SE444946B - Peptider, som inhiberar frigorandet av steroider - Google Patents

Description

15 20 25 Sd 35 g1sg 2 'Frigörandet av ett hormon genom framloben av hypofysen fordrar vanligen ett tidigare frigörande av en annan grupp av hormoner som bildas genom hypothulamus. En av hypothulamushor- monernu verkar såsom en faktor som utlöser frigörnndet av dc* gonadotropa hormonerna, speciellt lutciniseringshormon. För _enkelhets skull betecknas hädanefter luteiníseringshormon LH.

Hypothalamushormonet som verkar såsom en frigöringsfaktor för LH betecknas hädanefter LRF, vari RF betecknar "frigöringsfaktor" och L indikerar att hormonet frigör LH. LRF Har lsolerats och identifierats. i ' ' _' '_ i tDet har visat sig att vissa hondäggdjur som ej uppvimn~någon ovulationscykel och som ej uppvisar någon hypofysdefekt eller ovariedefekt börjar utsömha normala mängder av gonadotropinerna LH och FSH (follickelstimulerande hormon) efter administreríngen av LRF. Administreringen av LRF lämpar sig för behandling av sådana fall av infertilitet då funktionsdefekten finns i hypo- thalamus. Ovulation kan induceras i hondäggdjur genom administre- ring av LRF. Dosnivån av LRF som fordras för påverkan av mnflathnæn kan emellertid ibland vara hög. Nyligen redovisade studier har även indikerat att adminístreringen av stora och ofta förekom- mande doser av LRF i själva verket inhiberar gonadal funktion i honráttor genom att hormonnätverket förstöres. Av detta skäl har LRF och analoger av LRF som är mer verksamma än LRF med av- 'seende på främjandet av LH-frigörande undersökts med avseende på potentiell användning såsom kontraceptionsmedel. Den huvud- sakliga olägenheten med användningen av dessa peptider såsom ett potentiellt kontraceptionsmedel är naturligtvis kravet pà _ -stora och ofta förekommande doser. Det vore önskvärt att peptider utvecklas som är antagonister mot endogent LRF och som förhindrar ,utsöndrandet.av LH.

Föreliggande uppfinning avser följaktligen i första hand peptider som inhiberar frigörandet av gonadotropiner i däggdjur, inklusive människor. Speciellt inhiberar sålunda peptiderna en- ligt uppfinningen även frigörandet av steroider genom gonaderna i han- och hondäggdjur, inklusive människor, samt uppvisar en inhiberande effekt på reproduktionsförloppen hos däggdjur, res- pektive människor.

Uppfinningen förklaras närmare i följande beskrivning.

Av det ovan angivna framgår att föreliggande peptider 10 15 20 25 30 35 40 'delen av karboxylgruppen ersatts med en aminogrupp (NH2). '7s122ss-3 3 ínhiberar utsöudrnndet av gonadotropíner från hypofysen i dägg- 'djur, inklusive människor, och/eller inhibernr Erigörandet av steroider från gonaderna, varvid peptíderna verkar sålunda att de inhiberar frigörandet av gonadotropíner.

