DK150206B - Analogifremgangsmaade til fremstilling af lrf-analoge nona- eller decapeptidamider eller ikke-toksiske salte deraf og nona- eller decapeptidderivater til anvendelse som udgangsforbindelser ved fremgangsmaaden - Google Patents
Analogifremgangsmaade til fremstilling af lrf-analoge nona- eller decapeptidamider eller ikke-toksiske salte deraf og nona- eller decapeptidderivater til anvendelse som udgangsforbindelser ved fremgangsmaaden Download PDFInfo
- Publication number
- DK150206B DK150206B DK166581AA DK166581A DK150206B DK 150206 B DK150206 B DK 150206B DK 166581A A DK166581A A DK 166581AA DK 166581 A DK166581 A DK 166581A DK 150206 B DK150206 B DK 150206B
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- phe
- peptide
- gly
- lrf
- pro
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/16—Oxytocins; Vasopressins; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
- A61P13/02—Drugs for disorders of the urinary system of urine or of the urinary tract, e.g. urine acidifiers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P15/00—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/23—Luteinising hormone-releasing hormone [LHRH]; Related peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/13—Luteinizing hormone-releasing hormone; related peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Reproductive Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
150206
Den foreliggende opfindelse angår en analogifremgangsraåde til fremstilling af hidtil ukendte nona- eller decapeptid-amider eller ikke-toksiske salte deraf, som inhiberer frigørelsen af gonadotropiner fra hypofysekirtlen hos pattedyr 5 indbefattet mennesker og kan hindre ovulation og/eller inhibere frigørelsen af steroider, samt nona- eller decapeptidamider til anvendelse som udgangsprodukter ved fremgangsmåden. Nærmere betegnet angår den foreliggende opfindelse fremstilling af peptider, der inhiberer den gonadale funktion og frigørelsen 10 af steroidhormonerne progesteron og testosteron.
Hypofysekirtlen er ved hjælp af en stilk knyttet til det område i bunden af hjernen, der kendes som hypothalamus. Hypofysekirtlen har to lapper, forlappen og baglappen. Hypofysekirtlens baglap opbevarer og videregiver til den almindelige 15 cirkulation to hormoner, der fremstilles i hypothalamus, hvilke hormoner er vasopressin og oxytocin. Hypofysekirtlens forlap udsondrer et antal hormoner, som er komplekse protein- eller glyco-proteinmolekyler, der via blodstrømmen føres til forskellige organer, og som igen stimulerer sekre-20 tionen til blodstrømmen af andre hormoner fra de perifere organer. Især follikelstimulerende hormon (FSH) og luteinise-rende hormon (LH), der under tiden omtales som gonadotropiner eller gonadotrope hormoner, frigøres fra hypofysekirtlen. Disse hormoner regulerer i kombination kønskirtlernes funktion 25 til produktion af testosteron i testiklerne og progesteron og østrogen i æggestokkene, og endvidere regulerer de produktionen og modningen af kønsceller.
Frigørelsen af et hormon fra hypofysekirtlens forlap kræver 30 sædvanligvis en forudgående frigørelse af en anden klasse af hormoner, der produceres af hypothalamus. Et af de hypothåla= me hormoner fungerer som en faktor, der udløser frigørelsen af de gonadotrope hormoner, især LH. Det hypothalame hormon, der fungerer som en frigørende faktor for LH, omtales her som LRF, 35 selvom det også har været omtalt som LH-RH og som GnRH. LRF er blevet isoleret og karakteriseret som et decapeptid med følgende formel p-Glu-Eis-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-Gly-N^ 2 1S0206
Peptider er forbindelser, der indeholder to eller flere amino= syrer, hvori den ene syres carboxylgruppe er forbundet med aminogruppen i den anden syre. Formlen for LRF som ovenfor vist er i overensstemmelse med den konventionelle angivelse 5 af peptider, ifølge hvilken aminogruppen forekommer til ven stre og carboxylgruppen forekommer til højre. Aminosyreres-tens stilling identificeres ved nummerering af aminosyreres-terne fra venstre til højre. X tilfælde af LRF er hydroxyl= delen af glycins carboxylgruppe blevet erstattet med en amino= 10 gruppe (NH2). Forkortelserne for de ovennævnte individuelle aminosyrerester er konventionelle og er baseret på aminosyrens trivialnavn, hvorefter p-Glu er pyroglutaminsyre, His er hi= stidin, Trp er tryptophan. Ser er serin, Tyr er tyrosin, Gly er glycin, Leu er leucin, Arg er arginin og Pro er prolin.
15 Med undtagelse af glycin har alle aminosyrer i de ifølge opfindelsen fremstillede peptider L-konfiguration, med mindre andet er anført.
Det er kendt, at indføring af D-aminosyrer i stedet for Gly i 6-stillingen i LRF decapeptidet resulterer i et peptidma-20 teriale med en fra 1-35 gange større virkningsevne end LRF
har med hensyn til at bevirke frigørelse af LH og andre gona= dotropiner fra pattedyrets hypofysekirtel. Den frigørende virkning opnås, når LRF-analogen administreres intravenøst, subkutant, intramuskulært, oralt, intranasalt eller intrava= 25 ginalt til et pattedyr.
Det er også kendt, at indføring af forskellige aminosyrer i stedet for His (eller fjernelse af His) i 2-stillingen i LRF-decapeptidet frembringer analoge med en inhiberende virkning på frigørelsen af LH og andre gonadotropiner fra pattedyrets 30 hypofysekirtel. Især opnås varierende grader af inhibering af frigørelsen af LH, når His fjernes (des His) eller erstattes med D-Ala, D-Phe eller Gly. Den inhiberende virkning af sådanne peptider, der er modificeret i 2-stillingen, kan yderligere forøges, når en D-aminosyre indføres i stedet for Gly 35 i decapeptiders 6-stilling. F.eks. er peptidet pGlu-Trp-Ser-Tyr-D-Ala-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 fire gange mere virksomt som 150206 3 inhibitor for frigørelsen af gonadotropiner end tilfældet er.for det samme peptid, hvori Gly er til stede i 6-stil-lingen i stedet for D-Ala.
