SA518400172B1 - لقاحات متعددة التكافؤ لفيروس السعار والفيروس التاجي - Google Patents

لقاحات متعددة التكافؤ لفيروس السعار والفيروس التاجي Download PDF

Info

Publication number
SA518400172B1
SA518400172B1 SA518400172A SA518400172A SA518400172B1 SA 518400172 B1 SA518400172 B1 SA 518400172B1 SA 518400172 A SA518400172 A SA 518400172A SA 518400172 A SA518400172 A SA 518400172A SA 518400172 B1 SA518400172 B1 SA 518400172B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
ser
leu
amino acids
thr
rabies virus
Prior art date
Application number
SA518400172A
Other languages
English (en)
Inventor
ريج اف جونسون
ماثيس شنيل
ماثيو بى فريمان
كريستوفير ام كولمان
ليزا اى هينسلى
كريستوفير ويربليش
Original Assignee
توماس جيفيرسون يونيفيرسيتى
ذا يونياتد ستتيس اوف امريكا ، اس ريبريسينتيد باى ذا سكيرتارى ، ديبارتمنت اوف هيلث اند هيومن سيرفيسز
يونيفيرسيتى اوف ماريلاند، بالتيمور
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by توماس جيفيرسون يونيفيرسيتى, ذا يونياتد ستتيس اوف امريكا ، اس ريبريسينتيد باى ذا سكيرتارى ، ديبارتمنت اوف هيلث اند هيومن سيرفيسز, يونيفيرسيتى اوف ماريلاند، بالتيمور filed Critical توماس جيفيرسون يونيفيرسيتى
Publication of SA518400172B1 publication Critical patent/SA518400172B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
    • C12N15/86—Viral vectors
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B25—HAND TOOLS; PORTABLE POWER-DRIVEN TOOLS; MANIPULATORS
    • B25H—WORKSHOP EQUIPMENT, e.g. FOR MARKING-OUT WORK; STORAGE MEANS FOR WORKSHOPS
    • B25H3/00—Storage means or arrangements for workshops facilitating access to, or handling of, work tools or instruments
    • B25H3/003—Holders for drill bits or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/205—Rhabdoviridae, e.g. rabies virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/215—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20041—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2760/20043—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/20011—Rhabdoviridae
    • C12N2760/20111—Lyssavirus, e.g. rabies virus
    • C12N2760/20141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2760/20143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
    • C12N2770/00011—Details
    • C12N2770/20011—Coronaviridae
    • C12N2770/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Mechanical Engineering (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بطرق وتركيبات لحث الاستجابة المناعية immune response التي تمنح حماية مشتركة ضد الإصابة infections إما بأي من أو بكلاً من فيروس السعار rabies virus أو الفيروس التاجي coronavirus، و/أو التي من الممكن استخدامها لعلاج إصابة موجودة بفيروس السعار و/أو الفيروس التاجي لعلاج عرض واحد خاص بهما على الأقل و/أو لإبطال أو لإزالة عوامل الإصابة infecting agents. وبشكل خاص، يوفر الاختراع الحالي ناقل vector فيروس سعار مأشوب recombinant مشتملا على تسلسل نيوكليوتيد مشفر لقطعة بروتين سكري مستمنع immunogenic glycoprotein للفيروسات التاجية واحدة على الأقل، بالإضافة إلى التركيبات الدوائية المشتملة على نواقل اللقاح vaccine vectors. شكل1

Description

لقاحات متعددة التكافؤ لفيروس السعار والفيروس التاجي ‎MULTIVALENT VACCINES FOR RABIES VIRUS AND CORONAVIRUSES‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع يتعلق الكشف الحالي بشكل عام بمجال اللقاحات ‎vaccines‏ وطرق وتركيبات العلاج و/أو التلقيح ضد الإصابات الفيروسية ‎ald (Sing .»1:81 infections‏ يتعلق الكشف الحالي باللقاحات متعددة التكافؤ ‎multivalent vaccines‏ كعامل تلقيح ‎immunization agent‏ أو علاج منفرد ضد الإصابات وواحد أو كلا من فيروس ‎virus‏ السعار ‎rabies‏ و/أو ‎(ug ull‏ التاجي ‎«Coronavirus‏ مثل الفيروس
Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus ‏التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط‎ -(MERS-CoV) تعد الفيروسات التاجية ‎Coronaviridae‏ من عائلة فيروسات (مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط والفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة ‎Severe Acute‏ ‎(SARS-CoV) Respiratory Syndrome Coronavirus 0‏ التي تصيب الجزء التنفسي العلوي ‎upper‏ ‎respiratory‏ بشكل أساسي والجهاز الهضمي ‎gastrointestinal‏ للثدييات والطيورء وتكون مسئولة ‏عن الأمراض الحادة والمزمنة ‎acute and chronic diseases‏ للأجهزة التنفسية؛ الكبدية ‎chepatic‏ ‏الهضمية والعصبية ‎neurological‏ تكون الفيروسات التاجية عبارة عن فيروسات الحمض النووي ‏الرربوزي ‎(RNA) ribonucleic acid‏ مغلفة وحيدة الشريط ‎single-stranded‏ إيجابية الاتجاه ‎positive-‏ ‎sense 5‏ ولديها قفيصة النووية ‎nucleocapsid‏ للمركز الحلزوني ‎helical symmetry‏ وفيريونات ‎virions‏ ‏ذات مظهر إكليلي ‎appearance‏ عءلنل-000. تتراوح جينومات ‎genomes‏ الفيروسات التاجية من ‏حوالي 26 حتى حوالي 32 كيلوقاعدة. ‏تكون فيريونات كل فيروس تاجي حوالي 100 نانومتر تقريبا وذات مظهر إكليلي بسبب بروتينات ‎proteins‏ شوكية على شكل ‎Lac‏ غليظة ‎club-shaped spike‏ (5) على شكل ‎Lae‏ غليظة تبرز 0 .من سطح الغشاء. يعد البروتين الشوكي ‎spike protein‏ هو بروتين الغشاء الفيروسي ‎viral‏ ‎receptor ‏المسؤول عن مدخل الخلية ويتضمن مجال 51؛ المسئول عن ريط مستقبل‎ membrane ‏سطح الخلية؛ ومجال 52؛ حيث يكون عبارة عن وحدة فرعية مثبتة للغشاء ‎membrane-anchored‏ ‎.subunit
بعد إدخال الخلية المصابة؛ تنسخ الفيروسات التاجية الحمض النووي الرببوزي الخاصة بها وتنتسخ الفيروسات في سيتوبلازم الخلية المصابة. يتوسط الاستنساخ عن طريق خلق سلالة الحمض النووي الريبوزي معاكسة للكود؛ حيث تتوفر كنموذج لجينومات فيروسية إضافية والاستنساخ ‎transcription‏ ‏ثم يتم إدخال الفيروسات وتنبعث من الخلية المصابة ‎.infected cell‏ يظهر الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مؤخرا كفيروس تاجي بشري مسبب للمرض ‎pathogenic‏ بدرجة كبيرة. منذ التعرف عليه في 2012؛ تسبب الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في 1700 إصابة مع 735 معدل وفاة الحالات تقريبا. طبقا للوياء ودليل التسلسل؛ يعد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط فيروس حيواني ‎zoonotic virus Lill‏ ينتقل إلى البشر عن طريق خفاش في المقبرة المصرية ‎Egyptian Tomb Bat‏ والجمال وحيدة السنام. تم 0 إيجاد جزءِ قصير من جينوم الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في عينة خفاش في المقبرة المصرية بينما وجدت دراسات عديدة إصابات بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الحمض النووي الريبوزي؛ وأجسام مضادة ‎antibodies‏ ‏لمضاد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في الجمال في الشرق الأوسط وأفريقيا. تم ربط انتشار الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط من مستودع الحيوان إلى البشر وبائياء 5 .وتم ملاحظة تفشي الوياء من البشر إلى البشر في مستشفيات الشرق الأوسط وكوريا الجنوبية. لابد من أن يتم التعرف على الآلية الدقيقة للمنشاً الحيواني أو الانتقال من البشر للبشرء بالرغم من فرضية الانتقال عن طريق الإفرازات التنفسية ‎respiratory secretions‏ أو القطرات التنفسية ‎respiratory‏ ‎droplets‏ الصغيرة. يشفر 30 كيلو قاعدة من جينوم ‎genome‏ الحمض النووي الرببوزي إيجابي الاتجاه وحيد الشربط 0 لللفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 10 بروتينات تقريبا: اثنين من بروتينات النسخ؛ ثلاثة بروتينات بنيوية ‎«(My 2 ¢E) structural proteins‏ البروتين السكري ‎glycoprotein‏ (5) السطحي (الشوكي ‎«(spike‏ وخمسة بروتينات غير بنيوية ‎.nonstructural proteins‏ يكون من الصعب فهم المرض البشري الذي يتبع الإصابة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. معظم مرضى متلازمة تنفس الشرق الأوسط ‎middle east respiratory syndrome‏ ‎(MERS) 5‏ الأكثر شدة يكون لديهم حمى ‎fever‏ أعراض الجهاز التنفسي السفلي ‎lower respiratory‏ ‎ctract‏ وعكة صحية ‎cmalaise‏ وعادة التهاب رئوي ‎pneumonia‏ يوفر الفحص الصدري بأشعة أكس
‎Chest X-rays‏ والفحص بالتصوير المقطعي المحوسب ‎(CT) Computed Tomography scans‏ الدليل على وجود التهاب في 430 ‎lung inflammation‏ ويؤدي هذا إلى تقليل وظيفة الرئة ‎lung‏ ‎function‏ والموت في 5 تقريبا من الحالات. لقد ركزت الأبحاث على تطوير الإجراءات المضادة للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسطء والعديد من المجموعات تعرفت على العقاقير» اللقاحات؛ الأجسام المضادة؛ والعلاجات الأخرى التي تكون فعالة في المختبر وفي نماذج الحيوانات الصغيرة. في العمل ذات الصلة؛ قام الباحثون بتطوير الأنظمة الأساسية المختلفة أيضا والتي تكون فعالة في نماذج الحيوانات الصغيرة للفيروس التاجي المسبب للمرض في البشر: الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. أخيراء طور الباحثون العديد من الطرق المشجعة للقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط؛ بالرغم 0 .من ذلك؛ لا توجد لقاحات دخلت في التجارب الإكلينيكية أو تم تحسينها من أجل الاستخدام في البشر أو الحيوانات الأخرى. لقد ركز معظم تصميم اللقاح على المستضد السائد مناعيا الأساسي ‎«immunodominant antigen‏ يقع بروتين (5) الشوكي على سطح الفيريون ‎cvirion‏ والذي ‎ashy‏ بوظيفة الرابط ‎ligand‏ لمستقبل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ‎gh‏ بيبتيديل بيبتيداز 4 4 ‎dipeptidyl peptidase‏ ‎((DPP4) 5‏ المعروف أيضا ب سي دي 26 0026). يعد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط بروتين سكري عبر غشائي ينشطر إلى مجال 51 و52. تعادل الأجسام المضادة المعطلة للفيروس ‎«(VNA) Virus neutralizing antibodies‏ والتي يتم إنتاجها نتيجة للإصابة أو التطعيم بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 الإصابة بالفيروس ‎virus infection‏ في المختبر وتحمي الرئة من الإصابة بالمرض في نماذج الفتران. لقد تم استخدام أساليب اللقاح في بروتين الفيروس 0 اتتاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 إما إذا كان بروتين 5 كامل الطول أو بروتين 5 المأشوب ‎recombinant 5 protein‏ من الإيكولاي ‎E coli‏ أو ‎WA‏ الحشرات المتكونة كجسيمات نانوية ‎nanoparticles‏ لقد استخدمت الأنظمة الأساسية التعبير المعتمد على البلازميد ‎plasmid‏ أو التغيرات الشوكية ‎spike variants‏ المعبرة عن النواقل الفيروسية ‎vectors‏ ل10» مثل ‎ug pd‏ اللقاح المعدل أنقرة ‎(MVA) modified vaccine virus Ankara‏ أو الفيروسات الغدية ‎adenoviruses‏ للتعبير عن 5 الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 8. تأتي كل من أساليب اللقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط المختلفة مع نقاط القوة والضعف المستقلة؛ ‎Jie‏ سهولة الإنتاج؛
الاستمناع ‎HEY) (immunogenicity‏ السلبية ‎adverse effects‏ الظاهرة؛ الإمراضية المتبقية ‎residual‏ ‎pathogenicity‏ لابد من توازن تلك العوامل لكي يتم خلق اللقاح الذي يعد سهل الاستخدام في الحيوانات والبشر. على سبيل المثال؛ يتم تطوير العديد من اللقاحات المختلفة ضد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق ‎aug)‏ ولا يوجد أي منهم متاحا للاستخدام. لكل اللقاحات؛ لابد من توافر الاعتبارات الأساسية لكي يتم استخدامها ألا وهي التكلفة؛ الأمان؛ والاستمناع. تم إثبات أن النواقل الفيروسية فعالة بدرجة كبيرة؛ ولابد من توافر الأمان. على سبيل المثال؛ بالرغم من أنه قد وجد أن الفيروسات الغدية المختلفة للتعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 أو 51 كانت مستمنعة في ‎Ql‏ تضمنت الاهتمامات المناعة الموجودة من قبل وطول العمر للاستجابات المناعية 0 المستحثة؛ لتلك النواقل على الأقل ‎LADS Jie‏ لا تعتبر المناعة الموجودة مسبقا الأمر الأساسي للنواقل المعتمدة على فيروس اللقاح المعدل أنقرة؛ حيث تعتبر ناقصة النسخ في البشرء ولا تكون فعالة بدون الحقن ‎inoculations‏ المتعدد. تكون لقاحات الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي ‎(DNA) deoxyribonucleic acid‏ أو اللقاحات المعتمدة على بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 الأسرع لنقص المناعة المستقلة. تتطلب لقاحات الحمض النووي دي أوكسي رببوزي؛ 5 بالرغم من ذلك؛ كمية كبيرة نسبيا من الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي (مثل 2-0.5 مللي جرام) وحقن متعدد من أجل حث الاستجابات المناعية ‎immune responses‏ القوية في ‎lal‏ وقرد المكاك ‎.rhesus macaques‏ تم دراسة طرق أخرى مع بروتين 5 المأشوب أو الوحدة الفرعية الخاصة به كلقاحات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. أخيراء يعتبر لقاح الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي المتبع بالتعزيز بالبروتين المأشوب وقائي في 38 المكاك. ويما أن كل تلك الطرق 0 الموضحة تعزز النتائج؛ فيجب الانتظار حتى يتم ترجمتها إلى لقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط بشري. في حد ذاته؛ هناك حاجة إلى تطوير اللقاح الإضافي المرشح للعلاج أو المناعة ضد الفيروسات المناعية؛ ‎Jie‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. ‎(ging‏ اللقاح المعتمد على الرابدو ‎Rhabdovirus‏ على توازن في العوامل التي تثبت فاعلية لقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق 5 الأوسط. تم دراسة اللقاحات الناقلة للرابدو ‎Rhabdovirus-vectored vaccines‏ المعتمدة على فيروس السعار ‎(RABV) rabies virus‏ وفيروس التهاب ‎adll‏ الحويصلتي ‎(VSV) vesicular stomatitis virus‏
من أجل مسببات المرض ‎pathogens‏ البشربة العديدة. تم استخدام كلا من فيروس السعار وفيروس التهاب الفم الحويصلي مؤخرا بنجاح كلقاحات لفيروس الإيبولا ‎(EBOV) Ebola virus vaccines‏ وكانت الطرق إما قريبة من التجارب الإكلينيكية (فيروس السعار) أو دخلت تقريبا في الحالة 2 للتجارب الإكلينيكية (فيروس التهاب الفم الحويصلي). تعتمد اللقاحات المعتمدة على فيروس التهاب الفم الحويصلي على نسخ المختص فيروس التهاب الفم الحويصلي؛ الحي للتعبير عن البروتين الأجنبي ‎foreign protein‏ قيد الاهتمام» يعتمد النظام الأساسي للقاح فيروس السعار على سلاسل لقاح فيروس السعار الموهنة بدرجة كبيرة والحية أو فيريونات فيروس السعار غير النشطة التي تحمل البروتينات الأجنبية المدرجة داخل الغشاء الفيروسي ‎viral envelope‏ تم استخدام فيروس السعار- لقاحات لفيروس الإيبولا غير النشطة ‎inactivated‏ والموهنة الحية ‎Live-attenuated‏ بنجاح ضد 0 _لقاحات لفيروس الإيبولا. ويشكل خاص؛ تستخدم اللقاحات المعتمدة على فيروس السعار غير النشطة بشكل واسع وآمن على البشر حيث تكون اللقاحات المعتمدة على مسببات العدوى أو فيروس السعار غير النشطة آمنة على الحيوانات. كلقاحات مزدوجة ‎cdual vaccines‏ تحث النواقل المعتمدة على فيروس السعار الأجسام المضادة المعادلة ضد كلا من فيروس السعار ومسبب المرض المستهدف. يتم استخدام لقاح فيروس السعار الحية بشكل واسع في الحيوانات البرية ويكون لديه القدرة على 5 إقصاء السعار بنجاح في أورويا الغربية. في هذه الأثناء؛ يتم استخدام حوالي 15 مليون جرعة من لقاحات فيروس السعار غير النشطة بنجاح في البشر كل عام. الوصف العام للاختراع ‎gla‏ الكشف الحالي بتركيبات اللقاح المأشوب ‎recombinant vaccine‏ الجديدة التي تعتمد على تعديل ناقل لقاح فيروس السعار المأشوب للتعبير عن واحد أو ‎SST‏ من البولي بيبتيدات ‎polypeptides‏ ‏0 المستمنعة للفيروس التاجي؛ مثل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو البروتين السكري للفيروس التاجي المسبب للفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة (مثل؛ البروتين السكري الشوكي (5))؛ لدرجة أنه يتم حث الاستجابات المناعية الخلوية ‎cellular‏ و/أو الخلطية ‎humoral‏ ضد الإصابة بفيروس السعار و/أو الفيروس التاجي بعد إعطاء تركيب اللقاح المأشوب الخاص بالكشف أو الفيريون المأشوب المعتمد عليها. ومن المفضل» أن يتم إضعاف ناقل لقاح 5 فيروس السعار لإزالة أو تقليل سعته من أجل أن يصل الأذى العصبي إلى مستوى آمن. يوفر ‎Lad‏ ‏الكشف تركيبات وطرق التلقيح أو علاج الإصابات إما عن طريق أيا من أو كلا من فيروس السعار
والفيروس التاجي؛ مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. من الممكن أن يتم الإشارة إلى تركيبات اللقاح المأشوب الخاص بالكشف ك 'ثنائية التكافؤ ‎"bivalent‏ أو 'متعددة التكافؤٌ ‎"multivalent‏ بسبب كونها تركيبة وحيدة قادرة على الحث المتتابع للاستجابة المناعية ضد اثنين أو ‎JST‏ من مسببات المرض الفيروسية؛ ‎(io‏ ‏5 فيروس السعار والفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. من الممكن أن تستخدم تركيبات اللقاح الخاصة بالكشف كشكل ‎(Aly‏ أي؛ لحث الاستجابة المناعية الخلوية و/أو الخلطية كحماية ضد الإصابة المتتالية أو كتصدي لأي من أو لكل من فيروس السعار و/أو الفيروس التاجي؛ ويتم استخدامها ‎(ladle‏ أي؛ لحث الاستجابة المناعية الخلوية و/أو الخلطية لتساعد في تعطيل أو تطهير
الإصابات الموجودة مسبقا عن طريق أيا من أو كلا من فيروس السعار أو الفيروس التاجي.
0 وبذلك؛ يتعلق الكشف الحالي بالطرق والتركيبات المستخدمة في حث الاستجابة المناعية التي تحدث حماية مزدوجة ضد الإصابات بواسطة أيا من أو كلا من فيروس السعار أو الفيروس التاجي؛ و/أو حيث يتم استخدامها بشكل علاجي للإصابة الحالية بفيروس السعار و/أو الفيروس التاجي لعلاج عرض واحد على الأقل و/أو لتعطيل أو تطهير عوامل الإصابة ‎.infecting agents‏ ‎coll‏ في أحد النواحي؛ يوفر الكشف الحالي ناقل فيروس السعار المأشوب المشتمل على تسلسل
النيوكليوتيد ‎nucleotide‏ المشفر عند بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزءٍ منه لفيروس تاجي واحد على الأقل. يشتمل بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزءِ ‎die‏ على قطع البروتين السكري للفيروس التاجي؛ ‎Jie‏ قطع النهاية ع ‎c-terminal truncation‏ للبروتين الشوكي » أو البروتين الكيميري المشتمل على مجال 1 للبروتين الشوكي ومثبت الغشاء ‎-membrane anchor‏ في أحد النماذج؛ يتضمن قطع النهاية » للبروتين الشوكي مجال ‎ST‏ للبروتين الشوكي. في نموذج ‎(Alda)‏
0 يتم إزالة أحماض أمينية ‎amino acids‏ في قطع النهاية ع تتراوح من حوالي 15 حتى حوالي 35 حمض أميني (مثل؛ حوالي 16 حمض أميني حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 27 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 19 حمض أميني؛ أو حوالي 29 حمض أميني). يكون مثبت الغشاء من الفيروس باستثناء الفيروس التاجي؛ مثل؛ فيروس السعار. في نموذج خاص؛ يشتق مثبت الغشاء من البروتين
5 السكري(6) لفيروس السعارء؛ على سبيل المثال من الممكن أن يتضمن مثبت الغشاء ‎hn‏ لواحد على
الأقل من: مجال خارجي ‎Jas‏ عبر غشائي ‎transmembrane domain‏ (111)؛ ومجال سيتوبلازمي
‎(CD) cytoplasmic domain‏ للبروتين السكري لفيروس السعار.
‏ومن ناحية خاصة؛ يوفر الكشف الحالي ناقل فيروس السعار ‎rabies virus vector‏ المأشوب المشتمل
‏على تسلسل النيوكليوتيد المشفر عند بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎die gin‏ عند فيروس تاجي واحد على الأقل و/أو بروتين كيميري ‎chimeric protein‏ مشتمل على بروتين سكري مستمنع
‏واحد على الأقل أو جزءِ منه عند فيروس تاجي واحد على الأقل.
‏من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف الحالي لقاح متعدد التكافؤ يكون فعالا ليحمي ضد الإصابة بواحد أو
‏كل من فيروس السعار أو الفيروس التاجي؛ المشتمل على ناقل فيروس السعار المأشوب الذي يعبر
‏عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزء ‎die‏ عند فيروس تاجي واحد على الأقل.
‏0 .من ‎gal ali‏ يوفر الكشف الحالي تركيبة لقاح يشتمل على لقاح متعدد التكافؤ واحد على الأقل ويكون فعالا ليحمي ضد الإصابة بواحد أو كل من فيروس السعار أو الفيروس التاجي؛ المشتمل على ناقل فيروس السعار المأشوب الذي يعبر عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎Sa‏ ‏منه عند فيروس تاجي واحد على الأقل. في نموذج؛ تشتمل أيضا تركيبة اللقاح على ‎Jala‏ مقبول دوائيا.
‏15 من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف الحالي طريقة حث الاستجابة المناعية التي تحمي ضد الإصابة بواحد أو كل من فيروس السعار أو الفيروس التاجي في الهدف؛ المشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة علاجيا من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل لقاح فيروس السعار المأشوب الذي يعبر عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎die gia‏ عند فيروس تاجي واحد على الأقل. من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف طريقة حث وتعطيل الأجسام المضادة ضد الفيروس ‎AE‏ و/أو
‏0 فيروس السعار في هدف مصاب أو تعرض لأي من أو كل من الفيروسات المذكورة؛ المشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة ‎Ladle‏ من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل لقاح فيروس السعار المأشوب الذي يعبر عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جز مشتق من البروتين السكري لفيروس تاجي واحد على الأقل. من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف الحالي طريقة علاج هدف مصاب بفيروس تاجي و/أو فيروس
‏5 السعارء مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة علاجيا من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل لفاح فيروس السعار المأشوب الذي يعبر عن بروتين سكري مستمنع للفيروس التاجي واحد على
الأقل أو ‎gia‏ منه؛ حيث يحث اللقاح المذكور الاستجابة المناعية المؤثرة ضد واحد أو كل من الفيروسات المذكورة. في نماذج محددة؛ يكون البروتين السكري المستمنع للفيروس التاجي أو ‎die ga‏ المشفر بواسطة ناقل لقاح السعار المأشوب المستخدم في جوانب مختلفة من الكشف الحالي عبارة عن بروتين سكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. من الممكن أن يكون البروتين السكري المستمنع أو جزء منه؛ في نماذج مختلفة ونواحي هناء عبارة عن بولي بيبتيد مشتمل على تسلسل حمض أميني للمتوالية رقم 8( 12؛ أو 14. في نماذج أخرى محددة؛ يكون البروتين السكري المستمنع للفيروس التاجي أو ‎die gia‏ المشفر بواسطة ناقل لقاح السعار المأشوب المستخدم في جوانب مختلفة من الكشف عبارة عن بروتين سكري 0 الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. في نماذج أخرى محددة؛ يعبر ناقل فيروس السعار المأشوب المستخدم في جوانب مختلفة للكشف أيضا عن واحد أو أكثر من بروتينات الفيروس التاجي الإضافية أو الأجزاء المستمنعة الخاصة به. في نماذج مختلفة؛ من الممكن أن تكون بروتينات الفيروس التاجي الإضافية عبارة عن بروتين» أو أجزاء مستمنعة منه؛ يتم اختياره من مجموعة تتكون من عديد البروتين المتنسخ ‎replicase‏ ‎cpolyprotein 5‏ بروتين ‎BE‏ بروتين 5 بروتين 84 أو بروتين غير بنيوي؛ على سبيل المثال؛ من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. في نماذج مختلفة؛ يتم اختيار بروتينات الفيروس التاجي الإضافية من المجموعة التي تتكون من أي واحد من بروتينات الفيروس التاجي؛ أو الأجزاء المستمنعة الخاصة به. في نماذج مختلفة أخرى» يتم اختيار بروتينات الفيروس التاجي الإضافية من مجموعة تتكون من أي واحد من 0 بروتينات الفيروس ‎alll‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسطء أو الأجزاء المستمنعة ‎immunogenic‏ ‏25 الخاصة به. يتأمل الكشف أيضا في التعبير عن البروتين السكري للفيروس التاجي بواسطة نواقل لقاح فيروس السعار المأشوب المستخدم في العديد من نواحي الكشف وبتم التعبير ‎die‏ كأجزاء مستمنعة. يكون ‎gall‏ المستمنع لبروتين الفيروس التاجي عبارة عن؛ من أهداف هذا الكشف؛ أي جزءِ من بروتين 5 الفيروس التاجي الذي يكون قادرا بشكل كبير على حث نفس الاستجابة المناعية كبروتين مناظر كامل الطول. من الممكن أن تشير نفس الاستجابة المناعية فعليا إلى على سبيل ‎(Jl‏ حيث
يكون تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد القطع تقريبا نفس ‎al‏ أو أقل من حوالي 7275 أو 180( أو 290 أو 195 أو 799 أو أكثر من تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد بروتين الفيروس التاجي كامل الطول المختبر عند نفس الظروف. في نموذج خاص؛ يحتوي ‎eda‏ البروتين السكري المستمنع للفيروس التاجي على مجال 51 للبروتين الشوكي.
يتأمل الكشف أيضا في التعبير عن أي بروتين للفيروس التاجي الإضافي بواسطة نواقل فيروس السعار المأشوب المستخدم في نواحي مختلفة للكشف وبتم التعبير ‎gal die‏ مستمنع. تعد الأجزاء المستمنعة لبروتين الفيروس التاجي ‎Ble‏ عن» من أهداف هذا الكشف» أي جزءٍ من بروتين الفيروس التاجي الذي يكون قادرا بشكل كبير على حث نفس الاستجابة المناعية كبروتين مناظر كامل الطول. من الممكن أن تشير نفس الاستجابة المناعية فعليا إلى على سبيل ‎(JB‏ حيث يكون تركيز
0 الأجسام المضادة المستحثة ضد الأجزاء تقرببا نفس التركيز» أو أقل من حوالي 775؛ أو 80 أو 0 أو 295 أو 299 أو أكثر من تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد بروتين الفيروس التاجي كامل الطول المختبر عند نفس الظروف. في نماذج أخرى؛ يتم إضعاف لقاح فيروس السعار المأشوب؛ لدرجة أنه يتم استبعاد خصائص الفوعة العصبية ‎neurovirulence properties‏ الخاصة به أو تقل ‎Wad‏ لدرجة أنه يتم تجنب الضرر العصبي ‎neurological damage 5‏ النموذجي لفيروس السعار. في نماذج معينة؛ يعد لقاح فيروس السعار المأشوب عبارة عن اللقاح الضعيف الحي " فيروس السعار 1319 580 " ويتم إضعافه بواسطة ممر استنبات النسيج ويستخدم كلقاح فموي حي ‎live‏ ‎oral vaccine‏ للأحياء البرية في أورويا لسنوات عديدة. في نماذج محددة أخرى؛ يشتق لقاح فيروس السعار المأشوب من فيروس السعار 1319 ‎SAD‏ عن 0 طريق توفر تغيرات جينية إضافية والتي تعمل ‎Load‏ على إضعاف ‎attenuation‏ الفيروس. من أهداف هذا الكشف؛ يشير مصطلح "مشتق" إلى جسيم الحمض النووي المعدل (مثل؛ ناقل اللقاح ‎vaccine‏ ‎(vector‏ نسبة للأحياء البربة أو أي مصدر جزيئي آخر حيث يحدث بداخله التغييرات؛ حيث تتضمن التغييرات تغييرات جينية و/أو تغييرات ‎Alla‏ مشتملة على بدائل النيوكليوتيد المفردة (طفرات النقطة ‎«(point mutations‏ الحذف ‎«deletions‏ الإدخال ‎«insertions‏ الانقلاب ‎cinversions‏ طفرات 5 الننقطة المتعددة ‎point mutations‏ ع1001«» والتغييرات الكيميائية ‎chemical changes‏ مثل ‎die‏ ‎methylation‏ الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي أو الأستلة ‎-acetylation‏ في نماذج محددة؛ أشتق
فيروس السعار 319 ‎SAD‏ ليكون "بي ان اس بي ‎"BNSP‏ عن طريق إدخال تسلسل الإشارة لنسخ التوقف- البداية الجديد فيروس السعار المحاط بواسطة مواقع التقييد الوحيدة 257177 ‎Nhels‏ بين البروتين النووي ‎(N) nucleoprotein‏ وجينات البروتين الفسفوري ‎(P) phosphoprotein‏ لإدخال الجينات الأجنبية ‎foreign genes‏ (انظر شكل 1). في نموذج آخر؛ يشتق ناقل ‎Lad BNSP‏ (ويضعف) عن طريق إدخال تغير 88361 عند الحمض الأميني 333 لبروتين 6 لفيروس السعار (انظر شكل 1). تم توضيح طفرة 333 لإضعاف الفوعة العصبية ‎neurovirulence‏ بشكل
كبير لفيروس السعار في الفأر البالغ. في نماذج معينة أخرى؛ يوفر الكشف خلايا المضيف التي تعمل على تقل المادة الوراثية الفيروسية مع لقاحات فيروس السعار المأشوب طبقا للكشف من أجل الأهداف؛ المتضمنة؛ التعبير عن البروتين
0 المشفر بواسطة لقاحات الفيروس و/أو لتوليد فيريونات سعار مأشوبة؛ ‎lly‏ يتم عزلها واستخدامها في تركيبات اللقاح طبقا لجوانب مختلفة ونماذج الكشف. من الممكن أن تتضمن خلايا المضيف المناسبة أي خلية عرضة للنقل أو للتلوث في المختبر مع لقاح فيروس ‎land‏ متضمنا أي خطوط خلية بشرية أو خطوط خلية حيوانية. من المفضل أن يتم صنع فيروسات لقاح السعار وإنتاج أي فيريونات فيروسية واستخدامها كلقاحات
5 طبقا لأي متطلبات ضرورية قومية و/أو عالمية للصحة والأمان بالنسبة لفيروس السعار والفيروسات التاجية؛ ‎fie‏ طبقا لمتطلبات ‎Se‏ الولايات المتحدة للتحكم في الأمراض ‎Center for Disease‏ ‎(CDC) Control‏ أو منظمة الصحة العالمية ‎.(WHO) World Health Organization‏ من الممكن أن تتضمن مركبات اللقاح طبقا للكشف؛ في نماذج محددة؛ حامل مقبول دوائيا أو سواغ ‎excipient‏ كما هو موضح بالأسفل.
0 في نموذج ‎AT‏ للكشف؛ يوفر الكشف نواقل لقاح فيروس السعار المأشوب؛ ‎lly‏ تتضمن: (أ) ‎BNSP333-GP‏ (لقاح ناقل فيروس سعار مأشوب؛ مؤهل للنسخ يعبر عن ‎ZEBOV GP‏ لسلالة ماينجا ‎¢(Mayinga‏ (ب) ‎BNSP333-S‏ (لقاح تاقل فيروس سعار مأشوب » مؤهل للنسخ ‎replication-‏ ‎competent‏ يعبر عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط)؛ (ج) ‎BNSP333-‏ ‏9 (لقاح ناقل فيروس سعار مأشوب؛ مؤهل للنسخ يعبر عن بروتين 8 للفيروس التاجي لمتلازمة
5 تنفس الشرق الأوسط مع قطع النهاية ¢ للحمض الأمينى 29)؛ (د) ‎BNSP333-SA19‏ (لقاح ناقل فيروس سعار مأشوب؛ مؤهل للنسخ يعبر عن بروتين 8 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق
الأوسط مع قطع النهاية ع للحمض الأمينى 29)؛ (ه) ‎BNSP333-S1‏ (لقاح ناقل فيروس سعار
مأشوب؛ ‎age‏ للنسخ يعبر عن بروتين كيميري المشتمل على مجال 51 للبروتين السكري 5 للفيروس
‎all‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط والمجال الخارجي؛ المجال عبر الغشائي؛ والمجال
‏السيتوبلازمي لفيروس السعار0 ). لا تجعل تلك التركيبات المحددة معروفة ضمن نطاق الكشف
‏5 والأمثلة الخاصة بتلك المركبات الكشف مقتصرا على أي طريقة. لقد وجب التنويه أيضا ‎(le‏ أنه
‏تم استخدام ناقل لقاح السعار غير مؤهل الاستنساخ» خطوط الخلية التي توفر الوظائف الخلالية
‏الناقصة/ المفقودة التي تعد ضرورية لانتشار الفيروسات و/أو للسماح بتحضير الفيريونات. تعد تلك
‏الوظائف الخلالية وخطوط الخلية معروفة في المجال وتتعلق باستخدام نواقل لقاح السعار.
‏يتم توضيح متواليات النيوكليوتيد الكاملة لتركيبات اللقاح الأربعة الخاصة بالكشف التالي: ‎BNSP333-‏ ‎BNSP333-S «GP 0‏ (المتوالية رقم: 22)؛ ‎BNSP333-SA29‏ (المتوالية رقم:23)؛ ‎BNSP333-SA19‏
‏(المتوالية رقم:24)؛ و ‎BNSP333-S1‏ (المتوالية رقم:21)؛ ‎aging‏ التسلسل المذكور هنا.
‏يتم الكشف عن تلك النماذج وأخرى أو يتم التأمل في التغيرات والموضحة بواسطة؛ الوصف التفصيلي
‏التالي.
‏الوصف المفصل التالي؛ الموضح كمثال؛ ولكن لا يقتصر الاختراع فقط على النماذج المحددة الموضحة ‎add‏ وجب التنويه أنه لابد من اقتران النماذج بالرسومات المصاحبة.
‏شرح مختصر. للرسومات
‏يوفر الشكل 1 توضيح تخطيطي لبعض تركيبات للقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق
‏الأوسط الموضحة والمستخدمة هنا. يتم إدخال البروتين الشوكي الحمض النووي الرببوزي المكمل
‎(cDNA) complement deoxyribonucleic acid‏ بين جين 17 ‎Ps‏ ل 580-319 المشتق من ناقل 0 "لاح لفيروس السعار ‎(BNSP333‏ حيث يحتوي على طفرة في جين البروتين السكري ويقوم بإقصاء
‏الألفة للأعصاب ‎neurotropism‏ للسلالة الأبوية ‎SAD-B19‏ (المتوالية رقم: 20). يحتوي
‏5 اب(المتوالية رقم: 22) على التسلسل المشفر من النوع الشرس ‎wild-type‏ للبروتين
‏الشوكي للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط (المتوالية رقم: 9)؛ وبهذا يتم إنتاج بروتين
‏شوكي من النوع الشرس (المتوالية رقم: 10). تتضمن تركيبات ‎BNSP333-SA29‏ (المتوالية رقم: ‎BNSP-SA195 )23 5‏ (المتوالية رقم: 24) أحماض نووية للبروتين الشوكي المقطوع (المتوالية رقم:
‏1 والمتوالية رقم: 13؛ بالتبعية) التي يتم التعبير عنها لإنتاج البروتينات الشوكية المقطوعة؛ التي
تحتاج للأحماض الأمينية 19 أو 29 للنهاية ¢ (المتوالية رقم: 12 والمتوالية رقم: 14)؛ بالتبعية. يتم التعبير عن تركيب ‎BNSP333-S1‏ (المتوالية رقم: 21) كبروتين كيميري يحتوي على مجال 51 كلي يندمج مع النهاية ع التي تعد جزءا من البروتين السكري فيروس السعار 6 (الأحماض الأمينية 524-8) (المتوالية رقم: 8)؛ حيث يشتمل على كل المجال السيتوبلازمي؛ مجال غبر الغشائي؛ بالإضافة إلى 31 حمض أميني من المجال الخارجي ‎(B31)‏ لفيروس السعار 6. يتم التعرف على عناصر البناء المختلفة للبروتين الشوكي في تركيب كامل الطول: بيبتيد الإشارة ‎signal peptide‏ ‎«(SP)‏ مجال ارتباط المستقيل ‎receptor-binding domain‏ (ط25) بيبتيد الالتحام ‎fusion peptide‏ ‎(FP)‏ مناطق التكرار السباعية 1 و2 2 ‎¢(HR2 5 HR1) heptad repeat regions 1 and‏ مجال عبر
الغشائي؛ مجال سيتوبلازمي. تشير الأرقام إلى أجزاء الحمض الأميني في البروتين الشوكي.
0 توفر الأشكال 2 2« 2ج؛ 2د؛ 2ه بيانات التعبير عن فيروس السعار ‎-G‏ وبروتينات الالتحام 6 في خلايا في ايه آر او إيه6 ‎E6‏ 70180. تحدث الإصابة للخلايا لمدة 60 ساعة ‎eg‏ ثم تتبع بالتثبيت ‎fixation‏ وقابلية النفاذ ‎Gigi) permeabilization‏ بالجسم المضاد أحادي النسيلة ‎monoclonal antibody‏ ضد فيروس السعار 6 (اللوحة اليسرى) ومصل ضدي متعدد النسائل ‎polyclonal antiserum‏ ضد الوحدة الفرعية ‎ST‏ لبروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق
5 الأوسط 5 (اللوحة اليمنى). توفر الأشكال 3 3ب و3ج بيانات لفيريونات فيروس السعار حيث يتم إدراج البروتين الشوكي كامل الطول. تلوثت ‎WAY‏ بي اس آر ‎BSR‏ وفي إيه ‎Jl‏ أو ‎VERO‏ ب ‎BNSP333-S‏ يعبر أيا من ناقل ‎BNSP333‏ الأبوي أو ناقل فيروس السعار النوع الشرس 580-319 للبروتين السكري ‎(SPBN)‏ ‏بدون إضعاف الطفرة عند المكان 333 للبروتين السكري. يتم تنقية جزيئات الفيروس من المواد
0 الطافية ويتم فصلها بواسطة اس دي اس-بي أيه جي إيه ‎SDS-PAGE‏ المتبع بالتلوث بياقوت (أ)- سايبرو ‎SYPRO-Ruby (A)‏ أو لطخة ويسترن ‎(WB) western blotting‏ مع المصل الضدي متعدد النسائل ‎polyclonal antiserum‏ ضد الوحدة الفرعية (ب) 1 أو المصل الضدي متعدد النسائل ضد البروتين السكري (ج) فيروس السعار. تشير الأسهم إلى البروتين النووي ‎(N)‏ فيروس السعار» البروتين السكري (6)؛ بروتين بوليمراز ‎polymerase protein‏ (1آ). إدراج البروتين السكري فيروس
السعار يقل بشكل مثير في وجود البروتين الشوكي كامل الطول الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط.
تتأمل الأشكال ‎od HM‏ و4ج في تأثير قطع النهاية © للبروتين الشوكي في البروتين السكري الموجود في جزيئات فيروس السعار. تلوث ‎VERO WIA‏ ب ‎BNSP333‏ للتعبير عن كامل الطول 5 أو المقطوع 5 المفقود في النهاية ¢ للأحماض الأمينية 19 أو 29. يعبر ‎BNSP333 Jil‏ الأبوي عن بروتين سكري غير إضافي مستخدم كنموذج. يتم تحليل جزيئات الفيروس المنقاة ‎Purified‏ ‎virus particles 5‏ بواسطة ‎SDS-PAGE (A)‏ ولطخة ويسترن مع المصل الضدي متعدد النسائل المحدد لفيروس السعار(©) 6 والوحدة الفرعية 51 ل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ‎(B)‏ 5. قطع المقدمة 5 لزيادة إدراج فيروس السعار 6 داخل الجزيئات مقارنة بالفيروس للتعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 كامل الطول. يقل إدراج البروتين السكري فيروس السعار مقارنة بالناقل الأبوي للتعبير عن البروتين السكري غير الإضافي. تشير الأسهم إلى البروتين النووي ‎(N) 0‏ فيروس السعارء البروتين السكري (6)؛ بروتين بوليمراز (1). تشير الأرقام جهة الشمال إلى حجوم الوزن الجزيئي القياسي. تتأمل الأشكال ‎(IS‏ 5( و5ج في إقصاء الوحدة الفرعية 52 بشكل مثير ويحسن إدراج البروتين السكري داخل جزيئات فيروس السعار. يحتوي البروتين السكري الكيميري على 51؛ ولكن يتم فقد كل الوحدة الفرعية 52 المنشأة بواسطة التحام الأحماض الأمينية 750 الأولى ل 5 مع النهاية ء للأحماض الأمينية 96 للبروتين السكري فيروس السعار. يتم تلوث ‎VERO WA‏ ب ‎BNSP333‏ ‏للتعبير عن بروتين الالتحام 91-6؛ البروتين السكري لفيروس زيار ‎Youd‏ أو ناقل ‎BNSP333‏ الأبوي للتعبير عن البروتين السكري غير الإضافي. يتم تحليل جزيئات الفيروس بواسطة ‎SDS-PAGE (A)‏ ولطخة ويسترن مع المصل الضدي متعدد النسائل المحدد لفيروس السعار(©) 6 والوحدة الفرعية 1 الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط(08 5 . الجزيات التي تحتوي على كمية متساوية 20 .من بروتين الالتحام 51-6 والبروتين السكري فيروس السعار ويظهر محتوى ‎G‏ غير مخفض مقارنة بنموذج الفيروس للتعبير عن ‎ZEBOV GP‏ تشير الأسهم إلى البروتين النووي ‎(N)‏ فيروس السعار» البروتين السكري (6)؛ بروتين بوليمراز (1). تشير الأرقام جهة الشمال إلى حجوم الوزن الجزيئي القياسي. تتأمل الأشكال 6أ؛ 6« 6ج وكد في فيروسات الكشف ‎Jad)‏ لإنتاج الاستجابات المناعية القوية. 5 تحليل الاستجابة المناعية ل ‎BNSP333-S1/G‏ في فأر تم فحصه باستخدام فأر ‎Balble‏ تم تحصينه ثلاثة مرات (يوم صفرء 7 و 21) ب 10ميكروجرام من جزيئات غير نشطة كيميائيا ل ‎BNSP333-‏
06 (الأشكال 16 و6ب)؛ أو ‎BNSP333‏ للتعبير عن ‎(Fllorabl) ZEBOV GP‏ (الشكل 1) أو التحصين الكاذب ‎mock-immunized‏ بالفوسفات المخفف بالمحلول الملحي ‎phosphate-buffered‏ ‎(PBS) saline‏ (الشكل 6د). تم تحصين كل الفئران ب ‎BNSP333-S1/G‏ المطور للاستجابة المناعية الخلطية القوية للوحدة الفرعية 51. لم يتم تحديد أي استجابة أعلى من المذكور سابقا في الفأر النموذج. الوصف التفصيلي: لابد من فهم الكشف الحالي بسهولة أكثر عن طريق الوصف التفصيلي التالي للنماذج المفضلة الخاصة بالكشف والأمثلة المتضمنة. قبل الطرق الحالية والتقنيات التي سيتم الكشف عنها وتوضيحهاء ‎AY‏ من فهم أن لا يقتصر الكشف الحالي على طرق محددة وتركيبات؛ حيث من الممكن؛ بالطبع؛ 0 أن تختلف. لابد من فهم أيضا أن التقنية المستخدمة هنا تعد من أهداف النماذج الموضحة بشكل خاص فقط ولا تقتصر على ذلك. ما لم يذكر خلاف ذلك؛ كل المصطلحات العلمية والتقنية المستخدمة هنا لديها معنى شائع معروف لخبراء المجال الذين ينتمون للكشف. تشير الأدوات ‎CES‏ و"المعرفة " المستخدمة هنا وفي عناصر الحماية المرفقة إلى واحد أو أكثر من واحد (أي؛ واحد على الأقل) من الهدف النحوي للمقال ما لم يشر المحتوى خلاف ذلك. على سيل المثال؛ 'العنصر" يعني عنصر واحد أو أكثر من عنصر. الجملة 'و/أو' كما هو مستخدم هنا في المواصفات وفي عناصر الحماية؛ لابد من فهم معنى "أيا من أو كلا من" للعناصر المتضمنة؛ أي؛ العناصر التي تكون موجودة بشكل فاصل في بعض الحالات وموجودة بشكل رابط في حالات أخرى. العناصر العديدة المذكورة ب 'و/أو" لابد من تفسيرها بنفس الطريقة؛ أي؛ 'واحد أو أكثر" من العناصر المتضمنة. من الممكن أن تكون العناصر الأخرى موجودة 0 بشكل اختياري عن العناصر المحددة المعرفة بجملة 'و/أو"» إما أن تتعلق أو لا تتعلق بتلك العناصر المحددة المعرفة. ‎cling‏ كمثال غير محدد؛ بالإشارة إلى "أ و/أو ب" عندما عندما يتم اقترانهم مع كلام ليس له نهاية ‎Jie‏ 'مشتملة على" من الممكن أن تشيرء في أحد النماذج؛ إلى أ فقط (اختياريا يتضمن العناصر ماعدا ب )؛ في نموذج ‎AT‏ حتى ب فقط (اختياريا يتضمن العناصر ماعدا أ)؛ في نموذج آخرء لكل من أ و ب (اختياريا يتضمن العناصر الأخرى)؛ إلخ. 5 كما هو مستخدم هنا في المواصفات وفي عناصر الحماية؛ "أو" لابد من فهم أنها لديها نفس المعنى مثل 'و/أو' كما هو معرف بالأعلى. على سبيل المثال؛ عندما يتم فصل العناصر في القائمة؛ "أو"
أو 'و/أو' لابد من تفسير أنها متضمنة؛ أي؛ تضمن واحد على الأقل؛ ولكن يتضمن أكثر من واحد؛ من عدد أو قائمة العناصر؛ وء اختيارياء العناصر غير المذكورة في القائمة. العناصر المشار إليها بوضوح على النقيض» ‎Jie‏ 'واحد فقط من" أو 'واحد بالضبط من" أو؛ عندما يتم استخدامها في عناصر الحماية؛ 'تتكون ‎(Ge‏ سوف تشير إلى تضمن عنصر واحد بالضبط من رقم أو قائمة العناصر. بصورة عامة؛ مصطلح "أو" كما هو مستخدم هنا لابد أن تم تفسيره كبدائل حصرية مشار إليها (أي؛ 'واحد أو ‎AT‏ ولكن ليس كليهما") عندما تسبق بالمصطلحات الحصرية؛ ‎SU Jie‏ 'واحد من"» "واحد فقط من" أو 'واحد تحديدا من". في عناصر الحماية؛ كما هو موضح في المواصفات بالأعلى؛ كل الجمل الانتقالية مثل 'مشتمل ‎Cle‏ 'متضمن" 'يحمل"؛ ‎Cal‏ 'يحتوي على"؛ 'متضمنا"؛ 'ممسكا"؛ 'متكون من" وما شابه ولابد 0 من فهم كونها نهاية مفتوحة؛ أي؛ يعني أنها متضمنة ولكن ليس مقتصرا عليها. كل الجمل الانتقالية فقط 'تتكون من" و'تتكون بشكل أساسي من" لابد أن تكون جمل انتقالية مغلقة أو نصف مغلقة؛ ‎cual‏ كما ذكر في كتيب مكتب براءة الاختراع الأمريكية لإجراءات فحص البراءة؛ المقطع 2111.03 كما هو مستخدم هنا في المواصفات وعناصر الحماية؛ 'واحد على الأقل" بالإشارة إلى قائمة عنصر 5 واحد أو ‎ST‏ لابد من فهم أنها تعني عنصر واحد على الأقل يتم اختياره من أي واحد أو ‎AST‏ من عنصر في قائمة العناصر؛ ولكن ليس بالضرورة أن يتضمن واحد على الأقل من كل أو جميع العناصر المذكورة تحديدا ضمن قائمة العناصر ولا تتضمن أي اندماج بين العناصر في قائمة العناصر. يسمح هذا التعريف أيضا بأنه اختياريا من الممكن أن تكون العناصر موجودة باستثناء العناصر المحددة المعرفة داخل قائمة العناصر حيث تشير جملة 'واحد على الأقل"؛ إما تتعلق أو 0 لا تتعلق بتلك العناصر المحددة المعرفة. وبذلك؛ مثال غير محدد؛ 'واحد على الأقل من أ و ب" (أو؛ مكافتاء 'واحد على الأقل من أ أو ب" أو مكافئا 'واحد على الأقل من أ و/أو ب") من الممكن أن ‎at‏ في أحد النماذج؛ لواحد على الأقل؛ اختياريا يتضمن أكثر من واحد؛ أ؛ مع عدم وجود ب (واختياريا يتضمن عناصر باستثناء ب)؛ في نموذج آخرء لواحد على الأقل؛ اختياريا يتضمن أكثر من واحد؛ ب» ولا ‎Tang‏ (واختياريا يتضمن العناصر باستثناء أ)؛ في نموذج آخرء لواحد على الأقل؛ 5 اختياريا يتضمن أكثر من ‎of easly‏ وواحد على الأقل؛ اختياريا متضمنا أكثر من ‎easly‏ ب (واختياريا متضمنا العناصر الأخرى)؛ إلخ.
