SI20819A - Analogi pirolo/2,3-d/pirimidinskih nukleozidov - Google Patents

Analogi pirolo/2,3-d/pirimidinskih nukleozidov Download PDF

Info

Publication number
SI20819A
SI20819A SI200020035A SI200020035A SI20819A SI 20819 A SI20819 A SI 20819A SI 200020035 A SI200020035 A SI 200020035A SI 200020035 A SI200020035 A SI 200020035A SI 20819 A SI20819 A SI 20819A
Authority
SI
Slovenia
Prior art keywords
group
compound
pyrrolo
cell
pyrimidine
Prior art date
Application number
SI200020035A
Other languages
English (en)
Inventor
Guangyi Wang
Robert Tam
Zbigniew Pietrzkowski
Esmir Grunic
Original Assignee
Icn Pharmaceuticales, Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Icn Pharmaceuticales, Inc. filed Critical Icn Pharmaceuticales, Inc.
Publication of SI20819A publication Critical patent/SI20819A/sl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/14—Pyrrolo-pyrimidine radicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7068—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines having oxo groups directly attached to the pyrimidine ring, e.g. cytidine, cytidylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Predstavljeni so sestavki in postopki za analoge pirolo /2,3-d/pirimidinskih nukleozidov, ki imajo substituente pri pozicijah C4' in C5' iz ribofuranoznega dela. Obravnavane spojine kažejo, med drugim, protirakave in imunomodulacijske učinke pri zmanjšani citotoksičnosti.ŕ

