska kislina 1-t-butil estra (Ramsamy et al. Synthesis, 1982, 42-43). t-Boc in t-butil estrske zaščitne skupine odstranimo kot sledi:
K raztopini 1,68 g 4-((2-amino-4-tiazolil)metil)-No!-t-Boc-L-homoalanin t-butil estra v 35 ml dioksana dodamo 1,1 ml trietilsilana in 8 ml 4N klorovodikove kisline v dioksanski raztopini. Po mešanju 16 ur pri 22 °C zmes filtriramo in trdne snovi speremo z dioksanom. NMR surovega vzorca kaže na nedokončano reakcijo. Ponovno raztopimo surovo trdno snov v 20 ml dioksana in obdelujemo s 4N klorovodikovo kislino (5 ml) 4 ure. Trdne snovi izoliramo s filtracijo, jih raztopimo v vodo, in liofiliziramo, da dobimo 1,23 g (80 %) 4-((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-homoalanina kot higroskopno belo trdno snov (bis-hidroklorid hidriran z 1,4 mol % vode in solvatiziran z 0,3 mol % dioksana). Analizna HPLC; Phenomenex C 18, voda/metanol/trifluoroocetna kislina (95/5/0,1), k’ = 0,34.
Ή NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ 9,25 (širok s 2H), 8,5 (širok s 2H), 6,55 (s, IH), 3,93 (m, IH), 2,6 (m, 2H), 1,8 (m, 4H).
Anal. izrač. za CgH13N3O2S · 2HC1 · 1,4 Κ,Ο · 0,3 dioksan: C 32,51, H 5,99; N 12,36; S 9,43; Cl 20,86. Ugot.: C 32,28; H 5,72; N 12,71; S 9,60; Cl 20,86.
Primer 10
Priprava N,N’-fh3-fenilenbisfmetilen)bisfS-metilizotiosečnine)
K 0 °C mešani raztopini 3,30 g (25 mmol) m-ksililendiamina (Aldrich Chemical) v 100 ml diklorometana dodamo 7,0 ml (52 mmol) benzoilizotiocianata. Zmes mešamo 18 ur pri 20 °C in topilo odstranimo pod znižanim tlakom. Surove trde snovi (bledo rumene) suspendiramo v 100 ml 10 % raztopine natrijevega hidroksida in refluktiramo 5 minut. Zmes nakisamo s koncentrirano klorovodikovo kislino, medtem ko je še vroča, jo ohladimo in nato naalkalimo z dodatkom amonijevega hidroksida. Bele trdne snovi, ki se oborijo, zberemo in posušimo pri 60 °C pod znižanim tlakom, do konstantne mase, da dobimo 4,82 g bis-tiosečninskega intermediata kot sivo belo trdno snov.
Anal. izrač. za C10H14N4S2: C 47,22; H 5,55; N 22,03; S 25,10. Ugot.: C 47,49; H 5,50; N 21,81; S 25,01.
K raztopini 2,54 g (10 mmol) bis-tiosečninskega intermediata v 25 ml dimetilformamida dodamo 5,0 ml (80 mmol) jodometana. Raztopino mešamo 65 ur pri 20 °C, topilo odstranimo pod znižanim tlakom in ostanek prekristaliziramo iz vročega etanola. Bledo rumene kristale posušimo pod znižanim tlakom pri 60 °C, da dobimo 4,28 g (81 %) N,N’-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-metilizotiosečnine), tal. = 164-167 °C. TLC (eno mesto na silikagelu z 1 % amonijevim hidroksidom v metanolu, Rf = 0,48). NMR (300 MHz DMSO/D2O) 8 7,5-7,4 (m, IH), 7,35-7,2 (m, 3H), 4,59 (s, 4H), 2,65 (s, 6H).
Anal. izrač. za C12H18N4S2 · 1,9 HJ: C 27,43; H 3,82; N 10,66; S 12,20; J 45,89.
Ugot.: C 27,30; H 3,91; N 10,57; S 12,19; 145,92.
Primer 11
Priprava N.NVU-fenilenbisfmetilenlbisfS-etilizotiosečnine)
K raztopini 1,0 g (3,93 mmol) bis-tiosečnine, pripravljene v primeru 10 v 20 ml etanola dodamo 6,29 g (78,62 mmol) jodoetana. Zmes segrevamo 8 ur do refluksa in jo koncentriramo do pene pod znižanim tlakom. Surovi produkt prečistimo s silikagelno kromatografijo z metanolom v diklorometanu (10 % do 20 %), da dobimo 1,66 g (74 %) N,N’-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-etilizotiosečnine). TLC (Rf = 0,30,48,20 % metanol v diklorometanu). Masni spekter (FAB) 311,2 (M+l).
*H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 7,5-7,4 (m, IH), 7,31-7,22 (m, 3H), 4,58 (s, 4H), 3,20 (q, J=7,4 Hz, 4H), 1,28 (t, J=7,4 Hz, 6H).
Anal. izrač. za C^H^N^ · 2HJ: C 29,69; H 4,27; N 9,89; S 11,32; J 44,82.
Ugot.: C 29,44; H 4,25; N 9,64; S 11,50; J 44,65.
Primer 12
Priprava S-(3-(4-amidinotio)metil)fenil)propil)izotiosečnine
Iz 3-(4-karboksifenil)propionske kisline (Lancaster-ova sinteza) pripravimo 3-(4((amidinotio)metil)fenil)propil)izotiosečnino kot belo trdno snov (2,95 g, tal. = 190195 °C) s postopkom primera 1. Masni spekter (FAB) 283 (M+l). XH NMR (200 MHz, D2O) δ 7,38 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,26 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 4,36 (s, 2H), 3,06 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,74 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 2,1-1,9 (m, 2H).
Anal. izrač. za C12H18N4S2 · 2HBr: C 32,44; H 4,54; N 12,61; S 14,43; Br 35,97. Ugot.: C 32,53; H 4,58; N 12,56; S 14,34; Br 35,85.
Primer 13
Priprava S-(2-(5-((amidinotio)metil)-2-tienil)etil)izotiosečnine
K raztopini 21,48 g (0,19 mol) a,α-diklorometil metil etra (Fluka) v 300 ml diklorometana pri 0 °C dodamo 44,76 g (0,172 mol) kositrovega (IV) klorida (Aldrich). Po 15 min po kapljicah v nekaj minutah dodamo raztopino 24,01 g (0,14 mol) etil 2-tiofenacetata (Aldrich) v 50 ml diklorometana. Zmes zlijemo v vodo in led po 1 uri in mešamo 30 minut. Diklorometansko plast speremo z vodo, posušimo preko natrijevega sulfata in koncentriramo. Surov produkt prečistimo s silikagelno kromatografijo z 10 % etil acetatom v heksanih, da dobimo 22,85 g (82 %) intermediata, etilester 5-formil-2-tiofenocetne kisline.
K 0 °C mešani suspenziji 0,77 g (20,29 mmol) litijevega aluminijevega hidrida (Aldrich) v 200 ml tetrahidrofurana dodamo raztopino 2,0 g (10,09 mmol) zgoraj pripravljenega intermediata v 50 ml tetrahidrofurana. Suspenzijo mešamo 16 ur pri 20 °C, ohladimo do 0 °G in prebitni hidrid pogasimo s previdnim dodajanjem 0,8 ml vode, 0,8 ml IN raztopine natrijevega hidroksida in 2,4 ml vode. Suspenzijo mešamo z magnezijevim sulfatom, filtriramo, koncentriramo in prečistimo s silikagelno kromatografijo s 50 % etil acetatom v heksanih do 100 % etil acetatom. Izoliramo 1,07 g (67 %) diolnega intermediata, ki ga neposredno pretvorimo v dibromid, kot sledi.
Diolni intermediat (1,07 g, 6,76 mmol) v 50 ml diklorometana pri 0 °C obdelamo s 3,90 g (14,87 mmol) trifenilfosfina in 4,93 g (14,87 mmol) ogljikovega tetrabromida. Predno dodamo 200 ml pentana raztopino mešamo 1 uro. Na površju plavajočo snov oddekantiramo od oljnatega ostanka, koncentriramo in prečistimo s silikagelno kromatografijo s heksani, da dobimo 1,10 g (57 %) dibromidnega intermediata. Dibromidni produkt (1,10 g, 3,87 mmol) v 50 ml etanola obdelamo z 0,59 g (7,75 mmol) tiosečnine. Raztopino mešamo 2 uri pri refluksu. Koncentrirano raztopino prečistimo s preparativno HPLC (Waters C18 BondaPak PrepPak polnjenje) z metanol/voda/trifluoroocetna kislina gradientom (5/95/0,1 do 90/10/0,1). Združene produktne frakcije koncentriramo, razredčimo z vodo in liofiliziramo, da dobimo 306 mg S-(2-(5-((amidinotio)metil)-2-tienil)etil)izotiosečnine kot bis-trifluoroocetno kislinsko sol in 0,1 mol hidrata (tal. = 186-190 °C). XH NMR (200 MHz, D2O) δ 6,98 (d, J = 3,5 Hz, IH), 4,57 (s, 2H), 3,38 (t, J = 6,5 Hz, 2H), 3,2 (t, J = 6,5 Hz, 2H).