لابد من فهم أيضاء في طرق محددة موضحة هنا حيث تتضمن أكثر من خطوة أو قانون؛ ترتيب الخطوات أو قوانين الطرق ليس بالضرورة أن يكون محددا للترتيب حيث في تلك الخطوات أو القوانين يتم سرد الطريقة ما لم يشر المحتوى خلاف ذلك. مصطلح "مريض”" أو "هدف" المستخدم في المواصفات ليصف الحيوان؛ متضمنا البشرء؛ الرئيسات لا إنسانية ‎cia)‏ قرد أو نسناس) أو حيوان أهلي أو بري؛ الذي يتم معالجته؛ متضمناء العلاج الوقائي ‎eprophylactic treatment‏ بالتركيبات المتوفرة طبقا للكشف الحالي. لعلاج تلك الإصابات؛ يتم تحديد شروط وحالات المرض للحيوان المحدد ‎Jie‏ المريض البشري؛ يشير مصطلح مريض إلى أن الحيوان المحدد؛ متضمنا الحيوان الأهلي أو البري؛ مثل الأبل (مثل؛ الجمل؛ ألبكة؛ أو ‎(LUI‏ الكلب؛ القطة؛ الفأر؛ الهامستر؛ أو حيوانات المزرعة ‎(land) (ie‏ البقرة؛ الغنم؛ ‎lead)‏ الخنزير» الدجاجة؛ إلخ. 0 بصورة عامة؛ في الكشف الحالي؛ يشير مصطلح مريض إلى المريض البشري ما لم يشر المحتوى استخدام مصطلح آخر. ‎(Lad‏ سوف يتعرف الشخص المهتم بالمجال على البدائل المستقلة؛ الحذف أو الإضافات في تسلسل الحمض الأميني؛ أو في تسلسل النيوكليوتيد المشفر للأحماض الأمينية؛ والذي يتغير؛ إضافة أو حذف حمض أميني واحد أو نسبة صغيرة من الأحماض الأمينية (بشكل نموذجي أقل من 75؛ أكثر 5 تموذجية أقل من 71) في التسلسل المشفر وتعتبر تغيرات معدلة بشكل محافظ؛ حيث تنتج التغيرات في تبديل الحمض الأميني مع الحمض الأميني المشابه كيميائيا. توفر جداول التبديل الوقائية الأحماض الأمينية متشابهة الوظيفة المعروفة جيدا في المجال. المجموعات الستة التالية كل منها تحتوي على أحماض أمينية تعتبر بدائل وقائية بعضهم البعض: (1) ألانين ‎Alanine‏ (أيه)؛ سيرين ‎Serine‏ (أس) « ثيرونين ‎Threonine‏ (تيه)؛ )2( حمض الأسبارتيك ‎Aspartic acid‏ (ديه)؛ حمض 0 الجلوتاميك ‎Glutamic acid‏ (إيه)؛ )3( أسبارجين ‎Asparagine‏ (أن) ¢ جلوتامين ‎Glutamine‏ (كيوة)؛ )4 أرجينين ‎Arginine‏ (آر)ء ليسين ‎Lysine‏ (كيه)؛ )5( أيزوليوسين ‎Isoleucine‏ (أي)؛ ليوسين ‎(J) Leucine‏ « ميثايونين ‎(a) Methionine‏ « فالين ‎Valine‏ (فيه)؛ و(6) فينيل ألانين ‎Phenylalanine‏ (أف) ¢ تيروسين ‎Tyrosine‏ (واي) تريبتوفان ‎Tryptophan‏ (دابليو). ومصطلحات أخرى معرفة ومحددة هنا. 5 كما هو مستخدم ‎(lia‏ مصطلحات "العينة البيولوجية ‎"biological sample‏ أو ‎due’‏ المريض ‎patient‏ ‎"sample‏ أو ‎due’‏ الاختبار ‎"test sample‏ أو "العينة' كما هو مستخدم ‎(la‏ تشير إلى العينة التي تم
الحصول عليها من الكائن الحي ‎organism‏ أو من مكونات ‎cia)‏ الخلايا) للهدف أو المريض من أجل غرض التشخيص» التنبؤ 80800515 أو تقييم المريض قيد الاهتمام. من الممكن أن تكون العينة؛. على سبيل المثال؛ دم؛ حيث يشكل ‎had‏ لتلوثه بفيروس السعارء أو نسيج رئوي؛ حيث يشكل خطرا لتلوثه بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. في نماذج محددة؛ من الممكن أن يتم الحصول على تلك العينة من أجل تقييم وجود الأجسام المضادة المحددة للفيروس التاجي أو فيروس السعار حيث يتبع التلوث المشتبه به أو يتبع التطعيم باستخدام تركيبة اللقاح الخاصة بالكشف. يتأمل الكشف في اختبارات الأمان الضرورية و/أو الإجراءات الحكومية المفروضة لاستعمال ومعالجة أي عينة مشكوك في احتوائها على التلوث بفيروس السعار والفيروس التاجي؛ مثل؛ الفيروس التاجي
لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة.
0 كما هو مستخدم ‎cla‏ 'ترتبط تحديدا ب" أو يكون 'محددا من أجل" في السياق تعني تداخلات الجسم المضاد/المستضد الارتباط المحدد للجسم المضاد بالمستضد المتجانس ‎cognate antigen‏ عن طريق واحد أو أكثر من الحواتم ‎epitopes‏ التي يتم التعرف عليها عن طريق الجسم المضاد؛ بدون الارتباط بالجزيئات التي تقلل تلك الحواتم. كما هو مستخدم هناء يتضمن 'معالجة" أو 'علاج" أي عملية؛ ‎(dad‏ تطبيق؛ علاج؛ أو ما شابه؛
5 حيث الهدف (أو المريض)؛ يتضمن البشرء حيث يتم عن طريق إعطاؤه العامل أو التركيبة؛ مثل؛ تركيبة اللقاح العلاجية؛ من أجل تحسين ‎Alla‏ الهدف؛ بطريقة مباشرة أو غير مباشرة؛ أو تبطئ تطور الحالة أو الخلل في الهدف (مثل؛ الحمى أو ضيق التنفس نتيجة الإصابة بالفيروس التاجي)؛ أو تحسين عرض واحد على الأقل للمرض أو الخلل تحت تأثير العلاج ‎(Jia)‏ الكحة ‎cough‏ أو الإسهال ‎diarrhea‏ نتيجة الإصابة بالفيروس التاجي). كما هو مستخدم في المحتوى المرض المسبب بواسطة
‎Glad) 0‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروسات التاجية ‎(GAY)‏ تشير مصطلحات ‎COs”‏ 'معالجة"؛ وما شابه؛ إلى الإعفاء من أو حصر العملية الباثولوجية التي تتوسط الفيروسات المذكورة. تشير مصطلحات "الإعطاء المشترك" و"إعطاؤه مشتركا" أو "العلاج المدمج” إلى كلا من الإعطاء المتزامن (إعطاء اثنين أو أكثر من العوامل العلاجية في نفس الوقت) والإعطاء غير المتزامن (إعطاء
‏5 واحد أو أكثر من العوامل العلاجية عند أزمنة مختلفة عن إعطاء العامل العلاجي الإضافي أو العوامل)؛ بالإضافة إلى تواجد العوامل العلاجية داخل المريض بعض الشيء؛ من المفضل عند
الكميات الفعالة. عند نفس الزمن. في نواحي مفضلة؛ يتم توضيح واحد أو أكثر من المركبات الحالية هناء ويتم إعطاؤها مشتركا بالاندماج مع عامل نشط حيويا ‎bioactive agent‏ إضافي واحد على الأقل ؛» وبتضمن تحديدا عامل مضاد للسرطان ‎agent‏ :©20026200. ومن النواحي المفضلة بشكل ‎(ala‏ ينتج الإعطاء المشترك للمركبات في النشاط التأزري ‎Ss synergistic activity‏ العلاجي. من الممكن أن يعتمد العلاج الأول على اللقاحات مزدوجة الحماية الخاصة بالكشف. من الممكن أن يعتمد العلاج الثاني على العلاج المعروف الخاص بالكشف المستخدم للعلاج. على سبيل المثال؛ من الممكن أن يتم إعطاء عقاقير مضادة للفيروس ‎anti-virus drugs‏ بديلة عن طريق الإعطاء المشترك بنواقل اللقاح الخاص بالكشف أو العوامل العلاجية ‎therapeutic agents‏ لتحد من أعراض أو الشروط التي تحدث نتيجة الإصابة. ترتيب إعطاء اثنين أو أكثر من العوامل العلاجية بشكل 0 أساسي لم يتم تحديده. إعطاء اثنين أو أكثر من العوامل العلاجية من الممكن أن يتم إعطاؤه على طرق مختلفة» عن طريق الطريقة المحلية ‎(fic)‏ التوصيل المخاطي ‎mucosal delivery‏ للقاح المزدوج الخاص بالكشف) والطريقة النظامية (مثل؛ التوصيل عن طريق الحقن ‎Ladi parenteral delivery‏ الجزيء الصغير لمضاد السعار ‎anti-rabies‏ ومضاد الفيروس التاجي ‎-(anti-coronavirus‏ ‏يوضح مصطلح ‎"Jed‏ كمية المركب؛ التركيبة أو المكون التي؛ تستخدم في المحتوى وكيفية 5 استخدامهاء وتأثيرها على النتائج. يضمن مصطلح فعال كل الكميات الفعالة ‎GAY)‏ أو مصطلحات التركيز الفعالة؛ الموضحة أو المستخدمة في الكشف الحالي. كما هو مستخدم هناء تشير جمل 'كمية فعالة علاجيا" واكمية فعالة وقائيا" إلى الكمية التي تكون فعالة علاجيا خلال العلاج؛ المنع؛ أو ترتيب العمليات الباثولوجية التي تتوسط الإصابة بفيروس ‎land‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروسات التاجية الأخرى؛ أو الأعراض 0 الواضحة للعمليات الباثولوجية التي تتوسط السعار أو الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروسات التاجية الأخرى. الكمية المحددة التي تكون فعالة علاجيا من الممكن أن يتم الحصول عليها بسهولة عن طريق الممارس الطبي التقليدي ومن الممكن أن تختلف معتمدة على عوامل معروفة في المجال؛ علي سبيل ‎(JEN‏ مثل؛ نوع العمليات الباتولوجية ‎pathological processes‏ التي تتوسط بإصابة الفيروس؛ تاريخ المريض والعمر؛ مرحلة العملية الباثولوجية التي تتوسط بإصابة 5 الفيروس؛ وإعطاء ‎alias‏ للعملية الباثتولوجية ‎anti-pathological processes‏ آخر التي تتوسط بالإصابة.
— 2 0 —
‎WS‏ هو مستخدم هناء ‎Jails‏ "التركيبة الدوائية ‎"pharmaceutical composition‏ على الكمية الفعالة علاجيا من تركيبة اللقاح والحامل المقبول دوائيا. كما هو مستخدم هناء تشير "كمية فعالة ‎"ile‏ ‏كمية فعالة علاجيا" أو بشكل مبسط "الكمية الفعالة" إلى كمية اللقاح الفعالة لإنتاج الناتج الوقائي أو العلاجي؛ الدوائي. على سبيل المثال؛ يتم اعتبار العلاج الإكلينيكي فعالا عندما يكون أقل من 725 على الأقل من العناصر المقاسة المقترنة بالمرض أو ‎(JAN‏ تكون الكمية الفعالة ‎Ladle‏ للعقار اللازمة لعلاج هذا المرض أو الخلل عبارة عن الكمية الضرورية لتأثر في أقل من 725 على الأقل في هذا العنصر. أيضاء من الممكن أن يتم تصميم التركيبة الدوائية لتحسن الخلايا المستهدفة المتضمنة_ في الإصابة بالفيروس ‎Jie‏ الخلايا الشجيرية ‎LIAN dendritic cells‏ البلعمية ‎WAY «macrophages‏ الكبدية ‎chepatocytes‏ والخلايا المتنية ‎parenchymal cells‏ الأخرى. كما
‏0 هو مستخدم هناء يعني "المقبول دوائيا" أنه يتم تقدير عنصر الهدف في المنتج الدوائي. كما هو مستخدم هناء سوف يشير 'تركيب اللقاح” إلى جزئ الحمض النووي ‎nucleic acid molecule‏ الذي يساهم في ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن واحد أو أكثر من مستضدات الفيروس التاجي ‎Jia)‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط» أو البروتين السكري الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة أو القطع أو ‎gia‏ منه) الخاص بالكشف. يتأمل أيضا الكشف 5 في استخدام اللقاح المأشوب "الفيريون" الذي ينتج بواسطة تركيبات اللقاح الخاصة بالكشف عندما يتم إدخالها في خلية المضيف ‎host cell‏ المشكوك في تلوثهاء حيث تنتشر بعد ذلك وتتكون ‎liga pd‏ الفيروس في الخلية؛ ثم يتم الحصول عليها و/أو تطهيرها. يشير 'فيربون” إلى جسيم الفيروس المكتمل الناتج من دورة الإصابة لجيئوم السعار المأشوب في الخلية القادرة على استضافة جينوم السعار. يشتمل "اللقاح" أو "اللقاحات المأشوية" الخاصة بالكشف على كل من "اللقاحات الجينية ‎genetic‏ ‎"vaccines 20‏ أي ‘ تركيبات اللقفاح الخاصة بالاختراع؛ واللقاحات التقليدية؛ التي يتم اعتبارهم الفيريونات . بالاعتماد على الجينوم المأشوب لتركيبة اللقاح» من الممكن أن تكون الفيريونات النسخ المختص أو النسخ الفاسد. حيث يكون انتشار النسخ الفاسد؛ في خلايا المضيف في المختبر أو في الكائن الحي من الممكن أن يتطلب "مساعد ‎helper‏ للفيروس أو ‎lal‏ حيث من الممكن أن تتوفر وظائف النسخ الخلالية المحددة بواسطة أيا من مساعد الفيروس أو الخلية التي يحدث فيها التلوث. من 5 الممكن أن تتضمن مركبات اللقاح كلا من تركيبات اللقاح؛ بالإضافة إلى الفيريونات. من الممكن ‎La‏ أن تكون الفيريونات من نوع "الفيروس الميت ‎"killed virus‏ حيث يتم ‎ili go yall dallas‏
كيميائيا أو توقف نشاطها بواسطة بعض وسائل التعطيل حيث الفيريون ليس لديه أو أدنى قابليه للنسخ. تعتمد لقاحات الفيروس الميت على البولي بيبتيدات الموجودة على سطحها (مثل؛ البروتين ‎Soul‏ للفيروس القاتل أو جزءِ منه) لبحث الاستجابة المناعية الجلطية. بصورة نموذجية؛ لا تحدث الاستجابة المناعية الخلوية مع لقاحات نوع الفيروس الميت بسبب أن فيريوناتها بصورة عامة لا تدخل إلى داخل الخلية. كما هو مستخدم هناء مصطلح ‎"gad‏ أو "منقى” للبولي بيبتيد أو البروتين أو الفيريون أو الجزء النشط بيولوجيا أو تركيبة اللقاح الخاصة بها حيث تكون حرة في المادة الخلوية أو البروتينات الملوثة الأخرى من الخلية أو مصدر النسيج الذي يتم الحصول عليه من البولي بيبتيد (مثل؛ بروتين البروتين السكري للفيروس التاجي أو القطع/ الجزءِ الخاص به) أو فيريون ‎dia)‏ فيروس السعار للتعبير عن 0 _بروتين البروتين السكري للفيروس التاجي أو القطع/الجزء الخاص بد). كما هو مستخدم هناء يتضمن "الحامل المقبول دوائيا" أي مادة والتي؛ عندما تندمج مع مكون نشط في التركيبة؛ ويسمح للمكون بأن يظل نشط بيولوجيا ‎Geng‏ التسبب في اضطراب التفاعلات مع النظام المناعي للهدف. تتضمن الأمثلة؛ ولكن ليست مقتصرة على»؛ أي حوامل دوائية قياسية ‎ie‏ ‏المحلول الملحي المخفف للفوسفات؛ الماء؛ المستحلبات ‎Jie emulsions‏ مستحلب الزبت/الماء ‎coil/water emulsion 5‏ وأنواع مختلفة من ‎(alse‏ التندية ‎agents‏ عدناا”». تكون المخففات النموذجية للأيروسول ‎aerosol‏ أو الإعطاء عن طريق الحقن ‎parenteral administration‏ عبارة عن محلول ملحي مخفف للفوسفات أو محلول ملحي ‎saline‏ طبيعي (70.9). تشتمل التركيبات على النواقل التي تتشكل بواسطة الطرق التقليدية المعروفة جيدا (انظرء على سبيل المثال؛ ‎Remington's‏ ‎Pharmaceutical Sciences, Chapter 43, 14th Ed., Mack Publishing Col, Easton Pa. 18042,‏ ‎(USA 20‏ السواغ المقبولة دوائيا تم توضيحها بإطناب في مختلف المنشورات؛ متضمناء على سبيل المثال» ‎A.
Gennaro (2000) "Remington: The Science and Practice of Pharmacy,” 20th‏ ‎edition, Lippincott, Williams, & Wilkins; Remington's Pharmaceutical Sciences, 14th Ed.‏ ‎or latest edition, Mack Publishing Col, Easton Pa. 18042, USA; Pharmaceutical Dosage‏ ‎Forms and Drug Delivery Systems (1999) H.
C.
Ansel et al., eds., 7th ed., Lippincott,‏ ‎Williams, & Wilkins; and Handbook of Pharmaceutical Excipients (2000) A.
H.
Kibbe et 25‏ ‎Lal, eds., 3rd ed.
Amer.
Pharmaceutical Assoc.‏ تتوفر أيضا المناقشة هنا. يتعلق الكشف الحالي بتركيبات اللقاح المأشوب التي تعتمد على التعديل الجيني لناقل لقاح فيروس السعار للتعبير عن واحد أو أكثر من البولي بيبتيدات المستمنعة للفيروس التاجي؛ مثل الفيروس
التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو البروتين السكري للفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة (مثل؛ البروتين الشوكي (5)) أو القطع أو جزءِ منه؛ لدرجة أنه يتم حث الاستجابات المناعية الخلوية و/أو الخلطية ضد الإصابة بفيروس السعار و/أو الفيروس التاجي بعد إعطاء تركيبة اللقاح المأشوية الخاصة بالكشف أو الفيريون المأشوب المعتمد عليها. في أحد النماذج؛ يتم إضعاف ‎JBL 5‏ لقاح فيروس السعار لإزالة أو تقليل سعته من أجل أن يصل الأذى العصبي إلى مستوى آمن. يوفر أيضا الكشف تركيبات وطرق التحصين ضد أو علاج الإصابات إما عن طريق أيا من أو كلا من فيروس السعار والفيروس التاجي؛ مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. تعد تركيبات اللقاح المأشوب الخاص بالكشف تركيبة وحيدة قادرة على الحث المتتابع للاستجابة 0 المناعية ضد اثنين أو أكثر من مسببات المرض الفيروسية؛ مثل؛ فيروس السعار و الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. من الممكن أن يتم الإشارة إليها ك 'ثنائية التكافؤ" أو 'متعددة التكافؤ". من الممكن أن تستخدم تركيبات اللقاح الخاصة بالكشف لحث الاستجابة المناعية الخلوية و/أو الخلطية كحماية ضد الإصابة المتتالية أو كتصدي لأيا من أو لكل من فيروس السعار و/أو الفيروس التاجي(تستخدم كوقاية)؛ ويتم استخدامها لحث الاستجابة المناعية الخلوية و/أو الخلطية لتساعد في تقليل أو تطهير الإصابات الموجودة مسبقا عن طريق أيا من أو كلا من فيروس السعار أو الفيروس التاجي (علاجيا). من الممكن أن تقوم طرق وتركيبات الكشف الحالي بحث الاستجابة المناعية التي تحدث حماية مزدوجة ضد الإصابات بواسطة فيروس السعار و/أو فيروس تاجي واحد على الأقل؛ و/أو حيث يتم استخدامها بشكل علاجي للإصابة الحالية بفيروس السعار و/أو الفيروس التاجي لعلاج عرض واحد 0 على الأقل و/أو لتعطيل أو تطهير عوامل الإصابة. يوفر الكشف الحالي ناقل فيروس السعار المأشوب المشتمل على تسلسل النيوكليوتيد المشفر لبروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزءِ ‎die‏ لفيروس تاجي واحد على الأقل. على سبيل المثال؛ يتم اختيار كل من البروتين السكري المستمنع الواحد على الأقل أو جزءِ ‎die‏ بشكل مستقل من أي فيروس تاجي ذات صلة إكلينيكية. 5 يشتمل البروتين السكري المستمنع الواحد على الأقل أو جزءِ ‎die‏ على قطع البروتين السكري للفيروس التاجي؛ مثل قطع النهاية ع للبروتين السكري الشوكي. على سبيل المثال؛ من الممكن أن يؤدي قطع
النهاية ع للبروتين السكري الشوكي إلى إزالة جزءِ من المجال السيتوبلازمي. في نموذج محدد؛ يؤدي
قطع النهاية ع للبروتين الشوكي إلى إزالة ‎gia‏ واحد على الأقل من مجال 52 للبروتين الشوكي؛ مثل
كل مجال 52. في نموذج ‎«AT‏ يشتمل قطع النهاية ع للبروتين السكري الشوكي على ‎ga‏ مستمنع للمجال ‎ST‏ للبروتين الشوكي؛ ‎Jie‏ مجال 51 كله للبروتين السكري الشوكي. في نموذج ‎«AT‏ يحتوي
بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو قطعة منه على حوالي 13 إلى حوالي 25 حمض أميني أو حوالي 23 إلى حوالي 35 حمض أميني من قطع النهاية » للبروتين السكري الشوكي. على سبيل
‎JU)‏ يعد قطع النهاية ع للبروتين السكري الشوكي للفيروسات التاجية (مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة) عبارة
‏عن قطع حوالي 13 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 34 حمض أميني؛
‏0 حوالي 13 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 32 حمض أميني» حوالي 13 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي
‏9 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي
‏3 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى
‏5 حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 19 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 18 حمض أميني؛
‏حوالي 13 حتى حوالي 17 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 16 حمض أميني؛ حوالي 13
‏حتى حوالي 15 حمض أميني؛ حوالي 13 حتى حوالي 14 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي
‏5 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 33 حمض
‏0 أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 31 حمض ‎(ined‏ حوالي 4 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى
‎26 ‏حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي‎ 28 iss ‏حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 24 حمض أميني؛‎
‏حوالي 14 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 14
‏5 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 9 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 18 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 17 حمض
أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 16 حمض أميني؛ حوالي 14 حتى حوالي 15 حمض أميني؛ حوالي حتى حوالي 35 حمض ‎cud‏ حوالي 15 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ 5 حوالي 15 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 27 حمض أميني» حوالي 15 حتى حوالي 26 ‎(men‏ أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 25 ‎(man‏ أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 4 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 5 حتى حوالي 19 حمض ‎cud‏ حوالي 15 حتى حوالي 18 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى 0 حوالي 17 حمض أميني؛ حوالي 15 حتى حوالي 16 ‎cid (man‏ حوالي 16 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 31 حمض ‎«sine‏ حوالي 16 حتى حوالي 30 ‎(men‏ أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 29 ‎(man‏ أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 8 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 26 حمض 5 أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 25 ‎(men‏ أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 6 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 19 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 18 حمض أميني؛ حوالي 16 حتى حوالي 17 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 34 حمض أميني» حوالي 17 0 حتى حوالي 33 ‎cid (men‏ حوالي 17 حتى ‎(man 32 sa‏ أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي ‎(men 1‏ أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 7 حتى حوالي 26حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 25 حمض ‎cd‏ حوالي 17 حتى حوالي 4 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 22 حمض 5 أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 7 حتى حوالي 19 حمض أميني؛ حوالي 17 حتى حوالي 18 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى
حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 34 ‎(men‏ أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 8 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 18 حتى حوالي 19 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ 0 حوالي 19 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 29 ‎(men‏ أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 28 ‎(man‏ أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 9 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 9 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى 5 حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 21 ‎(man‏ أميني؛ حوالي 19 حتى حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 9 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ ‎ss‏ 20 حتى حوالي 27 حمض 0 أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 0 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 20 حتى حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 21 5 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 29 ‎(man‏ أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 8 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 26 حمض
أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 1 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 21 حتى حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 6 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 22 حتى حوالي 23 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 3 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى 0 حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 26 حمض أميني»؛ حوالي 23 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 23 حتى حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 5 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 33 حمض 5 أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 4 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 24 حتى حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 33 حمض أميني»؛ حوالي 25 0 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 0 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ ‎ss‏ 25 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 25 حتى حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 6 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 31 5 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 26 حتى حوالي 27 حمض أميني»؛ حوالي 27
حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 27 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 27 حتى حوالي ‎(mes 3‏ أميني؛ حوالي 27 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 27 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 27 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ ‎Mss‏ 27 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 7 حتى حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 28 حتى حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 29 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 29 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 29 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 29 حتى حوالي ‎(mes 2‏ أميني؛ حوالي 29 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 29 حتى حوالي 30 حمض 0 أميني؛ حوالي 30 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 30 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 0 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 30 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 30 حتى حوالي 31 حمض أميني؛ حوالي 31 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 31 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 31 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 31 حتى حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 32 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 32 حتى حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 32 5 حتى حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 33 حتى حوالي 35 حمض أميني؛ أو حوالي 33 حتى حوالي 34 حمض أميني. على سبيل المثال؛ يعد قطع النهاية ع للبروتين السكري الشوكي للفيروس التاجي (مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة) عبارة عن قطع حوالي 10 حمض أميني؛ حوالي 11 حمض أميني؛ ‎dss‏ 12 حمض أميني؛ حوالي 0 13 حمض أميني؛ حوالي 14 حمض أميني؛ حوالي 15 حمض أميني؛ حوالي 16 حمض أميني؛ حوالي 17 حمض أميني؛ حوالي 18 حمض أميني؛ حوالي 19 حمض أميني؛ حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 23 حمض أميني»؛ حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 8 حمض أميني؛ حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 31 حمض أميني؛ 5 حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 34 حمض أميني؛ أو حوالي 35 حمض أميني.
hg
في النموذج الإضافي؛ يكون البروتين السكري المستمنع أو جزءٍ منه عبارة عن بروتين التحام/كيميري مشتمل على جزء واحد على الأقل من البروتين السكري للفيروس التاجي؛ المستمنع؛ ومرساة الغشاء . في نماذج محددة؛ يحتوي جزء واحد على الأقل من البروتين السكري للفيروس التاجي على جزءٍ واحد من البروتين السكري الشوكي. في نموذج آخر» يحتوي ‎sha‏ واحد على الأقل من البروتين السكري للفيروس التاجي على جزءِ واحد على الأقل من مجال ‎ST‏ للبروتين السكري الشوكي؛ ‎ie‏ كل مجال 1 للبروتين السكري الشوكي. على سبيل المثال؛ من الممكن أن يشتمل ‎gin‏ واحد على الأقل من البروتين السكري للفيروس التاجي على أحماض أمينية من 1 إلى 750 أو أحماض أمينية من 22
إلى 750 للبروتين السكري الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. في نماذج محددة؛ تحتوي مرساة الغشاء على مجال عبر غشائي واحد على الأقل. في بعض التماذج؛ 0 .يتم اختيار مرساة الغشاء من فيروس غير الفيروس التاجي؛ ‎Jin‏ الفيروس من عائلة فيروسات الرابدو 68 مثل فيروس السعار. في نموذج محدد؛ تشتق مرساة الغشاء من بروتين سكري من عائلة فيروسات الرابدو ‎cia)‏ فيروس السعار)؛ مثل من الممكن أن تحتوي مرساة الغشاء على ‎Sa‏ ‏من واحد على الأقل من: مجال خارجي؛ مجال عبر غشائي؛ ومجال سيتوبلازمي للبروتين السكري لفيروس الرابدو. على سبيل ‎JE‏ من الممكن أن يشتمل مثبت الغشاء على جزءِ من البروتين 5 السكري 6 لفيروس الرابدو المشتمل على المجال السيتوبلازمي؛ المجال عبر الغشائي؛ وجزء من المجال الخارجي. على سبيل ‎cal‏ في نموذج؛ يحتوي بروتين الالتحام/الكيميري على حوالي 15 حتى حوالي 55 حمض أميني للمجال الخارجي للبروتين السكري 6 لفيروس الرابدو (مثل؛ حوالي 5 حمض أميني؛ حوالي 16 حمض أميني؛ حوالي 17 حمض أميني؛ حوالي 18 حمض أميني؛ حوالي 20 حمض أميني؛ حوالي 21 حمض أميني؛ حوالي 22 حمض أميني؛ حوالي 23 حمض 0 أميني؛ حوالي 24 حمض أميني؛ حوالي 25 حمض أميني؛ حوالي 26 حمض أميني؛ حوالي 27 حمض أميني؛ حوالي 28 حمض أميني؛ حوالي 29 حمض أميني؛ حوالي 30 حمض أميني؛ حوالي 1 حمض أميني؛ حوالي 32 حمض أميني؛ حوالي 33 حمض أميني؛ حوالي 34 حمض أميني؛ حوالي 35 حمض أميني؛ حوالي 36 حمض أميني؛ حوالي 37 حمض أميني؛ حوالي 38 حمض أميني؛ حوالي 39 حمض أميني؛ حوالي 40 حمض أميني؛ حوالي 41 حمض أميني»؛ حوالي 42 5 حمض أميني؛ حوالي 43 حمض أميني؛ حوالي 44 حمض أميني؛ حوالي 45 حمض أميني؛ حوالي 6 حمض أميني؛ حوالي 47 حمض أميني؛ حوالي 48 حمض أميني؛ حوالي 49 حمض أميني؛
حوالي 50 حمض أميني؛ حوالي 51 حمض أميني؛ حوالي 52 حمض أميني؛ حوالي 53 حمض أميني؛ حوالي 54 حمض أميني؛ أو حوالي 55 حمض أميني للمجال الخارجي؛ والذي من الممكن
أن يشتمل على جزء واحد الأقل من تسلسل الحمض الأميني للمتوالية رقم: 16). في نموذج ‎«AT‏ يحتوي بروتين مرساة للغشاء على حوالي 96 حمض أميني من النهاية ع للبروتين السكري 6 لفيروس الرابدو؛ على سبيل المثال؛ الأحماض الأمينية 524-428 للبروتين السكري ‎G‏ ‏لفيروس السعار (المتوالية رقم: 16). في نماذج محددة؛ يكون بروتين مرساة للغشاء من حوالي 90 إلى حوالي 150 حمض أميني من النهاية ع للبروتين السكري 6 لفيروس الرابدو؛ ‎Jie‏ فيروس السعار. على سبيل ‎«Jil‏ من الممكن أن يكون بروتين مرساة للغشاء عبارة عن حوالي 90 حمض أميني؛ حوالي 90 حمض أميني؛ حوالي 91 حمض أميني؛ حوالي 92 حمض أميني؛ حوالي 93 0 حمض أميني؛ حوالي 94 حمض أميني؛ حوالي 95 حمض أميني؛ حوالي 96 حمض أميني؛ حوالي 7 حمض أميني؛ حوالي 98 حمض أميني؛ حوالي 99 حمض أميني؛ حوالي 100 حمض أميني؛ حوالي 101 حمض أميني؛ حوالي 102 حمض أميني؛ حوالي 103 حمض أميني؛ حوالي 104 حمض أميني؛ حوالي 105 حمض أميني؛ حوالي 106 حمض أميني؛ حوالي 107 حمض أميني؛ حوالي 108 حمض أميني؛ حوالي 108 حمض أميني؛ حوالي 110 حمض أميني؛ حوالي 111 5 حمض أميني؛ حوالي 112 حمض أميني؛ حوالي 113 حمض أميني؛ حوالي 114 حمض أميني؛ حوالي 115 حمض أميني؛ حوالي 116 حمض أميني؛ حوالي 117 حمض أميني؛ حوالي 118 حمض أميني؛ حوالي 119 حمض أميني؛ حوالي 120 حمض أميني؛ حوالي 121 حمض أميني؛ حوالي 122 حمض أميني؛ حوالي 123 حمض أميني؛ حوالي 124 حمض أميني؛ حوالي 125 حمض أميني؛ حوالي 126 حمض أميني؛ حوالي 127 حمض أميني؛ حوالي 128 حمض أميني؛ حوالي 129 حمض أميني؛ حوالي 130 حمض أميني؛ حوالي 131 حمض أميني؛ حوالي 132 حمض أميني؛ حوالي 133 حمض أميني؛ حوالي 134 حمض أميني؛ حوالي 135 حمض أميني؛ حوالي 136 حمض أميني؛ حوالي 137 حمض أميني؛ حوالي 138 حمض أميني؛ حوالي 139 حمض أميني؛ حوالي 140 حمض أميني؛ حوالي 141 حمض أميني؛ حوالي 142 حمض أميني؛ حوالي 143 حمض أميني؛ حوالي 144 حمض أميني؛ حوالي 145 حمض أميني؛ حوالي 146 5 حمض أميني؛ حوالي 147 حمض أميني؛ حوالي 148 حمض أميني؛ حوالي 149 حمض أميني؛ أو حوالي 150 حمض أميني من النهاية ‏ للبروتين السكري 6 لفيروس ‎cul‏ مثل فيروس السعار).
ومن ناحية خاصة؛ يوفر الكشف الحالي ناقل فيروس السعار المأشوب المشتمل على تسلسل نيوكليوتيد مشفر لبروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎die ga‏ عند فيروس تاجي واحد على الأقل و/أو بروتين كيميري مشتمل على بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎die gia‏ عند فيروس تاجي واحد على الأقل. من ‎ali‏ أخرى؛ يوفر الكشف الحالي لقاح متعدد التكافؤ يكون فعالا ليحمي ضد الإصابة بواحد أو كل من فيروس السعار أو الفيروس التاجي؛ المشتمل على ناقل فيروس السعار المأشوب الذي يعبر عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزء ‎die‏ عند فيروس تاجي واحد على الأقل. من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف الحالي تركيبة لقاح يشتمل على لقاح متعدد ‎SESE‏ واحد على الأقل ويكون فعالا ليحمي ضد الإصابة بواحد أو كل من فيروس السعار أو الفيروس التاجي؛ المشتمل 0 على ناقل فيروس السعار المأشوب الذي يعبر عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎Sa‏ ‏منه عند فيروس تاجي واحد على الأقل. في نموذج؛ تشتمل أيضا تركيبة اللقاح على ‎Jala‏ مقبول ‎alga‏ ‏من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف الحالي طريقة حث الاستجابة المناعية التي تحمي ضد الإصابة بواحد أو كل من فيروس السعار أو الفيروس ‎all‏ في هدف؛ مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة 5 دوائيا من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل لقاح فيروس سعار مأشوب يعبر عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎gia‏ منه عند فيروس تاجي واحد على الأقل. من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف طريقة حث الأجسام المضادة المعادلة ضد الفيروس التاجي و/أو فيروس السعار في هدف مصاب أو تعرض لأحد أو كلا الفيروسات المذكورة؛ مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة دوائيا من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل لقاح فيروس سعار مأشوب يعبر 0 عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎sa‏ مشتق من البروتين السكري لفيروس تاجي واحد على الأقل. من ناحية ‎jig (gal‏ الكشف ‎Jal‏ طريقة علاج هدف مصاب بفيروس تاجي و/أو فيروس السعارء مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة علاجيا من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل لقاح فيروس سعار مأشوب يعبر عن بروتين سكري مستمنع لفيروس تاجي واحد على الأقل أو جزء منه؛ حيث يحث اللقاح المذكور الاستجابة المناعية الفعالة ضد واحد أو كل من الفيروسات المذكورة.
في نماذج محددة؛ يكون البروتين السكري المستمنع للفيروس التاجي أو ‎die eda‏ المشفر بواسطة ناقل لقاح السعار المأشوب المستخدم في جوانب مختلفة من الكشف الحالي عبارة عن بروتين سكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. من الممكن أن يكون البروتين السكري المستمنع أو جزء ‎die‏ نماذج ونواجي ونواحي هناء عبارة عن بولي بيبتيد مشتمل على تسلسل حمض أميني للمتوالية رقم 8 12 أو 14. في نماذج أخرى محددة؛ يكون البروتين السكري المستمنع للفيروس التاجي أو قطعة منه المشفر بواسطة ناقل لقاح السعار المأشوب المستخدم في جوانب مختلفة من الكشف عبارة عن بروتين سكري الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. في نماذج أخرى محددة؛ يعبر ناقل فيروس السعار المأشوب المستخدم في جوانب مختلفة للكشف 0 أيضا عن واحد أو أكثر من بروتينات الفيروس التاجي الإضافية أو القطع المستمنعة منها. في نماذج مختلفة. من الممكن أن تكون بروتينات الفيروس ‎all‏ الإضافية عبارة عن بروتين (أو القطع المستمنعة منها) يتم اختياره من مجموعة تتكون من عديد البروتين المتنسخ؛ بروتين ‎¢E‏ بروتين ‎(N‏ ‏بروتين 14 أو بروتين غير بنيوي؛ على سبيل المثال؛ من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. في نماذج مختلفة؛ يتم اختيار 5 بروتينات الفيروس التاجي الإضافية من المجموعة التي تتكون من أي واحد من بروتينات الفيروس التاجي؛ أو القطع المستمنعة الخاصة بها. في نماذج مختلفة أخرى؛ يتم اختيار بروتينات الفيروس التاجي الإضافية من مجموعة تتكون من أي واحد من بروتينات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط؛ أو القطع المستمنعة الخاصة بها. يتأمل الكشف أيضا في التعبير عن البروتين السكري للفيروس التاجي بواسطة نواقل لقاح فيروس 0 السعار المأشوب المستخدم في العديد من نواحي الكشف وبتم التعبير ‎die‏ كقطع مستمنعة. تكون القطعة المستمنعة لبروتين الفيروس التاجي؛ من أهداف هذا الكشف؛ عبارة عن أي قطع لبروتين الفيروس التاجي الذي يكون قادرا بشكل كبير على حث نفس الاستجابة المناعية كبروتين مناظر كامل الطول. من الممكن أن تشير نفس الاستجابة المناعية فعليا إلى على سبيل ‎(Jl‏ حيث يكون تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد القطع تقريبا نفس ‎al‏ أو أقل من حوالي 7275 أو 280 أو 190 أو 195 أو 199 أو أكثر من تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد بروتين
الفيروس التاجي كامل الطول المختبر عند نفس الظروف. في نموذج خاص؛ تحتوي قطعة البروتين السكري المستمنع للفيروس التاجي على مجال 51 للبروتين الشوكي. يتأمل الكشف أيضا في التعبير عن أي بروتين للفيروس التاجي الإضافي بواسطة نواقل فيروس السعار المأشوب المستخدم في نواحي مختلفة للكشف وبتم التعبير عنه كقطع مستمنعة. تعد القطعة المستمنعة لبروتين الفيروس التاجي عبارة عن؛ من أهداف هذا الكشف؛ أي قطع لبروتين الفيروس التاجي الذي يكون قادرا بشكل كبير على حث نفس الاستجابة المناعية كبروتين مناظر كامل الطول. من الممكن أن تشير نفس الاستجابة المناعية فعليا إلى على سبيل ‎(JB‏ حيث يكون تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد القطع تقريبا نفس التركيز» أو أقل من حوالي 775؛ أو 780؛ أو 0 أو 295 أو 299 أو أكثر من تركيز الأجسام المضادة المستحثة ضد بروتين الفيروس التاجي 0 كامل الطول المختبر عند نفس الظروف. في نماذج أخرى؛ يتم إضعاف لقاح فيروس السعار المأشوب؛ لدرجة أنه يتم استبعاد خصائص الفوعة العصبية الخاصة به أو تقل فعليا لدرجة أنه يتم تجنب الضرر العصبي النموذجي لفيروس السعار. في نماذج معينة؛ يعد لقاح فيروس السعار المأشوب عبارة عن اللقاح الموهن الحي "فيروس السعار ‎SAD 9‏ " وبتم إضعافه بواسطة ممر استنبات النسيج وستخدم كلقاح فموي حي للأحياء البرية 5 في أورويا لسنوات عديدة. في نماذج محددة أخرى؛ يشتق لقاح فيروس السعار المأشوب من فيروس السعار 5811319 عن طريق توفر تغيرات جينية إضافية تعمل أيضا على إضعاف الفيروس. من أهداف هذا الكشف؛ يشير مصطلح "'مشتق" إلى جسيم الحمض النووي المعدل ‎(Jie)‏ ناقل اللقاح) نسبة للأحياء البرية أو أي مصدر ‎AT As‏ حيث يحدث بداخله التغييرات» حيث تتضمن التغييرات تغييرات جينية و/أو 0 تغييرات ‎dle‏ مشتملة على بدائل النيوكليوتيد المفردة (طفرات النقطة)؛ الحذف؛ الإدخال؛ الانقلاب؛ طفرات النقطة المتعددة؛ والتغييرات الكيميائية مثل ميثلة الحمض النووي دي أوكسي رببوزي أو الأستلة. في نماذج محددة؛ أشتق فيروس السعار 1319 ‎SAD‏ ليكون "31157 " عن طريق إدخال تسلسل الإشارة لنسخ التوقف- البداية الجديد فيروس السعار المحاط بواسطة مواقع التقييد الوحيدة 7 و]20:01 بين البروتين النووي ‎(N)‏ وجينات البروتين الفسفوري ‎(P)‏ لإدخال الجينات الأجنبية 5 (نظر شكل 1). في نموذج آخرء يشتق ناقل ‎Lad BNSP‏ (ويضعف) عن طريق إدخال تغير
‎Arg>Glu‏ عند الحمض الأميني 333 لبروتين 6 لفيروس السعار (انظر شكل 1). تم توضيح طفرة 3 لإضعاف الفوعة العصبية بشكل كبير لفيروس السعار في الفأر البالغ. في نماذج معينة أخرى؛ يوفر الكشف خلايا المضيف التي تعمل على تقل المادة الوراثية الفيروسية مع لقاحات فيروس السعار المأشوب طبقا للكشف من أجل الأهداف؛ المتضمنة؛ التعبير عن البروتين المشفر بواسطة لقاحات الفيروس و/أو لتوليد فيريونات سعار مأشوبة؛ ‎lly‏ يتم عزلها واستخدامها في تركيبات اللقاح طبقا لجوانب مختلفة ونماذج الكشف. من الممكن أن تتضمن خلايا المضيف المناسبة أي خلية عرضة للنقل أو للتلوث في المختبر مع لقاح فيروس ‎land‏ متضمنا أي خطوط خلية بشرية أو خطوط خلية حيوانية. تكون خطوط الخلية تلك واستخدامها في التعبير عن البروتينات وتكوين فيريونات السعار معروفة في المجال وموضحة بالتفصيل في؛ على سبيل المثال» ‎Barrett‏ ‎Dev Biol (Basel). 10‏ لق ‎PN et al., Expert Rev Vaccines. 2009 May; 8(5):607-18; Tordo N et‏ ‎Toovey S. et al., Travel Med Infect Dis. 2007 Nov; 5(6):327-48;‏ ;131:467-76 ;2008 ‎Chelbi-Alix MK, J Interferon Cytokine Res. 2006 May; 26(5):271-80; Morenweiser R. et‏ ‎al., Gene Ther. 2005 Oct; 12 Suppl 1:S103-10; Morimoto K et al., Virus Res. 2005 Jul;‏ ‎Epub 2005 Apr 11; Finke S et al., Virus Res. 2005 Aug; 111(2):120-31; and‏ .111(1):61-7 ‎Halder M., Altern Lab Anim. 2002 Jan-Feb; 30(1):93-108; and Montagnon BJ et al., Dev 15‏ ‎«Biol Stand. 1998; 93:119-23,‏ وبتم إدراجها جميعا هنا كمرجع. من المفضل أن يتم صنع فيروسات لقاح السعار وإنتاج أي فيريونات فيروسية واستخدامها كلقاحات طبقا لأي متطلبات ضرورية قومية و/أو عالمية للصحة والأمان بالنسبة لفيروس السعار والفيروسات التاجية؛ مثل؛ طبقا لمتطلبات مركز الولايات المتحدة للتحكم في الأمراض أو منظمة الصحة العالمية. من الممكن أن تتضمن مركبات اللقاح طبقا للكشف؛ في نماذج محددة؛ ‎Jala‏ مقبول دوائيا أو سواغ؛ كما هو موضح بالأسفل. في نموذج ‎AT‏ مماثل للكشف؛ قام المخترعون تحديدا بتركيب خمسة نواقل لقاح فيروس السعار المأشوب للأمثلة؛ ‎lly‏ تتضمن: (أ) ‎BNSP333-GP‏ ( النسخ المماثل المختص؛ لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن ‎ZEBOV GP‏ لسلالة ماينجا)؛ (ب) ‎BNSP333-S‏ (النسخ الممائل 5 المختص» لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط)؛ (ج) ‎BNSP333-SA29‏ (النسخ المماثل المختص؛ لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع قطع النهاية ع للحمض الأمينى 29)؛ (د) ‎BNSP333-SA19‏ (النسخ المماثل المختص؛ لقاح ناقل فيروس السعار
المأشوب للتعبير عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع قطع النهاية ع للحمض الأمينى 29)؛ (ه) ‎BNSP333-S1‏ (النسخ المماثل المختص؛ لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين كيميري المشتمل على مجال ‎ST‏ للبروتين السكري 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط والمجال الخارجي؛ المجال عبر الغشائي؛ والمجال السيتوبلازمي لفيروس السعار 6). تكون تلك التركيبات المحددة معروفة ضمن نطاق الكشف والأمثلة الخاصة بتلك المركبات لا تجعل الكشف مقتصرا على أي طريقة. لقد وجب التنويه أيضا ‎le‏ أنه تم استخدام نسخ-ناقل لقاح السعار المعيب؛ خطوط الخلية التي توفر الوظائف الخلالية المعيبة/ المفقودة التي تعد ضرورية لانتشار الفيروسات و/أو للسماح بتحضير الفيريونات. تعد تلك الوظائف الخلالية
وخطوط الخلية معروفة في المجال وتتعلق باستخدام نواقل لقاح السعار.