Description

Področje izuma
Področje izuma so analogi nukleozidov.
Ozadje izuma
Analogi nukleozidov so se dolgo uporabljali kot antimetaboliti za zdravljenje rakov in virusnih infekcij. Po vstopu v celico se analogi nukleozidov pogosto fosforilirajo po poteh predelave (v angl. orig.: salvage pathways) nukleozidov, pri katerih se analogi tipično fosforilirajo v ustrezne mono-, di-. in trifosfate. Trifosforilirani analogi nukleozidov se, med drugimi intracelulamimi nameni, često uporabljajo kot substrati za polimeraze DNA ali RNA in se torej vključujejo v DNA ali RNA. Kjer so trifosforilirani analogi nukleozidov močni inhibitorji polimeraze, lahko povzročijo prezgodnje dokončanje nastajajoče molekule nukleinske kisline. Če se trifosforilirani analogi nukleozidov vključijo v nukleinsko kislino, so posledica lahko replikati ali transkripti, izražanja genov ali prekinitev funkcije.
Na bolj celulamem nivoju lahko analogi nukleozidov tudi motijo celični cikel in posebno zaželeni učinki analogov nukleozidov vključujejo indukcijo apoptoze rakavih celic. Nadalje je za analoge nukleozidov tudi znano, da modulirajo določene imunske odgovore.
V stroki so znani različni analogi nukleozidov z relativno močnim protirakavim učinkom. Na primer, znana zdravila vključujejo inhibitorje timidilat sintaze, kot 5-fluorouridin, inhibitorje adenozin deaminaze, vključno 2-kloroadenozin in neplanocin A, ki je inhibitor Sadenozilhomocistein hidrolaze. Vendar pomenijo vsi ali skoraj vsi od znanih analogov nukleozidov tudi nevarnost normalnim celicam sesalcev, prvenstveno, ker ti analogi nukleozidov nimajo ustrezne selektivnosti med normalnimi celicami in tumorskimi celicami. Na nesrečo je pomanjkanje ustrezne selektivnosti često povezano s težkimi stranskimi učinki in zato pogosto omejuje potencial takih analognih zdravil.
-2-2Čeprav so v stroki znani različni analogi nukleozidov, imajo vsi ali skoraj vsi od njih, eno ali več pomanjkljivosti. Zato obstoji še vedno potreba, da se zagotovijo izboljšani postopki in sestavki za analoge nukleozidov.
Povzetek izuma
Predloženi izum je usmerjen k analogom nukleozidov z modifikacijami na sladkornih delih analogov pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov, ki lahko pomembno zmanjšajo toksičnost analogov nukleozidov proti celicam sesalca, medtem ko tudi zagotavljajo pomembno citotoksičnost za rakave celice. Te modifikacije vključujejo substitucije pri C4' in C5' pozicijah ribofuranoznih delov, vendar niso nanje omejene. Predloženi izum tudi nazorno prikaže, da imajo določeni analogi pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov zaželene imunomodulacijske učinke, vključno rast citokinov tipa 1, kot na primer IL-2 in supresijo citokinov tipa 2, kot na primer IL-4. Te imunomodulacijske lastnosti so lahko uporabne proti raku, proti virusom in pri avtoimunskih boleznih, zdravljenju vnetja in preprečevanju zavrnitve transplantatov.
Po enem vidiku predmeta tega izuma je analog nukleozida pirolo[2,3]pirimidinski nukleozid s strukturo po formuli (I):
v čemer je A O, S ali CH2; X je H, NH2 ali OH; Y je H, halogen ali NH2; Z je izbran iz skupine, ki sestoji iz H, halogena, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NR2, CN, C(O)NH2, COOH, COOR, CH2NH2, C(=NOH)NH2 in C(=NH)NH2, kjer je R alkil, alkenil, alkinil ali aralkil; R2 in R3 sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz H, F in OH; R4 je izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R4 opcijsko vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino (v angl. orig.: at least one of a heteroatom and a functional group); R5 je H, OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR')2 ali P(O)(OR')2, pri čemer je R' maskirajoča skupina; in R5.je izbran iz skupine, ki sestoji iz alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R5. vsaj dva atoma ogljika in opcijsko ima vsaj enega od
-3-3heteroatomov in funkcionalno skupino.
Po drugem vidiku predmeta tega izuma je analog nukleozida pirolo[2,3d]pirimidinski nukleozid s strukuro po formuli (II):
(H) v čemer je Z CN, C(O)NH2, C(=NH)NH2 ali C(=NOH)NH2 in R4 in R5. sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, v čemer R4 in R5. neodvisno in opcijsko vsebujeta vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino; s pridržkom, da R4 in R5< nista hkrati vodik.
Po nadaljnjem vidiku predmeta tega izuma se obravnavane spojine uporabljajo za inhibiranje tumorske rasti ali za moduliranje produkcije citokinov tipa 1 in tipa 2 in kemokinov.
Različni cilji, značilnosti, vidiki in prednosti predloženega izuma bodo postali bolj razvidni iz naslednjega podrobnega opisa prednostnih izvedb izuma, skupaj s spremljajočimi risbami.
Kratek opis risb
Slika 1 je prva ponazorilna sintetična shema reakcij, vključenih v produkcijo spojin po predmetu tega izuma.
Slika 2 je druga ponazorilna sintetična shema reakcij, vključenih v produkcijo spojin po predmetu tega izuma.
Slika 3 je tretja ponazorilna sintetična shema reakcij, vključenih v produkcijo spojin po predmetu tega izuma.
Slika 4 je četrta ponazorilna sintetična shema reakcij, vključenih v produkcijo spojin po predmetu tega izuma.
-4-4Slika 5 je peta ponazorilna sintetična shema reakcij, vključenih v produkcijo spojin po predmetu tega izuma.
Slika 6 je šesta ponazorilna sintetična shema reakcij, vključenih v produkcijo spojin po predmetu tega izuma.
Slika 7 prikazuje značilne spojine po predmetu tega izuma.
Sliki 8A in 8B sta grafa, ki predstavljata učinek spojin po predmetu tega izuma na izražanje citokinov tipa 1 in tipa 2, poedino.
Slika 9 je tabela, ki kaže citotoksičnost različnih spojin po predmetu tega izuma.
Slika 10 je tabela, ki kaže hitrosti sinteze DNA v celicah, obdelovanih z različnimi spojinami po predmetu tega izuma.
Slika 11 je graf, ki prikazuje inhibicijo sproščanja VEGF iz humanih rakavih celic prostate po obdelovanju s spojinami po predmetu tega izuma.
Slika 12 je graf, ki prikazuje inhibicijo sproščanja IL-8 iz humanih rakavih celic prostate po obdelovanju s spojinami po predmetu tega izuma.
Podroben opis
Ugotovljeno je bilo, da imajo analogi pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov po splošnih formulah (I) in (II) različne biološke učinke na normalne in hiperproliferativne celice.
v čemer je A O, S ali CH2; X je H, NH2 ali OH; Y je H, halogen ali NH2; Z je izbran iz skupine,
-5-5ki sestoji iz H, halogena, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NR2, CN, C(O)NH2, COOH, COOR, CH2NH2, C(=NOH)NH2 in C(=NH)NH2, kjer je R alkil, alkenil, alkinil ali aralkil; R2 in R3 sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz H, F in OH; R4 je izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R4 opcijsko vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino; R5 je H, OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR')2 ali P(O)(OR’)2, pri čemer je R' maskirajoča skupina; in R5. je izbran iz skupine, ki sestoji iz alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R5. vsaj dva atoma ogljika in opcijsko ima vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino.
Predsem naj bi se upoštevalo, da se izrazi 'alkil*, 'alkenil', 'alkinil' in 'aralkil, kot se uporabljajo tu notri, nanašajo tako na linearne kakor na razvejane vrste. Z ozirom na substituenta R2 in R3 naj bi se upoštevalo, da sta tako R2 kakor R3 lahko neodvisno usmerjena proti a- ali β-licu (v angl. orig.; face). Nadalje, kjer substituenti na C5, niso identični, ima substitucija na C5 lahko za posledico R- ali S-kiralni center. Izraz 'heteroatom', kot se uporablja tu notri, se nanaša na ne-ogljikove atome v organski molekuli in obravnavani heteroatomi zlasti vključujejo halogene, dušik, kisik in žveplo. Izraz 'funkcionalna skupina, kot se uporablja tu notri, se nanaša na reaktivno vez (npr. dvojno ali trojno vez) ali reaktivno skupino (npr. -OH, -SH, -NH2, -N3, -CN, COOH, -CHO, -CONH2, itd.).
Obravnavani analogi pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov so zlasti tisti po formuli (I), v kateri je Z CN, C(O)NH2 ali C(=NH)NH2 in v kateri ima R5. vsaj dva atoma ogljika in je izbran iz skupine, ki sestoji iz alkila, alkenila, alkinila in aralkila.
Analog pirolo[2,3-d]pirimidinskega nukleozida po formuli (II) ima naslednjo strukturo;
v čemer je Z CN, C(O)NH2, C(=NH)NH2 ali C(=NOH)NH2 in R4 in R5. sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer R4 in R5. neodvisno in opcijsko vsebujeta vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino; s pridržkom, da
-6-6R4 in R5. nista hkrati vodik; in pri čemer so preostali substituenti, kot so definirani v formuli (I).
Vendar naj bi se upoštevalo, da so spojine po predmetu tega izuma lahko tudi v drugih oblikah in pripravkih, kot so opisani prej in obravnavane oblike predvsem vključujejo oblike predzdravil ali drugače modificirane oblike, pri katerih so obravnavane molekule kemično in/ali encimatsko modificirane, da se izboljšajo farmakološke in/ali farmakodinamične lastnosti, vključno višja specifičnost proti ciljnim organom, ali celicam, ali subcelulamim razdelkom in povečan čas polovične življenjske dobe v organizmu.
Lahko se, na primer, tvorijo addukti holesterola, da se poveča ciljna specifičnost proti jetrom, ali se lahko tvorijo addukti apolipoproteinov, da se izboljša penetracija modificiranega zdravila čez krvnomožgansko pregrado proti možganom. Pri drugem primeru se lahko sintetizirajo kompleksi receptor-ligand, da se usmeri modificirano zdravilo na posamezno celico, ki izraža receptor, specifičen za ligand. Alternativno se lahko tvorijo kompleksi protiteles ali fragmentov protiteles, da se poveča selektivna dostava modificiranega zdravila na subcelularno lokacijo. V stroki je znanih mnogo predzdravil in modificiranih oblik in obravnavane oblike predzdravil zlasti vključujejo predzdravila, opisana v Začasni prijavi ZDA 60/216418, vloženi 17. 04. 00 in vključeni tu notri po referenci. V še nadaljnjih primerih se obravnavanim molekulam lahko dodajajo nabite ali nenabite skupine, lipofilne ali polarne skupine, da se poveča čas polovične življenjske dobe v serumu ali drugih ciljnih organih in/ali celicah. Pri nadaljnjih primerih naj bi se upoštevalo, da so obravnavane spojine, kadar so fosforilirane pri C5 atomu, lahko tudi di-, ali tri-fosforilirane ali vključujejo tiofosfat.
Medtem ko je običajno prednostno, da imajo obravnavane spojine sladkorni del v D-konfiguraciji, je tudi predvideno, da imajo spojine lahko sladkorni dei v L-konfiguraciji. Nadaljnji stereokemični vidiki vključujejo predvsem R in S konfiguracije pri C5 atomu, kjer je primemo, upoštevalo pa naj bi se, da so substituenti v obravnavanih spojinah lahko usmerjeni k a ali β fazi.
Upoštevalo naj bi se tudi, da so obravnavane spojine lahko formulirane v različnih pripravkih, vključno v oblikah tekočin, sirupov ali gelov (npr. za injiciranje, zaužitje ali lokalno dajanje) in v trdnih oblikah (npr. za zaužitje, injiciranje ali vlaganje v telesno votlino). Ko se pričakuje, na primer, da so spojine po predmetu tega izuma nestabilne v želodčnem okolju, se predvideva posebno injiciranje prednostno izotonične raztopine. Alternativno sta lahko intranazalna aplikacija ali inhalacija tekoče oblike primerni, da se prepreči razgradnja s kislino. Po drugi