Analiza izrač. za C9H14N4S3 · 2,0 C2HF3O2 · 0,1 H2O: C 30,96; H 3,24; N 11,11; S 19,08. Ugot.: C 31,02; H 3,19; N 11,00; S 18,97.
Primer 14
Priprava S-(3-(5-(2-(amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnme
Etil ester 5-formil-2-tiofenocetne kisline pripravimo, kot je opisano v primeru 13. K raztopini 2,0 g (10,09 mmol) tega estra v 100 ml tetrahidrofurana dodamo 3,87 g (11,10 mmol) karbetoksimetilentrifenilfosforana. Raztopino refluktiramo preko noči in koncentriramo. Surov produkt združimo z drugo 2,0 g reakcijsko zmesjo, pri čemer uporabimo 10,54 g (30,27 mmol) karboetoksimetilentrifenilfosforana refluktiranega v 100 ml tetrahidrofurana 3 ure. Združene surove produkte prečistimo s silikagelno kromatografijo (10 % etil acetat/heksan), da dobimo 2,39 g (44 %) in diesterskega intermediata. K raztopini 1,0 g (3,73 mmol) tega en-diestra v 50 ml etanola dodamo 1,0 g 10 % paladija na ogljiku. Zmes stresamo 14 ur pri 20 °C pod 344,74 kPa vodika. Katalizator odstranimo s filtracijo preko celite-a in raztopino koncentriramo, da dobimo 1,0 g surovega diesterskega intermediata. Končne tri reakcije na tem intermediatu, ki vključujejo redukcijo z litijevim aluminijevim hidridom (82 %), bromiranje nastalega diola (78 %) in alkilacijo dibromida s tiosečnino (88 %) so analogne tistim opisanim v primeru 13. Surov produkt alkilacijske reakcije prečistimo s preparativno HPLC (Waters, 08 BondaPak PrepPak polnjenje), pri čemer eluiramo z metanol/voda gradientom od 10 % do 90 % metanola v teku 40 minut (raztopine napuframo z 0,1 % trifluoroocetno kislino). Produktne frakcije liofiliziramo, da dobimo 1,53 g S-((3-(5-(2-amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnine kot mešano sol (1,0 HBr, 1,1 TFA) in 0,5 mol solvata z metanolom. Tal. = 146-151 °C. Masni spekter (FAB) 303. (M+l). *H NMR (200 MHz, D2O) δ 6,77 (d, J = 3,3 Hz, IH), 6,73 (d, J = 3,3 Hz, IH), 3,37 (t, J = 6,6 Hz, 2H), 3,21-3,03 (m, 2H), 2,91 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,1-1,95 (m, 2H).
Anal. izrač. za CnH18N4S3 · 1,0 HBr · 1,1 C2HF3O2 · 0,5 H^O; C 31,35; H 4,24; Br 15,22; N 10,68; S 18,05. Ugot.: C 31,59; H 4,01; Br 14,94; N 10,45; S 18,05.
Primere 15-17 pripravimo po postopku primera 2.Surove produkte prečistimo s preparativno HPLC (Waters, 08 BondaPak PrepPak polnjenje). Gradientne eluacije z metanol/voda/trifluoroocetna kislina (5/95/0,1 do 90/10/0,1), čemur sledi liofilizacija, zagotovi ciljne amino kisline kot trifluoroocetne kislinske adicijske soli.
Primer 15
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-D-cistein
Pripravimo iz D-cisteina in 2-amino-4-klorometiltiazola (Spraque, J.M. et al, J. Am. Chem.Soc. 1946, 68, 2155-2159). Analizna HPLC - phenomenex C18 voda/metanol/hepentafluoromaslena kislina (80/20/0,17), en vrh, k’ = 1,9. UV (pH 7,0 pufer) Xmaks 254 nm (log ε 3,73). 7H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 8,1 (širok, 2H), 8,1-7,5 (širok, 2H), 6,5 (s, IH), 4,25 (m, IH), 3,65 (d, J = 6 Hz, 2H), 3,0 (m, 2H).
Analiza izrač. za C7HnN3O2S · 2,3 C2HF3O2 · 0,1 H2O; C 27,92; H 2,72; N 8,43; S 12,85. Ugot.: C 28,00; H 2,89; N 8,74; S 12,62.
Primer 16
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-(D,L)-homocistein
Pripravimo iz (D,L)-homocisteina in 2-amino-4-klorometiltiazola (Spraque, J.M.et al J.Am.Chem.Soc. 1946, 68, 2155-2159). Analizna HPLC - phenomenex 08, voda/metanol/trifluoroocetna kislina (95/5/0,1), en vrh, k’ = 2,3 UV (pH 7,0 pufer) Xmaks 254 nm (log ε 3,73). *H NMR (200 MHz, DMSO-d6) δ 8,5-8,0 (širok, 2H), 7,27,0 (širok, 2H), 6,35 (s, IH), 4,0 (t, J = 4 Hz, IH), 3,55 (s, 2H), 2,6 (m, 2H), 2,0 (m, 2H).
Anal. izrač. za CgH3N3O2S · 1,1 C2HF3O2 · 1,0 f^O; C 31,35; H 4,15; N 10,75; S 16,41. Ugot.: C 31,30; H 4,07; N 10,73; S 16,31.
Primer 17
S-(2-(2-amino-4-tiazolil)etil)-L-cistein
Iz L-cisteina in 2-amino-4-(2-bromoetil)tiazola (pripravljenega iz l,5-dibromo-2butanona po postopku Spraque et at J.Am.Chem.Soc. 1946,68, 2155-2159).
Analizna HPLC - fenomeneks 08, voda/metanol/trifluoroocetna kislina (95/5/0,1), en vrh, k’ = 2,6. UV (pH 7,0 pufer) Xmakg 256 nm (log ε 3,71). XH NMR (200 MHz,
DMSO-d6) δ 9,2-8,8 (širok, 2H), 8,6-8,2 (širok, 2H), 6,6 (s, IH), 4,2 (m, IH), 3,0 (m, 2H), 2,8 (m, 4H).
Anal. izrač. za C8H13N3O2S2 · 2,0 C2HF3O2 · 2,4 H2O; C 27,79; H 3,85; N 8,10; S 12,37. Ugot.: C 27,65; H 3,69; N 8,02; S 12,38.
Primer 18
Priprava S-(2-(4-bromofenil)etil)izotiosečnina hidrobromida
K raztopini 4-bromofenetil alkohola (720 mg, 0,50 ml, 3,58 mmol) in trifenilfosfina (1,13 g, 4,30 mmol) v diklorometanu (7,0 ml) pri 0 °C dodamo ogljikov tetrabromid (1,42 g, 4,30 mmol). Reakcijsko zmes mešamo 30 minut, medtem ko jo segrevamo do sobne temperature. Raztopino zlijemo v heksan (100 ml) in filtriramo preko celite-a. Topila odstranimo v vakuumu, dodamo heksan in raztopino filtriramo preko celite.Po odstranitvi topila v vakuumu surovi material kugelrohr destiliramo (120 °C/93,33 Pa), da dobimo bistro olje.
Bistro olje raztopimo v 95 % etanolu (7,0 ml) in dodamo tiosečnino (300 mg, 3,94 mmol). Reakcijsko zmes segrevamo 16 ur do refluksa, ohladimo do sobne temperature in topilo odstranimo v vakuumu, da dobimo belo trdno snov. Trdno snov suspendiramo v vročem acetonu in filtriramo, da dobimo 832 mg (68 % dobitek) naslovne spojine.
*H NMR (300 MHz, dfi-DMSO); δ 9,02 (s, 4H), 7,52 (d, J = 8,3 Hz, 2H), 7,26 (d, J =
8,3 Hz, 2H), 3,43 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 291 (t, J = 7,4 Hz, 2H).
M.S. (CI) za C9H12N2SBr2, m/z relativna intenziteta 259 (M+-Br, 100), 183 (68), 77 (92).
Elementna analiza za C9H12N2SBr2, izrač.: C 31,79; H 3,56; N 8,24; S 9,43; Br 46,99. Ugot.: C 31,84; H 3,59; N 8,19; S 9,34; Br 46,92.
Primer 19
Priprava S-(2-(4-fluorofenil)etil)izotiosečnina hidrobromida
Pripravimo iz 4-fluorofenetil alkohola po postopku primera 18. Naslovno spojino prečistimo s prekristalizacijo iz absolutnega etanola.
*H NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,10 (širok, s, 2H), 8,96 (širok s, 2H), 7,32 (m, 2H), 7,14 (m, 2H), 3,43 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,91 (t, J = 6,8 Hz, 2H).