LRF har kännetecknats såsom en dekapeptid uppvisande föl- jande struktur: p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-NHZ _Peptider utgör föreningar som innehåller två eller flera aminosyror, vari karboxylgruppen i en syra är_bunden till amino- gruppen i den andra syran. Formeln för LRF som angivits ovan överensstämmer med konventionell representation av peptider, l varvid aminogruppen anges till vänster och karboxylgruppen anges till höger. Aminogruppernas läge identifieras genom att amino- grupperna numreras från vänster till höger. l LRF har hydroxi- För- kortningarna för de individuella aminosyragrupperna som använts ovan är konventionella och baserade på aminosvrornas trivialnamn, varvid p-Glu betecknar pyroglutaminsyra, His betecknar histidín, Trp betecknar tryptofan, Ser betecknar serin, Tyr betecknar ty- rosin, Gly betecknar glycin, Leu betecknar leucin, Arg betecknar argínin och Pro betecknar prolin. Förutom glycin uppvisar amino- syrorna i peptíderna enligt uppfinningen L-konfiguration om ej annat anges. _ _ Det är känt att om Gly i 6-ställning av LRF-dekapeptiden ' ersattes med D-aminosyror erhålles ett peptidmaterial uppvisande 'ca 1-30 gånger så hög verkan som LRF med avseende på frigörandetg av luteiniseringshormon och andra gonadotropiner genom hypofysen i däggdjur. Frígöringseffekten erhålles när den substituerade peptiden införes i blodcirkulationen hos däggdjur. 7 Det är också känt att om olika aminosyror får ersätta His (eller om His avlägsnas) i Z-ställning av LRF-dekapeptiden er- hålles peptidmaterial uppvisande en inhiberande effekt på fri- görandet av luteíniseringshormon och andra gonadotropiner genom hypofysen hos däggdjur. Speciellt erhålles olika inhiberingsgra- der med avseende på frigörandet av luteíniseríngshormon när His avlägsnas eller ersättes med Asp, Cyc, D-Ala, des-His, D-Phe och Gly. Man har vidare upptäckt att den inhiberande effekten hos sådana peptíder som är modifierade i 2-ställningen kan ökas avsevärt när D-aminosyra får ersätta Gly i 6-ställningen av deka- peptíderna. Exempelvis är peptiden p-Glu-Trp-Ser-Tyr-D-A1a-Leu- 10 _15 20 ZS 30 7812255-5 -Arg-Pro-Gly-NH2 tre gånger så verksam såsom inhibator med av- seende på frigörandet av gonadotropiner än samma peptíd vari Gly ' är närvarande i 6-ställning i stället för D-Ala.

Peptiderna enligt uppfinningen är höggradigt verksamma 'med avseende på inhiberíng av LH-frigörandet. Dessa peptider har visat sig inhibera ovulation i hondäggdjur när de administre- ras i mycket låga doser vid proöstrus¿ Peptiderna är också mycket effektiva med avseende pâ åstadkommandet av resorption av befruk- tade ägg om de administreras kort efter konceptionQ Peptíderna enligt uppfinningen representeras av följande formel:__ _ _-I Å'i i ' I _ R1-R2-R3-Ser-Tyr-R4-R5-Arg-R6 - _ p vari R1 betecknar D-p-Gln, D-Pro, D-Trp, D-His, D-Arg, D-Leu, formyl-D-Pro,,acetyl-D-Pro, bensoyl-D-Pro eller B-Ala; R2 be- tecknar D-Phe, D-His eller D-Trp; R3 betecknar D-Trp, D-Phe eller D-His; R4 betecknar D-Trp, D-Phe eller D-Tyr, Rs beteck- nar Leu eller Na-Me-Leu och R6 betecknar Pro-Gly-NH2 eller Pro-NH-CHZ-CH3. i ' Föreliggande peptider har framställts medelst fast-fas- teknik. Syntesen genomföres stegvis på klorometylerat harts för sâdana_peptider vari R6 betecknar Pro-NH-CH2-CBS och på benshyd- s rylaminharts för sådana.peptider vari R6 betecknar Pro-Gly-NH2.

Hartset bestod av fina pärlor (20-70 pm i diameter) av ett syn- tetharts som framställts genom sampolymerisation av styren med 1-2 %*dívinv1bensen{ För klorometylerat harts klorometylerades bensenringarna i hartset enligt en Friedel-Crafts reaktion med klorometyleter och tenn(IV)k1orid. Kloret som införes på detta sätt uppvisar en bindning av'reaktiv bensylkloridtyp. Fríedel- Crafts reaktionen fortsättes tills hartset innehåller 0,5-2 mmol klor/g harts. Benshydnflhminhartset framställdes enligt följande schema: _ (steg A.) FRIEDEL-CRAFTS reaktibn: O 0 . .

