SE460930B - Immunologiskt foerfarande foer bestaemning av en substans daer en av reaktionspartnerna aer bunden till en vattenoloeslig baerare - Google Patents
Immunologiskt foerfarande foer bestaemning av en substans daer en av reaktionspartnerna aer bunden till en vattenoloeslig baerareInfo
- Publication number
- SE460930B SE460930B SE8102558A SE8102558A SE460930B SE 460930 B SE460930 B SE 460930B SE 8102558 A SE8102558 A SE 8102558A SE 8102558 A SE8102558 A SE 8102558A SE 460930 B SE460930 B SE 460930B
- Authority
- SE
- Sweden
- Prior art keywords
- cea
- immunologically active
- substance
- enzyme
- bound
- Prior art date
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/74—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving hormones or other non-cytokine intercellular protein regulatory factors such as growth factors, including receptors to hormones and growth factors
- G01N33/76—Human chorionic gonadotropin including luteinising hormone, follicle stimulating hormone, thyroid stimulating hormone or their receptors
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
2 4 6 Û 9 3 ÛSom exempel på testsubstanser kan nämnas alla enskilda beståndsdelar i 10 15 20 25 30 35 fysiologiska vätskor, cell- eller vävnadsextrakt, för vilka immunologiska reak- tionspartner finns eller kan bildas och som har tvâ eller flera immunologiskt aktiva ställen. Därtill hör peptider, proteiner, lipoproteiner, giykoproteiner, steriner, steroider, lipoider, nukleinsyror, enzymer, hormoner, polysackarider, alkaloider. Föredragna immunologiskt aktiva substanser är de naturliga anti- generna såsom hormoner, enzymer, organspecifika antigener, bindvävskomponen- ter, blodcellantigener, plasmaproteiner, patologiska globuliner. Särskilt före- dragna substanser är karcinoembryonalt antigen (CEA) liksom humant choriongo- nadotropin (HCG). vid metoden enligt uppfinningen tjänstgör den immunologiskt aktiva reaktionspartner, som är försedd med ett enzym, som indikator på den immuno- logiska reaktionen. Föredragna enzymer är alkaliskt fosfatas, malat-dehydroge- nas, glukos-s-fosfat-dehydrogenas, glukosoxidas, glukoamylas, galaktosidas och acetylkolinesteras. En särskilt föredragen enzymmarkör är peroxidas från pepparrot.
Enzymet som indikator för den immunologiska reaktionen mäts i den flytande, dock företrädesvis i den fasta fasen enligt kända metoder och utgör ett mått på mängden substans som skall bestämmas. Vid peroxidas från pepparrot som markör mäts enzymmängden företrädesvis på grundval av den förhanden- varande katalytiska aktiviteten, vilken bestäms med hjälp av HZOZ och o-fenylendiamin som redoxindikator. Därvid mäts färgintensiteten hos den oxiderade redoxindikatorn fotometriskt efter 30 minuters katalytisk reaktion.
Den andra immunologiskt aktiva reaktionspartnern tjänar till separation av den substans som skall bestämmas ur analysprovet. För detta separationssteg kan den andra immunologiskt aktiva reaktionspartnern från början vara bunden till en vattenolöslig bärare eller bindas till en motsvarande bärare under eller efter den immunologiska reaktionen.
Lämpliga som vattenolösliga bärare för den andra immunologiskt aktiva reaktionspartnern är: organiska och oorganiska polymerer (amylas, dextran, nativ eller modifierad cellulosa, polyakrylamid, agaros, magnetit, poröst glaspulver, polyvinylidenfluorid (Kynar, framställd av Penn Salt Chemical Corporation, Philadelphia, USA) och latex), innerväggen på testkärl (provrör, titrerplattor eller kyvetter av glas eller syntetmaterial) liksom ytan på fasta kroppar (glas- och syntetmaterialstavar, stavar med ändförtjockriing, stavar med ändvingar eller -lameller). Särskilt lämpliga bärare för metoden enligt uppfinningen är glas- och syntetmaterialkulor.
Den andra immunologiskt aktiva reaktionspartriern kan vara fysikaliskt (adsorptivt) eller kemiskt bunden till den vattenolösiiga bäraren eller bindas med ._ ...e ...___...-....._........~,....,. . l0 15 20 25 30 35' 3 hjälp av en ytterligare reaktionspartner, som i sin tur är bunden tifi ênqaärgrš, under eller efter reaktionen.