-7-7strani se, če je znano, da so obravnavane spojine odporne na prebavno razgradnjo, lahko obravnavane oblike dajejo v obliki sirupa ali tablete. Odvisno od posamezne uporabe se obravnavane spojine lahko tudi formulirajo za lokalne ali transdermalne aplikacije. V stroki je znanih še mnogo pripravkov, od katerih se za vse tudi pričakuje, da so primerni v zvezi s tu notri predstavljenim predmetom izuma in posebno pričakovani pripravki so opisani v 'Drug Products forClinical Trials: An Intl. Guide to Formulation, Production, Quality Control, Donald C. Monkhouse in Christopher T. Rhodes (urednika); ISBN: 082479852Χ.
Še nadalje naj bi se upoštevalo, da obravnavane spojine in pripravki lahko vključujejo funkcionalne in nefunkcionalne dodatke. Na primer, kjer je zaželena transkutana dostava zdravila, se lahko dodajajo sredstva za izboljšanje penetracije kože. Alternativno se lahko dodajajo zdravila, vključno citostatska, antivirusna ali imunomodulatorna sredstva, ki sinergistično ali dodatno izboljšajo delovanje obravnavanih spojin. Primeri za nefunkcionalne dodatke vključujejo polnila, antioksidante, sredstva za aromo ali barvo, da bi se izboljšala posamezna kvaliteta obravnavanih spojin.
Z ozirom na koncentracijo obravnavanih spojin je prednostno, da je koncentracija v območju od približno 1 μΜ do okoli 100 μΜ, kadar se meri na mestu učinkovanja. Vendar so primerne koncentracije lahko tudi v območju od 999 nM do 10 nM in manj in posebno, kjer je afiniteta obravnavanih spojin pod 1 μΜ. Po drugi strani so lahko, kjer obravnavane spojine kažejo relativno kratke čase polovične življenjske dobe ali imajo močno pretvorbo, predvidene koncentracije 0,1 mM in 100 mM in več. Potemtakem lahko doziranje obravnavanih spojin močno variira, vendar se primerna doziranja lahko brez težav določijo pri eksperimentih in vitro ali z živalmi.
Med različnimi biološkimi učinki 5'- in 4'-modificiranih analogov pirolopirimidinskih nukleozidov vključujejo pomembni biološki učinki zlasti modulacijo produkcije citokinov tipa 1 in tipa 2, uravnavanje neoplastičnih stanj (t.j., zmanjšanje sinteze DNA ali zmanjšanje rasti celic) in zmanjšanje sproščanja kemokinov in rastnih faktorjev, kot je opisano spodaj.
Potemtakem lahko obravnavani postopek spreminjanja sekrecije citokina iz celice obsega stopnjo, pri kateri se spojina po formuli (I) zagotovi in ima nadaljnjo stopnjo, pri kateri se celici spojina po formuli (I) daje pri koncentraciji, ki učinkuje, da se spremeni sekrecija citokina. Čeprav se v formuli (I) na sploh pričakujejo vse možne kombinacije substituentov, so zlasti pričakovane spojine spojine po formuli (I), pri čemer sta R4 in R5. neodvisno izbrana iz
-8-8skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila in pri čemer R4 in R5. neodvisno in opcijsko vsebujeta vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino, s preostalimi substituenti, kot je definirano zgoraj v formuli (I). Po alternativnem vidiku je spojina, ki se uporabi, da se spremeni sekrecija citokina iz celice, lahko tudi spojina po naslednji strukturi:
v čemer je Z CN, C(O)NH2> C(=NH)NH2, C(=NNH2)NH2 ali -C(=NOH)NH2, in v čemer je R5 H, OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR')2 ali P(O)(OR')2, z R', ki je maskirajoča skupina.
Obravnavani citokini zlasti vključujejo citokine tipa 1 (npr. IFNy) in tipa 2 (npr. IL-4). Z ozirom na celice se pričakuje, da so primerne vse celice, znane, da producirajo in/ali izločajo citokine, vendar posebno pričakovane celice vključujejo limfocite in rakave celice (npr. rakave celice prostate, infra).
Po nadaljnjem vidiku predmeta tega izuma lahko postopek zmanjšanja rasti hiperproliferativne celice obsega stopnjo, pri kateri se spojina po formuli (I) zagotovi in drugo stopnjo, pri kateri se hiperproliferativni celici spojina daje pri koncentraciji, ki učinkuje, da se zmanjša rast hiperproliferativne celice. Posebno prednostne spojine vključujejo spojine po formuli (I), pri čemer je R4 izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer R4 opcijsko vsebuje vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino in pri čemer je R5. izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R5. vsaj dva atoma ogljika in opcijsko vsebuje vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino, s pridržkom, da R4 in R5. nista hkrati vodik in s preostalimi substituenti, kot je definirano zgoraj.
Posebno pričakovane hiperproliferativne celice vključujejo rakave celice, in posebno pričakovana rakava celica je rakava celica prostate. Čeprav se ne želimo vezati na specialno teorijo, predvidevamo, da zmanjšanje rasti obsega zmanjšanje sinteze DNA.
Po še nadaljnjem vidiku predmeta tega izuma pričakujemo, da ima postopek zmanjšanja sproščanja rastnega faktorja iz celice stopnjo, pri kateri se spojina po formuli (I) zagotovi in
-9-9drugo stopnjo, pri kateri se celici spojina daje pri koncentraciji, ki učinkuje, da se zmanjša sproščanje rastnega faktorja. Pričakujemo, da se sproščanje različnih rastnih faktorjev lahko zmanjša s tu notri predstavljenim postopkom, vendar posebno pričakujemo zmanjšanje sproščanja VEGF. Podobno posebno pričakovane celice vključujejo rakave celice, in posebno rakave celice prostate, čeprav pričakujemo v zvezi s tu notri predstavljenim postopkom vse celice, za katere je znano, da izločajo rastne faktorje.
Z ozirom na sintezo obravnavanih spojin bi se moralo upoštevati, da se analogi pirolo[2,3djpirimidinskih nukleozidov po predmetu tega izuma lahko sintetizirajo s pomočjo različnih sinteznih poti in naslednji postopki so predvideni samo zaradi primera.
Sinteza C5‘-modificiranih analogov piroio[2r3-d]pirimidinskih nukleozidov
5'-substituirane analoge nukleozidov smo pripravili s kondenzacijo pirolo[2,3-d]pirimidinskih baz in primemo zaščitenih 5‘-substituiranih ribofuranoz. Kot je prikazano na sliki 1, smo spojino 1, pripravljeno po objavljenem postopku (Jones et al., Methods in carbohydrate Chemistry (uredila VVhistler in Moffat), vol. VI, str. 315-322, Academic Press, New York, (1972)), obdelali z velikim številom nukleofilov, kot na primer Grignardovimi reagenti, da smo proizvedli spojino 2, ki smo jo benzoilirali in pozneje obdelali s trifluoroocetno kislino, da smo proizvedli spojino 4. Benzoiliranje in naslednja obdelava z ocetnim anhidridom/ocetno kislino v prisotnosti žveplove kisline sta dala spojino 6. ki smo jo uporabili za kondenzacijo s pirolo[2,3-d]pirimidinskimi bazami.
Spojino 7 (Jones et al., Methods in carbohydrate Chemistry (uredila VVhistler in Moffat), vol. VI, str. 315-322, Academic Press, New York. (1972)), pripravljeno po objavljenem postopku, smo pretvorili v derivat tozilata, ki smo ga reducirali z litij aluminijevim hidridom, da smo proizvedli spojino 8. S podobnimi postopki, prikazanimi na sliki 1, smo spojino 8 pretvorili v spojino 9. Kondenzacija spojine 9 in pirolo[2,3-djpirimidina 19 in naslednje transformacije, kot je prikazano v shemi 2, so dale spojine 10-15, kot je ponazorjeno na sliki 2.
Kot je prikazano na sliki 3, smo spojino 2 pretvorili v sulfonat 16, ki smo ga podvrgli nukleofilni zamenjavi, da smo proizvedli konfiguracijsko obrnjeno spojino 17. Odstranitev zaščite izopropilidenu in naslednje acetiliranje je dalo tetraacetat 18. Kondenzacija 5-C-substituiranih zaščitenih ribofuranoz z bazami nukleozidov je prikazana na sliki 4.
5-cianopirolo[2,3-d]pirimidin 19, pripravljen po objavljenem postopku (Tolman et al., J. Org.
-10-10Chem., 1969, 91, 2102-2108), smo pretvorili v trimetilsilil derivat in potem kondenzirali s spojino 6 v prisotnosti trimetilsilil triflata s podobnim postopkom, opisanim za toyocamycin (Sharma etal., Nucleosides Nucleotides, 1993, 12, 643-648). Nastali produkt pripajanja smo podvrgli debromiranju s hidrogeniranjem, da smo proizvedli spojino 20. Obdelovanje spojine 20 z amoniakom v brezvodnem metanolu je dalo spojini 21 in 23. Spojino 21 smo oksidirali, da smo proizvedli spojino 22. Spojino 23 smo pretvorili v karboksamid derivat 24. Spojini 23 in 24 smo oksidirali, da smo proizvedli spojino 25. Obdelovanje spojine 25 s hidroksiaminom je dalo spojino 26, ki smo jo hidrogenirali nad Raney nikljem, da smo proizvedli 27. Alternativno smo spojino 27 pripravili tudi s segrevanjem spojine 25 z amoniakom v avtoklavu (v angl. orig.bomb), danem podtlak.
Sinteza C4'-modificiranih analogovpirolol2,3-d}pirimidinskih nukleozidov
Po sliki 5 smo spojino 1 obdelali s formaldehidom v vodnem natrijevem hidroksidu, da smo proizvedli 4'-hidroksimetil derivat 28, ki smo ga selektivno zaščitili, da smo pripravili spojino 29. Naslednja zaščita z DMT in odstranitev TBS je dala spojino 31, ki se lahko pretvori v veliko število substituentov. 4-C-substituirani derivati, podvrženi podobnim transformacijam kot 5-C-substituirane ribofuranoze (shema 1), se lahko pretvorijo v spojino 35, ki se uporablja za kondenzacijo z bazami nukleozidov.
Podobno C5'-substituiranim analogom pirolopirimidinskih nukleozidov lahko 4'-substituirane analoge 36 dobimo s kondenzacijo spojine 35 s spojino 19, kot je prikazano na sliki 6. Naslednje transformacije lahko dajo 4'-C-substituiran pirolopirimidinski nukleozid 37-42.
Sinteza 2‘-modificiranih in drugih analogovpirolo[2,3-djpirimidinskih nukleozidov
Za biološko testiranje smo pripravili naslednje analoge pirolopirimidinskih nukleozidov, od katerih so bili nekateri objavljeni (navedeni kot znane spojine) in so prikazani na sliki 7. Znane spojine 43, 44, 52-55 in 57 smo pripravili po objavljenem postopku (Hinshaw et al., J. Org. Chem., 1970, 92, 236-241). Spojino 56 smo pripravili s hidrogeniranjem spojine 52. Znano spojino 49 (Krawczyk et al., Nucleosides Nucleotides, 1989, 8, 97-115) smo obdelali z natrijevim nitritom, da smo proizvedli spojino 50. Znani spojini 45 in 48 smo pripravili po objavljenem postopku (Ramasamy et al., J. Heterocyclic Chem., 1988, 25, 1043-1046). Spojino 45 smo obdelali z amoniakom-metanolom, da smo proizvedli spojino 46 in hidrogenirali, da smo proizvedli spojino 47. Spojine 58-63 smo pripravili iz spojine 45 s
-11-11podobnimi postopki, ki so bili uporabljeni za spojine 52-57. Znano spojino 64 (Krawczyk et al., Nucleosides Nucleotides, 1989, 8, 97-115) smo pretvorili v spojine 65-67. Znano spojino 68 (Ramasamy et al., Tetrahedron, 1986, 42, 5869-5878) smo pretvorili v spojini 69 in 70.
Priprava humanih celic T in aktivacija in vitro
Periferne krvne mononukleame celice od zdravih donorjev smo izolirali s centrifugiranjem z gostotnim gradientom, čemur je sledilo obogatenje celic T z uporabo Lymphokwik (One Lambda, Canoga Park CA). Kontaminirajoče monocite smo odstranili z adherenco na plastiko. Očiščene celice T so bile > 99 % CD2+, <1 % HLA-DR+ in < 5 % CD25+ in smo jih vzdrževali v RPMI-AP5 (RPMI1640 medium, vsebujoč 5 % avtologne plazme, 1 % L-glutamina, 1% penicilina/streptomicina in 0,05 % 2-merkaptoetanola). Za določanje nivojev proteinov citokinov, smo celice T (0,2 χ 106 celic v volumnu 0,2 ml) aktivirali z dodajanjem 2 ng forbol miristat acetata in 0,1 mg ionomycina (PMA-ION, oba iz Calbiochem, San Diego, CA) in inkubirali v ploščah s 96 vdolbinicami v prisotnosti 0 ali 10 μΜ različnih gvanozinskih nukleozidov v teku 48 h pri 37 °C. Po aktivaciji smo supernatante analizirali glede na produkcijo iz celic izvirajočih citokinov.
Analize ekstracelularnih citokinov.
Nivoje humanih citokinov smo določili v supernatantih celic, po primerni razredčitvi, z uporabo ELISA kompletov, specifičnih za IFNy in IL-4 (Biosource, Camarillo, CA). Vsi rezultati z ELISA so bili izraženi kot pg/ml.