يزعم الكشف الحالي بأن أي جينوم مناسب لفيروس السعار أو ناقل من الممكن أن يتم استخدامه كمركب اللقاحات المأشوية طبقا للكشف. وبهذاء من الممكن أن يتم الحصول على جينوم فيروس السعار من أي سلالة مناسبة أو عزل فيروس السعار؛ طالما حدث ذلك أو يؤدي هذا إلى إضعافه. يعد هدف الكشف؛ يعني مصطلح 'يضعف" يتعلق بخاصية جينوم فيروس السعار طبقا للكشف؛ أن جينوم فيروس السعار أو الناقل يكون قادرا على الاتصال الفيروسي؛ الإدخال؛ وفي بعض الحالات؛
5 النسخ في خلية المضيف. بالرغم من ذلك؛ جينومات فيروس السعار الضعيفة- مقارنة بفيروسات السعار الضعيفة أو جينومات فيروس السعار- لديها بشكل كبير أو بشكل تام فقدان في خاصية الفوعة العصبية. بطريقة أخرى؛ الخاصية الموجهة للأعصاب لفيروسات السعار الضعيف ‎lids‏ ‏للكشف من المفضل أن يتم إلغائها أو تم إلغائها فعليا بحيث تظل نواقل فيروس السعار طبقا للكشف آمنه للإعطاء للمريض أو الحيوان بدون الأخذ في الاعتبار التأثيرات العصبية.
0 إن علم الأحياء الأساسي لفيروس السعار معروف جيدا. يكون فيروس السعار عبارة عن فيروس الحمض النووي الرببوزي سلبي الشريط غير مقسم لمقاطع من عائلة فيروسات الرابدو؛ والذي يعد مسببا لمرض السعار. يعتبر السعار مرضا ممكن حدوثه في فصائل ذوات الدم الساخن. يتبع الإصابة بفيروس السعار تفشي في الخصائص الإكلينيكية ووفاة كل الفصائل المصابة تقريبا. في أوروباء والولايات المتحدة الأمريكية وكندا لا يزال سعار الحياة البرية موجودا ويمثل عاملا مهما جدا في
5 معظم حالات السعار البشرية التي تحدث. على الصعيد الآخرء يشكل السعار الحضري السبب الرئيسي في السعار البشري في البلاد المتطورة والقارات بأكملها؛ مثل أفريقيا.
تتكون فيروينات فيروس ‎lead)‏ من اثنين من المكونات الأساسية_البنيوية: قفيصة نووية ‎nucleocapsid‏ أو بروتين نووي رببوزي ‎((RNP) ribonucleoprotein‏ وغشاء على هيئة غشاء ثنائي الطبقة ‎bilayer membrane‏ يحيط بقلب بروتين نووي رببوزي. يكون المكون المسبب لمرض فيروس السعار هو قلب بروتين نووي ريبوزي والذي يتكون من جينوم الحمض النووي الريبوزي موجود في بروتين القفيصة النووية ‎(N)‏ بالاتحاد مع اثنين من البروتينات الثانوية» أي -الحمض النووي الرببوزي الحمض النووي الريبوزي المعتمد- بوليميراز ‎(L) polymerase‏ والبروتين الفسفوري ‎(P)‏ يتكون الغشاء المحيط بقلب الحمض النووي الريبوزي من اثنين من البروتينات: بروتين سكري للغشاء
الخلالي ‎(G)‏ ومصفوفة بروتين ‎(M)‏ تقع في الموضع الداخلي للغشاء . يعد بروتين ©؛ المشار إليه أيضا بالبروتين ‎«(Sod‏ مسئولا عن اتصال الخلية والتحام الغشاء في
0 فيروس السعار بالإضافة إلى كونه الهدف الأساسي للنظام المناعي المضيف. يتم تحديد منطقة الحمض الأميني عند الموضع 330 حتى 340 (يشار إليها كمكان للمستضد ‎(III antigenic site‏ للبروتين 6 لتكون مسئولة عن إمراضية الفيروس؛ وبشكل خاص بقايا ‎Arg‏ عند الموضع 333. يكون لدى سلالات فيروس السعار نفس الإمراضية عند المكان المستضد المحدد ‎JIT‏ ‏بالرغم من تسبب فيروس السعار النوع الشرس في مرض مميت للجهاز العصبي المركزي ‎central‏
‎(CNS) nervous system 5‏ في الفصائل الثديية؛ لا يتسبب الشكل (الأشكال) الضعيفة لفيروس السعار في تلك المشاكل. من الممكن أن يتم توضيح جينوم فيروس السعار الضعيف المناسب أو النواقل في؛ على سبيل المثال» في براءة الاختراع الأمريكية أرقام: 7.544.791؛ 7.419.816؛ 6.887.479؛ 46.719.981 5 6.706.523 ودتم إدراجهم هنا كمرجع.
‏0 في النموذج المفضل؛ يعتمد جينوم فيروس السعار الموهن الخاص بالكشف على سلالة فيروس السعار ‎SAD B19‏ المؤهلة للاستنساخ؛ وهي سلالة فيروس السعار التي تم استخدامها في المناعة الفموية لحيوانات الأحياء البرية في أورويا ‎EY‏ من 20 عاما وسجلت معدلات أمان جيدة. يكون تسلسل النيوكليوتيد ل ‎SAD B19‏ متاحا بصورة ‎dale‏ برقم دخول في بنك الجينات ‎M31046.1‏ (متوالية رقم: 20).
‏5 يتعلق أيضا الكشف ببولي بيبتيد الفيروس التاجي-واقترانها بالنيوكليوتيد وتسلسلات الحمض الأميني- الجينات التي يتم إدراجها بداخل نواقل فيروس السعار المأشوب الضعيف طبقا للكشف. يتأمل الاختراع
في استخدام أي بروتين للفيروس التاجي؛ متضمنا أي بروتين سكري سطحي للفيرون؛ البروتين النووي؛ البروتين البنيوي أو عنصر آلية النسخ؛ أو القطعة المستمنعة الخاصة ‎cd‏ والتي يتم إدراجها باستخدام التقنيات المعروفة والقياسية في علم الأحياء الخاص بالجسيم داخل جينومات فيروس السعار الضعيفة طبقا للكشف. في النماذج المفضلة؛ يتم التعرف على بروتينات الفيروس التاجي من الفيروس التاجي؛ متضمنا أي بروتين متعدد متنسخ؛ بروتين غشائي؛ بروتين قفيصة نووية؛ بروتين غشاء؛ بروتين شوكي؛ وبروتين غير بنيوي. يكون النيوكليوتيد المتطابق وتسلسل الحمض الأميني لبروتينات الفيروسات التاجية؛ بالإضافة إلى؛ البروتينات غير البنيوية والبنيوية المتطابقة للفيروسات التاجية؛ متاحة بسهولة في المجال ‎py‏ ‏استخدامها بسهولة بواسطة الكشف الحالي. بالتبعية؛ يوفر الجدول 1 التالي معلومات صائبة لقائمة 0 غير شاملة للتسلسلات المتاحة علنا والمتأملة بواسطة الكشف الحالي؛ ويشكل خاص بالنسبة للبروتين السكري الشوكي للفيروس التاجي. جدول 1. معلومات التسلسل عن تسلسلات الحمض الأميني للبروتين الشوكي للفيروس التاجي المتاح علنا بروتين جين الفيروس | تسلسل (تسلسلات) | رقم المتوالية الفيروس التاجي النيوكليوتيد للبنك الجيني | ‎Hl]‏ ‏التاجي رقم الشوكة (5) .| الفيروس التاجي ‎NC_019843.3‏ المتوالية لمتلازمة تنفس رقم:3 الشرق الأوسط الشوكة (5) .| الفيروس التاجي ‎AHV00721.1‏ المتوالية لمتلازمة تنفس رقم :4 الشرق الأوسط الشوكة (5) .| الفيروس التاجي ‎AAR86775.1‏ المتوالية المسبب لمتلازمة رقم:5 التنفس الحادة الوخيمة
الشوكة )5( الفيروس التاجي ‎AAR86775.1‏ المتوالية المسبب لمتلازمة رقم:7 التنفس الحادة الوخيمة يتأمل الكشف أيضا في لقاح فيروس السعار بشكل هندسي طبقا للكشف-باستخدام التقنيات المعروفة جيدا-ليس للتعبير فقط عن البروتين السكري للفيروس التاجي أو القطعة المستمنعة منه؛ ولكن للتعبير أيضا عن واحد أو أكثر من بروتينات الفيروس التاجي الإضافية أو القطع المستمنعة الخاصة به (مثل؛ بروتينات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة الإضافية). وبهذا الأسلوب؛ يكون متاحا استخدام ناقل فيروس سعار ضعيف ثنائي التكافؤ أو متعدد ‎SSA‏ طبقا للكشف. لقد وجد في المجال أن هناك تغيرات معينة في تسلسل النيوكليوتيد الذي يقوم بوظيفة المركب الجيني ولديه بروتينات قليلة أو لا يرتبط بالبروتين المشفر للمركب. تنتج تلك التغيرات إما في طفرات النقطة الصامتة أو طفرات النقطة التي تشفر الأحماض الأمينية المختلفة ولا تحد تغييرا ملحوظا في سلوك 0 البروتين المشفر. وجب التنويه أن أجزاء منطقة التشفير من الممكن أن يتم استبعادها بدون التأثير على تأثير المركب المرغوب؛ المسمى بحث الاستجابة المناعية الحامية ضد التصدي للفيروس التاجي. لقد وجب التنويه أيضا في المجال أنه تعمل بعض الخطوات المميزة المحددة على زيادة استضداد البروتين المشفر عن طريق تعديل تركيبة الحمض الأميني الخاص به. من الممكن أن تتوفر تلك التغييرات في تركيبة الحمض الأميني عن طريق تعديل التسلسل الجيني المشفر للبروتين. 5 وتكون تلك التعديلات والتغييرات في جينات البروتين السكري للفيروس الجيني متكافئة ضمن نطاق الكشف الحالي. بأي وسيلة مناسبة؛ متضمنا أي تقنيات معتمدة على البيولوجية الجزيئية أو معتمدة على الجينات وما شابه من الممكن أن يتم استخدامها لتركيب نواقل لقاح فيروس السعار المأشوب طبقا للكشف الحالي. في أحد النماذج؛ من الممكن أن يحصل الخبير في المجال أولا على ناقل فيروس السعار المناسب 0 لأغراض الكشف. ومن المفضل؛ أن تكون نواقل فيروس السعار مناسبة للبروتينات الضعيفة؛ بحيث لا يكون هناك تأثيرا سلبيا على الجهاز العصبي المركزي للهدف نتيجة إعطاء ناقل فيروس السعار. من الممكن أن يتم الحصول على نواقل فيروس السعار المناسبة بسهولة. من الممكن أن يتم تعديل
تلك النواقل لتحسين درجة الضعف باستخدام الطرق المعروفة. في النموذج المفضل؛ استخدم المخترعون الحاليون ناقل لقاح ‎BNSP‏ فيروس السعار (الشكل 1)؛ والذي يشتق من سلالة لقاح ‎«SAD B19‏ ويضعف بواسطة ‎jas‏ استنبات النسيج ‎tissue culture‏ ويستخدم كلقاح فموي حي ‎live‏ ‎oral vaccine‏ للأحياء البرية في أورويا.
في هذا التركيب بشكل خاص؛ كما تم مناقشته في مثال 1؛ تم هندسته ليحتوي على تسلسل الإشارة لنسخ التوقف- البداية الجديد فيروس السعار المحاط بواسطة مواقع التقييد الوحيدة 857177 ‎Nhel s‏ بين البروتين النووي ‎(N)‏ وجينات البروتين الفسفوري ‎(P) phosphoprotein‏ لجينوم فيروس السعار لإدخال الجينات الأجنبية. بالرغم من ذلك؛ للإزالة التامة للفوعة العصبية الموجودة في هذا المركب؛ ويتولد أيضا مشتق ضعيف ‎('BNSP333")‏ يحتوي على تغير ‎Arg>Glu‏ عند الحمض الأميني 333
0 لفيروس السعار 6؛ الموضحة لإضعاف الفوعة العصبية بشكل كبير لنواقل لقاح فيروس السعار في الفأر البالغ. كما هو موضح بالتفصيل في الأمثلة؛ قام المخترعون بتركيب خمسة لقاحات لفيروس السعار المأشوب مختلفة معتمدة على لقاح فيروس السعار الضعيف ‎<BNSP333‏ والتي تتضمن: (أ) ‎BNSP333-GP‏ ‏( النسخ المماثل المختص؛ لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن ‎ZEBOV GP‏ لسلالة 5 _ماينجا)؛ (ب) ‎BNSP333-S‏ (النسخ المماثل المختص؛ لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط)؛ (ج) ‎BNSP333-SA29‏ (النسخ المماثل المختصء لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع قطع النهاية ¢ للحمض الأميني 29)؛ (د) ‎BNSP333-SA19‏ (النسخ المماثل المختصء لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين 5 للفيروس التاجي لمتلازمة 0 تنفس الشرق الأوسط مع قطع النهاية ‎c‏ للحمض الأميني 29)؛ (ه) ‎BNSP333-S1‏ (النسخ المماثل المختصء لقاح ناقل فيروس السعار المأشوب للتعبير عن بروتين كيميري المشتمل على مجال 51 للبروتين السكري 5 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط والمجال الخارجي؛ المجال عبر الغشائي؛ والمجال السيتوبلازمي لفيروس السعار 6). أثناء تركيب مركبات ناقل فيروس السعار طبقا للكشف؛ من الممكن أن يتم اختيار بولي بيبتيد مناعي للفيروس التاجي المرغوب ‎Jin)‏ البروتين السكري الشوكي الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة أو الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط) والحصول عليه معتمدا على
التسلسلات المتاحة بسهولة واستخدام التقنيات البيولوجية الجزيئية المعروفة جيدا. على سبيل المثال؛ أحد الاهتمامات هو استخدام لقاح فيروس السعار ليدخل البروتين الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسطء أو ‎ia‏ منه؛ داخل المريض ويمكن الحصول على تسلسل النيوكليوتيد لجين البروتين السكري الشوكي من الفيروس التاجي عن طريق استخدام المعلومات المعروفة المتاحة بسهولة (متل؛ موقع البيانات الذي يعمل عن طريق المركز القومي لمعلومات التقنيات الحيوية). من الممكن أن يتم استخدام الاستراتيجية المعتمدة على تفاعل سلسلة بوليمراز ‎polymerase chain‏ ‎(PCR) reaction‏ لتكبير الجين الشوكي من مصدر مناسب لنموذج الحمض النووي دي أوكسي رببوزي» والذي يكون متاحا أيضا بسهولة لخبراء المجال؛ استخدام أوليات ‎primers‏ الأوليجونيوكليوتيد ‎oligonucleotide‏ المصمم من التسلسل الجيني نفسه. بعد التكبيرء يتم تنفيذ الطرق القياسية 0 للاستنساخ الحيوي؛ تأكيد التسلسل؛ التعبيرء ونقل تسلسل النيوكليوتيد لناقل فيروس السعار 3 أو أي ناقل آخر مناسب لفيروس السعار طبقا للكشف) للحصول على ناقل فيروس السعار المأشوب المرغوب للتعبير عن البروتين السكري الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وسوف يكون ظاهرا بسهولة؛ بالرغم من ذلك؛ يحتاج أي عمل يتم تنفيذه باستخدام التسلسلات أو المواد من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو أي فيروس تاجي للتنفيذ 5 إلى مستوى أمان حيوي ‎Biosafety Level‏ محسوب لمنع الخطر الواضح أثناء العمل والتعامل مع
الفيروسات التاجية. يتأمل أيضا الكشف في تقديم أكثر من بولي بيبتيد مناعي واحد للفيروس التاجي داخل نفس ناقل فيروس السعار المأشوب. على سبيل المثال؛ من الممكن أن يكون واحد؛ باستخدام نفس الإجراءات الموضحة بالأعلى» بالإضافة إلى أي إجراءات أخرى مناسبة؛ وتحضير اثنين أو أكثر من تسلسلات 0 النيوكليوتيد التي تشفر البولي بيبتيدات المناعية المختلفة للفيروس التاجي؛ مثل؛ حيث يعد أول بولي بيبتيد قيد الاهتمام عبارة عن البروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو ‎die dak‏ ويعد ثاني بولي بيبتيد قيد الاهتمام عبارة عن البروتين السكري المتنسخ للفيروس التاجي (مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط)؛ البروتين الغشائي؛ وبروتين القفيصة النووية؛ بروتين الغشاء؛ البروتين ‎«(Soll‏ والبروتين غير البنيوي. وبذلك؛ يتأمل الكشف الحالي في إعطاء 5 تاقل فيروس السعار الذي يحتوي ويعبر عن كل من البروتين السكري للفيروس التاجي الوحيد ‎(Jie)‏ ‏الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة
الوخيمة) والقطعة الأخرى المناعية لبولي بيبتيد الفيروس التاجي ‎cia)‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة). بالرغم من ذلك؛ من الممكن أن يندمج اثنين أو أكثر من مركبات لقاح فيروس السعار المختلفة مع الإعطاء المفرد أو عن طريق الإعطاء المساعد؛ حيث يتم التعبير هندسيا عن كل لقاحات فيروس السعار كقطعة بولي بيبتيد مناعية مختلفة للفيروس التاجي. ويتأمل الكشف أيضا في؛ حدوث التفاعلية المتصالبة؛ أي؛ حيث يتم حث الأجسام المضادة أو استجابة الخلية 7 السامة ‎cytotoxic T-cell response WAL‏ مع الاستجابة لواحد من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو بولي بيبتيد الفيروس التاجي حيث يتفاعل تصالبيا مع البولي بيبتيد المتماثل من أنواع مختلفة من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو حتى 00 مع جين مختلف من الفيروس التاجي؛ يتصور الكشف لقاح وحيد يعبر عن بولي بيبتيد وحيد للفيروس التاجي أو قطعة منه (مثل؛ قطعة بروتين سكري شوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط) يتم حثها في الاستجابة المناعية التي تتفاعل تصالبيا ضد أنواع أخرى من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو فيروسات تاجية أخرى ‎(Jie)‏ الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة). ويتأمل الكشف أيضا في مركبات اللقاح التي تشتمل على نواقل لقاح فيروس 5 السعار المأشوية المستقلة التي تعبر عن البروتينات الشوكية المستمنعة المحددة أو قطع منها للفيروسات التاجية المختلفة وبذلك تؤثر تركيبة اللقاح الوحيدة عكسيا في الفيروسات التاجية المختلفة (مثل؛ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط و الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة) التي يتم إعطاؤها. تلك الطرق وأخرى للحصول على و/أو تحضير مركبات لقاح فيروس السعار الموجودة في؛ على سبل المثال؛ البروتوكولات الحالية في بيولوجية الأحياء؛ ‎Ausubel et al.(eds.), John Wiley and‏ ‎.Sons,Inc‏ ‏يتأمل أيضا الكشف في الخلايا المضيفة التي يتم نقلها بواسطة نواقل فيروس السعار المأشوية الخاصة بالكشف ‎lly‏ يمكن استخدامها للتعبير عن البروتين المشفر للفيروس و/أو وليكون فيربونات السعار المأشوية. تكون طرق وتقنيات الحصول على استنبات الخلية المستمر للإصابة بفيروسات 5 السعار معروفة في المجال. من الممكن أن يتلوث خط الخلية (أو يتم نقله) بناقل لقاح السعار المأشوب الخاص بالكشف. من الممكن أن تستخدم خطوط الخلية للتعبير عن البروتينات الفيروسية؛
أو من الممكن أن تستخدم لإنتاج كل فيريونات السعار المحتوية على الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط المعبر عنها أو بولي بيبتيد الفيروس التاجي المرغوب أو قطع منه التي يتم التعبير عنها بواسطة ناقل لقاح السعار المأشوب المستخدم ليلوث الخلايا. من الممكن أن تشتمل خلايا المضيف المناسبة على أي خلية حساسة يتم نقلها أو تلوثها في المختبر مع لقاح فيروس ‎andl‏ ‏5 المشتمل على أي خطوط خلية بشرية أو خطوط خلية حيوانية. من الممكن أن يتم استخدام خطوط الخلية تلك في التعبير عن البروتينات وتكوين فيريونات السعار المعروفة في المجال والموضحة بالتفصيل فيء على سبيل المثال) ‎Barrett PN et al., Expert Rev Vaccines. 2009 May;‏ ‎Dev Biol (Basel). 2008; 131:467-76; Toovey S. et al., Travel‏ لة ‎N et‏ 10100 ;8(5):607-18 ‎Med Infect Dis. 2007 Nov; 5(6):327-48; Chelbi-Alix MK, J Interferon Cytokine Res.‏ ‎Gene Ther. 2005 Oct; 12 Suppl 1:S103- 10‏ لق ‎May; 26(5):271-80; Morenweiser R. et‏ 2006 ‎Morimoto K et al., Virus Res. 2005 Jul; 111(1):61-7. Epub 2005 Apr 11; Finke S et‏ ;10 ‎al., Virus Res. 2005 Aug; 111(2):120-31; and Halder M., Altern Lab Anim. 2002 Jan-‏ ‎Feb; 30(1):93-108; Montagnon BJ et al., Dev Biol Stand. 1998; 93:119-23‏ والمدرجة هنا 5 .من المفضل أن يتم صنع فيروسات لقاح السعار وإنتاج أي فيريونات فيروسية واستخدامها كلقاحات طبقا لأي متطلبات ضرورية قومية و/أو عالمية للصحة والأمان بالنسبة لفيروس السعار والفيروسات التاجية؛ مثل؛ طبقا لمتطلبات مركز الولايات المتحدة للتحكم في الأمراض أو منظمة الصحة العالمية. من ناحية أخرى طبقا للكشف؛ لقاحات ناقل فيروس السعار المأشوية طبقا للكشف؛ أو لقاحات الفيريون للسعار المأشوية (حيث تعبر عن قطعة من أو على البولي بيبتيد (بيبتيدات) للفيروس التاجي 0 المرجو) من الممكن أن تتشكل كتركيبات طبقا للطرق المعروفة لتحضير التركيبات الدوائية والتركيبات الصيدلانية. من الممكن أن يعتمد نوع ومكونات التركيبات الصيدلانية الخاصة بالكشف على طريقة الإعطاء؛ ‎Jie‏ عن طريق الفم؛ الحقن أو الجلد. من الممكن أن تشتمل التركيبات الصيدلانية وتركيبات الإعطاء الفموي على مساحيق أو حبيبات ‎cgranules‏ جزيئات ميكروية ‎emicroparticulates‏ حبيبات تانوية ‎¢nanoparticulates‏ معلقات ‎suspensions 5‏ أو محاليل في الماء أو وسط غير ‎non-aqueous media (Slo‏ وكبسولات» وكبسولات هلامية ‎capsules‏ 861» أكياس» أقراص أو أقراص صغيرة. متخنات ‎«Thickeners‏ عوامل منكهة ‎flavoring agents‏ مخففات ‎«diluents‏ مستحلبات ‎emulsifiers‏ إضافات مشتتة ‎dispersing aids‏ أو مساعدات تماسك ‎binders‏ من الممكن أن يكون مرغوب فيها.
تستخدم المركبات الصيدلانية والتركيبات للحقن» والإعطاء داخل القراب أو داخل البطين ومن الممكن أن تتضمن محاليل مائية معقمة ومن الممكن أن تحتوي أيضا على صادات؛ مخففات وإضافات أخرى مناسبة مثل؛ ولكن ليس مقتصرة على» محسنات الاختراق ‎«penetration enhancers‏ مركبات الحوامل والحوامل الأخرى المقبولة صيدلانيا أو السواغ.
من الممكن أيضا أن تشتمل التركيبات الدوائية على؛ ولكن ليس مقتصرا ‎le‏ المحاليل؛ المستحلبات؛ المركبات المحتوية على الجسيم الدهني ‎liposome‏ من الممكن أن تتولد تلك المركبات من مكونات مختلفة تتضمن؛ ولكن ليست مقتصرة ‎lo‏ السوائل المعدة مسبقاء ‎gall‏ الصلبة ذاتية الاستحلاب والمواد الشبه صلبة ذاتية الاستحلاب. من الممكن تحضير المركبات الدوائية طبقا للكشف الحالي؛ والتي من الممكن تقديمها على شكل
0 جرعة واحدة»؛ طبقا للتقنيات التقليدية المعروفة في مجال صناعة الأدوية. بصورة عامة؛ يتم تحضير المركبات بانتظام عن طريق ربطها بالمواد الفعالة مع الحوامل السائلة أو الحوامل الصلبة المقسمة أو كليهماء ثم» إذا كان ضرورياء يتم تشكيل المنتج. في نماذج محددة؛ من الممكن أن تساهم التركيبات الدوائية طبقا للكشف الحالي في المركبات الحاملة في المركبات. كما هو مستخدم هناء من الممكن أن يشير "مركب حامل" أو "حامل" إلى الحمض 5 النووي؛ أو النظير الخاص به؛ ويكون خاملا (أي؛ لا يسجل أي نشاط بيولوجي كل ثانية) ولكن يتم تعريفه كحمض نووي في عمليات الكائن الحي التي تقلل التوافر الحيوي ‎bioavailability‏ للحمض النووي الذي لديه نشاط حيوي عن طريق؛ على سبيل المثال؛ تحلل النشاط الحيوي للحمض النووي أو تحفيز إزالته من الدورة الدموية. من الممكن أن يؤدي الإعطاء المساعد للحمض النووي؛ مثل ناقل لقاح السعار الخاص بالكشف؛ والمركب ‎celal)‏ مع زبادة المواد الأخيرة بصورة نموذجية؛ إلى 0 الاختزال الشديد لكمية الحمض النووي المستخرجة من الكبد ‎diver‏ الكلى ‎kidney‏ أو المستودعات خارج الدورة الدموية ‎cextracirculatory reservoirs‏ لافتراضية أن يكون هناك منافسة بين المركب الحامل والحمض النووي للوصول للمستقبل المشترك. على سبيل المثال» من الممكن أن تقل الاستعادة الجسيمية للفوسفوثيوات ‎phosphorothioate‏ الحمض النووي الريبوزي مزدوج الجديلة ‎double‏ ‎(dsRNA) stranded ribonucleic acid‏ في الأنسجة الكبدية ‎hepatic tissue‏ عندما يتم إعطاؤه مع حمض البولي أينوسينيك ‎cpolyinosinic acid‏ ديكستران سلفات ‎dextran sulfate‏ حمض البوليسيتيديك ‎polycytidic acid‏ أو 4-أسيتاميدو-4" أيزوثيوسيانو-ستيلبين-2 72-حمض داي
سلفونيك ‎Miyao et al., DSRNA ) 4-acetamido-4'isothiocyano-stilbene-2,2'-disulfonic acid‏ ‎Res.
Dev., 1995, 5, 115-121; Takakura et al., DSRNA & Nucl.
Acid Drug Dev., 1996, 6,‏ 177-183. من الممكن أن تشتمل المركبات الدوائية طبقا للكشف على "حامل دوائي" أو 'سواغ» والذي بغرض الكشف؛ يكون عبارة عن مذيب ‎solvent‏ مقبول دوائياء عامل تعليق ‎inert vehicle‏ أو أي مركبة خاملة ‎inert vehicle‏ دوائية لتوصيل واحد أو أكثر من الأحماض النووية (مثل؛ ناقل فيروس السعار المأشوب طبقا للكشف) أو البولي بيبتيد أو فيريون الفيروس ‎cia)‏ فيريون السعار المأشوب المعبر عن واحد أو أكثر من البروتينات السكرية للفيروس التاجي (متضمنة ‎ohn‏ منها) خاص بالكشف) للحيوان. من الممكن أن يكون السواغ عبازة عن سائل أو مادة صلبة يتم اختيارهاء مع مراعاة أسلوب 0 الإعطاء ‎coll‏ لكي يوفر الكمية المطلوب؛ التماسك؛ إلخ؛ عندما يتحد العامل النشط طبقا للكشف (مثل؛ ناقل لقاح السعارء فيريون؛ أو البولي بيبتيدات المعبر عنها) مع المكونات ‎GAY)‏ للتركيبة الدوائية المعطاة. تشتمل الحوامل الدوائية بصورة نموذجية على؛ ولكن ليس مقتصرا على؛ عوامل ‎binding agents Jal‏ (مثل؛ نشاء الذرة المضاف إليه الجيلاتين مسبقا ‎pregelatinized maize‏ ‎«starch‏ بولي فينيل بيروليدون ‎polyvinylpyrrolidone‏ أو هيدروكسي ‎Jug‏ ميثيل سيليللوز ‎hydroxypropyl methylcellulose 5‏ إلخ)؛ المرشحات ‎fillers‏ (مثل؛ اللاكتوز ‎lactose‏ والسكريات الأخرى» السيلليلوز دقيق التبلور ‎microcrystalline cellulose‏ البكتين مناءءم» الجلاتين ‎cgelatin‏ ‏كالسيوم سلفات ‎ccalcium sulfate‏ إيثيل سيليلوز ‎cethyl cellulose‏ بولي أكريلات ‎polyacrylates‏ ‏أو هيدروجين كالسيوم فوسفات ‎«calcium hydrogen phosphate‏ إلخ)؛ زيوت التشحيم ‎lubricants‏ ‎fic)‏ ¢ سترات الماغنيسيوم ‎cmagnesium stearate‏ التلك ‎ctale‏ السيليكا ‎esilica‏ ثاني أكسيد السيليكون 0 الصمغي ‎¢colloidal silicon dioxide‏ حمض السيتريك ‎acid‏ 116ة508»؛ سيتيرات الألومينيوم المعدني ‎emetallic stearates‏ الزيوت النباتية المهدرجة ‎Wa chydrogenated vegetable oils‏ الذرة ‎corn‏ ‎ds cstarch‏ إيثيلين جليكول ‎Cod (PEG) polyethylene glycols‏ الصوديوم ‎sodium‏ ‎cbenzoate‏ أسيتات الصوديوم ‎csodium acetate‏ إلخ.)؛ مفتتات ‎estarch Wall ¢ Jie) disintegrants‏ غليكولات نشا الصوديوم ‎csodium starch glycolate‏ إلخ)؛ عوامل التندية ‎(ic)‏ صوديوم لوريل 5 سلفات ‎<sodium lauryl sulphate‏ إلخ).
السواغ غير العضوية أو العضوية المقبولة دوائيا المناسبة للإعطاء عن طريق خلاف ‎non- Call‏ ‎parenteral administration‏ لا يتفاعل بشكل مؤذي مع العوامل النشطة الخاصة بالكشف (مثل؛ ناقل لقاح السعارء الفيريون» أو البولي بيبتيدات المعبر عنها) ومن الممكن أن يتم استخدامها لتكون تركيبات الكشف الحالي. تشتمل الحوامل المقبولة دوائيا المناسبة على؛ وليس مقتصرة ‎(le‏ الماء؛ محاليل الملح ‎¢salt solutions‏ الكحولات ‎salt solutions‏ البولي إيثيلين جليكول؛ الجيلاتين؛ اللاكتوزء الأميلوز ‎camylose‏ ستيرات الماغنيسيوم» التلك» حمض السيليسيك ‎silicic acid‏ البرافين اللزج ‎paraffin‏ 156015 هيدروكسي ميثيل سيلليلوز ‎chydroxymethyleellulose‏ بولي فينيل بيروليدون وما شابه. من الممكن أن تحتوي أيضا التركيبات الدوائية طبقا للكشف الحالي على مكونات إضافية موجودة 0 بشكل تقليدي في التركيبات الدوائية؛ في مجال تأسيس مستويات الاستخدام. ‎ling‏ على سبيل المثال؛ من الممكن أن تحتوي التركيبات على مواد نشطة دوائياء ملائمة؛ إضافية؛ مثل؛ على سبيل ‎(JU‏ مضادات الحكة ‎cantipruritics‏ قابض الأوعية ‎castringents‏ المخدرات الموضعية ‎local‏ ‎canesthetics‏ عوامل مضادة للالتهاب ‎canti-inflammatory agents‏ أو من الممكن أن يحتوي على مواد إضافية مفيدة في أشكال الجرعة المختلفة المتكونة فيزيائيا للمركبات طبقا للكشف الحالي؛ مثل 5 الصبغات؛ عوامل المنكهة؛ المواد الحافظة ‎«preservatives‏ مضادات الأكسدة ‎cantioxidants‏ ‏المعتمات ‎copacifiers‏ عوامل التثخين ‎cthickening agents‏ المثبتات ‎stabilizers‏ بالرغم من ‎«lly‏ ‏تلك المواد؛ عندما يتم إضافتها؛ لا يجد أن تتداخل على نحو غير ملائم مع النشاطات البيولوجية لمكونات المركبات الخاصة بالكشف الحالي. من الممكن أن يتم تعقيم التركيبات و» إذا كان مرجواء ويمزج بعوامل مساعدة؛ مثل؛ على سبيل 0 المثال؛ زيوت التشحيم؛ المواد الحافظة؛ المثبتات؛ عوامل التندية؛ المستحلبات؛ الأملاح المؤثرة في الضغط التناضحي ‎osmotic pressure‏ المخففات ‎«buffers‏ الملونات ‎colorings‏ مواد التنكهة ‎flavorings‏ و/أو المواد العطرية ‎aromatic substances‏ وما شابه ولا تتفاعل بشكل مؤذي مع الحمض(الأحماض) النووية للتركيبة. من الممكن أن تحتوي المعلقات المائية على مواد تعمل على زيادة لزوجة المعلق متضمناء على 5 سببيل المثال» صوديوم كربوكسي ميثيل سيليللوز ‎csodium carboxymethylcellulose‏ السوربيتول ‎sorbitol‏ و/أو الديكستران ‎«dextran‏
— 4 5 —
من الممكن أن يحتوي المعلق على مثبتات. توفر نماذج محددة طبقا للكشف التركيبات الدوائية التي تحتوي على واحد أو أكثر من العوامل العلاجية الإضافية؛ على سبيل المثال؛ عقار الجسيمات الصغيرة غير الفيروسية الذي يثبط بعض جوانب إدخال الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط و/أو النسخ و/أو التجميعة؛ أو يساعد في تقليل واحد أو أكثر من علامات الإصابة ب الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الإصابة بأي فيروس تاجي ‎AT‏ مثل الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. تشتمل أمثل العوامل العلاجية تلك على؛ وليست مقتصرة على؛ الأسبرين ‎caspirin‏ الكودين ‎«codeine‏ ‏بنزوناتات ‎cbenzonatate‏ كلوروفينيرامين ‎cchlorpheniramine‏ سودوايفيدرين ‎«pseudoephedrine‏ ‏هيدروكودون ‎chydrocodone‏ كوليستيميثات ‎ccolistimethate‏ جيوفينيسين ‎cguafenesin‏ هيماتروفين ‎chomatropine 0‏ ليفودرويروييزين ‎devodropropizine‏ نوسكابين ع0ا(ه»008» أوكسيميتازولين ‎coxymetazoline‏ ترايبروليدين ‎ctriprolidine‏ داونوروييسين ‎«daunorubicin‏ داونوميسين ‎cdaunomycin‏ داكتينوميسين ‎ edactinomycin‏ دوكسوروييسين ‎cdoxorubicin‏ إيبيروييسين ‎epirubicin‏ إيداريبيسين ‎cidarubicin‏ إيسوروبيسين ‎cesorubicin‏ بليوميسين ‎¢bleomycin‏ ‏مافوسفاميد ‎¢mafosfamide‏ إيفوسفاميد ‎ifosfamide‏ سيتوسين أرابيتوسيد ‎«cytosine arabinoside‏ بيس - كلوروإيثيل نيتروسوريا ‎cbis-chloroethylnitrosurea‏ بيوسلفان ‎cbusulfan‏ ميتوميسين سيه ‎¢mitomycin C‏ أسيتينوميسين ديه 0 ‎cactinomycin‏ ميثراميثين ‎cmithramycin‏ بريدنيسون 0160015016 هيدروكسي بروجيستيرون ‎chydroxyprogesterone‏ تيستوستيرون ‎testosterone‏ ‏تاموكسيفين ‎tamoxifen‏ داكاريازين ‎«dacarbazine‏ بروكاريازين عصاعدطاته010» هيكساميثيل ميلامين ‎chexamethylmelamine‏ بينتاميثيل ميلامينين ‎<pentamethylmelamine‏ ميتوزانترون ‎cmitoxantrone 0‏ أمساكرين ‎camsacrine‏ كلورامبوسيل ‎chlorambucil‏ ميثيل سيكلوهيكسيانيتروسيرا ‎<methylcyclohexylnitrosurea‏ خرادل النيتروجين ‎mustards‏ دععدضتص ميلفالان ‎«melphalan‏ ‏سيكلوفوسفاميد ‎«cyclophosphamide‏ 6- ميركابتوبيورين ‎«6-mercaptopurine‏ 6-ثيوجيونانين -6 ‎thioguanine‏ سيترابين ‎cytarabine‏ 5-أزاسيتيدين ‎(S-azacytidine‏ هيدروكسي ‎Lys‏ ‎ chydroxyurea‏ دي أوكسيسوفورميسين ‎deoxycoformycin‏ 4-هيدروكسي بيروكسي 5 سيكلوفوسفوراميد ‎<4-hydroxyperoxycyclophosphoramide‏ 5-فلوراسيل ‎5-fluorouracil‏ (5- ‎«(FU‏ 5-فلورودي أوكسييوريدين ‎ 5-fluorodeoxyuridine‏ (6-5نا2)» ميثوتريكسات
— 4 6 — cvincristine ‏فينكرستين‎ ctaxol ‏تاكسول‎ «colchicine ‏كلوشيسين‎ ¢(MTX) methotrexate ‏إيرينوتيكان‎ ctrimetrexate ‏ترايميتريكسات‎ «(VP-16) etoposide ‏إيتويوسيد‎ cvinblastine ‏فينبلاستين‎ ‏سيسبلاتين‎ cteniposide ‏تيتيبوسيد‎ cgemcitabine ‏جيمسيتابين‎ topotecan (Sg ¢irinotecan
The Merck ‏انظرء بصورة عامة؛‎ (DES) diethylstilbestrol ‏إيثيل ستيلبيسترول‎ (slag cisplatin
Manual of Diagnosis and Therapy, 15th Ed. 1987, pp. 1206-1228, Berkow et ‏لق‎ eds., 5 ‏عندما يتم استخدامهم مع مركبات الكشف؛ من الممكن أن يتم استخدام العوامل‎ Rahway, NJ. ‏العلاجية مستقلة؛ تباعاء أو مندمجة مع واحد أو أكثر من العوامل العلاجية الأخرى. عقاقير مضادة‎ nonsteroidal anti- ‏للالتهاب؛ تتضمن وليست مقتصرة على عقاقير مضادة للالتهاب لاستيرويدية‎ «celecoxib ‏سيلكوكسيب‎ naproxen dodium ‏(مثل نابروكسين دوديوم‎ inflammatory drugs «diflunisal ‏داي فلويئنيسال‎ ¢salsalate ‏سالسالات‎ coxaprozin ‏أوكسابروزين‎ sulindac lanl 0 ‏ميلوكسيكام‎ cetodolac ‏إيتودولاك‎ cindomethacin ‏إندومثاسين‎ epiroxicam ‏بيروكسيكام‎ ‎ketorolac ‏كيتورولاك تروميثامين‎ cnabumetone ‏نابيوميتون‎ cnaproxen ‏نابروكسين‎ ¢meloxicam ‏إيبويروفين‎ ediclofenac ‏ديكلوفيناك‎ cesomeprazole ‏نابروكسين/إيسوميبرازول‎ ctromethamine ‏(مثل؛ بيثاميثاسون‎ corticosteroids ‏و/أو أسبرين) والهرونات المنشطة‎ «ibuprofine ‎ cbethamethasone 5‏ بربدنيسون؛ بربدنيسولون ‎prednisolone‏ ترايامسينولون ‎«triamcinolone‏ ‏ميثيلبربدنيسولون ع(710:60015010ا08» ديكساميثاسون ‎«dexamethasone‏ هيدروكورتيزون ‎hydrocortisone‏ كورتيزون ‎cortisone‏ إيثاميتاسوناب ‎«ethamethasoneb‏ و/أو فلودروكورتيزون ‎ ¢(fludrocortisone‏ عقاقير مضادة للفيروسات (متضمنة وليست مقتصرة ‎le‏ أمانتادين ‎camantadine‏ ربمانتادين ‎crimantadine‏ أوسيلتاميفير ‎coseltamivir‏ زاناميفي ‎czanamivi‏ أسيكلوفير ‎acyclovir 20‏ بيربفيودين ‎ cbrivudine‏ دوكوسانول 0(01م8ممل؛ فاميسيكلوفير ‎«famiciclovir‏ ‏أيدوكسيوردين ‎cidoxuridine‏ بينسيكلوفير 06061071 فالاسيكلوفير ‎evalacyclovir‏ رببافيرين ‎ribavirin‏ جانجسيسكلوفير ‎cgangeiclovir‏ ترايفلوريدين ‎ctrifluoridine‏ زيدوفيودين ‎«zidovudine‏ ‏ديدانوسين ‎cdidanosine‏ زالسيتابين ‎czalcitabine‏ لاميفيودين ‎cabacavir lull damivudine‏ أتازانافير ‎catazanavir‏ أتريبلا ‎catripla‏ زبدوفيودين ‎zidovudine‏ كومبيفير ‎ccombivir‏ داريونافير ‎«dolutegravir ‏دوليوتيجرافير‎ c¢delavirdine ‏ديلافيردين‎ «didanosine ‏ديدانوسين‎ cdarunavir 5 cetravirine ‏إيترافيرين‎ cenfuvirtide ‏إنفيوفيرتيد‎ celvitegravir ‏الفيتيجرافير‎ efavirenz ‏إفافيرينز‎
إيفبليرا ‎ ceviplera‏ فوسامبرينافير ‎ fosamprenavir‏ إيمتررسيتابين ‎cemtricitabine‏ إندينافير ‎indinavir‏ كيفيكسا ‎opinavir dling! kivexa‏ ربتونافير ‎ritonavir‏ مارافيروك ‎¢maraviroc‏ ‏تيلفينافير ‎enelfinavir‏ نيفيرابين ‎nevirapine‏ رالتجرافير ‎craltegravir‏ ربلبيفيرين ‎crilpivirine‏ ‏ربتونافير ‎ritonavir‏ ساكينافير ‎saquinavir‏ ستريبيلد ‎cstribild‏ تينوفوفير ‎ctenofovir‏ تينوفوفير ‎ctenofovir 5‏ تيبرانافير ‎ctipranavir‏ ترايومين ‎etriomine‏ ترايزيفير «ستعتن» تروقادا ‎ctruvada‏ وألفا انترفيرون ‎(o-interfereon‏ من الممكن أن يندمج أيضا مع تركيبات الكشف. انظر؛ بشكل عام ‎The‏ ‎Merck Manual of Diagnosis and Therapy, 15th Ed., Berkow et al., eds., 1987, Rahway,‏ ‎NUT, pages 2499-2506 and 46-49, respectively)‏ . تكون العوامل العلاجية ‎GAY)‏ ضمن نطاق الكشف. من الممكن أن يتم استخدام اثنين أو أكثر من المركبات المشتركة معا أو بالتتابع. من 0 الممكن أن يتم إعطاء تلك المركبات باستخدام جدول إعطاء منفصل نسبة لجدول الإعطاء الخاص بالعوامل النشطة طبقا للكشف. من الممكن أن تكون جداول الإعطاء متشابهة أو متداخلة. من الممكن أن يتم الحصول على التأثير العلاجي والسمي لتلك المركبات عن طريق الإجراءات الصيدلانية في استنبات الخلية أو الحيوانات المعملية؛ ‎cin‏ للحصول على 1050 (الجرعة المميتة ل750 من السكان) و 20:0 (التأثير العلاجي للجرعة في 750 من السكان). تكون نسبة الجرعة بين التأثيرات العلاجية والسمية عبارة عن المؤشر العلاجي ويمكن التعبير ‎die‏ كنسبة 15:0/15150. تكون المركبات التي لديها تثبيط مرتفع للحث علاجي مفضلة. من الممكن أن يتم استخدام البيانات التي تم الحصول عليها من تقييم استنبات الخلية في التركيبة ومدى الجرعة المستخدمة في البشر. تقع جرعة التركيبات الخاصة بالكشف بصورة عامة في مدى تركيزات الدورة الدموية التي تتضمن 2050 قليل أو بدون سمية. من الممكن أن تختلف الجرعة ضمن 0 هذا النطاق معتمدة على الجرعة المعطاة وطريقة الإعطاء المستخدمة. لأي مركب مستخدم في طريقة الكشف؛ يمكن مبدئيا تقدير الجرعة المؤثرة علاجيا من تقييم استنبات الخلية. من الممكن أن يتم إعداد الجرعة في نماذج الحيوان للحصول على مدى تركيز بلازما الدورة الدموية للمركب أو عندما يتم تقديره؛ لمنتج البولي بيبتيد للتسلسل المستهدف (مثل؛ الحصول على التركيز المخفض للبولي بيبتيد) والذي يتضمن 1650 (أي؛ تركيز المركب المختبر والذي يحقق نصف القيمة القصوى 5 لتثبيط العلامات)؛ كما تم تحقيقه في استنبات الخلية. من الممكن أن يتم استخدام تلك المعلومات من أجل جرعات مفيدة تم الحصول عليها وأكثر دقة للمريض؛ كما هو معرف بالأعلى (يتضمن؛
‎«Jia‏ البشرء الجمال؛ الإبل؛ ‎LOU‏ وألبكة). من الممكن أن يتم قياس مستويات البلازماء على سبيل
‎high performance liquid ‏عن طريق استخدام الاستشراب السائل عالي الأداء‎ (Jd
‎.(HPLC) chromatography
‏بالإضافة إلى إعطائهم مستقلين أو مجمعين؛ كما هو موضح بالأعلى؛ من الممكن أن يتم إعطاء لقاحات الكشف ‎Jal‏ بالاشتراك مع العوامل المؤثرة المعروفة الأخرى لعلاج العمليات الباثولوجية
‏المتوسطة بواسطة التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو أي فيروس تاجي
‏آخر -مثل تلك المذكورة بالأعلى وغيرها. أيا ما كان؛ يقوم الطبيب المعالج بضبط كمية وزمن إعطاء
‏اللقاح على أساس النتائج الملاحظة باستخدام المقاييس القياسية المؤثرة والمعروفة في المجال أو
‏الموضحة هنا.