I' II _ CÖHS-C-Cl+C6H5-harts >AlC13 CÖHS-C-CÖH4-harts (I) CÖHSNOZ ' (Steg B.) LEUKART'S reducerande aminering: 10 15 S 7s122ssës _Q_ II - 0 NH-CH II (I) NH§0-CH, CÖHS- H-CÖH4-harts (II) 1so°c (Steg C1) Hydrolys, neutralísatíon: ' NH2 (Illa 1) 6N HCl/8h CÖHS-dfl-C -harts v21 trietylamin I I följande beskrivning uppräknas de använda reagensen först under användning av deras kemiska namn och deras konven- tionella förkortningar. Därefter sker i vissa fall hänvisning 6"4 till reagenset genom den konventionella förkortningen.

Vid framställning av peptider, vari RÖ betecknar Pro-NH- -CHZ-CH3”förestras trietylammoniumsaltet av NKBOC-skyddat Pro på det klorometylerade hartset genom àterloppskokning i etanol under ca 48 h. Det är också möjligt att använda hartset eller kalinmsalter i dimetyformamid (DNF) eller dimetylsulfoxíd (DNS) vid temperaturer som varierar från 40 till 80°C. Efter avlägs- nande av skyddsgruppen och neutralisering tillsättes N«-Boc- derivatet av nästa aminosyra, nämligen Arg, tillsammans med kopplíngsmedel, som utgöres av dicyklohexylkarbodiimid (DCC).

Sídokedjan av Arg skyddas med tosyl (Tos). Avlägsnandet av skydds- gruppen, neutralisering och tillsats av snccessiva aminosyror genomföres enligt följande schema. l, Schema för koppling av aminosyror vid fast-fassyntes av DfpGln-D-Phe~D-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-NH-CH2-CH5 -på 10 g harts " Steg' Reagens och operationer Blandnings- - ' _ tid min 1 CHZCIZ-tvätt, 80 ml (2 gånger) gZ Metanol-(Me0H) tvätt 30 ml (2 gånger] 3 CH2ClZ-tvätt, 80 ml (3 gånger) 4 50 procent trifluoroättiksyra (TFA) plus 5 procent 1,2 - etaneditiol i CHZCIZ, 70 ml (Z gånger) 10 CH2Cl2-tvätt, 80 ml (2 gånger) 3 6 Trietylamín (Et3N) 12,5 procent i dimetyl- 'formamid_(DMF), 70 ml (2 gånger)' 7 5 l\) 7 Me0H-tvätt, 40 ml (2 gånger) 7812255-sei t,l§Tg-6 p 2 Z 1 Boç-aminosyra C10 mmol) i 30 ml_DMF (1 gång) .plus dicyklohexylkarbodiimid (DCC) (10 mmol) 3- 'Ica cl -tvätt; so m1 (3 gånger) ~ 3 t _ 1 DNF _ so ,1o .neon-tvätt, 40 ml (2 gånger) 3 11 cEt3N 12,5 procent 1 DMP 10 m1 (1 gäng) 3 ' 12 -- MeOH-tvätt, 30 ml (Z gånger) 3 13 CH Cl -tvätt, 80 ml (2 gånger) 3 2 Efter steg 13 uttages en alikvot del för ett nínhydrín~test: om testet är negativt går man tillbaka till steg 1 för koppling av nästa aminosyra; om testet är positivt eller svagt positivt går man tillbaka till stegen 9-13. _ 5 Detta schema användes för koppling av var och en av amino- syrorna i peptiden enligt uppfinningen. N:-Boc-skyddsgrupp an- vändesïför var och en avçde återstående aminosyrorna under hela syntesen. OBz1 användes såsom skyddsgrupp för sidokedjor i Ser g och Tyr. 2,6~diklorobensyl kan användas såsom skyddsgrupp för 10 sidokedjan i Tyr, p-toluensulfonyl (Tos), dinitrofenyl (Dnp) eller Boc kan användas såsom skyddsgrupp för sídokedjan i His. pGlu införas såsom bensyloxikarbonyl LI; skyddad amínosyra..