Učinek analogovpirolo-[2,3,d]pirimidinskih nukleozidov na nivoje ekstracelularnih citokinov pri aktiviranih humanih celicah T.
Učinek analogov piroto-[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov pri 0 in 10 μΜ na izražanje citokinov tipa 1, IFNy in citokinov tipa 2, IL-4, pri celicah T, stimuliranih s PMA/ionomycinom, je prikazan na slikah 8A in 8B za 5 individualnih humanih donorjev. Nivoje citokinov smo z ELISA določili v supernatantih brez celic. Najmočnejši učinek smo opazili s 7-b-D-ribofuranzil-4oksopirolo-[2,3-d]pirimidin-5-karboksamidinom. Ta spojina je zvišala produkcijo aktiviranih IL-4 za 498 % ± 83 in zadušila IFNy za 43 % ± 4 glede na nivoje aktivirane kontrole vsakega citokina. Podatki so prikazani kot odstotek glede na aktivirano kontrolo, izračunan kot razmerje nivoja citokinov aktiviranih celic T v prisotnosti testnih nukleozidov z ozirom na nivo citokinov
-12-12neobdelanih aktiviranih celic T x 100 %. Ničelni učinek na nivoje citokinov zaradi testnih nukleozidov bi dal odstotno vrednost 100 % glede na aktivirano kontrolo. Absolutni nivo (pg/ml ± standardna deviacija) sekrecije citokinov, inducirane s PMA-ION, je bil za lFNy 22954 ± 3391; in za IL-4 162 ± 40. Počivajoči nivoji so bili < 30 pg/ml za vse testirane citokine.
Citotoksičnost anatogo v pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozido v in vitro
Analogi pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov iz predloženega izuma so bioaktivni, ker pokažejo nek nivo citotoksičnost! in vitro. Pri teh raziskavah smo testirane spojine aplicirali na celično kulturo normalnih humanih tibrobtastov, humanih rakavih celic prostate 81, humanih rakavih celic melanoma 140, humanih rakavih celic pljuč 177 in humanih ovarijskih rakavih celic R in NR (vsi dobavljivi od ATCC). Pri teh eksperimentih smo celice nanesli pri gostoti 2000 celic na 200 μΙ medija na vdolbinico (plošča s 96 vdolbinicami). Testirane spojine smo aplicirali na vdolbinice enkrat, pri koncentracijskem območju 0,78-100 μΜ takoj po nanašanju celic. Kolorimetrični test citotoksičnosti MTS smo izvajali po 72 urah obdelave. EC50 smo izračunali na osnovi zbranih odčitkov in so predstavljene na sliki 9. Odsotnost citotoksičnosti kaže pri koncentraciji pod 100 μΜ več spojin. V takih primerih je EC50 označena kot >100. V drugih primerih naznačuje EC50 koncentracijo testiranih spojin, potrebno, da se poškoduje 50 % populacije celic.
Analogi pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov inhibirajo sintezo DNA v celicah, gojenih in vitro, na način, odvisen od odmerka
Analogi pirolo[2,3-d]pirimidinskega nukleozida inhibirajo rast humanih celic, gojenih in vitro, kot je izmerjeno z nivojem DNA. Eksperimentalni način je bil isti, kot je opisano zgoraj. Spojine so bile dane enkrat, nivo DNA pa smo izmerili po 72 urah. Pri tem času smo polovico medija iz vdolbinic za gojitev odstranili in zamenjali s čisto vodo. Po tem smo celice prenesli na -70 °C za vsaj 12 ur. V naslednji stopnji smo celice prenesli nazaj iz -70 °C na sobno temperaturo in dodali na vsako vdolbinico 1 μΜ Hoechst 33342. Po 2 urah inkubacije smo izmerili signal fluorescence (360-530 nm). Intenziteta fluorescence je po tem postopku proporcionalna količini DNA na podlagi prisotnosti nastalega kompleksa DNA-Hoechst 33342. Rezultati so predstavljeni na sliki 10. Števila izražajo mnogokratnik povečanja količine DNA v primerjavi s količino DNA pri začetku eksperimenta (2 uri po nanašanju celic). Pri neobdelanih rakavih celicah prostate in normalnih celicah se je med 72 urami gojitve nivo DNA povečal 5,78 in 4,47 krat, poedino.
-13-13Spojini 23a(5'-R) in 23a(5'-S) ovirata sekrecijo VEGF iz humanega raka prostate in vitro.
Spojini 23a(5‘-R) in 23a(5’-S) sta učinkoviti pri inhibiciji sekrecije vaskulamega endotelijskega rastnega faktorja (VEGF) iz humanih rakavih celic prostate, HTB81. VEGF je pripoznan kot marker angiogeneze, ker je ta molekula odločilna za migracijo in rast endotelijskih celic in tvorbo mikrožil in vivo. Da bi to dokazali, smo 0,5x105 celic nanesli v 5 ml gojitvenega medija v petrijevi skodelici s premerom 10 cm. Spojine smo aplicirali prav po nanašanju za 72 ur. Medij smo po tem zbrali in nivo VEGF izmerili z uporabo VEGF Elisa testa (R&D Systems) in izrazili kot pg VEGF na ml medija. Rezultati so predstavljeni na sliki 11. V skladu s temi rezultati obe spojini inhibirata sekrecijo VEGF na način, ki je odvisen od odmerka.
Spojini 23a(5'-R) in 23a(5'-S) inhibirata sproščanje IL-8 iz humanih rakavih celic prostate, gojenih in vitro.
Spojini 23a(5'-R) in 23a(5'-S) kažeta inhibitorni učinek na sekrecijo interlevkina-8 (IL-8) iz humanih rakavih celic prostate, HTB81. IL-8 spada v razred kemijsko privlačnih kemokinov (tipa alfa), ki so v pleteni v vnetne procese zaradi privlačnosti nevtrofilcev. Na splošno je za kemokine znano, da jih producirajo različni tipi raka. V različnih raziskavah je dokazano, da je za gostitelja koristna inhibicija produkcije kemokinov prek rakavih celic. Da bi dokazali učinkovitost teh dveh spojin za inhibiranje sekrecije IL-8 iz rakavih celic prostate, smo rakave celice prostate HTB 81 obdelali in vitro s spojinami 23a v 5'-R in 5'-S konfiguraciji pri koncentracijah, navedenih v grafu. Medij, zbran iz kulture, smo analizirali glede na nivo IL-8 ob uporabi IL-8 Elisa testa iz R&D Systems. V skladu z zbranimi rezultati sta obe spojini sposobni, da inhibirata sekrecijo IL-8 na način, odvisen od odmerka, kot je prikazano na sliki
12.
Upoštevalo pa naj bi se, da ni potrebno, da bi bili biološki učinki obravnavanih spojin omejeni na posamezne učinke, kot je opisano zgoraj. Zlasti pričakujemo, da spojine po predmetu tega izuma na sploh kažejo citostatski učinek pri različnih hiperproliferativnih motnjah, vključno lokaliziranih in/ali metastatskih rakih (npr. limfomih in karcinomih), benigni hiperplaziji prostate in keratozah. Čeprav smo izumitelji ugotovili znatne biološke učinke na IL-4 (citokin tipa 2) in IFNy (citokin tipa 1), pričakujemo na sploh, da so spojine po predmetu tega izuma biološko aktivne pri modulaciji drugačnih citokinov kot IL-4 in IFN-γ. Predvsem pričakujemo, da spojine utegnejo povečati ali zmanjšati izražanje/sekrecijo posameznega citokina ali serije citokinov. Potemtakem pričakujemo, da spojine po predmetu tega izuma utegnejo modulirati imunski
-14-14sistem organizma tako, da bi se lahko dosegel bolj izrazit odgovor tipa 1 ali tipa 2. Torej pričakujemo, da spojine po predmetu tega izuma utegnejo biti uspešne, da bi se zmanjšal titer virusa v živem sistemu bodisi z direktnim delovanjem kot inhibitor virusne polimeraze in/ali indirektno z aktiviranjem imunskega sistema na posamezen humoralen ali celularen odgovor. Nadalje pričakujemo, da spojine po predmetu tega izuma utegnejo biti tudi koristne pri zmanjšanju odgovora imunskega sistema proti alo- ali ksenotransplantatu z zmanjšanjem ostrosti celulamega odgovora proti alo- ali ksenotransplantatu.
Primeri
Naslednji protokoli opisujejo ponazorilno sintezo različnih spojin po predmetu tega izuma in so namenjeni samo, da ponazorijo, ne pa, da omejijo, tu notri predstavljen inventivni koncept.
Priprava meti!2,3-O-izopropi!iden-5(R,S)-C-etini!-p-ribofuranozida (2b) \J mešano raztopino metil 4-C,5-O-didehidro-2,3-<9-izopropiliden-p-D-ribofuranozida (Jones et al., Methods in Carbohydrate Chemistiy, vol 1, str. 315-322 (1972), 4,00 g, 19,78 mmolov) v brezvodnem THF (20 mL) pri -42 °C pod argonom smo dodali po kapljicah etinilmagnezijev bromid (0,5 M v THF, 80 mL, 40 mmolov). Po dodatku smo nastalo zmes počasi segrevali do 0 °C (~90 min.). Reakcijo smo pogasili z dodajanjem ledu (50 g)/vode (50 mL) in zmes mešali v teku 30 min. Po nevtralizaciji z 10 %-no vodno ocetno kislino, smo zmes dvakrat ekstrahirali z etil acetatom. Združeni organski sloj smo sušili (Na2SO4) in koncentrirali. Kromatografija na siliki (etil acetat-heksani 1:4) je dala 3,48 g naslovne spojine (razmerje R/S 1:1) kot belo trdno snov. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine; Metil 2,3-<3-izopropiliden-5(R)-Cmetil-p-D-ribofuranozid (2a) smo pripravili iz metil 4-C,5-0-dihehidro-2,3-<9-izopropiliden-pD-ribofuranozida in etilmagnezijevega bromida. Metil 2,3-Oizopropiliden-5(R)-C-vinil-p-Dribofuranozid (2c) smo pripravili iz metil 4-C,5-0-dihehidro-2,3-<9-izopropiliden-p-D-ribofuranozida in vinilmagnezijevega bromida. Metil 5(R)-C-alil-2,3-č>izopropiliden-p-D-ribofuranozid (2d) smo pripravili iz metil 4-C,5-0-dihehidro~2,3-Oizopropiliden-p-D-ribofuranozida in alilmagnezijevega bromida.
Priprava meril 2,3-0-izopropriden-5-0-metansulfonil-5(R)-C-metil-p-Dribofuranozida (16)
V mešano raztopino metil 2,3-<9-izopropiliden-5(R)'C-metil-p-D-ribofuranozida (2a, 7,24 g,
-15-1533,17 mmolov) v brezvodnem piridinu (50 mL) pri 0 °C smo dodali metansulfonil klorid (3,1 mL, 39,92 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 1 h, ohladili na 0 °C, pogasili z dodajanjem vode (1,0 mL) in mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min. Topilo smo izparili in ostanek raztopili v etil acetatu, trikrat izprali s slanico, sušili (NagSC^) in koncentrirali. Kromatografija na siliki (30 % EtOAc v heksanih) je dala 8,62 g naslovne spojine kot brezbarven sirup.
Priprava metil 2,3-0-izopropiliden-5-0-acetil-5(S)-C-metil-p-D ribofuranozida (17)
Mešano suspenzijo metil 2,3-i>izopropiliden-5-<3-metansulfonil-5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozida (16, 8,62 g, 29,1 mmolov) in NaOAc (brezvodni, 3,5 g, 42,5 mmolov) v brezvodnem DMF (350 mL) smo segrevali pri 125 °C pod argonom v teku 4 dni. Topilo smo izparili in ostanek kromatografirali na siliki (25 % EtOAc v heksanih), da smo proizvedli 4,0 g naslovne spojine kot belo trdno snov.
Priprava meti! 2,3-0-izopropiliden-4-C-hidroksimetil-fi-D-ribofuranozida (28)
V mešano raztopino metil 4-C,5-O-didehidro-2,3-<3-izopropiliden-p-D-ribofuranozida 1 (20,22 g, 100 mmolov) v dioksanu (380 mL) pri 0 °C smo dodali po kapljicah formaldehid (37 %-na raztopina, 76 mL) in potem 2 M NaOH (188 mL). Nastalo reakcijsko zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 20 h, ohladili na 0 °C, nevtralizirali (10 %-na ocetna kislina), koncentrirali (~50 %) in dvakrat ekstrahirali z metilen kloridom. Združeni organski sloj smo sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki (4 % metanola v kloroformu) je dala 20,2 g naslovne spojine 28 kot belo trdno snov.
Priprava meti!2,3-O-izopropiliden-5-deoksi-p-D-ribofuranozida (8)
V mešano raztopino metil 2,3-CMzopropiliden-p-D-ribofuranozida (14,2 g, 70,0 mmolov) v brezvodnem piridinu (250 mL) pri 10 °C smo dodali po porcijah (v teku 30 min) p-toluensulfonil klorid (19,1 g, 100 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 18 h, ohladili na 0 °C, pogasili z dodajanjem vode (5,0 mL) in mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min. Topilo smo izparili. Ostanek smo raztopili v etil acetatu, trikrat izprali s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki (etil acetat-heksani 1:3) je dala 24,1 g naslovne spojine kot belo trdno snov.