Nogle hunpattedyr, som ikke har nogen ovulationscyklus, og 5 som ikke udviser nogen defekt i hypofysen eller ovarierne, begyn der at udsondre normale mængder af gonadotropinerne LH og FSH efter den pågældende administration af LRF. Administrationen af LRF betragtes således som egnet til behandling af de tilfælde af infertilitet, hvor en funktionsmæssig defekt 10 foreligger i hypothalamus.
Der er også grunde til at man ønsker at hindre ovulation hos hunpattedyr, og administrationen af LRF-analoge, som er antagonistiske overfor den normale funktion af LRF, har været benyttet til at hindre ovulation. Af denne grund undersøges LRF-15 analoge, der er -antagonistiske overfor LRF, med hensyn til deres potentielle anvendelse som et kontraceptiv eller til regulering af konceptionsperioder. Der er ønskeligt at opnå peptider, som er kraftigt antagonistiske overfor endogent LRF, og som hindrer sekretion af LH og frigørelsen af stero= 20 ider fra pattedyrs kønskirtler.
Den foreliggende opfindelse tager sigte på tilvejebringelsen af peptider, der inhiberer frigørelsen af gonadotropiner hos pattedyr indbefattet mennesker og inhiberer frigørelsen af stero-25 ider fra han- og hunpattedyrs kønskirtler. De forbedrede LRF-analoge er antagonistiske overfor LRF og har en inhibe= rende virkning på forplantningsprocesserne hos pattedyr. Disse analoge kan benyttes til inhibering af produktionen af go= nadotropiner og seksualhormoner under forskellige omstændig- 30 heder inklusive tidlig udviklet pubertet, hormonafhængig neuplasia, dysmenorrhea og endometriosis.
Ved fremgangsmåden ifølge den foreliggende opfindelse er der generelt blevet syntetiseret peptider, der kraftigt inhibe= rer sekretionen af gonadotropiner fra hypofysekirtlen hos 150206 4 pattedyr indbefattet mennesker og/eller inhiberer frigørelsen af steroider fra kønskirtlerne. Disse peptider er LRF-analo-ge, hvori der foreligger en substitution i 1-stillingen i form af enten 3,4-dehydroprolin eller thiazolidin-4-carboxyl-5 syre, og hvori der også er en substituent i 2-stillingen og fortrinsvis også i 3- og 6-stillingen. Substituenten i 1-stillingen kan modificeres, så at dens α-aminogruppe indeholder en acylgruppe, nonlig formyl, acetyl, acrylyl, vinylacetyl, eller benzoyl. 3,4-Dehydro L-Pro foretrækkes i 1-stillingen. Modificeret D-Phe er fortrinsvis til stede i 2-stillingen og frembringer forøget antagonistisk virkning som resultat af de specifikke modifikationer, der findes i benzenringen.
Enkelte udskiftninger af hydrogen foretages fortrinsvis i para- eller 4-stillingen, og dobbeltsubstitutioner foretages 15 fortrinsvis i 2,4- eller 3,4-stillingerne. Substituenterne er fortrinsvis valgt blandt dichlor, methyl, fluor, difluor, trifluormethyl, methoxy, brom, dibrom, nitro, dinitro og meth-ylmercapto. D-Trp foretrækkes i 3-stillingen, og D-His(imBzl) eller D-Trp foretrækkes i 6-stillingen, selvom Gly eller D-Leu 20 og D-Ser (O-t But) kan anvendes. Substitutionerne i 7- og 10-stillingen er valgfri.
Som følge af at disse peptider er overordentlig virksomme med hensyn til at inhibere frigørelsen af LH, omtales de ofte som 25 LRF-antagonister. Peptiderne inhiberer ovulation hos hunpattedyr, når de administreres i meget små mængder på proestrus= tidspunktet; og er også effektive til at bevirke resorption af befrugtede æg, hvis de administreres kort tid efter kon- „ ception.
30
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstilles nona- eller decapeptidamider har nærmere betegnet følgende almene formel 35 X-R1-R2-R3-Ser-Tyr-R4-R5-Arg-Pro-Rg hvori X er hydrogen eller en formyl-, acetyl-, acrylyl-, vinylacetyl- eller benzoylgruppe, R^ er 3,4-dehydro Pro, 3,4-dehydro 5 150206 D-Pro, 3,4-dihydro D,L-Pro eller en L- eller D-thiazolidin-4-carboxylsyrerest, r2 er D-Phe, D-His, D-Trp, Cl-D-Phe, dichlor-D-Phe, CF^-D-Phe, F-D-Phe, difluor-D-Phe, N02~D-Phe, dinitro-D-Phe, Br-D-Phe, dibrom-D-Phe, CH^S-D-Phe, CH^O-D-Phe eller 5 CH^-D-Phe, R^ er D-Trp, Trp, D-Phe eller D-His, R^ er D-His-(imBzl), D-Trp, Gly, D-Leu eller D-Ser(0-t But), hvorhos imBzl betyder, at en benzylgruppe er knyttet til histidins imidazolnitrogen, og O-t But betyder den tertiære butylester, R^ er Leu eller i^Me-Leu og Rg er Gly-NH2 eller NHC^CH^, 10 eller er ikke toksiske salte deraf, og fremgangsmåden er ejendommelig ved, at man (a) danner en intermediær forbindelse med formlen X1-R1-R2-R3-Ser(X2)-Tyr(X3)-R4~ R,--Arg(X4)-Pro-X5 15 1 2 hvori X er en a-amino-beskyttelsesgryppe, X er en beskyttelsesgruppe for Ser's alkoholiske hydroxylgruppe, X3 er en beskyttelsesgruppe 4 iifor Tyr's phenoliske hydroxylgruppe, X er en beskyttelsesgruppe for Arg's
C
guanidingruppe, og X er valgt blandt dy-O-C^ [harpiksbærer],' O-Ol·,- [harpiksbærer] , Gly-NH- [harpiksbærer], Gly-NH2 og NHCH2CH3, og cm nødvendigt emdanner X^· til en acylgruppe valgt blandt formyl, acetyl, acrylyl, vinylacetyl og benzoyl, (b) når X5 er Gly-0-CH2- hhv,· 0-€H2“[harpiksbærer], fraspalter harpiksbæreren ved behandling med ammoniak hhv. ethylamin, fraspalter beskyttelsesgrupperne og, når X3 er Gly-NH- [harpiksbærer], harpiksbæreren med HF og cm ønsket emdanner et resulterende peptid til et ikke-toksisk salt deraf.