‏0 يهتم الكشف الحالي بأي وسيلة مناسبة أو طريقة لإعطاء مركبات اللقاح الخاصة بالاختراع. سوف يقدر الشخص المهتم بأن وسائل الإعطاء بشكل خاص من الممكن أن تعتمد على تركيبة اللقاح المشتملة على فيريونات فيروس السعار المأشوية ‎ci)‏ عن طريق التعبير عن جزءِ من البروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الموجود على سطع الفيريون) أو يكون اللقاح الذي يتم إعطاؤه عبارة عن لقاح معتمد على الحمض النووي؛ أي؛ حيث يشتمل اللقاح على ناقل
‏5 فيروس السعار المأشوب الخاص بالكشف والذي تم تعديله للتعبير عن جزءٍ البروتين المستمنع للفيروس التاجي. في نماذج معينة؛ من الممكن أن يتم إعطاء أي لقاحات خاصة بالكشف عن طريق؛ على سبيل المثال؛ الحقن الوريدي (مثل الحقن ‎Jala‏ الصفاق 1دع(00206:100» تحت الجلد ‎«subcutaneous‏ أو داخل العضل ‎¢(intramuscular‏ الحقن في البيضة ‎ovo injection‏ في الطيور» فمويا » أو عن طريق
‏0 التطبيقات الموضعية للفيروس (المنفذة بشكل نموذجي في التركيبات الدوائية) على سطح المسلك الهوائي. من الممكن أن يتم تنفيذ التطبيق الموضعي للقاح الخاص بالكشف على سطح المسلك الهوائي عن طريق الإعطاء داخل الأنف (مثل» عن طريق استخدام قطارة؛ فرشاة ترطيب؛ أو مستنشق ‎inhaler‏ حيث يتم إيداع التركيبة الدوائية داخل الأنف). من الممكن أن يتم تنفيذ التطبيق النموذجي للقاح الخاص بالكشف على سطح المسلك الهوائي عن طريق الإعطاء الاستنشاقي ‎inhalation‏
‎cadministration 5‏ مثل عن طريق خلق جزيئات صالحة للتنفس من التركيبة الدوائية (مشتملة على الجزيئات الصلبة والجزبئات السائلة) محتوية على الرببليكون ‎replicon‏ كمعلق أيروسول» وستنشق
الهدف الجزيئات الصالحة للتنفس. تكون طرق وجهاز إعطاء الجزيئات الصالحة للتنفس في التركيبات الدوائية ‎lus dg jae‏ ومن الممكن أن يتم تنفيذ أي تقنية تقليدية. من الممكن أن يكون الإعطاء الفموي على هيئة سائل قابل للهضم أو تركيبة صلبة. كما هو مذكور بالأعلى؛ في أحد النماذج يكون الحقن تحت الجلد؛ وفي نموذج آخر يكون الحقن عضلي.
عندما يكون لقاح الكشف الحمض النووي الريبوزي أو الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي (مثل؛ ناقل لفاح فيروس السعار المأشوب للتعبير عن ‎ein‏ من البروتين السكري للفيروس التاجي؛ ‎on edie‏ من البروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط)؛ من الممكن أن يتم إعطاء ناقل اللقاح الحمض النووي الريبوزي أو الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي مباشرة عن ‎Goh‏ استخدام التقنيات ‎Jie‏ توصيل الخرز الذهبي ‎gold beads‏ (مسدس الجين ‎«(gene gun‏ والتوصيل بواسطة
0 الأجسام الشحمية ‎cliposomes‏ أو عن طريق الحقن المباشرء متضمنا الطرق الأخرى المعروفة في المجال. من الممكن أن يتم استخدام أي واحد أو أكثر من مركبات النيوكليوتيد الموضحة بالأعلى في أي اندماج مؤثر ليحدث استجابة مناعية في الهدف. بصورة عامة؛ من الممكن أن يتم إعطاء لقاح الحمض النووي بكمية حوالي 5-1 ميكروجرام حمض نووي لكل جرعة وسوف تعتمد على الهدف المعالج؛ وسعة الجهاز المناعي للهدف ليوفر الاستجابة المناعية المرجوة؛ ودرجة الوقاية
5 المرجوة. من الممكن أن يتم إعطاء كمية مقدرة من اللقاح معتمدة على قرار الممارس وتحدد بالنسبة للهدف والمستضد ‎.antigen‏ ‏من الممكن أيضا أن يتم استخدام أنظمة تسليم الكرة المكروية المعتمدة على السائل لتسلم لقاحات الكشف»؛ وبشكل ‎(als‏ جزيئات ناقل اللقاح الخاصة بالكشف. اختيارياء من الممكن أن يتم تعدي تلك الأنظمة بحيث تستهدف تحديدا الخلايا المحددة و/أو الأنسجة و/أو أعضاء الجسم؛ مثل» مواقع
0 الإصابة. سوف تكون طرق تحضير تلك الأنظمة معروفة لخبراء المجال. على سبيل المثال؛ من الممكن أن يتم تعديل ناقل تسليم الكرات المكروية ليشتمل على واحد أو أكثر من الروابط أو الأجزاء المستهدفة والتي تسمح للكرة الميكروية ‎microspheres‏ بأن ترتبط و/أو تتداخل تحديدا مع المستقبل أو تستهدف الخلية المستهدفة ‎target cell‏ أو النسيج. بالتبعية؛ من ناحية أخرى؛ يوفر الكشف الحالي تركيبات ناقل السعار المأشوية المشتملة على نظام
5 حامل معتمد على الشحم ‎Jie clipid-based carrier system‏ جسيم دهني ‎lipid particle‏ لحمض نووي مثبت؛ دهن كاتيوني ‎cationic lipid‏ أو مركبات حمض نووي شحمي ‎liposome nucleic acid‏
(أي ¢ متشابك شحمي ‎¢(lipoplexes‏ الشحوم؛ مذيلة ‎cmicelle‏ فيروسوم 10806 أو خليط منهم؛ واختياريا من الممكن أن يتم تعديلها لتحتوي على جسيم قادرا على استهداف واحد أو أكثر من خلايا أو أنسجة الجهاز الهيضمي. في بعض النماذج؛ يكون النظام الحامل ‎carrier system‏ عبارة عن نظام حامل معتمد على البوليمر ‎polymer‏ مثل مركب حمض نووي لبوليمر كاتيوني ‎cationic polymer‏ (أي؛ متعدد التشابك ‎¢(polyplex‏ واختياريا يتم تعديله ليحتوي على جسيم يكون قادرا على استهداف واحد أو أكثر من الخلايا المرجوة أو الأنسجة. في نماذج إضافية؛ يكون النظام الحامل عبارة عن نظام ‎Jala‏ معتمد على السيكلوديكسترين ‎Jie cyclodextrin‏ مركب حمض نووي بوليمري سيكلوديكسترين؛ ويتم تعديله اختياريا ليحتوي على جسيم يكون قادرا على استهداف واحد أو أكثر من ‎LDA‏ المرجوة أو الأنسجة. في بعض النماذج ‎(liad‏ يكون النظام الحامل ‎Ble‏ عن نظام ‎dela‏
0 معتمد على البروتين ‎Jie‏ مركب حمض نووي بيبتيدي كاتيوني. شحوم الحمض النووي و/أو جزيئات شحوم البروتين وطرق تحضيرهم تم الكشف عنهم في» على سبيل المثال» براءة الاختراع الأمريكية أرقام. ¢5.753.613 ¢5.785.992 5.705.385؛ ¢5.976.567 ¢5.981.501 6.110.745؛ و6.320.017؛ ومنشور طلب براءة الاختراع الدولية رقم 40964/96؛ والتي يتم إدراجها جميعا هنا كمرجع.
من الممكن أن تتضمن الشحوم المشتبكة شحوم غير كاتيونية ‎non-cationic lipids‏ تستخدم في التركيبات طبقا للكشف الحالي؛ حيث تتضمن تنوع من أيون غير مشحون متعادل, أيون ثنائي الشحنة ‎zwitterionic‏ أو دهون أنيونية ‎anionic lipids‏ قادرة على إنتاج مركب ثابت. من الممكن أن تكون الدهون غير الكاتيونية متعادلة أو سالبة الشحنة. تتضمن أمثلة الدهون غير الكاتيونية؛ بدون تحديدء المواد المتعلقة بالشحوم الفسفورية ‎Jie phospholipid‏ ليسيثين ‎clecithin‏ فوسفاتيديليثانولامين
‎«phosphatidylethanolamine 0‏ ليسوليسيثين ‎<lysolecithin‏ ليسوفوسفاتيديليثانولامين ‎ lysophosphatidylethanolamine‏ فوسفاتيديلسيرين ‎ cphosphatidylserine‏ فوسفاتيديلينوسيتول ‎«phosphatidylinositol‏ سفينجوميلين ‎«sphingomyelin‏ إيج سفينجوميلين ‎egg sphingomyelin‏ ‎«(ESM)‏ سيفالين ‎ccephalin‏ كارديوليفين ‎cardiolipin‏ حمض النفوسفاتيديك ‎«phosphatidic acid‏ سيريبروسيدس ‎ccerebrosides‏ دايسيتيلفوسفات ‎sho edicetylphosphate‏ ستيرودل فوسفاتيديلكولين
‎«(DSPC) distearoylphosphatidylcholine 5‏ داوليويل فوسفاتيديلكولين ‎«(DOPC) dioleoylphosphatidylcholine‏ دايبا هينيتوبلفوسفاتيديلكولين
‎«(DPPC) dipahnitoylphosphatidylcholine‏ دايوليوبلفوسفاتيديل جليسرول ‎gh ¢(DOPG) dioleoylphosphatidylglycerol‏ بالميتويل فوسفاتيديل جليسرول ‎«(DPPG) dipalmitoylphosphatidylglycerol‏ داي ‎agi‏ فوسفاتيديل إيثانولامين ‎«(DOPE) dioleoylphosphatidylethanolamine‏ بالميتوبلوليول -فوسفاتيديلكولين ‎(POPC) palmitoyloleoyl-phosphatidylcholine 5‏ بيلميتوليول-فوسفاتيديل | إيثانولامين ‎(POPE) palmitoyloleoyl-phosphatidylethanolamine‏ بالميتوبلويل-فوسفاتيديل جليسرول ‎«(POPG) palmitoyloleyol-phosphatidylglycerol‏ داي ‎gal of‏ لفوسفاتيديل إيثانولامين 4-(11- ماليميدوميثيل) سيكلوهيكسان- 1 -كريوكسيلات | -4-07 ‎dioleoylphosphatidylethanolamine‏ ‎¢(DOPE-mal) maleimidomethyl)-cyclohexane-1-carboxylate‏ داي بالميتول -فوسفاتيديل 0 بإيثانولامين ‎«(DPPE) dipalmitoyl-phosphatidylethanolamine‏ داي ميريستويل - فوسفاتيديل إيثانولامين ‎gla ¢(DMPE) dimyristoyl-phosphatidylethanolamine‏ ستيرويل -فوسفاتيديل إيثانولامين ‎«(DSPE) distearoyl-phosphatidylethanolamine‏ ميثيل وحيد -فوسفاتيديل إيثانولامين ‎«monomethyl-phosphatidylethanolamine‏ داي ميثيل- فوسفاتيديل إيثانولامين ‎dimethyl-‏ ‎«phosphatidylethanolamine‏ داي إيليادويل -فوسفاتيديل إيثانولامين ‎dielaidoyl-‏ ‎«(DEPE) phosphatidylethanolamine 5‏ وستيرويل أوليل-فوسفاتيديل إيثانولامين ‎stearoyloleoyl-‏
‎.(SOPE) phosphatidylethanolamine cholesterol ‏الكوليسترول‎ Jie sterols ‏من الممكن أن تكون الشحوم غير الكاتيونية أو الستيرول‎ (ie ‏موجودة في الكريات المجهرية. تشتمل اللافسفوريات الإضافية المحتوية على الشحوم على؛‎ <hexadecylamine ‏هيكساديسيلامين‎ cdodecylamine ‏دوديسيلامين‎ estearylamine ‏ستيريلامين‎ ‏هيكساديسيل سيتيرات‎ cglycerolricinoleate ‏جليسرولريسينوليت‎ cacetyl palmitate ‏أسيتيل بالتيميت‎ 0 ‏بوليمرات مذبذبة ذو أيونين‎ isopropyl myristate lon yaa ‏أيزوبروييل‎ hexadecyl stereate «triethanolamine-lauryl sulfate ‏تراي إيثانولامين- لوريل سلفات‎ camphoteric acrylic polymers alkyl-aryl sulfate ‏أميدات الحمض الدهني ألكيل أريل سلفات بولي إيثيلوكسيلات‎ ‏داي أوكتاديسيلدي ميثيل أمونيوم بروميد‎ «polyethyloxylated fatty acid amides ‏داي سيلفوسفاتيديلكولين‎ cceramide ‏سيراميد‎ «dioctadecyldimethyl ammonium bromide 5 ‏داي أسيلفوسفاتيديل إيثانولامين‎ «diacylphosphatidylcholine
Jie ‏.وما شابه. ومن الممكن أن توجد شحوم أخرى‎ cdiacylphosphatidylethanolamine ‏وليسوفوسفاتيديل إيثانولامين‎ lysophosphatidylcholine ‏ليسوفوسفاتيديلكولين‎ ‏أن تشتمل الشحوم غير الكاتيونية على‎ Lad ‏عصنسداه(ه110216ه1م17800108._ من الممكن‎ ‏البوليمرات المعتمدة على البولي إيثيلين جليكول مثل بولي إيثيلين جليكول 2000 بولي إيثيلين‎
جليكول 5000« وبقترن البولي إيثيلين جليكول بالشحوم الفسفورية أو بالسيراميد (المشار إليها ك البولي إيثيلين جليكول-:06)؛ كما هو موضح في طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 08/316.429.
أمثلة غير محددة لأنظمة الحامل المعتمدة على الدهن الإضافية المناسبة للاستخدام في الكشف ‎Ja‏ وتشتمل على المتشابك الشحمي (انظرء مثل» طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 5 ر )2004( 100:165-180 ‎o Zhang et al., J.
Control Release,‏ المتشابكات
0 الدهنية الحساسة لدرجة الحموضة (انظرء ‎(Jie‏ طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 5 المتشابكات الدهنية المقنعة القابلة للانعكاس (انظر» مثل» طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 2003/0180950)؛ المركبات المعتمدة على الدهون الكاتيونية (انظرء ‎ce‏ طلب
براءة الاختراع الأمريكية أرقام 6.756.054؛ وطلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 2005/0234232(« الليبوزومات الكاتيونية (انظرء ‎(Jie‏ طلب براءة الاختراع الأمريكية أرقام 2003/0229040
5 2002/0160038,؛ و2002/0012998؛ وطلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 5.908.635؛ وطلب براءة الاختراع الدولية رقم 01/72283)) الليبوزومات الأنيونية (انظرء مثل» طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 2003/0026831) الليبوزومات الحساسة لدرجة الحموضة (انظرء ‎Jie‏ ¢ طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 2002/0192274؛ وبراءة الاختراع الاسترالية رقم 2003/210303)؛ الليبوزومات المغطاة بالأجسام المضادة ‎antibody-coated liposomes‏ (انظرء ‎«(fie‏ طلب براءة
0 الاختراع الأمريكية رقم 2003/0108597؛ وطلب براءة الاختراع الدولية رقم 00/50008)؛ الليبوزمات المحددة لنوع الخلية (انظر» مثل»؛ ‎alla‏ براءة الاختراع الأمريكية رقم 2003/0198664)؛ الليبوزومات المحتوية على الحمض النووي والبيبتيدات (انظرء مثال» طلب براءة الاختراع الأمريكية
رقم 6.207.456( الليبوزومات المحتوية على الشحوم المشتقة مع البوليمرات الأليفة للماء ‎hydrophilic polymers‏ القابلة للانطلاق (انظرء ‎(Jie‏ طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم
5 2003/0031704)؛ الحمض النووي المحاصر للدهن 11010-20080060 (انظرء مثلء طلب براءة الاختراع الدولية أرقام 03/057190 و03/059322)؛ الحمض النووي المغلف للشحم ‎lipid-‏
‎encapsulated‏ (انظر» ‎«(fic‏ طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 2330/0129221؛ و طلب براءة الاختراع ‎١‏ لأمريكية رقم 5.756.122) ‎٠‏ ومركبات ليبوزومية ‎liposomal compositions‏ أخرى (انظرء ‎«(fie‏ طلب براءة الاختراع الأمريكية أرقام 2003/0035829 و2003/0072794؛ وطلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 6.200.599(« والخلائط المثبتة لليبوزومات والمستحلبات (انظر» مثل؛ براءة الاختراع الأوروبية قم 1304160(« مركبات المستحلبات (انظر» ‎(Jie‏ طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 6.747.014)؛ ومستحلبات ميكروية ‎micro-emulsions‏ للحمض النووي (انظرء؛ مثل؛ طلب براءة الاختراع الأمريكية رقم 2005/0037086). في نموذج آخرء يتم الإعطاء بواسطة توصيل جين الجسيم المتسارع. تعتمد تقنية توصيل جين جسيم المتسارع على تغطية التركيبات الجينية ليتم توصيلها داخل الخلايا 0 الموجودة على جزبئات الحامل المتناهية الصغر؛ وتم تصميمها صغيرة نسبة للخلايا المراد نقلها بواسطة العملية. تتسارع جزيئات الحامل المغطاة بعد ذلك في اتجاه الخلايا المراد نقلها لدرجة أن جزيئات الحامل تقطن في الجزءٍ الأمامي للخلايا المستهدفة. من الممكن أن تستخدم تلك التقنية إما مع الخلايا الموجودة في المختبر أو في الكائن الحي. عند تردد معين؛ لقد تم تغطية الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي مسبقا على جزيئات الحامل التي تم التعبير عنها في ‎DIAN‏ المستهدفة. تم 5 توضيح ‎dai‏ التعبير الجيني تلك لتدخل في بدائيات النواة ‎procaryotes‏ وحقيقيات النواة ‎«eukaryotes‏ ‏من البكتيريا ‎bacteria‏ والخمائر ‎yeasts‏ للنباتات العليا والحيوانات. ويذلك؛ توفر طريقة الجسيم المتسارع منهجية مناسبة لتوصيل الجينات داخل الخلايا مع تنوع واسع في أنواع الأنسجة؛ وتسمح بتوصيل تلك الجينات للخلايا في موضعها الأصلي وفي الكائن الحي بدون أي تأثير سلبي أو تأثير على ‎LAY‏ المعالجة المستقلة. وأيضاء تكون طريقة الجسيم المتسارع مفضلة في كونها تسمح بتركيب 0 القاح الجيني بأن يحدث استجابة مناعية مباشرة لكل من النسيج بشكل خاص؛ وطبقة الخلية في ‎mal)‏ بشكل خاص؛ عن طريق التنوع في موقع التوصيل وقوة تسارع الجزيئات؛ بالتبعية. تكون تلك التقنية مناسبة لتوصيل جينات بروتينات مستضدية ‎antigenic proteins‏ داخل البشرة ‎.epidermis‏ ‏وبذلك؛ بالنسبة لتوصيل نواقل لقاح السعار المأشوية الخاصة بالكشف؛ ‎daly‏ الكشف أيضا في احتواء القطرات المائية على ناقل مكشوف من الممكن أن يتم توصيله عن طريق تقنيات تسارع 5 مناسبة داخل الأنسجة المستقلة المرجوة الملقحة. عند تردد معين» سوف يتم استخراج ‎sale‏ الناقل "'المكشوف" ‎"naked" vector material‏ من الأنسجة المعالجة.
يتم توضيح الأسلوب العام لتقنية نقل جين الجسيم المتسارع في براءة الاختراع الأمريكية رقم 0 . تعتمد الآلة على تحسين متنوع للأسلوب المتاح تجاريا من معامل بايوراد ‎‘BioRad‏ ‏يتم توضيح الأسلوب المناسب لجهاز تقل الجسيم ‎particle transfection apparatus‏ المتسارع في براءة الاختراع الأمريكية رقم 5.015.580 والذي؛ عندما يتوجه لنقل نباتات فول الصوياء؛ يتم توضيح الجهاز القابل للمهايأة بالتساوي للاستخدام مع الخلايا الثديية وآمن على كل الثدييات. توضح براءة الاختراع الأمريكية رقم 5.149.655 النسخة الممسوكة باليد لجهاز توصيل جين الجسيم المتسارع المناسبة. من الممكن أن تعتمد الأجهزة الأخرى على مصادر دفعية أخرى تستخدم؛ على سبيل ‎(Jal‏ الغاز المضغوط كقوة حركية. يتم ‎mung‏ الجهاز المفضل وطريقة توصيل المادة الجينية ‎genetic material‏ طبقا للكشف ‎Mall‏ في طلب براءة الاختراع | لأمريكية المنشورة برقم 00780/95 0 وفي براءة الاختراع الأمريكية رقم 5.584.807 وسوف يتم مناقشتها في 17 ديسمبرء 1997. وتم إدراجهم هنا كمرجع. من الممكن أن يتم توصيل "اللقاح الجيني” أي؛ ناقل لقاح السعار المأشوب (المعاكس لتركيبة فيريونات ‎laud‏ والموضحة هنا أيضا) بطريقة غير مجتاحة لتنوع أنواع الأنسجة المستهدفة للوصول إلى الاستجابة المستضدية المرجوة في الشخص. على نحو مفيد؛ من الممكن أن يتم إدخال اللقاح الجيني 5 داخل البشرة. هذا التوصيل» ‎dag‏ سوف ينتج استجابة مناعية خلطية نظامية؛ استجابة الذاكرة؛ واستجابة مناعية سامة ‎immune response WAL‏ عندمامالان. ‎Laie‏ يتم توصيل اللقاح الجيني لخلايا الجلد؛ يكون مرجوا أن يتم إزالة أو ثقب طبقة القرنية ‎stratum corneum‏ للحصول على الفاعلية الإضافية من هذه التقنية؛ من الممكن أن يكون مرجوا أن يتم توصيل الجينات إلى سطح نسيج الغشاء المخاطي ‎mucosal tissue‏ لكي يتم التأكد من أنه يتم إنتاج الاستجابات 0 المناعية الخلوية والخلطية والمخاطية في الشخص الملقح. لقد تم تخيل أن هناك تنوع لمواقع التوصيل المناسبة التي تتضمن أي عدد من المواقع على البشرة ‎epidermis‏ خلايا الدم الطرفية ‎peripheral‏ ‎cblood cells‏ أي الخلايا الليمفاوية ‎Ally dlymphocytes‏ يتم معالجتها في المختبر ويتم إعادتها إلى الشخص؛ وتنوع الأسطح الفموية؛ أسطح التنفس العلوية؛ والأسطح المخاطية ‎mucosal surfaces‏ التناسلية ‎.genital‏ ‏5 يشير مصطلح ‎JF‏ المادة الوراثية" المستخدم هنا إلى الخلايا التي يتم إدراجها ضمن تركيبات اللقاح الجيني الأجنبي الذي يتم توصيله ‎(Ji)‏ نواقل لقاح السعار المأشوبة)؛ حيث يتم استخدام تقنية
التوصيل. يتم استخدام مصطلح تقل المادة الوراثية هنا أفضل من مصطلح ‎Ca‏ لتجنب الالتباس الطبيعي تجاه المصطلح الأخير؛ والذي يستخدم أيضا ليشير إلى التغيرات الخلوية في عملية تكون الورم ‎.oncogenesis‏ ينتمي مصطلح "إصابة" إلى عملية الإعادة الخلوية الجزيئية الطبيعية عن طريق إدخال الفيروس داخل الخلية. من الممكن أن يطلق على تلك ‎WAY‏ 'معرضة ل" للإصابة.
في بعض النماذج؛ ‎Lovie‏ يتم حث الاستجابات المناعية المحمية؛ الخلطية والخلوية بعد اللقاح الجيني ‎cgenetic vaccination‏ تكون الخلايا المفضلة هي ‎LIA‏ البشرة؛ بدلا من ‎WIA‏ طبقات الجلد الأعمق مثل الأدمة ‎dermis‏ تكون خلايا البشرة من المستلمين المفضلين للقاحات الجينية بسبب أنها تعد من أكثر الخلايا سهلة المنال في الجسم ومن الممكن؛ أيضاء أن تحصن بشكل منتشر. ثانياء بالإضافة إلى حدوث الاستجابة المناعية الخلطية؛ والخلايا البشرة المحصنة جينيا تحدث استجابة
0 مناعية سامة للخلايا تكون أقوى من المولدة في خلايا البشرة الأدنى ‎.sub-epidermal cells‏ يعد الوصول إلى البشرة ميزة حيث يقلل الاجتياح ويكون الوصول إلى الخلايا بالتالي خارج الجسم. يتم إعطاء اللقاحات الخاصة بالكشف الحالي (مثل؛ فيريون السعار المأشوية و/أو نواقل لقاح السعار المأشوية الخاصة بالكشف) عن طريق أي من الوسائل الموضحة بالأعلى طبقا لأي جدول تطعيمات مناسب؛ ‎(ie‏ اليوم صفرء الشهر الأول؛ أربعة ‎el‏ واثنى عشر شهرا من اليوم صفر. بالرغم من 5 ذلك؛ يتم التعبير بصورة عامة؛ عن اللقاحات الموضحة هنا حيث يتم أخذها على هيئة جدول جرعة منفردة؛ أو من المفضل أن يكون جدول جرعات متعددة في فترة التطعيم الأولية وتكون 10-1 جرعات منفصلة؛ ‎am‏ بالجرعات الأخرى المأخوذة عند فترات زمنية متتابعة للحصول على وتحفيز الاستجابة المناعية» على سبيل المثال» من 14-1 ‎hes‏ للجرعة الثانية؛ إذا تم الاحتياج ‎clad)‏ الجرعة (الجرعات) المتتابعة بعد شهور عديدة. أمثلة أخرى لجداول التحصين المناسبة وتتضمن: (1) 0؛ 1 0 شهر و6 شهور؛ (2) 0 7 أيام و ‎heal‏ )3( 0 و1 ‎ogi‏ (4) 0؛ 6 شهور؛ (5) 10 شهر و2 شهر؛ أو الجداول الأخرى المناسبة للتعرض للاستجابات المناعية المرجوة اللازمة لتحظى بالمناعة المحصنة؛ أو لتقلل أعراض المرضء أو لتقلل شدة المرض. الكشف الحالي» من نواحي ‎«al‏ يوفر طرق تقييم العينة طبقا لوجود الأجسام المضادة المعاكسة للسعار و/أو الفيروس التاجي؛ مثل؛ الفيروس ‎alll‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. يتأمل الكشف 5 الحالي في أن تكون تلك الطرق مفيدة؛ على سبيل المثال؛ في تقييم ما إذا كانت عينة النسيج تحتوي على أجسام مضادة معاكسة للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الفيروس التاجي أو
‎lad)‏ والتي تكون مفيدة في تحديد ما إذا كان الشخص أو الحيوان قد تعرض لتلك الكائنات المرضية. من الممكن أن تكون طرق التحديد تلك مفيدة في ملاحظة دم المرض أو الأنسجة الأخرى لمعرفة أنه قد تم حث الاستجابة المناعية ضد لقاح الكشف. ‎Lad‏ في النموذج؛ يتعلق الكشف الحالي بطريقة تحديد وجود أجسام مضادة معاكسة للفيروس التاجي المتلازمة تنفس الشرق الأوسط في العينة. باستخدام منهجية قياسية معروفة في المجال؛ من الممكن أن يتم إنشاء التقييم التشخيصي عن طريق تغطية على السطح (أي داعم صلب على سبيل المثال؛ طبق المعايرة الميكروية؛ الغشاء (مثل» غشاء نيتروسيللولوز ‎(nitrocellulose membrane‏ أو مقياس العمق)؛ يتم توضيح كل أو جزءِ وحيد لأي من بروتينات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط بالأعلى أو أي اندماجات بينهم؛ واتصالهم مع مصل الشخص أو الحيوان المعرض للفيروس 0 التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وجود المركب الناتج المتكون بين بروتين (بروتينات) الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط والأجسام المضادة للمصل المحددة هنا من الممكن أن يتم تحديده بواسطة أي الطرق الشائعة المعروفة في المجال؛ مثل التحليل الطيفي للأجسام المضادة المفلورة أو قياس الألوان. من الممكن أن يتم استخدام طريقة التحديد؛ على سبيل المثال؛ لتشخيص الإصابة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ولتحديد درجة التطور التي حدثت للشخص 5 من قبل الأجسام المضادة المحددة للفيروس بعد إعطاء اللقاح. في نموذج ‎AT‏ يتعلق الكشف الحالي بطرق تحديد وجود بروتينات فيريون من السعار؛ الفيروس التاجي أو الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في العينة. من الممكن أن يتم استخدام الأجسام المضادة المعاكسة للبروتينات السكرية وبروتينات البندقة الصغيرة لتقييمات التشخيص. يتم استخدام منهجية معروفة في المجال؛ من الممكن أن يتم إنشاء التقييم التشخيصي عن طريق تغطية 0 على السطح (أي داعم صلب على سبيل ‎(JE‏ طبق المعايرة الميكروية ‎microtitration‏ أو الغشاء ‎(fie)‏ غشاء نيتروسيللولوز))؛ يتم توضيح الأجسام المضادة المحددة لأي من بروتينات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الموضحة بالأعلى؛ واتصالهم مع مصل أو عينة نسيج الشخص المعرض للإصابة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وجود المركب الناتج المتكون بين البروتين أو البروتينات الموجودة في المصل والأجسام المضادة المحددة أيضا 5 من الممكن أن يتم تحديده بواسطة أي الطرق الشائعة المعروفة في المجال؛ ‎Jie‏ التحليل الطيفي
للأجسام المضادة المفلورة أو قياس الألوان. من الممكن أن يتم استخدام طريقة التحديد؛ على سبيل
‎Jal‏ ¢ لتشخيص الإصابة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. في نموذج آخرء يتعلق الكشف الحالي ب الحمض النووي دي أوكسي رببوزي أو متواليات النيوكليوتيد لاستخدامهم في تحديد وجود فيروس السعار أو الفيروس التاجي؛ ‎in‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط باستخدام تفاعل البلمرة التسلسلي للانتساخ العكسي ‎reverse transcription-‏ ‎(RT-PCR) polymerase chain reaction‏ أو عن طريق استخدام أي وسائل أخرى مناسبة لتحديد متواليات النيوكليوتيد المحددة. من الممكن أن يتم استخدام متوالية النيوكليوتيد الخاصة بالكشف لتصمم الأوليات التي ترتبط تحديدا بالحمض النووي الريبوزي الفيروسي من أجل تحديد وجود الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو قياس كمية الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط
‏0 في العينة. من الممكن أن يكون طول الأوليات يتراوح من 7 إلى 400 نيوكليوتيدة؛ ومن المفضل من 10 إلى 15 نيوكليوتيدة على ‎«JW‏ والأكثر تفضيلا من 18 إلى 40 نيوكليوتيدة. تكون الكواشف والضوابط ضرورية لتفاعلات تفاعل سلسلة بوليمراز ومعروفة جيدا في المجال. من الممكن أن يتم تحليل المنتج المكبر لفحص وجود المتواليات الفيروسية؛ على سبيل المثال عن ‎Gob‏ التجزئة الهلامية؛ مع أو بدون التهجين ‎hybridization‏ بواسطة الكيمياء الإشعاعية ‎cradiochemistry‏
‏5 وتقنيات الكيمياء المناعية ‎ cimmunochemistry‏ أي تقنيات أخرى مناسبة. في نموذج آخرء يتعلق الكشف الحالي بعدة التشخيص ‎diagnostic kit‏ التي تتضمن تركيبة اللقاح الخاصة بالكشف»؛ واختياريا وسيلة لتحديد ما إذا تم حث الاستجابة المناعية التالية لإعطاء اللقاح؛ وأيضاء واختياريا وسيلة لإعطاء اللقاح الخاص بالكشف؛ ‎(loads‏ اختياريا مجموعة من التعليمات التي تشير إلى إجراء إعطاء اللقاح وتقييم فاعليته على الاستجابة المناعية.
‏0 بالاعتماد على كيفية عمل العدة؛ من الممكن أن تتضمن العدة واحد أو أكثر من تركيبات اللقاح الإضافية الخاصة بالكشف؛ حيث تشتمل كل تركيبة لقاح على ناقل فيروس السعار المأشوب المعبر عن جزءِ مختلف من بروتين الفيروس التاجي؛ ‎ial (fie‏ المستمنع للبروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. سوف يتم الأخذ في الاعتبار أن مكونات محددة من العدد سوف تتغير نتيجة لاعتمادها على الهدف
‏5 الملقح و/أو من أي مكان سوف يتم أخذ العينات. من الممكن أن تشتمل الأهداف على؛ على سبيل ‎(Jal‏ البشرء رئيس غير بشري؛ حيوان؛ مثل؛ الحصان؛ الحمارء الخنزير؛ ‎lal‏ الهامسترء ‎cll‏
والثدييات ‎(AY)‏ الطيور. على سبيل المثال» حيث يتم إعطاء ناقل لقاح السعار للبشر؛ من الممكن أن تشتمل العدة على ممر جلدي؛ بداخله يتم الإعطاء للرئيس غير البشري؛ من الممكن أن تتضمن العدة سرنجة. في نماذج محددة؛ من الممكن أن تشمل العدة أيضا على كاشف كشف مناعي أو لاصق لتحديد الأجسام المضادة المستحثة بواسطة اللقاح أو لتحديد العينات الموجود بها السعار أو بيبتيدات الفيروس التاجي أو ‎gia‏ منه. تكون كواشف التحديد المناسبة معروفة جيدا في المجال كما هو مثبت بواسطة الإشماع ‎«radioactive‏ أ لأنزيم ‎enzymatic‏ أو روابط مولدة للون ‎«chromogenic ligands‏ وتعمل بشكل نموذجي مع المستضد و/أو الجسم المضاد؛ أو تقترن بجسم مضاد ‎SB‏ لديه انتقائية للجسم المضاد الأول. وبذلك؛ يتم تحديد التفاعل أو تقديره كميا عن طريق تحديد أو تقدير اللاصق. 0 تكون كواشف الكشف المناعي والعمليات المناسبة للتطبيق المرتبطة بالطرق الجديدة الخاصة بالكشف الحالي تكون معروفة جيدا في المجال. من الممكن أن تحتوي الكواشف على عوامل مساعدة ‎Jie ancillary agents‏ عوامل تخفيف ‎buffering agents‏ وعوامل تثبيت البروتين ‎stabilizing agents‏ منعام«م؛_مثل»؛ عديد السكاريد ‎polysaccharides‏ وما شابه. من الممكن أيضا أن تشتمل العدة على؛ ويكون ضرورباء عوامل لتقليل ‎Jalal 5‏ الخلفي في الاختبار»ء عوامل لزيادة الإشارة؛ جهاز لإدارة الاختبار» منحنيات معايرة ومخططات؛ منحيات قياسية ومخططات؛ وما ‎ld‏ ‏في نموذج ‎AT‏ ¢ من الممكن أن تشتمل تلك العدة على تعليمات لعوامل التشغيل المناسبة على هيئة لاصق أو ملحق منفصل. تشتمل الأمثلة التالية على النماذج المفضلة الموضحة للكشف. ولابد أخذها في الاعتبار بواسطة 0 خبراء المجال حيث التقنيات التي تم الكشف عنها في الأمثلة والتي تتبع التقنيات المكتشفة بواسطة المخترعون وسوف يتم معرفة الوظيفة جيدا عند تطبيق الكشف؛ وبهذا لابد الأخذ في الاعتبار مساهمة الأنماط المفضلة أثناء تطبيقه. بالرغم من ذلك؛ لابد خبراء المجال؛ في ‎Glas‏ الكشف الحالي؛ أن يقدروا العديد من التغيرات التي تمت في النماذج المحددة والتي تم الكشف عنها والتي تحدث نتائج مماثلة ومشابهه بدون الابتعاد عن نطاق الكشف. 5 أمثلة
تستخدم المواد؛ التركيبات؛ والطرق الموضحة هنا كأمثلة توضيحية للاختراع» ويجب التنويه بأنه لا يجب قصر نطاق الاختراع على نطاق الأمثلة. وسوف يدرك خبراء المجال بأنه من الممكن استخدام الاختراع مع تباينات في المواد التي تم الكشف عنهاء والتركيبات والطرق؛ مثل التباينات التي تتعلق بمجال الاختراع.
وقد كانت الهدف الموضوعي لتلك الأمثلة هو التعرف على ترشيحات لقاح جديد للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع إمكانية قصوى من الترخيص والاستخدام. وعند تلك النقطة؛ تم اختيار نظام لقاح فيروس السعار. وسوف يتيح هذا النظام التطور السريع للقاح مؤهل للاستتنساخ؛ ناقص الاستنساخ؛ وغير نشط كيميائيا من أجل زيادة احتمالية تحقيق التوازن الصحيح بين الاستمناع وإحداث ردود الأفعال ‎.reactogenicity‏
0 إن فيروس السعار ‎Ble‏ عن فيروس الحمض النووي ‎Gaull‏ سلبي ‎canal‏ غير ‎Bas‏ من عائلة فيروسات الرابدو. وعلى الرغم من أن فيروس السعار النوع الشرس يتسبب دوما بمرض قاتل في الجهاز العصبي المركزي في فصيلة الثدييات (2010 ‎(Schnell et al.,‏ » في شكله الموهن؛ لا يتسبب لقاح فيروس السعار بمرض قاتل في الجهاز العصبي المركزي ‎Faber et al.,)‏ ;2008 ,.لة ‎Cenna et‏ ‎Faul et al., 2008; McGettigan et al., 2006; McGettigan et al.,‏ ;2009 لة ‎Faul et‏ ;2005
‎(2003a; McGettigan et al., 2003b; Siler et al., 2002; Snook et al., 2008; Tan et al., 2005 15‏ . من المكن توليد نواقل لقاح فيروس السعار من نظام الجينات المعاكسة المشتق من لقاح ‎SAD B19‏ فيروس السعار ‎all‏ الموهن الذي يستخدم لتلقيح الحياة البرية في أورويا ( ‎Vos et al., 1999; Vos‏ ‎(et al., 2002‏ وقد تم توليد لقاحات منقولة إضافية لفيروس السعار الموهن بواسطة إدخال الطفرات في البروتين السكري فيروس السعار (6)؛ بالإضافة لمسح فيروس السعار 6 الذي ينتقا على خطوط
‏0 الخلايا العابرة المتكاملة التي تقوم بالتعبير عن فيروس السعار 6 ( ;2010 .ىله ‎(Gomme et‏ ‎٠ (McGettigan et al., 20036: McKenna et al., 2004‏ وقد تبين أن الفيروسات المأشوية ناقصة أو محظورة النمو بداخل المختبر والجسم الحي وعالية الاستمناع ) ‎Gomme et al., 2010; McGettigan‏ ‎(et al., 20035: McKenna et al., 2004‏ . إضافة إلى ‎(lly‏ فقد تم استخدام بيتا بروبيولاكتون ‎beta-‏ ‎propiolactone‏ الذي يتوسط إيقاف نشاط اللقاحات الناقلة فيروس السعار لتوليد ترشيحات لقاح ميتة
‎(Siler et al., 2002; Smith et al., 2006) Ji ‏يجب أن يكون لديها مخطط أمان‎ 25
وتوضح الأمثلة التالية جيل لقاحات فيروس السعار غير المنشطة والموهنة التي تعبر عن بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 أو ‎aie shal‏ وتوضح خصائصهم الجزيئية؛ قدرتهم الإمراضية؛ الاستمناع؛ وفاعلية الحماية ضد فيروس السعار والفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في الفئران. إضافة إلى مميزات لقاح فيروس السعار الموضحة بالأعلى؛ ‎ald‏ من المتوقع أن تسه الحالة المتقدمة الحالية لأمان عقار فيروس السعارء والإنتاج؛ والتوزيع من التطور الإكلينيكي للقاحات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 تلك. إضافة إلى ذلك؛ يتسبب فيروس السعار بوفيات تقدر ب 24000 سنويا في أفريقيا لذلك فإن لقاح فيروس السعار/الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ثنائي التكافؤ سوف يكون أداة صحية ‎dale‏ فعالة في أفريقيا الوسطى. ولتحديد ما إذا كان اللقاح المعتمد على فيروس السعار آمنا وفعالا ضد الفيروس التاجي لمتلازمة 0 تنفس الشرق الأوسط؛ قام المخترعون بإنتاج ناقل فيروس السعار يحتوي على مجال الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 51 الخاص بجين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 المتصل بطرف النهاية سي للبروتين جي فيروس السعار. ثم قام المخترعون بعد ذلك بإيقاف نشاط الفيروس كيميائيا واختبار اللقاح في نموذج فأري مصاب بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. قام الفأر بإنتاج معايير عالية من الأجسام المضادة المعادلة مع اللقاح ثم تم تحديه بواسطة 5 الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. كانت الفتران الملقحة بواسطة فيروس السعار/ متلازمة تنفس الشرق الأوسط-5 محمية حماية كاملة من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق ‎cans!‏ بينما أوضحت الفئران النموذجية مستويات عالية من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في الرئتين. وقد أوضحت تلك البيانات أن استخدام اللقاح المعتمد على فيروس السعار/ متلازمة تنفس الشرق الأوسط-5 غير النشط لحجب استنساخ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق 0 الأوسط بداخل الجسم ‎al)‏ مما يرجح إمكانية استخدام لقاحات فيروس السعار في كلا من الجمال والإنسان في مناطق المصابة بأويئة الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. مثال 1.الطرق والمواد المستخدمة عبر الأمثلة إنشاء الحمض النووي ‎(ghoul)‏ المكمل الخاص بنواقل اللقاح. تم وصف ناقل ‎BNSP333‏ اللقاح سابقا (36). تم تكبير الحمض النووي الرببوزي المكمل بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس 5 الشرق الأوسط 5 كامل الطول وأجزاء 5 مع قطع النهاية سي من مستنسخ ‎clone‏ الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الحمض النووي الرببوزي المكمل النوع الشرس الموفر بواسطة مركز
مركز المراقبة الصحية للقوات المسلحة ‎«Armed Forces Health Surveillance Center‏ فرع مراقبة الالتهابات عالمية المنشاً ‎Global Emerging Infections Surveillance‏ ونظام الاستجابة). تم تصميم البادئات بحيث تتضمن موضع 1351171 عند الطرف 5" وموضع ‎Spel‏ عند الطرف 73 للسماح بالإدخال في ‎.BNSP333‏ تم تركيب كيميرا 51- فيروس السعار6 باستخدام تفاعل سلسلة بوليمراز امتداد متراكب من الحمض النووي الرببوزي المكمل معدل الكودون ‎codon‏ المشفر للأحماض الأمينية 750-1 من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 (سينوبيولوجيكال ‎(Sinobiological‏ ‏والكودون المشفر للأحماض الأمينية 524-428 من البروتين السكري فيروس السعار ‎SAD-B19‏ ‏(جينسكريبت ‎(Genseript‏ .3 فحص المستنسخات المأشوية ‎Recombinant clones‏ بواسطة تسلسل الحمض النووي دي أوكسي رببوزي وتم استخدامهم لاستعادة الفيروس الممرض كما هو موضح سابقا. تم تكبير الكودونات 750-18 لجين البروتين الشوكي باستخدام الحمض النووي الريبوزي المكمل معدل الكودون كقالب لتوليد بلازميد التعبير لإنتاج ‎ST‏ مذاب. تم هضم ناتج بواسطة ‎Ball]‏
‎Notl‏ وتم استنساخه إلى ناقل ‎pDISPLAY‏ (مؤسسة إنفيتروجين «(6ع1171008). تنقية الفيروس. تم استعادة المأشوب كما هو موضح سابقا (37). ولتنقية جسيمات الفيروس على مدى واسع؛ تم إنماء حجرتين من 2 مستنبت خلية متراكبين مع خلايا فيرو في دولبيسو وسط إيجل 5 المعدل ‎(DMEM) Dulbecco’s Modified Eagle Medium‏ المدعم بواسطة 75 من مصل جنين صغير البقر ‎fetal calf serum‏ (705). وقبل إضافة الفيروس؛ تم غسل الخلايا بواسطة الفوسفات ‎phosphate‏ المخفف بالمحلول الملحي ثم الإصابة بمعدل تضاعف إصابة قليل (0.05-0.01) في وسط خالي من المصل ‎serum-free medium‏ عند 34 درجة مئوية. تم تجميع المواد الطافية على مدار فترات 4-3 أيام واستبدالها بوسط خالي من المصل. تم طرد وسط مستنبت الخلية ‎Cell culture‏ 0 مركزيا عند سرعة قليلة لمدة 10 دقائق لإزالة البقايا وترشيحها عبر أغشية ترشيح 0.45 ميكرومتر. ثم تم تركيز المواد الطافية المرشحة عن طريق ترشيح التدفق التماسي ‎tangential flow filtration‏ في صندوق ألياف ‎fiber cartridges‏ مجوفة ام بي إيه اس ‎(SpectrumLabs) mPES‏ ثم تبعت بالطرد المركزي الفائق ‎ultracentrifugation‏ على وسائد سكروز ‎sucrose‏ 720 في دوار ‎rotor‏ ‏1 لمدة 2 ساعة عند 25000 دورة في الدقيقة )46000 جرام). ثم تم ‎sale]‏ تعليق الفيروس 5 المستخرج في الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي ومحتوى مقاس من البروتين باستخدام مجموعة مقايسة بروتين ‎Protein Assay‏ بي سي أيه ‎BCA‏ (بي أي إيه آر سي إيه ‎(PIERCE‏ وبعد إضافة
الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي لتعديل تركيز البروتين إلى 1 ملجم/مللي لترء تم إضافة بيتا بروبيولاكتون بتركيز 70.05 ‎(viv)‏ لإيقاف نشاط الفيروس. وبعد تحضين على مدار الليل عند 4 درجات مثوية؛ تم تحضين الخسيمات غير المنشطة عند 37 درجة مثوية لمدة 30 دقيقة وتجميدها بعد ذلك في أجزاء عند -80 درجة ‎sie‏ ومن أجل التحقق من تمام إيقاف نشاط/ غياب الفيروس المعدي؛ تم حقن 10 ميكروجرام من الفيروس غير المنشط في قارورة مستنبتة مع خلايا ‎BSR‏ ويعد أربعة أيام من الحقن؛ تم تمرير 10/1 من المواد الطافية على ‎BSR WA‏ جديدة. وبعد أربعة أيام من الحقن؛ تم تثبيت الخلايا وصبغها بواسطة الجسم المضاد أحادي النسيلة المحدد ب اف آي تي
سي ‎FITC‏ ضد البروتين النووي فيروس السعار. تحليل هلام البروتين ولطخة ويسترن. تم تعديل جسيمات الفيروس المنقاه في مخفف اليوريا ‎urea‏ ( ‎A 125 0‏ ميجا تريس -حمض الهيدروكلوريك ‎(Tris-HCI) Tris—Hydrochloric acid‏ درجة حموضة 8 ؛ 8 مول يورياء 74 سلفان دوديسيل صوديوم ‎sodium dodecyl sulfate‏ 75 بيتا ميركابتو إيثاتول ‎cbeta-mercaptoethanol‏ 70.02 بروموفيثول ‎١ bromophenol‏ لأزرق) عند 95 درجة ‎Lge‏ ‏لمدة خمس دقائق. ثم تم إذابة 3 ميكروجرام من البروتين على 710 هلام بولي أكريلاميد ‎SDS‏ ‎SDS-polyacrylamide gel‏ ثم ‎rua‏ على مدار الليل بواسطة سيبرو روبي لتحليل البروتين 5 الإجمالي أو نقله إلى غشاء نيتروسلسلوز في ‎chide‏ توبين ‎Ale 192) Towbin buffer‏ مول جليسين ‎«glycine‏ 25 مللي متر تريس ‎«Tris‏ 720 ميثانول ‎(methanol‏ لتحليل لطخة وبسترن. ثم تم حجب غشاء النيتروسليلوز في ‎A100) TBST‏ مول تريس-حمض الهيدروكلوريك ‎Hydrochloric acid‏ ‎(HCI)‏ درجة حموضة 7.9 150 مللي مول كلوريد الصوديوم ‎¢(NaCl) sodium chloride‏ 70.01 توين 20) المحتوي على 75 ‎(Wi)‏ لبن مجفف غير دهني عند درجة حرارة الغرفة لمدة 1 ‎dela‏ ‏0 وبعد الحجب؛ تم تحضين الغشاء على مدار الليل مع مضاد المصل ‎antisera‏ الخاص بالأرنب الخاص بالبروتين السكري ‎ug yd‏ السعار (تم توفيره بواسطة د. ديتزشولد» جامعة توماس جيفرسون) أو مصل الأرنب ضد الوحدة الجزئية ‎ST‏ أو 52 الخاصة ب الفيروس ‎all)‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 (سينوبيولوجيكال) عند تخفيف 1: 1000 في الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 75 ألبومين مصل بقري ‎bovine serum albumin‏ (85). ويعد الغسل»؛ تم تحضين اللطخة 5 المدة 1 ساعة مع الجلوبيولين المناعي جي ‎(IgG) immunoglobulin G‏ اتش آر بي ‎HRP‏ المضاد للأرنب المخفف 1: 50,000 في مخفف الحجب. تم تطوير الشرائط بواسطة ركيزة ‎SuperSignal‏
‎(PIERCE) West Dura Chemiluminescent‏ تم الحصول على الصور بواسطة نظام تصوير ‎(ProteinSimple) FluorChem M CCD‏ تم استخدام سلم البروتين المصبوغ مسبقا ‎PageRuler‏ ‏(ثيرمو ساينتيفيك ‎(ThermoScientific‏ لتحديد الوزن الجزيئي. التفلور. تم استنبات خلايا فيرو 126 على أغطية عينات في دولبيسو وسط إيجل المعدل وإصابتها بالمرض في اليوم التالي بواسطة متلازمة تنفس الشرق الأوسط -5 المعبر عن فيروس السعار أو فيروس السعار النموذجي في عند 34 درجة مئوية لمدة 1 ساعة. وبعد إزالة المحضن وإضافة وسط دولبيسو إيجل المعدل الطازج المحتوي على 75 مصل جنين صغير ‎all‏ تم تحضين الخلايا عند 4 درجة مئوية لمدة 60 ساعة. وفي نهاية التحضين؛ تم غسل الخلايا بواسطة الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي؛ مثبت في 72 بي اف ‎PRAM]‏ لمدة 30 دقيقة؛ وترشيحه في الفوسفات المخفف 0 بالمحلول الملحي المحتوي على 70.2 توين لمدة 15 دقيقة؛ وغسله بواسطة الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي؛ وحجبه بواسطة الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 75 ألبومين مصل بقري. ثم تم صباغة الخلايا لمدة 2-1 ساعة في درجة حرارة الغرفة بواسطة مضاد مصل الأرنب متعدد النسيلة ضد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 (سينوبيولوجيكال» 4 ميكروجرام/مللي لتر)؛ الجسم المضاد 105 أحادي النسيلة ضد البروتين السكري فيروس السعار 5 (بكام؛ 4 ميكروجرام/مللي لتر)؛ أو ©1211 المتصل بالجسم المضاد أحادي النسيلة ضد البروتين النووي فيروس السعار ‎(Fujirebio)‏ المخفف 1: 200 في الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 72 ألبومين مصل بقري. وبعد الغسل بواسطة الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي والتحضين مع ‎Cy2‏ أو ‎Cy3‏ المتصل بالجسم المضاد الثانوي المضاد للفأر (جاكسون للأبحاث المناعية؛ 1: 250 في الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 75 ألبومين مصل بقري)؛ 0 تتم إحصاء الخلايا في محلول برولونج الذهبي مضاد للبهتان. تم الحصول على الصور بواسطة الميكروسكوب ‎Axioskop)‏ 40؛ ‎JIS‏ زبس) المعد بعدسات ‎PlanNeofluar‏ بتكبير 20 مرة و 40 مرة وكاميرا سي سي ديه ‎CCD‏ المبردة ‎Jenoptik ProgresCFcool)‏ ). تم تحضير الصور المركبة باستخدام الصورة [. تصريح أخلاقيات الحيوان. تم إجراء تلك الدراسة مع الالتزام التام للتوصيات الموضحة في دليل 5 العناية واستخدام حيوانات التجارب؛ مكتب العناية بالحيوان وقسم الولايات المتحدة للزراعة. تمت الموافقة على جميع أعمال الحيوانات بواسطة مؤسسة العناية بالحيوان ولجنة الاستخدام ‎Institutional‏
‎(JACUC) Animal Care and Use Committee‏ عند جامعة توماس جيفرسون وعند جامعة ميريلاند. تم إجراء جميع التجارب تحت تخدير الأيزوفلوران ‎isoflurane‏ بواسطة أشخاص ‎(pie‏ وتحت إشراف طاقم من البيطريين. تم وضع ‎lal‏ في أقفاص في مجموعات مكونة من خمسة؛ تحت ظروف ‎dish)‏ ودرجة ‎Ba‏ وضوءٍ يتم التحكم بهم (دورات 12 ساعة ضوءٍ/ 12 ساعة ظلام). ساعة ظلام). وكان الغذاء متاحا حسب الحاجة.