-16-16V mešano suspenzijo LiAIH4 (4,58 g, 120,5 mmolov) v brezvodnem dietil etru (120 mL) smo dodali metil 2,3-0-izopropiliden-5-0-p-toluensulfonil-p-D-ribofuranozid (13,1 g, 36,55 mmolov) v dietil etru-toluenu (2,5:1, 140 mL). Nastalo zmes smo refluksirali v teku 22 h, ohladili na sobno temperaturo, razredčili z etil acetatom (25 mL), pogasili z dodajanjem vode (5,0 mL). Topilo smo izparili. Ostanek smo raztopili v etil acetatu, izprali trikrat s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki (etil acetat-heksani 1:3) je dala 3,58 g naslovne spojine kot brezbarvno tekočino.
Priprava meti! 5(R)-C-alil-5-0-benzoil-2.3-O-izopropi!iden-p-D-ribofuranozida (3d)
V mešano raztopino metil 5(R)-C-alil-2,3-0-izopropliden-p-D-ribofuranozida (4,49 g, 18,38 mmolov) v brezvodnem piridinu (40 mL) pri 0 °C smo dodali benzoil klorid (2,7 mL, 23,0 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 18 h, hladili z ledom, pogasili z dodajanjem vode (1 mL) in mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min. Topilo smo izparili in ostanek raztopili v etil acetatu, izprali trikrat s slanico, sušili (NagSO^ in koncentrirali. Kromatografija na siliki (12 % etil acetata v heksanih) je dala 6,26 g naslovne spojine 3d kot brezbarven sirup. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: Metil 5-0-benzoil-5(R,S)-C-etinil-2,3-0-izopropliden-p-D-ribofuranozid (3b, razmerje R/S: 1:1) iz metil 5(R,S)-C-etinil-2,3-č>izopropliden-p-D-ribofuranozida (2b). Metil 4-C-benzoiloksimetil5-0-benzoil-2,3-0-izopropliden-p-D-ribofuranozid iz metil 2,3-0-izopropliden-4-C-hidroksimetil- β-D-ribofuranozida.
Priprava meti! 5(R)-C-aiil-5-0-benzoit-p-D-ribofuranozida (4d)
Raztopino metil 5(R)-C-alil-5-0-benzoil-2,3-0-izopropiliden-β-D-ribofuranozida (3d, 6,2 g, 17,8 mmolov) v zmesi TFA-H2O (9:1) smo mešali pri 0 °C v teku 90 min in koncentrirali do suhega pri 0 °C. Ostanek smo raztopili v zmesi metanol-toluen (20 mL, 1:1) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki (etil acetat-heksani 1:1) je dala 3,70 g naslovne spojine 4d kot belo trdno snov. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: Metil 5-<3-benzoil-5(R,S)-Cetinil-p-D-ribofuranozid (4b, razmerje R/S: 1:1) iz metil 5-0-benzoil-5(R,S)-C-etinil-2,3-0izopropiliden-β-D-ribofuranozida (3b). Metil 5-0-benzoil-4-C-benzoiloksimetil-p-D-ribofuranozid iz metil 5-0-benzoil-4-C-benzoiloksimetil-2,3-0-izopropiliden-β-D-ribofuranozida.
-17-17Priprava meti! 5(R)-C-aM-2,3.5-tri-O-benzoil-[i-D-ribofuranozida (Sd) ri mešano raztopino metil 5(R)-C-alil-5-Obenzoil-p-D-ribofuranozida (4d, 3,60 mg, 11,68 mmolov) v brezvodnem piridinu (80 mL) pri 0 °C smo dodali benzoil klorid (3,0 mL, 25,84 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 18 h, hladili z ledom, pogasili z dodajanjem vode (1 mL), potem mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min. Zmes smo koncentrirali, razredčili z etil acetatom, izprali trikrat s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali do suhega. Kromatografija na siliki (15 % etil acetata v heksanih) je dala 5,3 g naslovne spojine 5d kot brezbarven sirup. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: Metil 5(R,S)-C-etinil-2,3,5-tri-C>-benzoil-p-D-ribofuranozid (5b, razmerje R/S: 1:1) iz metil 5-6>-benzolil-5(R,S)-C-etinil-p-D-ribofuranozida (4b). Metil 4-C-benzoil-oksometil-2,3,5-tri-č>benzoil-p-D-ribofuranozid iz metil 4-C-benzoiloksimetil-5-Obenzoil-p-D-ribofuranozida.
Priprava 1-O-metH-2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C- vinil-p-D-ribofuranoze (5c)
Raztopino metil 2,3-<9-izopropiliden-5(R)-C-vinil-p-D-ribofuranosise (2c, 1,0 g, 4,3 mmolov) v zmesi trifluoroocetne kisline in vode (9:1, v/v, 11 mL) smo mešali pri 0 °C v teku 30 min in koncentrirali do suhega. Ostanek smo raztopili v metanolu in koncentrirali do suhega (3 krat), potem raztopili v piridinu in uparili in končno smo raztopili v brezvodnem piridinu (11 mL). Tej raztopini smo dodali benzoil klorid (1,9 mL, 16 mmolov). Reakcijsko zmes smo mešali pri 25 °C v teku 16 h in vlili v vodo z ledom (20 mL). Zmes smo ekstrahirali z diklorometanom (20 mL) in organski sloj sušili nad natrijevim sulfatom ter koncentrirali do suhega. Ostanek smo kromatografirali na siliki (0-5 % etil acetata v diklorometanu), da smo proizvedli 1,0 g naslovne spojine 5c kot sirup.
Pripra va 1 -O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-5(R)-C-alil-D-ribofuranoze (6d) ri mešano raztopino metil 5(R)-C-alil-2,3,5-tri-č?-benzoil-p-D-ribofuranozida (5d, 4,0 g, 7,74 mmolov) v ocetni kislini (14 mL) in ocetnem anhidridu (1,75 ml, 18,36 mmolov) pri 0 °C smo dodali koncentrirano žveplovo kislino (200 pL, 3,79 mmolov v 4,0 mL ocetne kisline). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 20 h, ohladili na 0 °C, razredčili s hladnim etil acetatom, izprali z vodo, 5 %-nim vodnim NaHCO3 in potem s slanico, sušili (NagSO^ in koncentrirali. Kromatografija na siliki (etil acetat-heksani 1:4) je dala 2,82 g naslovne spojine 6d (razmerje α/β: 1:2) kot brezbarvno peno. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: 1-č>acetil-5(R,S)-C-etinil-2,3,5-tri-č>benzolil-p-D-ribofuranozo (6b, razmerje R/S: 1:1
-18-18in razmerje α/β: 1:2) iz metil 5(R,S)-C-etinil-2,3,5-tri-č?-benzolil-p-D-ribofuranozida (5b). 1-Oacetil-4-C-benzoiloksimetil-2,3,5-tri-C>-benzoil-D-ribofuranozo (razmerje α/β: 1:3) iz metil 4-C-benzoiloksimetil-2,3,5-tri-č>-benzoil-p-D-ribofuranozida. 5(R)-C-metil-1,2,3,5-tetra-<3-acetilβ-D-ribofuranozo iz metil 2,3-<9-izopropiliden-5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozida.
1.2.3.5- tetra-č>acetil-5(S)-C-metil-D-nbofuranozo 6a iz metil 5-<3-acetil-2,3-č>izopropiliden5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozida. 5-deoksi-1,2,3-tri-<3-acetil-D-ribofuranozo 9 iz metil 5-Oacetil-2,3-<3-izopropiliden-p-D-ribofuranozida. 1-č>acetil-2,3,5-tri-č>benzoil-5(R)-C-vinil-p-Dribofuranozo 6c iz metil 2,3,5-tri-O-benzoil-5(R)-C-vinil-p-D-ribofuranozida.
Priprava 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C-alil-p-Dribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina
Suspenzijo 4-amino-6-bromo-5-cianopirolo[2,3-č/]pirimidina (Tolman et al., J. Org. Chem., 1969, 91, 2102-2108, 1,05 g, 4,41 mmolov) in amonijevega sulfata (50 mg) v HMDS (75 mL) in brezvodnem m-ksilenu (25 mL) smo refluksirali pod argonom v teku 18 h. Topila smo izparili in ostanek sušili pod vakuumom. Ostanek smo raztopili v brezvodnem 1,2-dikloroetanu (80 mL) in zmešali z 1-0-acetil-2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C-alil-D-ribofuranozo (2,00 g, 3,67 mmolov). Ob hlajenju z ledom smo dodali TMSOTf (1,3 mL, 7,30 mmolov v 5 mL brezvodnega 1,2-dikloroetana). Zmes pod argonom smo mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min, potem refluksirali v teku 90 h, pogasili z vlivanjem (hladno) v led/NaHCO3 (50 mL) in filtrirali. Organski sloj smo ločili, sušili (Na2SO4) in koncentrirali. Kromatografija na siliki (EtOAc-heksani 2:3) je dala 1,81 g naslovne spojine kot brezbarvno trdno snov. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3,5)-tri-(>benzoil~5(R,S)-C-etinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidin (razmerje R/S: 1:1) smo pripravili iz 1-€>acetil-2,3,5-tri-<3benzolil-5(R,S)-C-etinil-D-ribofuranoze in 4-amino-6-bromo-5-cianopirolo[2,3-d]pirimidina. 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(4-enzoiloksometil-2,3,5-tri-č?-benzoil-p-D-ribofuranozil) pirolo[2,3-</]pirimidin smo pripravili iz 1-0-acetil-4-benzoiloksimetil-2,3,5-tri-<3-benzoil-D-ribofuranoze in 4-amino-6-bromo-5-cianopirolo[2,3-</]pirimidina. 4-amino-6-bromo-5-ciano-7(1,2,3,5-tetra-č>acetil-5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-oq-pirimidin smo pripravili iz
1.2.3.5- tetra-0-aeetil-5(R)-C-metil-D-ribofuranoze in 4-amino-6-bromo-5-cianopirolo[2,3djpirimidina. 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-č>acetil-5(S)-C-metil-p-D-ibofuranozil)pirolo[2,3-</]pirimidin smo pripravili iz 1,2,3,5-tetra-č>acetil-5(S)-C-metil-D-ribofuranoze in
4- amino-6-bromo-5-cianopirolo[2,3-d]pirimidina. 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3-di-0-acetil5- deoksi^-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-tf]pirimidin smo pripravili iz 1,2,3-tri-C>-acetil-5-deoksi-Dribofuranoze in 4-amino-6-bromo-5-cianopirolo[2,3-d]pirimidina. 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-19-19(2,3,5-tri-<3-benzoil-5(R)-C-vinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]pirimidin smo pripravili iz 1-0acetil-2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C-vinil-p-D-ribofuranoze in 4-amino-6-bromo-5-cianopirolo-[2,3i/]pirimidina.
Priprava 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-O-benzoil-5(Ft)-C-alil-fi-Dribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina (2Oe)
V raztopino 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3,5-tri-<3-benzoil-5(R)-C-alil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-tf]pirimidina (738 mg, 1,0 mmol) v ocetni kislini (25 mL) smo dodali cinkov prah (1,04 g, 16,0 mmolov) v dveh porcijah (eno uro narazen). Reakcijsko zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 20 h in filtrirali. Filtrat smo uparili do suhega in ostanek kromatografirali na siliki (etil acetat-heksani 1:1), da smo proizvedli 450 mg naslovne spojine 20e kot brezbarvno peno. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-5 ciano-7-(2,3,5-tri-č>-benzoil-5(R,S)-C-etinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-tf]pirimidin (razmerje R/S: 1:1) 20b iz 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3,5-tri-C>-benzoil-5(R,S)-C-etinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-</]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-<2-benzoil-5(R)-C-vinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]pirimidin 20c i z 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3,5-tri-<3-benzoil-5(R)-C:vinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-</]pirimidina.
Priprava 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C-propil-p-Dribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina (20f)
Suspenzijo 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C-alil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-tf]pirimidina (400 mg, 0,54 mmola) in 10 % Pd/C (100 mg, -50 % vode) v dioksanu (50 mL) in trietilaminu (0,5 mL) smo stresali v aparaturi za hidrogeniranje (H2,20 psi (= 137,9 kPa - opomba prev.)) v teku 4 h. Katalizator smo filtrirali in izprali (dioksan). Združeni filtrat smo koncentrirali in ostanek kromatografirali na siliki (etil acetat-heksani 1:1), da smo proizvedli 340 g naslovne spojine 20f kot brezbarvno peno. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-<9-benzoil-5(R,S)-C-etil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-<7]pirimidin (razmerje R/S: 1:1) 20d iz 4-amino-6-bromo-5-Ciano-7-(2,3,5-trič>benzoil-5(R,S)-C-etinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(4benzoiloksometil-2,3,5-tri-C>-benzoi!-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-č/]pirimidin iz 4-aminoe-bromo-S-ciano-Z-H-benzoiloksometil^.S.S-tri-CLbenzoil-p-D-ribofuranoziljpirolo^.S-tf jpirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-Oacetil-5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3</]pirimidin 20a iz 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-Oacetil-5(R)-C-metil-p-D-20-20ribofuranozil)pirolo[2,3-č/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-0-acetil-5(S)-C-metilp-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-£/]pirimidin 20a iz 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-č> acetil-5(S)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-t/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(1,2,3-tri-<3acetil-5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-č/]pirimidin iz 4-amino-6-bromo-5-ciano-7-(1,2,3tri-<9-acetil-5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-£/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(2,3-dideoksi-p-D-glicero-pentofuranozil)pirolo[2,3-c/]pirimidin smo pripravili iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3dideoksi-p-D-pent-2-enofuranozil)pirolo[2,3-č/]pirimidina.