Med dehydro Pro menes 3,4-dehydroprolin, C^H^C^N, og når X er en acylgruppe, er den knyttet til nitrogenatomet. Med Thz menes thiazolidin-4-carboxylsyre, C,H709NS, der kan frem-( stilles ved behandling af cysteinhydrochlorid med formaldehyd, og eksempelvis kan Ac-Thz fremstilles ved omsætning af Thz med eddikesyreanhydrid.
De ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede pep-35 tider syntetiseres ved hjælp af en fastfaseteknik under anvendelse af en chlormethyleret harpiks, en methylbenzhydrylamin-harpik (MBHA) eller en benzhydrylaminharpiks (BHA). Synte- 150206 6' sen udføres på en måde med trinvis addition af aminosyrerne i kæden på den måde, der i detaljer er anført i USA patentskrift nr. 4.211.693. Sidekædebeskyttende grupper, som er velkendte, sættes fortrinsvis til Ser, Tyr, Arg og His, før 5 disse aminosyrer kobles til den kæde, som bygges på harpiksen.
En sådan metode tilvejebringer det fuldstændigt beskyttede mellemprodukt peptidoharpiks. Opfindelsen angår derfor desuden nona- eller decapeptidderivater til anvendelse som udgangs-materialer ved den omhandlede fremgangsmåde, hvilke peptidderivater er ejendommelige ved det i krav 7's kendetegnende del anførte.
Mellenprodukteme, der dannes ved fastfasesyntesen, kan betegnes som: 15 X1-R1-R2-R3-Ser(X2)-Tyr (X3)-R4~R5-Arg(X4)-Pro-X5 hvori X^- er en a-aminobeskyttelsesgruppe af den type, som vides at være nyttig inden for teknikken vedrørende trinvis syntese af polypeptider, og når X i det ønskede peptidmate-20 riale er en acylgruppe, kan denne gruppe benyttes som beskyttelsesgruppe. Blandt klasserne af a-aminobeskyttelses-grupper, der omfattes af X3", kan nævntes (1) beskyttelsesgrupper af acyltypen, såsom formyl (For), trifluoracetyl, phthalyl, p-toluensulfonyl (Tos), benzoyl (Bz), benzensulfo=
2 S
nyl, o-nitrophenylsulfenyl (Nps), tritylsulfenyl, o-nitro= phenoxyacetyl, acrylyl (Acr), chloracetyl, acetyl (Ac) og γ-chlorbutyryl; (2) aromatiske beskyttelsesgrupper af urethan= typen, f.eks. benzyloxycarbonyl (Z) og substitueret benzyl= oxycarbonyl,* såsom p-chlor-benzyloxycarbonyl, p-nitrobenzyl= 30 oxycarbonyl, p-brombenzyloxycarbonyl og p-methoxybenzyloxy= 1 carbonyl] (3) alifatiske urethan-^beskyttelsesgrupper, såsom tert.-butyloxycarbonyl (Boc), diisopropylmethoxycarbonyl, isopropyloxycarbonyl, ethoxycarbonyl og allyloxycarbonyl(4) cykloalkylbeskyttelsesgrupper af urethantypen, såsom cyklo= 35 pentyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl og cyklohexyloxy= carbonylJ (5) beskyttelsesgrupper af thiourethantypen, såsom phenylthiocarbonyli (6) beskyttelsesgrupper af alkyltypen, såsom allyl (Aly), triphenylmethyl (trityl) og benzyl (Bzl) og (7) trialkylsilangrupper, såsom trimethylsilan. Den foretrukne α-aminobeskyttelsesgruppe er Boc, når X er hydrogen.
7 2 150206 X er en beskyttelsesgruppe for den alkoholiske hydroxylgrup-pe i Ser og er valgt blandt acetyl, benzoyl, tetrahydropyra-nyl, tert-butyl, trityl, benzyl og 2,6-dichlorbenzyl. Benzyl foretrækkes.
5 3 X er en beskyttelsesgruppe for den phenoliske hydroxylgruppe i Tyr og er valgt blandt tetrahydropyranyl, tert-butyl, trityl, benzyl, benzyloxycarbonyl, 4-brombenzyloxycarbonyl og 2,6-dichlorbenzyl.
10 4 X er en beskyttelsesgruppe for nitrogenatomerne i Arg og er valgt blandt nitro, Tos, benzyloxycarbonyl, adamantyloxy-carbonyl og Boc.
C
15 X er valgt blandt Gly-O-CH^,-[harpiksbærer] , O-C^- [harpiks- bærer] og Gly-NH-[harpiksbærer].
Kriteriet for udvælgelse af sidekædebeskyttelsesgrupper X^-X^ er, at beskyttelsesgruppen skal være stabil overfor 20 reagenset under de reaktionsbetingelser, der vælges til fjernelse af α-aminobeskyttelsesgruppen på hvert trin i syntesen. Beskyttelsesgruppen må ikke blive fraspaltet under koblingsbetingelser, og beskyttelsesgruppen skal kunne fjernes efter afslutning af syntesen af den ønskede aminosyresekvens under 25 reaktionsbetingelser, der ikke vil ændre peptidkæden.
5 Når X -gruppen er Gly-O-CE^-[harpiksbærer], repræsenterer esterdelen en af polystyrenharpiksbærerens mange funktionel- 5 le grupper. Når X -gruppen er Gly-NH-[harpiksbærer], forbin-30 der en amidbinding Gly med BHA harpiks eller med en MBHA har- i piks.