Detta förfarande användes för framställning av det full- ständig: skyddade peptidhartsec X1-R1-RZ-R3-ser(x2)-Iyæ(x3)- 15 R4-RS-Arg-Pro-O-harts, rarívar och en av skyddsgrupperna utgöres av de nedan angivna. Om så är önskvärt kan den fullständigt skyd- dade peptiden avlägsnas från hartsbäraren genom amínolys med användning av dimetylamin, metylamin, etylamín, n-propylamin, i-propylamin, butylamín, isobutylamin, pentylamin eller fenetyl- amin varvid den fullständigt skyddade alkylamidmellanprodukten ' erhålles. Exempelvis kan klyvning av peptiden från hartset genom- föres genom omröring av hartset över natten i destillerad etyl- amin vid 0°C i ett tryckkärl. Efter avlägsnandet av överskott av etylamin.genom destíllering i kvävgas eller i vakuum avlägsnas 125 hartset uppslammat i metanol från uppslamningen genom filtrering. _Hartset tvättas vidare i följd med DNF, metanol och en blandning gav DNF och metanolr Den utvunna lösningen av avspjälkad, skyddad peptid indunstas till torrhet på en roterande vakuumindunstare vid rumstemperatur Peptiden upptages i en minimal mängd metanol 30 'för upplösning avçæptíden.Lösningen sättes droppvis till ett 50- gångers volymöverskott av torr eter under'omröring. En flockig fällning uppträder som utvinnes genom filtrering eller centri- 10 15 20 25 30 35 7 g7s122ss-3 fugering. Den utvunna fällningen torkas varvid mellanprodukter för framställning av peptider enligt uppfinningen erhålles.

Dessa mellanprodukter kan betecknas med formeln: .1 - V i -R1-R2-R3-se1mx2)-ryrrxsafn4-nsfArg-pro-x4 vari X1 betecknar väte eller en äïaminoskyddsgrupp; X2 betecknar en skyddsgrupp för Ser och utgöres företrädesvis av bensylester (0Bzl), X3 betecknar en skyddsgrupp för Tyr som utgöres av OBzl eller 2,6-diklorobensyl, och X utgöres av dimetylamin, alkylamin med 1-5 kolatomer, fenetylamin, O-CHZ-[hartsbärare7 eller Gly- -0-CH2[hartsbärare7 eller Gly-Nfllhartsbärareå. Kriteriet för ut- väljandet av sidokedjeskyddsgrupper för X -X är att skyddsgruppen måste vara stabil i förhållande till reagenset under de utvalda reaktionsbetingelserna för avlägsnande av dïamínoskyddsgruppen i varje steg i syntesen, att skyddsgruppen ej får avspjälkas un- der kopplíngsbetingelserna och att skyddsgruppen måste kunna av- clägsnas efter iullbordad syntes av önskvärd aminosyrasekvens un- der sådana reaktionsbetingelser som ej ändrar peptídkedjan.

Gruppen -0-CHz¿%artsbärare] eller Gly-Q-CH2-Åhartsbararey i defixxitionerl av' 'X .för mellanprodukterna som användes enligt upp- finningen representerar estergruppen av en' av de många 'funktionella “ grup- perna i polystyrenhartsbäraren. Gruppen Gly-NH-[hartsbärare] i definitionen av X i ovannämnda mellanprodukter representerar amidbindningen för Gly till bensylhydrylaminhartset.

