SE0950550A1 - Extraktion av musslor - Google Patents

Description

15 20 25 30 2 ningsmedelsextrakt. Lösningsmedlet avlägsnas sedan från extraktet genom nanofiltrering för att framställa ett koncentrerat lipidextrakt. Lösningsmedlet återvinns och ytterligare lösningsmedel avlägsnas från det koncentrerade extraktet genom rotationsevaporation för att kvarlämna extraherade lipider som är särskilt rika på ETAs (eikosatetraensyror). I WO2005/073354 anges att PUFA-innehållet, där PUFA inkluderar omega-3-syran oktadekatetraen- syra, är anmärkningsvärt högre vid användning av nanofiltrering än vid an- vändning av extraktion med superkritisk koldioxid.

Extraktion med superkritisk koldioxid framhävs dock i US 6083536 som avser framställning av ett lipidextrakt som är rikt på icke-polära lipider från ett rämusselpulver av Perna canaliculus eller Mytilis edulis. Patentdokumentet är inriktat på en antiinflammatorisk behandlingsmetod för människa eller djur genom administrering av lipidextraktet enligt US 6083536.

Ett förfarande för framställning av ett lipidextrakt frän musslor beskrivs vidare i WO 2006/128244. Förfarandet innefattar proteasenzymbehandling och kan dessutom genomföras genom användning av extraktion i superkritisk fluid, såsom i t ex superkritisk koldioxid.

I WO 2006/052150 beskrivs en komposition innehållande ett mussel- extrakt och kolin eller ett kolinderivat. Kompositionen sägs ha förhöjd anti- inflammatorisk aktivitet ijämförelse med musselextrakt som inte innehäller kolin eller kolinderivat. Kompositionen sägs vidare kunna användas för be- handling av inflammation, särskilt inflammation orsakad av artrit. Vidare be- skrivs ett förfarande för framställning av en komposition innehållande mussel- extraktet och kolin eller ett kolinderivat. Lösningsmedlet som anges kan vara en superkritisk fluid, t ex superkritisk koldioxid.

I NZ Išâšåtlttêe beskrivs väciare ett förfarande för erhåtianae av giykogeit med hög renhet från rnuasier. Förfarandet innefattar bettandting av musslorna med ett prsteetytiskt enzym, såsom t ex pepein, i vatten ttnder ca 3 tântniar všd ca ïtPíš för att ge en uppsiarnning av fast återstod och en xfattanhattäg iëening av gíykegen, separatien av den fasta återstoden från den vattenhattâga tös- ningan gerient tšiieats av atanot een sedan utvinning av gâykegenet från den vattenhattiga iösnängen. Giykogenet sägs uppvisa arttäâittiainntatoràsk aktivitet eeit kunna användas tös' benandiing av artrit. 10 15 20 25 30 3 Bet finns även andra marina rårnaterial där extraktion är av intresse, Exempelvis i WO 2008/117062 så beskrivs en krilloljekomposition som inne- fattar fosfolipider, astaxantinestrar och/eller omega-3-innehåll. Krilloljekompo- sitionen erhålls från krillkött genom användning av extraktion med superkritisk fluid i en tvåstegsprocess. I steg 1 avlägsnas den neutrala Iipiden genom extraktion med ren superkritisk koldioxid eller koldioxid tillsammans med ca 5% samlösningsmedel för att erhålla en denaturerad krillprodukt. I steg 2 extraheras olja ut från den denaturerade krillprodukten genom användning av superkritisk koldioxid i kombination med ca 20% etanol.

Utöver substanserna som beskrivs ovan, såsom omega-3-fettsyror och fosfolipider, är det även känt att musslor innehåller andra substanser. Bland annat innehåller toxiska musslor alggiftet okadasyra. Blötdjur, såsom musslor, vilka innehåller mer än 160 pg okadasyra per kilo rå ätbar del, får inte salufö- ras som livsmedel, då dessa kan ge upphov till en magsjukeliknande förgift- ning hos människor. Musslor som innehåller en halt som denna eller högre halt av okadasyra kan därför betraktas som och kallas för toxiska musslor.

Förekomsten av okadasyra i t ex blåmusslor är ett stort problem för odlare av blåmusslor i t ex Bohuslän.

Att det finns okadasyra i toxiska musslor beskrivs även i ES 2161616.

För att avlägsna okadasyra från toxiska musslor beskrivs två alternativa sätt i ES 2161616. En avvattnad och frystorkad toxisk musselblandning kan bringas i kontakt med en blandning av superkritisk koldioxid och metanol eller etanol. Genom denna extraktion är det möjligt att separera ut opolära lipider, fosfolipider och okadasyra och på så vis kan okadasyran avlägsnas från toxiska musslor. En ren koldioxid, det vill säga endast koldioxid, anses däremot inte vara möjligt att använda. Okadasyran sägs även kunna neutraliseras genom att en blandning av koldioxid och ättiksyra bringas i kontakt med musselblandningen.

Syftet med föreliggande uppfinning är att tillhandahålla ett förbättrat förfarande för bearbetning och koldioxidextraktion av musslor. Ett annat syfte med föreliggande uppfinning är att tillhandahålla ett förfarande för framställ- ning av okadasyra från toxiska musslor. Ytterligare ett syfte med föreliggande uppfinning är att tillhandahålla ett förfarande för framställning av ett extrakt 10 15 20 25 30 4 som är rikt på DHA-fosfolipid, det vill säga dokosahexaensyrafosfolipid, och som dessutom är helt fritt på musseltoxiner och miljögifter.

Sammanfattninq av uppfinninqen Syftet enligt föreliggande uppfinning uppnås enligt en specifik utför- ingsform av föreliggande uppfinning medelst ett förfarande för framställning av åtminstone en koncentrerad målkomponent från musslor eller ett redan förbehandlat musselmjöl, varvid förfarandet innefattar följande steg: - eventuell förbearbetning av musslorna till en musselkrossblandning; - extraktion av musselkrossblandningen eller musselmjölet, varvid åtminstone ett extraktionssteg genomförs i ren koldioxid; - bortseparering av koldioxiden och substanser som löser sig däri för bildande av ett musseloljaextrakt innefattande nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent; och - preparativ kromatografi av musseloljaextraktet för möjliggörande av separa- tion och tillvaratagande av nämnda åtminstone en koncentrerad målkompo- nent, och varvid nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent är okadasyra (OA), DTX- 1, DTX-2, en eller flera former av DHA-fosfolipider, derivat därav eller en blandning därav.