Når X er acetyl, formyl, acrylyl, vinylacetyl eller benzoyl, 3g kan den benyttes som X^-beskyttel’sesgruppen for a-aminogrup-pen i Rj, i hvilket tilfældet den kan tilsættes før kobling af den sidste aminosyre til peptidkæden. Alternativt kan en omsætning med peptidet på harpiksen foretages, f.eks. om- 150206 8 sætning med eddikesyre i nærværelse af dicyklohexylcarbodi-imid (DCC) eller fortrinsvis med eddikesyreanhydrid.
Det fuldt beskyttede peptid spaltes fra en chlormethyleret · 5 harpiksbærer ved · hjælp af ammonolyse, således som den kendes indenfor teknikken, til opnåelse af det fuldtud beskyttede amidmellemprodukt. Afbeskyttelse af peptidet såvel som spaltning af peptidet fra eri benzhydrylaminharpiks finder sted ved 0°C med hydrogenfluoridsyre (HF). Anisol sættes til pep= tidet før behandlingen med HF. Efter fjernelsen af HF under vakuum behandles det fraspaltede afbeskyttede peptid med ether, dekanteres, optages i fortyndet eddikesyre og lyofiliseres.
Rensning af peptidet foretages ved hjælp af ionbytningskro-matografi på en CMC-søjle efterfulgt af fordelingkromatogra= fi under anvendelse af elueringssystemet; n-butanol/0,1N ed= dikesyre (1:1 volumenforhold) på en søjle pakket med "Sephadex" G-25 eller ved anvendelse af HPLC som det kendes inden for teknikken. De ifølge opfindelsen franstil lede nona- eller decapeptidamider er effektive i mængder på mindre end 200 mikrogram pr. kilogram legemsvægt, når de administreres omkring middagstid på pro= estrusdagen med henblik på at forhindre ægløsning hos hunrotter. Til forlænget undertrykkelse af ægløsning kan det være nødvendigt at benytte doseringsmængder i intervallet fra ca.
25 0,1 til ca. 5 mg pr. kilogram legemsvægt. Disse antagonister er også effektive som kontraceptiver, når de administreres til hanpattedyr på regelmæssig måde.
Eftersom disse forbindelser vil formindske testosteronmængder-( ne (en uønsket konsekvens hos normale, seksuelt aktive hanner), kan det være fornuftigt at administrere erstatningsdoser af testosteron sammen med LRF-antagonisten.
Fra GB-patentansøgning 2.009.182 og US-patentskrifterne nr. 3.933.782 og 3.928.307 kendes forbindelser, der er nært beslægtede med de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede, og som har LRF-antagonistisk virkning. De fra nævnte trykskrifter kendte forbindelser skal imidlertid anvendes i betyde 150206 9 lig større doser end de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede for at være biologisk effektive i samme grad som de ved fremgangsmåden ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser.
5
Peptidsammensætning nr. 31 i tabel IH i det efterfølgende eksempel III svarende til peptid nr. 3 i DS patentskrift nr. 4.307.083, for hvilket en ICR^-værdi på 0,3 er anført, er således 950% så virksom som forsøgsstandarden repræsenteret ved peptidsam-mensætning nr. li eksempel 1 på side 4 i nævnte GB-patent-ansøgning, som svarer til peptid nr. 1 i tabel 3 på side 873 i Life Sciences, bind 23, 1978, for hvilket en ICR5Q-værdi på 3,0 er anført. Af dette peptid kræves en dosis på 250 mikrogram til opnåelse af 100% inhibering af ovulation in 15 vivo, og en sammenligning mellem denne mængde og de mængder af forbindelserne ifølge opfindelsen, der kræves til opnåelse af fuldstændig ovulationsblokering, viser, at mange af forbindelserne fremstillet ifølge opfindelsen tilvejebringer-denne virkning i en mængde så lav som 10 mikrogram eller med an-20 dre ord 1/25 af mængden af referenceforbindelsen.
US-patentskrift nr. 3.933.782 omtaler i 6. spalte, at anvendelse af de deri omhandlede forbindelser i en dosis på 12 mg pr.
25 kg legemsvægt resulterede i en ovulationsinhibering på 80%.
Denne ovulationsinhibering kan sammenlignes med den, der opnås med peptidsammensætning nr. 17 i den efterfølgende tabel II, hvori AC-dehydro-D,L-pro er indført i stedet for AC-D-pro i 1-stillingen. Det har vist sig, at den ifølge opfindelsen 30 fremstillede forbindelse tilvejebragte 70% inhibering i en dosis på kun 50 mikrogram pr. rotte, hvilket svarer til ca. 200 mikrogram pr. kg legemsvægt af den ifølge opfindelsen fremstillede forbindelse. De fra US-patént- skrift nr. 3.928.307 kendte forbindelser har en lignende virk-35 ning, idet der skal anvendes en dosis på mellem 20 og 30 mg pr. kg legemsvægt til opnåelse af en tilsvarende ovulationsinhibering.
150206 10
Som også nævnt i det følgende har vellykket in vivo afprøvning af nogle af de ifølge opfindelsen fremstillede forbindelser været udført med injektioner af kun 0,02 mg, hvorved der opnåedes en meget betydelig reduktion af den mængde, der hidtil 5 måtte anvendes af de kendte LRF-antagonister.
De følgende eksempler illustrerer yderligere forskellige træk ved opfindelsen.
10 Eksempel I
Følgende peptider med formlen X-3,4-dehydro Pro-R2~D-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Rj--Arg-Pro-Gly-NH2 fremstilles ved hjælp af den ovenfor omtalte fastfaseprocedure.