Avlägsnandet av skyddsgrupper från peptiderna samt av- spjälkandet av peptíden från benshydrylaminhartset sker vid 0°C. med fluorvätesyra (HF). Anisol sättes till peptiderxföre behand- ling med HF. Efter avlägsnandet av HF under vakuum behandlas den avspjälkade peptiden,vars skyddsgrupper avlägsnats, med eter, dekanteras, upptages i utspädd ättiksyra och lyofiliseras.

Peptiden renas genom jonbyteskromatografi på en CMC-kolonn följt av fördelningskromatografi med användning av elueríngs- systemet n-butanol, ättiksyra och vatten (4:1:5, volymförhållande).

Fördelningskromatograferingskolonnen är packad med Sephadex G 25.

Framställningen av sådana peptíder vari R5 betecknar Pro-Gly-NH2 på benshydrylaminharts sker enligt följande metod, varvid Na- och sidokedjeskyddsgrupperna under syntesen var de- samma som definierats ovant koppling av en återstod genomfördes under 1-S h i metylenklorid, dimetylformamid (DMF) eller bland- ningar därav med användning av ett 3-5-faldigt överskott av BOC- 10 35 .7ïs1225àig-si i 8 'skyddade aminosyror och dicykloetylkarbodiimid- (DCC) aktiverings- reagens. Den första återstoden bands till benshydrylaminhartset medelst en amidbindning. Kopplingsreaktionen under syntesen över- vakades_genom ett ninhydrintest, såsom beskrives av Kaiser et ai,-Ana1. iBíochemL-sßusvo) 595. Avbiockeringsförfarandet ut- gjordes av en 20-min behandling i TFA innehållande 5 % 1,Z-etan- ditio1'följt av neutralisation med tríetylamin {Et3N) i DMF eller metylenklorid. Flera tvättförlopp med MeOH och CH2Cl2 genomfördes efter varje steg. g - t 7 - Avspjälkningen av peptiden fran hartset och det fullstän- diga avlägsnandet av skyddsgrupper från peptiden sker mycket t lätt vid 0°C med fluorvätesyra (HF). Anísol sattes till hartset .före behandlingen med HF. Efter avlägsnandet av HF behandlades hartset under vakuum med eter, fíltrerades och.peptiden späddes därefter med ättiksyra och vatten. De kombinerade ättiksyra- vattenextrakten avdrevs och utsattes för rening. _ Rening av peptiden genomfördes medelst fördelningskroma- tografi på en gelfíltreríngskolonn_med användning av eluerings- systemet n-butanol, 0,1-N ättiksyra.(1:] volymförhállande). _Detta-förlopp följdes av en enkel gelfiltrering med användning _ av 0,5-N ättíksyra.såsom-elueringsmedel.

Peptíderna användes vid en halt som är effektiv för för- hindrande av ovulation av hondäggdjursägg. Peptiden_enligt upp- finníngen är effektiv i doser av S mg/kg kroppsvikt när den administreras ungefär klockan tolv på dagen för proöstrus för - förhindrande av ovulation. Företrädesvis användes doshalter i ett intervall av ca 0,1-10 mg/kg kroppsvikt. Högre halter kan användas men ingen signifikant fördel kan uppnås genom använd- ning av högre halter.

Följande exempel belyser uppfinningen ytterligare.

Exempel 1. Följande peptider enligt uppfinningen med an- _ given formel framställdes genom ovan beskrivna fast-fasförfarande.

För sådana peptider vari R6 betecknar Pro-NH-CH,-CH3 användes e ett klorometylerat harts. Ett benshydrylaminharts användes för sådana peptíder vari_R¿ betecknar Pro-Gly-NH2. 10' 15 20 25 ga 'vs122ss-s D-p-Glu-R2-R3-Ser-Tyr-R4-R5-Arg-RÖ Peptíd L g komposition Éå Éâ R4 R5- ' RÖ 15 D-Plw -D-Trp D-Trp Leu _ Pro-Gly-NHZ 2 ' Na-Me-Phe D-Trv D-Trv Leu Pro-ciy-NHZ ä*) D-Phe D-Trp D-Trp Na-Me-Leu Pro-Gly-NH2 4*) D-Phe Phe D-Trp Leu Pro-Gly~NH2 $ D-Dhe Pro _ D-Trp Leu Pro-Gly-NHZ 6 94%* D-TIPM D-Trp Leu _ Pere-N-cnz-cns 7 D-Phe D-.Trp D-Trp Nfl-Me-Leu Pro-N-cH2-cr13 *)omfattas ej av uppfinningen Ovan angivna peptider undersöktes in vitro och in vivo.