Priprava 4-amino-5-ciano-7-(5(R)-C-alil-β -D-ribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina(23e)
Raztopino 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-<3-benzoil-5(R)-C-alil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3djpirimidina (300 mg, 0,454 mmola) v metanolu (40 ml_) pri 0 °C smo nasitili z amoniakom. Raztopina je stala pri sobni temperaturi v teku 2 dni. Topilo smo izparili in ostanek skupaj z NaOAc (brezvodni, 20 mg) suspendirali v DMF (20 mL). Zmes smo mešali pod argonom pri 120 °C v teku 5 h. Topilo smo izparili. Ostanek smo adsorbirali na silikagelu in eluirali iz kolone s silikagelom (metanol-etil acetat 1:25), da smo proizvedli 145 mg naslovne spojine kot brezbarvno trdno snov.
Pred segrevanjem v DMF je produkt vseboval dve glavni spojini 21 in 23, ki ju je bilo mogoče ločiti s kromatografijo na silikagelu. Spojine 21 smo pripravili s pomočjo tega postopka. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-5-ciano-7-(5(R)-C-propil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-c<]pirimidin 23f iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-0-benzoil-5(R)-C-propil-p-Dribofuranozil)-pirolo[2,3-ri]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(5(R,S)-C-etinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-č/]pirimidin (razmerje R-S: 1:1) 23b iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-O-benzoil-5(R,S)C-etinil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]-ptrimidina. 4-amino-5-ciano-7-(5(R,S)-C-etil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-c/]pirimidin (razmerje R-S: 1:1) 23d iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-Obenzoil-5(R,S)-C-etil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-ri]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(4-hidroksimetil-p-D-ribofuranozil)pirolo-[2,3-cQpirimidin 33d iz 4-amino-5-ciano-7-(4-benzoiloksometil2,3,5-tri-0-benzoil-p-D-riboturanozil)pirolo[2,3-i/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(5(R)-C-metilp-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-£/]pirimidin 23a(5'-R) iz 4-amino-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-O-acetil5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-č/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(5(S)-C-metil-p-Dribofuranozil)pirolo[2,3-č?]pirimidin 23a(5'-S) iz 4-amino-5-ciano-7-(1,2,3,5-tetra-0-acetil-5(S)C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-£/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-c<Jpirimidin 10 iz 4-amino-5-ciano-7-(1,2,3-tri-Oacetil-5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-tf]pirimidina. 4-3ΐτίηο-5-α3ηο-7-(5(Η)-6:-νίηίΙ-ρ-Ο-Γ^οίυΓ3ηοζϊΙ)ρίΓθΙο[2,3-α,]ρίΓίιτιί-21-21din 23c iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3,5-tri-<9-benzoil-5(R)-C-vinil-p-D-ribofuranozil)pirolo-[2,3-o5pirimidina.
Priprava 4-amino-5-ciano-7-(2,3-di-0-metansulfonil-5-0-terc-butildifenilsilil-B-Dribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina
V mešano raztopino toyocamicina 43 (5,83 g, 20,0 mmolov) v brezvodnem piridinu (100 mL) pri 0 °C smo dodali terc-butilklorodifenilsilan (6,2 mL, 24,0 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 18 h in potem ohladili na 0 °C in dodali metansulfonilklorid (3,4 mL, 44,0 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 2 h, hladili z ledom, pogasili z dodajanjem vode (2 mL) in mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min. Topilo smo izparili. Ostanek smo raztopili v etil acetatu, izprali trikrat s slanico, sušili (Na2SO4) in koncentrirali. Kromatografija na siliki (etil acetat-heksani 3:2) je dala 8,41 g naslovne spojine kot brezbarvno trdno snov.
Priprava 4-amino-5-ciano-7-(5-O-terc-butildifenilsilil-2,3-didehidro-2,3-dideoksi-p-Dribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina
Telurjev prah (zanka sita 200, 640 mg, 5,0 mmolov) smo pod argonom zaprli, zmešali z litijevim trietilborohidratom (1,0 M v THF, 11,25 mL, 11,25 mmolov). Zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 6 h in potem ohladili na 5 °C, in dodali 4-amino-5-ciano-7-(2,3-di-<3metansulfonil-5-<9-terc-butildifenilsilil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-c/]pirimidin (1,40 g, 2,09 mmola) v THF (12 mL). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 18 h, hladili z ledom, pogasili z dodajanjem vode (0 °C, 5 mL) in mešali pri sobni temperaturi v teku 30 min. Topilo smo izparili in ostanek ekstrahirali z etil acetatom. Ekstrakte smo koncentrirali in ostanek kromatografirali na siliki (15 % etil acetata v heksanih), da smo proizvedli 640 mg naslovne spojine kot brezbarvno peno.
Priprava 4-amino-5-ciano-7-(2,3-didehidro-2,3-dideoksi-p-D- ribofuranozil)pirolo[2,3-d]pirimidina (49)
V mešano raztopino 4-amino-5-ciano-7-(5-<9-terc-butildifenilsilil-2,3-didehidro-2,3-dideoksi-pD-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]pirimidina (2,55 g, 5,32 mmolov) v brezvodnemTHF (100 mL) pri 5 °C smo dodali terabutilamonijev fluorid (1,0 M v THF, 6,6 mL). Nastalo zmes smo mešali pri sobni temperaturi v teku 3 h in koncentrirali. Kromatografija na siliki (6 % metanola v etil
-22-22acetatu) je dala 1,09 g naslovne spojine 49 kot brezbarvno trdno snov.
Priprava 5-ciano-7-(5(R)-C-meti!-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-d]-4-pirimidona (25a)
V mešano raztopino 4-amino-5-ciano-7-(5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)-pirolo-[2,3-c/]pirimidina (306 mg, 1,0 mmol) v vodi (30 mL) in ocetni kislini (2,0 mL) pri 55 °C smo dodali po porcijah natrijev nitrit (590 mg, 8,55 mmolov). Nastalo zmes smo mešali pri 70 °C v teku 3 h in dodali še natrijev nitrit (300 mg, 4,30 mmolov). Zmes smo mešali pri isti temperaturi v teku dodatnih 18 h. Topilo smo izparili in ostanek kromatografirali na siliki (12 % metanola v metilen kloridu), da smo proizvedli 210 mg naslovne spojine 25a(5'-R) kot brezbarvno trdno snov. Podobno smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-5-ciano-7-(5(S)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-tf]-4-pirimidon 25a(5'-S) iz 4-amino-5-ciano-7-(5(S)-C-metil-p-D-ribofuranozil)- pirolo[2,3-£/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(p-D-arabinofuranozil)pirolo[2,3-o']-4-pirimidon 58 iz 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-arabinofuranozi)pirolo[2,3-£/]pirimidina. 4-amino-5-ciano7-(5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-ri]-4-pirimidon 11 iz 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-Dribofuranozil)pirolo[2,3-£/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(2,3-dideoksi- 2,3-didehidro-p-Dglicero-pento-furanozil)pirolo[2,3-</]-4-pirimidon 50 iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3-dideoksi-p-Dpent-2-enofuranozil)pirolo-[2,3-6/]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(2,3-dideoksi-p-D-giiceropentofuranozil)pirolo[2,3-tf]-4-pirimidon 65 iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3-dideoksi-p-D-gliceropentofuranozil)pirolo[2,3-tf]pirimidina. 4-amino-5-ciano-7-(2-deoksi-p-D-furanozil)pirolo[2,3č/]-4-pirimidon 69 iz 4-amino-5-ciano-7-(2-deoksi-p-D-eritropentofuranozil)pirolo[2,3-cQpirimidina.
Priprava 7-(5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-d]-4-pirimidon-5karboksamidoksima (24a)
Mešano suspenzijo 5-ciano-7-(5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]-4-pirimidona (240 mg, 0,784 mmola), hidroksilamin hidroklorida (163 mg, 2,352 mmola) in kalijevega karbonata (162 mg, 1,176 mmola) v etanolu (50 mL) smo refluksirali pod argonom v teku 18 h. Oborino smo filtrirali in izprali s toplim etanolom. Filtrat smo koncentrirali in ostanek kromatografirali na siliki (20 % metanola v metilen kloridu), da smo proizvedli 170 mg naslovne spojine 26a(5‘-R) kot brezbarvno trdno snov. Podobno smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-5-ciano7-(p-D-arabinofuranozil)pirolo[2,3-tf]-4-pirimidon-5-karboksamidoksim 60 iz 4-amino-5-ciano7-(5-deoksi-p-D-arabinofuranozi)-pirolo[2,3-ri]-4-pirimidona.
-23-234-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-c/]-4-pirimidon-5-karboksamidoksim 13 iz 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-ribofuranozil)piroto[2,3-o']-4-pirimidona. 4-amino-5ciano-7-(2,3-didehidro-2,3-dideoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]-4-pirimidon-5-karboksamidoksim 51 iz 4-amino-5-ciano-7-(2,3-didehidro-2,3-dideoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]4-pirimidona. 4-amino-5-ciano-7-(2-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-c/]-4-pirimidon-5-karboksamidoksim iz 4-amino-5-ciano-7-(2-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-b]-4-pirimidona.
Priprava 7-(5(R)-C-metil-fi-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-d]-4-pirimidon-5-karboksamidin hidrok/orida (27a)
Suspenzijo 7-(5(R)-C-metil-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-oJ-4-pirimidon-5-karboksamidoksima (110 mg, 0,324 mmola), amonijevega klorida (20 mg, 0,374 mmola) in Raney niklja (50 %-na gošča v vodi, 200 mg) v vodi (75 mL) smo stresali v aparaturi za hidrogeniranje (H2, 50 psi (= 344,7 kPa - opomba prev.)) pri sobni temperaturi v teku 18 h. Katalizator smo filtrirali in izprali (topla voda).
Združeni filtrat smo koncentrirali in produkt prekristalizirali iz metanola, da smo proizvedli 100 mg naslovne spojine 27a(5'-R) kot brezbarvno trdno snov. Na podoben način smo pripravili naslednje spojine: 4-amino-5-ciano-7-( p-D-arabinofuranozil)pirolo[2,3-£/]-4-pirimidon-5karboksamidin hidroklorid 63 iz 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-arabinofuranozi)pirolo[2,3r/]-4-pirimidon-5-karboksamidoksima. 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-ribofuranozil)-pirolo[2,3-tf]-4-pirimidon-5-karboksamidin hidroklorid 15 iz 4-amino-5-ciano-7-(5-deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-i/]-4-pirimidon-5-karboksamidoksima. 4-amino-5-ciano-7-(2-deoksi-p-Dribofuranozil)pirolo[2,3-oQ-4-pirimidon-5-karboksamidin hidroklorid 70 iz 4-amino-5-ciano-7-(2deoksi-p-D-ribofuranozil)pirolo[2,3-o<]-4-pirimidon-5-karboksamidoksima.
Tako smo opisali specifične izvedbe in aplikacije analogov pirolo[2,3-d]pirimidinskih nukleozidov. Strokovnjakom pa naj bi bilo jasno, da je poleg že opisanih možnih še mnogo modifikacij, ne da bi se oddaljili od inventivnih konceptov tu notri. Zato predmet tega izuma naj ne bi bil omejen, razen v duhu priloženih patentnih zahtevkov. Poleg tega naj bi se pri interpretiranju tako specifikacije kot patentnih zahtevkov vsi izrazi interpretirali na najširši možen način, skladen s kontekstom. Posebno izrazi 'obsega' in 'ki obsega' naj bi se interpretirali kot nanašajoči se na elemente, komponente, ali stopnje na neizključevalen način, ki naznačuje, da so navedeni elementi, komponente ali stopnje lahko prisotni, ali uporabljeni,
-24-24ali kombinirani z drugimi elementi, komponentami ali stopnjami, ki niso izrecno navedeni.