15
Tabel I
-Peptid X r2 r5 a22 20 1 Ac 3,4 Cl2-D-Phe Leu -79,9° 2 " 4 CF3-D-Phe " -69,9° 3 ,r 4F-D-Phe " -78,2°
o fi ^-O
5 Ac 4 N0o-D-Phe Leu -89,6
* O
g »4 Br-D-Phe " -76,0 25 η <1 4 CH,S-D-Phe " -79,8°
3 O
8 " 4 CHgO-D-Phe " -82,7 9 » 4 CH3-D-Phe " -81,7° 10 *' 2,4 Cl2-D-Phe " -77,2° 11 Acr 3,4 Cl2-D-Phe " —72,5 30 12 Ac 4 CH-jO-D-rPhe N°MeLeu -113,4° 13 " 4 CH3-D-Phe " -106,5° 14 » 3,4 Cl2-D-Phe " -110,0°
Til eksempel anføres i det følgende en repræsentativ fastfase= 35 syntese af ovennævnte peptid nr. 1, der omtales som [Ac-dehy= dro Pro1, 3,4 Cl2-D-Phe2, D-Trp3'6]-LRF. Dette peptid har følgende formel:
Ac-dehydro Pro-^^ Cl2-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2 11 1.50206
Der benyttes en benzhyciryiaminharpiks, og Boc-besSyttefc Gly Ro&lé&tiT harpiksen i løbet af en 2 timers periode i CH2C12 under anvendelse af et tredobbelt overskud af Boc-derivat og DCC som aktiverende reagens. Glycinresten knyttes til BHA-resten via 5 en amidbinding.
Efter koblingen af hver aminosyrerest udføres vaskning, af= blokering og kobling af den næste aminosyrerest i overensstemmelse med følgende skema under anvendelse af et automati= 10 seret apparat og begyndende med ca. 5 gram harpiks:
Blandetider,
Trin_Reagenser og operationer_mimru-Ar__ 1 CH2Cl2-vask, 80 ml (2 gange) 3 2 Methanol (MeOH)-vask, 30 ml (2 gange) 3 15 3 CH2Cl2-vask, 80 ml (3 gange) 3 4 50% TFA plus 5% 1,2-ethandithiol i CH_C1_, 70 ml (2 gange) 10 5 CH2C1 -vask, 80 ml (2 gange) 3 6 TEA 12,5% i CH2C12, 70 ml (2 gange) 5 2° 7 MeOH-vask, 40 ml (2 gange) 2 8 CH2Cl2-vask, 80 ml (3 gange) 3 9 Boc-aminosyre (10 mmol) i 30 ml af enten DMF eller CH Cl_, afhængigt af opløseligheden af 2 *- den pågældende beskyttede aminosyre, 25 (1 gang) plus DCC (10 mmol) i CH2C12 30-300 10 MeOH-vask, 40 ml (2 gange) 3 11. TEA 12,5% i CH2C12, 70 ml (1 gang) 3 12 MeOH-vask, 30 ml (2 gange) 3 13 CH2Cl2~vask, 80 ml (2 gange) 3 30
Efter trin 13 udtages en aliquot mængde til en ninhydrinprøve.
Hvis prøven er negativ,' går man.tilbage til trin 1 til kobling af den næste aminosyre. Hvis prøven er positiv eller en smule positiv, går man tilbage og gentager trinnene 9 til 13.
Det ovennævnte skema anvendes til kobling af hver af amino-syreme i det ifølge opfindelsen fremstillede peptid,efter at den første aminosyre er blevet tilknyttet. NaBoc-beskyttelse 35 1.50206 12 anvendes til hver af de resterende aminosyrer gennem syntesen. Arg's sidekæde beskyttes med Tos. OBzl benyttes som en side-kædebeskyttelsesgruppe for Ser's hydroxylgruppe, og 2,6-di= chlorbenzyl benyttes som sidekædebeskyttelsesgruppe for Tyr's
O
hydroxylgruppe. N-acetyl-dehydro Pro indføres som den sidste aminosyre. Boc-Arg(Tos) og Boc-D-Trp, der har lav opløselighed i CH^Cl^r kobles under anvendelse af blandinger af DMF og CH2C12· 10
Fraspaltningen af peptidet fra harpiksen og fuldstændig afbe= skyttelse af sidekæderne foregår meget let ved 0°C med HF.
Anisol tilsættes som et skyllemiddel forud for HF-behandling. Efter fjernelsen af HF under vakuum, ekstraheres harpiksen jg med 50% eddikesyre, og vaskevæskerne lyofiliseres til opnåelse af et råt peptidpulver.
Rensning af peptidet udføres derefter ved hjælp af ionbytningskromatografi på CMC ("Whatman"® CM 32 under anvendelse af 20 en gradient af 0,05 til 0,3 M NH40Ac i 50/50 methanol/vand efterfulgt af adskillelseskromatografi på en gelfiltreringssøjle under anvendelse af elueringssystemet n-butanol/0,1N eddikesyre (l:l-volumenforhold).
25 De i ovenstående tabel anførte peptider bestemmes in vitro og in vivo. In vitro-prøven foretages under anvendelse af dis= socierede rottehypofyseceller, der holdes under dyrkning i.4 dage forud for bestemmelsen. De LH-nængder, der er opnået son reaktion på peptidanvendelsen, bestemmes ved hjælp af specifik radioimmun-30 prøve for rotte LH. Kontrolskåle med celler modtager kun en mængde, der er 3 nanomolær i henseende til LRF. Forsøgsskåle modtager en mængde, der er 3 nanomolær i henseende til LRF plus en mængde med en koncentration af forsøgspeptid, der går fra 0,01 til 3 nanomolær Den udsondrede mængde LH i prøver-35 ne, der kun er behandlet med LRF, sammenlignes med den mængde, der udsondres af prøverne behandlet med peptidet plus LRF. Resultater er beregnet og anført i tabel IA (In Vitro-søjle) som det molære koncentrationsforhold mellem forsøgspeptid og 1.50206 13 LRF (antagonist/LRF), der kræves til formindskelse af den af 3 nanomol LRF frigjorte LH-mængde til 50% af kontrolværdien <ICR50).
g
De ovenfor beskrevne peptider benyttes til bestemmelse af effektiviteten til forhindring af ægløsning hos hunrotter. Ved denne prøver indsprøjtes et bestemt antal kønsmodne Sprague-Dawley-hunrotter, der hver har en legemsvægt fra 225 til 250 gram, med enten 5 eller 10 mikrogram peptid i majsolie omkring 10 middagstid på proestrusdagen. Proestrus er eftermiddagen før oestrus (ægløsningen). En separat gruppe hunrotter benyttes til kontrol, og peptidet administreres ikke til disse. Hver af kontrol-hunrotterne har ægløsning på oestrustidspunktet.