Föreliggande uppfinning syftar bland annat till att visa på möjligheterna att tillvarata olika typer av värdefulla komponenterfrån musslor. En råvaru- mussla innehåller olika typer av sådana komponenter, såsom t ex fett. Andra komponenter som kan vara av intresse är aminoglukaner, vilka idag ges till såväl djur som människor, samt vissa funktionella proteiner. Ett annat exem- pel ärjust okadasyra som finns i högre halter i så kallade toxiska musslor.

Föreliggande uppfinning ger en vägledning hur det skulle kunna vara möjligt att tillvarata olika sådana komponenter för att på så vis erhålla en gynnsam totalekonomi vid bearbetning av musslor.

Vidare harföreliggande uppfinning sin grund i extraktion av musslor med ren koldioxid. Föreliggande uppfinning beskriver hur detta är möjligt och bör genomföras. Andra hjälplösningsmedel, såsom etanol, kan användas som hjälpmedel enligt föreliggande uppfinning, men extraktionssteget har sin 10 15 20 25 30 5 grund i att detta steg genomförs i ren koldioxid, såsom ren superkritisk kol- dioxid. Detta är annorlunda iförhällande till känd teknik, såsom t ex den extraktion som beskrivs enligt ES 2161616. Ett exempel är extraktionen av toxiska musslor enligt föreliggande uppfinning. Enligt föreliggande uppfinning löser sig okadasyran (OA) i ren superkritisk koldioxiden, med hjälp av de komponenter som redan finns i musslan, och ett samlösningsmedel, såsom etanol, behövs således inte nödvändigtvis användas i detta steg om det utförs på rätt sätt. Däremot kan etanol med fördel användas för att effektivisera pro- cessen enligt föreliggande uppfinning på andra sätt, såsom i termer av sepa- ration och utbyte. Såsom framgår enligt föreliggande uppfinning så utförs all- tid åtminstone ett extraktionssteg i ren koldioxid, såsom t ex i ren superkritisk koldioxid eller ren gasformig koldioxid, vilket inte är fallet vid extraktionen enligt ES 2161616.

Nedan beskrivs vidare olika specifika utföringsformer av föreliggande uppfinning.

Kort beskrivninq av fiquren Fig. 1 åskådliggör schematiskt olika möjliga processvägar, det vill såga såväl torr som våt väg, enligt föreliggande uppfinning.

Detalierad beskrivninq av uppfinningen Det finns olika processvägar att gå för att genomföra förfarandet enligt föreliggande uppfinning, såsom framgår från fig. 1. Detta visas nedan med olika specifika utföringsformer av uppfinningen. En av dessa specifika utför- ingsformer eller processvägar skulle kunna kallas för den ”våta process- vägen”. Enligt denna förfarandeväg processas råmusslor, vilket innebär att en mekanisk förbearbetning är av stor vikt. Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning genomförs därför en förbearbetning av musslorna med en grovkrossmetod vari hela musslor bearbetas mekaniskt och avvatt- nas med 70-90%-ig etanol, t ex 80%-ig etanol, som därefter tappas av.

Etanolblandningen kan såsom nämnts t ex ligga på 80% etanol l 20% vatten (vikt%/vikt%) för grovkrossningen. Denna etanolblandning tar upp vatten från musselköttet då dessa blandas samman, vilket leder till att torrsubstanshalten (TS) i musselköttet ökar från cirka 20% till 40-45% (vikt%). På så vis genom- förs en avvattning av musselköttet. Vid avvattningen kan även en okadasyra- 10 15 20 25 30 6 fraktion utvinnas, vilken OA-fraktion givetvis innehåller mer OA om toxiska musslor bearbetas. En sådan fraktion leds sedan bort för annan ytterligare bearbetning, såsom med nanofiltrering, hydrolys och koldioxidextraktion för utvinning av ett OA-koncentrat.

Efter avvattningssteget blandas musslorna med t ex 93-99%-ig etanol, såsom t ex 96%-ig etanol, och eventuellt i flera omgångar, och finkrossas så att dess ytor gnids mot varandra för bildande av en skalmusselkrossbland- ning. Därefter avlägsnas skaldelarna för bildande av en musselköttsbland- ning. Under finkrossningen sjunker skalen (den tyngsta fasta fasen) till botten medan musselköttet har lägre densitet och följer med etanolblandningen (vätskefasen), som pumpas i motsatt riktning till filtrering. Den tyngsta fasta fasen, det vill säga skalet, kasseras. Genom att använda denna metod uppnås flera fördelar i jämförelse med traditionella metoder. Genom metoden som beskrivs ovan så erhålls partiklar på cirka 3-4 mm som utgörs av mussel- skal samt kött som är i form av små partiklar. Eftersom det är köttet som man vill komma åt så innebär denna metod fördelar eftersom det blir förhållandevis enkelt att separera bort det krossade skalet.

Det finns vissa kända metoder för bearbetning av musselblandningar utan föregående avvattning. En sådan metod innefattar mixning av finmalda musslor (med skal) och metanol eller etanol i vatten. Detta ger en ytterst små- kornig blandning, vilket inte är fördelaktigt eftersom det då är svårare att separera köttpartiklarna som man vill samla upp.

Metoden för förbearbetning och avvattning av råmusslor enligt före- liggande uppfinning har flera fördelar. För det första är skalseparationen snabb och effektiv och medför att musselköttet håller en god kvalitet. För det andra är hela förbearbetnings- och avvattningsmetoden snabb och kan genomföras på en tid under 30 minuter. Vidare är avvattningen av musslorna effektiv, vilket ger en förhållandevis hög torrhalt för musslorna. Om denna våtvägsprocess enligt föreliggande uppfinning jämförs med t ex en torr väg där musslor kokas för att skal ska kunna avlägsnas och där det kvarvarande köttet sedan frystorkas så är förfarandet enligt föreliggande givetvis mycket snabbare, men också mycket mer energisnålt. Ett förfarande med kokning och frystorkning genomförs under 1-2 dagar och innebär förhållandevis stor 10 15 20 25 30 7 energiförbrukning vid båda delmomenten samt stor risk för skadlig fettoxida- tion.