Väsentligt för metoden enligt uppfinningen är att den substans som skall bestämmas har minst tvâ immunologislrt aktiva ställen (epitoper), som kan kännas igen och bringas till reaktion av de bada immunologiskt aktiva reaktionspart- nerna, den till en bärare bundna och den med ett enzym försedda reaktionspart- nern. Som immunologiskt aktiva reaktionspartner utnyttjas tva olika monoklona- la antikroppar eller en monoklonal antikropp och en antikropp från en annan djurart, varvid de båda kombinationerna reagerar med den substans som skall bestämmas, men som vardera är riktade mot olika immunologiskt aktiva ställen.
För bestämning av antigener är kombinationen av antikroppar av olika kloner eller av monoklonala antikroppar och antikroppar från en annan djurart särskilt lämplig.
För den immunologiska reaktionen kan provet användas med den substans, som skall bestämmas, antingen direkt eller förutspätt eller förbe- handlat på något lämpligt sätt. För förbehandling kan den substans som skall bestämmas isoleras, anrikas eller befrias från störande beståndsdelar.
Enligt förfarandet enligt uppfinningen bringas den substans som skall bestämmas samtidigt till reaktion med den enzymmärkta och den bärarbundna immunologiskt aktiva reaktionsparmern. Ordningsföljden på reagenstillsatsen beror pà karaktären på det valda bärarsystemet. När man arbetar med en sensibiliserad plastkula sammanförs först den erizymmärkta reaktíonsparmem med den substans som skall bestämmas i nagot lämpligt provrör, och därefter tillsätts den med den andra reaktionspartriern sensibiliserade kulan.
Den immunologiska reaktionen genomförs i nagot lämpligt buffertsys- tem för att hälla ett optimalt pH-värde, som kan ligga mellan ß och 9.
Föredragna buffertar är exempelvis acetatbuffert, citratbuffert, fosfatbuffert, tris-buffert, trietanolaminbuffert, boratbuffert eller glycinbuffert. Man kan också använda buffertblandningar.
Den immunologiska reaktionen sker företrädesvis vid en temperatur mellan 0 och 55°C. Normalt ökar den immunologiska reaktionshastigheten med högre temperatur, varvid jämvikten uppnås snabbare under i övrigt lika testbetingelser. lnkubationen av den substans, som skall bestämmas, med den enzym- märkta reaktionspartnern och den bärarbundna reaktionspartnern kan ske tills man uppnår jämvikt. Den immunologiska reaktionen kan dock också stoppas vid en tidigare tidpunkt genom att efter en bestämd inkubationstid de fasta och flytande faserna separeras och graden av enzymmärkning bestäms antingen i den flytande elleri den fasta fasen. 460 930 ' 4 10 15 20 25 30 35' Vid den immunologiska reaktionen kan man vidta åtgärder för stabilise- ring av den immunologiska aktiviteten hos reaktionspartnerna och den substans som skall bestämmas liksom av enzymet. Vidare kan man till inkubationsiös- ningen tillsätta beståndsdelar, såsom proteiner och detergenter, för att utesluta ospecifika reaktioner, för att minska hämmande påverkan eller för aktivering.
Den nya metoden enligt föreliggande uppfinning är utomordentligt känslig och utmärks av sin enkelheti handhavandet.
Uppfinningen illustreras i de efterföljande exemplen.
Exemæi i Kvantitativ bestämning av CEA i patientplasma med en monoklonal CEA-anti- kropp och en sedvanlig CEA-antikropïgtl l erforderligt antal provrör ( 10 x 75 mm) pipetteras i vart och ett 0,2 ml testlösning (0,2 moi/l NaH2P04/Na2HPO4, pH 6,5 med 2 g/l oxserumalbumin, 2096 normalt getserum och 0,2 pg/mi get-anti-CEA-peroxidas-konjugat), 0,050 ml av det patientplasma som skall analyseras respektive GEA-standarder (0 ng/ml CEA, 2,5 ng/mi csA, io ng/mi GEA och zo ng/mi cEA) och cars-kontrollsam- met (5,0 ng/ml CEA i 1,0 ng/ml) tillblandas, en med monoklonalt mus-anti-CEA- sensibiliserad polystyrenkula* (ß = 6,5 mm) tillsätts och inkuberas i 16 timmar vid 37°C. Därefter tvättas polystyrenkuian tre gånger med vardera 2-5 ml dest. vatten, överförs till vardera 0,5 ml substratbuffert för peroxidasaktivitets- benämningen (0,1 moi/l kaliumcitratbuffert av pH 5,0 med 6 mmol/l HZOZ och 20 mmol/l o-fenylendiamin) och inkuberas under 30 minuter vid rumstemperatur (22°C). För att stoppa den peroxidatiska aktiviteten liksom för att intensifiera färgintensiteten tillblandas 2,0 ml lN HCi, odi man mäter inom 30 minuter extinktionen vid våglängden 092 nm fotometriskt. I Tabell i anges värdena för en CEA-bestämning och jämförs med de värden, som erhölls med Radioimmunoassay från ROCHE.