Som anført i In Vivo-søjlen er peptiderne signifikant effektive til hindring af ægløsning hos hunrotter i en meget lav dosering, og alle peptidforbindelserne betragtes som værende fuldstændig effektive i en dosis på 1 mg.
20
Tabel IA
In Vitro In Vivo (10yg) In Vivo (5uq)
Peptid ICR50 Rotter med ægløsning Rotter med ægløsning 25 1 0,039 0/10 4/7 2 0,070 7/9 3 0,021 0/10 0/10 5 0,011 0/10 2/10 30 6 0,010 5/7 7 0,030 1/10 7/10 8 0,125 3/10 9 0,044 1/7 9/9 10 5/10 4/7 35 11 0,048 1/10 4/10 12 0,29 5/10 13 0,11 3/4 14 0,05 1/3 8/10 150206 14 ICR50-Vær<^en er et m®-l f°r ^en koncentration af d<± pågældende peptid, som vil formindske mængden af udsondret LH (som reaktion på en specifik dosering af LRF) til 50% af kontrolværdien. Kontrolværdien for referencepeptidet af [D-pGlu·*·, 5 D-Phe^, D-Trp^, D-Trp6]-LRF er 3 til 1 eller 3,0 ifølge ta bel 3 på side 873 i Life Sciences, bind 23, nr. 8, 1978.
Eksempel II
De nedenfor angivne peptider med formlen 10 X-R1-pCl-D-Phe-D-Trp-Ser-Tyr-R4-R5-Arg-Pro-R6 fremstilles ved hjælp af den fastfaseprocedure, som generelt er beskrevet i eksempel I, med undtagelse af nr. 20, der frem-15 stilles på en chlormethyleret harpiks.
Tabel II
2 0°
Peptid X Ri R4 R5 R6 aD
20 15 Ac dehydro Pro D-Trp Leu Gly-NH2 -92,3° 15 « " " NaMeLeu ’’ -110,5° 17 " dehydro D-Pro " Leu " +5,2 18 " " " NaMeLeu " -21,1° 19 Acr dehydro Pro n " " -69,2 25 20 Ac dehydro D-Pro 11 Leu NHCH2CH3 +2,4° 21 Ac Thz " " Gly-NH« -51.9° 22 " " " NaMeLeu " * -79,0° 23 » D-Thz " " " -46,5° 24 " " " Leu " -17,7° 25 " dehydro Pro (imBzl)D-His " " -31,7° 30 26 " dehydro D-Pro " " " +18,2° 27 " Thz " " " -41,3° 28 " D-Thz " " " - 7,7°
De i ovenstående tabel anførte peptider bestemmes in vitro 35 og in vivo. In vivoprøven foretages under anvendelse af dissocierede rottehypofyseceller, der holdes under dyrkning i 4 dage forud for bestemmelsen. De som reaktion på peptidanvendelsen opnåede LH-mængde'r bestemmes ved hjælp af specifik ra= 15 1S0206 dioimmunprøve for rotte LH. Kontrolskåle med celler modtager kun en mængde, der er 3 nanomolær i henseende LRF. Forsøgsskåle modtager en mængde, der er 3 nanomolær i henseende LRF, plus en mængde, der har en koncentration af ® forsøgspeptid gående fra 1 til 10 nanomolær. LH-insngden, der ud- sondres i de kun med LRF behandlede prøver, sammenlignes med den mængde, der udsondres af prøverne behandlet med peptidet plus LRF. Resultaterne er beregnet og udtrykt i eksempel IIA (In Vitrosøjle), som det molære koncentrationsforhold 10 mellem forsøgspeptid og LRF (antagonist/LRF), der kræves til at reducere den af 3 nanomol LRF frigjorte mængde LH til 50% af kontrolværdien (ICRj-q) .
Flere af de ovenfor beskrevne peptider benyttes til bestem-15 melse af effektiviteten til forhindring af ægløsning hos hun rotter. Ved dette forsøg indsprøjtes 4, 7, 9 eller 10 kønsmodne Sprague-Dawley hunrotter, der hver han en legemsvægt fra 225 til 250 gram, med 0,02 mg peptid (med mindre andet er anført) i majsolie omkring middagstid på proestrus« 20 dagen. Proestrus er eftermiddagen før oestrus (ægløsningen).
En separat gruppe på 10 hunrotter benyttes som kontrol, hvortil peptidet ikke administreres. Hver af de 10 kontrol-hun- rotter har ægløsning på oestrustidspunktet. Som anført i
In Vivosøjlen er peptiderne signifikant effektive til for-25 hindring af ægløsning hos hunrotter i en meget lav dosering, og alle peptidforbindelserne betragtes som værende fuldstændig effektive i en dosis på 1 mg.
1.50206 16
Tabel IIA
In Vitro In Vivo
Peptid ICR50 Rotter med ægløsning
5 '15 0,043 0/10 X
16 0,058 0/7 17 0,19 3/8
18 0,27 5/10 H K
19 0,03 0/9 10 20 0,2 21 0,14 5/8 22 0,13 9/10 * * 23 0,1 24 0,12 15 25 0,042 4/10 26 0,2 10/10 27 0,15 7/10 X *
28 0,1 7/10 H H
- x x 0,025 mg. x 0,010 mg 20
Eksempel III
De nedenfor anførte peptider med formlen 25 X-R1-R2-R3-Ser-Tyr-D-Trp-R5-Arg-Pro-R6 fremstilles ved hjælp af en fastfaseprocedure som generelt beskrevet i eksempel I.