M.S. (Cl) za C9H12N2SFBr, m/z relativna inteziteta 199 (M+-Br, 42), 77 (100). Elementna analiza za (C9H12N2SF)(CH4N2S)063 (HBr)106, izrač.: C 34,84; H 4,43; N 13,75; S 15,74; Br 25,51. Ugot.: C 35,31; H 4,41; N 13,62;’S 15,51; Br 25,92.
Primer 20
Priprava S-(2-(4-etoksi-3-metoksifenil)etil)izotiosečnina hidrobromida
Pripravimo iz 4-etoksi-3-metoksifenetil alkohola po postopku primera 18. Naslovno spojino prečistimo s prekristalizacijo iz absolutnega etanola.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 8,95 (širok s, 4H), 6,87 (s, IH), 6,84 (d, J = 8,1 Hz, IH), 6,73 (d, J = 8,2 Hz, IH), 3,94 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,39 (t, J =
7,3 Hz, 2H), 2,83 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,28 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
M.S. (Cl) za C12H19N2O2SBr, m/z relativna intenziteta 255 (M+-Br, 56), 179 (100).
»
Elementna analiza za C12H19N2O2SBr, izrač.: C 42,99; H 5,71; N 8,36; S 9,56; Br 23,83. Ugot.: C 43,09; H 5,73; N 8,42; S 9,61; Br 23,89.
Primer 21
Priprava S-(2-(4-etoksifenil)etil)izotiosečnina hidroklorida
Pripravimo iz 4-etoksifenetil alkohola po postopku primera 18. Surov produkt raztopimo v vodi in dodamo 2 molska ekvivalenta vodnega natrijevega pikrata. S filtracijo izoliramo svetlo rumeno oborino in kromatografiramo na AG1-X2 ionski izmenjevalni smoli (200-400 mesh, kloridna oblika 10:1 voda:metanol eluent), da dobimo hidrokloridno sol.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,19 (širok s, 4H), 7,19 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3,9.4 (q, J = 7,0 Hz, 2H), 3,39 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,83 (t, J = 7,4 Hz, 2H), 1,28 (t, J = 7,0 Hz, 3H).
M.S. (Cl) za CnH17N2OSCl, m/z relativna inteziteta 225 (M+-C1,37), 149 (100).
Elementna analiza za (CUH16N2OS) (ΗΟ)1θ8(ΟΗ4Ν28)θθ8(Η20)θ16, izrač.: C 48,81; H 6,55; N 11,10; S 12,70; Cl 14,04. Ugot.: C 48,91; H 6,41; N 11,12; S 12,55; Cl 14,20.
Primer 22
Priprava S-(2-(2,6-dimetoksifenil)etil)izotiosečnina hidroklorida
Pripravimo iz 2,6-dimetoksifenetil alkohola po postopku primera 21.
*H NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,14 (širok s, 4H), 7,18 (t, J = 8,2 Hz, IH), 6,07 (d, J = 8,2 Hz, 2H), 3,73 (s, 6H), 3,39 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,83 (t, J = 7,4 Hz, 2H).
M.S. (CI) za C11H17N2O2SC1, m/z relativna intenziteta 241 (M+-C1,25), 165 (100).
Elementna analiza za CnH17N2O2SCl, izrač.: C 47,74; H 6,19; N 10,12; S 11,48; Cl 12,81. Ugot.: C 47,77; H 6,19; N 10,07; S 11,48; Cl 12,87.
Primer 23
Priprava S-(2-(4-metoksifenil)etil)izotiosečnina hidroklorida
Pripravimo iz 4-metoksifenetil alkohola po postopku primera 21.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,19 (širok s, 4H), 7,19 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,82 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 3,73 (s, 3H), 3,39 (t, J = 7,3 Hz, 2H), 2,83 (t, J = 7,2 Hz, 2H).
M.S. (CI) za CnH17N2OSCl, m/z (relativna intenziteta) 211 (M+-C1,22), 135 (100).
Elementna analiza za (C10H15N2OSC1), izrač.: C 48,68; H 6,13; N 11,36; S 12,89; Cl 14,45. Ugot.: C 48,70; H 6,10; N 11,36; S 12,89; Cl 14,45.
Primer 24
Priprava 2-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnina hidroklorida
Pripravimo iz 3-metoksifenetil alkohola po postopku primera 21.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,00 (širok s, 4H), 7,21 (t, J = 7,9 Hz, IH), 6,80 (m, 3H), 3,72 (s, 3H), 3,43 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 2,88 (t, J = 7,4 Hz, 2H).
M.S. (CI) za C10H17N2OSCl,m/z (relativna inteziteta) 211 (M+-C1,100), 135 (10), 77 (70).
Elementna analiza za (C10H16N2OS)(HCl)105(CH4N2S)020(H2O)oo5, izrač.: C 45,39; H 6,13; N 12,62; S 14,45; Cl 13,61. Ugot.: C 45,28; H 6,18; N 12,54; S 13,43; Cl 13,65.
Primer 25
Priprava S-(2-(2,4,6-trimetilfenil)etil)izotiosečnina hidrobromida
Pripravimo iz 2,4,6-trimetoksifenetil alkohola po postopku primera 18. Naslovno spojino prečistimo s prekristalizacijo iz absolutnega etanola.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,00 (s, 4H), 6,80 (s, 2H), 3,24 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 2,84 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,49 (s, 3H), 2,28 (s, 6H).
M.S. (CI) za C12H19N2SBr, m/z (relativna intenziteta) 223 (M+-Br, 50), 147 (100).
Elementna analiza za C12H19N2SBr, izrač.: C 47,53; H 6,32; N 9,24; S 10,57; Br 26,53. Ugot.: C 47,26; H 6,30; N 9,34; S 10,49; Br 26,48.
Primer 26
Priprava S-(2-(3-metilfenil)etil)izotiosečnina hidrobromida
Pripravimo iz 3-metilfenetil alkohola po postopku primera 18. Naslovno spojino prečistimo s prekristalizacijo iz absolutnega etanola.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,08 (širok s, 2H), 9,03 (širok s, 2H), 7,20 (t, J = 7,5 Hz, IH), 7,08 (m, 3H), 3,43 (t, J = 7,8 Hz, 2H), 2,88 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 2,28 (s, 3H).
M.S. (CI) za C10H15N2SBr, m/z (relativna intenziteta) 195 (m+-Br, 100), 119 (56), 77 (42).
Elementna analiza za (C1QH15N2SBr)(CH4N2S)014, izrač.: C 42,60, H 5,49, N 11,17; S
12,79; Br 27,95. Ugot.: C 42,66; H 5,50; N 11,20; S 12,57; Br 27,79.
Primer 27
Priprava S-(2-(2-fluorofenil)etil)izotiosečnina hidroklorida
Pripravimo iz 2-fluorofenetil alkohola po postopku primera 21.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,21 (širok s, 4H), 7,39 (m, IH), 7,28 (m, IH),7,17 (m, 2H); 3,43 (t, J = 7,7 Hz, 2H), 2,92 (t, J = 7,8 Hz, 2H).
M.S. (Cl) za C9H12N2SFC1, m/z (relativna intenziteta) 199 (M+-C1,100), 123 (39).
Elementna analiza za C9H12N2SFC1, izrač.: C 46,05; H 5,15; N 11,93; S 13,66; Cl 15,10. Ugot.: C 45,93; H 5,11; N 11,83; S 13,59; Cl 15,14.
Primer 28
Priprava S-(2-(3-nitrofenil)etil)izotiosečnina hidrobromida
K raztopini 3-nitrofenetil alkohola (500 mg, 2,99 mmol) in piridina (35,6 mg, 36 μΐ, 0,45 mmol) v THF (10 ml) pri 0 °C dodamo fosforjev tribromid (298 mg, 0,10 ml, 1,10 mmol). Takoj se tvori bela oborina. Reakcijsko zmes segrejemo do sobne temperature in mešamo 1 uro. Dodamo vodo in eter in fazi se ločita. Organsko fazo speremo z nasičenim vodnim natrijevim bikarbonatom in posušimo preko brezvodnega magnezijevega sulfata. Zmes filtriramo in topila odstranimo v vakuumu, da dobimo rjavo olje.
Surovi bromid raztopimo v 95 % etanolu (10 ml) in dodamo tiosečnino (251 mg, 3,30 mmol). Reakcijsko zmes segrevamo 16 ur do refluksa, jo ohladimo do sobne temperature in topilo odstranimo v vakuumu. Surovo rumeno trdno snov suspendiramo v acetonu in zmes segrevamo do refluksa 10 minut. Vročo raztopino filtriramo, da dobimo belo trdno snov.
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,12 (širok s, 2H), 8,96 (širok s, 2H), 8,22 (s, IH), 8,14 (d, J = 7,9 Hz, IH), 7,78 (d, J = 7,6 Hz, IH), 7,64 (t, J = 8,0 Hz, IH), 3,50 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 3,10 (t, J = 7,2 Hz, 2H).
M.S. (Cl) za C9H12N3O2SBr, m/z (relativna intenziteta) 226 (M+-Br, 26), 136 (36), 76 (81).