Såsom framgår från ovan så tas eventuellt en OA-fraktion till nanofiltre- ring (se fig. 1). Denna filtrering har enligt en specifik utföringsform till syfte att separera olika komponenter med avseende på molekylvikt. Enligt en specifik utföringsform genomförs därför en membranfiltrering (nanofiltrering) på vätskefasen från fastfasseparationen, det vill säga på den fas som innefattar etanol/vatten från avvattningen. Eftersom separeringen genomförs baserat på molekylvikten hos olika komponenter så har önskad målkomponent eller öns- kade målkomponenter stor betydelse för utformningen av ett membranfilter vid användning av detta. Enligt en specifik utföringsform av föreliggande upp- finning är, såsom nämnts ovan, musslorna toxiska musslor och en membran- filtrering (nanofiltrering) genomförs på en OA-fraktion utvunnen från avvatt- ningen för separation och tillvaratagande av ett OA-koncentrat. En sådan membranfiltrering genomförs i detta fall för att separera bort fria fettsyror och annat möjligt skräp som man inte vill ha kvar. Eftersom okadasyra (okada- syraekvivalenter) har en molekylvikt (MW) av cirka 800 g/mol så kan en så- dan separation genomföras med högt utbyte. Fria fettsyror (FFA) ligger på ett MW av cirka 250 och dessa komponenter och andra med liknade förhållande- vis låga molekylvikter eller ännu lägre kan på så vis avlägsnas från delen innefattande okadasyra. Det är dock viktigt att inse att det i denna enstegs- filtrering inte är möjligt att få ett 100%-igt utbyte och en del fri fettsyra finns således kvar i den fas som innefattar okadasyra. Fasen med hög halt av fri fettsyra och annat ”skräp” kan givetvis tillvaratas och bearbetas för andra ändamål. Etanolen tas tillvara och kan recirkuleras och återanvändas.

Det är givetvis så att okadasyra inte behöver vara målmolekylen enligt föreliggande uppfinning när friska, men faktiskt även toxiska musslor bear- betas. Såsom nämnts ovan så finns även andra komponenter som kan vara av intresse i musslor och som kan tas tillvara enligt föreliggande uppfinning.

Exempel på sådana är aminoglukaner, vilka kan tillvaratas genom enzym- behandling, olika funktionella proteiner, vilka genom viss bearbetning kan tillvaratas, samt andra komponenter som kan användas i olika fodertyper, såsom foder till kyckling och fisk. Dessutom finns fett i musslor, vilket fett 10 15 20 25 30 8 innefattar olika komponenter som kan vara värdefulla inom olika segment. En komponent som är av stort intresse är de så kallade fosfolipiderna. Om fosfo- lipider är önskvärda kan ovannämnda avvattning med t ex 80%-ig etanol, vil- ket steg kan kallas en förextraktion, tjäna till att avlägsna eventuellt innehåll av OA, DTX-1 och DTX-2, avlägsna eventuellt innehåll av miljögifter, såsom dioxiner, dibensofuraner, PCB och dess ekvivalenter, DDT och dess ekviva- lenter, med flera liknande miljögifter samt avlägsna metylkvicksilver och andra tungmetaller, såsom t ex kadmium. Samtliga dessa farliga ämnen koncentre- ras till slut via membranfiltrering (nanofiltrering, RO) och kastas, bränns upp eller vad som är lämpligt.

Enligt en annan specifik utföringsform genomgår OA-koncentratet efter membranfiltreringen en extraktion i gasformig koldioxid i en kolonn, varvid bortseparation av etanol genomförs. En sådan kolonn kan vara baserad på såväl ”vanlig” som omvänd fas, t ex baserad på silika (silikapartiklar), alumina (aluminiumoxid) ellert ex Florisil. En sådan extraktion kan vidare genomföras vid t ex 50°C. Därefter kan trycket sedan ökas till superkritiskt tillstånd. En sådan betingelse kan även användas redan från början. Enligt en specifik ut- föringsform av föreliggande uppfinning genomgår därför OA-koncentratet (det OA-innehållande extraktet) efter membranfiltreringen en extraktion i super- kritisk koldioxid, eventuellt efter extraktionen i gasformig koldioxid, i en kolonn, varvid bortseparation av fria fettsyror (FFA) genomförs, för koncentre- ring av OA i OA-koncentratet och tillvaratagande av detsamma. Det som sedan följer med koncentratet efter denna extraktion är okadasyra samt viss del kvarvarande fri fettsyra. Det som sker i kolonnen är en separation där an- rikning av vissa komponenter äger rum på partiklarna i den ena änden av kolonnen. Givetvis kan olika typer av kolonner och partiklar användas med liknande och olika resultat, och de exempel som anges ovan ska endast ses som just exempel. Till exempel den kemiska beskaffenheten, såsom polarite- ten, hos partiklarna är av stor betydelse för att driva anrikningen på olika sätt.

För att sammanfatta så kan till exempel utvinning av okadasyra genom extraktion göras på följande sätt enligt föreliggande uppfinning. Först genom- förs en extraktion i gasformig koldioxid vid t ex 50 bar och 50°C. Detta löser etanolen så att denna kan separeras bort. Därefter genomförs en extraktion i 10 15 20 25 30 9 superkritisk koldioxid, vilket löser fri fettsyra så att denna kan separeras bort.

Därefter kan etanol användas igen för eluering av nästan ren okadasyra enligt föreliggande uppfinning.

Det är viktigt att förstå att det enligt föreliggande uppfinning kan finnas andra målkomponenter med denna ”våta väg” enligt föreliggande uppfinning.

Detta gäller även då toxiska musslor bearbetas och okadasyra (OA) önskas.

Exempel på sådana komponenter som kan innefattas i OA-koncentratet (det OA-innehållande extraktet) är DTX-1 och/eller DTX-2, vilka nämnts ovan och som också är toxiner i okadasyragruppen och snarlika OA.

Såsom framgår från ovan så behöver inte musselrämaterialet förbe- handlas enligt den specifika utföringsformen som beskrivs ovan utan kan även utgå från en annan typ av råmusselmaterial. Enligt en specifik utförings- form av föreliggande uppfinning är musselblandningen musselmjöl. Detta innebär att en det inte längre är fråga om en ”våtprocess” utan istället en ”torr- process” enligt föreliggande uppfinning då detta musselmjöl är torrt och inte innehåller nämnvärd halt av vatten _ Musselmjölet som på så vis kan använ- das enligt föreliggande uppfinning har förbehandlats med konventionella metoder. Dessa konventionella metoder utgör ej en del av förfarandet enligt föreliggande uppfinning. I fallet med musselmjöl så har musslor som skördats därefter kokats för att avlägsna skal, t ex genom skakning. Därefter torkas musslorna och mals sedan till ett torrt musselmjöl.

Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning används ett musselmjöl som innefattar toxiska musselrester, varvid ett OA-koncentrat (OA-innehållande extrakt) bildas och separeras bort efter extraktion av musselmjölet i koldioxid, t ex överkritisk koldioxid. OA-koncentratet innefattar sedan åtminstone flytande olja samt fri och/eller förestrad OA, DTX-1 och/eller DTX-2. Detta innebär alltså att en del av OA, DTX-1 och DTX-2 finns i fri form och en del finns i förestrad form.

Enligt en annan specifik utföringsform av föreliggande uppfinning genomförs en hydrolys på OA-koncentrat, vilken hydrolys antingen är en behandling med hydroxidlösning eller en enzymhydrolys, för omvandling av förestrad OA, DTX-1 och/eller DTX-2 till deras respektive syraformer. Ett sådant hydrolyssteg är enligt uppfinningen givetvis tänkbart på ett OA- 10 15 20 25 30 10 koncentrat oavsett om detta erhållits genom den våta eller torra process- vägen (se fig. 1).

Om en hydroxidbehandling, t ex med NaOH, genomförs enligt denna specifika utföringsform så erhålls en blandning som alltså är lik den som erhålls enligt den våta processvägen enligt föreliggande uppfinning som beskrivs ovan. Då kan en dubbelsilikarening sedan genomföras, på samma sätt som för den våta processvägen, för att koncentrera upp OA, DTX-1 och/eller DTX-2.

I fallet med enzymhydrolys så kan detta genomföras med hjälp av åt- minstone en lipas. Det finns flera lipaser som fungerar väl då det gäller att hydrolysera fettsyraförestrad och diolförestrad OA, DTX-1 och DTX-2, och dessutom fetter, till exempel grispankreaslipas eller grisleveresteras.

Enligt föreliggande uppfinning finns det olika sätt att genomföra kon- centrering av t ex okadasyra i ett extrakt. Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning genomgår OA-koncentratet en extraktion i super- kritisk koldioxid efter hydroxidhydrolys eller före enzymhydrolys, varvid bortseparation av FFA till extraktionen genomförs, för koncentrering av OA i OA-koncentratet och tillvaratagande av detsamma. Extraktionen kan i detta fall, såsom nämnts, t ex genomföras i en kolonn eller i ett nanofilter som släpper igenom FFA och koldioxid men håller tillbaka de större molekylerna OA, DTX-1 och DTX-2. Retentatet kan ledas ut till atmosfärstrycket (omgiv- ningen) där extraktet innehållande OA, DTX-1 och/eller DTX-2 samlas upp.

Ett nanofilter innebär i detta fall att en hel del lösningsmedel och annat skräp passerar nanofiltret medan OA, DTX-1 och/eller DTX-2 hålls tillbaka av nanofiltret.

I exempel 1 nedan visas ett exempel på framställning av ett OA-inne- hållande extrakt enligt föreliggande uppfinning där den ”torra vägen” åskådlig- görs och där användningen av en kolonn eller ett nanofilter enligt ovan för- klaras. Även betingelserna i själva processen kan vara av betydelse för extraktionen enligt föreliggande uppfinning. Enligt en specifik utföringsform genomförs extraktionsförfarandet enligt föreliggande uppfinning i en konti- nuerlig process där trycket för extraktionen är 300-500 bar. Enligt en annan 10 15 20 25 30 11 specifik utföringsform av föreliggande uppfinning så är trycket i processen, efter hydrolysen, sänkt till 200-275 bar och ett OA-koncentrat kan på så vis separeras bort från en ström innefattande stor andel FFA och liten andel OA, DTX-1 och/eller DTX-2. Detta OA-koncentrat enligt ovan kan sedan skickas till preparativ kromatografi för vidare rening.

Orsaken till möjligheten att via en trycksänkning fälla ut OA, DTX-1 och/eller DTX-2 är att OA-molekylen är större än FFA molekylen, 800 respek- tive 250 MW, vilket innebär att lösligheten i koldioxid för dessa två molekyl- slag skiljer sig kraftigt åt. Eftersom lösligheten är direkt proportionell mot trycket så resulterar en viss trycksänkning som är vald så att den ligger inom ett visst intervall i att OA-koncentratet fälls ut medan FFA förblir löst i kol- dioxiden.

Enligt en annan specifik utföringsform av föreliggande uppfinning recir- kuleras strömmen som innefattar stor andel FFA och liten andel OA, DTX-1 och/eller DTX-2 till extraktionen.

För att ge ett exempel på denna tryckreduktion i en process enligt före- liggande uppfinning så beskrivs nedan en variant på en processuppställning.

Denna uppställning skulle kunna innefatta en extraktor E fört ex torrt mussel- mjöl. Efter denna extraktor E återfinns en behållare för immobiliserat enzym ENZ, följt av en första tryckreduceringsventil V1 och en första separator S1.

Detta återföljs därefter av en andra tryckreduceringsventil V2 och en andra separator S2. E och ENZ arbetar vid högt tryck med ren koldioxid, t ex i inter- vallet 250-350 bar eller 350-500 bar. I koldioxiden löses olja samt OA, DTX-1, DTX-2 och fettsyraförestrad OA, DTX-1, DTX-2 samt diol-OA. När extraktet passerar ENZ så hydrolyseras estrarna, och det bildas fri OA, DTX1 och DTX-2 samt FFA, även av triglyceriderna som utgör oljan.

Därefter sänks trycket via V1 till t ex ett tryck i intervallet 150-250 bar (om trycket i E var 250-350 bar) eller till t ex ett tryck in intervallet 250-350 bar (om trycket i E var 350-500 bar). Såsom nämnts, OA-familjen (OA, DTX-1 och DTX-2) har molekylvikt runt 800 medan FFA ligger i intervallet av 200-340.

Konsekvensen är att lösligheten av OA reduceras snabbare ju mer trycket faller medan lösligheten av FFA reduceras långsammare och fortfarande är ansenlig vid t ex 200 bar. Det innebär att den sämre lösliga OA-familjen kan 10 15 20 25 30 12 fås att falla ut i S1 medan löslighet för FFA fortfarande är ansenlig. Alltså an- rikas OA-familjen i S1.

Därefter kan tänkas att trycket sänks ytterligare i S2, tex till 50 bar. Då hamnar FFA där. Likaså skulle koldioxidströmmen kunnas ta ut ur S1 och le- das tillbaka till E ett varv till. Denna ström innehållerju redan lösta FFA (me- dan OA föll ut och återfinns i ett precipitat på botten av behållaren S1). Kon- sekvensen blir då att extraktionhastigheten totalt ökar och att framställnings- processen förkortas då halten OA ökar i extraktet. Detta extrakt kan sedan tas till SPE rening, eller möjligen rentav direkt till preparativ kromatografi.