Claims (18)

  1. PATENTNI ZAHTEVKI
    1. Analog nukleozida po formuli (I):
    X
    Y
    Rj- v čemer je A O, S ali CH2; X je H, NH2 ali OH; Y je H, halogen ali NH2;
    Z je izbran iz skupine, ki sestoji iz H, halogena, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NR2, CN
    C(O)NH2, COOH, COOR, CH2NH2, C(=NOH)NH2 in C(=NH)NH2, kjer je R alkil, alkenil, alkinil ali aralkil;
    R2 in R3 sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz H, F in OH;
    R4 je izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R4 opcijsko vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino;
    R5 je OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR')2 ali P(O)(OR')2, pri čemer je R1 maskirajoča skupina; in
    R5, je izbran iz skupine, ki sestoji iz alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R5, vsaj dva atoma ogljika in ima opcijsko vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino.
  2. 2. Analog nukleozida iz zahtevka 1, pri čemer je Z CN, C(O)NH2 ali C(=NH)NH2 in pri čemer ima R5. vsaj dva atoma ogljika in je izbran iz skupine, ki sestoji iz alkila, alkenila, alkinila in aralkila.
  3. 3. Analog nukleozida iz zahtevka 1, ki ima strukturo
    Rj R2
    -26-26v čemer je Z CN, C(O)NH2, C(=NH)NH2 ali C(=NOH)NH2; in
    R4 in R5. sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer R4 in R5, neodvisno in opcijsko vsebujeta vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino;
    s pridržkom, da R4 in R5. nista hkrati vodik.
  4. 4. Uporaba spojine s formulo II pri izdelavi zdravila za spreminjanje sekrecije citokina iz celice, ki obsega:
    zagotavljanje spojine po formuli (II); in v čemer je A O, S ali CH2; X je H, NH2 ali OH; Y je H, halogen ali NH2;
    Z je izbran iz skupine, ki sestoji iz H, halogena, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NR2, CN, C(O)NH2, COOH, COOR, CH2NH2, C(=NOH)NH2 in C(=NH)NH2, kjer je R alkil, afkenil, alkinil ali aralkil;
    R2 in R3 sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz H, F in OH;
    R4 in R5. sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila in pri čemer R4 in R5. neodvisno in opcijsko vsebujeta vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino;
    R5 je H, OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR')2 ali P(O)(OR')2, pri čemer je R' maskirajoča skupina; in
    -27-2Ίdajanje spojine celici pri koncentraciji, ki učinkuje, da se spremeni sekrecija citokina.
  5. 5. Uporaba iz zahtevka 4, pri čemer je citokin citokin tipa 1.
  6. 6. Uporaba iz zahtevka 5, pri čemer je citokin tipa 1 IFNy.
  7. 7. Uporaba iz zahtevka 4, pri čemer je citokin citokin tipa 2.
  8. 8. Uporaba iz zahtevka 7, pri čemer je citokin tipa 2 IL-4.
  9. 9. Uporaba iz zahtevka 4, pri čemer je celica limfocit.
  10. 10. Uporaba iz zahtevka 4, pri čemer je celica rakava celica.
  11. 11. Uporaba iz zahtevka 10, pri čemer je rakava celica rakava celica prostate.
  12. 12. Uporaba spojine s formulo lil pri izdelavi zdravila za spreminjanje sekrecije citokina iz celice, ki obsega:
    zagotavljanje spojine po formuli (lil) (NI)
    HO OH v čemer je Z CN, C(O)NH2, C(=NH)NH2, C(=NNH2)NH2 ali -C(=NOH)NH2;
    v čemer je R5 H, OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR')2 ali P(O)(OR')2, pri čemer je R' maskirajoča skupina; in dajanje spojine celici pri koncentraciji, ki učinkuje, da se spremeni sekrecija citokina.
    -28-2813. Uporaba spojine s formulo IV pri izdelavi zdravila za zmanjšanje rasti hiperproliferativne celice, ki obsega:
    zagotavljanje spojine po formuli (IV);
    v čemer je A O, S ali CH2; X je H, NH2 ali OH; Y je H, halogen ali NH2;
    Z je izbran iz skupine, ki sestoji iz H, halogena, R, OH, OR, SH, SR, NH2, NHR, NR2, CN, C(O)NH2, COOH, COOR, CH2NH2, C(=NOH)NH2 in C(=NH)NH2, kjer je R alkil, alkenil, alkinil ali aralkil;
    R2 in R3 sta neodvisno izbrana iz skupine, ki sestoji iz H, F in OH;
    R4 je izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer R4 opcijsko vsebuje vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino;
    R5, je izbran iz skupine, ki sestoji iz vodika, alkila, alkenila, alkinila in aralkila, pri čemer ima R5i vsaj dva atoma ogljika in opcijsko vsebuje vsaj enega od heteroatomov in funkcionalno skupino;
    R5 je H, OH, OP(O)(OH)2, P(O)(OH)2, OP(O)(OR’)2 ali P(O)(OR')2, pri čemer je R’ maskirajoča skupina, s pridržkom, da R4 in R5, nista hkrati vodik; in dajanje spojine hiperproliferativni celici pri koncentraciji, ki učinkuje, da se zmanjša rast hiperproliferativne celice.
  13. 14. Uporaba iz zahtevka 13, pri čemer je hiperproliferativna celica rakava celica.
    -29-2915. Uporaba iz zahtevka 14, pri čemer je rakava celica rakava celica prostate.
  14. 16. Uporaba iz zahtevka 13, pri čemer zmanjšanje rasti obsega zmanjšanje sinteze DNA.
  15. 17. Uporaba spojine po zahtevku 1 pri izdelavi zdravila za zmanjšanje sproščanja rastnega faktorja iz celice, ki obsega:
    zagotavljanje spojine po zahtevku 1; in dajanje celici spojine pri koncentraciji, ki učinkuje, da se zmanjša sproščanje rastnega faktorja.
  16. 18. Uporaba iz zahtevka 17, pri čemer je rastni faktor VEGF.
  17. 19. Uporaba iz zahtevka 17, pri čemer je celica rakava celica.
  18. 20. Uporaba iz zahtevka 19, pri čemer je rakava celica rakava celica prostate.
SI200020035A 1999-08-27 2000-08-17 Analogi pirolo/2,3-d/pirimidinskih nukleozidov SI20819A (sl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US15123399P 1999-08-27 1999-08-27
PCT/US2000/022674 WO2001027114A1 (en) 1999-08-27 2000-08-17 PYRROLO[2,3-d]PYRIMIDINE NUCLEOSIDE ANALOGS