Elementna analiza za C9H12N2O2SBr, izrač.: C 35,31; H 3,95; N 13,72; S 10,47; Br 26,10. Ugot.: C 35,22; H 3,88; N 13,62; S 10,36; Br 26,18.
Primer 29
Priprava S-(2-(lH-pirol-l-il)etil)izotiosečnine
K raztopini sveže destiliranega N-(2-bromoetil)pirola (1,00 g, 5,74 mmol) v 95 % etanolu (12 ml) pri sobni temperaturi dodamo tiosečnino (415 mg, 5,74 mmol). Raztopino mešamo pri refluksu 22 ur, jo ohladimo do sobne temperature in zmes koncentriramo v vakuumu, da dobimo gosto rahlo bež olje. Olje pustimo, da kristalizira pri sobni temperaturi v teku 16 ur in kristale filtriramo in splaknemo s kloroformom (10 ml), da dobimo 1,078 g naslovne spojine, kot rahlo bež iglicam podobne kristale (75 % dobitek).
Ή NMR (300 MHz, d6-DMSO); δ 9,06 (širok s, 4H), 6,80 (t, J = 2,10 Hz, 2H), 5,99 (t, J = 2,10 Hz, 2H), 4,12 (t, J = 6,50 Hz, 2H), 3,52 (t, J = 6,50 Hz, 2H).
M.S. (Cl) za C7H12N3SBr, m/z relativna intenziteta 170 (M+-Br, 100), 153 (13), 103 (14), 94 (14), 93 (10), 77 (24).
Elementna analiza za C?H12N3SBr, izrač.: C 33,61; H 4,84; N 16,80; S 12,82; Br 31,94. Ugot.: C 33,68; H 4,84; N 16,74; S 12,74; Br 31,99.
Tal. 94,6-95,0 °C.
Primer 30
Inhibicijo NO sintaze določimo po naslednjem postopku:
Čiščenje NOS iz človeške placente
Od sveže placente odstranimo amnion in horion, ki jo nato splaknemo z 0,9 % NaCl. Tkivo homogeniziramo v Waring-ovem mešalniku v 3 volumnih HEDS pufra (20 mM Hepes pH 7,8,0,1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0,2M saharoza) plus 0,1 mM PMSF. Homogenat filtriramo preko kopivnega platna in nato centrifugiramo pri 1000 g 20 min. Supernatant ponovno centrifugiramo pri 27500 g 30 min. K supernatantu dodamo trden amonijev sulfat, da dobimo 32 % nasičenje. Oborjeno beljakovino peletiramo pri 25000 g in nato ponovno raztopimo v minimalnem volumnu HEDS pufra plus 0,1 mM PMSF, 10 /ig/ml leupeptina in sojinem tripsin inhibitorju in 1 /ig/ml pepstatina. Ponovno raztopljeno peleto centrifugiramo pri 15000 g 10 min. K supernatantu dodamo 1/20 volumna pri 2,5’ ADP agarozni smoli (Sigma), in suspenzijo počasi mešamo preko noči. Zjutraj suspenzijo napolnimo v kolono. Smolo zaporedoma speremo s HEDS, 0,5M NaCl v HEDS, HEDS in nato NOS eluiramo z 10 mM NADPH v HEDS. Encim lahko koncentriramo z ultra filtracijo in hitro zamrznemo in shranimo pri -70 °C, brez izgube v aktivnosti za vsaj 3 mesece.
Analiza za človeško placentno NOS
NOS analiziramo na tvorbo citrulena, čemur sledi postopek Schmidt et al (PNAS 88 365-369, 1991) s temi modifikacijami: 20 mM Hepes, pH 7,4, 10 jug/ml kalmodulin, 2,5 mM CaCl2, 2,5 mM DTT, 125 μΜ NADPH, 10 μΜ tetrahidrobiopterin, 0,5 mg/ml BSA, in 1 μΜ L-[14C]arginin (New England Nuclear). Linearnost NOSkatalizirane hitrosti potrdimo pred kinetičnimi študijami tako, da uporabimo enkratno določitev Časovne točke hitrosti.
Čiščenje NOS iz citokinsko-induciranih človeških kolorektalnih adenokarcinomnih
DLD-1 celic
DLD-1 (ATCC št.CCL 221) gojimo pri 37 °C, 5 % CO2 v RPMI 1640 mediju dopolnjenem z L-glutaminom, penicilinom, streptomicinom in 10 % toplotnoinaktiviranim zarodkovnim govejim serumom. Celice gojimo do konfluence in nato dodamo naslednji koktejl citokinov: 100 enot/ml interferona-gama, 200 enot/ml interleukina-6, 10 ng/ml tumorskega nekroznega faktorja in 0,5 ng/ml interleukina1/3. Po 18-24 urah po indukciji celice požanjemo s praskanjem in jih speremo s fosfatno napufrano fiziol. razt. NaCl. Peletirane celice shranimo pri -70 °C. Prečiščenje inducirane NOS izvedemo pri 4 °C. Surov ekstrakt pripravimo s tremi cikli zamrzovanja/odtajanja celic v TDGB (20 mMtris pH 7,5, 10 % glicerol, 1 mM DTT, 2 μΜ tetrahidrobiopterin). Ekstrakt nanesemo neposredno na kolono 2’,5’ ADP sefaroze (Pharmacia). Smolo zaporedoma speremo z TDGB, 0,5M NaCl v TDGB, TDGB. NOS eluiramo z 2 mM NADPH v TDGB. Takoj dodamo BSA, da dobimo končno koncentracijo 1 mg/ml. NOS lahko hitro zamrznemo in shranimo pri -70 °C brez izgube aktivnosti za vsaj 2 meseca.
Analiza za inducibilno človeško NOS
Tvorbo citrulina analiziramo kot je opisano zgoraj, razen da vključimo 10 μΜ FAD in iz analizne mešanice izključimo kalmodulinin CaCl2.
Prečiščenje NOS iz človeških možgan
Človeško možgansko NOS pripravimo z uporabo variacij postopkov Schmidt et al. (PNAS 88 365-369,1991), Mayer et al. (Fed. Eur. Biochem. Soc. 288 187-191,1991), in Bredt in Snyder, (PNAS 87 682-685, 1990). Na kratko, sveže cele možgane (3 z odrezanim mieliniranim tkivom, 1050 g) homogeniziramo v hladnem pufru A (50 mM HEPES, pH 7,5 (pH pri ST), in 0,5 mM EDTA, 10 mM DTT, 3,6 1 celotni volumen) s politronom. Zmes centrifugiramo pri 13000 g 1 uro in odstranimo supernatantno tekočino (okoli 2050 ml). K supematantni tekočini dodamo trden amonijev sulfat (365 g, okoli 30 % nasičen) in počasi mešamo skupaj 30 minut.
Oborino peletiramo pri 13000 g 30 minut in peleto ponovno suspendiramo v —400 ml pufra A s 4 μ,Μ tetrahidrobiopterinom, ΙμΜ FAD (Sigma), in 1 μΜ FMN (Sigma). Raztopino centrifugiramo pri 41000 g 60 minut. Supernatant odstranimo, zamrznemo z vlitjem v tekoč dušik in shranimo preko noči pri -70 °C. Zmes odtalimo in spustimo skozi 2’,5’ ADP-agarozno kolono (0,4 g nabreknjeno v pufru A) pri 4 ml/min. Kolono speremo s 100 ml pufra A, 200 ml pufra A s 500 mM NaCl, 100 ml pufra A, nato 30 ml pufra A s 5 mM NADPH. K encimski raztopini dodamo tetrahidrobiopterin do 10 μΜ, FAD in FMN do 1 μΜ, in Tween do 0,1 %. To raztopino koncentriramo s Centriprep-om 30 do volumna približno 500 μΐ. Encimsko aktivnost določimo, kot je opisal Schmidt et al. 1991, razen da vključimo v analizo 10 μΜ tetrahidrobiopterin.
Rezultati inhibicije so prikazani v tabeli 1.
Vrednosti so inhibicijske konstante (Ki) pridobljene iz merjenja odstotne inhibicije pri treh ali več koncentracijah inhibitorja in predvidevanju kompetitivne inhibicije glede na arginin.