*I Framställningen av monoklonalt mus-anti-CEA sker analogt med den i Journal of lmmunologicai Methods, 32 (1980) 297-304, beskrivna metoden, varvid som utgàngscellinje för fusionen myelomlinjen Sp 2/0l-AG används, vilken deponerats vid ATCC under nr. CRL 8006. Fusionen sker med mjältceller från möss, som immuniserats med CEA. immuniseringen av mössen utfördes analogt med Tabell I i nämnda publikation, varvid de första båda immuniseringarna skedde med vardera 50 pg CEA, lmmuniseringarna 3 och i; utelämnades, immuniseringen 5 utfördes med 50 pg CEA och immuniseringarna 6-8 utfördes med vardera 200 pg CEA.
Tabell I 460 930 Testmaterial ^E492 nm/RT/30 min.
CEA-Standard 0 ng/ml CEA 2,5 ng/ml CEA 10,0 ng/ml CEA 20,0 ng/ml CEA 0,103 0,330 0,978 1,850 CEÅ- kontrollserum 5,0 ng/ml CBA 0,540 Patientglasma Nr. 7212 Nr. 7188 Nr. 7220 Nr. 7218 Nr. 7234 Nr. 7249 Nr. 7203 Nr. 7223 Nr. 7247 Nr. 7258 Nr. 7215 Nr. 7219 Nr. 8180 Nr. 7248 Nr. 7262 Nr. 7201 w ~ ~ à ß h) W N N N r-l I-l N O ~ _ _ \O Gi H O k) à UI N N N 0'\ ~ ~ ROCHE-RIA-Test ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml Föríarandet enligt uggf inningen 1,2 ng/ml 1,0 ng/ml 1,4 ng/ml 1,3 ng/ml 2,7 ng/ml 2,0 ng/ml 2,0 ng/ml 3,3 ng/ml 2 ,8 ng/ml 4,3 ng/ml 5,5 ng/ml 5,9 ng/ml 8,5 ng/ml 10,7 ng/ml 14,3 ng/ml 15,3 ng/ml Värden under 2,5 ng/m! CEA ligger i normalområdet, medan värden över 2,5 nglml ligger i det patologiska omrâdet. 460 936- lO 15 20 25 a s Exempel 2 Kvantitativ bestämning av CEA i patientplasma med monoklonala GEA-anti- kgpar från tvâ olika kloner I erforderligt antal provrör (l0 x 75 mm) pipetteras vardera 0,2 ml testlösning (0,2 mol/l NaH2PO4/Na2HPOq, pH 6,5 med 2 g/l oxserumalbumin, 2096 normalt getserum och 0,15 tig/ml monoklonalt mus-anti-CEA-peroxidas- konjugat* ), 0,050 ml av det patientplasma som skall analyseras respektive av GEA-standard (O ng/ml CEA, 2,5 ng/ml CEA, 10 ng/ml CEA och 20 ng/ml CEA), och CEA-kontrollserumet (5,0 ng/ml CEA i 1,0 ng/ml) tillblandas, en med monoklonalt mus-anti-CEA sensíbiliserad x polystyrenkula (0 = 6,5 mm) tillsätts och man inkuberar i l6 timmar vid 37°C. Därefter tvättas polystyrenkulorna tre gånger med vardera 2-5 ml dest. vatten, överförs till vardera 0,5 ml substratbuffert för peroxidasaktivitetsbestämningen (0,1 mol/l kaliumcitrat- buffert av pH 5,0 med 6 mmol/l H202 och 20 mmol/l o-fenylendiamin) och inkuberas under 30 minuter vid rumstemperatur (22°C). För att stoppa den peroxidatiska aktiviteten liksom för att intensifiera färgintensiteten tillblandas 2,0 ml lN HCl och inom loppet av 30 minuter mäts extinktionen vid våglängden 492 nm fotometriskt. l Tabell lll är värdena för en GEA-bestämning angivna och jämförs med värden erhållna med Radioimmunoassay från ROCHE.