In vitro undersökningen genomfördes med användning av en fyra dagar gammal primär kultur av dispergerade rátthypofysceller.

Förlnedlade halter LH vidpsvar på pàförandet av peptider 'undersöktes genom en specifik radioimmunundersökning för LH från råttor.

Kontrollskålar med celler erhöll endast 3 x 1039 M LRF, då däremot experimentskålarna erhöll 3 x 10f9 M LRF och en koncent- ration av testpeptid som varierade från löfg M till 10'7 M. Re- sultaten_anges i tabell I (in vitro spalten) uttryckt såsom mol- förhållandet testpeptid som fordras för att mängden LH som fri- göres genom 3 x 10-9 M LRF skall reduceras till 50 % av kontroll- värdet." - ~ Därefter ympades kulturen åter med 3 x 10'5 M LRF och mol- förhållandet av peptid enligt uppfinningen som fordrades för undertryckande av utsöndrandet av LH alstrat genom LRF bestämdes.

Detta molförhållande anges i tabell I. " _ Effektiviteten av peptidkompositionerna enligt uppfinningen bestämdes också in vivo på följande sätt: 27 dagar gamla råttor ínjicerades nnd'S0 ng LRE.Därefter bestämdes molförhållandet av peptiden som fordrades för undertryckande av utsöndrandet av LH alstrat genom LRF. Detta värde anges i tabell I.

Det framgår av tabell I att för kompositíoncrna 2,4 och 5, som inte omfattas av uppfinningen, är erforderligt molförhållande högre d v s dessa peptider är väsentligt mindre effektiva än peptiderna enligt uppfinningen. D 10 7812255-3 1 0 Tabell I In Vitro Erforderligt molförhàllandc för inhibering av LRF-_ Molförhållande för I undertiyckande av Peptíd~ e(3 x 10f5 M) förmedlad -sekretíon av LH komposition LH-sekretion ' ^ 1¿) 7 3:1 - 50:1 2 - --30:1 3 ~ 2:1 *__ I ' 4 ) * 4:1 *) 5 5:1 '6« 3:1 -g7 2:1 *) Omfattas ei av uppfinningen.

Var och en av peptiderna som beskrivit bestämning av dess effektivitet för förhindrande av ovulation i honråttor. I detta test ínjicerades 10 honràttor med 1 mg peptid i majsolja ungefär klockan tolv på dagen för_proöstrus.. Pro- östrus utgör eftermiddagen före östrus (ovulation). I samtliga fall visade sig peptiden vana 100 % effektiv fö; förhindrande s ovan användes för '-av ovulation av honråttorf En separat grupp om 10 honråttor an- vändes såsom kontroll, vilka ej erhöll peptiden. Var och en av 1 de -10 kontroilhonráttorna uppvisade ovulation vid östrus.

Exemgel 2. Följande peptider enligt nppfínningen med indi- kerad formel framställdes genom ovan beskrivna fast-fasförfarande.