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SI20819A true SI20819A (sl) 2002-08-31

Family

ID=22537871

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SI200020035A SI20819A (sl) 1999-08-27 2000-08-17 Analogi pirolo/2,3-d/pirimidinskih nukleozidov

Country Status (18)

Country Link
EP (1) EP1212326A4 (sl)
JP (1) JP2003511454A (sl)
KR (1) KR20020092904A (sl)
CN (1) CN1384834A (sl)
AU (1) AU769578B2 (sl)
BR (1) BR0013642A (sl)
CA (1) CA2381297A1 (sl)
HR (1) HRP20020163A2 (sl)
HU (1) HUP0301875A2 (sl)
IL (1) IL147908A0 (sl)
MX (1) MXPA02001753A (sl)
NO (1) NO20020931D0 (sl)
PL (1) PL354094A1 (sl)
RU (1) RU2002103501A (sl)
SI (1) SI20819A (sl)
SK (1) SK1772002A3 (sl)
WO (1) WO2001027114A1 (sl)
ZA (1) ZA200201567B (sl)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7638496B2 (en) 2000-02-15 2009-12-29 Valeant Pharmaceuticals North America Nucleoside analogs with carboxamidine modified monocyclic base
US6455508B1 (en) * 2000-02-15 2002-09-24 Kanda S. Ramasamy Methods for treating diseases with tirazole and pyrrolo-pyrimidine ribofuranosyl nucleosides
JP2003183283A (ja) * 2001-12-18 2003-07-03 Takeda Chem Ind Ltd 縮合インドール化合物、その製造法および用途
US20050182252A1 (en) 2004-02-13 2005-08-18 Reddy K. R. Novel 2'-C-methyl nucleoside derivatives
CN101851241B (zh) * 2010-07-02 2012-05-23 西安交通大学 一种抗肿瘤化合物及其制备方法和其用途
AU2011305655B2 (en) 2010-09-22 2015-11-05 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleotide analogs
CN102286048A (zh) * 2011-06-24 2011-12-21 吉林大学 4-氨基-6-(3-(3-溴苯基)苯基)-5-氰基-7-(β-L-呋喃木糖)吡咯并[2, 3-d]嘧啶、同类衍生物及用于制备抗肿瘤药物
EP2794630A4 (en) 2011-12-22 2015-04-01 Alios Biopharma Inc SUBSTITUTED PHOSPHORTHIOAT NUCLEOTIDE ANALOGUE
AP2014007796A0 (en) 2011-12-22 2014-07-31 Alios Biopharma Inc Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9441007B2 (en) 2012-03-21 2016-09-13 Alios Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
WO2013142124A1 (en) 2012-03-21 2013-09-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Solid forms of a thiophosphoramidate nucleotide prodrug
USRE48171E1 (en) 2012-03-21 2020-08-25 Janssen Biopharma, Inc. Substituted nucleosides, nucleotides and analogs thereof
US9012427B2 (en) 2012-03-22 2015-04-21 Alios Biopharma, Inc. Pharmaceutical combinations comprising a thionucleotide analog
AU2015217221A1 (en) 2014-02-13 2016-08-11 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Prodrug compounds and their uses
CN106687118A (zh) 2014-07-02 2017-05-17 配体药物公司 前药化合物及其用途
AR104326A1 (es) 2015-05-04 2017-07-12 Lilly Co Eli Compuestos nucleósidos 5-sustituidos
WO2017053216A2 (en) * 2015-09-23 2017-03-30 Merck Sharp & Dohme Corp. 4'-substituted nucleoside reverse transcriptase inhibitors and preparations thereof
EP3737676B1 (en) 2018-01-09 2024-03-06 Ligand Pharmaceuticals, Inc. Acetal compounds and therapeutic uses thereof
EP4306532A3 (en) * 2018-05-15 2024-04-10 Illumina, Inc. Chemical cleavage and deprotection
MA55556A (fr) 2019-04-02 2022-02-09 Aligos Therapeutics Inc Composés ciblant prmt5
KR102639275B1 (ko) * 2021-06-08 2024-02-21 퓨쳐메디신 주식회사 다중 표적 인산화효소 저해 활성을 갖는 뉴클레오사이드 유도체 및 이를 포함하는 암의 예방 및 치료용 약학적 조성물

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3988338A (en) * 1974-04-24 1976-10-26 Wisconsin Alumni Research Foundation 4-Substituted amino-2-substituted thio-pyrrolo-[2,3-d]pyrimidine derivatives
US4892865A (en) * 1987-12-01 1990-01-09 The Regents Of The University Of Michigan Pyrrolo[2,3-d]pyrimidine nucleosides as antiviral agents
US5674998A (en) * 1989-09-15 1997-10-07 Gensia Inc. C-4' modified adenosine kinase inhibitors
WO1994018215A1 (en) * 1993-02-03 1994-08-18 Gensia, Inc. Adenosine kinase inhibitors comprising lyxofuranosyl derivatives
US5665721A (en) * 1995-06-07 1997-09-09 Abbott Laboratories Heterocyclic substituted cyclopentane compounds
CN1233254A (zh) * 1996-10-16 1999-10-27 Icn药品公司 嘌呤l－核苷、其类似物及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
KR20020092904A (ko) 2002-12-12
HRP20020163A2 (en) 2004-02-29
BR0013642A (pt) 2002-05-07
IL147908A0 (en) 2002-08-14
CN1384834A (zh) 2002-12-11
RU2002103501A (ru) 2003-09-10
ZA200201567B (en) 2003-07-30
JP2003511454A (ja) 2003-03-25
CA2381297A1 (en) 2001-04-19
NO20020931L (no) 2002-02-26
SK1772002A3 (en) 2002-10-08
PL354094A1 (en) 2003-12-29
EP1212326A1 (en) 2002-06-12
AU769578B2 (en) 2004-01-29
AU7061800A (en) 2001-04-23
NO20020931D0 (no) 2002-02-26
WO2001027114A1 (en) 2001-04-19
MXPA02001753A (es) 2002-10-23
HUP0301875A2 (hu) 2003-09-29
EP1212326A4 (en) 2003-08-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SI20819A (sl) Analogi pirolo/2,3-d/pirimidinskih nukleozidov
Tolman et al. Pyrrolopyrimidine nucleosides. III. Total synthesis of toyocamycin, sangivamycin, tubercidin, and related derivatives
Cottam et al. New adenosine kinase inhibitors with oral antiinflammatory activity: synthesis and biological evaluation
KR20030032944A (ko) 피리도[2,3-ｄ]피리미딘 및 피리미도[4,5-ｄ]피리미딘뉴클레오시드
CA2102782C (en) 2-fluoro-2-substituted adeninyl arabinosides as anti-cancer agents
JP3160288B2 (ja) プリン ヌクレオシド類
AU2011336272A1 (en) 7-deazapurine modulators of histone methyltransferase, and methods of use thereof
SI20024A (sl) Purinovi L-nukleozidi, analogi in uporaba od teh
JP2004529979A (ja) ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジンヌクレオシド類似体
JPH0153880B2 (sl)
Skoog et al. Anticytokinin activity of substituted pyrrolo [2, 3-d] pyrimidines
JP2002506868A (ja) 癌治療において用いるためのグラニュラチミド誘導体
WO2003061385A1 (en) Tricyclic nucleoside library compounds, synthesis, and use as antiviral agents
JP2954971B2 (ja) 選択的アデノシン受容体剤
WO1996004906A1 (en) Compounds for the treatment of restenosis
Anderson et al. Pyridopyrimidines. 7. Ribonucleosides structurally related to the antitumor antibiotic sangivamycin
Smith et al. Biochemical and biological studies with tubercidin (7-deaza-adenosine), 7-deazainosine and certain nucleotide derivatives of tubercidin
Bussolari et al. Synthesis and biological evaluation of N4-substituted imidazo-and v-triazolo [4, 5-d] pyridazine nucleosides
Baker et al. An evaluation of certain chain-extended analogs of 9-. beta.-D-arabinofuranosyladenine for antiviral and cardiovascular activity
JP5184351B2 (ja) ６−チオグアノシン三リン酸の類縁化合物、医療分野におけるその使用、及びその調製方法に対する改良
EP1907407A1 (en) Improvements to analogous compounds of 6-thioguanosine triphosphate, their use in medical fields and processes for their preparation
Andy Approach for identification of binding proteins of calcium mobilizing second messengers: NAADP and cADPR
Hanna+ et al. 6-Methyl-5-azacytidine-synthesis, conformational properties and biological activity. a comparison of molecular conformation with 5-azacytidine
Borcherding et al. Cis (IS, 3R)-1-(9-Adenyl)-3-Hydroxycyclopentane Inhibits the Respiratory Burst from Polymorphonuclear Leukocytes and Has In Vivo Efficacy in an Acute and Chronic Model of Inflammation
Girgis et al. 9‐Deazapurine nucleosides. The synthesis of certain N‐5‐β‐d‐ribofuranosylpyrrolo [3, 2‐d] pyrimidines

Legal Events

Date Code Title Description
IF Valid on the event date
KO00 Lapse of patent

Effective date: 20050602