TABELA 1 ω
N ni
-P c
•H m
Ό •H
W
2*
O >
O •H >m
Ό
CU •r-) •P
O d
£
HI
ČLOVEŠKA ' MOŽGANSKA 1.8 ±0.1 μΜ 57 ± 5 μΜ 0.42 ± 0.09 μΜ 1.8 ±0.1 μΜ 13 ±0.2 μΜ 10±1μΜ 0.41 ±0.02 μΜ | 1.7±0. ΙμΜ 14±2μΜ 5.6 ±0.5 μΜ 1.2 ±0.06 μΜ | 0.62 ± 0.03 μΜ 21 ±4 μΜ 2 d. m O d Ή C' KO d 0.82 ± 0.02 μΜ | 0.59 ± 0.03 μΜ
< s 2 2 2 d. oo S d. CM 2 d. S 2 d. vn o s S d. S d. 2 S 2 d. 2 X 2 d. 2 d. κη 2 d. 2 X KO
H >0 S ω ω > u o < j j X CM d. m m o +1 m ko d +1 OK KO +1 o m X KO d +1 m cn d. M· CM d -H OK CM CM +1 m CM =t m wn X TJ- vi d -H CM o d -H CM 00 -H r- d -H IO d +1 O d +1
>o cu o d
2 d. CM S d. S d. s d. S d. CM 02 μΜ 03 μΜ 4 μΜ S d. en 4 μΜ s d. 2 d. 0.1 μΜ 02 μΜ I 3 μΜ 2 d. o 2 d. 2 i r-~ o
O 00 o d o o o d o ** d d d o d d
< J 1—1 -H +1 CM -H +) -H +1 +1 +1 -H -H +1 -H •H +1 -H -H +1
>cn m 0.59 r- O oo Ok KO oo OO KO Ok CM CM M o CM Tj- Ok
ČLOVE NDUCI tri en o CM d + d 0Ω en d CM d U •>r d o 0.4
H
1 Z\
.b (U z—κ X- •3
eri H Gj z“«s L Gj g π
c 5? .5 2 y 3 * ni S
•H 95 c •3 >f 1 rt rt B prt
c Q G (D >Q >r •Γ] «3 ert c
>o 3 rn <>· *W R R >b •H •3 Γ |U
<D O *cd •H z-s I 1 a o t i i i | ί i 1
-P o S •M '8 H •H z—s •9 F T s ij a i
< s N •H i 3 'Š-Z •9 z-> C 1 s •r •F >1 •9 z—\ d t |i 4 S z—\ rd 1 Q
HI 1—1 Q Q rt Q & 5 +3 <Π Tj 4-> d Z-> N
SPOJ noeti i ί •s-Z | j J, 1 T 1 s -g tj 7.1 x-z Z—s s S d etil)i
•H u N Iii I w c 3 Ή 3 3 J n A 8 H
1 r\j 1 1 v $ CM κ-τ ( 5 1 •k CM en to en 3 $ Χ-Ζ i & 1
cm CM o PS CO CO w * ? v-ž ώ M-Z cA S cA cA K.-/ en s-z CM v-z
1 CO cA cA en en X CKJ w v. en cA cA cA
CM m Tj- «n KO Γ· oo Ok o - CM T“* en p-K m KO »“M e- 00
2.0 ±0.1 μΜ 0.22 ± 0.01 μΜ | 1 0.61 ± 0.02 μΜ | 0.71 ±0.05 μΜ 8.8 ±0.3 μΜ 0.31 ± 0.03 μΜ | 0.25 ±0.01 s =L o o o -H Ό O d 1.1 ±0.1 μΜ 1 6.8 ± 0.5 μΜ 4.4 ± 0.3 μΜ 2 X CN +) O 0.38 ± 0.01 μΜ 3 ± 0.3 μΜ | 2 i m d -H 00 KO d 2 i m o •H 00 o 0.82 ± 0.03 μΜ | 0.029±0.009μΜ 2 =L 00 o o d +1 m o d 2 i o d +1 m Ό d
0.1 μΜ to'0 90 0 23 ± 7 μΜ S =L CN 0.8 μΜ S =L oo o s X CN O O ro 2 s. cn o 2 X CN CN 0.8 μΜ | 0.05 μΜ 2 =L CN O 1 Ι0Ό 2 a. d 2 λ +0.003μ M ;0.0005μ M 2 n. <N O d
2.3 ± .27 ± 1.2 ±i Ή VO 6.6 ± +) o OŠ -H KO cn 3.0 ± 7.2 ± 7.7 ± .45 ± 5.6 ± +1 cn 00 -H OK +1 >.039; Tl CN CN O +1 r» KO
o o o d d
S =L KO o 10’ S OL O 2 a. o 2 a. rn S a. m o 2 i cn o o S i »n o o o S =L «n o S =1 cn o 2 -t S =L i Ok O 2 =L cn O 2 i rrt o 2 X KO O 2 A cn O 002μΜ 0007μΜ 2 a. CN O
d o d d O o d d d o O rS d o d d d d d
+1 (N +1 Ή KO -H 3± +1 r* +1 -H 8± 6± 6± -H 3± •H KO 2± +1 CN 17± +1 00 CN
CN Tj- 00 Ok 00 00 CN «n CN o o
o O O o O o o o o o 0 O d O d d d o d O
1 z—> s 4 • .1
a Λ '3 Λ A d y n J8 •3
•3 C? •3 T H r· d 8 Q 'S
-LJ Al 00 •rt •K—z K-c a rrt •H fli
8 n η T“ TJ •3 S •3 g ε y-~> Λ y z—s «—I O n i 5
•H •rt r~4 *rt 1 r- «—L m •d N »3' M frt
/S -LJ •rt cj cj <—4 c? ΐ 11 S ( f—4 •r r—4 •rt M Γ Z—\ >rj C
1 i -'“'S d 0 g. II <2 c r-j »r· 1 1 z—s d z—S d 1 1 1 i
4 1 1 t—· Q ·* >F1 r <Ά 8 ·* *r4 4 8 3 4 1 J L i 5 1 d i i
40 0Q *S »^-Z l | 1 »rt c 1 «rt t J »rt v Q p, »rt
Ή O •»Z~\ CO cn m □ 1 1 ** lo •c rs Ό -J 9* c M c p
n •3 cn q ci s—z čn i—i čn h □ ra T Q o i 2 <2 rn d 8* g.
E iJ JS 4J cn d cn 3 *n OJ o C\| .5 .5 J. T J. j. Ί3 Ja δ
PO rjj Ώ o 1 B- s-z S S CM y > <\l, OJ v Ji T4
čA </> <Λ S 3 en CD <u <?5 cA <A c5 n Ji Ji Ji Ji Ji Ji
Ό cn
o o CN m n- cn KO l· 00 Ok o CN cn v> KO 00
(N cn CN CN CN CN CN CN CN CN cn cn cn cn cn cn cn cn cn
Za

Claims (19)

1-4 ali Ra veže žveplov atom na enega izmed dušikovih atomov v spojini s formulo (I), da tvori 5- ali 6-členski heterocikličen obroč, s pridržkom, da Ra ni metil.
1. Uporaba izotiosečninskega derivata, ki ima inhibitoren učinek proti encimu NO sintazi, za izdelavo zdravila za zdravljenje stanja, kjer obstaja prednost v inhibiranju encima NO sintaze.
2-amino-4,5-dimetiltiazola
S-(2-(lH-pirol-l-il)etil)izotiosečnine
S-(3-hidroksipropil)izotiosečnine
S-(2-(fenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnine
2-amino-4-metiltiazola
2- amino-5-metiltiazola
S-((2-amino-4-tiazolil)metil-L-cisteina
2-amino-2-tiazolina
S,S’-heksametilenbis(izotiosečnine)
S,S’-heptametilenbis(izotiosečnine)
S-benzilizotiosečnine
S-(2-morfolinoetil)izotiosečnine
S-(6-metil-2-(metiltio)-4-pirimidinil)izotiosečnine
S,S’-(l,4-fenilenbis(metilen))diizotiosečnine
S-tercbutilizotiosečnine
S-(4-etilbenzil)izotiosečnine
S-((metiltio)metil)izotiosečnine
S-(3-bromopropil)izotiosečnine
S-(2-bromoetil)izotiosečnine
S-(3-metil-2-butenil)izotiosečnine
S-alilizotiosečnine
S-(3-aminopropil)izotiosečnine
S,S’-(l,3-fenilenbis(metilen))diizotiosečnine
S,S’-(2-metilen-l,3-propandiil)diizotiosečnine
S,S’-(2-butin-l,4-diil)diizotiosečnine
S,S’-(l,3-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnine
S,S’-(l,4-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnine
(2) C^alkenil;
2. Uporaba po zahtevku 1, označena s tem, da je izotiosečninski derivat spojina s formulo (I) (I) ali njena sol, kjer je
R (1) C114hidrokarbilna skupina; ali (2) 5- ali 6-členski heterociklični obroč; ali (3) 9-členski biciklični heterociklični obročni sistem pri čemer je vsaka skupina R v danem primeru substituirana z eno ali dvema skupinama neodvisno izbranima iz:
(a) halo;
(b) -XRx kjer je
X kisik, C(O)m, pri čemer je m 1 ali 2, S(O)n, pri čemer je n 0,1 ali 2, ali NR2, pri čemer je R2 vodik, CMalkil ali C3 6cikloalkil, ali je R2 vezan na R1, da tvorita C26alkilensko skupino;
R1 vodik; ali CMalkil, C2 6alkenil, C36cikloalkil, C? 9aralkil, C610aril ali 5- ali
3- ((2-amino-4-tiazolil)metil-L-alanina
(3) skupina -(CH,)-—C Ή— (CH^Ci^ pri čemer je p 1 ali 2 in je q 0 ali 1; ali (4) 5- ali 6-členski heterociklični obroč, ki vsebuje en ali dva dušikova atoma, pri čemer je vsak v danem primeru substituiran z eno ali dvema skupinama, ki sta lahko enaki ali različni, izbranima iz (a) halo, prednostno bromo;
(b) skupine OR2b’, pri čemer je R2b’ vodik ali metil;
(c) skupine C(O)mR2b’, pri čemer sta m in R2b’ kot je definirano predhodno;
(d) skupine SR9, pri čemer je R9 metil ali etil;
(e) skupine NR7bR8b, pri čemer sta R7b in R8b neodvisno izbrana izmed vodika ali C^alkila, prednostno vodika, metila ali etila;
(f) fenilnega obroča, v danem primeru substituiranega s skupino OR2b’ ali ,NH skupino Q kot je predhodno definirano;
“NH.
l2 (g) 5- ali 6-členskega heterocikličnega obroča, ki vsebuje en ali dva heteroatoma, neodvisno izbrana iz dušika ali kisika; ali (h) C1 ^alkila, prednostno metila ali je eden izmed ogljikovih atomov v R vezan na imino dušik v spojini s formulo (I), da tvori tiazolni ali tiazolinski obroč.