*Framställningen av monoklonalt mus-anti-CEA sker analogt med den i Journal of Immunological Methods, 32 (1980) 297-300, beskrivna metoden, varvid som utgångscellirlje för fusionen används myelomlinjen Sp 2/0l-Ag, som deponerats vid ATCC under nr. CRL 8006. Fusionen sker med mjältcelier från möss, som immuniserats med CEA. Musimmuniseringen skedde analogt med Tabell l i den angivna publikationen, varvid de första båda immuniseringarna utfördes med vardera 50 ug CEA, immuniseringarna 3 och b utelämnades, immunisering 5 utfördes med 50 ug CEA och immuniseringarna 6-8 med vardera 200 ug CEA. Man använder tvâ olika, lämpliga monoklonala antikroppar, som är riktade mot olika epitoper hos CEA-antigenet. 7 Tabell II 460 930 Testmaterial A 5492 nm/nr/ao CBA~Standard 0 ng/ml CEA 2,5 ng/ml CEA 10,0 ng/ml CEA 20,0 ng/ml CEA 0,390 o,44o 0,620 o,aeo CEA-kontrollserum 5,0 ng/ml CEA 0,510 Paflengaflna N;_ 7220 N;_ 7234 Nr, 7223 Nr_ 7247 Nr, 7258 Nr, 7215 Nr_ 7219 Nr. 8180 Nr. 7248 Nr. 7262 Nr. 7201 ROCHE-RIA-Test 1,2 ng/ml 2,5 ng/ml 3,0 ng/ml 3,1 ng/ml 4,6 ng/ml 4,9 ng/ml 5,0 ng/ml _8,6 ng/ml 11,2 ng/ml 14,2 ng/ml 15,6 ng/ml Förfarandet enligt uggfinningen o,e 3,0 3,5 3,2 4,4 s,o 5,4 8,6 11,0 14.0 16,0 ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml ng/ml Värden under 2,5 ng/ ml CEA ligger i normalomrâdet, medan värden över 2,5 ng/ml ligger i det patologiska området. 460 936 10 15 20 25 8 Exempel 3 Kvantitativ bestämning av HCG i serum med monoklonala HCG-antikroppar från tvâ olika kloner l erforderligt antal provrör (10 x 75 mm) pipetteras vardera 0,2 ml testlösning (0,1 moi/l NaHzPOalNazHPOk, pH 7,0 med 2 g/l oxserumalbumin och 1,0 gig/ml monoklonalt mus-anti-HCG-peroxidas-konjugatx), 0,050 ml av det patientplasma som skall analyseras respektive HCG-standarder (0, 25, 50, 100 och 200 miU/ml HCG) tillblandas, vardera en med monoklonalt mus-anti-HCG senszbafisefad ponynyfenkuia* (o = 6,5 mm) means och :nkuberas tex. vid a7°c under tvâ timmar. Därefter tvättas polystyrenkulorna tre gånger med vardera 2-5 mi dest. vatten, överförs till vardera 0,5 ml substratbuffert för aktivitets- bestämning av peroxidasen (0,1 mol/ml kaliumcitratbuffert av pH 5,0 med 6 mmolll 11202 och 20 mmol/l o-fenylendiamin) och inkuberas under 30 minuter vid rumstemperatur (l6-30°C). För att stoppa den peroxidatiska aktiviteten liksom för att intensifiera färgintensiteten tillblandas 1,0 ml 2N HCl och inom 30 minuter mäts extinktionen vid våglängden 1492 nm fotometriskt. Itabellen anges värden för HCG-bestämningar i serum.
*Franiställningen av de monoklonala mus-HCG-antikropparna sker enligt den i Journal of lmmunological Methods, 32 (1980) 297-300 beskrivna metoden. Man använder tvâ olika, lämpliga monoklonala antikroppar, som är riktade mot olika epitoper hos HCG-antigenet.
HCG-bestämningfinumanserum (medelvärde av dubbelbestämningar) 1. Standardkurvor AE 492 nm/30 Mirn/RT.