التلقيحات. تم شراء إناث ‎oh‏ بي أيه ال بي1/8113/ سي» بعمر ستة إلى ثمانية أسابيع من مختبرات جاكسون. تم حقن عشرة فثران بداخل العضل بواسطة 10 ميكروجرام من جسيمات ‎BNSP333-S1-‏ ‏© غير النشطة كيميائيا في 100 ميكرولتر الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي وتحفيزها مرتيم بواسطة نفس الكمية من الفيروس في يوم 7 ويوم 21 بالتتابع. تم تلقيح مجموعات الخمس فنران 0 بواسطة ‎¢BNSP333-GP‏ 31450333 أو الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي كنماذج بعد نفس جدول التلقيح. تم تجميع عينات الدم بواسطة نزيف خلف محجري مباشرة قبل التلقيح الأول وعلى فترات
أسبوعية بعد ذلك وصيلا إلى يوم 35 بعد التلقيح. اختبار ماص للمناعة مرتيط با لإنزيم ‎(ELISA) Enzyme-linked immunosorbent assay‏ .3 قياس الاستجابات الخلطية لفيروس السعار 6 ولبروتين لقاحات لفيروس الإيبولا جي بي 67 عن طريق 5 اختبار ماص للمناعة مرتبط بالإنزيم غير المباشرة كما هو موضح سابقا (28). ولتحديد استجابات الأجسام المضادة لبروتين 5 الخاص ب الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط؛» تم تطوير اختبار ماص للمناعة مرتبط بالإنزيم غير مباشرة باستخدام بروتين 51 المنقى. تم إنتاج بروتين 51 المذاب عن طريق تقل المادة الوراثية الفيروسية- لخلايا 2937 بواسطة بلازميد ‎ashy‏ بالتعبير عن المجال الخارجي ‎ST‏ المفرز (الأحماض الأمينية 750-18( المتصل بذيل اتش أيه ‎HA‏ للنهاية إن. 0 .تم إجراء تنقية البروتين المذيل ب ‎HA‏ من تحضين الخلايا المنقول إليها المادة الوراثية كما هو موضح بالأعلى (38). تم تغطية أطباق ماكسي سورب ‎(Nunc) 4 HBX 96 Maxisorp‏ على مدار الليل عند 4 درجات مئوية مع 100 ميكرولتر من بروتين ‎ST‏ المنقى (0.5 ميكروجرام/مللي لتر) في 50 مللي مول من مخفف كريونات ‎carbonate‏ (درجة حموضة 9.6). ويعد الغسل بواسطة الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 70.05 ‎(wiv)‏ توين 20 والحجب بواسطة مخفف الفوسفات 5 المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 70.05 ‎(w/v)‏ توين 20 المحتوي على 75 لبن مجففء تم تحضين الأطباق على مدار الليل مع ثلاثة أضعاف تخفيفات متتالية من أمصال الفئران في
الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 70.5 ألبومين مصل بقري. ثم تبع هذا بثلاثة دورات غسيل؛ والتحضين مع ‎HRP‏ المتصل بالجسم المضاد الثانوي ‎secondary antibody‏ للجلوبيولين المناعي جي للماعز المضاد للفأر (أبحاث جاكسون المناعية ‎Jackson‏ ‎<Immunoresearch‏ 1: 10.000 في الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي المحتوي على 70.05 ‎(WA) 5‏ توين 20( لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة؛ ثلاثة دورات غسيا إضافية؛ وإضافة ركيزة 000 (سيجما ألدربتش ‎(Sigma-Aldrich‏ تم إيقاف تطور اللون عن طريق إضافة 50 ميكرولتر من 3 مول حمض كبريتيك ‎sulfuric acid‏ (11:50) لكل ‎yi‏ ¢ وتم قياس الكتافة الذوئية ‎optical‏ ‎density‏ عند 490 نانو متر باستخدام قارئ أطباق ‎ELX800 plate reader‏ (بيوتك 6ا81016). تم تحليل البيانات باستخدام منظور ‎GraphPad‏ (الإصدار 6.0جي) باستخدام 4-معايير تراجع غير 0 خطي ‎-nonlinear regression‏ إصابة وتحليل استنساخ الفيروس ‎all‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في الفئران الملقحة. تم تحوير ‎(fall‏ الملقحة بواسطة ناقل الفيروس الغدي عن طريق الحقن بداخل الأنف وتركه لمدة 4 أيام للتأكد من التعبير عن داي بيبتيديل بيبتيداز 4؛ كما هو موضح سابقا (39). ثم تم إصابة الفئران المحورة بواسطة الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط (الأردن) كما هو موضح سابقا (40)؛ فيما عدا أنه قد تم حقن الفئران بواسطة 2.5 ‎sang” 10x‏ تكوين ترسبات الخاص بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط (الأردن) في حجم إجمالي 50 ميكرولتر. وبعد 4 أيام من الإصابة؛ تم تحديد معايير الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط (الأردن) عن ‎Gob‏ ‏تقييمات اللويحة كما هو موضح بالأعلى (40). تم تحديد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط الحمض النووي الريبوزي بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس 0 الشرق الأوسط كما هو موضح سابقا (40)؛ ‎Lad‏ عدا أن المتحكم الداخلي كان بروتين 1 مستقبل ترانسفيرين الفأري ‎transferrin receptor protein‏ (©178)_باستخدام البادئ ‎١‏ لأمامي التالي: ‎TGACGTTGAATTGAACCTGGACTA‏ (لمتوالية .رقم 17)؛_البادئ_ العكسي : ‎GTCTCCACGAGCGGAATACAG‏ (لمتوالية رقم 18)؛ والكاشف ‎ABY- : probe‏ ‎ATCAGGGATATGGGTCTAAGTCTACAGTGG-QSY‏ (لمتوالية رقم 19)؛ في تشابك 5 ثلاثي مع البادئ/ الكاشف المذكور سابقا يعد مع و بروتين غشاء ‎(M)‏ الحمض النووي الرببوزي الرسول ‎(mRNA) massanger ribonucleic acid‏ (41).
تقييمات معادلة الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. تم تقييم المصل من الفئران الملقحة لنشاط معادلة الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط كما هو موضح ‎Lad‏ سبق (20). مثال 2. إنشاء فيروس السعار موهن معبر عن البروتين الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط.
يشتق ناقل لقاح ‎BNSP333‏ المستخدم هنا من فيروس السعار الموهن السلالة ‎SAD-B19‏ (42). وقد تم إدخال تعديلات عديدة في السلالة الأبوية من أجل زيادة لأمان والوصول بالتعبير عن الجينات الغريبة لأقصى درجة. وقد أوضح المخترعون قبل ذلك أنه من الممكن إدخال جينات غريبة بثبات في هذا الناقل )28 36؛ 38 43 44). إضافة إلى ذلك؛ فقد أوضح المخترعون أن التعبير عن مستضدات غريبة من الموضع بين فيروس السعار 17 وجين ©؛ بجانب تحسين الكودون للخلايا
0 البشرية للجين المستهدف؛ يؤدي إلى ‎del‏ مستوبات التعبير عن المستضد الغريب. إضافة إلى ذلك؛ فإن استبدال الأرجينين بحمض الجلوتاميك في الموضع 333 ‎(333RD333E)‏ في البروتين السكري فيروس السعار (6) يقلل أيضا من إمراضية الناقل عالي الإضعاف بالفعل (36). وقد استخدم المخترعون بنجاح هذا الناقل المطور لتوليد مرشحات لقاح ضد العديد من الأمراض الفيروسية حيوانية المصدر ‎Jie‏ فيروس الإيبولا (لقاحات لفيروس الإيبولا) وفيروس ‎(HeV) Henipaviruse Luigll‏ )28«
5 38). وطبقا لعملنا السابق في إنشاء ‎lala‏ لفيروس الإيبولا؛ فقد اختار المخترعون إدخال بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5_ في 081150333. يكون الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط عبارة عن بروتين سكري مثبت في غشاء فيربونات الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ويهذا هدفا كبيرا للأجسام المضادة الواقية. أولاء قام المخترعون بإنتاج مستنسخ ‎BNSP333 0‏ محتوي على جين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط كامل الطول النوع الشرس (شكل 1). وقد استعاد المخترعون فيروس ‎BNSP333-S‏ المأشوب وقاموا بتحضير مخزون فيروسي من ‎BNSP333-S‏ على خلايا ‎BSR‏ (مستنسخ خلية كلية صغير هامستر) ‎WIA‏ فيرو. وقد استخدم المخترعون كلا خطي الخلايا نتيجة أنه أثناء نمو ‎BNSP333‏ ناقل فيروس السعار الأبوي
إلى أعلى معدلاته على ‎(BSR WIA‏ كانت خلايا فيرو أكثر ملائمة لإنتاج اللقاحات البشرية.
5 ثم بعد ذلك؛ قام المخترعون بتحليل التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5
من ‎.BNSP333-S‏ ومن أجل تلك المقارية؛ تم إصابة ‎WIA‏ فيرو عند تكرار الإصابة ‎multiplicity‏
‎(MOI) of infection‏ المساوي ‎BNSP333-S1‏ أو ‎BNSP333-GP‏ كنموذج. وعندما تم التعبير عن
‏بروتينات 5 للفيروسات التاجية على سطح الخلايا المعبرة عن ‎hDDP4‏ في أنظمة التعبير المتباينة؛
‏أدى إلى الالتحام وتكوين التشابك مع الخلايا المجاورة المعبرة عن المستقبل الشبيه. وقد أشار التحليل
‏بواسطة التفلور المناعي والصبغة بواسطة الأجسام المضادة الخاصة بفيروس السعار ‎(AIG‏ أنه تمت إصابة الخلايا (الأشكال 2 و 2ب؛ المخطط الأيسر). إضافة إلى ذلك؛ فقد أوضحت الخلايا المصابة
‎BNSP333-S‏ خلايا كبيرة متعددة النوايا (الشكل 2ا. المخطط الأيسر)؛ والذي يشير إلى التعبير عن
‏بروتين الفيروس ‎all)‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5مؤهل للالتحام من 81150333-5.
‏مثال 3. يثبط التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط كامل الطول التعبير عن
‏بروتين فيروس السعار 6 وبقلل المعايير الفيروسية بشدة.
‏0 وبعد استعادة ناقل لقاح ‎can‏ لاحظ المخترعون أن ‎LAY‏ المصابة ب ‎BNSP333-S‏ قامت بإنتاج فيروسات أقل عند مقارنتها بالخلايا المصابة ب ‎BNSP333‏ أو بنواقل لقاح أخرى طبقا ل ‎(BNSP333‏ ‎ie‏ 31م1708. إضافة إلى ‎(lly‏ فقد أراد المخترعون تحليل إدراج بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 في فيريونات فيروس السعار وذلك لأن الإدراج يعد أساسيا لاستخدام ذلك اللقاح في شكله غير النشط. ومن أجل تحليل نمو وإدراج الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق
‏5 الأوسط8 في جسيمات فيروس السعار؛ تم إصابة ‎WA‏ فيرو و ‎BSR‏ في قوارير 7 - 150 عند تكرار الإصابة مساويا ل 0.01 مع ‎<SPBN (BNSP333‏ أو 51450333-5؛ وتم تجميع المواد الطافية لمستنبت النسيج على مدار 14-10 يوم. استخدم المخترعون الطرق المركزي فائق السرعة لتركيز جسيمات الفيروس في مواد طافية مزالة وتحليل ‎SDS-PAGE‏ لفيروس السعار 6 ومستضدات فيروس ‎Glad‏ . وبعد الصبغة بواسطة سيبروروبي؛ تم تحديد العديد من شرائط البروتين ل ‎BNSP333‏ و
‎SPBN | 0‏ وتتماشى تلك الشرائط مع بروتينات فيروس السعار6 ,7,14 ,11 و ‎BSR WIA (AL‏ وفيرو (شكل 3ا). وبالرغم من ذلك؛ فقد تبين أن الفيريونات التي تم تجميعها من المواد الطافية للخلايا المصابة ب ‎BNSP333-S‏ لا تحتوي على بروتين فيروس السعار0 ؛ أو كمية قليلة جدا على الأقل. وبالرغم من ذلك؛ فقد حدد المخترعون شرائط إضافية من الحجم المتوقع لبروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 (180 كيلو دالتون) والوحدة الجزئية ‎ST‏ (120-110 كيلو دالتون)
‏5 في خلايا فيرو و ‎BSR‏
ومن أجل التحقق من المستوى المنخفض من فيروس السعار6 في الفيريونات ‎(BNSP333-S‏ ‏بالإضافة لتأكيد وجود الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق ‎Slave)‏ ؛ فقد قام المخترعون بتحليل 8. باستخدام مصل أرنب مخصص ل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط58 ؛ وحدد المخترعون بروتين الحجم المتوقع الخاص ب ‎S1BNSP333-S‏ في فيريونات ‎BNSP333-S‏ المشتقة من خلايا فيرو أو ‎BSR‏ (شكل 3ب). وقد قام المخترعون بنقل 905-08015ممائل كما هو موضح بالأعلى إلى غشاء نيتروسليلوز ثم تم تحضين لطخة ويسترن مع خليط من أريعة أجسام مضادة أحادية النسيلة مختلفة موجهة ضد فيروس السعار 6. وكما هو موضح في مثال 3؛ فقد انخفض فيروس السعار 6 بشكل كبير في فيريونات 11150333-8. مثال 4. مسح إشارة تثبيت إيه آر ‎BR‏ الخاصة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 0 يطور التعبير عنها والإدراج. يتجمع البروتين5 للفيروس التاجي في الفراغات بداخل ‎WAN‏ حيث يتم تبرعم ونضج جسيمات الفيروس. ولهذا فقد افترض المخترعون أن تثبيت الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 في ‎ER‏ من الممكن أن يتداخل مع المعالجة الملائمة ونقل بروتين فيروس ‎Gland)‏ . وقد تم دعم تلك الافتراضية بواسطة الملاحظات السابقة بأن قطع مجالات النهاية سي الخاصة بمتلازمة التنفس 5 الحادة الوخيمة وبروتينات تي جي إيه في ‎TGEV‏ 5 تزيد من إدراج البروتين 5 في جسيمات فيروس التهاب الفم الحويصلي. ولهذاء قام المخترعون بتركيب طافرتي مسح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 عن طريق مسح 19 أو 29 حمض أميني من المجال السيتوبلازمي لبروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 (شكل 1 ‎BNSP333-SA19‏ و 81150333-5429). تم تنقية الفيريونات من المواد الطافية ل ‎BSR‏ وخلايا فيرو المصابة ب ‎(BSNP333‏ 31150333 0 5219 81650333 و ‎.BNSP333A29‏ وقد أوضح التحليل بواسطة ‎SDS-PAGE‏ ولطخة ويسترن أن إزالة 19 حمض أميني يحسن كثيرا من إدراج بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 في ‎BNSP333 A19‏ (شكل 4). وقد قلل إزالة 29 حمض أميني من المجال السيتوبلازمي ضمن ‎BNSP333-SA29‏ من إدراج الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 في الفيريونات بشكل كبير. وبالرغم من ذلك؛ فقد كان التعبير عن لا يزال متأثرا بشدة بواسطة التعبير عن الفيروس 5 التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 ¢ ‎SATO‏ أو 5429؛ وتم تحديد فيروس السعار6 فقط بواسطة لطخة ويسترن. وقد لوحظ فقد قلل عدم إدراج فيروس ‎Glad)‏ من معايير ‎BNSP333-SA19‏ و
‎(BNSP333-SA29‏ ولهذاء لم يتم اعتبار تلك التركيبات مناسبة للتطوير الإضافي للقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. مثال 5. يؤدي التعبير عن ‎ST‏ المتصل بجزءٍ النهاية سي من فيروس السعار6 إلى إدراج قوي لبروتين الالتحام فيروس السعار ‎G-MERS-COV-S1‏ ‏5 وقد أوضحت الدراسات السابقة أن مجال التحام الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط يقع
في الوحدة الجزئية 52 ل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق ‎Shaws)‏ ؛ بينما تحتوي الوحدة الجزئية 51 ل الفيروس ‎all)‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 على ‎Jae‏ ربط المستقبل. وقد افترض المخترعون أن إشارات التثبيت الوهمية في المجال السيتوبلازمي ونشاط التحام مجال 52 تداخل مع نقل فيروس السعار6 عبر مركب جولجي وإدراج 6 في جسيمات الفيروس عند الغشاء
0 البلازمي. إضافة إلى ذلك؛ فقد أشارت الأبحاث عن طريق آخرين أن الأجسام المضادة الموجهة ضد مجال ربط المستقبل من الممكن أن تقي من المرض؛ ولهذا فإن التعبير عن ‎ST‏ من الممكن أن يكون كافيا لحث استجابة مناعية وقائية ضد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وبهذاء فقد ‎Lil‏ المخترعون ناقل لقاح جديد ‎(BNSP333-51)‏ يعبر عن الأحماض الأمينية 750 للنهاية إن الخاصة بمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 المتصلة بالبروتين السكري فيروس السعار المقطوع. والذي
يشتمل على 31 حمض أميني من المجال الخارجي لفيروس السعار© و المجال السيتوبلازمي الكامل وبتيح المجال عابر الأغشية لفيروس السعار #6 للبروتين السكري الكيميري الإدراج في فيريونات فيروس السعار. ويستخدم البروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط/51 فيروس السعار 6 الكيميري متوالية الانتقال الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط28 الأصلية ‎(SS)‏ وتم توليدها بواسطة تفاعل سلسلة بوليمراز الخاص بكودون أجزاء الحمض النووي الريبوزي المكمل
0 المحسنة (شكل 1) تم استعادة الفيروسات المعدية كما هو موضح بالأعلى. وعلى النقيض من فيروس السعار المأشوب المعبر عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 أو طافرات المسح الخاصة به؛ فقد نمى ‎BNSP333-S1‏ إلى معايير مماثلة لنواقل فيروس السعار الأخرى المأشوية؛ حوالي 10 3 ‎FFU‏ ‏/مللي لتر.
ومن أجل تحليل إدراج البروتين السكري الوهمي في جسيمات فيروس ‎lanl)‏ تم إصابة ‎WIS‏ فيرو بواسطة ‎(BNSP333‏ 81150333-51, أو الفيروسات النموذجية المعبرة عن إيبولا ‎BNSP333-) GP‏
‎(GP‏ وجسيمات الفيروس المنقاه كما هو موضح بالأعلى. وقد كشف تحليل ‎SDS-PAGE‏ للفيريونات المنقاة عن شربط قوي حوالي 150 كيلو دالتون في المواد الطافية من خلايا فيرو المضابة بواسطة ‎BNSP333-S1‏ (شكل 15(« والذي تفاعل بقوة مع الأجسام المضادة الخاصة بالوحدة الجزئية 51 للفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 و كانت غير موجودة في الفئران النموذجية (شكل 5ب)؛ مما يشير إلى إدراج فعال لبروتين التحام 51-6 في جسيمات ‎.BNSP333-S1‏ وقد احتوت جميع الفيروسات الثلاثة على كمية مماثلة من فيروس ‎Gobel‏ (شكل 5ج)؛ مما يشير إلى أن البروتين 51-6 الكيميري الذي يفتقد إلى الوحدة الجزئية 52 لا يقوم بحجب النقل وبقوم بإدراج البروتين السكري فيروس السعار وسوف يكون مرشح لقاح مناسب. مثال 6. ‎BNSP333-S1‏ يكون مستمنعا في الفئران ويحمي من الاختبار بواسطة الفيروس التاجي 0 للمتلازمة تنفس الشرق الأوسط المرضي من أجل تحليل استمناع ‎(BNSP333-S1‏ قام المخترعون بتلقيح 4 مجموعات من ‎BALB/c Ohi‏ (5 فثران لكل مجموعة) بواسطة 10 ميكروجرام ‎BNSP333-GP‏ (مجموعة 1(¢ 10 ميكروجرام 1 (مجموعة 2 و 3)؛ أو الفوسفات المخفف بالمحلول الملحي (مجموعة 4) عند يوم 0< 7 و 21. وتابع المخترعون الاستجابة الاستجابة المناعية ضد فيروس السعار 6 والفيروس 5 التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 بواسطة اختبار ماص للمناعة مرتبط بالإنزيم الخاصة بالمستضد. وقد ازدادت استجابات الجلوبيولين المناعي جي الخاصة بالمستضد على مدار الوقت وبعد كل تلقيح؛ وتم الحصول على مستويات عالية من الجسم المضاد ضد كل من فيروس السعار 6 و الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 8 بعد الحقن الثالث. وقد تم تحديد الاستجابات المناعية الخاصة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5- في المجموعات 2 و 3 فقط ولنكن تم تحديد الجلوبيولين المناعي جي الخاص بفيروس السعار 6 في المجموعات 3-1 (البيانات غير موضحة). ولم تظهر أيا من حيوانات المجموعة 4؛ التي تم تلقيحها تلقيحا وهمياء استجابة مناعية ضد فيروس السعار6 أو بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مما يؤكد خصوصية اختبار ماص للمناعة مرتبط بالإنزيم. بينما من المعروف أن معايير اختبار ماص للمناعة مرتبط بالإنزيم الخاصة بفيروس السعار 6 تتوقع الحماية ضد تحدي فيروس السعار؛ وتعد القدرات 5 الوقائية للأجسام المضادة الموجهة للفيروس ‎alll‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 غير معروفة. ولهذا فقد أجرى المخترعون الأجسام المضادة المعطلة للفيروس ضد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس
الشرق الأوسط للأمصال في اليوم 35 للفئران الملقحة من الأريعة مجموعات. ولم يتم تحديد أجسام مضادة الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط معادلة في أمصال ‎Ohl‏ من المجموعة ‎¢BNSP333-GP)1‏ شكل 6أ) أو الفتران الملقحة وهميا (الفوسفات المخفف بالمحلول ‎(All‏ ‏(مجموعة 4؛ شكل 6ب)؛ ولكن عادلت أمصال ‎ofall‏ الملقحة بواسطة ‎BNSP333-S1‏ (مجموعة 2 و5؛ أشكال كب و 6ج) الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط عند تخفيفات المصل بين 1: 160 (7فثران) و 1: 320 (3فئان). تم إجراء اختبار الفاعلية للقاح فيروس السعار- متلازمة تنفس الشرق الأوسط باستخدام النموذج الفأري الناقل الفيروس الغدي داي بيبتيديل بيبتيداز 4 البشري. تم تحوير الأريع مجموعات من الفثران» وبعد خمسة ‎cali‏ تم تحدي ‎Gaal‏ في المجموعات 1؛ 2 و 4 بالحقن بداخل الأنف ‎(IN)‏ ‏0 بواسطة الفيروس ‎all)‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط بمعدل 1 ‎x‏ 10 " وحدة تكوين ترسبات/فأر (السلالة الأردنية- 2012/03). وبعد أربعة أيام من التحدي؛ تم إخضاع الفئران للقتل الرحيم؛ وتم استصال رئاتهاء وتجانسهاء وتقييم الحمل الفيروسي بها بواسطة تفاعل البلمرة التسلسلي للانتساخ العكسي ‎(qRT-PCR) quantitative reverse transcription-polymerase chain reaction‏ وتقييم اللوحة الفيروسية. وفيما يتعلق بالفئران الملقحة 8517150333-51؛ تم اختزال كلا من الحمض 5 النووي ‎(Ghoul)‏ الرسول والجينومي إلى المستويات الهيكلية المماثلة للمستويات الموجودة في الفئران غير المحورة بواسطة 8.05 المعبر عن داي بيبتيديل بيبتيداز 4 البشري (جدول 2). إضافة إلى ذلك؛ فقد اختزل التلقيح بواسطة 3150333-51 الحمل الفيروسي في الرئة إلى المستويات تحت مستوى التقييم (5 ‎x‏ 10 “ءجدول 3). جدول 2. تفاعل البلمرة التسلسلي للانتساخ العكسي للحمض النووي الرببوزي الجينومي و الحمض 0 النووي الريبوزي الرسول بعد الاختبار بواسطة الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. الها" عدب ‎UpE‏ ‏الفيروس الريبوزي الرسول التاجي | المتوسط | الانحراف | المتوسط | ‎Glad)‏ ‏لمتلازمة المعياري المعياري
_— 2 7 _— الشرق الأوسط 4 50673112935900 | 535.30 ‎G2/BNSP333-‏ |. 46.03 41.91 3.57 2.88 ‎S1‏ = ‎S1‏ ‏4 الفوسفات نعم 7 383346 | 357.89 | 116.37 المخفف بالمحلول الملح جدول 3. الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط المستعاد من رئة الفثران الملقحة كما هو موضح سس ل التاجي لمتلازمة | المتوسط الاتحراف تنفس الشرق المعياري الأوسط ال سل ‎i)‏ الا ددس ا /4الفوسفات نعم ‎x7.65‏ 10 2 2.09 10 2 المخفف بالمحلول الملح ‎=ND‏ غير محدد (مستوى تحديد التقييم هو ‎10x25‏ ‏5 مناقشة ‎abd)‏ 6-1 لقد تم تركيب لقاحات فيروس السعار متعددة حية وميتة معبرة عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 وتم مقارنة تعبيرهم ‎¢S‏ أمانهم» استمناعهم وقدرتهم الوقائية في الفتران. ويتم هنا
وصف لقاح جديد معتمد على فيروس السعار معبر عن بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط51 كلقاح محتمل ضد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وبالمثل لمقاريات اللقاح السابقة الخاصة بناء قام المخترعون بالتعبير عن المستضد المستهدف للقاح (الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ‎(S‏ من ‎BNSP333‏ الهيكلي لناقل فيروس السعار الموهن. وبالرغم من ذلك؛ فقد ‎JIB‏ التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 إدراج فيروس ‎Gland‏ في الفيريونات بشدة. إضافة إلى ذلك؛ فقد احتوت فيريونات فيروس السعار فقط على كمية قليلة من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط9 . وقد تم ملاحظة نتائج مماثلة مع ناقل فيروس التهاب الفم الحويصليء بينما أدى التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 5 من الجينوم إلى مستويات قليلة من فيروس التهاب الفم الحويصلي© في الفيربونات ‎Be‏ أخرى 0 (لبيانات غير موضحة). وأشارت البيانات إلى أن التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 يتداخل مع التعبير أو نقل البروتينات السكرية الفيروسية الأخرى. ولهذاء وطبقا للعمل السابق الذي قام المخترعون فيه بالتعبير بنجاح عن البروتينات السكرية الفيروسية المختلفة من النواقل المعتمدة على فيروس السعار وملاحظة تأثير طفيف في حرائك استنساخ الفيروسات والمعايير النهائية؛ فقد تم افتراض أن تثبيت بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق 5 الأوسط5_يمنع معالجة في ‎ER‏ و/أو جهاز جولجي ومن المحتمل الانتقار إلى الغشاء البلازمي. وقد تم استبعاد النظرية البديلة بأن الغلوزة الثقيلة ل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 هي المسئولة طبقا لحقيقة أنه قد تم غلوزة من البروتين السكري فيروس نقص المناعة البشري-1 ‎(HIV-1) human immunodeficiency virus-1‏ 80160 وفيروس الإيبولا ‎GP‏ غلوزة ثقيلة؛ ‎(Sly‏ تم التعبير عنهم جيدا من فيروس السعارء وتم إدراجهم في الفيريونات بدون تثبيط إدراج فيروس السعار 0 6. وطبقا لنظرية أن تثبيت ‎ER‏ الخاص ب الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 يعد مسئلا عن اختزال نقل فيروس السعار6 إلى السطح. وقد تم إزالة ‎aga‏ إشارة تثبيت ‎ER‏ الخاص ب الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وقد تم تحديد أن هذا قام باستعادة التعبير عن فيروس السعار 6 و الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط59 ؛ بالإضافة إلى الإدخال في فيريونات فيروس 5 السعار. وأشارت تلك البيانات إلى أن التعبير عن الفيروس ‎all)‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 من الممكن أن يمنع التعبير عن نقل فيروس السعار6 . وقد تم اعتماد مقاربة بديلة للتعبير عن
الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 كامل الطول والتي ركزت على التعبير عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط51 ؛ الذي احتوى على مجال ربط المستقبل؛ وقد تبين أن مجال ربط المستقبل كافيا لحث الجسم المضاد الأجسام المضادة المعطلة للفيروس ضد الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. ولأنه يتم إفراز بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 51 نتيجة نقص مرساة الغشاء؛ وتم إضافة الإشارة المناسبة لتوجيه الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط51 إلى تبرعم فيريونات فيروس السعار. وياستخدام ‎oh‏ من فيروس ‎GED bed)‏ المحتوي على مجال قطع الجهد؛ بالإضافة إلى فيروس السعار ‎G‏ مجال عبر غشائي و المجال السيتويلازمي؛ غفد تبين أنه ذات أهمية للإدراج عالي الكفاءة للبروتين السكري في فيروسات الرابدو. وعلى النقيض من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 ؛ فقد تم إدراج بروتين الالتحام 0 الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط 51 فيروس السعار6 بكفاءة في فيريونات فيروس
السعار. ‎day‏ وجود نموذج حيواني صغير جيد هاما لأبحاث اللقاح؛ وبالرغم من ذلك؛ فعلى النقيض من الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة؛ فلا يوجد حتى الآن نموذج حيواني صغير جيد ل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. لا يتضاعف الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس 5 الشرق الأوسط في الفتران نتيجة الاختلاف بين الفصائل في مستقبل داي بيبتيديل بيبتيداز 4. ويتماثل داي بيبتيديل بيبتيداز 4 الفأري مع داي بيبتيديل بيبتيداز 4 البشري؛ ويختلف فقط عند 62 موقعا من 767 إجمالي بقايا حمض أميني (792 مطابقة)؛ وبالرغم من ذلك؛ وتهدف تلك الاختلافات إلى أن تتواجد فوق بقايا مكشوفة السطح والتي من الممكن أن تؤثر على ارتباط بروتين الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط5 بداي بيبتيديل بيبتيداز 4 الفأري. ويظهر قرد المكاك المصاب 0 بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط بعض الأعراض الإكلينيكية مثل فقدان الشهية؛ ووجود ارتشاحات رئوية التهابية. وبالرغم من ذلك؛ يعد مسار المرض خفيفا مقارنة بالإصابة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في البشرء ولا تستسلم الحيوانات للإصابة. ولهذاء فقد تم استخدام النموذج الفأري ‎dela‏ الفيروس الغدّي. يعبر هذا النموذج عن داي بيبتيديل بيبتيداز 4 البشري في الرئة بعد حقن ناقل الفيروس الغذي بداخل الأنف ثم تتبع بالإصابة ب الفيروس التاجي 5 ا لتلازمة تنفس الشرق الأوسط بعد 5 أيام. ‎Ladies‏ تم استخدامه لاختبار التلقيح بواسطة فيريونات فيروس السعار غير المنشطة المحتوية على الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط51 ؛
أوضحت النتائج أن التلقيح كان فعالا جدا: فقد قام بحث استجابة مناعية خلطية قوية ضد فيروس
‎Glad‏ بالإضافة إلى الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط. وقدد قلل التلقيح بواسطة
‏لقاح السعار المأشوب المعيار الفيروسي ل الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط في رئة
‏الحيوانات الملقحة تحت مستويات الكشف؛ بينما تم الكشف عن مستويات فيروسية عالية في الأهداف
‏5 النموذجية.
‏ويكون تأثير الاستجابة المناعية الخلوية للوقاية من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط
‏أقل وضوحاء ولكن أوضحت دراسات سابقة أن التلقيح بواسطة الحمض النووي دي أوكسي رببوزي
‏أو فيروس اللقاح المعدل أنقرة المأشوب المعبر عن الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة
‏الوخيمة5 يقوم بحث استجابات خلوية قوية. إلا أنه وبالرغم من ذلك؛ فسوف تتيح تجارب نقل تكيفية 0 لمجموعات خلوية معية استنتاج نهائي لتأثير الاستجابات المناعية الخلوية ضد الإصابة ب الفيروس
‏التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط.
‏ومن المحتمل ألا يتم استخدام اللقاح المعتمد على فيروس السعار حي للاستخدام الآدمي؛ ولكنه
‏يكون فعالا وآمنا على فصائل الحيوانات المختلفة؛ ويكون هذا خيارا موجودا للقاحات الحيوان» والذي
‏يتم تحليله حاليا لقاحات لفيروس الإيبولا المعتمد على فيروس السعار. ووفقا لدراستناء فقد أوضح 15 لقاح فيروس السعار غير المنشط الذي يقوم بإدراج الفيروس ‎all)‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط
‏1 الآن فاعلية في النموذج الفأري داي بيبتيديل بيبتيداز 4 للفيروس الغدّي الخاص بمتلازمة تنفس
‏الشرق الأوسط وببدو واعدا لدراسات إضافية للقاح الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط.
‏ولدى ناقل فيروس السعار أمان هائل؛ وقد تم تطعيم أكثر من 20 مليون فرد ضد فيروس السعار.
‏ويتقدم لقاح غير نشط ‎Biles‏ للمرحلة 1 لمرض فيروس الإيبولاء 711.08811»وسوف تكون هناك 0 بيانات أمان إضافية متاحة في القريب العاجل.
‏وصف مختصر لقائمة التسلسل
‏فيما يلي ملخص للتسلسلات الموجودة في قائمة التسلسل:
‏المتوالية رقم: 1- جينوم الفيروسات التاجية المسببة لمتلازمة الضائقة التنفسية بالشرق الأوسط الموجود في المرجع ‎NCBI‏ رقم 019843-_870؛
المتوالية رقم: 2- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي رببوزي الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع مرجع ‎NCBI‏ رقم ‎{NC_019843.3‏ ‏المتوالية رقم: 3- تسلسل البروتين الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع رقم دخول بنك الجينات ‎¢AHX00731.1‏ ‏5 المتوالية رقم: 4- تسلسل البروتين الشوكي الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط مع رقم
دخول بنك الجينات ‎¢AHX00721.1‏ ‏المتوالية رقم: 5- تسلسل البروتين الشوكي (الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة) للفيروسات التاجية المسببة لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة للسلالة شنغهاي 076012 مع رقم دخول بنك الجينات ‎¢AAR86788.1‏
0 المتوالية رقم: 6- تسلسل البروتين الشوكي الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة ‎ADL‏ شنغهاي 07602 مع رقم دخول بنك الجينات 186775.1مم؛ المتوالية رقم: 7- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي رببوزي لإدخال 51 الخاص ب ‎BNSP333-S1‏ ‏مع رقم دخول 1600696644 (برجاء ملاحظة أن هذا التسلسل هو تسلسل النيوكليوتيدات 1462- لمتوالية رقم: 21)؛
5 المتوالية رقم: 8- تسلسل بروتين لإدخال 51 الخاص ب 81150333-51؛ المتوالية رقم: 9- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي ل 5 الخاص ب ‎BNSP333-S‏ مع رقم دخول بنك الجينات 1617696640 (برجاء ملاحظة أن هذا التسلسل هو تسلسل النيوكليوتيدات 1462- 3 لمتوالية رقم: 22)؛ المتوالية رقم: 10- تسلسل بروتين 5 الخاص ب ‎¢BNSP333-S‏
0 المتوالية رقم: 11- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي ل 5429 الخاص ب ‎BNSP333-‏ ‏9 مع رقم دخول بنك الجينات 120696643 (برجاء ملاحظة أن هذا التسلسل هو تسلسل النيوكليوتيدات 5436-1562 للمتوالية رقم: 23)؛ المتوالية رقم: 12- تسلسل بروتين ‎SA29‏ الخاص ب 5429 ‎¢BNSP333-‏ ‏المتوالية رقم: 13- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي رببوزي ل 5419 الخاص ب ‎BNSP333-‏
5 58219 مع رقم دخول بنك الجينات 127696642 (برجاء ملاحظة أن هذا التسلسل هو تسلسل النيوكليوتيدات 5466-1462 للمتوالية رقم: 24)؛
المتوالية رقم: 14- - تسلسل بروتين 5419 الخاص ب 54819 -51150333؛ المتوالية رقم: 15- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي البروتين السكري جي لفيروس السعار مع رقم دخول بنك الجينات ¢£02022.1 المتوالية رقم: 16- تسلسل بروتين البروتين السكري جي لفيروس السعار مع رقم دخول بنك الجينات 7213.1جهذدهم؛ المتوالية رقم: 17- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي رببوزي للبادئ الأمامي ‎“TREC‏ ‏المتوالية رقم: 18- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي ‎(535m)‏ للبادئ العكسي ‎‘TREC‏ ‏المتوالية رقم: 19- تسلسل الحمض النووي دي أوكسي ريبوزي لمسبار ‎(TREC‏ والذي هو كالتالي (ملون ‎ABY-ATCAGGGATATGGGTCTAAGTCTACAGTGG-QSY (All‏ (مطفئ)؛ 0 المتوالية رقم: 20- تسلسل جينوم ‎¢SAD B19‏ المتوالية رقم: 21- تسلسل ‎agua‏ 51150333-51؛ المتوالية رقم: 22- تسلسل جينوم 51150333-5؛ المتوالية رقم: 23- تسلسل جينوم ‎¢BNSP333-SA29‏ و المتوالية رقم: 24- تسلسل جينوم ‎BNSP333-SA19‏ ‏15 ‏نماذج خاصة طبقا لجهة؛ يوفر الاختراع الحالي ناقل فيروس سعار مأشوب مشتملا على تسلسل نيوكليوتيدي مشفر لبروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو قطعة منه من فيروس تاجي واحد على الأقل. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون ‎on‏ بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل ‎Ble‏ عن 0 قطع للبروتين السكري الخاص بالفيروس التاجي. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون ‎on‏ بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل ‎Ble‏ عن قطع النهاية سي للبروتين الشوكي. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتضمن القطع مسح حوالي 15 إلى 25 حمض أميني من النهاية ‎Ea‏ ‏25 في أي جهة أو نموذج موضح هناء؛ يتضمن القطع مسح حوالي 19 حمض أميني من النهاية سي.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتضمن ‎cha‏ البروتين السكري المستمنع المجال 51 الخاص بالبروتين الشوكي. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون الفيروس التاجي هو الفيروس التاجي التنفسي الشرق أوسطي أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة الضائقة التنفسية الحادة الشديدة. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون ‎sha‏ البروتين السكري المستمنع عبارة عن بروتين كيميري متضمنا جزء بروتين سكري مستمنع ومرساة غشاء من فيروس غير الفيروس التاجي. في أي جهة أو نموذج موضح هناء تأتي مرساة الغشاء من البروتين السكري فيروس السعار. في أي جهة أو نموذج موضح هناء تتضمن مرساة الغشاء على الأقل جزءِ من مجال خارجي واحد على الأقل؛ المجال عبر الغشائي؛ المجال السيتوبلازمي للبروتين السكري فيروس السعار. 0 في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتم اختيار تسلسل حمض أميني ‎eal‏ بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل من مجموعة تتكون من المتوالية رقم: 8؛ 12 أو 14. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتم إضعاف جينوم فيروس السعار. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق ناقل فيروس السعار من لقاح فيروس السعار ‎SAD B19‏ الحي الموهن. 5 طبقا ‎deal‏ أخرى؛ يوفر الاختراع الحالي خلية مضيف مشتملة على ناقل فيروس السعار المأشوب الخاص بالاختراع الحالي. طبقا ‎deal‏ أخرى؛ يوفر الاختراع الحالي فيربون معزول محضر من خلية مضيف مصابة بناقل فيروس السعار المأشوب الخاص بالاختراع الحالي. طبقا لجهة إضافية أخرى؛ يوفر الاختراع الحالي لقاح متعدد ‎SSA‏ فعال للحماية ضد كلا من فيروس 0 السعار وأحد الفيروسات التاجية على الأقل؛ مشتملا على ناقل فيروس سعار مأشوب يقوم بالتعبير عن ‎asf‏ البروتينات السكرية على الأقل أو ‎die gia‏ من أحد الفيروسات التاجية على الأقل. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون الفيروس التاجي واحدا من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط؛ الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة على الأقل؛ أو كليهما. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون البروتين السكري المناعي أو قطعة منه عبارة عن بروتين 5 سكري شوكي لفيروس تاجي.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون لدى البروتين السكري المناعي أو قطعة منه تسلسل حمض
أميني يتم اختياره من مجموعة تتكون من المتوالية رقم: 8 12 أو 14.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتم إضعاف ‎agin‏ فيروس السعار.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق جينوم فيروس السعار من لقاح فيروس السعار 1319 ‎SAD‏
الحي الموهن.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يقوم جينوم فيروس السعار أيضا بالتعبير عن بروتين واحد أو
أكثر من بروتينات الفيروس التاجي الإضافية أو ‎gin‏ مستمنع منها.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتم اختيار بروتين الفيروس التاجي الإضافي من مجموعة تتكون
من بولي بروتين متنسخ؛ بروتين إي» بروتين إن» بروتين ‎cal‏ أو بروتينات غير تركيبية من الفيروس ‎all 0‏ لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة.