3. Uporaba po zahtevku 2, označena s tem, daje R (1) C^alkil;
4- ((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-homoalanina
N,N-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-metilizotiosečnine)
N,N-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-etilizotiosečnine)
4- ((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-homoalanina
N,N-l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-metilizotiosečnine)
N,N-(l,3-fenilenbis(metilen))bis(S-etilizotiosečnine)
4. Uporaba po zahtevkih 2 ali 3 s pridržkom, da R ni etil, propil ali izopropil.
5- (3-(4-((amidinotio)metil)fenil)propil)izotiosečnine
S-(2-(5-((amidinotio)metil)-2-tienil)etil)izotiosečnine
S-(3-(5-((2-amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnine
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-D-cisteina
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-(D,L)-homocisteina
S-(2-(2-amino-4-tiazolil)etil)-L-cisteina
S-(2-(2-amino-4-tiazolil)etil)-L-cisteina
S-(2-(4-fluorofenil)etil)izotioseČnine
S-(2-(4-bromofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3-metilfenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(4-etoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(4-metoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2-bromofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2-fluorofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3’nitrofenil)etil)izotiosečnine
S-(3-(lH-pirol-l-il)propil)izotiosečnine
S-(2-(4-etoksi-3-metoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2,4,6-trimetilfenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2,6-dimetoksifenil)etil)izotiosečnine ali njihovih soli.
5- (2-(5-((amidinotio)metil)-2-tienil)etil)izotiosečnine
S-(3-(4-((amidinotio)metil)fenil)propil)izotiosečnine
S-(3-(5-(2-amidinotio)etil)-2-tienil)propil)izotiosečnine
S-(2-(4-fluorofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(4-bromofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3-metoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3-metilfenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(4-etoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(4-metoksifenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2-bromofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2-fluorofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(3-nitrofenil)etiI)izotiosečnine
S-(3-(lH-pirol-l-il)propil)izotiosečnine
S-(2-(2-klorofenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(2,5-dimetilfenil)etil)izotiosečnine
S-(2-(4-etoksi-3-metoksifenil)etil)izotioseČnine ali njihove soli.
5. Uporaba po zahtevkih 1 do 2, označena s tem, da je izotiosečninski derivat spojina s formulo (IA), (IB) ali (IC) (IA)
H N (IB) pri čemer je R’ Cx^alkilenska skupina, C2^alkenilenska ali alkinilenska skupina, pri čemer vsaka v danem primeru vsebuje fenilni obroč, 5- ali 6-členski heterocikličen obroč ali skupino X, kot je predhodno definirano, in predstavlja črtkana črta dvojno ali enojno vez.
6. Uporaba po zahtevku 1, označena s tem, da je izotiosečninski derivat spojina s formulo (II)
SR3 (II)
NH, ali njena sol, pri čemer je Ra Cl ghidrokarbil ali 5- ali 6-členski heterociklični obroč ali
6-členska heterociklična skupina pri čemer je vsaka skupina v danem primeru substituirana z eno ali dvema skupinama neodvisno izbranima izmed Cx 3alkila, hidroksi, C13alkoksi, amino, C13alkilamino, halo, nitro, ali skupine C(O)mR2b pri čemer je m’ 1 ali 2 in je R2b vodik ali CMalkil; ali je R1 skupina NR3R4 pri čemer sta R3 in R4 enaka ali različna in je vsak vodik ali CMalkil ali sta R3 in R4 vezana, da tvorita C2 6alkilensko skupino;
NH (c) skupine (Y)w-Q-S—V , kjer je nh2
Y kisik, S(0)n, pri čemer je n kot je predhodno definirano, ah NR5, pri čemer je R5 vodik ali CMalkil;
w 0 ali 1;
Q C2 4hidrokarbil ali je imino dušik vezan na skupino R ali na skupino Q, da tvori 5- ali 6-členski heterocikličen obroč; ali (d) skupine A, pri čemer je A heterocikličen obročni sistem, v danem primeru
NH substituiran s skupino (Y)w-Q-S
NH, kot je predhodno definirana; ali (e) C16alkilne, C, 6alkenilne ali alkinilne ali C^cikloalkilne skupine;
ali je eden izmed ogljikovih atomov v R vezan na imino dušikov atom v spojini s formulo (I), da tvori 5- ali 6-členski heterocikličen obroč;
s pridržkom, da R ni metil.
7-(2’-amino-4-tiazolil)-L-homoalanina
S,S’-(l,2-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnine /3-(2’-amino-4’-tiazolil)-L-alanina
S-(2’-amino-5’-(R,S)-tiazolinilmetil)-L-cisteina
7. Uporaba po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 6, označena s tem, da je izotiosečninski derivat izbran izmed
S-(2-aminoetil)izotiosečnine
S-(2-dimetilamino)propil)izotiosečnine
S-(2-metil-2-propenil)izotiosečnine
S,S’-etilenbis(izotiosečnine)
S,S’-pentametilenbis(izotiosečnine)
S-(2-dimetilamino)etil)izotiosečnine
8. Uporaba po kateremkoli izmed zahtevkov 1 do 3 ali 6, označena s tem, da je izotiosečninski derivat izbran izmed
S-etilizotiosečnine
S-propilizotiosečnine
S-izopropilizotiosečnine.
9. Uporaba izotiosečnine po zahtevku 1, za zdravljenje sistemske hipotenzije.
9-členski biciklični heterociklični obročni sistem, pri čemer je vsak v danem primeru substituiran s halo ali z eno ali dvema skupinama -XaRla, pri čemer je Rla vodik, Cj 6alkil, C^cikloalkil, C? 9aralkil, C640aril, ali 5- ali 6-členska heterociklična skupina, pri čemer je vsak v danem primeru substituiran s C13alkilom, C13alkoksi, amino, halo ali nitro, ali je Rla skupina NR3aR4a, pri čemer sta R3a in R4a enaka ali različna in je vsak vodik ali C13alkil ali sta R3a in R4a vezana skupaj, da tvorita C2 6alkilensko skupino in je Xa kisik, C(O)ma, pri čemer je ma 1 ali 2, C(O)na, pri čemer je na 0,1 ali 2 ali NR23, pri čemer je R23 vodik, C^alkil ali C3^cikloalkil ali je R23 vezan na Ra, da tvorita C2 6alkilensko skupino, ali s skupino ?(CH2)t(Ya)v nh2 pri čemer je t O do 4 in je vv3 O ali 1, Ya je kisik, žveplo in NR7a, pri čemer je R7a vodik ali C, .alkil:
10. Uporaba izotiosečnine po zahtevku 1 ali 2 za zdravljenje septičnega šoka.
11. Uporaba izotiosečnine po zahtevku 9, označena s tem, daje sistemska hipotenzija povzročena s citokinsko ali citokinsko-inducirajočo terapijo.
12. Uporaba izotiosečnine po zahtevku 1 za zdravljenje kratkotrajne imunosupresije.
13. Uporaba izotiosečnine po zahtevku 1 za zdravljenje avtoimunske bolezni.
14. Uporaba izotiosečnine po zahtevku 1 za zdravljenje vnetnega stanja.
15. Izotiosečninski derivat s formulo (I), označen s tem, da je drugačen od S-etilizotio-sečnine, S-propilizotiosečnine, S-izopropilizotiosečnine, benzilizotiosečnine, S,S-(l,4-fenilenbis(metilen))diizotiosečnine in S-(2dimetilamino)etil)izotiosečnine za uporabo v medicini.