Tu IU/ml HCG 1) Serum ' 2) Plasma 3) Urin 4) Buffert 0 0.038 0.054 0.158 0.180 25 0.226 - _. ... 50 0.475 0.544 0.557 0.716 100 0.905 0.955 0.970 1.40 200 1.75 1.55 1.90 2.44 HCG-värdena för de nedan angivna exemplen på patientserum avlästes ur standardkurvan l). Standardkurvorna 2), 3) och 4) bestämdes en annan dag med nya HCG-standarder.
D» r" *77e-T7«.»..1e..~.-.-.-...1.4.,.1 9 460 930 2. Patientsera ' 82492/30 Min/RT alu/ml acc Serum uppmätt ur kurva l) Peel 091080 0.041 0 Nr. 2801 0.025 ' 0 Nr. 3881 0.450 47 Nr. 2673 1,13 127 Nr. 1167 2.12 (1=2) 470 Nr. 4891 0.975 (1=so) s'4so Nr. 3240 1.06 (1=2o) 2'28o Nr. 4418 1.475 (1:1000) 1s7'o00 10 15 20 Exemæl 16 För sensibilisering av en tlterplatta pipetteras per hålighet 0,15 ml sensibiliseringslösning (50 mmol/l NaHCO3, pH 8,0-8,3 med 20 mg/l avidin), och plattan får stå i en fuktig kammare vid l8-26°C under 10-214 timmar.
Efter utskakning av sensibiliseringslösningen och tvättning 2-3 gånger med PBS pipetteras 0,2 ml buffert per hålighet, plattan försluts med "själv- häftande folie" och förvaras minst l dag vid 2-8°C i en fuktig kammare.
Omedelbart före utförandet av CEA-enzymimmunoassay utskakas bufferten. l var och en av de för testserien nödvändiga håligheterna i titerplattan pipetteras 0,1 ml anti-CEA-peroxidas-testlösning, till vilken satts 2 ml/l biotiny- lerat anti-CEA från cellinjen C-l9, samt 0,05 ml CEA-standardlösrtingar resp. värmebehandlade (56°C/ 30 min.) serum- eller plasmaprover. Plattan försluts och inkuaefa; under a timma.- vid 37°C (vattenbad). Efter tvättning av plattan 3-5 gånger med PBS - 0,5 ml/l Twee 20 tillsätts 0,15 ml o-fenylendlamin- substratbuffert per hålighet för bestämning av den bundna mängden peroxidas.
Efter en 30 minuters inkubation vid l8-26°C stoppas den enzymatiska reaktionen genom tillblandning av 0,15 ml 0,5 mol/l 112504 - 2 g/l NazSzOs, och färgintensi- teten vid våglängden 492 nm mäts med flerkanalsfotometer.
Exemggl 5 Man arbetar på analogt sätt som i Exempel b, varvid dock titerplattorna är sensibiliserade med biotin och varvid man arbetar med avidinhaltigt monoklonalt anti-GEA.
Claims (9)
1. Immunologiskt förfarande för pàvisande respektive bestämning av en substans med en immunologiskt aktiv reaktionspartner, som är försedd med ett enzym, samt en immunologiskt aktiv reaktionspartner, som är bunden eller binds till en vattenolöslig bärare, genom inkubering av den substans som skall bestämmas med de immunologiskt aktiva reaktionspartnerna, anslutande separa- tion av fast och flytande fas och uppmätning av graden enzymmärkning antingen i den fasta eller i den flytande fasen som mått på mängden substans som skall bestämmas, k ä n n e t e c k n a t av att den immunologiska inkubationen av den substans som skall bestämmas från början sker gemensamt med de immunologlskt aktiva reaktionspartnema och att man som immunologiskt aktiva reaktionspartner använder två olika monoklonala antikroppar eller en monoklonal antikropp och en antikropp från en annan djurart, van/id den reaktionspartner, som är bunden eller binds till den vattenolösliga bäraren, är en monoklonal antikropp.
2. Förfarande enligt patentkravet 1, k ä n n e t e c k n a t av att den substans som skall bestämmas är karcino- embryonalt antigen (CEA).
3. Förfarande enligt patentkravet 2, k ä n n e t e c k n a t av att den immunologiskt aktiva reaktionspartner, som är bunden till en vattenolöslig bärare, är monoklonalt mus-anti-CEA.
4. 14. Föríarande enligt patentkraven 2 och 3, k ä n n e t e c k n a t av att den immunologiskt aktiva reaktionspartner, som är försedd med en märkning, är ett enzymmärkt, annat monoklonalt mus-anti-CEA.