Såsom framgår från ovan så finner föreliggande uppfinning användning för såväl friska som toxiska musslor. Däremot kan detta få betydelse för hur förfarandet designas eftersom målmolekylerna i dessa två olika fall ofta inte är desamma. Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning så innefattar musslorna toxiska musslor eller innefattar musselmjölet toxiska musselrester, och där nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent som framställs är OA, DTX-1 och/eller DTX-2, eller derivat därav, vilka genom den preparativa kromatografin kan utvinnas och separeras från varandra, om nödvändigt.

Enligt en annan specifik utföringsform av föreliggande uppfinning så är musslorna friska enligt definition, det vill säga icke-toxiska. Även de icke- toxiska musslorna är av intresse att förbehandla enligt föreliggande uppfinnig.

Förbearbetningen av dessa friska musslor görs enligt föreliggande uppfinning på principiellt samma sätt som då toxiska musslor bearbetas. Enligt den våta processvägen kan musslorna därför först genomgå en grovkrossning vari musslorna tillplattas för bildande av en grovmusselkrossblandning. En sådan grovmusselkrossblandning kan enligt uppfinningen sedan avvattnas i ett etanolbad, i t ex 80%-ig etanol, eller genomgå en saltlakeavvattning, därefter finkrossas med tillsättning av t ex 96%-ig etanol, eventuellt i flera omgångar, och genomgå skalbortseparation, varefter en musselkött/etanolblandning tillvaratas. Vid grosskrossningen kan alltså etanolhalten i ett sådant etanolbad ligga på cirka 80%. Etanolhalten ska inte ligga för lågt eftersom detta inte ger en god separation. Å andra sidan ska den inte ligga alltför högt eftersom det då finns risk för att fettet från musslorna följer med vid separationen. Etanolen 10 15 20 25 30 13 från grovkrossningen avtappas och därefter tillsätts ny t ex 96%-ig etanol, eventuellt i flera omgångar. Då ett fosfolipidextrakt är det som önskas erhållas enligt föreliggande uppfinning så ska alltså etanolhalten ligga på en nivå som ger god separation, som säkerställer att fettet återfinns i önskad fas och att andra oönskade substanser kan avlägsnas. Sådana substanser är till exem- pel musseltoxiner i toxiska musslor, såsom OA vilken kan vara en av mål- molekylerna annars, men som i detta fall måste separeras bort från fettfasen, samt andra typer av gifter, såsom dioxiner, PCB, DDT, miljögifter och tung- metaller (t ex kvicksilver och kadmium). Eftersom koncentreringen önskas drivas mycket långt så kan det vara av relativt sett stor vikt att avlägsna olika typer av gifter. Detta innebär alltså att detta avvattningssteg i själva verket även fungerar som ett reningssteg då eventuell okadasyra och dess syskon DTX-1 och DTX-2, samt tungmetaller och andra gifter följer med etanolfasen och alltså inte i fettfasen.

När det gäller avvattnings- och reningssteget så kan detta genomföras i flera steg. Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning genom- förs finkrossningen med åtminstone ytterligare en tvättning i etanolbad med t ex ny 96%-ig etanol. Detta steg kan alltså göras i flera omgångar, såsom t ex 3 gånger. Analyser tas efter hand genom att prover tas ut och analyseras kontinuerligt tills att vattenhalten är tillräckligt låg. Under dessa steg kan alltså t ex en 96%-ig etanol användas i etanolbadet. De sista stegen kan även göras i överkritisk (100-500 bar/35-70°C) eller vätskeformig (70-200 bar/“l0-30 °C) koldioxid plus etanol i upp till 30% etanolinblandning, vilket då kan minska mängden etanol som behöver indunstas. Efter finkrossningen och skalbort- separationen genomförs en filtrering av den erhållna musselkött/etanol- blandning (se fig. 1). Musselköttet avlägsnas sedan i extraktionsförfarandet enligt föreliggande uppfinning (se återigen fig. 1). Enligt en specifik utförings- form av föreliggande uppfinning tillvaratas därför en musselkött/etanolbland- ning efter skalseparationen, vilken musselkött/etanolblandning genomgår en filtrering och ytterligare extraktion samt musselköttsavlägsnande för tillvara- tagande av en väsentligen vattenfri musselolje/etanolblandning.

Den väsentligen vattenfria musselolje/etanolblandningen kan enligt föreliggande uppfinning sedan tillföras till en kontinuerlig process med kol- 10 15 20 25 30 14 dioxidextraktion och koncentrering av ett DHA-fosfolipidinnehållande extrakt. Även torrt musselmjöl kan enligt föreliggande uppfinning genomgå den torra processvägen så att en sådan väsentligen vattenfri musselolje/etanolbland- ning skapas, vilken sedan på samma vis som ovan kan tillföras till en konti- nuerlig process med koldioxidextraktion och koncentrering av ett DHA- fosfolipidinnehållande extrakt (se fig. 1). Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning används därför ett torrt musselmjöl som först even- tuellt genomgår en ren koldioxidextraktion och därefter en koldioxidletanol- extraktion för bildande av en väsentligen vattenfri musselolje/etanolblandning efter lämplig bortseparation av mjölrester.

Precis såsom enligt ovan så kan processen enligt föreliggande upp- finning designas specifikt för att öka separationsgraden. Enligt en specifik utföringsform innefattar därför den kontinuerliga processen åtminstone ett trycksänkningssteg efter extraktionssteget för koncentrering av DHA-fosfolipi- der i det DHA-fosfolipidinnehållande extraktet. Detta fungerar principiellt på samma vis som beskrivits för S1 och S2 ovan.

Det finns även andra möjliga utformningar för en process enligt förelig- gande uppfinning. Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning genomgår den väsentligen vattenfria musselolje/etanolblandningen en indunstning där etanolen separeras bort och musseloljan tillvaratas och som sedan genomgår extraktion i ren koldioxid, såsom superkritisk koldioxid, för separation och tillvaratagande av fosfolipider i musseloljan. För att tillvarata fosfolipider i musselolja enligt ovan så hade det inte varit lämpligt att genom- föra detta steg i gasformig koldioxid samt etanol eftersom detta hade medfört att fosfolipider hade följt med i båda faserna. Med andra ord skulle processer enligt känd teknik, såsom enligt ES 2161616, inte vara lämpliga att använda för detta ändamål.