30
Tabel III
20°
Peptid X R-^ R3 ^5 R6 aD
.35 29 H dehydro-D,L-Pro D-Phe D-Trp NaMeLeu Gly-NH2 -57,7 30 h " " " Leu " 31 Ac dehydro-D, L-Pro " " " " -22,7 32 H " NaMeLeu " 33 Ac dehydro-Pro " 11 beu " -77,7 17 150206
De i ovennævnte tabel anførte peptider bestemmes in vitro og in vivo. In vitro-bestemmelsen foretages under anven-5 delse af en 4 dage gammel primærkultur af dispergerede rottehypofyseceller. De som reaktion på peptidanvendelsen opnåede LH-mængder bestemmes ved hjælp af specifik radio= immunprøve for rotte LH. Kontrolskåle med celler modtog kun en mængde, som er 3 nanomolær i henseende til LRF, 1Q og forsøgsskåle modtog en mængde på 3 nanomol LRF og med en koncentration af forsøgspeptid gående fra 1 til 100 nanomolær. Den udsondrede LH-mængde i prøverne, der kun blev behandlet med LRF, sammenlignes med den LH-mængde, der udsondres af prøverne behandlet med peptidet plus LRF. ig Resultaterne er beregnet og anført i tabel IIIA (In Vitro søj le) som det molære forsøgspeptid-koncentrationsforhold, der kræves til at formindske den af de 3 nanomol LRF frigjorte LH-mængde til 50% af kontrolværdien (ICR^q).
20
Flere af de ovenfor beskrevne peptider benyttes til bestemmelse af effektivitetén til forhindring af ægløsning hos hunrotter. Ved dette forsøg indsprøjtes et antal kønsmodne Sprague-Dawley hunrotter, der hver har en legemsvægt fra 225 25 til 250 gram, 0,02 mg peptid i majsolie cmliring middagstid på pro= estrusdagen. Proestrus er eftermiddagen før oestrus (ægløsningen) . En separat gruppe hunrotter benyttes som kontrol, hvortil peptidet ikke administreres. Hver af kontrol-hunrot-terne har ægløsning på oestrustidspunktet. Som angivet i gø In Vivo-søjlen er peptiderne signifikant effektive til for hindring af ægløsning hos hunrotter i en meget lav dosering, og alle peptidforbindelserne betragtes som værende fuldstændig effektive ved en dosis på 1 mg.
35
Claims (3)
1. Analogifremgangsmåde til fremstilling af LRF-analoge nona- eller decapeptidamider med den almene formel 30 „ X-R1-R2_R3-Ser-Tyr-R4-R5-Arg-Pro-Rg hvori X er hydrogen eller en formyl-, acetyl-, acrylyl-, vinylacetyl- eller benzoylgruppe, R1 er 3,4-dehydro Pro, 35 3,4-dehydro D-Pro, 3,4-dehydro D,L-Pro eller en L- eller D-thiazolidin-4-carboxylsyrerest, Rj er D-Phe, D-His, D-Trp, Trp, Cl-D-Phe, dichlor-D-Phe, CF3-D-Phe, F-D-Phe, difluor- 150206 ✓ D-Phe, NOj-D-Phe, dinitro-D-Phe, Br-D-Phe, dibrom-D-Phe, CH3S-D-Phe, CH30-D-Phe eller CH3-D-Phe, R3 er D-Trp, Trp, D-Phe eller D-His, R^ er D-His(imBzl), D-Trp, Gly, D-Leu eller D-Ser(0-t But), hvorhos imBzl betyder, at en benzylgruppe 5 er knyttet til histidins imidazolnitrogen, og O-t But betyder den tertiære butylester, R5 er Leu eller NaMe-Leu, og Rg er Gly-NH2 eller NHCH2CH3, eller ikke-toksiske salte deraf, kendetegnet ved, at man (a) danner en intermediær forbindelse med formlen 10 X1-R1-R2-R3-Ser(X2)-Tyr (X3)-R4~ Rg-Arg{X1)-Pro-X2 3 1. hvori X er en oc-amino-beskyttelsesgruppe, X er en beskyttelsesgruppe for Ser's alkoholiske hydroxylgruppe, X3 er en beskyttelses- 4 gruppe for lyr's phenoliske hydrojylgruppe, X er en beskyttelsesgruppe for Arg's guanidinogruppe, og X^ er valgt blandt Gly-OCH2 [harpiksbærer], O-CH^- [harpiksbærer], Gly-NH-[harpiksbærer], Gly-NH2 og °9 0011 nødvendigt emdanner X"*· til en acylaruppe valgt blandt fontyl, acetyl, acry-lyl, vinylacetyl og benzoyl, (b) når X^ er Gly-OCH2- hhv. O-CHj-Ihar-piksbærer], fraspalter harpiksbæreren ved behandling med amnoniak hhv. ethylamin, fraspalter beskyttelsesgrupperne og, når X3 er Gly-NH-[harpiksbærer] , harpiksbæreren med HP og om ønsket emdanner et resulterende peptid til et ikke-toksisk salt deraf. 25 7
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, at X er acrylyl.
3. Fremgangsmåde ifølge krav 1, kendetegnet ved, 30 at X er acetyl. Fremgangsmåde ifølge krav 2 eller 3, kendetegnet ved, at R2 er 2,4 Cl-D-Phe, 3,4 Cl-D-Phe, 4F-D-Phe, 4N02-D-Phe, 4Br-D-Phe eller 4CH3S-D-Phe. 35 2 Fremgangsmåde ifølge krav 4,k endetegnet ved, 3 at R^ er D-Trp.