5. Förfarande enligt patentkraven 2 och 3, k ä n n e t e c k n a t av att den immunologiskt aktiva reaktionspartner, som är försedd med en märkning, är ett enzymmärkt get-anti-CEA.
6. Föríarande enligt patentkravet l: eller 5, k ä n n e t e c k n a t av att man använder anti-GEA märkt med peroxidas.
7. Förfarande enligt patentkravet 1, kännetecknat avattantigenetärHCG.
8. Förfarande enligt patentkravet 7, k ä n n e t e c k n a t av att den immunologiskt aktiva reaktionsparmer, som är - ;.:7._., f* ll försedd med en märkning, är ett enzymmärkt monoklonalt mus-anti-Héá. 0 9 3 Û
9. Förfarande eniígt patentkravet 8, k ä n n e t e c k n a t av att man använder mus-anti-HCG märkt med perøxidas.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CH320980A CH642458A5 (en) | 1980-04-25 | 1980-04-25 | Immunological method |
| CH589880A CH651396A5 (en) | 1980-08-04 | 1980-08-04 | Immunological method for detecting and determining carcinoembryonic antigen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SE8102558L SE8102558L (sv) | 1981-10-26 |
| SE460930B true SE460930B (sv) | 1989-12-04 |
Family
ID=25692464
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SE8102558A SE460930B (sv) | 1980-04-25 | 1981-04-22 | Immunologiskt foerfarande foer bestaemning av en substans daer en av reaktionspartnerna aer bunden till en vattenoloeslig baerare |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| AT (1) | AT373398B (sv) |
| AU (1) | AU542563B2 (sv) |
| CA (1) | CA1160566A (sv) |
| DE (1) | DE3115115A1 (sv) |
| DK (1) | DK151399C (sv) |
| FR (1) | FR2481318A1 (sv) |
| GB (1) | GB2074727B (sv) |
| IT (1) | IT1137344B (sv) |
| NL (1) | NL187545B (sv) |
| NO (1) | NO159620C (sv) |
| SE (1) | SE460930B (sv) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6406920B1 (en) | 1980-06-20 | 2002-06-18 | Inverness Medical Switzerland Gmbh | Processes and apparatus for carrying out specific binding assays |
| EP0146654A3 (en) * | 1980-06-20 | 1986-08-20 | Unilever Plc | Processes and apparatus for carrying out specific binding assays |
| JPS57501147A (sv) * | 1980-07-16 | 1982-07-01 | ||
| US4486530A (en) * | 1980-08-04 | 1984-12-04 | Hybritech Incorporated | Immunometric assays using monoclonal antibodies |
| US4879219A (en) * | 1980-09-19 | 1989-11-07 | General Hospital Corporation | Immunoassay utilizing monoclonal high affinity IgM antibodies |
| EP0049898B2 (en) * | 1980-10-15 | 1991-08-14 | Takeda Chemical Industries, Ltd. | Method for immunochemical assay and kit therefor |
| US4837167A (en) * | 1981-01-30 | 1989-06-06 | Centocor, Inc. | Immunoassay for multi-determinant antigens using high-affinity |
| GB2118300B (en) * | 1982-02-12 | 1985-06-19 | Corning Glass Works | Method of immunoassay |
| DK76983A (da) * | 1982-03-05 | 1983-09-06 | Takeda Chemical Industries Ltd | Fremgangsmaade og reagens til immunkemisk bestemmelse af humant choriogonadotropin |
| DE3225027A1 (de) * | 1982-07-05 | 1984-01-05 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Immunchemisches messverfahren |
| IL73938A (en) * | 1984-01-02 | 1989-09-28 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process and reagent for the determination of polyvalent antigen by incubation with three different receptors |
| US4690890A (en) * | 1984-04-04 | 1987-09-01 | Cetus Corporation | Process for simultaneously detecting multiple antigens using dual sandwich immunometric assay |
| US5011771A (en) * | 1984-04-12 | 1991-04-30 | The General Hospital Corporation | Multiepitopic immunometric assay |
| US4935339A (en) * | 1985-05-07 | 1990-06-19 | Nichols Institute Diagnostics | Delayed solid phase immunologic assay |
| US5770459A (en) * | 1986-04-30 | 1998-06-23 | Igen International, Inc. | Methods and apparatus for improved luminescence assays using particle concentration, electrochemical generation of chemiluminescence detection |