Såsom framgår enligt nedan så är föreliggande uppfinning, enligt en specifik utföringsform, inriktad på framtagande av ett extrakt som är rikt på vissa speciella typer av fosfolipider. Enligt en specifik utföringsform är därför nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent åtminstone en DHA- fosfolipid, såsom DHA-PC, DHA-Lyso PC, DHA-PE, DHA-PS och/eller DHA- 10 15 20 25 30 15 Pl eller en blandning därav, vilka kan användas som eller i ett läkemedel eller som kosttillskott.

Såsom allmänt känt så är omega-3-fettsyror av intresse för människors hälsa. Bland annat anses fetter som innefattar stor andel omega-3 nyttiga och effekter som sådana fetter medför är bland annat sänkning av blodfetter, blodtryck och minskad risk för hjärt- och kärlsjukdomar, förbättring av hjär- nans kapacitet, ökning av mängden serotonin i hjärnan och därmed lindrande av depressioner, bekämpning av inflammationer i hjärnans celler och blodkärl samt att cellmembraner blir mer mjuka och elastiska. En speciell typ av omega-3 som finns i större andel i fisk- och skaldjur är ovannämnda DHA (dokosahexaensyra), vilken utgör fokus i föreliggande ansökan. DHA har ock- så positiva effekter som de som beskrivs ovan, och är särskilt av intresse då det gäller funktioner i hjärnan och kognition. Det finns idag många personer som får i sig för lite DHA alternativt som inte får tillräckligt mycket DHA att nå vitala ställen i hjärnan. Det är därför av intresse att tillhandahålla preparat eller lösningar eller liknande som innefattar DHA, t ex som kosttillskott eller faktiskt som läkemedel.

DHA kan förekomma som DHA-triglycerid eller DHA-fosfolipid. Det finns ett problem med DHA då denna förekommer i triglyceridform. Biotill- gängligheten är inte speciellt hög för denna form då blod-hjärnbarriären utgör ett hinder för denna. Det samma är inte fallet då det gäller DHA-fosfolipider och biotillgängligheten är faktiskt cirka 50 gånger högre i hjärnan för denna form iförhållande till DHA i triglyceridform. Att tillhandhålla ett koncentrat/- extrakt med rikliga nivåer/halter av DHA-fosfolipider bör därför vara av stort intresse för allmänheten. Ett sådant extrakt skulle t ex kunna ges till barn för att öka kognitionen eller som ett nyttigt kosttillskott eller rentav läkemedel till alla och envar för att medföra de positiva effekter som beskrivs ovan. Att till- handahålla ett sådant extrakt är ett av syftena enligt föreliggande uppfinning.

Studier har visat på fördelar med fosfolipider som bärare för DHA.

Bland annat har studier visat på en förbättring avseende kognitionen hos barn, i så kallade prestationstester. Andra studier har visat att intag av DHA- fosfolipidföda åstadkommer en anrikning av DHA i hjärnan, det vill säga att 10 15 20 25 30 16 biotillgängligheten för denna form av DHA är högre än i förhållande till DHA- triglyceridblandningar.

Vidare finns studier som visar på de positiva effekterna som intag av DHA-fosfolipid innebär. Detta är i såväl hjärna som genom anrikning på andra ställen i kroppen, såsom i lever, lungor, plasma och blodet. DHA-fosfolipider kan alltså ha positiva effekter på hälsan och vara effektivt för att förbättra kognitionen, men kan även ha effekt vid återhämtning av vissa störningar. Vid till exempel ryggmärgsskador och hjärnskador så visar vissa studier på att DHA-fosfolipidintag kan vara lindrande och till och med effektfullt för att för- bättra tillståndet. Exempel på tillstånd som kan behandlas är oxidativ stress, inflammatoriska reaktioner, störningar på nervceller och axonal skada. Resul- tat som till exempel kan uppnås är skydd för nervceller, återuppbyggnad och återhämtning av nervtrådar, minskad oxidation i hjärnan samt återhämtning av rörelseförmåga vid olika typer av tillstånd.

Föreliggande uppfinning avser vidare ett fosfolipidextrakt innefattande åtminstone 90 vikt% fosfolipider eller derivat därav, varvid åtminstone 20 vikt% av fosfolipiderna eller derivaten därav är DHA-fosfolipider eller derivat därav. Detta innebär att föreliggande uppfinning beskriver ett extrakt som innefattar höga halter av fosfolipider, av vilka DHA-fosfolipider står för en förhållandevis hög andel. Dessa DHA-fosfolipider kan, såsom nämnts, vara åtminstone en av DHA-PC, DHA-Lyso PC, DHA-PE, DHA-PS eller DHA-Pl, eller en blandning därav. Det vanligaste fallet enligt föreliggande uppfinning är att en blandning av dessa olika DHA-fosfolipider erhålls i extraktet enligt före- liggande uppfinning.

Extraktet som beskrivs enligt föreliggande exempel skiljer sig från extrakt som beskrivs i känd teknik definierad ovan. Extrakten enligt känd teknik innefattar betydligt högre halter triglycerider och med andra ord inte lika höga halter fosfolipider. Dessutom innefattar dessa extrakt enligt känd teknik inte lika höga halter DHA-fosfolipider.

Såsom framgår så är föreliggande uppfinning inriktad på bearbetning och extraktion av musslor och musselblandningar. Däremot är det viktigt att förstå att även andra marina råvaror är möjliga att använda enligt föreliggan- de uppfinning för att framställa ett DHA-fosfolipidinnehållande extrakt enligt 10 15 20 25 30 17 uppfinningen. Exempel på sådana marina råvaror är olika musseltyper och musselblandningar, t ex torkat musselmjöl, men även krillolja, räkrom, olika typer av fiskoljor, tångräkor och andra räkor, krabbor, och blandningar därav, vissa idag outnyttjade fisksorter samt marina biprodukter. Från vissa sådana råvaror är det alltså möjligt att framställa ett DHA-fosfolipidinnehållande extrakt enligt föreliggande uppfinning.

Enligt en specifik utföringsform av föreliggande uppfinning innefattar fosfolipidextraktet åtminstone 99 vikt% fosfolipider eller derivat därav, varvid mängden DHA-fosfolipider eller derivat därav är i intervallet av 25-50 vikt%, såsom en mängd av DHA-fosfolipider eller derivat därav i intervallen 25-45, 25-40, 25-35, 25-30, 30-50, 30-45, 30-40, 30-35, 35-50, 35-45, 35-40, 40-50, 40-45 och 45-50 vikt%.