طبقا لجهة إضافية أخرى» يوفر الاختراع الحالي خلية مضيف مشتملة على لقاح متعدد التكافؤ خاص
بالاختراع الحالي.
طبقا لجهة؛ يوفر الاختراع الحالي فيربون معزول محضر من ‎WA‏ مضيف مصابة بلقاح متعدد
‎sil‏ خاص بالاختراع الحالي. 5 طبقا ‎deal‏ إضافية ‎«gal‏ يوفر الاختراع الحالي تركيبة لقاح مشتملة على واحد أو أكثر من اللقاحات
‏متعددة التكافؤ الخاصة بالاختراع الحالي وحامل مقبول دوائيا.
‏في أي جهة أو نموذج موضح هناء تشتمل تركيبة اللقاح أيضا على عامل علاجي إضافي واحد
‏على الأقل.
‏في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون العامل العلاجي على الأقل واحدا من عقاقير مضادة 0 لللفيروسات؛ جسم ‎alias‏ مضاد للفيروسات؛ عامل حث مناعي؛ محفز؛ أو خليط منهم.
‏في أي جهة أو نموذج موضح ‎(la‏ يكون العامل العلاجي (:)عقار مضاد للفيروسات؛ 5 ‎(i)‏ جسم
‏مضاد للفيروسات؛ عامل حث مناعي؛ و/أو محفز.
‏طبقا لجهة؛ يوفر الاختراع الحالي لقاح فيروسي مشتمل على ناقل فيروس سعار موهن مأشوب يقوم
‏بالتعبير عن البروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو ‎cis gin‏ حيث 5 يحمي لفاح الفيروس من الإصابة بكلا من فيروس السعار والإصابة بالفيروس التاجي لمتلازمة تنفس
‏الشرق الأوسط.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتمل البروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو قطعة منه على تسلسل حمض أميني يتم اختياره من مجموعة تتكون من المتوالية رقم: 8 أو 14 في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق ناقل فيروس السعار من لقاح فيروس السعار ‎SAD B19‏ الحي الموهن. طبقا لجهة إضافية؛ يوفر الاختراع الحالي طريقة حث الاستجابة المناعية للوقاية من الفيروس التاجي و/أو فيروس السعار في هدف؛ مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة دوائيا من اللقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل فيروس سعار مأشوب يقوم بالتعبير عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎gia‏ منه من أحد الفيروسات التاجية على الأقل. 0 في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎gia‏ منه عبارة عن الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون أحد الفيروسات التاجية على الأقل هو الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. 5 في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتمل ‎gia‏ مستمنع واحد على الأقل على تسلسل حمض أميني يتم اختياره من مجموعة تتكون من المتوالية رقم: 8( 12 أو 14. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتم إضعاف ناقل فيروس السعار. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يتم إيقاف نشاط ناقل فيروس السعار. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق ناقل فيروس السعار من لقاح فيروس السعار ‎SAD B19‏ 0 الحي الموهن. طبقا لجهة ‎(gal‏ يوفر الاختراع الحالي طريقة حث الأجسام المضادة المعادلة ضد الفيروسات التاجية و/أو فيروس السعار في هدف مصاب أو تعرض للإصابة بأحد أو كلا الفيروسات؛ مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة دوائيا من لفاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل فيروس السعار المأشوب الذي يقوم بالتعبير عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزءِ ‎die‏ عند فيروس 5 تاجي واحد على الأقل.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزءِ منه من
الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة
الوخيمة.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء حيث يكون لدى ‎sha‏ واحد على الأقل تسلسل حمض أميني يتم اختياره من مجموعة تتكون من المتوالية رقم: 8؛ 12 أو 14.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء حيث يتم إضعاف ناقل فيروس السعار.
في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق ناقل فيروس السعار من لقاح فيروس السعار ‎SAD B19‏
الحي الموهن.
في أي جهة أو نموذج موضح ‎(Lib‏ حيث يتم إيقاف نشاط ناقل فيروس السعار.
0 طلقا ‎deal‏ أخرى؛ يوفر الاختراع الحالي طريقة علاج هدف مصاب بالفيروس التاجي و/أو فيروس السعارء مشتملة على إعطاء الهدف كمية فعالة دوائيا من لقاح متعدد التكافؤ مشتمل على ناقل فيروس السعار المأشوب الذي يقوم بالتعبير عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل من الفيروسات التاجية أو جزءِ منه؛ حيث يقوم اللقاح المذكور بحث استجابة مناعية فعالة ضد أحد أو كلا الفيروسات المذكورة.
5 في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو جزءِ منه من البروتين السكري الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط أو البروتين السكري الفيروس التاجي المسبب لمتلازمة التنفس الحادة الوخيمة. في أي جهة أو نموذج موضح ‎(Lib‏ حيث يكون لدى بروتين سكري لفيروس تاجي واحد على الأقل أو ‎gia‏ منه تسلسل حمض أميني يتم اختياره من مجموعة تتكون من المتوالية رقم: 8 12 أو 14.
0 في أي جهة أو نموذج موضح هناء حيث يتم إضعاف ناقل فيروس السعار. في أي جهة أو نموذج موضح هناء حيث يتم إيقاف نشاط ناقل فيروس السعار في أي جهة أو نموذج موضح هناء يشتق ناقل فيروس السعار من لقاح فيروس السعار ‎SAD B19‏ الحي الموهن. طبقا ‎deal‏ أخرى؛ يوفر الاختراع الحالي ناقل حي؛ مؤهل للاستنساخ؛ معتمد على فيروس السعار
5 يقوم بالتعبير عن بروتين سكري واحد على الأقل أو جزءِ ‎die‏ مشتق من فيروس تاجي واحد على الأقل.
— 2 8 — في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون لدى الناقل تسلسل نيوكليوتيد المتوالية رقم :21 23 أو 24 طبقا لجهة أخرى؛ يوفر الاختراع الحالي ناقل حي؛ ناقص الاستنساخ؛ معتمد على فيروس السعار يقوم بالتعبير عن بروتين سكري مستمنع واحد على الأقل أو ‎die ga‏ مشتق من بروتين سكري لفيروس تاجي واحد على الأقل. في أي جهة أو نموذج موضح هناء يكون لدى الناقل تسلسل نيوكليوتيد المتوالية رقم :21 23 أو 24 بينما قد تم وصف الاختراع بالتفصيل ؛ بما في ذلك النماذج المفضلة للاختراع» بهدف التوضيح ‎¢pgilly‏ ‏فسوف يقدر خبير في المجال أنه من الممكن إجراء تغييرات مختلفة ‎MEE‏ وتفصيلا بدون الخروج 0 عن الهدف الحقيقي للاختراع. وبالمثل» يجب التنويه أن الاختراع المحدد بواسطة الفقرات السابقة ليس الهدف منه الاقتصار على تفاصيل معينة مذكورة فى الوصف السابق حيث من الممكن أن يكون هناك تباينات واضحة بدون الخروج عن هدف ومجال ا لاختراع الحالى . المراجع 5 جميع الوثائق المقتبسة في قائمة التسلسل هذه؛ وجميع الوثائق المقتبسة أو المشار إليها كمرجع في الوثائق المقتبسة هذه؛ معا مع أي من تعليمات المصنع؛ الوصف؛ خصائص المنتج؛ وبيانات المنتج لأي من المنتجات المذكورة هنا أو أي من الوثائق المدرجة هنا كمرجع؛ يتم إدراجها هنا كمرجع؛ ومن الممكن استخدامها في مجال الاختراع. ‎I.
Milne-Price S, Miazgowicz KL, Munster VJ. 2014. The emergence of the 0‏ ‎Middle East respiratory syndrome coronavirus.
Pathog Dis 71:121-136.‏ ‎Zaki AM, van Boheemen S, Bestebroer TM, Osterhaus AD, Fouchier RA.‏ .2 ‎Isolation of a novel coronavirus from a man with pneumonia in Saudi‏ .2012 ‎Arabia.
N Engl J Med 367:1814-1820.‏ ‎Anonymous. 2013. WHO Statement on the third meeting of the IHR Emergency | 25‏ .3 ‎committee concerning Middle East respiratory syndrome coronavirus (MERS-‏ ‎CoV). Wkly Epidemiol Rec 88:435-436.‏ ‎Memish ZA, Zumla Al, Assiri A. 2013. Middle East respiratory syndrome‏ .4 ‎coronavirus infections in health care workers.
N Engl J Med 369:884-886.‏ ‎Drosten C, Kellam P, Memish ZA. 2014. Evidence for camel-to-human 30‏ .5 ‎transmission of MERS coronavirus.
N Engl J Med 371:1359-1360.‏
— 8 3 — 6. Madani TA, Azhar EI, Hashem AM. 2014. Evidence for camel-to-human transmission of MERS coronavirus. N Engl J Med 371:1360. 7. Azhar El, El-Kafrawy SA, Farraj SA, Hassan AM, Al-Saeed MS, Hashem
AM, Madani TA. 2014. Evidence for camel-to-human transmission of MERS coronavirus. N Engl J Med 370:2499-2505. 5 8. Khan A, Farooqui A, Guan Y, Kelvin DJ. 2015. Lessons to learn from MERS-
CoV outbreak in South Korea. J Infect Dev Cries 9:543-546. 9. Park HY, Lee EJ, Ryu YW, Kim Y, Kim H, Lee H, Yi SJ. 2015.
Epidemiological investigation of MERS-CoV spread in a single hospital in South
Korea, May to June 2015. Euro Surveill 20:1-6. 10 10. Petersen E, Pollack MM, Madoff LC. 2014. Health-care associate transmission of Middle East Respiratory Syndrome Corona virus, MERS-CoV, in the Kingdom of Saudi Arabia. Int J Infect Dis 29:299-300. 11. Cauchemez S, Van Kerkhove MD, Riley S, Donnelly CA, Fraser C, Ferguson
NM. 2013. Transmission scenarios for Middle East Respiratory Syndrome 15
Coronavirus (MERS-CoV) and how to tell them apart. Euro Surveill 18. 12. Chan PK, Ma S, Ngai SM. 2011. Identification of T-cell epitopes of SARS- coronavirus for development of peptide-based vaccines and cellular immunity assessment methods. Hong Kong Med J 17 Suppl 6:26-30. 13. Roper RL, Rehm KE. 2009. SARS vaccines: where are we? Expert Rev 0
Vaccines 8:887-898. 14. Zhu X, Liu Q, Du L, Lu L, Jiang S. 2013. Receptor-binding domain as a target for developing SARS vaccines. J Thorac Dis 5 Suppl 2:5142-148. 15. Du L, Jiang S. 2015. Middle East respiratory syndrome: current status and future prospects for vaccine development. Expert Opin Biol Ther 15:1647-1651. 25 16. Volz A, Kupke A, Song F, Jany S, Fux R, Shams-Eldin H, Schmidt J, Becker
C, Eickmann M, Becker S, Sutter G. 2015. Protective Efficacy of Recombinant
Modified Vaccinia Virus Ankara Delivering Middle East Respiratory Syndrome
Coronavirus Spike Glycoprotein. J Virol 89:8651-8656. 17. Ma C, Wang L, Tao X, Zhang N, Yang Y, Tseng CT, Li F, Zhou Y, Jiang 5, 30
Du L. 2014. Searching for an ideal vaccine candidate among different MERS coronavirus receptor-binding fragments--the importance of immunofocusing in subunit vaccine design. Vaccine 32:6170-6176. 18. Ma ‏إن‎ Li Y, Wang L, Zhao G, Tao X, Tseng CT, Zhou Y, Du ‏ما‎ Jiang S. 2014.
Intranasal vaccination with recombinant receptor-binding domain of MERS-CoV ~~ 35 spike protein induces much stronger local mucosal immune responses than subcutaneous immunization: Implication for designing novel mucosal MERS vaccines. Vaccine 32:2100-2108. 19. Muthumani K, Falzarano D, Reuschel EL, Tingey C, Flingai S, Villarreal
DO, Wise M, Patel A, Izmirly A, Aljuaid A, Seliga AM, Soule G, Morrow M, 40
Kraynyak KA, Khan AS, Scott DP, Feldmann 1, LaCasse R, Meade-White
K, Okumura A, Ugen KE, Sardesai NY, Kim JJ, Kobinger G, Feldmann H,
Weiner DB. 2015. A synthetic consensus anti-spike protein DNA vaccine induces
— 8 4 — protective immunity against Middle East respiratory syndrome coronavirus in nonhuman primates. Sci Transl Med 7:301ral32. 20. Coleman CM, Liu YV, Mu H, Taylor JK, Massare M, Flyer DC, Glenn GM,
Smith GE, Frieman MB. 2014. Purified coronavirus spike protein nanoparticles induce coronavirus neutralizing antibodies in mice. Vaccine 32:3169-3174. 5 21. Mou H, Raj VS, van Kuppeveld FJ, Rottier PJ, Haagmans BL, Bosch BJ. 2013. The receptor binding domain of the new Middle East respiratory syndrome coronavirus maps to a 231-residue region in the spike protein that efficiently elicits neutralizing antibodies. J Virol 87:9379-9383. 22. Dull, Zhao G, Kou Z, Ma C, Sun S, Poon VK, Lu ‏ما‎ Wang L, Debnath AK, 10
Zheng BJ, Zhou Y, Jiang S. 2013. Identification of a receptor-binding domain in the S protein of the novel human coronavirus Middle East respiratory syndrome coronavirus as an essential target for vaccine development. J Virol 87:9939-9942. 23. Zhang N, Channappanavar R, Ma C, Wang ‏ما‎ Tang J, Garron T, Tao X,
Tasneem S, Lu ‏ما‎ Tseng CT, Zhou Y, Perlman S, Jiang S, Du L. 2015. 5
Identification of an ideal adjuvant for receptor-binding domain-based subunit vaccines against Middle East respiratory syndrome coronavirus. Cell Mol
Immunol doi:10.1038/cmi.2015.03. 24. Yang Y, Deng Y, Wen B, Wang H, Meng X, Lan J, Gao GF, Tan W. 2014.
The amino acids 736-761 of the MERS-CoV spike protein induce neutralizing 0 antibodies: implications for the development of vaccines and antiviral agents.
Viral Immunol 27:543-550. 25. Kim E, Okada K, Kenniston T, Raj VS, AlHajri MM, Farag EA, AlHajri F,
Osterhaus AD, Haagmans BL, Gambotto A. 2014. Immunogenicity of an adenoviral-based Middle East Respiratory Syndrome coronavirus vaccine in 5
BALB/c mice. Vaccine 32:5975-5982. 26. Guo X, Deng Y, Chen H, Lan J, Wang W, Zou X, Hung T, Lu Z, Tan W. 2015. Systemic and mucosal immunity in mice elicited by a single immunization with human adenovirus type 5 or 41 vector-based vaccines carrying the spike protein of Middle East respiratory syndrome coronavirus. Immunology 145:476- 0 484. 27. Pfaller CK, Cattaneo R, Schnell MJ. 2015. Reverse genetics of
Mononegavirales: How they work, new vaccines, and new cancer therapeutics.
Virology (60 year edition), accepted. 28. Willet M, Kurup D, Papaneri A, Wirblich C, Hooper JW, Kwilas SA, 35
Keshwara R, Hudacek A, Beilfuss S, Rudolph G, Pommerening E, Vos A,
Neubert A, Jahrling P, Blaney JE, Johnson RF, Schnell MJ. 2015. Preclinical
Development of Inactivated Rabies Virus-Based Polyvalent Vaccine Against
Rabies and Filoviruses. J Infect Dis doi:10.1093/infdis/jiv251. 29. Huttner A, Dayer JA, Yerly S, Combescure C, Auderset F, Desmeules J, 40
Eickmann M, Finckh A, Goncalves AR, Hooper JW, Kaya G, Krahling V,
Kwilas S, Lemaitre B, Matthey A, Silvera P, Becker S, Fast PE, Moorthy V,
Kieny MP, Kaiser L, Siegrist CA, Consortium VS-E. 2015. The effect of dose on the safety and immunogenicity of the VSV Ebola candidate vaccine: a
— 8 5 — randomised double-blind, placebo-controlled phase 1/2 trial. Lancet Infect Dis 15:1156-1166. 30. Blaney JE, Marzi A, Willet M, Papaneri AB, Wirblich C, Feldmann F,
Holbrook M, Jahrling P, Feldmann H, Schnell MJ. 2013. Antibody quality and protection from lethal Ebola virus challenge in nonhuman primates immunized 5 with rabies virus based bivalent vaccine. PLoS Pathog 9:e1003389. 31. Blaney JE, Wirblich C, Papaneri AB, Johnson RF, Myers CJ, Juelich TL,
Holbrook MR, Freiberg AN, Bernbaum JG, Jahrling PB, Paragas J, Schnell
MJ. 2011. Inactivated or live-attenuated bivalent vaccines that confer protection against rabies and Ebola viruses. J Virol 85:10605-10616. 10 32. Papaneri AB, Wirblich C, Cann JA, Cooper K, Jahrling PB, Schnell MJ],
Blaney JE. 2012. A replication-deficient rabies virus vaccine expressing Ebola virus glycoprotein is highly attenuated for neurovirulence. Virology 434:18-26. 33. Papaneri AB, Wirblich C, Cooper K, Jahrling PB, Schnell MJ, Blaney JE. 2012. Further characterization of the immune response in mice to inactivated and 5 live rabies vaccines expressing Ebola virus glycoprotein. Vaccine 30:6136-6141. 34. Cliquet F, Aubert M. 2004. Elimination of terrestrial rabies in Western European countries. Dev Biol (Basel) 119:185-204. 35. WHO. 2015. Rabies, Fact Sheet #99. 36. MecGettigan JP, Pomerantz RJ, Siler CA, McKenna PM, Foley HD, 20
Dietzschold B, Schnell MJ. 2003. Second-generation rabies virus-based vaccine vectors expressing human immunodeficiency virus type 1 gag have greatly reduced pathogenicity but are highly immunogenic. J Virol 77:237-244. 37. Papaneri AB, Wirblich ‏بن‎ Marissen WE, Schnell MJ. 2013. Alanine scanning of the rabies virus glycoprotein antigenic site III using recombinant rabies virus: 5 implication for post-exposure treatment. Vaccine 31:5897-5902. 38. Kurup D, Wirblich C, Feldmann H, Marzi A, Schnell MJ. 2014. Rhabdoviral-
Based Vaccine Platforms against Henipaviruses. J Virol doi:10.1128/JV1.02308- 14. 39. Zhao J, Li K, Wohlford-Lenane C, Agnihothram SS, Fett C, Gale MJ, Jr., 30
Baric RS, Enjuanes L, Gallagher T, McCray PB, Jr., Perlman S. 2014. Rapid generation of a mouse model for Middle East respiratory syndrome. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 111:4970- 4975. 40. Pascal KE, Coleman CM, Mujica AO, Kamat V, Badithe A, Fairhurst J, 35
Hunt C, Strein J, Berrebi A, Sisk JM, Matthews KL, Babb R, Chen G, Lai
KM, Huang TT, Olson W, Yancopoulos GD, Stahl N, Frieman MB,
Kyratsous CA. 2015. Pre- and postexposure efficacy of fully human antibodies against Spike protein in a novel humanized mouse model of MERS-CoV infection. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States 0 of America 112:8738-8743. 41. Coleman CM, Frieman MB. 2015. Growth and Quantification of MERS-CoV
Infection. Current protocols in microbiology 37:15E 12 11-19.
— 8 6 — 42. Conzelmann KK, Cox JH, Schneider LG, Thiel HJ. 1990. Molecular cloning and complete nucleotide sequence of the attenuated rabies virus SAD B19.
Virology 175:485-499. 43. Hudacek AW, Al-Saleem FH, Willet M, Eisemann T, Mattis JA, Simpson LL,
Schnell MJ. 2014. Recombinant rabies virus particles presenting botulinum 5 neurotoxin antigens elicit a protective humoral response in vivo. Molecular
Therapy—Methods & Clinical Development 1. 44, McGettigan JP, Naper K, Orenstein J, Koser M, McKenna PM, Schnell MJ. 2003. Functional human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) Gag-Pol or HIV- 1 Gag-Pol and env expressed from a single rhabdovirus-based vaccine vector 0 genome. J Virol 77:10889-10899. 45. Lontok E, Corse E, Machamer CE. 2004. Intracellular targeting signals contribute to localization of coronavirus spike proteins near the virus assembly site. J Virol 78:5913-5922. 46. Schwegmann-Wessels C, Glende J, Ren X, Qu X, Deng H, Enjuanes L, 15
Herrler G. 2009. Comparison of vesicular stomatitis virus pseudotyped with the
S proteins from a porcine and a human coronavirus. J Gen Virol 90:1724-1729. 47. Fukushi S, Mizutani T, Saijo M, Matsuyama S, Miyajima N, Taguchi F,
Itamura S, Kurane I, Morikawa S. 2005. Vesicular stomatitis virus pseudotyped with severe acute respiratory syndrome coronavirus spike protein. J Gen Virol 0 86:2269-2274. 48. Smith ME, Koser M, Xiao S, Siler C, McGettigan JP, Calkins C, Pomerantz
RJ, Dietzschold B, Schnell MJ. 2006. Rabies virus glycoprotein as a carrier for anthrax protective antigen. Virology 353:344-356. 49, McKenna PM, Pomerantz RJ, Dietzschold B, McGettigan JP, Schnell MJ. 5 2003. Covalently linked human immunodeficiency virus type 1 gp120/gp41 is stably anchored in rhabdovirus particles and exposes critical neutralizing epitopes.
J Virol 77:12782-12794. 50. Siler CA, McGettigan JP, Dietzschold B, Herrine SK, Dubuisson J,
Pomerantz RJ, Schnell MJ. 2002. Live and killed rhabdovirus-based vectors as ~~ 30 potential hepatitis C vaccines. Virology 292:24-34. 51. Schnell MJ, Foley HD, Siler CA, McGettigan JP, Dietzschold B, Pomerantz
RJ. 2000. Recombinant rabies virus as potential live-viral vaccines for HIV-1.
Proc Natl Acad Sci U S A 97:3544-3549. 52. Winter C, Schwegmann-Wessels ‏ىن‎ Neumann U, Herrler 6. 2008. The spike 5 protein of infectious bronchitis virus is retained intracellularly by a tyrosine motif.
J Virol 82:2765-2771. 53. Schwegmann-Wessels C, Ren X, Herrler G. 2006. Intracellular transport of the
S proteins of coronaviruses. Adv Exp Med Biol 581:271-275. 54. Schwegmann-Wessels C, Al-Falah M, Escors D, Wang Z, Zimmer G, Deng 40
H, Enjuanes L, Naim HY, Herrler G. 2004. A novel sorting signal for intracellular localization is present in the S protein of a porcine coronavirus but absent from severe acute respiratory syndrome-associated coronavirus. J Biol
Chem 279:43661-43666.
— 8 7 — 55. Coleman CM, Matthews KL, Goicochea L, Frieman MB. 2013. Wild type and innate immune deficient mice are not susceptible to the Middle East Respiratory
Syndrome Coronavirus. J Gen Virol doi:10.1099/vir.0.060640-0. 56. May 18 2013. 16. Pneumonia from Human Coronavirus in a Macaque Model. N
Engl J Med, 368.1560-1562. 5 ‏مضه املاط‎ neinorg/doy/abs/ LOT 036/NEIMc 1215691. 57. Wang L, Shi W, Joyce MG, Modjarrad K, Zhang Y, Leung K, Lees CR, Zhou
T, Yassine HM, Kanekiyo M, Yang ZY, Chen X, Becker MM, Freeman M,
Vogel L, Johnson JC, Olinger G, Todd JP, Bagci U, Solomon J, Mollura DJ,
Hensley L, Jahrling P, Denison MR, Rao SS, Subbarao K, Kwong PD, 10
Mascola JR, Kong WP, Graham BS. 2015. Evaluation of candidate vaccine approaches for MERS-CoV. Nat Commun 6:7712. ‏قائمة التسلسلات:‎ <110>The United States of America, as represented by the 15
Secretary, Department of Health and Human Services
Johnson, Reed <120>MULTIVALENT VACCINES FOR RABIES VIRUS AND
CORONOVIRUSES 20 1420378.443 <130>WO2 <140>TBD 31-03-2017 <141> 25 318,087/62 <150>
— 8 8 — 04-04-2016 <151> 24 <160> <170>PatentIn version 5 5 1 <210> 30119 <211> <212>DNA <213>Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus 10 1 <400> gatttaagtg aatagcttgg ctatctcact tcccctegtt ctettgcaga actttgatit 60 taacgaactt aaataaaagc cctgttgttt agcgtatcgt tgcacttgtc tggtgggatt 120 15 gtggcattaa tttgcctgct catctaggca gtggacatat gctcaacact gggtataatt 180 ctaattgaat actatttttc agttagagcg tcgtgtctct tgtacgtctc ggtcacaata 240
— 8 9 — cacggtttcg tccggtgcgt ggcaattcgg ggcacatcat gtctttcgtg getggtgtga 300 ccgcgcaagg tgcgcgeggt acgtatcgag cagcgctcaa ctctgaaaaa catcaagacc 360 5 atgtgtctct aactgtgcca ctctgtggtt caggaaacct ggttgaaaaa ctttcaccat 420 ggttcatgga tggcgaaaat gcctatgaag tggtgaaggce catgttactt aaaaaggagc 480 10 cacttctcta tgtgcccatc cggcetggctg gacacactag acacctccca ggtcctegtg 540 tgtacctggt tgagaggctc attgcttgtg aaaatccatt catggttaac caattggctt 600 15 atagctctag tgcaaatggc agcctggttg gcacaacttt gcagggcaag cctattggta 660 tgttcttcce ttatgacatc gaacttgtca caggaaagca aaatattctc ctgcgcaagt 720 20
— 9 0 — atggccgtgg tggttatcac tacaccccat tccactatga gcgagacaac acctcttgec 780 ctgagtggat ggacgatttt gaggcggatc ctaaaggcaa atatgcccag aatctgctta 5
840 agaagttgat tggcggtgat gtcactccag ttgaccaata catgtgtggc gttgatggaa
900 aacccattag tgcctacgca tttttaatgg ccaaggatgg aataaccaaa ctggctgatg
960 ttgaagcgga cgtcgcagca cgtgctgatg acgaaggctt catcacatta aagaacaatc 1020 5 tatatagatt ggtttggcat gttgagcgta aagacgttcc atatcctaag caatctattt 1080 ttactattaa tagtgtggtc caaaaggatg gtgttgaaaa cactcctcct cactatttta 1140
— 9 1 — ctcttggatg caaaatttta acgctcaccc cacgcaacaa gtggagtggc gtttctgact 1200 tgtccctcaa acaaaaactc ctttacacct tctatggtaa ggagtcactt gagaacccaa 1260 5 cctacattta ccactccgca ttcattgagt gtggaagttg tggtaatgat tcctggctta 1320 cagggaatgc tatccaaggg tttgcctgtg gatgtggggce atcatataca gctaatgatg 1380 10 tcgaagtcca atcatctggc atgattaagc caaatgctct tetttgtget acttgcccet 140 ttgctaaggg tgatagctgt tcttctaatt gcaaacattc agttgctcag ttggttagtt 10 acctttctga acgctgtaat gttattgctg attctaagtc cttcacactt atctttggtg 1560 gcgtagctta cgcctacttt ggatgtgagg aaggtactat gtactttgtg cctagagcta 1620 agtctgttgt ctcaaggatt ggagactcca tctttacagg ctgtactggc tcttggaaca 1680 20
— 9 2 — aggtcactca aattgctaac atgttcttgg aacagactca gcattccctt aactttgtgg 1740 gagagttcgt tgtcaacgat gttgtcctcg caattctctc tggaaccaca actaatgttg 1800 acaaaatacg ccagcttctc aaaggtgtca cccttgacaa gttgcgtgat tatttagctg 1860 actatgacgt agcagtcact gccggcccat tcatggataa tgctattaat gttggtggta 1920 caggattaca gtatgccgcc attactgcac cttatgtagt tctcactgge ttaggtgagt 1980 0 cctttaagaa agttgcaacc ataccgtata aggtttgcaa ctctgttaag gatactctgg 2040 cttattatgc tcacagcgtg ttgtacagag tttttcctta tgacatggat tctggtgtgt 1100 catcctttag tgaactactt tttgattgcg ttgatctttc agtagcttict acctattttt 2160 tagtccgcat cttgcaagat aagactggcg actttatgtc tacaattatt acttcctgcc 0
— 9 3 — aaactgctgt tagtaagctt ctagatacat gttttgaagc tacagaagca acatttaact 80 tcttgttaga tttggcagga ttgttcagaa tctttctccg caatgcectat gtgtacactt 230 cacaagggtt tgtggtggtc aatggcaaag ttictacact tgtcaaacaa gtgttagact 2400 5 tgcttaataa gggtatgcaa cttitgcata caaaggtctc ctgggctggt tctaaaatca 2460 ttgctgttat ctacagcggc agggagtctc taatattccc atcgggaacc tattactgty 0 tcaccactaa ggctaagtcc gttcaacaag atcttgacgt tattttgcct ggtgagtttt 2580 ccaagaagca gttaggactg ctccaaccta ctgacaattc tacaactgtt agtgttactg 2640 tatccagtaa catggttgaa actgttgtgg gtcaacttga gcaaactaat atgcatagtc 2700 ctgatgttat agtaggtgac tatgtcatta ttagtgaaaa attgtttgtg cgtagtaagg 2760
— 9 4 — aagaagacgg atttgccttc taccctgctt gcactaatgg tcatgctgta ccgactctet | 0 ttagacttaa gggaggtgca cctgtaaaaa aagtagcctt tggcggtgat caagtacatg 2880 aggttgctgc tgtaagaagt gttactgtcg agtacaacat tcatgctgta ttagacacac - 2940 tacttgcttc ttctagtctt agaacctttg ttgtagataa gtctttgtca attgaggagt 00 ttgctgacgt agtaaaggaa caagtctcag acttgcttgt taaattactg cgtggaatgc 3060 10 cgattccaga ttttgattta gacgatttta ttgacgcacc atgctattgc tttaacgctg 3120 agggtgatgc atcctggtct tctactatga tcttctctct tcaccecgte gagtgtgacg 3180 aggagtgttc tgaagtagag gcttcagatt tagaagaagg tgaatcagag tgcatttctg 3240 agacttcaac tgaacaagtt gacgtttctc atgagacttc tgacgacgag tgggctgctg 3300 20
— 9 5 — cagttgatga agcgttccct ctcgatgaag cagaagatgt tactgaatct gtgcaagaag 3360 aagcacaacc agtagaagta cctgttgaag atattgcgca ggttgtcata gctgacacct 5 3420 tacaggaaac tcctgttgtg cctgatactg ttgaagtccc accgcaagtg gtgaaacttc 3480 cgtctgcacc tcagactatc cagcccgagg taaaagaagt tgcacctgtc tatgaggctg 3540 ataccgaaca gacacagaat gttactgtta aacctaagag gttacgcaaa aagcgtaatg 3600 15 ttgacccttt gtccaatttt gaacataagg ttattacaga gtgcgttacc atagttttag 10 gtgacgcaat tcaagtagcc aagtgctatg gggagtctgt gttagttaat gctgctaaca 3720 0
— 9 6 — cacaftcttaa gcatggcggt ggtatcgctg gtgctattaa tgcggcttca aaaggggctg 3780 tccaaaaaga gtcagatgag tatattctgg ctaaagggcc gttacaagta ggagattcag 3840 5 ttctcttgca aggccattct ctagctaaga atatcctgca tgtcgtagge ccagatgecc 3900 gcgctaaaca ggatgtttct ctecttagta agtgctataa ggctatgaat gcatatcctc 3960 ttgtagtcac tcctcttgtt tcagcaggcea tatttggtgt aaaaccagcet gtgtcttity 0 attatcttat tagggaggct aagactagag ttttagtcgt cgttaattcc caagatgtct 4080 ataagagtct taccatagtt gacattccac agagtttgac ttiticatat gatgggttac 4140 15 gtggcgcaat acgtaaagct aaagattatg gttttactgt ttttgtgtgc acagacaact 4200 ctgctaacac taaagttctt aggaacaagg gtgttgatta tactaagaag tttcttacag 4260
— 9 7 — ttgacggtgt gcaatattat tgctacacgt ctaaggacac tttagatgat atcttacaac 40 aggctaataa gtctgttggt attatatcta tgcctttggg atatgtgtct catggtttag 4380 acttaatgca agcagggagt gtcgtgcgta gagttaacgt gccctacgtg tgtctcctag 4440 ctaataaaga gcaagaagct attttgatgt ctgaagacgt taagttaaac ccttcagaag 4500 10 attttataaa gcacgtccgc actaatggtg gttacaattc ttggcattta gtcgagggtg 4560 aactattggt gcaagactta cgcttaaata agctcctgca ttggtctgat caaaccatat 4620 gctacaagga tagtgtgttt tatgttgtaa agaatagtac agcttticca tttgaaacac - 4680 tttcagcatg tcgtgcgtat ttggattcac gcacgacaca gcagttaaca atcgaagtct 0 tagtgactgt cgatggtgta aattttagaa cagtcgttct aaataataag aacacttata 4800 gatcacagct tggatgcgtt tictttaatg gtgctgatat ttctgacacc attcctgatg 4860 agaaacagaa tggtcacagt ttatatctag cagacaattt gactgctgat gaaacaaagg 5
4920 cgcttaaaga gttatatggc cccgttgatc ctactttctt acacagattc tattcactta 0 aggctgcagt ccatgggtgg aagatggttg tgtgtgataa ggtacgttct ctcaaattga 10
5040 gtgataataa ttgttatctt aatgcagtta ttatgacact tgatttattg aaggacatta 500 aatttgttat acctgctcta cagcatgcat ttatgaaaca taagggcggt gattcaactg 5160 15 acttcatagc cctcattatg gcttatggca attgcacatt tggtgctcca gatgatgcct 5220 ctcggttact tcataccgtg cttgcaaagg ctgagttatg ctgttctgca cgcatggttt 580
— 9 9 — ggagagagtg gtgcaatgtc tgtggcataa aagatgttgt tctacaaggc ttaaaagctt 5340 gttgttacgt gggtgtgcaa actgttgaag atctgcgtge tcgcatgaca tatgtatgcc 5400 5 agtgtggtgg tgaacgtcat cggcaattag tcgaacacac caccccctgg ttgctgctct 5460 caggcacacc aaatgaaaaa ttggtgacaa cctccacggc gcctgatttt gtagcattta 0 5520 atgtctttca gggcattgaa acggctgttg gccattatgt tcatgctcge ctgaagggtg 0 gtcttatttt aaagtttgac tctggcaccg ttagcaagac ttcagactgg aagtgcaagg 5640 15 tgacagatgt acttttcccc ggccaaaaat acagtagcga ttgtaatgtc gtacggtatt 0 ctttggacgg taatttcaga acagaggttg atcccgacct atctgctttc tatgttaagg 0 atggtaaata ctttacaagt gaaccacccg taacatattc accagctaca attttagctg 5620 gtagtgtcta cactaatagc tgccttgtat cgtctgatgg acaacctgge ggtgatgeta 0 ttagtttgag ttttaataac cttttagggt ttgattctag taaaccagtc actaagaaat 5940 5 acacttactc cttcttgcct aaagaagacg gcgatgtgtt gttggctgag tttgacactt 6000 atgaccctat ttataagaat ggtgccatgt ataaaggcaa accaattctt tgggtcaata 6060 aagcatctta tgatactaat cttaataagt tcaatagagc tagtttgcgt caaatttttg 6120 acgtagcccc cattgaactc gaaaataaat tcacaccttt gagtgtggag tctacaccag 6180 ttgaacctcc aactgtagat gtggtagcac ttcaacagga aatgacaatt gtcaaatgta 6240 agggtttaaa taaacctttc gtgaaggaca atgtcagttt cgttgctgat gattcaggta 6300 ctccegttgt tgagtatctg tctaaagaag acctacatac attgtatgta gaccctaagt 6360 atcaagtcat tgtcttaaaa gacaatgtac tttcttctat gcttagattg cacaccgttg 6420 agtcaggtga tattaacgtt gttgcagctt ccggatcttt gacacgtaaa gtgaagttac 0 tatttagggc ttcattttat ttcaaagaat ttgctacccg cactttcact gctaccactyg 6540 ctgtaggtag ttgtataaag agtgtagtgc ggcatctagg tgttactaaa ggcatattga 6600 10 caggctgttt tagttttgcc aagatgttat ttatgcttcc actagcttac tttagtgatt 6660 caaaactcgg caccacagag gttaaagtga gtgctttgaa aacagccggc gttgtgacag 6720 15 gtaatgttgt aaaacagtgt tgcactgctg ctgttgattt aagtatggat aagttgcgcc 6780 gtgtggattg gaaatcaacc ctacggttgt tacttatgtt atgcacaact atggtattgt 0 tgtcttctgt gtatcacttg tatgtcttca atcaggtctt atcaagtgat gttatgttty 0 aagatgccca aggtttgaaa aagttctaca aagaagttag agcttaccta ggaatctctt 6960 5 ctgcttgtga cggtcttgct tcagcttata gggcgaattc ctttgatgta cctacattct 7020 gcgcaaaccg ttctgcaatg tgtaattggt gettgattag ccaagattce ataactcact 7080 acccagctct taagatggtt caaacacatc ttagccacta tgttcttaac atagattggt 7140 tgtggtttgc atttgagact ggtttggcat acatgctcta tacctcggec ttcaactggt 70 tgttgttggc aggtacattg cattatttct ttgcacagac ttccatattt gtagactgge 7260 5 ggtcatacaa ttatgctgtg tctagtgect tctggttatt cacccacatt ccaatggegg 0 gtttggtacg aatgtataat ttgttagcat gcctttggct tttacgcaag ttttatcage 80 atgtaatcaa tggttgcaaa gatacggcat gcttgctctg ctataagagg aaccgactta 7440 ctagagttga agcttctacc gttgtctgtg gtggaaaacg tacgttttat atcacagcaa 7500 5 atggcggtat ttcattctgt cgtaggcata attggaattg tgtggattgt gacactgcag 0 gtgtggggaa taccttcatc tgtgaagaag tcgcaaatga cctcactacc gccctacgca
7620 10 ggcctattaa cgctacggat agatcacatt attatgtgga ttccgttaca gttaaagaga 7680 ctgttgttca gtttaattat cgtagagacg gtcaaccatt ctacgagcgg tttccectct 770 gcgcttttac aaatctagat aagttgaagt tcaaagaggt ctgtaaaact actactggta 7800 tacctgaata caactttatc atctacgact catcagatcg tggccaggaa agtttagcta 7860 ggtctgcatg tgtttattat tctcaagtct tgtgtaaatc aattcttttg gttgactcaa 7920 gtttggttac ttctgttggt gattctagtg aaatcgccac taaaatgttt gattcctttg 7980 ttaatagttt cgtctcgctg tataatgtca cacgcgataa gttggaaaaa cttatctcta 8040 5 ctgctcgtga tggcgtaagg cgaggcgata acttccatag tgtcttaaca acattcattg 8100 acgcagcacg aggccccgca ggtgtggagt ctgatgttga gaccaatgaa attgttgact 10 8160 ctgtgcagta tgctcataaa catgacatac aaattactaa tgagagctac aataattatg 8220 taccctcata tgttaaacct gatagtgtgt ctaccagcga tttaggtagt ctcattgatt 280 gtaatgcggc ttcagttaac caaattgtct tgcgtaattc taatggtgct tgcatttgga 8340 acgctgctgc atatatgaaa ctctcggatg cacttaaacg acagattcgc attgcatgcc
8400 gtaagtgtaa tttagctttc cggttaacca cctcaaagct acgcgctaat gataatatct 8460 tatcagttag attcactgct aacaaaattg ttggtggtgc tcctacatgg tttaatgecgt 0 tgcgtgactt tacgttaaag ggttatgttc ttgctaccat tattgtgttt ctgtgtgctg 0 tactgatgta tttgtgttta cctacatttt ctatggcacc tgttgaattt tatgaagacc 8640 0 gcatcttgga ctttaaagtt cttgataatg gtatcattag ggatgtaaat cctgatgata 8700 agtgctttgc taataagcac cggtcctica cacaatggta tcatgagcat gttggtggtg 0 tctatgacaa ctctatcaca tgcccattga cagttgcagt aattgctgga gttgctggtg 8820 ctcgcattcc agacgtacct actacattgg cttgggtgaa caatcagata attttcttty 0 tttctcgagt ctttgctaat acaggcagtg tttgctacac tcctatagat gagataccct -. 8940 ataagagttt ctctgatagt ggttgcattc ttccatctga gtgcactatg tttagggatg 9000 cagagggccg tatgacacca tactgccatg atcctactgt tttgcctggg gettttgegt 9060 5 acagtcagat gaggcctcat gttcgttacg acttgtatga tggtaacatg tttattaaat 9120 ttcctgaagt agtatttgaa agtacactta ggattactag aactctgtca actcagtact 9180 gccggttcgg tagttgtgag tatgcacaag agggtgtitg tattaccaca aatggctcgt 9240 gggccatttt taatgaccac catcttaata gacctggtgt ctattgtggc tctgatttta 9300 ttgacattgt caggcggtta gcagtatcac tgttccagcc tattacttat ttccaattga 9360 5 ctacctcatt ggtcttgggt ataggtttgt gtgcgttcct gactttgctc ttctattata 9420 ttaataaagt aaaacgtgct tttgcagatt acacccagtg tgctgtaatt ‏و‎ 9480 ctgctgttct taatagcettg tgcatctgct ttgttacctc tataccattg tgtatagtac 0 cttacactgc attgtactat tatgctacat tctattttac taatgagcct gcatttatta 9600 tgcatgtttc ttggtacatt atgticgggc ctatcgttcc catatggatg acctgegtct 9660 atacagttgc aatgtgcttt agacacttct tctgggtttt agcttatttt agtaagaaac 9720 atgtagaagt ttttactgat ggtaagctta attgtagttt ccaggacgct gecctctaata 9780 0 tctttgttat taacaaggac acttatgcag ctcttagaaa cictttaact aatgatgcct 9840 attcacgatt tttgggottg tttaacaagt ataagtactt ctctggtgct atggaaacag 9900 ccgcttatcg tgaagctgca gcatgtcatc ttgctaaagce cttacaaaca tacagcgaga 9960 ctggtagtga tcttctttac caaccaccca actgtagcat aacctctggc gtgttgcaaa
10020 gcggtttggt gaaaatgtca catcccagtg gagatgttga ggcttgtatg gttcaggtta 10080 cctgcggtag catgactctt aatggtcttt ggcttgacaa cacagtctgg tgcccacgac
10140 acgtaatgtg cccggctgac cagttgtctg atcctaatta tgatgccttg ttgatttcta 10200 tgactaatca tagtttcagt gtgcaaaaac acattggcgc tccagcaaac ttgcgtgttg
10260 ttggtcatgc catgcaaggce actcttttga agttgactgt cgatgttgct aaccctagca 10320 ctccagccta cacttttaca acagtgaaac ctggcgcagc atttagtgtg ttagcatgct
10380 ataatggtcg tccgactggt acattcactg ttgtaatgcg ccctaactac acaattaagg 10440 20 gttectttet gtgtggttct tgtggtagtg ttggttacac caaggagggat agtgtgatca 10 atttctgtta catgcatcaa atggaacttg ctaatggtac acataccggt tcagcatttg 10560 atggtactat gtatggtgcc tttatggata aacaagtgca ccaagttcag ttaacagaca
10620 aatactgcag tgttaatgta gtagcttggc tttacgcagc aatacttaat ggttgcgett 10680 ggtttgtaaa acctaatcgc actagtgttg tttcttttaa tgaatgggcet cttgccaacc 10740 aattcactga atttgttggc actcaatccg ttgacatgtt agctgtcaaa acaggegtty 10800 ctattgaaca gctgctttat gcgatccaac aactgtatac tgggttccag ggaaagcaaa 15
10860 tccttggcag taccatgttg gaagatgaat tcacacctga ggatgttaat atgcagatta
10920 tgggtgtggt tatgcagagt ggtgtgagaa aagttacata tggtactgcg cattggttgt 10980 ttgcgaccct tgtctcaacc tatgtgataa tcttacaagc cactaaattt actttgtgga 11040 actacttgtt tgagactatt cccacacagt tgttcccact cttatttgtg actatggect 11100 5 tcgttatgtt gttggttaaa cacaaacaca cctttttgac acttttcttg ttgectgtgg 11160 ctatttgttt gacttatgca aacatagtct acgagcccac tactcccatt tcgtcagege 11220 tgattgcagt tgcaaattgg cttgccccca ctaatgctta tatgcgcact acacatactg 11280 atattggtgt ctacattagt atgtcacttg tattagtcat tgtagtgaag agattgtaca 11340 acccatcact ttctaacttt gcgttagcat tgtgcagtgg tgtaatgtgg ttgtacactt 11400 15 atagcattgg agaagcctca agccccattg cctatctggt tittgtcact acactcacta 11460 gtgattatac gattacagtc tttgttactg tcaaccttgc aaaagtttgc acttatgcca 11520 tctttgctta ctcaccacag cttacacttg tgtttccgga agtgaagatg atacttttat 11580 tatacacatg tttaggtttc atgtgtactt gctattttgg tgtcttctct cttttgaacc 11640 ttaagcttag agcacctatg ggtgtctatg actttaaggt ctcaacacaa gagttcagat
11700 tcatgactgc taacaatcta actgcaccta gaaattcttg ggaggctatg gctctgaact 11760 10 ttaagttaat aggtattggc ggtacacctt gtataaaggt tgctgctatg cagtctaaac 11820 ttacagatct taaatgcaca tctgtggttc tcctctetgt gectccaacag ttacacttag 11880 aggctaatag tagggcctgg gctttctgtg ttaaatgcca taatgatata ttggcagcaa
11940 cagaccccag tgaggcttic gagaaattcg taagtctctt tgctacttta atgacttitt 12000 ctggtaatgt agatcttgat gcgttagcta gtgatatttt tgacactcct agcgtacttc 12060 aagctactct ttctgagttt tcacacttag ctacctttgc tgagttggaa gctgcgcaga 12120 aagcctatca ggaagctatg gactctggtg acacctcacc acaagtictt aaggctttgc 5 12180 agaaggctgt taatatagct aaaaacgcct atgagaagga taaggcagtg gcccgtaagt 12240 tagaacgtat ggctgatcag gctatgactt ctatgtataa gcaagcacgt gctgaagaca 12300 agaaagcaaa aattgtcagt gctatgcaaa ctatgttgtt tggtatgatt aagaagctcg 12360 15 acaacgatgt tcttaatggt atcatttcta acgctaggaa tggttgtata cctcttagtg 12420 tcatcccact gtgtgcttca aataaacttc gcgttgtaat tcctgacttc accgtctgga 12480 atcaggtagt cacatatccc tcgcttaact acgetggggce tttgtgggac attacagtta 12540 taaacaatgt ggacaatgaa attgttaagt cttcagatgt tgtagacagc aatgaaaatt 12600 taacatggcc actigtttta gaatgcacta gggcatccac tictgccgtt aagtigcaaa 12660 ataatgagat caaaccttca ggtctaaaaa ccatggttgt gtctgcgggt caagagcaaa 12720 ctaactgtaa tactagttcc ttagcttatt acgaacctgt gcagggtcgt aaaatgctga 12780 tggctcttct ttctgataat gectatctca aatgggegceg tgttgaaggt aaggacggat 12840 ttgtcagtgt agagctacaa cctccttgca aattcttgat tgcgggacca aaaggacctg 5 12900 aaatccgata tctctatttt gttaaaaatc ttaacaacct tcatcgcggg caagtgttag 12960 ggcacattgc tgcgactgtt agattgcaag ctggttctaa caccgagttt gcctctaatt 13020 0 ccteggtgtt gtcacttgtt aacttcaccg ttgatcctca aaaagcttat ctegatttcg 0 tcaatgcggg aggtgcccca ttgacaaatt gtgttaagat gcttactcct aaaactggta 13140 5 caggtatagc tatatctgtt aaaccagaga gtacagctga tcaagagact tatggtggag 13200 cttcagtgtg tctctattgc cgtgcgcata tagaacatcc tgatgtctct ggtgtitgta 13260 10 aatataaggg taagtttgtc caaatccctg ctcagtgtgt ccgtgaccct gtgggatttt 13320 gtttgtcaaa taccccctgt aatgtctgtc aatattggat tggatatggg tgcaattgtg 13380 actcgcttag gcaagcagca ctgccccaat ctaaagattc caatttttta aacgagtccg 13440 gggttctatt gtaaatgccc gaatagaacc ctgttcaagt ggtttgtcca ctgatgtcgt 13500 ctttagggca tttgacatct gcaactataa ggctaaggtt gctggtattg gaaaatacta 13560 caagactaat acttgtaggt ttgtagaatt agatgaccaa gggcatcatt tagactccta 13620 ttttgtcgtt aagaggcata ctatggagaa ttatgaacta gagaagcact gttacgactt 13680 gttacgtgac tgtgatgctg tagctcccca tgatttcttc atctttgatg tagacaaagt 13740 taaaacacct catattgtac gtcagcgttt aactgagtac actatgatgg atcttgtata 13800 10 tgccctgagg cactttgatc aaaatagcga agtgcttaag gctatcttag tgaagtatgg 13860 ttgctgtgat gttacctact ttgaaaataa actctggttt gattttgttg aaaatcccag 13920 15 tgttattggt gtttatcata aactiggaga acgtgtacgc caagctatct taaacactgt 13980 taaattttgt gaccacatgg tcaaggctgg tttagtcggt gtgctcacac tagacaacca
14040 20 ggaccttaat ggcaagtggt atgattttgg tgacttcgta atcactcaac ctggttcagg 1410 agtagctata gttgatagct actattctta tttgatgcct gtgctctcaa tgaccgattg 14160 tctggccgcet gagacacata gggattgtga ttttaataaa ccactcattg agtggccact 14220 tactgagtat gattttactg attataaggt acaactcttt gagaagtact ttaaatattg 14280 ggatcagacg tatcacgcaa attgcgttaa tigtactgat gaccgtigtg tgttacattg 14340 tgctaatttc aatgtattgt ttgctatgac catgcctaag acttgtttcg gacccatagt 14400 ccgaaagatc tttgttgatg gcgtgccatt tgtagtatct tgtggttatc actacaaaga 14460 5 attaggttta gtcatgaata tggatgttag tctccataga cataggctct ctcttaagga 14520 gttgatgatg tatgccgctg atccagccat gcacattgece tcctctaacg cttttettga 14580 tttgaggaca tcatgtttta gtgtcgctgc acttacaact ggtttgactt ttcaaactgt 14640 gcggcctgge aattttaacc aagacttcta tgatttcgtg gtatctaaag gtttctttaa 14700 ggagggctct tcagtgacgc tcaaacattt tttctttgct caagatggta atgctgctat 14760 tacagattat aattactatt cttataatct gcctactatg tgtgacatca aacaaatgtt 14820 gttctgcatg gaagtigtaa acaagtactt cgaaatctat gacggtggtt gtcttaatgc 14880 0 ttctgaagtg gttgttaata atttagacaa gagtgctggc catcctttta ataagtttgg 1490 caaagctcgt gtctattatg agagcatgtc ttaccaggag caagatgaac tttttgccat 15000 15 gacaaagcgt aacgtcattc ctaccatgac tcaaatgaat ctaaaatatg ctattagtgc 15060 taagaataga gctcgcactg ttgcaggcgt gtccatactt agcacaatga ctaatcgcca 15120 gtaccatcag aaaatgctta agtccatggc tgcaactcgt ggagcgactt gcgtcattgg 15180 5 tactacaaag ttctacggtg gctgggattt catgcttaaa acattgtaca aagatgttga 15240 taatccgcat cttatgggtt gggattaccc taagtgtgat agagctatgce ctaatatgtg 10 tagaatcttc gcttcactca tattagctcg taaacatgge acttgttgta ctacaaggga 15360 cagattttat cgcttggcaa atgagtgtgc tcaggtgcta agcgaatatg ttctatgtgg 150 tggtggttac tacgtcaaac ctggaggtac cagtagcgga gatgccacca ctgcatatge 5 15480 caatagtgtc tttaacattt tgcaggcgac aactgctaat gtcagtgcac ttatgggtgc 15540 taatggcaac aagattgttg acaaagaagt taaagacatg cagtttgatt tgtatgtcaa 15600 tgtttacagg agcactagcc cagaccccaa atttgttgat aaatactatg cttttcttaa 15660 taagcacttt tctatgatga tactgtctga tgacggtgtc gtttgctata atagtgatta 15720 tgcagctaag ggttacattg ctggaataca gaattttaag gaaacgctgt attatcagaa 15780 caatgtcttt atgtctgaag ctaaatgctg ggtggaaacc gatctgaaga aagggccaca 15840 tgaattctgt tcacagcata cgctttatat taaggatggc gacgatggtt acttccttcc 0 ttatccagac ccttcaagaa ttttgtctge cggttgcttt gtagatgata tcgttaagac 10 tgacggtaca ctcatggtag agcggtttgt gtctttggct atagatgctt accctctcac 16020 aaagcatgaa gatatagaat accagaatgt attctgggtc tacttacagt atatagaaaa