| DE3638767A1 (de) * | 1986-11-13 | 1988-05-26 | Behringwerke Ag | Laktoferrin enthaltendes inkubationsmedium fuer festphasenimmunometrisches verfahren und seine verwendung |
| US5935779A (en) * | 1988-11-03 | 1999-08-10 | Igen International Inc. | Methods for improved particle electrochemiluminescence assay |
| US6881589B1 (en) | 1987-04-30 | 2005-04-19 | Bioveris Corporation | Electrochemiluminescent localizable complexes for assay compositions |
| DE3851050T2 (de) * | 1987-08-25 | 1995-03-16 | Fuji Yakuhin Kogyo Kk | Diagnostische methode für chronischen gelenkrheumatismus. |
| US5175084A (en) * | 1987-10-30 | 1992-12-29 | Fuji Yakuhin Kogyo Kabushiki Kaisha | Method for the diagnosis of hepatic carcinoma |
| DE3807440A1 (de) * | 1988-03-07 | 1989-09-21 | Progen Biotechnik Gmbh | Verfahren zum immunologischen nachweis von substanzen sowie eine derartige zusammensetzung und ein testkit |
| US5779976A (en) * | 1988-11-03 | 1998-07-14 | Igen International, Inc. | Apparatus for improved luminescence assays |
| US5705402A (en) * | 1988-11-03 | 1998-01-06 | Igen International, Inc. | Method and apparatus for magnetic microparticulate based luminescence assay including plurality of magnets |
| US5962218A (en) * | 1988-11-03 | 1999-10-05 | Igen International Inc. | Methods and apparatus for improved luminescence assays |
| US5798083A (en) * | 1988-11-03 | 1998-08-25 | Igen International, Inc. | Apparatus for improved luminescence assays using particle concentration and chemiluminescence detection |
| US5746974A (en) * | 1988-11-03 | 1998-05-05 | Igen International, Inc. | Apparatus for improved luminescence assays using particle concentration, electrochemical generation of chemiluminescence and chemiluminescence detection |
| AU624200B2 (en) * | 1988-12-12 | 1992-06-04 | Csl Limited | Solid phase immunoassay with lyophilised conjugate |
| US5176999A (en) * | 1989-12-07 | 1993-01-05 | Eastman Kodak Company | Buffered wash composition, insolubilizing composition, test kits and method of use |
| ZA92803B (en) | 1991-02-06 | 1992-11-25 | Igen Inc | Method and apparatus for magnetic microparticulate based luminescene asay including plurality of magnets |
| US6201109B1 (en) | 1993-01-13 | 2001-03-13 | Dade Behring Marburg Gmbh | Assay for bone alkaline phosphatase |
| FR2710410B1 (fr) * | 1993-09-20 | 1995-10-20 | Bio Merieux | Procédé et dispositif pour la détermination d'un analyte dans un échantillon . |
| AU705059B2 (en) * | 1994-02-19 | 1999-05-13 | Seikagaku Corporation | Method and measurement kit for assay of normal aggrecan, and method for evaluation of information on the joint |
| US6569634B1 (en) | 1998-09-01 | 2003-05-27 | Taiho Pharmaceutical Co., Ltd. | Method for assaying human thymidylate synthase and assay kit |
| WO2000062073A1 (en) | 1999-04-12 | 2000-10-19 | Sumitomo Chemical Company, Limited | Method for analyzing the amount of intraabdominal adipose tissue |
| CA2609379C (en) | 2005-06-03 | 2016-11-29 | Allen J. Bard | Electrochemistry and electrogenerated chemiluminescence with a single faradaic electrode |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1572220A (en) * | 1976-10-07 | 1980-07-30 | Mochida Pharm Co Ltd | Immunochemical process of measuring physiologically active substances |
| GB1549069A (en) * | 1976-12-10 | 1979-08-01 | Erba Farmitalia | Enzyme linked immunoassay |
| US4244940A (en) * | 1978-09-05 | 1981-01-13 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Single-incubation two-site immunoassay |
| JPH0235944B2 (ja) * | 1980-06-20 | 1990-08-14 | Unilever Nv | Tokuitekiketsugokenteiojitsushisuruhohooyobigaihohoojitsushisurutamenoshikenkitsuto |
-
1981