Ett fosfolipidextrakt enligt föreliggande uppfinning har höga halter DHA- fosfolipider och är dessutom är helt fritt från farliga ämnen. Med tanke på det senare är det viktigt att förstå att alla farliga substanser och annat ”skräp” som finns i vissa av dessa marina råvaror måste avskiljas så att de inte ham- nar i det DHA-fosfolipidinnehållande extraktet enligt föreliggande uppfinning.

För till exempel musslor är det därför vidare viktigt att inse att även ätbara musslor kan innehålla okadasyra och att det som skiljer ätbara musslor från icke-ätbara musslor endast är ett bestämt gränsvärde, nämligen just 160 pg okadasyra per kilo rå ätbar del. Därför, vid framställning av ett fosfolipidinne- hållande extrakt även från ätbara musslor, är det av stor vikt att separera bort eventuell okadasyra så att denna inte hamnar i det fosfolipidinnehållande extraktet. Även i ett sådant fall kan det givetvis vara av intresse att ta tillvara okadasyran och koncentrera upp denna i ett separat extrakt. Hur detta går till beskrivs ovan. Eftersom fosfolipider vidare inte löser sig i ren koldioxid så är det vidare fullt möjligt att separera fosfolipider från triglycerider (se fig. 1).

Vidare är det inte endast eventuell OA som är möjlig att separera bort enligt föreliggande uppfinning så att ett rent extrakt innefattande DHA-fosfo- lipider kan erhållas enligt uppfinningen. Andra sådana farliga substanser som kan separeras bort är t ex sådana som beskrivs ovan, såsom dioxiner, PCB, DDT, miljögifter och tungmetaller (t ex kvicksilver och kadmium). Då förfaran- det enligt föreliggande uppfinning medför att oönskade och farliga substanser, 10 15 20 25 30 18 såsom t ex tungmetaller, kvicksilverinnehållande föreningar och olika miljö- gifter (t ex PCB, DDT), kan avlägsnas kan på så vis renheten i extraktet hållas på en mycket hög nivå. Vissa av dessa substanser är mycket viktig att avlägsna då de kan passera blod-hjärnbarriären. Med andra ord kan även mycket små halter av dem vara viktigt att separera bort och avlägsna så att de inte finns i slutextraktet som ska konsumeras.

Extraktet enligt föreliggande uppfinning kan inkapslas i olika former, och kan t ex innehållas i täta kapslar som konsumeras av en människa. Inne- hållet frigörs sedan efter förtäring och DHA-fosfolipiderna kan på så vis nå hjärnan hos denna slutkonsument.

Beskrivning av figuren I fig. 1 visas ett allmänt processchema för olika möjliga vägar enligt föreliggande uppfinning. Dessa olika vägar utgår från antingen våt process- väg där hela musslor bearbetas eller torr processväg där musselmjöl är startmaterialet. Vidare visas exempel på hur olika målextrakt är möjliga att erhålla, såsom OA-, DTX-1- eller DTX-2-innehållande extrakt från toxiska musslor eller DHA-fosfolipidinnehållande extrakt från ätbara musslor eller musselmjöl.

Exempel Exempel 1. Extraktion av toxiskt musselkött enliqt den ”torra väqen” enliqt föreliqqande uppfinninq, för erhållande av ett OA-innehållande extrakt Ett musselmjöl innefattande cirka 5 mg OA/kg torrt musselkött bearbe- tas, det vill säga extraheras i ren koldioxid enligt föreliggande uppfinning. Ett OA-innehållande extrakt innefattande åtminstone flytande olja samt fri och förestrad OA. Under denna extraktion så har oljemängden relativt mot mäng- den okadasyra minskat. Därefter genomförs en hydrolys, såsom en enzym- hydrolys, och då övergår den förestrade okadasyran till dess syraformer. I oljan som återstår finns nu fortfarande cirka 5 mg OA samt cirka O,5-1 ,O g FFA. Oljan blandas och skakas sedan med etanol. Genom indunstning kokas sedan en stor andel etanol bort. Eftersom FFA då fälls ut så separeras OA och FFA, och andelen OA ökar således iförhållande till FFA. På den kvarva- rande lösningen som innehåller etanol, FFA samt OA genomförs därefter en så kallad SPE (solid phase extraction) på en silikakolonn. Genom att först 10 15 20 25 30 19 genomföra ett steg med gasformig koldioxid (50 bar, 50°C) och därefter ett steg med superkritisk koldioxid (200-350 bar), med efterföljande eluering, kan sedan OA koncentreras i ett extrakt innehållande cirka 5 mg OA och cirka 20 mg FFA (kallat OA-innehållande extrakt). Det som möjliggör denna koncen- trering är faktumet att varm gasformig koldioxiden drar med sig etanolen var- efter den superkritiska koldioxiden drar med sig FFA selektivt. På så vis koncentreras andelen OA upp successivt. Den slutgiltiga blandningen med cirka 1 del OA och 4 delar FFA går sedan till preparativ kromatografi för att OA ska kunna separeras ytterligare från FFA.

Allmänt kan sägas att utbytet av okadasyra ökar med ett ökat tryck, såsom med ett utbyte av OA av 40-45% vid cirka 250 bar och 40°C till ett utbyte av OA av 85-95% vid cirka 500 bar och 40°C i ren koldioxid. Vid ett högre tryck är det vidare möjligt att sänka förbrukningen av koldioxid, trots ökat utbyte av OA.

Vid jämförelse med en extraktion i blandning av koldioxid och etanol så är extraktion i ren koldioxid vid högt tryck, såsom vid 500 bar, enligt förelig- gande uppfinning såväl enkelt som råvaru- och energisnålt.

Exempel 2. DHA-fosfolipidinnehållande extrakt enliqt föreliqqande uppfinninq Ett DHA-fosfolipidinnehållande extrakt framställdes enligt föreliggande uppfinning. Det sista extraktionssteget enligt föreliggande uppfinning genom- fördes i ren koldioxid för att möjliggöra god separation av triglycerider och fosfolipider från varandra. I det fosfolipidinnehållande extraktet fanns 24 vikt% DHA-fosfolipider och cirka 60% EPA-fosfolipider (dubbelprov användes vid analysen). Enligt föreliggande uppfinning skulle denna koncentrering av DHA- fosfolipider i extraktet kunna ökas. Med referensförsök har påvisats att upp till åtminstone 40 vikt% DHA-fosfolipider skulle vara möjligt i det DHA-fosfolipid- innehållande extraktet enligt föreliggande uppfinning. Andelen DHA-fosfo- lipider som är möjlig beror givetvis dels på hur långt föreliggande koncentre- ring genomförs, men dels även på råvaran som används. Därför bör nivåer upp till 50 vikt% DHA-fosfolipider vara möjligt enligt föreliggande uppfinning.