16. Nov izotiosečninski derivat, označen s tem, da ima formulo (IA), (IB) ali (IC) kot je tu predhodno definirano.
17. Izotiosečninski derivat po zahtevku 16, označen s tem, daje izbran izmed
S,S’-(l,4-fenilenbis(l,2-etandiil))diizotiosečnine
S-(2-(lH-pirol-l-il)etil)izotiosečnine
S-((2-amino-4-tiazolil)metil)-L-cistena
18. Postopek za pripravo izotiosečninskega derivata po zahtevku 16, označen s tem, da obsega
a) presnovo tiosečnine s spojino RL(L’)r, pri čemer je R kot je definirano predhodno, sta L in L’ oba odhodni skupini in je R 0 ali 1, čemur sledi, če je potrebno, odstranitev zaščite; ali
b) odstranitev zaščite spojini s formulo (IB1) pri čemer je R’ in črtkana črta, kot je definirano predhodno in sta P in P’ enaka ali različna in sta oba zaščitni skupini.
19. Farmacevtski pripravek, označen s tem, da vključuje izotiosečninski derivat, kot je predhodno definiran, drugače od S-etilizotiosečnine, S-propilizotiosečnine, S-izopropilizotiosečnine, S-benzilizotiosečnine, S,S-(l,4-fenilenbismetilen)diizotio48 sečnine in S-(2-dimetilamino)etil)izotiosečnine ali njegovo farmacevtsko sprejemljivo sol ali solvat, skupaj z enim ali več njegovimi farmacevtsko sprejemljivimi nosilci in v danem primeru, eno ali več drugimi terapevtskimi sestavinami.
SI9300616A 1992-11-27 1993-11-26 Enzyme inhibitors SI9300616A (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB929224948A GB9224948D0 (en) 1992-11-27 1992-11-27 Nitric oxide synthase inhibitors
GB939315159A GB9315159D0 (en) 1993-07-22 1993-07-22 Nitric oxide synthase inhibitors
GB939319663A GB9319663D0 (en) 1993-09-23 1993-09-23 Enzyme inhibitors

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI9300616A true SI9300616A (en) 1994-06-30

Family

ID=27266488

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI9300616A SI9300616A (en) 1992-11-27 1993-11-26 Enzyme inhibitors

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP0670720A1 (sl)
JP (1) JPH08503940A (sl)
CN (1) CN1095710A (sl)
AU (1) AU5533094A (sl)
IL (1) IL107771A0 (sl)
SI (1) SI9300616A (sl)
WO (1) WO1994012165A2 (sl)

Families Citing this family (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK16396A3 (en) * 1993-08-12 1996-09-04 Astra Ab Amidine derivatives with nitric oxide synthetase activities
EP0724570B1 (en) * 1993-10-21 1999-03-03 G.D. Searle & Co. Amidino derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
CA2188680A1 (en) * 1994-05-07 1996-01-25 James Edwin Macdonald Bicyclic amidine derivatives as inhibitors of nitric oxide synthetase
GB9418912D0 (en) * 1994-09-20 1994-11-09 Fisons Corp Pharmaceutically active compounds
WO1996014842A1 (en) * 1994-11-15 1996-05-23 Merck & Co., Inc. Substituted heterocycles as inhibitors of nitric oxide synthase
WO1996018617A1 (en) * 1994-12-12 1996-06-20 Merck & Co., Inc. Substituted 2-acylamino-pyridines as inhibitors of nitric oxide synthase
JPH08333258A (ja) 1994-12-14 1996-12-17 Japan Tobacco Inc チアジン又はチアゼピン誘導体及びそれら化合物を含有してなる一酸化窒素合成酵素阻害剤
FR2728261A1 (fr) * 1994-12-14 1996-06-21 Japan Tobacco Inc Derives de thiazine ou de thiazepine utiles comme inhibiteurs de la no-synthetase
DE4444930A1 (de) * 1994-12-16 1996-06-27 Cassella Ag 2-Amino-1,3-thiazepine und deren Verwendung als Hemmstoffe der Stickstoffmonoxid-Synthase
WO1996021445A1 (en) * 1995-01-13 1996-07-18 The General Hospital Corporation Methods of inhibiting neurodegenerative diseases
TW397812B (en) * 1995-02-11 2000-07-11 Astra Ab Bicyclic isothiourea derivatives useful in therapy
FR2730733B1 (fr) * 1995-02-17 1997-07-04 Hoechst Lab Nouveaux derives nitro-ethyleniques soufres et leurs applications en tant qu'inhibiteurs de no-synthase
US5674907A (en) * 1995-03-24 1997-10-07 Children's Hospital Medical Center Mercapto derivatives as inhibitors of nitric oxide synthase
US5929063A (en) * 1995-03-24 1999-07-27 Children's Hospital Medical Center Mercapto and seleno derivatives as inhibitors of nitric oxide synthase
GB9506188D0 (en) * 1995-03-27 1995-05-17 Fujisawa Pharmaceutical Co Amidine derivatives
US6011028A (en) * 1995-04-20 2000-01-04 G.D. Searle & Co. Cyclic amidino agents useful as nitric oxide synthase inhibitors
US5908842A (en) * 1995-12-08 1999-06-01 Merck & Co., Inc. Substituted 2-acylamino-pyridines as inhibitors of nitric oxide synthase
US5945408A (en) * 1996-03-06 1999-08-31 G.D. Searle & Co. Hydroxyanidino derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
US6090839A (en) * 1996-12-23 2000-07-18 Merck & Co., Inc. Antidiabetic agents
US6160000A (en) * 1996-12-23 2000-12-12 Merck & Co., Inc. Antidiabetic agents based on aryl and heteroarylacetic acids
US5981556A (en) * 1997-07-22 1999-11-09 G.D. Searle & Co. 1,3-diazolino and 1,3-diazolidino heterocycles as useful nitric oxide synthase inhibitors
EP1067926A2 (en) * 1998-04-06 2001-01-17 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Immunosuppressive imidazole derivatives and their combination preparations with tacrolimus or cyclosporins
US6552052B2 (en) 1998-06-10 2003-04-22 Monsanto/G.D. Searle Pyrrolo[2,1-c][1,2,4] thiadiazoles and Pyrollo[2,1-c][1,12,4]oxadiazoles useful as nitric oxide synthase inhibitors
CA2333691A1 (en) 1998-06-10 1999-12-16 G.D. Searle & Co. Heterobicyclic and tricyclic nitric oxide synthase inhibitors
GB9903404D0 (en) 1999-02-16 1999-04-07 Angiogene Pharm Ltd Methods of treatment and compositions useful for the treatment of diseases involving angiogenesis
CA2397828C (en) * 2000-01-19 2007-09-04 Cadila Healthcare Ltd. Compounds having hypolipidemic and hypocholesteremic activities, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing them
NZ520812A (en) 2000-03-24 2004-04-30 Pharmacia Corp Amidino compound and salts thereof useful as nitric oxide synthase inhibitors
ATE296627T1 (de) * 2000-03-31 2005-06-15 Univ Medisch Centrum Utrecht Verwendung von 2-iminobiotin zur herstellung eines arzneimittels zur prävention und / oder therapie von komplikationen bei neugeborenen, die während der geburt entstanden sind
US7087633B2 (en) 2000-03-31 2006-08-08 Universitair Medisch Centrum Method for treating perinatal asphyxia in a human or animal neonate
AR030416A1 (es) 2000-04-13 2003-08-20 Pharmacia Corp COMPUESTO DERIVADO HALOGENADO DEL ACIDO 2-AMINO-3,4 HEPTENOICO, COMPOSICION FARMACEUTICA QUE LO COMPRENDE Y SU USO EN LA FABRICACION DE UN MEDICAMENTO uTIL COMO INHIBIDOR DE LA OXIDO NITRICO SINTETASA
US6545170B2 (en) 2000-04-13 2003-04-08 Pharmacia Corporation 2-amino-5, 6 heptenoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
AR034120A1 (es) 2000-04-13 2004-02-04 Pharmacia Corp Compuesto derivado halogenado del acido 2-amino-4,5 heptenoico, composicion farmaceutica que lo comprende y el uso de dicho compuesto y dicha composicion en la fabricacion de un medicamento para inhibir o modular la sintesis de acido nitrico
US6956131B2 (en) 2000-04-13 2005-10-18 Pharmacia Corporation 2-amino-3, 4 heptenoic compounds useful as nitric oxide synthase inhibitors
US6787668B2 (en) 2000-04-13 2004-09-07 Pharmacia Corporation 2-amino-4,5 heptenoic acid derivatives useful as nitric oxide synthase inhibitors
AR032318A1 (es) 2000-04-13 2003-11-05 Pharmacia Corp Compuesto derivado halogenado del acido 2-amino-5,6 heptenoico; composicion farmaceutica que lo comprende y su uso en la fabricacion de un medicamento util como inhibidor de la oxido nitrico sintetasa