- 1981-03-23 CA CA000373607A patent/CA1160566A/en not_active Expired
- 1981-04-06 DK DK155881A patent/DK151399C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-04-13 IT IT21122/81A patent/IT1137344B/it active
- 1981-04-14 DE DE19813115115 patent/DE3115115A1/de active Granted
- 1981-04-15 NL NLAANVRAGE8101860,A patent/NL187545B/xx not_active Application Discontinuation
- 1981-04-22 SE SE8102558A patent/SE460930B/sv not_active IP Right Cessation
- 1981-04-23 FR FR8108105A patent/FR2481318A1/fr active Granted
- 1981-04-24 AT AT0186481A patent/AT373398B/de not_active IP Right Cessation
- 1981-04-24 NO NO811407A patent/NO159620C/no not_active IP Right Cessation
- 1981-04-24 AU AU69811/81A patent/AU542563B2/en not_active Expired
- 1981-04-24 GB GB8112730A patent/GB2074727B/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU6981181A (en) | 1981-10-29 |
| DK151399C (da) | 1988-09-05 |
| IT8121122A0 (it) | 1981-04-13 |
| DK151399B (da) | 1987-11-30 |
| GB2074727B (en) | 1983-11-30 |
| SE8102558L (sv) | 1981-10-26 |
| NO811407L (no) | 1981-10-26 |
| NO159620B (no) | 1988-10-10 |
| GB2074727A (en) | 1981-11-04 |
| DE3115115C2 (sv) | 1987-02-12 |
| AT373398B (de) | 1984-01-10 |
| IT1137344B (it) | 1986-09-10 |
| FR2481318B1 (sv) | 1984-10-19 |
| NL187545B (nl) | 1991-06-03 |
| AU542563B2 (en) | 1985-02-28 |
| DK155881A (da) | 1981-10-26 |
| ATA186481A (de) | 1983-05-15 |
| DE3115115A1 (de) | 1982-02-04 |
| FR2481318A1 (fr) | 1981-10-30 |
| CA1160566A (en) | 1984-01-17 |
| NL8101860A (nl) | 1981-11-16 |
| NO159620C (no) | 1989-01-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| SE460930B (sv) | Immunologiskt foerfarande foer bestaemning av en substans daer en av reaktionspartnerna aer bunden till en vattenoloeslig baerare | |
| US4016043A (en) | Enzymatic immunological method for the determination of antigens and antibodies | |
| EP0124050B1 (en) | A method of solid phase immunoassay incorporating a luminescent label | |
| JPH0239747B2 (sv) | ||
| JPH01150856A (ja) | 抗原および抗体の同時免疫定量法 | |
| US4670383A (en) | Immune-chemical measurement process for haptens and proteins | |
| US20090088334A1 (en) | Method of high sensitive immunoassay | |
| EP0062892B1 (en) | Single incubation immunochemical assay for creatin phosphokinase mb | |
| US5792606A (en) | Nucleic acid hybridization based assay for determining a substance of interest | |
| JPH081438B2 (ja) | 酵素免疫測定法 | |
| JPH0772152A (ja) | 特異的バインディングアッセイ方法及び分析要素 | |
| US5437981A (en) | Method for the immunological determination of ligands | |
| USRE32696E (en) | Enzymatic immunological method for determination of antigens and antibodies | |
| EP0303980A2 (en) | Carrier coated with antigen or antibody | |
| EP0125368B1 (en) | A method of immunoassay detection by reaction-rate potentiometry using fluoride ion-selective electrode | |
| JP3889045B2 (ja) | Ｈｉｖを検出するためのペプチド | |
| JPH03170058A (ja) | イムノアッセイ用試薬複合体 | |
| US5783455A (en) | Regenerable solid phase for carrying out specific binding reactions | |
| Clarke | Immunoassays for therapeutic drug monitoring and clinical toxicology | |
| JP2651438B2 (ja) | 酵素標識抗体感作ラテックス及びそれを用いた酵素免疫測定法 | |
| JP2972241B2 (ja) | 全イムノグロブリンクラスの抗原特異的抗体を測定するための１段階イムノアツセイ | |
| EP0529057B1 (en) | Denatured vehicular proteins to improve enzyme linked immunosorbent assays | |
| Bauch et al. | A double antibody sandwich microELISA for measuring human platelet factor 4 | |
| EP0318734A1 (en) | A highly sensitive method to detect bacteria by using antibody against bacterial cells | |
| JPH02205774A (ja) | 免疫測定法および免疫測定試薬 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| NAL | Patent in force |
Ref document number: 8102558-7 Format of ref document f/p: F |
|
| NUG | Patent has lapsed |
Ref document number: 8102558-7 Format of ref document f/p: F |