16080 actgtataaa gaccttacag gacacatgct tgacagttat tctgtcatge tatgtggtga 16140 taattctgct aagttttggg aagaggcatt ctatagagat ctctatagtt cgcctaccac 16200 tttgcaggct gtcggttcat gegttgtatg ccattcacag acttccctac getgtgggac ١160 atgcatccgt agaccatttc tctgctgtaa atgctgctat gatcatgtta tagcaactcc 16320 0 acataagatg gttttgtctg ttictcctta cgtttgtaat gcccctggtt gtggegtitc 16380 agacgttact aagctatatt taggtggtat gagctacttt tgtgtagatc atagacctgt 16440 gtgtagtttt ccactttgcg ctaatggtct tgtattcggc ttatacaaga atatgtgcac 16500 aggtagtcct tctatagttg aatttaatag gttggctacc tgtgactgga ctgaaagtgg 16560 tgattacacc cttgccaata ctacaacaga accactcaaa ctttttgctg ctgagacttt 16620 acgtgccact gaagaggcgt ctaagcagtc ttatgctatt gccaccatca aagaaattgt 16680 tggtgagcgc caactattac ttgtgtggga ggctggcaag tccaaaccac cactcaatcg 16740 taattatgtt tttactggtt atcatataac caaaaatagt aaagtgcagc tcggtgagta 16800 cattttcgag cgcattgatt atagtgatgc tgtatcctac aagtctagta caacgtataa 16860 actgactgta ggtgacatct tcgtacttac ctctcactct gtggctacct tgacggegee 16920 cacaattgtg aatcaagaga ggtatgttaa aattactggg ttgtacccaa ccattacggt 15 16980 acctgaagag ttcgcaagtc atgttgccaa cttccaaaaa tcaggttata gtaaatatgt 17040 cactgttcag ggaccacctg gcactggcaa aagtcatttt gctatagggt tagcgattta
17100 ctaccctaca gcacgtgttg tttatacagc atgttcacac gcagctgttg atgetttgtg 17160 tgaaaaagct tttaaatatt tgaacattgc taaatgttcc cgtatcattc ctgcaaagge 17220 acgtgttgag tgctatgaca ggtttaaagt taatgagaca aattctcaat atttgtttag 17280 tactattaat gctctaccag aaactictgc cgatattctg gtggttgatg aggttagtat 17340 0 gtgcactaat tatgatcttt caattattaa tgcacgtatt aaagctaagc acattgtcta 17400 tgtaggagat ccagcacagt tgccagctcc taggactttg ttgactagag gcacattgga 17460 15 accagaaaat ttcaatagtg tcactagatt gatgtgtaac ttaggtcctg acatattttt 17520 aagtatgtgc tacaggtgtc ctaaggaaat agtaagcact gtgagcgctc ttgtctacaa 17580 20 taataaattg ttagccaaga aggagctttc aggccagtgc tttaaaatac tctataaggg 17640 caatgtgacg catgatgcta gctctgccat taatagacca caactcacat tigtgaagaa 5 17700 ttttattact gccaatccgg catggagtaa ggcagtcttt atttcgectt acaattcaca 17760 gaatgctgtg tctcgttcaa tgctgggtct taccactcag actgttgatt cctcacaggg 17820 0 ttcagaatac cagtacgtta tcttctgtca aacagcagat acggcacatg ctaacaacat 17880 taacagattt 381910038 tcactcgtgc ccaaaaaggt attctttgtg ttatgacatc 17940 15 tcaggcactc tttgagtcct tagagtttac tgaattgtct tttactaatt acaagctcca 18000 gtctcagatt gtaactggcc tttttaaaga ttgctctaga gaaacttctg gectctcace ١10 tgcttatgca ccaacatatg ttagtgttga tgacaagtat aagacgagtg atgagcttty 18120 cgtgaatctt aatttacccg caaatgtccc atactctcgt gttatttcca ggatgggett 18180 taaactcgat gcaacagttc ctggatatcc taagcttttc attactcgtg aagaggetgt 18240 5 aaggcaagtt cgaagctgga taggcttcga tgttgagggt gctcatgctt 600138106 18300 atgtggcacc aatgtgcctc tacaattagg attttcaact ggtgtgaact tigtigttca 18360 10 gccagttggt gttgtagaca ctgagtgggg taacatgtta acgggcattg ctgcacgtcc 18420 tccaccaggt gaacagttta agcacctcgt gcctcttatg cataaggggg ctgcgtggee 5 18480 tattgttaga cgacgtatag tgcaaatgtt gtcagacact ttagacaaat tgtctgatta 18540 ctgtacgttt gtttgttggg ctcatggctt tgaattaacg tctgcatcat acttttgcaa 18600 20 gataggtaag gaacagaagt gttgcatgtg caatagacgc gctgcagcegt actcttcacc 18660 tctgcaatct tatgcctgcet ggactcattc ctgcggttat gattatgtct acaacccttt 18720 5 ctttgtcgat gttcaacagt ggggttatgt aggcaatctt gctactaatc acgatcgtta 18780 ttgctctgtc catcaaggag ctcatgtggc ttctaatgat gcaataatga ctegttgttt 18840 agctattcat tcttgtttta tagaacgtgt ggattgggat atagagtatc cttatatctc 18900 acatgaaaag aaattgaatt cctgttgtag aatcgttgag cgcaacgtcg tacgtgctgc 18960 tcttcttgcc ggttcatttg acaaagtcta tgatattggc aatcctaaag gaattcctat 19020 tgttgatgac cctgtggttg attggcatta ttttgatgca cagcccttga ccaggaaggt 19080 acaacagctt ttctatacag aggacatggc ctcaagattt gctgatgggc tctgettatt 190 ttggaactgt aatgtaccaa aatatcctaa taatgcaatt gtatgcaggt ttgacacacg 19200 tgtgcattct gagttcaatt tgccaggttg tgatggcggt agtttgtatg ttaacaagca 19260 001111021 acaccagcat atgatgtgag tgcattccgt gatctgaaac ctitaccatt 19320 cttttattat tctactacac catgtgaagt gcatggtaat ggtagtatga tagaggatat 19380 10 tgattatgta cccctaaaat ctgcagtctg tattacagct tgtaatttag ggggegetgt 19440 ttgtaggaag catgctacag agtacagaga gtatatggaa gcatataatc ttgtctctgc
19500 15 atcaggtttc cgcctttggt gttataagac ctttgatatt tataatctct ggtctacttt 19560 tacaaaagtt caaggtttgg aaaacattgc tittaatgtt gttaaacaag gccattttat 19620 tggtgttgag ggtgaactac ctgtagctgt agtcaatgat aagatcttca ccaagagtgg 19680 cgttaatgac atttgtatgt ttgagaataa aaccactttg cctactaata tagcttttga 19740 5 actctatgct aagcgtgctg tacgctcgca tcccgatttc aaattgctac acaatttaca 19800 agcagacatt tgctacaagt tcgtcctttg ggattatgaa cgtagcaata tttatggtac 19860 tgctactatt ggtgtatgta agtacactga tattgatgtt aattcagctt tgaatatatg 19920 ttttgacata cgcgataatt gttcattgga gaagttcatg tctactccca atgccatctt 19980 tatttctgat agaaaaatca agaaataccc ttgtatggta ggtcctgatt atgcttactt 20040 15 caatggtgct atcatccgtg atagtgatgt tgttaaacaa ccagtgaagt tctacttigta 20100 taagaaagtc aataatgagt ttattgatcc tactgagtgt atttacactc agagtcgctc 20160 ttgtagtgac 1101300062 tttctgacat ggagaaagac tttctatctt ttgatagtga 20220 tgttttcatt aagaagtatg gcttggaaaa ctatgctttt gagcacgtag tctatggaga 20280 cttctctcat actacgttag gcggtcttca cttgcttatt ggtttataca agaagcaaca 20340 ggaaggtcat attattatgg aagaaatgct aaaaggtagc tcaactattc ataactattt 20400 tattactgag actaacacag cggcttttaa ggcggtgtgt tctgttatag atttaaagct 20460 tgacgacttt gttatgattt taaagagtca agaccttggc gtagtatcca aggttgtcaa 20520 ggttcctatt gacttaacaa tgattgagtt tatgttatgg tgtaaggatg gacaggttca 20580 15 aaccttctac cctcgactcc aggcttctge agattggaaa cctggtcatg caatgccatc 20640
010111888 gttcaaaatg taaaccttga acgttgtgag cttgctaatt acaagcaatc 0700 tattcctatg cctcgecggtg tgcacatgaa catcgctaaa tatatgcaat tgtgccagta 20760 tttaaatact tgcacattag ccgtgcctge caatatgcgt gttatacatt ttggecgetgg 20820 5 ttctgataaa ggtatcgctc ctggtacctc agttttacga cagtggcttc ctacagatgc 20880 cattattata gataatgatt taaatgagtt cgtgtcagat gctgacataa ctttatttgg 20940 agattgtgta actgtacgtg tcggccaaca agtggatctt gttatttccg acatgtatga 21000 tcctactact aagaatgtaa caggtagtaa tgagtcaaag gctttattct ttacttacct 21060 gtgtaacctc attaataata atcttgctct tggtgggtct gttgctatta aaataacaga 21120 5 acactcttgg agcgttgaac tttatgaact tatgggaaaa tttgcttggt ggactgtttt 21180 ctgcaccaat gcaaatgcat cctcatctga aggattcctc ttaggtatta attacttggg 21240 tactattaaa gaaaatatag atggtggtgc tatgcacgcc aactatatat tttggagaaa 21300 ttccactcct atgaatctga gtacttactc actttttgat ttatccaagt ttcaattaaa 21360 5 attaaaagga acaccagttc ttcaattaaa ggagagtcaa attaacgaac tcgtaatatc 21420 tctcctgtcg cagggtaagt tacttatccg tgacaatgat acactcagtg tttictactga 21480 0 tgttcttgtt aacacctaca gaaagttacg ttgatgtagg gccagattct gttaagtctg 21540 cttgtattga ggttgatata caacagactt tctttgataa aacttggcct aggccaattg 21600 atgtttctaa ggctgacggt attatatacc ctcaaggccg tacatattct aacataacta 21660 tcacttatca aggtcttttt ccctatcagg gagaccatgg tgatatgtat gtttactctg 21720 caggacatgc tacaggcaca actccacaaa agttgtttgt agctaactat tctcaggacg 21780 tcaaacagtt tgctaatggg tttgtcgtcc gtataggagc agctgccaat tccactggcea 21840 5 ctgttattat tagcccatct accagcgcta ctatacgaaa aatttaccct gettttatge 21900 tgggttcttc agttggtaat ttctcagatg gtaaaatggg ccgcttctic aatcatactc 21960 tagttctttt gcccgatgga tgtggcactt tacttagage tttttattgt attctagage 22020 ctcgctctgg aaatcattgt cctgctggea attcctatac ttettttgec acttatcaca 22080 ctcctgcaac agattgttct gatggcaatt acaatcgtaa tgccagtctg aactctttta 22140 5 aggagtattt taatttacgt aactgcacct ttatgtacac ttataacatt accgaagatg 22200 agattttaga gtggttiggc attacacaaa ctgctcaagg tgttcacctc ttctcatctc 22260 ggtatgttga tttgtacggc ggcaatatgt ttcaatttgc caccttgcct gtttatgata 20 ctattaagta ttattctatc attcctcaca gtattcgttc tatccaaagt gatagaaaag 22380 cttgggctgc cttctacgta tataaacttc aaccgttaac tttcctgttg gatttttctg 22440 ttgatggtta tatacgcaga gctatagact gtggttttaa tgatttgtca caactccact 22500 gctcatatga atccttcgat gttgaatctg gagtttattc agtttcgtct ttcgaagcaa 22560 0 aaccttctgg ctcagttgtg gaacaggctg aaggtgttga atgtgatttt tcacctcttc 22620 tgtctggcac acctcctcag gtttataatt tcaagcgttt ggtttttacc aattgcaatt 22680 ataatcttac caaattgctt tcactttttt ctgtgaatga ttttactigt agtcaaatat 22740 ctccagcagc aattgctagc aactgttatt cttcactgat tttggattac ttttcatacc 2800 cacttagtat gaaatccgat ctcagtgtta gttctgctgg tccaatatcc cagtttaatt 22860 ataaacagtc cttttctaat cccacatgtt tgattttagc gactgttcct cataacctta 22920 ctactattac taagcctctt aagtacagct atattaacaa gtgctctcgt ctictttctg 22980 5 atgatcgtac tgaagtacct cagttagtga acgctaatca atactcaccc tgtgtatcca 23040 ttgtcccatc cactgtgtgg gaagacggtg attattatag gaaacaacta tctccacttg 23100 10 aaggtggtgg ctggcttgtt gctagtggct caactgttgc catgactgag caattacaga 23160 tgggctttgg tattacagtt caatatggta cagacaccaa tagtgtttgc cccaagetty 23220 5 aatttgctaa tgacacaaaa attgcctctc aattaggcaa ttgcgtggaa tattccctct 23280 atggtgtttc gggccgtggt gtttttcaga attgcacagc tgtaggtgtt cgacagcage 23340 gctttgttta tgatgcgtac cagaatttag ttggctatta ttctgatgat ggcaactact 23400 actgtttgcg tgcttgtgtt agtgttcctg tttctgtcat ctatgataaa gaaactaaaa 23460 cccacgctac tctatttggt agtgttgcat gtgaacacat ttcttctacc atgtctcaat 23520 actcccgttc tacgcgatca atgcttaaac ggcgagattc tacatatggce ccccttcaga 23580 cacctgttgg ttgtgtccta ggacttgtta attcctcttt gttcgtagag gactgcaagt 23640 tgcctcttgg tcaatctcte tgtgctcettc ctgacacacc tagtactctc acacctcgca 23700 gtgtgcgctc tgttccaggt gaaatgcgct tggcatccat tgcttttaat catcctattc 23760 5 aggttgatca acttaatagt agttatttta aattaagtat acccactaat ttttccttty 23820 gtgtgactca ggagtacatt cagacaacca ttcagaaagt tactgttgat tgtaaacagt
23880 acgtttgcaa tggtttccag aagtgtgagc aattactgcg cgagtatggc cagtttigtt 23940 ccaaaataaa ccaggctctc catggtgcca atttacgcca ggatgattct gtacgtaatt
24000 tgtttgcgag cgtgaaaagc tctcaatcat ctectatcat accaggtttt ggaggtgact 24060 ttaatttgac acttctagaa cctgtttcta tatctactgg cagtcgtagt gcacgtagtg 24120 ctattgagga tttgctattt gacaaagtca ctatagctga tcctggttat atgcaaggtt 24180 acgatgattg catgcagcaa ggtccagcat cagctcgtga tcttattigt gctcaatatg 24240 5 tggctggtta caaagtatta cctccictta tggatgttaa tatggaagcc gegtatactt 24300 catctttgct tggcagcata gcaggtgttg gctggactgce tggcttatce tectttgetg 24360 ctattccatt tgcacagagt atcttttata ggttaaacgg tgttggcatt actcaacagg 24420 ttctttcaga gaaccaaaag cttattgcca ataagtttaa tcaggctctg ggagctatgce 24480 5 aaacaggctt cactacaact aatgaagctt ttcagaaggt tcaggatgct gtgaacaaca 24540 atgcacaggc tctatccaaa ttagctagcg agctatctaa tactttiggt getatttccg 24600 0 cctctattgg agacatcata caacgtcttg atgttctcga acaggacgcc caaatagaca 24660 gacttattaa tggccgtttg acaacactaa atgcittttgt tgcacagcag cttgttcgtt 24720 5 ccgaatcagc tgctctttcc gctcaattgg ctaaagataa agtcaatgag tgtgtcaagg 247780 cacaatccaa gcgttctgga ttttgcggtc aaggcacaca tatagtgtcc titgttgtaa 24840 20 atgcccctaa tggcctttac ttcatgcatg ttggttatta ccctagcaac cacattgagg 4900 ttgtttctgce ttatggtctt tgcgatgcag ctaaccctac taattgtata geccectgtta 24960 atggctactt tattaaaact aataacacta ggattgttga tgagtggtca tatactggct 25020 cgtccttcta tgcacctgag cccattacct cccttaatac taagtatgtt gcaccacagg 25080 tgacatacca aaacatttct actaacctcc ctectectet tetcggcaat tccaccggga 25140 10 ttgacttcca agatgagttg gatgagtttt tcaaaaatgt tagcaccagt atacctaatt 25200 ttggttccct aacacagatt aatactacat tactcgatct tacctacgag atgttgtctc 5*0 ttcaacaagt tgttaaagcc cttaatgagt cttacataga ccttaaagag cttggcaatt 25320 atacttatta caacaaatgg ccgtggtaca tttggcttgg tttcattgct gggcttgtty 25380 ccttagctct atgcgtcttc ttcatactgt getgcactgg ttgtggcaca aactgtatgg 25440 gaaaacttaa gtgtaatcgt tgttgtgata gatacgagga atacgacctc gagccgcata 25500 aggttcatgt tcactaatta acgaactatt aatgagagtt caaagaccac ccactctctt 25560 gttagtgttt tcactctctc ttttggtcac tgcatcctca aaacctctct atgtacctga 25620 gcattgtcag aattattctg gttgcatgct tagggcttgt attaaaactg cccaagctga 25680 10 tacagctggt ctttatacaa attttcgaat tgacgtccca tctgcagaat caactggtac 25740 tcaatcagtt tctgtcgatc ttgagtcaac ttcaactcat gatggtccta ccgaacatgt 25800 tactagtgtg aatctttttg acgttggtta ctcagttaat taacgaactc tatggattac 25860 gtgtctctge ttaatcaaat ttggcagaag taccttaact caccgtatac tacttgttty 0 tacatcccta aacccacagc taagtataca cctttagttg gcacttcatt gcaccetgtg 25980 ctgtggaact gtcagctatc ctttgctggt tatactgaat ctgctgttaa ttctacaaaa 26040 gctttggcca aacaggacgc agctcagcga atcgcttggt tgctacataa ggatggagga 5
26100 atccctgatg gatgttccct ctacctccgg cactcaagtt tattcgcgca aagcgaggaa
26160 gaggagccat tctccaacta agaaactgcg ctacgttaag cgtagatttt ctcttctgcg
26220 ccatgaagac cttagtgtta ttgtccaacc aacacactat gtcagggtta cattttcaga 26280 ccccaacatg tggtatctac gttcgggtca tcatttacac tcagttcaca attggcttaa 26340 accttatggc ggccaacctg ttictgagta ccatattact ctagctttgc taaatctcac 26400 tgatgaagat ttagctagag atttttcacc cattgcgctc tttttgcgca atgtcagatt 26460 20 tgagctacat gagttcgect tgctgcgcaa aactcettgtt cttaatgcat cagagatcta 26520 ctgtgctaac atacatagat ttaagcctgt gtatagagtt aacacggcaa tccctactat 26580 taaggattgg cttctcgttc agggattttc cctttaccat agtggcctce ctttacatat 26640 gtcaatctct aaattgcatg cactggatga tgttactcgc aattacatca ttacaatgcc 6700 atgctttaga acttaccctc aacaaatgtt tgttactcct ttggccgtag atgttgtctc 26760 0 catacggtct tccaatcagg gtaataaaca aattgticat tcttatccca ttttacatca 26820 tccaggattt taacgaacta tggctttctc ggcgtcttta tttaaacccg tccagctagt 26880 cccagtttct cctgcatttc atcgcattga gtctactgac tctattgttt tcacatacat 26940 tcctgctage ggctatgtag ctgctttage tgtcaatgtg tgtctcattc cectattatt 27000 actgctacgt caagatactt gtcgtcgcag cattatcaga actatggttc tctatticct 27060 tgttctgtat aactttttat tagccattgt actagtcaat ggtgtacatt atccaactgg 27120 aagttgcctg atagcctict tagttatcct cataatactt tggtttgtag atagaattcg 27180 5 tttctgtctc atgctgaatt cctacattcc actgtttgac atgcgttcce actttattcg 70 tgttagtaca gtticttctc atggtatggt ccctgtaata cacaccaaac cattatttat 27300 tagaaacttc gatcagcgtt gcagctgttc tcgttgtttt tatttgcact cticcactta 27360 tatagagtgc acttatatta gccgttttag taagattagc ctagtttctg taactgactt 27420 ctccttaaac ggcaatgttt ccactgtttt cgtgcctgca acgcgcegatt cagttcctct 27480 5 tcacataatc gccccgagct cgcttategt ttaagcagct ctgcgcetact atgggtcceg
27540 tgtagaggct aatccattag tctctctttg gacatatgga aaacgaacta tgttaccctt 27600 tgtccaagaa cgaatagggt tgttcatagt aaactttttc atttttaccg tagtatgtgc 27660 tataacactc ttggtgtgta tggctttcct tacggctact agattatgtg tgcaatgtat 27720 5 gacaggcttc aataccctgt tagticagcc cgcattatac ttgtataata ctggacgttc 7780 agtctatgta aaattccagg atagtaaacc ccctctacca cctgacgagt gggtttaacg 27840 10 aactccttca taatgtctaa tatgacgcaa ctcactgagg cgcagattat tgccattatt 27900 aaagactgga actttgcatg gtccctgatc tttctcttaa ttactatcgt actacagtat 27960 ggatacccat cccgtagtat gactgtctat gtctttaaaa tgtttgtttt atggctccta 28020 tggccatctt ccatggcgct atcaatattt agcgccegttt atccaattga tctagcttcc 28080 cagataatct ctggcattgt agcagctgtt tcagctatga tgtggatttc ctactttgty 28140 cagagtatcc ggctgtttat gagaactgga tcatggtggt cattcaatcc tgagactaat 28200 tgccttttga acgttccatt tggtggtaca actgtcgtac gtccactcgt agaggactct 28260 accagtgtaa ctgctgttgt aaccaatggc cacctcaaaa tggctggcat gcatttcggt 28320 gcttgtgact acgacagact tcctaatgaa gtcaccgtgg ccaaacccaa tgtgctgatt 28380 gctttaaaaa tggtgaagcg gcaaagctac ggaactaatt ccggcegttge catttaccat
28440 15 agatataagg caggtaatta caggagtccg cctattacgg cggatattga acttgcattg 28500 cttcgagctt aggctcttta gtaagagtat cttaattgat tttaacgaat ctcaatttca 28560 20 ttgttatggc atcccetget geacctegtg ‏للدعتاواه‎ tgccgataac aatgatataa 620 caaatacaaa cctatctcga ggtagaggac gtaatccaaa accacgagct gcaccaaata 28680 5 acactgtctc ttggtacact gggcttaccc aacacgggaa agtccctctt acctttccac 28740 ctgggcaggg tgtacctctt aatgccaatt ctacccctgc gcaaaatgct gggtattgge 10 28800 ggagacagga cagaaaaatt aataccggga atggaattaa gcaactggct cccaggtggt 28860 acttctacta cactggaact ggacccgaag cagcactccc attccgggcet gttaaggatg 28920 gcatcgtttg ggtccatgaa gatggcgcca ctgatgctcc ttcaactttt gggacgcgga 28980 20 accctaacaa tgattcagct attgttacac aattcgcgcc cggtactaag cttcctaaaa 29040 acttccacat tgaggggact ggaggcaata gtcaatcatc ttcaagagcc tctagcttaa 29100 5 gcagaaactc ttccagatct agttcacaag gttcaagatc aggaaactct acccgecggcea 29160 cttctccagg tccatctgga atcggagcag taggaggtga tctactttac ctigatcttc 29220 0 tgaacagact acaagccctt gagtctggca aagtaaagca atcgcagcca aaagtaatca 29280 ctaagaaaga tgctgctgct gctaaaaata agatgcgcca caagcgcact tccaccaaaa 5 29340 gtttcaacat ggtgcaagct tttggtcttc gcggaccagg agacctccag ggaaactttg 29400 gtgatcttca attgaataaa ctcggcactg aggacccacg ttggccccaa attgctgagce
29460 ttgctcctac agccagtgct tttatgggta tgtcgcaatt taaacttacc catcagaaca 29520 atgatgatca tggcaaccct gtgtacttcc ttcggtacag tggagccatt aaacttgacc
29580 caaagaatcc caactacaat aagtggttgg agcttcttga gcaaaatatt gatgcctaca 29640 10 aaaccttccc taagaaggaa aagaaacaaa aggcaccaaa agaagaatca acagaccaaa
29700 tgtctgaacc tccaaaggag cagcgtgtgc aaggtagcat cactcagcgce actcgcacce 5
29760 gtccaagtgt tcagcctggt ccaatgattg atgttaacac tgattagtgt cactcaaagt 29820 aacaagatcg cggcaatcgt ttgtgtttgg caaccccatc tcaccatcgce ttgtccactc 20
29880 ttgcacagaa tggaatcatg ttgtaattac agtgcaataa ggtaattata acccatttaa 29940 ttgatagcta tgctttatta aagtgtgtag ctgtagagag aatgttaaag actgtcacct 30000 ctgcttgatt gcaagtgaac agtgcccccc gggaagagct ctacagtgtg aaatgtaaat 30060 aaaaaatagc tattattcaa ttagattagg ctaattagat gatttgcaaa aaaaaaaaa 30119 10 2 <210> 4062 <211>
DNA <212> 15
Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus <213> 2 <400> atgatacact cagtgtttct actgatgttc ttgttaacac ctacagaaag ttacgttgat 60 gtagggccag attctgttaa gtctgcttgt attgaggttg atatacaaca gactttcttt 120 gataaaactt ggcctaggcc aattgatgtt tctaaggctg acggtattat ataccctcaa 180 ggccgtacat attctaacat aactatcact tatcaaggtc tttttcccta tcagggagac 240 catggtgata tgtatgttta ctctgcagga catgctacag gcacaactcc acaaaagttg 300 ttigtagcta actattctca ggacgtcaaa cagtttgcta atgggtttgt cgtccgtata 360 ggagcagctg ccaattccac tggcactgtt attattagcc catctaccag cgctactata 420 cgaaaaattt accctgcttt tatgctgggt tcttcagttg gtaattictc agatggtaaa 480 15 atgggccgct tcttcaatca tactctagtt ctittgcceg atggatgtgg cactttactt 540 agagcttttt attgtattct agagcctcgce tectggaaate attgtectge tggcaattee 600 tatacttctt ttgccactta tcacactcct gcaacagatt gttctgatgg caattacaat 660 cgtaatgcca gtctgaactc ttttaaggag tattttaatt tacgtaactg cacctttatg 720 tacacttata acattaccga agatgagatt ttagagtggt ttggcattac acaaactgct 780 caaggtgttc acctcttctc atctcggtat gttgattigt acggcggcaa tatgtticaa 840 tttgccacct tgcctgttta tgatactatt aagtattatt ctatcattcc tcacagtatt 900 10 cgttctatcc aaagtgatag aaaagcttgg gctgcectict acgtatataa acttcaaccg 960 ttaactttcc tgttggattt ttctgttgat ggttatatac gcagagctat agactgtggt 1020 tttaatgatt tgtcacaact ccactgctca tatgaatcct tcgatgttga atctggagtt 1080 tattcagttt cgtctttcga agcaaaacct tctggctcag ttgtggaaca ggctgaaggt 1140 gttgaatgtg atttttcacc tcttctgtct ggcacacctc ctcaggttta taatttcaag 1200 cgtttggttt ttaccaattg caattataat cttaccaaat tgctttcact tttttctgtg 1260 aatgatttta cttgtagtca aatatctcca gcagcaattg ctagcaactg ttattctica 1320 5 ctgattttgg attacttttc atacccactt agtatgaaat ccgatctcag tgttagttct 10 gctggtccaa tatcccagtt taattataaa cagtcctttt ctaatcccac atgtttgatt 140 ttagcgactg ttcctcataa ccttactact attactaagce ctcttaagta cagctatatt 10 aacaagtgct ctcgtcttct ttctgatgat cgtactgaag tacctcagtt agtgaacget 10 aatcaatact caccctgtgt atccattgtc ccatccactg tgtgggaaga cggtgattat 1620 15 tataggaaac aactatctcc acttgaaggt ggtggctggc ttgtigctag tggctcaact 1680 gttgccatga ctgagcaatt acagatgggc tttggtatta cagttcaata tggtacagac 1740 accaatagtg tttgccccaa gcttgaattt gctaatgaca caaaaattgc ctctcaatta 1800 ggcaattgcg tggaatattc cctctatggt gtttcgggec gtggtgtttt tcagaattge 1860 acagctgtag gtgttcgaca gcagcgcttt gtttatgatg cgtaccagaa tttagttggc 1920 tattattctg atgatggcaa ctactactgt ttgcgtgcett gtgttagtgt tectgtttct 1980 gtcatctatg ataaagaaac taaaacccac gctactctat ttggtagtgt tgcatgtgaa 2040 10 cacatttctt ctaccatgtc tcaatactcc cgttctacge gatcaatgcet taaacggecga 2100 gattctacat atggccccct tcagacacct gtiggtigtg tcctaggact tgttaattcc 2160 tctttgttcg tagaggactg caagttgcct cttggtcaat ctctetgtge tcttcctgac 2220 acacctagta ctctcacacc tcgcagtgtg cgctctgttc caggtgaaat gcgcttggea 2280 tccattgctt ttaatcatcc tattcaggtt gatcaactta atagtagtta ttttaaatta 30 agtataccca ctaatttttc ctttggtgtg actcaggagt acattcagac aaccattcag 2400 aaagttactg ttgattgtaa acagtacgtt tgcaatggtt tccagaagtg tgagcaatta 2460 ctgcgegagt atggccagtt tigttccaaa ataaaccagg ctctccatgg tgccaattta 2520 cgccaggatg attctgtacg taatttgttt gcgagcgtga aaagctctca atcatctcct 2580 10 atcataccag gttttggagg tgactttaat ttgacactic tagaacctgt tictatatct 60 actggcagtc gtagtgcacg tagtgctatt gaggatttgc tatttgacaa agtcactata 2700 gctgatcctg gttatatgca aggttacgat gattgcatgc agcaaggtcc agcatcagcet
2760 cgtgatctta tttgtgctca atatgtggct ggttacaaag tattacctcc tcttatggat 2820 gttaatatgg 38022902918 tacttcatct ttgcttggca gcatagcagg tgttggetgg 0 actgctggct tatcctcctt tgctgctatt ccatttgcac agagtatctt ttataggtta 2940 aacggtgttg gcattactca acaggttctt tcagagaacc aaaagcttat tgccaataag 3000 tttaatcagg ctctgggagce tatgcaaaca ggcttcacta caactaatga agcttttcag
3060 10 aaggttcagg atgctgtgaa caacaatgca caggctctat ccaaattagc tagcgagcta 3120 tctaatactt ttggtgctat ttccgcectct attggagaca tcatacaacg tettgatgtt 3180 5 ctcgaacagg acgcccaaat agacagactt attaatggcc gtttgacaac actaaatgct 3240 tttgttgcac agcagcttgt tcgttccgaa tcagcetgcetce tttccgetca attggctaaa 3300 20 gataaagtca atgagtgtgt caaggcacaa tccaagcgtt ctggattttg ‏91886و‎ ‎3360 ‎acacatatag tgtccttigt tgtaaatgcc cctaatggcc tttacticat gcatgtiggt 3420 5 tattacccta gcaaccacat tgaggttgtt tctgcttatg gtctttgcga tgcagctaac 3480 cctactaatt gtatagcccc tgttaatggce tactttatta aaactaataa cactaggatt 3540 gttgatgagt ggtcatatac tggctcgtcc ttctatgcac ctgagcccat tacctcectt | 3600 aatactaagt atgttgcacc acaggtgaca taccaaaaca tttctactaa cctccctect 3660 cctcttctcg gcaattccac cgggattgac ttccaagatg agttggatga gtttttcaaa 3720 aatgttagca ccagtatacc taattttggt tccctaacac agattaatac tacattactc 3780 gatcttacct acgagatgtt gtctcticaa caagttgtta aagcccttaa tgagtcttac 3840 atagacctta aagagcttgg caattatact tattacaaca aatggccgtg gtacatttgg 3900 cttggtttca ttgctgggct tgttgcctta getctatgeg tcttcttcat actgtgetge 3960 5 actggttgtg gcacaaactg tatgggaaaa cttaagtgta atcgttgttg tgatagatac 4020 gaggaatacg acctcgagcc gcataaggtt catgttcact aa 4062 3 <210> 1353 <211>
PRT <212>
Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus <213> 15 3 <400>
Met lle His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu
15 10 5 1
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys lle Glu 30 25 20 5
Val Asp lle Gln GIn Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro lle 45 40 35
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly lle lle Tyr Pro Gin Gly Arg Thr Tyr 60 55 50
Ser Asn lle Thr lle Thr Tyr Gin Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp 80 75 70 65
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr 95 90 85
Pro GIn Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gin Asp Val Lys GIn Phe 5 110 105 100
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg lle Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly 125 120 115 10
Thr Val lle lle Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr lle Arg Lys lle Tyr 140 135 130
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys 160 155 150 145
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys 175 170 165
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys lle Leu Glu Pro Arg Ser Gly 190 185 180
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His 0 205 200 195
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser 220 215 210 15
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met 240 235 230 225
Tyr Thr Tyr Asn lle Thr Glu Asp Glu lle Leu Glu Trp Phe Gly lle 255 250 245
Thr Gin Thr Ala GIn Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp 270 265 260
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gin Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp 285 280 275
Thr lle Lys Tyr Tyr Ser lle lle Pro His Ser lle Arg Ser lle GIn 5 300 295 290
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gin Pro
320 315 310 305
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr lle Arg Arg Ala 335 330 325 5 lle Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser GIn Leu His Cys Ser Tyr Glu 350 345 340
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala 365 360 355
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gin Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp 380 375 370
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gin Val Tyr Asn Phe Lys 400 395 390 385
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser 5 415 410 405
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gin lle Ser Pro Ala Ala 430 425 420 10 lle Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu lle Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr 445 440 435
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Gly Val Ser Ser Ala Gly Pro lle 460 455 450
Ser GIn Phe Asn Tyr Lys GIn Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu lle 480 475 470 465
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr lle Thr Lys Pro Leu Lys 495 490 485
Tyr Ser Tyr lle Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr 10 510 505 500
Glu Val Pro Gin Leu Val Asn Ala Asn GIn Tyr Ser Pro Cys Val Ser 525 520 515 15 lle Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys 0 540 535 530
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr 560 555 550 545
Val Ala Met Thr Glu GIn Leu Gin Met Gly Phe Gly lle Thr Val Gin 575 570 565
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn 590 585 580
Asp Thr Lys lle Ala Ser GIn Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu 5 605 600 595
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gin Asn Cys Thr Ala Val Gly
620 615 610
Val Arg Gin GIn Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly 640 635 630 625 5
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser 655 650 645
Val Pro Val Ser Val lle Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr 670 665 660
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His lle Ser Ser Thr Met Ser 0 685 680 675
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr 700 695 690
Gly Pro Leu GIn Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser 5 720 715 710 705
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly 60 Ser Leu Cys 735 730 725 10
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser 750 745 740
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser lle Ala Phe Asn His Pro lle 765 760 755
‏ماك‎ Val Asp GIn Phe Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser lle Pro Thr 780 775 770
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gin Glu Tyr lle Gin Thr Thr lle Gin 800 795 790 785
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys GIn Tyr lle Cys Asn Gly Phe Gin Lys 0 815 810 805
Cys Glu GIn Leu Leu Arg Glu Tyr Gly 60 Phe Cys Ser Lys lle Asn 830 825 820 15
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gin Asp Asp Ser Val Arg Asn 845 840 835
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser Gln Ser Ser Pro lle lle Pro Gly 860 855 850
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser lle Ser 880 875 870 865
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala lle Glu Asp Leu Leu Phe Asp 895 890 885
Lys Val Thr lle Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gin Gly Tyr Asp Asp Cys 5 910 905 900
Met Gin GIn Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu lle Cys Ala GIn Tyr
925 920 915
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu 940 935 930 5
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser lle Ala Gly Val Gly Trp 960 955 950 945
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala lle Pro Phe Ala GIn Ser lle 975 970 965
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly lle Thr Gln GIn Val Leu Ser Glu 990 985 980
Asn GIn Lys Leu lle Ala Asn Lys Phe Asn GIn Ala Leu Gly Ala Met 1005 1000 995
GIn Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Arg Lys Val GIn 5 1020 1015 1010
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gin Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser 1035 1030 1025 10
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala lle Ser Ala Ser lle Gly Asp 1050 1045 1040 lle lle Gin Arg Leu Asp Val Leu Glu GIn Asp Ala Gin lle Asp 1065 1060 1055
Arg Leu lle Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala 1080 1075 1070
Gln GIn Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gin Leu 1095 1090 1085
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala GIn Ser Lys Arg 0 1110 1105 1100
Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His lle Val Ser Phe Val Val 1125 1120 1115 15
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro 1140 1135 1130
Ser Asn His lle Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala 1155 1150 1145
Ala Asn Pro Thr Asn Cys lle Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe lle 1170 1165 1160
Lys Thr Asn Asn Thr Arg lle Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly 1185 1180 1175
Ser Ser Phe Tyr Ser Pro Glu Pro lle Thr Ser Leu Asn Thr Lys 5 1200 1195 1190
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gin Asn lle Ser Thr Asn Leu
1215 1210 1205
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly lle Asp Phe GIn Asp 1230 1225 1220 5
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser lle Pro Asn 1245 1240 1235
Phe Gly Ser Leu Thr Gin lle Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr 1260 1255 1250
Tyr Glu Met Leu Ser Leu 60 GIn Val Val Lys Ala Leu Asn Glu 1275 1270 1265
Ser Tyr lle Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn 1290 1285 1280
Lys Trp Pro Trp Tyr lle Trp Leu Gly Phe lle Ala Gly Leu Val 5 1305 1300 1295
Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe lle Leu Cys Cys Thr Gly Cys 1320 1315 1310 10
Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp 1335 1330 1325
Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp Leu Glu Pro His Lys Val His Val His 1350 1345 1340
4 <210> 1353 <211>
PRT <212>
Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus <213> 5 4 <400>
Met lle His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu 10 5 1 10
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys lle Glu 25 20 15
Val Asp lle Gln GIn Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro lle 40 35
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly lle lle Tyr Pro Gin Gly Arg Thr Tyr 60 55 50
Ser Asn lle Thr lle Thr Tyr Gin Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp 80 75 70 65
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr 10 95 90 85
Pro GIn Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gin Asp Val Lys 60 Phe 110 105 100 15
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg lle Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly 125 120 115
Thr Val lle lle Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr lle Arg Lys lle Tyr 140 135 130
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys 160 155 150 145
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys 175 170 165
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys lle Leu Glu Pro Arg Ser Gly 5 190 185 180
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His
205 200 195
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser 220 215 210 5
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met 240 235 230 225
Tyr Thr Tyr Asn lle Thr Glu Asp Glu lle Leu Glu Trp Phe Gly lle 255 250 245
Thr Gin Thr Ala GIn Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp 270 265 260
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gin Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp 285 280 275
Thr lle Lys Tyr Tyr Ser lle lle Pro His Ser lle Arg Ser lle Gin 5 300 295 290
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro 320 315 310 305 10
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr lle Arg Arg Ala 335 330 325 lle Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser GIn Leu His Cys Ser Tyr Glu 350 345 340
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala 365 360 355
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gin Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp 380 375 370
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro ‏ماو‎ Val Tyr Asn Phe Lys 10 400 395 390 385
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser 415 410 405 15
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gin lle Ser Pro Ala Ala 430 425 420 lle Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu lle Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr 445 440 435
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Gly Val Ser Ser Ala Gly Pro lle 460 455 450
Ser GIn Phe Asn Tyr Lys GIn Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu lle 480 475 470 465
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr lle Thr Lys Pro Leu Lys 15 495 490 485
Tyr Ser Tyr lle Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr
510 505 500
Glu Val Pro Gin Leu Val Asn Ala Asn GIn Tyr Ser Pro Cys Val Ser 525 520 515 5 lle Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys 0 540 535 530
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr 560 555 550 545
Val Ala Met Thr Glu GIn Leu Gin Met Gly Phe Gly lle Thr Val Gin 575 570 565
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn 590 585 580
Asp Thr Lys lle Ala Ser Gin Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu 5 605 600 595
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gin Asn Cys Thr Ala Val Gly 620 615 610 10
Val Arg Gin GIn Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly 640 635 630 625
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser 655 650 645
Val Pro Val Ser Val lle Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr 670 665 660
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His lle Ser Ser Thr Met Ser 0 685 680 675
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr 0 700 695 690
Gly Pro Leu GIn Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser 720 715 710 705 15
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly GIn Ser Leu Cys 735 730 725
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser 750 745 740
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser lle Ala Phe Asn His Pro lle 765 760 755
Gln Val Asp GIn Phe Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser lle Pro Thr 780 775 770
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr ‏ماي‎ Glu Tyr lle GIn Thr Thr lle GIn 5 800 795 790 785
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys GIn Tyr lle Cys Asn Gly Phe GIn Lys
815 810 805
Cys Glu GIn Leu Leu Arg Glu Tyr Gly 60 Phe Cys Ser Lys lle Asn 830 825 820 5
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gin Asp Asp Ser Val Arg Asn 845 840 835
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser GIn Ser Ser Pro lle lle Pro Gly 860 855 850
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser lle Ser 880 875 870 865
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala lle Glu Asp Leu Leu Phe Asp 895 890 885
Lys Val Thr lle Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gin Gly Tyr Asp Asp Cys 5 910 905 900
Met GIn Gln Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu lle Cys Ala 60 Tyr 925 920 915 10
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu 940 935 930
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser lle Ala Gly Val Gly Trp 960 955 950 945
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala lle Pro Phe Ala Gin Ser lle 975 970 965
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly lle Thr Gin ‏ماي‎ Val Leu Ser Glu 990 985 980
Asn GIn Lys Leu lle Ala Asn Lys Phe Asn GIn Ala Leu Gly Ala Met 10 1005 1000 995
GIn Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Arg Lys Val GIn 1020 1015 1010 15
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala GIn Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser 1035 1030 1025
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala lle Ser Ala Ser lle Gly Asp 1050 1045 1040 lle lle Gin Arg Leu Asp Val Leu Glu GIn Asp Ala Gin lle Asp 1065 1060 1055
Arg Leu lle Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala 1080 1075 1070
GIn GIn Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Glin Leu 15 1095 1090 1085
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala 60 Ser Lys Arg
1110 1105 1100
Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His lle Val Ser Phe Val Val 1125 1120 1115 5
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro 1140 1135 1130
Ser Asn His lle Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala 1155 1150 1145
Ala Asn Pro Thr Asn Cys lle Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe lle 1170 1165 1160
Lys Thr Asn Asn Thr Arg lle Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly 1185 1180 1175
Ser Ser Phe Tyr Ser Pro Glu Pro lle Thr Ser Leu Asn Thr Lys 5 1200 1195 1190
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gin Asn lle Ser Thr Asn Leu 1215 1210 1205 10
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly lle Asp Phe GIn Asp 1230 1225 1220
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser lle Pro Asn 1245 1240 1235
Phe Gly Ser Leu Thr ‏ماي‎ lle Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr 1260 1255 1250
Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gin GIn Val Val Lys Ala Leu Asn Glu 1275 1270 1265
Ser Tyr lle Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn 10 1290 1285 1280
Lys Trp Pro Trp Tyr lle Trp Leu Gly Phe lle Ala Gly Leu Val 1305 1300 1295 15
Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe lle Leu Cys Cys Thr Gly Cys 1320 1315 1310
Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp 1335 1330 1325
Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp Leu Glu Pro His Lys Val His Val His 1350 1345 1340 5 <210> 1255 <211>
PRT <212>
Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus <213> 5 <400>
Met Phe lle Phe Leu Leu Phe Leu Thr Leu Thr Ser Gly Ser Asp Leu 15 10 5 1
Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gin Ala Pro Asn Tyr Thr Gin 30 25 20
His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu lle Phe Arg 45 40 35
Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Gln Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser 60 55 50
Asn Val Thr Gly Phe His Thr lle Asn His Thr Phe Gly Asn Pro Val 15 80 75 70 65 lle Pro Phe Lys Asp Gly lle Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn
95 90 85
Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser 0 110 105 100 5
Ser Val lle lle lle Asn Asn Ser Thr Asn Val Val lle Arg Ala Cys 125 120 115
Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met 140 135 130
Gly Thr GIn Thr His Thr Met lle Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr 160 155 150 145
Phe Glu Tyr lle Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser 175 170 165
Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly 5 190 185 180
Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr Gln Pro lle Asp Val Val Arg Asp 205 200 195 10
Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro lle Phe Lys Leu Pro Leu 220 215 210
Gly lle Asn lle Thr Asn Phe Arg Ala lle Leu Thr Ala Phe Ser Pro 240 235 230 225
Ala GIn Asp lle Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr 255 250 245
Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr lle 270 265 260
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser GIn Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys 0 285 280 275