FR2810037B1 (fr) * 2000-06-09 2004-04-23 Aventis Pharma Sa Utilisation de derives de 2-aminothiazoline comme inhibiteurs de no-synthase inductible
FR2810036B1 (fr) * 2000-06-09 2004-04-23 Aventis Pharma Sa Derives de 4,5-dihydro-1,3-thiazol-2-ylamine, leur preparation et les compositions phamarceutiques les contenant
US6451821B1 (en) 2000-06-09 2002-09-17 Aventis Pharma S.A. Use of 2-aminothiazoline derivatives as inhibitors of inducible no-synthase
FR2832152A1 (fr) * 2001-11-09 2003-05-16 Aventis Pharma Sa Utilisation de derives de 2-amino-thiazoline comme inhibiteurs de no-synthase inductible
US6420566B2 (en) 2000-06-09 2002-07-16 Aventis Pharma S.A. Pharmaceutical compositions containing a 4, 5-dihydro-1, 3-thiazol-2-ylamine derivative, novel derivatives and preparation thereof
US6344473B1 (en) 2000-08-07 2002-02-05 G.D. Searle & Co. Imidazoles useful as nitric oxide synthase inhibitors
US7012098B2 (en) 2001-03-23 2006-03-14 Pharmacia Corporation Inhibitors of inducible nitric oxide synthase for chemoprevention and treatment of cancers
DK1450750T3 (da) * 2001-11-09 2010-03-08 Aventis Pharma Sa Derivater af 2-amoni-4-pyridiylmethylthiazolin og anvendelse deraf som inhibitorer af inducerbar NO-syntase
FR2832150B1 (fr) * 2001-11-09 2004-07-16 Aventis Pharma Sa Utilisation de derives de 2-amino-4-pyridylmethyl-thiazoline comme inhibiteurs de no-synthase inductible
CN1314674C (zh) 2001-11-09 2007-05-09 安万特医药股份有限公司 2－氨基－二氢噻唑衍生物及其作为诱导型no－合酶抑制剂的用途
FR2832151B1 (fr) * 2001-11-09 2004-12-17 Aventis Pharma Sa Utilisation de derives de 2-amino-4-heteroarylethyl-thiazoline comme inhibiteurs de no-synthase inductible
HUP0402038A2 (hu) 2001-11-09 2005-01-28 Aventis Pharma S.A. 2-Amino-4-heteroaril-etil-tiazolin-származékok alkalmazása az indukálható NO-szintetáz inhibitoraként, eljárás az előállításukra és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények
US8173642B2 (en) 2005-10-25 2012-05-08 Shionogi & Co., Ltd. Aminodihydrothiazine derivatives
WO2007108004A2 (en) * 2006-03-23 2007-09-27 Meditor Pharmaceuticals Ltd. S-alkylisothiouronium derivatives for the treatment of inflammatory diseases
RU2476430C2 (ru) 2007-04-24 2013-02-27 Сионоги Энд Ко., Лтд. Производные аминодигидротиазина, замещенные циклической группой
EP2151435A4 (en) 2007-04-24 2011-09-14 Shionogi & Co PHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR THE TREATMENT OF ALZHEIMER'S DISEASE
EP2305672B1 (en) 2008-06-13 2019-03-27 Shionogi & Co., Ltd. SULFUR-CONTAINING HETEROCYCLIC DERIVATIVE HAVING ß-SECRETASE-INHIBITING ACTIVITY
CN101372471B (zh) * 2008-10-08 2010-12-22 中国科学院化学研究所 烷基异脲类化合物及其类似物的新用途
EP2360155A4 (en) 2008-10-22 2012-06-20 Shionogi & Co 2-AMINOPYRIDIN-4-ON AND 2-AMINOPYRIDINE DERIVATIVE WITH BACE1-HEMDERING EFFECT
EP2415756A4 (en) 2009-03-31 2012-08-29 Shionogi & Co ISOTHIOROUS DERIVATIVES OR ISO-HARVEST DERIVATIVES WITH BACE1-HEMMENDER EFFECT
JPWO2011071135A1 (ja) 2009-12-11 2013-04-22 塩野義製薬株式会社 オキサジン誘導体
WO2012057247A1 (ja) 2010-10-29 2012-05-03 塩野義製薬株式会社 縮合アミノジヒドロピリミジン誘導体
WO2012057248A1 (ja) 2010-10-29 2012-05-03 塩野義製薬株式会社 ナフチリジン誘導体
TW201247635A (en) 2011-04-26 2012-12-01 Shionogi & Co Oxazine derivatives and a pharmaceutical composition for inhibiting BAC1 containing them
WO2014065434A1 (en) 2012-10-24 2014-05-01 Shionogi & Co., Ltd. Dihydrooxazine or oxazepine derivatives having bace1 inhibitory activity

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1178242A (en) * 1966-02-05 1970-01-21 Wellcome Found Novel Biologically Active Bis-Isothioureas
US3790600A (en) * 1972-04-06 1974-02-05 Uniroyal Inc 2-(3-benzo(b)thenyl)-2-thiopseudourea and its pharmaceutically acceptable salts
US3954982A (en) * 1972-04-20 1976-05-04 Smith Kline & French Laboratories Limited Pharmaceutical compositions and method of inhibiting H-1 and H-2 histamine receptors
ZA771408B (en) * 1976-03-29 1978-04-26 Smith Kline French Lab Pharmaceutical compositions
US4208430A (en) * 1979-03-15 1980-06-17 Smithkline Corporation Pharmaceutical compositions and method of inhibiting phenylethanolamine N-methyltransferase
US4262125A (en) * 1979-07-23 1981-04-14 American Home Products Corporation (1H-Imidazol-5-ylmethyl)isothioureas
EP0245669B1 (de) * 1986-05-14 1993-12-01 Medopharm Arzneimittelwerk Dr. Zillich GmbH &amp; Co. Pharmazeutisches Präparat zur Verhütung der Schädigung lebender Zellen durch freie Radikale, beziehungsweise zur Erhöhung der Wirksamkeit von organischen Schwefelverbindungen und Verfahren zur Erhöhung der Lebensdauer isolierter Organe
GB8916947D0 (en) * 1989-07-25 1989-09-13 Smith Kline French Lab Medicaments
ES2087163T3 (es) * 1989-09-19 1996-07-16 Syntello Inc Preparacion antitumoral que comprende intreleucina-2 e histamina, analogo al de las mismas o agonistas de receptor h2.
ATE191847T1 (de) * 1991-12-16 2000-05-15 Univ Washington Verwendung von aminoguamidin zur herstellung eines arzneimittels zur unterdrückung der stickoxidbildung
KR100892685B1 (ko) * 2007-11-09 2009-04-15 주식회사 하이닉스반도체 Ｅａｉｃ 시스템

Also Published As

Publication number Publication date
EP0670720A1 (en) 1995-09-13
WO1994012165A2 (en) 1994-06-09
WO1994012165A3 (en) 1994-12-08
CN1095710A (zh) 1994-11-30
JPH08503940A (ja) 1996-04-30
AU5533094A (en) 1994-06-22
IL107771A0 (en) 1994-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI9300616A (en) Enzyme inhibitors
TWI533872B (zh) Ｂｔｋ抑制劑之苯磺酸鹽
ES2343481T3 (es) Antagonistas del receptor cgrp.
JPH09504278A (ja) Ｎｏシンターゼインヒビターとしての置換尿素およびイソチオ尿素誘導体
CA2520855C (fr) Derives d&#39;imidazo-pyridine comme agonistes ou antagonistes du recepteur de la melanocortine
US20220288070A1 (en) Deuterated mk2 pathway inhibitors and methods of using the same
SU1400508A3 (ru) Способ получени производных арилтиазолов
WO1996014842A1 (en) Substituted heterocycles as inhibitors of nitric oxide synthase
MX2011000026A (es) Inhibidores de proteina cinasas.
EA008865B1 (ru) Производные 2-имино-4-оксотиазолидина
CA3172203A1 (en) Process, compositions, and crystalline forms of substituted pyridinone-pyridinyl compounds
US8357707B2 (en) 2-carboxamide cycloamino ureas
EP3738954A1 (en) Method of preparation of substituted 2,4-diamino-pyrimidine-5-carboxamides
EP3845538B1 (en) Dihydroimidazopyrazinone compound, composition including same, and use thereof
JP6903663B2 (ja) アルキルジヒドロキノリンスルホンアミド化合物
WO2017049401A1 (en) New benzimidazoles derivatives as tec kinases family inhibitors
JP6985271B2 (ja) アルキニルジヒドロキノリンスルホンアミド化合物
AU2003238915B2 (en) (halo-benzo carbonyl)heterobicyclic p38 kinase inhibiting agents
NZ188770A (en) Thiazolinylguanidine derivatives and pharmaceutical compositions
RU2168493C2 (ru) Производные l-аргинина, способ их получения, фармацевтическая композиция, обладающая ингибирующей no-синтазу активностью
US11993613B2 (en) Thiazolo[5,4-b]pyridine MALT-1 inhibitors
US6090846A (en) Substituted urea and isothiourea derivatives as no synthase inhibitors
US6225305B1 (en) Substituted urea and isothiorea derivatives as no synthase inhibitors
US6297276B1 (en) Substituted urea and isothiourea derivatives as no synthase inhibitors
US3398144A (en) Substituted 3-amino-2&#39;-hydroxyacrylophenones