Peptidr ' u. komgosition 8 9. ío 11_ 12 13 14 150 16.* 17 18 -R -R -R -Ser-Tyr-R4-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 1 2 3 R1 D-Trp D-Arg D-Leu D-His D-pG1u D-Pro Éormyl-D-Pro Acetyl-DÉPro Bensovl-D-Pro ß-Ala 'D-pGlu Rz 0:Phe .D-Phe D-Phe e D-Phe D-Phe' D-Phe D-Phe D-Phe .D-Phe D-Phe ”D-Trp Rs D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp 0-Trp D-Trp És D-Trp I D-Trp D-Trp D-Trp D-Trp I D-Trp D-Trp D-Trp DfTïv D-Trp D-Trp 10 f/ . 7812255-3 11? p p Var och en av dessa peptíder användes för bestämning av deras effektivitet för förhindrande av óvulation i hónråttor.

I detta test injicerades 10 honråttor uppvisande en medelvíkt av 2 kg med i tabell II indikerad peptidhalt. Peptiden injice- rades ungefär klockan tolv på dagen för proöstrus. Effektivi- teten av peptíden för förhindrande av ovulatíon vid indikerad -ínjektíonshalt indikeras i tabell II för indíkerad användnings- mängd. En separat grupp om-10 honråttor användes såsom kontroll vilka ej erhöll peptiden. Var och en av de 10 kontrollhonråttorna uppvisade ovulatíon vid östrus..

Tabell II Peptid- _ Antal råttor upp- komposition Använd mängd (ggl_ visande ovulation " s i j 750 i 'S9 91 ' 'iso s 10 _ ' soo 9 11 i Å - vso s 12 ' 1so o 13 ' __ 100 4 13 250 0 *14-. 500 4 15 âflfl 0 15 250 3 17 p 7so 1 18 S00 4 _1711.

Claims (6)

1. 7s122ss-s r - gg li l'PArENTKRAv ,1.

2. Peptíd som ínhíberar frígörandet av steroider genom gonadotropiner från däggdjur, k ä n n e t e c k n a d av formeln:_ _, ' _ I _, I R,-R2-R3rSer*Tyr-R4-ks-Arg-R6 _ I I varí R, betecknar D-p-Glu, D-Pro, D-Trp, D-His, D-Arg, D-Leu, formyl-D-Pro,.acetyl-D-Pro, bènsoyl-DfPro eller ßfA1a, R2 be- 'tecknar DÅPhe, D-His eller D-Trp; R3 betecknar DÅTrp,'DfPhe eller D-His; R betecknar D-Trp, D-Phe eller D-Tyr; R betecknar Leu 4 ._ - 5 eller Nä-Me-Leu och R6 betecknar Pro-G1yjNH2 eller Pro-NH-CH2-CH3 _ 2.>Peptíd enligt krav 1, k ä n n e t e c k n a d därav, att R]-ärD-Trp, D-Arg, D-Leu, D-His, D-Pro, D-p-Glu, formyl-D-Pro, acetyl-D=Pro, bensoyl-D-Pro eller B-Ala, R2 är D-Phe, R3 är D-Trp, R4 är D-Trp, Rs är Leu och R6 är Pro-Gly-NH2_

3. Peptid enligt krav 1, k ä n n e t e c k n ayd därav, att R1 är n-p-Glu, R2 är D-Phe, RS är D-Trp, R4 är D-Trp, Rs är Leu och R6 är Pro-Gly-NH2. '_ ' ' _

4. , Peptid enligt krav 1,,k ä n n e t e c k n a d därav, att R, är D-p-c1u, R, är D-Phe, R3 är D-Trp, R4 än n-Trp, Rs är Na-Me-Leu och R6 är ProfGly-NHZ.

5. Peptíd enligt krav 1, k ä n n egt e c.k n a d därav, att RI är Dfp-Glu, R2 är D-Phe, R3 är D-Trp, R4 är D-Trp, R5 är _Leu och R6 är ProfNH-CH2fCH3.

6. Peptid enligt krav 1, k ä n n ent e c k n a d därav, att R1 är D-p-Glu, R2 är D-Phe, R3 är D-Trp, R4 är D-Trp, R5 är Nu-Me-Leu och R6 är Pro-NH-CH2-CH3. I ____.._-__..-~_..__-..