Applications Claiming Priority (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US14048780 | 1980-04-15 | ||
| US06/140,487 US4292313A (en) | 1980-04-15 | 1980-04-15 | LRF Antagonists |
| US14755580 | 1980-05-08 | ||
| US06/147,555 US4307083A (en) | 1978-10-16 | 1980-05-08 | LRF Antagonists |
| US18259480A | 1980-08-29 | 1980-08-29 | |
| US18259480 | 1980-08-29 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK166581A DK166581A (da) | 1981-10-16 |
| DK150206B true DK150206B (da) | 1987-01-05 |
| DK150206C DK150206C (da) | 1987-07-06 |
Family
ID=27385503
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK166581A DK150206C (da) | 1980-04-15 | 1981-04-13 | Analogifremgangsmaade til fremstilling af lrf-analoge nona- eller decapeptidamider eller ikke-toksiske salte deraf og nona- eller decapeptidderivater til anvendelse som udgangsforbindelser ved fremgangsmaaden |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0038135B1 (da) |
| KR (1) | KR850001159B1 (da) |
| AU (1) | AU543921B2 (da) |
| DD (1) | DD160534A5 (da) |
| DE (1) | DE3164661D1 (da) |
| DK (1) | DK150206C (da) |
| ES (1) | ES8207510A1 (da) |
| GR (1) | GR74501B (da) |
| IE (1) | IE51068B1 (da) |
| IL (1) | IL62449A (da) |
| NZ (1) | NZ196558A (da) |
| YU (1) | YU98981A (da) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4409208A (en) * | 1980-04-15 | 1983-10-11 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH antagonists |
| IL70888A0 (en) * | 1983-03-10 | 1984-05-31 | Salk Inst For Biological Studi | Gn rh antagonist peptides and pharmaceutical compositions containing them |
| US4547370A (en) * | 1983-11-29 | 1985-10-15 | The Salk Institute For Biological Studies | GnRH Antagonists |
| IL74827A (en) * | 1984-05-21 | 1989-06-30 | Salk Inst For Biological Studi | Peptides active as gnrh antagonists and pharmaceutical compositions containing them |
| ZA862570B (en) * | 1985-04-09 | 1986-12-30 | Univ Tulane | Therapeutic decapeptides |
| US4866160A (en) * | 1985-04-09 | 1989-09-12 | The Administrators Of The Tulane Educational Fund | Therapeutic decapeptides |
| US5084443A (en) * | 1989-12-04 | 1992-01-28 | Biomeasure, Inc. | Promoting expression of acetylcholine receptors with lhrh antagonist |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1532211A (en) * | 1974-10-25 | 1978-11-15 | Wellcome Found | Lh-rh peptide analogues |
| US4087416A (en) * | 1976-11-05 | 1978-05-02 | Parke, Davis & Company | New heptapeptides and methods for their production |
| NZ188987A (en) * | 1977-11-30 | 1982-02-23 | Salk Inst For Biological Studi | Peptide analogues of luteinizing hormone releasing factor |
-
1981
- 1981-03-18 NZ NZ196558A patent/NZ196558A/xx unknown
- 1981-03-20 IL IL62449A patent/IL62449A/xx unknown
- 1981-03-26 AU AU68814/81A patent/AU543921B2/en not_active Ceased
- 1981-03-27 DE DE8181301357T patent/DE3164661D1/de not_active Expired
- 1981-03-27 EP EP81301357A patent/EP0038135B1/en not_active Expired
- 1981-03-27 IE IE703/81A patent/IE51068B1/en unknown
- 1981-04-04 KR KR1019810001129A patent/KR850001159B1/ko active
- 1981-04-13 DK DK166581A patent/DK150206C/da not_active IP Right Cessation
- 1981-04-13 GR GR64669A patent/GR74501B/el unknown
- 1981-04-14 ES ES501321A patent/ES8207510A1/es not_active Expired
- 1981-04-15 DD DD81229265A patent/DD160534A5/de unknown
- 1981-04-15 YU YU00989/81A patent/YU98981A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ES501321A0 (es) | 1982-09-16 |
| IE810703L (en) | 1981-10-15 |
| KR850001159B1 (ko) | 1985-08-16 |
| EP0038135B1 (en) | 1984-07-11 |
| NZ196558A (en) | 1984-10-19 |
| AU543921B2 (en) | 1985-05-09 |
| AU6881481A (en) | 1981-10-22 |
| GR74501B (da) | 1984-06-28 |
| IL62449A0 (en) | 1981-05-20 |
| EP0038135A2 (en) | 1981-10-21 |
| IL62449A (en) | 1984-03-30 |
| EP0038135A3 (en) | 1982-01-06 |
| YU98981A (en) | 1984-04-30 |
| DE3164661D1 (de) | 1984-08-16 |
| IE51068B1 (en) | 1986-09-17 |
| DK166581A (da) | 1981-10-16 |
| ES8207510A1 (es) | 1982-09-16 |
| KR830005114A (ko) | 1983-07-23 |
| DK150206C (da) | 1987-07-06 |
| DD160534A5 (de) | 1983-09-07 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR900007083B1 (ko) | GnRH 길항물질 제조방법 | |
| US4444759A (en) | GnRH Antagonists II | |
| US4410514A (en) | GnRH Agonists | |
| US4565804A (en) | GnRH Antagonists VI | |
| DK149896B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af lrf-analoge nona- eller decapeptidamider eller ikke-toksiske salte deraf | |
| US4215038A (en) | Peptides which inhibit gonadal function | |
| DK166214B (da) | Gnrh-antagonistisk peptid og farmaceutisk acceptable salte heraf samt farmaceutisk praeparat indeholdende peptidet | |
| US4072668A (en) | LH-RH Analogs | |
| US4292313A (en) | LRF Antagonists | |
| EP0063423B1 (en) | Gnrh antagonists | |
| DK150206B (da) | Analogifremgangsmaade til fremstilling af lrf-analoge nona- eller decapeptidamider eller ikke-toksiske salte deraf og nona- eller decapeptidderivater til anvendelse som udgangsforbindelser ved fremgangsmaaden | |
| US4382922A (en) | Peptides affecting gonadal function | |
| US4307083A (en) | LRF Antagonists | |
| HU190949B (en) | Process for producing peptides antagonistic with hormones for releasing gonadotropine | |
| US4377574A (en) | Contraceptive treatment of male mammals | |
| US4261887A (en) | Peptide compositions | |
| US4386074A (en) | LRF Antagonists | |
| EP0047079B1 (en) | Nonapeptides affecting gonadal function | |
| KR910002702B1 (ko) | 펩티드의 제법 | |
| HU189504B (en) | Process for preparing decapeptide derivatives inhibiting the release of luteinizing hormone | |
| JPS59186948A (ja) | ＧｎＲＨ「きつ」抗物質 | |
| CS237319B2 (cs) | Způsob výroby peptidů inhibujících uvolňování gonadotropinů z hypofýzy savců | |
| WO1982000004A1 (en) | Contraceptive treatment of male mammals |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PBP | Patent lapsed | ||
| PBP | Patent lapsed |