Claims (21)

10 15 20 25 30 20 KRAV

1. Förfarande för framställning av åtminstone en koncentrerad mälkomponent från musslor eller ett redan förbehandlat musselmjöl, varvid förfarandet innefattar följande steg: - eventuell förbearbetning av musslorna till en musselkrossblandning; - extraktion av musselkrossblandningen eller musselmjölet, varvid åtminstone ett extraktionssteg genomförs i ren koldioxid; - bortseparering av koldioxiden och substanser som löser sig däri för bildande av ett musseloljaextrakt innefattande nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent; och - preparativ kromatografi av musseloljaextraktet för möjliggörande av separation och tillvaratagande av nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent, och varvid nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent är okadasyra (OA), DTX- 1, DTX-2, en eller flera former av DHA-fosfolipider, derivat därav eller en blandning därav.

2. Förfarande enligt krav 1, varvid förbearbetning av musslorna genomförs med först en grovkrossning vari hela musslor bearbetas mekaniskt, därefter en avvattning, sedan en finkrossning och skalbortseparation för bildande av en musselköttsblandning.

3. Förfarande enligt krav 2, varvid grovkrossningen genomgörs med tillsätt- ning av 70-90%-ig etanol och finkrossningen genomgörs med tillsättning av 93-99%-ig etanol, den senare eventuellt med tillsättning i flera omgångar.

4. Förfarande enligt krav 3, varvid musslorna är toxiska musslor och en membranfiltrering (nanofiltrering) genomförs på en OA-fraktion utvunnen från avvattningen för separation och tillvaratagande av ett OA-koncentrat. 10 15 20 25 30 21

5. Förfarande enligt krav 4, varvid OA-koncentratet efter membranfiltreringen genomgår en extraktion igasformig koldioxid i en kolonn, varvid bortsepara- tion av etanol genomförs.

6. Förfarande enligt krav 4 eller 5, varvid OA-koncentratet efter membran- filtreringen genomgår en extraktion i superkritisk koldioxid, eventuellt efter extraktionen i gasformig koldioxid, i en kolonn, varvid bortseparation av fria fettsyror (FFA) genomförs, för koncentrering av OA i OA-koncentratet och tillvaratagande av detsamma.

7. Förfarande enligt krav 1, varvid ett musselmjöl används som innefattar toxiska musselrester och varvid ett OA-koncentrat bildas och separeras bort efter extraktion av musselmjölet i koldioxid.

8. Förfarande enligt något av föregående krav, varvid hydrolys genomförs på OA-koncentratet, vilken hydrolys antingen är en behandling med hydroxid- lösning eller en enzymhydrolys, för omvandling av förestrad OA, DTX-1 och/eller DTX-2 till deras respektive syraformer.

9. Förfarande enligt krav 8, varvid en enzymhydrolys genomförs med hjälp av åtminstone en lipas.

10. Förfarande enligt krav 8 eller 9, varvid OA-koncentratet genomgår en extraktion i superkritisk koldioxid efter hydroxidhydrolys eller före enzym- hydrolys, varvid bortseparation av FFA till extraktionen genomförs, för koncentrering av OA i OA-koncentratet och tillvaratagande av detsamma.

11. Förfarande enligt något av föregående krav, varvid förfarandet genomförs i en kontinuerlig process där trycket för extraktionen är 300-500 bar.

12. Förfarande enligt krav 11, varvid trycket efter hydrolysen i processen är sänkt till 200-275 bar och ett koncentrerat OA-koncentrat på så vis kan 10 15 20 25 30 22 separeras bort från en ström innefattande stor andel FFA och liten andel OA, DTX-1 och/eller DTX-2.

13. Förfarande enligt kravet 12, varvid strömmen som innefattar stor andel FFA och liten andel OA, DTX-1 och/eller DTX-2 recirkuleras till extraktionen.

14. Förfarande enligt något av föregående krav, varvid musslorna innefattar toxiska musslor eller musselmjölet innefattar toxiska musselrester och varvid nämnda åtminstone en koncentrerad målkomponent som framställs är OA, DTX-1 och/eller DTX-2, eller derivat därav, vilka genom den preparativa kromatografin kan utvinnas och separeras från varandra, om nödvändigt.

15. Förfarande enligt något av kraven 1-3, varvid en musselkött/etanol- blandning tillvaratas efter skalseparationen, vilken musselkött/etanolblandning genomgår en filtrering och ytterligare extraktion samt musselköttsavlägs- nande för tillvaratagande av en väsentligen vattenfri musselolje/etanolbland- ning.

16. Förfarande enligt krav 1, varvid ett torrt musselmjöl används som först eventuellt genomgår en ren koldioxidextraktion och därefter en koldioxid/- etanolextraktion för bildande av en väsentligen vattenfri musselolje/etanol- blandning efter lämplig bortseparation av mjölrester.

17. Förfarande enligt krav 15 eller 16, varvid den väsentligen vattenfria musselolje/etanolblandningen genomgår en indunstning där etanolen separeras bort och musseloljan tillvaratas och sedan genomgår extraktion i ren koldioxid för separation och tillvaratagande av fosfolipider i musseloljan.

18. Förfarande enligt något av kraven 15-17, varvid den väsentligen vattenfria musselolje/etanolblandningen tillförs till en kontinuerlig process med extrak- tion i superkritisk koldioxid och koncentrering av ett DHA-fosfolipid- innehållande extrakt. 10 23

19. Förfarande enligt krav 18, varvid den kontinuerliga processen innefattar åtminstone ett trycksänkningsteg efter extraktionssteget för koncentrering av DHA-fosfolipider i det DHA-fosfolipidinnehållande extraktet.

20. Fosfolipidextrakt innefattande åtminstone 90 vikt% fosfolipider eller derivat därav, varvid åtminstone 20 vikt% av fosfolipiderna eller derivaten därav är DHA-fosfolipider eller derivat därav.

21. Fosfolipidextrakt enligt krav 20, innefattande åtminstone 99 vikt% fosfolipider eller derivat därav, varvid mängden DHA-fosfolipider eller derivat därav är i intervallet av 25-50 vikt%.