Ser Val Lys Ser Phe Glu lle Asp Lys Gly lle Tyr GIn Thr Ser Asn 300 295 290 15
Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn lle Thr 320 315 310 305
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser 335 330 325
Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys lle Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr 350 345 340
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly 365 360 355
Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala 5 380 375 370
Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gin lle Ala Pro Gly
400 395 390 385 ‏ماك‎ Thr Gly Val lle Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe 415 410 405 5
Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn lle Asp Ala Thr Ser 430 425 420
Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu 445 440 435
Arg Pro Phe Glu Arg Asp lle Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly 460 455 450
Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp 480 475 470 465
Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly lle Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val 5 495 490 485
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly 510 505 500 10
Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu lle Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn 525 520 515
Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg 540 535 530
Phe GIn Pro Phe GIn Gin Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp 560 555 550 545
Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu lle Leu Asp lle Ser Pro Cys 575 570 565
Ala Phe Gly Gly Val Ser Val lle Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser 10 590 585 580
Glu Val Ala Val Leu Tyr Gin Asp Val Asn Cys Thr Asn Val Ser Ala 605 600 595 15
Ala lle His Ala Asp Gin Leu Thr Pro Ala Trp Arg lle Tyr Ser Thr 620 615 610
Gly Asn Asn Val Phe 60 Thr Gin Ala Gly Cys Leu lle Gly Ala Glu 640 635 630 625
His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp lle Pro lle Gly Ala Gly lle 655 650 645
Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gln Lys 670 665 660
Ser lle Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser lle Ala 15 685 680 675
Tyr Ser Asn Asn Thr lle Ala lle Pro Thr Asn Phe Ser lle Ser lle
700 695 690
Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys 720 715 710 705 5
Asn Met Tyr lle Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu 735 730 725
Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gln Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly lle 750 745 740
Ala Ala Glu GIn Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gin Val Lys 765 760 755
‏داك‎ Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe 780 775 770
Ser ‏(ا6‎ lle Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe lle 5 800 795 790 785
Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met 815 810 805 10
Lys 0 Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp lle Asn Ala Arg Asp Leu lle 830 825 820
Cys Ala GIn Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr 845 840 835
Asp Asp Met lle Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala 860 855 850
Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu GIn lle Pro Phe 880 875 870 865
Ala Met GIn Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly lle Gly Val Thr Gin Asn 10 895 890 885
Val Leu Tyr Glu Asn GIn Lys GIn lle Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala 910 905 900 15 lle Ser GIn lle Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly 925 920 915
Lys Leu GIn Asp Val Val Asn GIn Asn Ala GIn Ala Leu Asn Thr Leu 940 935 930
Val Lys GIn Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala lle Ser Ser Val Leu Asn 960 955 950 945
Asp lle Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gin lle Asp 975 970 965
Arg Leu lle Thr Gly Arg Leu GIn Ser Leu Gin Thr Tyr Val Thr GIn 5 990 985 980
Gin Leu lle Arg Ala Ala Glu lle Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala
1005 1000 995
Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly GIn Ser Lys Arg Val Asp 1020 1015 1010 5
Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gin Ala Ala 1035 1030 1025
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser 0 1050 1045 1040
Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala lle Cys His Glu Gly Lys 1065 1060 1055
Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser 1080 1075 1070
Trp Phe lle Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gin lle lle Thr 5 1095 1090 1085
Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val lle Gly 1110 1105 1100 10 lle lle Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu 60 Pro Glu Leu Asp 1125 1120 1115
Ser Phe Lys Gly Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser 1140 1135 1130
Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp lle Ser Gly lle Asn Ala Ser Val 1155 1150 1145
Val Asn lle GIn Lys Glu lle Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys 1170 1165 1160
Asn Leu Asn Glu Ser Leu lle Asp Leu GIn Glu Leu Gly Lys Tyr 0 1185 1180 1175
Glu GIn Tyr lle Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe lle 1200 1195 1190 15
Ala Gly Leu lle Ala lle Val Met Val Thr lle Leu Leu Cys Cys 1215 1210 1205
Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys Gly 1230 1225 1220
Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys 1245 1240 1235
Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 1255 1250 6 <210> 15 1255 <211>
PRT <212>
Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus <213>
6 <400>
Met Phe lle Phe Leu Leu Phe Leu Thr Leu Thr Ser Gly Ser Asp Leu 15 10 5 1
Asp Arg Cys Thr Thr Phe Asp Asp Val Gin Ala Pro Asn Tyr Thr 0 30 25 20
His Thr Ser Ser Met Arg Gly Val Tyr Tyr Pro Asp Glu lle Phe Arg 40 35
Ser Asp Thr Leu Tyr Leu Thr Glin Asp Leu Phe Leu Pro Phe Tyr Ser 15 60 55 50
Asn Val Thr Gly Phe His Thr lle Asn His Thr Phe Gly Asn Pro Val
80 75 70 65 lle Pro Phe Lys Asp Gly lle Tyr Phe Ala Ala Thr Glu Lys Ser Asn 95 90 85 5
Val Val Arg Gly Trp Val Phe Gly Ser Thr Met Asn Asn Lys Ser 0 110 105 100
Ser Val lle lle lle Asn Asn Ser Thr Asn Val Val lle Arg Ala Cys 125 120 115
Asn Phe Glu Leu Cys Asp Asn Pro Phe Phe Ala Val Ser Lys Pro Met 140 135 130
Gly Thr GIn Thr His Thr Met lle Phe Asp Asn Ala Phe Asn Cys Thr 160 155 150 145
Phe Glu Tyr lle Ser Asp Ala Phe Ser Leu Asp Val Ser Glu Lys Ser 5 175 170 165
Gly Asn Phe Lys His Leu Arg Glu Phe Val Phe Lys Asn Lys Asp Gly 190 185 180 10
Phe Leu Tyr Val Tyr Lys Gly Tyr ‏ماك‎ Pro lle Asp Val Val Arg Asp 205 200 195
Leu Pro Ser Gly Phe Asn Thr Leu Lys Pro lle Phe Lys Leu Pro Leu 220 215 210
Gly lle Asn lle Thr Asn Phe Arg Ala lle Leu Thr Ala Phe Ser Pro 240 235 230 225
Ala GIn Asp lle Trp Gly Thr Ser Ala Ala Ala Tyr Phe Val Gly Tyr 255 250 245
Leu Lys Pro Thr Thr Phe Met Leu Lys Tyr Asp Glu Asn Gly Thr lle 10 270 265 260
Thr Asp Ala Val Asp Cys Ser GIn Asn Pro Leu Ala Glu Leu Lys Cys 285 280 275 15
Ser Val Lys Ser Phe Glu lle Asp Lys Gly lle Tyr GIn Thr Ser Asn 300 295 290
Phe Arg Val Val Pro Ser Gly Asp Val Val Arg Phe Pro Asn lle Thr 320 315 310 305
Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Lys Phe Pro Ser 335 330 325
Val Tyr Ala Trp Glu Arg Lys Lys lle Ser Asn Cys Val Ala Asp Tyr 350 345 340
Ser Val Leu Tyr Asn Ser Thr Phe Phe Ser Thr Phe Lys Cys Tyr Gly 15 365 360 355
Val Ser Ala Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Ser Asn Val Tyr Ala
380 375 370
Asp Ser Phe Val Val Lys Gly Asp Asp Val Arg Gin lle Ala Pro Gly 400 395 390 385 5 ‏ماك‎ Thr Gly Val lle Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro Asp Asp Phe 415 410 405
Met Gly Cys Val Leu Ala Trp Asn Thr Arg Asn lle Asp Ala Thr Ser 430 425 420
Thr Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Tyr Arg Tyr Leu Arg His Gly Lys Leu 445 440 435
Arg Pro Phe Glu Arg Asp lle Ser Asn Val Pro Phe Ser Pro Asp Gly 460 455 450
Lys Pro Cys Thr Pro Pro Ala Leu Asn Cys Tyr Trp Pro Leu Asn Asp 5 480 475 470 465
Tyr Gly Phe Tyr Thr Thr Thr Gly lle Gly Tyr Gln Pro Tyr Arg Val 495 490 485 10
Val Val Leu Ser Phe Glu Leu Leu Asn Ala Pro Ala Thr Val Cys Gly 510 505 500
Pro Lys Leu Ser Thr Asp Leu lle Lys Asn Gln Cys Val Asn Phe Asn 525 520 515
Phe Asn Gly Leu Thr Gly Thr Gly Val Leu Thr Pro Ser Ser Lys Arg 540 535 530
Phe GIn Pro Phe GIn Gin Phe Gly Arg Asp Val Ser Asp Phe Thr Asp 560 555 550 545
Ser Val Arg Asp Pro Lys Thr Ser Glu lle Leu Asp lle Ser Pro Cys 0 575 570 565
Ala Phe Gly Gly Val Ser Val lle Thr Pro Gly Thr Asn Ala Ser Ser 590 585 580 15
Glu Val Ala Val Leu Tyr Gln Asp Val Asn Cys Thr Asn Val Ser Ala 605 600 595
Ala lle His Ala Asp GIn Leu Thr Pro Ala Trp Arg lle Tyr Ser Thr 620 615 610
Gly Asn Asn Val Phe 60 Thr Gin Ala Gly Cys Leu lle Gly Ala Glu 640 635 630 625
His Val Asp Thr Ser Tyr Glu Cys Asp lle Pro lle Gly Ala Gly lle 655 650 645
Cys Ala Ser Tyr His Thr Val Ser Leu Leu Arg Ser Thr Ser Gin Lys 5 670 665 660
Ser lle Val Ala Tyr Thr Met Ser Leu Gly Ala Asp Ser Ser lle Ala
685 680 675
Tyr Ser Asn Asn Thr lle Ala lle Pro Thr Asn Phe Ser lle Ser lle 700 695 690 5
Thr Thr Glu Val Met Pro Val Ser Met Ala Lys Thr Ser Val Asp Cys 720 715 710 705
Asn Met Tyr lle Cys Gly Asp Ser Thr Glu Cys Ala Asn Leu Leu Leu 735 730 725
Gln Tyr Gly Ser Phe Cys Thr Gin Leu Asn Arg Ala Leu Ser Gly lle 750 745 740
Ala Ala Glu GIn Asp Arg Asn Thr Arg Glu Val Phe Ala Gin Val Lys 765 760 755
GIn Met Tyr Lys Thr Pro Thr Leu Lys Tyr Phe Gly Gly Phe Asn Phe 5 780 775 770
Ser ‏(ا6‎ lle Leu Pro Asp Pro Leu Lys Pro Thr Lys Arg Ser Phe lle 800 795 790 785 10
Glu Asp Leu Leu Phe Asn Lys Val Thr Leu Ala Asp Ala Gly Phe Met 815 810 805
Lys 0 Tyr Gly Glu Cys Leu Gly Asp lle Asn Ala Arg Asp Leu lle 830 825 820
Cys Ala GIn Lys Phe Asn Gly Leu Thr Val Leu Pro Pro Leu Leu Thr 845 840 835
Asp Asp Met lle Ala Ala Tyr Thr Ala Ala Leu Val Ser Gly Thr Ala 860 855 850
Thr Ala Gly Trp Thr Phe Gly Ala Gly Ala Ala Leu Gin lle Pro Phe 10 880 875 870 865
Ala Met GIn Met Ala Tyr Arg Phe Asn Gly lle Gly Val Thr Gln Asn 895 890 885 15
Val Leu Tyr Glu Asn GIn Lys GIn lle Ala Asn Gln Phe Asn Lys Ala 910 905 900 lle Ser GIn lle Gln Glu Ser Leu Thr Thr Thr Ser Thr Ala Leu Gly 925 920 915
Lys Leu GIn Asp Val Val Asn GIn Asn Ala GIn Ala Leu Asn Thr Leu 940 935 930
Val Lys GIn Leu Ser Ser Asn Phe Gly Ala lle Ser Ser Val Leu Asn 960 955 950 945
Asp lle Leu Ser Arg Leu Asp Lys Val Glu Ala Glu Val Gln lle Asp 5 975 970 965
Arg Leu lle Thr Gly Arg Leu GIn Ser Leu Gin Thr Tyr Val Thr 0
990 985 980
Gin Leu lle Arg Ala Ala Glu lle Arg Ala Ser Ala Asn Leu Ala Ala 1005 1000 995 5
Thr Lys Met Ser Glu Cys Val Leu Gly GIn Ser Lys Arg Val Asp 1020 1015 1010
Phe Cys Gly Lys Gly Tyr His Leu Met Ser Phe Pro Gin Ala Ala 1035 1030 1025
Pro His Gly Val Val Phe Leu His Val Thr Tyr Val Pro Ser 0 1050 1045 1040
Glu Arg Asn Phe Thr Thr Ala Pro Ala lle Cys His Glu Gly Lys 1065 1060 1055
Ala Tyr Phe Pro Arg Glu Gly Val Phe Val Phe Asn Gly Thr Ser 5 1080 1075 1070
Trp Phe lle Thr Gln Arg Asn Phe Phe Ser Pro Gin lle lle Thr 1095 1090 1085 10
Thr Asp Asn Thr Phe Val Ser Gly Asn Cys Asp Val Val lle Gly 1110 1105 1100 lle lle Asn Asn Thr Val Tyr Asp Pro Leu 60 Pro Glu Leu Asp 1125 1120 1115
Ser Phe Lys Gly Glu Leu Asp Lys Tyr Phe Lys Asn His Thr Ser 1140 1135 1130
Pro Asp Val Asp Leu Gly Asp lle Ser Gly lle Asn Ala Ser Val 1155 1150 1145
Val Asn lle GIn Lys Glu lle Asp Arg Leu Asn Glu Val Ala Lys 10 1170 1165 1160
Asn Leu Asn Glu Ser Leu lle Asp Leu GIn Glu Leu Gly Lys Tyr 1185 1180 1175 15
Glu GIn Tyr lle Lys Trp Pro Trp Tyr Val Trp Leu Gly Phe lle 1200 1195 1190
Ala Gly Leu lle Ala lle Val Met Val Thr lle Leu Leu Cys Cys 1215 1210 1205
Met Thr Ser Cys Cys Ser Cys Leu Lys Gly Ala Cys Ser Cys Gly 1230 1225 1220
Ser Cys Cys Lys Phe Asp Glu Asp Asp Ser Glu Pro Val Leu Lys 1245 1240 1235
Gly Val Lys Leu His Tyr Thr 5 1255 1250 7 <210>
2544 <211>
DNA <212>
Artificial Sequence <213> <220> 5
Chimeric protein that includes the 51 subunit of Middle East <223>
Respiratory Syndrome Coronavirus rused to a C-terminal part of (Rabies virus G glycoprotein (amino acids 428-524 7 <400> 10 atgattcact ctgtgttcct gctgatgttc ctgctgacac caacagagtc ctatgtggat 60 gtgggacctg actctgtgaa gtctgcctgt attgaggtgg acatccaaca gaccttctit 120 gacaagacct ggccaagacc aattgatgtg agcaaggctg atggcatcat ctacccacag 15 180 ggcaggacct acagcaacat caccatcacc taccagggac tgtttccata ccagggagat 240 catggagata tgtatgtcta ctctgctggt catgccacag gcaccacacc acagaaactg 300 tttigtggcta actacagcca ggatgtgaag cagtttgcca atggctttgt ggtgaggatt 360 5 ggagcagcag ccaacagcac aggcacagtg attatcagcc caagcacctc tgccaccatc 420 aggaagattt accctgcectt tatgctgggce tcctetgtgg gcaacttcte tgatggcaag 480 10 atgggcaggt tcttcaacca caccctggtg ctgctgectg atggctgtgg caccctgcetg 540 agggctttct actgtatctt ggaaccaagg tctggcaacc actgtcctge tggcaactcc 600 15 tacacctcct ttgccaccta ccacacacct gccacagact gttctgatgg caactacaac 660 aggaatgcct ccctgaactc cttcaaggaa tacttcaacc tgaggaactg tacctttatg 720 20 tacacctaca acatcacaga ggatgagatt ttggagtggt ttggcatcac ccagacagcc 780 cagggagtgc atctgttctc gagcagatat gtggacctct atggaggcaa tatgttccag 5 840 tttgccaccc tgcctgtcta tgacaccatc aaatactaca gcatcatccc acacagcatc 900 aggagcatcc agtctgacag gaaggcttgg gctgccttct atgtctacaa actccaacca 960 ctgaccttcc tgctggactt ctetgtggat ggctacatca ggagggctat tgactgtggce 1020 ttcaatgacc tgagccaact tcactgttcc tatgagtcct ttgatgtgga gtctggagtc 1080 tactctgtgt cctectttga ggctaageca tetggetetg tggtggaaca ggctgaggga 1140 gtggagtgtg acttcagccc actgctgtct ggcacacctc cacaggtcta caacttcaag
1200 agactggtgt tcaccaactg taactacaac ctgaccaaac tgctgtccct gttctctgtg 1260 aatgacttca cttgtagcca gattagccct getgccattg ccagcaactg ttactcctce 1320 ctgattctgg actactictc ctacccactg agtatgaagt ctgacctgtc tgtgtcctct 1380 gctggaccaa tcagccagtt caactacaag cagtccttca gcaacccaac ttgtctgatt 10
1440 ctggctacag tgccacacaa cctgaccacc atcaccaagc cactgaaata ctcctacatc
1500 aacaagtgta gcagactgct gtctgatgac aggacagagg tgccacaact agtgaatgcc
1560 aaccaataca gcccatgtgt gagcattgtg ccaagcacag tgtgggagga tggagactac 1620 20 tacaggaagc aacttagccc attggaggga ggaggctggce tggtggcatc tggcagcaca 1680 gtggctatga cagaacaact ccaaatgggc tttggcatca cagtccaata tggcacagac 5 1740 accaactctg tgtgtccaaa attggagttt gccaatgaca ccaagattgc cagccaactt 1800 ggcaactgtg tggaatactc cctctatgga gtgtctggca ggggagtgtt ccagaactgt 1860 actgctgtgg gagtgagaca acagaggttt gtctatgatg cctaccagaa cctggtgggce 1920 15 tactactctg atgatggcaa ctactactgt ctgagggctt gtgtgtctgt gectgtgtct 190 gtgatttatg acaaggagac caagacccat gccaccctgt ttggctctgt ggcttgtgaa 2040 20 cacatctcca gcacaatgag tcaatacagc aggagcacca ggagtatgct gaaaaggagg 2100 gacagcacat atggaccact ccaaacacct gtgggctgtg tgctgggact ggtgaactcc 2160 5 tccetgtttg tggaggactg taaactgcca ctgggacaat ccctgtgtge cctgectgac 2220 acaccaagca ccctgacacc aaggtctgtg ggagatgagg ccgaagactt tgtggaagtc 0 2280 cacctgcctg atgtgcataa ccaggtgtct ggcgtcgacc tgggactgcc aaattgggge 2340 aagtacgtgc tgctgagtgc tggagcactg actgccctga tgctgatcat tttcctgatg 2400 acctgctgtc ggcgcgtgaa cagaagtgag cccactcagc acaatctgcg aggaaccggg 2460 agagaagtgt cagtcacacc tcagagcggg aaaatcatta gtagttggga atcacataaa 2520 agcgggggcg agaccaggct gtga 2544 8 <210> 847 <211>
PRT <212>
Artificial Sequence <213> 10 <220>
Chimeric protein that includes the 51 subunit of Middle East <223>
Respiratory Syndrome Coronavirus rused to a C-terminal part of (Rabies virus G glycoprotein (amino acids 428-524 15 8 <400>
Met lle His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu
15 10 5 1
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys lle Glu 30 25 20 5
Val Asp lle Gln GIn Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro lle 45 40 35
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly lle lle Tyr Pro Gin Gly Arg Thr Tyr 60 55 50
Ser Asn lle Thr lle Thr Tyr Gin Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp 80 75 70 65
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr 95 90 85
Pro GIn Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gin Asp Val Lys GIn Phe 5 110 105 100
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg lle Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly 125 120 115 10
Thr Val lle lle Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr lle Arg Lys lle Tyr 140 135 130
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys 160 155 150 145
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys 175 170 165
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys lle Leu Glu Pro Arg Ser Gly 190 185 180
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His 0 205 200 195
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser 220 215 210 15
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met 240 235 230 225
Tyr Thr Tyr Asn lle Thr Glu Asp Glu lle Leu Glu Trp Phe Gly lle 255 250 245
Thr Gin Thr Ala GIn Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp 270 265 260
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gin Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp 285 280 275
Thr lle Lys Tyr Tyr Ser lle lle Pro His Ser lle Arg Ser lle GIn 5 300 295 290
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro
320 315 310 305
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr lle Arg Arg Ala 335 330 325 5 lle Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser GIn Leu His Cys Ser Tyr Glu 350 345 340
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala 365 360 355
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gin Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp 380 375 370
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gin Val Tyr Asn Phe Lys 400 395 390 385
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser 5 415 410 405
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gin lle Ser Pro Ala Ala 430 425 420 10 lle Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu lle Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr 445 440 435
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro lle 460 455 450
Ser GIn Phe Asn Tyr Lys GIn Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu lle 480 475 470 465
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr lle Thr Lys Pro Leu Lys 495 490 485
Tyr Ser Tyr lle Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr 10 510 505 500
Glu Val Pro Gin Leu Val Asn Ala Asn GIn Tyr Ser Pro Cys Val Ser 525 520 515 15 lle Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys 0 540 535 530
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr 560 555 550 545
Val Ala Met Thr Glu GIn Leu Gin Met Gly Phe Gly lle Thr Val Gin 575 570 565
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn 590 585 580
Asp Thr Lys lle Ala Ser GIn Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu 5 605 600 595
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gin Asn Cys Thr Ala Val Gly
620 615 610
Val Arg Gln GIn Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gin Asn Leu Val Gly 640 635 630 625 5
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser 655 650 645
Val Pro Val Ser Val lle Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr 670 665 660
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His lle Ser Ser Thr Met Ser 0 685 680 675
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr 700 695 690
Gly Pro Leu GIn Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser 5 720 715 710 705
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly GIn Ser Leu Cys 735 730 725 10
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Gly Asp 750 745 740
Glu Ala Glu Asp Phe Val Glu Val His Leu Pro Asp Val His Asn 07 765 760 755
Val Ser Gly Val Asp Leu Gly Leu Pro Asn Trp Gly Lys Tyr Val Leu 780 775 770
Leu Ser Ala Gly Ala Leu Thr Ala Leu Met Leu lle lle Phe Leu Met 800 795 790 785
Thr Cys Cys Arg Arg Val Asn Arg Ser Glu Pro Thr Gln His Asn Leu 0 815 810 805
Arg Gly Thr Gly Arg Glu Val Ser Val Thr Pro GIn Ser Gly Lys lle 830 825 820 15 lle Ser Ser Trp Glu Ser His Lys Ser Gly Gly Glu Thr Arg Leu 845 840 835
9 <210> 4062 <211>
DNA <212> 5
Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus <213> 9 <400> atgatacact cagtgtttct actgatgttc ttgttaacac ctacagaaag ttacgttgat 60 gtagggccag attctgttaa gtctgcttgt attgaggttg atatacaaca gactttcttt 120 gataaaactt ggcctaggcc aattgatgtt tctaaggctg acggtattat ataccctcaa 180 ggccgtacat attctaacat aactatcact tatcaaggtc tttttcccta tcagggagac 240 15 catggtgata tgtatgttta ctctgcagga catgctacag gcacaactcc acaaaagttg 300
1110130-18 actattctca ggacgtcaaa cagtttgcta atgggtttgt cgtccgtata 360 ggagcagctg ccaattccac tggcactgtt attattagcc catctaccag cgctactata 420 cgaaaaattt accctgcttt tatgctgggt tcttcagttg gtaattictc agatggtaaa 480 5 atgggccgct tcttcaatca tactctagtt ctittgcceg atggatgtgg cactttactt 540 agagcttttt attgtattct agagcctcgce tectggaaate attgtcctge tggcaattee 600 tatacttctt ttgccactta tcacactcct gcaacagatt gttctgatgg caattacaat 660 cgtaatgcca gtctgaactc ttttaaggag tattttaatt tacgtaactg cacctttatg 720 tacacttata acattaccga agatgagatt ttagagtggt ttggcattac acaaactgct 780 15 caaggtgttc acctcttctc atctcggtat gttgattigt acggcggcaa tatgtticaa 840 tttgccacct tgcctgttta tgatactatt aagtattatt ctatcattcc tcacagtatt 900 cgttctatcc aaagtgatag aaaagcttgg gctgcectict acgtatataa acttcaaccg 960 ttaactttcc tgttggattt ttctgttgat ggttatatac gcagagctat agactgtggt 1020 tttaatgatt tgtcacaact ccactgctca tatgaatcct tcgatgttga atctggagtt 1080 tattcagttt cgtctttcga agcaaaacct tctggctcag ttgtggaaca ggctgaaggt 1140 gttgaatgtg atttttcacc tcttctgtct ggcacacctc ctcaggttta taatttcaag 1200 10 cgtttggttt ttaccaattg caattataat cttaccaaat tgctttcact tttttctgtg 1260 aatgatttta cttgtagtca aatatctcca gcagcaattg ctagcaactg ttattctica 1320 ctgattttgg attacttttc atacccactt agtatgaaat ccgatctcag tgttagttct 10 gctggtccaa tatcccagtt taattataaa cagtcctttt ctaatcccac atgtttgatt 140 ttagcgactg ttcctcataa ccttactact attactaagce ctcttaagta cagctatatt 10 aacaagtgct ctcgtcttct ttctgatgat cgtactgaag tacctcagtt agtgaacget 1560 aatcaatact caccctgtgt atccattgtc ccatccactg tgtgggaaga cggtgattat 1620 5 tataggaaac aactatctcc acttgaaggt ggtggctggc ttgtigctag tggctcaact 1680 gttgccatga ctgagcaatt acagatgggc tttggtatta cagttcaata tggtacagac 1740 accaatagtg tttgccccaa gcttgaattt gctaatgaca caaaaattgc ctctcaatta 1800 ggcaattgcg tggaatattc cctctatggt gtttcgggec gtggtgtttt tcagaattge 1860 acagctgtag gtgttcgaca gcagcgcttt gtttatgatg cgtaccagaa tttagttggce 1920 15 tattattctg atgatggcaa ctactactgt ttgcgtgctt gtgttagtgt tectgtttct 1980 gtcatctatg ataaagaaac taaaacccac gctactctat ttggtagtgt tgcatgtgaa 2040 cacatttctt ctaccatgtc tcaatactcc cgttctacge gatcaatgcet taaacggecga 2100 gattctacat atggccccct tcagacacct gttggttgtg tcctaggact tgttaattcc 160 tctttgttcg tagaggactg caagttgcct cttggtcaat ctctetgtge tcttcctgac 2220 acacctagta ctctcacacc tcgcagtgtg cgctctgttc caggtgaaat gcgcettggca 2280 tccattgctt ttaatcatcc tattcaggtt gatcaactta atagtagtta ttttaaatta 2340 agtataccca ctaatttttc ctttggtgtg actcaggagt acattcagac aaccattcag 2400 aaagttactg ttgattgtaa acagtacgtt tgcaatggtt tccagaagtg tgagcaatta 2460 15 ctgcgegagt atggccagtt tigttccaaa ataaaccagg ctctccatgg tgccaattta 2520 cgccaggatg attctgtacg taatttgttt gcgagcgtga aaagctctca atcatctcct 2580 atcataccag gttttggagg tgactttaat ttgacactic tagaacctgt tictatatct 60 actggcagtc gtagtgcacg tagtgctatt gaggatttgc tatttgacaa agtcactata 2700 gctgatcctg gttatatgca aggttacgat gattgcatgc agcaaggtcc agcatcagct
2760 cgtgatctta tttgtgctca atatgtggct ggttacaaag tattacctcc tcttatggat 2820 gttaatatgg aagccgcgta tacttcatct ttgcttggca gcatagcagg tgttggetgg 0 actgctggct tatcctcctt tgctgctatt ccatttgcac agagtatctt ttataggtta 2940 aacggtgttg gcattactca acaggttctt tcagagaacc aaaagcttat tgccaataag 5
3000 tttaatcagg ctctgggagce tatgcaaaca ggcttcacta caactaatga agcttttcag
3060 aaggttcagg atgctgtgaa caacaatgca caggctctat ccaaattagc tagcgagcta
3120 tctaatactt ttggtgctat ttccgcctct attggagaca tcatacaacg tcttgatgtt 3180 ctcgaacagg acgcccaaat agacagactt attaatggcc gtttgacaac actaaatgct
3240 titgttgcac agcagcttgt tcgttccgaa tcagctgctce tttccgetca attggctaaa 3300 gataaagtca atgagtgtgt caaggcacaa tccaagcgtt ctggattttg cggtcaaggc
3360 acacatatag tgtcctttgt tgtaaatgcc cctaatggcc tttacttcat gcatgttggt 10 tattacccta gcaaccacat tgaggttgtt tctgcttatg gtctttgcga tgcagctaac 3480 cctactaatt gtatagcccc tgttaatggce tactttatta aaactaataa cactaggatt 3540 gttgatgagt ggtcatatac tggctcgtcc tictatgcac ctgagcccat tacctcectt 3600 20 aatactaagt atgttgcacc acaggtgaca taccaaaaca tttctactaa cctccctect 3660 cctcttctcg gcaattccac cgggattgac ticcaagatg agttggatga gtttttcaaa 3720 5 aatgttagca ccagtatacc taattttggt tccctaacac agattaatac tacattactc 3780 gatcttacct acgagatgtt gtctcticaa caagttgtta aagcccttaa tgagtcttac 3840 atagacctta aagagcttgg caattatact tattacaaca aatggccgtg gtacatttgg 3900 cttggtttca ttgctgggct tgttgcctta gctctatgeg tcttcttcat actgtgctge 3960 actggttgtg gcacaaactg tatgggaaaa cttaagtgta atcgttgttg tgatagatac 4020 15 gaggaatacg acctcgagcc gcataaggtt catgttcact aa 4062
10 <210> 1353 <211>
PRT <212>
Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus <213> <400>
Met lle His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu 10 5 1 10
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys lle Glu 25 20 15
Val Asp lle Gln GIn Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro lle 40 35
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly lle lle Tyr Pro Gin Gly Arg Thr Tyr 60 55 50
Ser Asn lle Thr lle Thr Tyr Gln Gly Leu Phe Pro Tyr GIn Gly Asp 5 80 75 70 65
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr 95 90 85 10
Pro GIn Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gin Asp Val Lys 60 Phe 110 105 100
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg lle Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly 125 120 115
Thr Val lle lle Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr lle Arg Lys lle Tyr 140 135 130
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys 160 155 150 145
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys 0 175 170 165
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys lle Leu Glu Pro Arg Ser Gly 190 185 180 15
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His 205 200 195
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser 220 215 210
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met 240 235 230 225
Tyr Thr Tyr Asn lle Thr Glu Asp Glu lle Leu Glu Trp Phe Gly lle 255 250 245
Thr Gln Thr Ala Gin Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp 5 270 265 260
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gin Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp
285 280 275
Thr lle Lys Tyr Tyr Ser lle lle Pro His Ser lle Arg Ser lle 0 300 295 290 5
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro 320 315 310 305
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr lle Arg Arg Ala 335 330 325 lle Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser GIn Leu His Cys Ser Tyr Glu 350 345 340
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala 365 360 355
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gin Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp 5 380 375 370
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gin Val Tyr Asn Phe Lys 400 395 390 385 10
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser 415 410 405
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gin lle Ser Pro Ala Ala 430 425 420 lle Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu lle Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr 445 440 435
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro lle 460 455 450
Ser GIn Phe Asn Tyr Lys GIn Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu lle 0 480 475 470 465
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr lle Thr Lys Pro Leu Lys 495 490 485 15
Tyr Ser Tyr lle Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr 510 505 500
Glu Val Pro Gin Leu Val Asn Ala Asn GIn Tyr Ser Pro Cys Val Ser 525 520 515 lle Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys 0 540 535 530
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr 560 555 550 545
Val Ala Met Thr Glu GIn Leu Gin Met Gly Phe Gly lle Thr Val GIn 5 575 570 565
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn
590 585 580
Asp Thr Lys lle Ala Ser GIn Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu 605 600 595 5
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gin Asn Cys Thr Ala Val Gly 620 615 610
Val Arg Gin GIn Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly 640 635 630 625
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser 655 650 645
Val Pro Val Ser Val lle Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr 670 665 660
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His lle Ser Ser Thr Met Ser GIn 5 685 680 675
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr 700 695 690 10
Gly Pro Leu GIn Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser 720 715 710 705
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly GIn Ser Leu Cys 735 730 725
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser 750 745 740
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser lle Ala Phe Asn His Pro lle 765 760 755
GIn Val Asp GIn Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser lle Pro Thr 0 780 775 770
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gin Glu Tyr lle ‏ماى‎ Thr Thr lle Gin 800 795 790 785 15
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys GIn Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gin Lys 815 810 805
Cys Glu GIn Leu Leu Arg Glu Tyr Gly Gln Phe Cys Ser Lys lle Asn 830 825 820
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gin Asp Asp Ser Val Arg Asn 845 840 835
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser GIn Ser Ser Pro lle lle Pro Gly 860 855 850
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser lle Ser 5 880 875 870 865
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala lle Glu Asp Leu Leu Phe Asp
895 890 885
Lys Val Thr lle Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gin Gly Tyr Asp Asp Cys 910 905 900 5
Met Gin GIn Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu lle Cys Ala Gin Tyr 925 920 915
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu 940 935 930
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser lle Ala Gly Val Gly Trp 960 955 950 945
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala lle Pro Phe Ala GIn Ser lle 975 970 965
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly lle Thr Gln Gln Val Leu Ser Glu 5 990 985 980
Asn GIn Lys Leu lle Ala Asn Lys Phe Asn GIn Ala Leu Gly Ala Met 1005 1000 995 10
GIn Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe 60 Lys Val GIn 1020 1015 1010
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gin Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser 1035 1030 1025
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala lle Ser Ala Ser lle Gly Asp 1050 1045 1040 lle lle Gin Arg Leu Asp Val Leu Glu Gln Asp Ala Gin lle Asp 1065 1060 1055
Arg Leu lle Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala 10 1080 1075 1070
Gln GIn Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gin Leu 1095 1090 1085 15
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala 60 Ser Lys Arg 1110 1105 1100
Ser Gly Phe Cys Gly Gin Gly Thr His lle Val Ser Phe Val Val 1125 1120 1115
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro 1140 1135 1130
Ser Asn His lle Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala 1155 1150 1145
Ala Asn Pro Thr Asn Cys lle Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe lle 15 1170 1165 1160
Lys Thr Asn Asn Thr Arg lle Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly
1185 1180 1175
Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro lle Thr Ser Leu Asn Thr Lys 1200 1195 1190 5
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gin Asn lle Ser Thr Asn Leu 1215 1210 1205
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly lle Asp Phe GIn Asp 1230 1225 1220
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser lle Pro Asn 1245 1240 1235
Phe Gly Ser Leu Thr ‏ماي‎ lle Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr 1260 1255 1250
Tyr Glu Met Leu Ser Leu GIn ‏ماي‎ Val Val Lys Ala Leu Asn Glu 5 1275 1270 1265
Ser Tyr lle Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn 1290 1285 1280 10
Lys Trp Pro Trp Tyr lle Trp Leu Gly Phe lle Ala Gly Leu Val 1305 1300 1295
Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe lle Leu Cys Cys Thr Gly Cys 1320 1315 1310
Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn Arg Cys Cys Asp 1335 1330 1325
Arg Tyr Glu Glu Tyr Asp Leu Glu Pro His Lys Val His Val His 1350 1345 1340 11 <210> 10 3975 <211>
DNA <212>
Artificial Sequence <213> <220> 15
Middle Easter Respiratory Syndrom Coronavirus spike <223> glycoprotein tuncation — 29 amino acid deleted from the C-terminus
11 >400< atgatacact cagtgtttct actgatgttc ttgttaacac ctacagaaag ttacgttgat 60 gtagggccag attctgttaa gtctgcttgt attgaggttg atatacaaca gactttcttt 120 gataaaactt ggcctaggcc aattgatgtt tctaaggctg acggtattat ataccctcaa 180 ggccgtacat attctaacat aactatcact tatcaaggtc tttttcccta tcagggagac 240 catggtgata tgtatgttta ctctgcagga catgctacag gcacaactcc acaaaagttg 0 300 ttigtagcta actattctca ggacgtcaaa cagtttgcta atgggtttgt cgtccgtata 360 ggagcagctg ccaattccac tggcactgtt attattagcc catctaccag cgctactata 420 15 cgaaaaattt accctgcttt tatgctgggt tcttcagttg gtaatttctc agatggtaaa 480 atgggccgct tcttcaatca tactctagtt ctittgcceg atggatgtgg cactttactt 540 agagcttttt attgtattct agagcctcgce tectggaaate ‏عواععاو1ة3‎ tggcaattee 600 tatacttctt ttgccactta tcacactcct gcaacagatt gttctgatgg caattacaat 660 cgtaatgcca gtctgaactc ttttaaggag tattttaatt tacgtaactg cacctttatg 720 tacacttata acattaccga agatgagatt ttagagtggt ttggcattac acaaactgct 780 caaggtgttc acctcttctc atctcggtat gttgattigt acggcggcaa tatgtticaa 840 10 tttgccacct tgcctgttta tgatactatt aagtattatt ctatcattcc tcacagtatt 900 cgttctatcc aaagtgatag aaaagcttgg gctgcecttct acgtatataa acttcaaccg 960 ttaactttcc tgttggattt ttctgttgat ggttatatac gcagagctat agactgtggt 1020 tttaatgatt tgtcacaact ccactgctca tatgaatcct tcgatgttga atctggagtt 1080 tattcagttt cgtctttcga agcaaaacct tctggctcag ttgtggaaca ggctgaaggt 1140 gttgaatgtg atttttcacc tcttctgtct ggcacaccte ctcaggttta taatttcaag 1200 cgtttggttt ttaccaattg caattataat cttaccaaat tgctttcact tttttctgtg 1260 5 aatgatttta cttgtagtca aatatctcca gcagcaattg ctagcaactg ttattctica 1320 ctgattttgg attacttttc atacccactt agtatgaaat ccgatctcag tgttagttct 10 gctggtccaa tatcccagtt taattataaa cagtcctttt ctaatcccac atgtttgatt 140 ttagcgactg ttcctcataa ccttactact attactaagc ctcttaagta cagctatatt 0 aacaagtgct ctcgtcttct ttctgatgat cgtactgaag tacctcagtt agtgaacgect 1560 5 aatcaatact caccctgtgt atccattgtc ccatccactg tgtgggaaga cggtgattat 1620 tataggaaac aactatctcc acttgaaggt ggtggcetggce ttgttgctag tggctcaact 10 gttgccatga ctgagcaatt acagatgggc tttggtatta cagttcaata tggtacagac 1740 accaatagtg tttgccccaa gcttgaattt gctaatgaca caaaaattgc ctctcaatta 1800 ggcaattgcg tggaatattc cctctatggt gtttcgggec gtggtgtttt tcagaattge 1860 acagctgtag gtgttcgaca gcagcgcttt gtttatgatg cgtaccagaa tttagttggc 1920 tattattctg atgatggcaa ctactactgt ttgcgtgctt gtgttagtgt tectgtttct 1980 0 gtcatctatg ataaagaaac taaaacccac gctactctat ttggtagtgt tgcatgtgaa 2040 cacatttctt ctaccatgtc tcaatactcc cgttctacge gatcaatgcet taaacggecga 2100 gattctacat atggccccct tcagacacct gttggtigtg tcctaggact tgttaattcc 160 tctttgttcg tagaggactg caagttgcct cttggtcaat ctctetgtge tcttcctgac 2220 acacctagta ctctcacacc tcgcagtgtg cgctctgttc caggtgaaat gcgcttggca 2280 tccattgctt ttaatcatcc tattcaggtt gatcaactta atagtagtta ttttaaatta 2340 agtataccca ctaatttttc ctttggtgtg actcaggagt acattcagac aaccattcag 2400 aaagttactg ttgattgtaa acagtacgtt tgcaatggtt tccagaagtg tgagcaatta 2460 ctgcgcgagt atggccagtt ttgttccaaa ataaaccagg ctctccatgg tgccaattta 2520 0 cgccaggatg attctgtacg taatttgttt gcgagcgtga aaagctctca atcatctcct 2580 atcataccag gttttggagg tgactttaat ttgacactic tagaacctgt tictatatct 60 actggcagtc gtagtgcacg tagtgctatt gaggatttgc tatttgacaa agtcactata 2700 gctgatcctg gttatatgca aggttacgat gattgcatgc agcaaggtcc agcatcagcet 2760 cgtgatctta tttgtgctca atatgtggct ggttacaaag tattacctcc tcttatggat 2820 gttaatatgg aagccgcegta tacttcatct ttgcttggca gcatagcagg tgttggetgg 2880 actgctggct tatcctcctt tgctgctatt ccatttgcac agagtatctt ttataggtta 2940 aacggtgttg gcattactca acaggttctt tcagagaacc aaaagcttat tgccaataag
3000 tttaatcagg ctctgggagce tatgcaaaca ggcttcacta caactaatga agcttttcag
3060 aaggttcagg atgctgtgaa caacaatgca caggctctat ccaaattagc tagcgagcta 3120 15 tctaatactt ttggtgctat ttccgcctct attggagaca tcatacaacg tcttgatgtt 3180 ctcgaacagg acgcccaaat agacagactt attaatggcc gtttgacaac actaaatgct 3240 20 titgttgcac agcagcttgt tcgttccgaa tcagctgctce 1160-1-68 138 3300 gataaagtca atgagtgtgt caaggcacaa tccaagcgtt ctggattttg cggtcaaggc 3360 5 acacatatag tgtcctttgt tgtaaatgcc cctaatggcc tttacttcat gcatgttggt 10 tattacccta gcaaccacat tgaggttgtt tctgcttatg gtctttgcga tgcagctaac 3480 cctactaatt gtatagcccc tgttaatggce tactttatta aaactaataa cactaggatt 3540 gttgatgagt ggtcatatac tggctcgtcc ttctatgcac ctgagcccat tacctcectt | 3600 aatactaagt atgttgcacc acaggtgaca taccaaaaca tttctactaa cctccctecet 15 3660 cctcttctcg gcaattccac cgggattgac ttccaagatg agttggatga gtttttcaaa 3720 aatgttagca ccagtatacc 138111091 tccctaacac agattaatac tacattactic 3780 gatcttacct acgagatgtt gtctcticaa caagttgtta aagcccttaa tgagtcttac 3840 atagacctta aagagcttgg caattatact tattacaaca aatggccgtg gtacatttgg 3900 5 cttggtttca ttgctgggct tgttgcctta gctctatgeg tcttcttcat actgtgctge 3960 actggttgtg gctaa 3975 12 <210> 1324 <211>
PRT <212>
Artificial Sequence <213> 15 <220>
Middle Easter Respiratory Syndrom Coronavirus spike <223> glycoprotein tuncation - 29 amino acid deleted from the C-terminus 12 <400>
Met lle His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu 5 10 5 1
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys lle Glu 25 20 10
Val Asp lle Gln GIn Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro lle 40 35 15
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly lle lle Tyr Pro Gin Gly Arg Thr Tyr 60 55 50
Ser Asn lle Thr lle Thr Tyr Gin Gly Leu Phe Pro Tyr Gin Gly Asp 80 75 70 65
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr 95 90 85
Pro GIn Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gln Asp Val Lys 60 Phe 0 110 105 100
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg lle Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly 125 120 115 15
Thr Val lle lle Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr lle Arg Lys lle Tyr 140 135 130
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys 160 155 150 145
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys 175 170 165
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys lle Leu Glu Pro Arg Ser Gly 190 185 180
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His 15 205 200 195
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser
220 215 210
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met 240 235 230 225 5
Tyr Thr Tyr Asn lle Thr Glu Asp Glu lle Leu Glu Trp Phe Gly lle 255 250 245
Thr Gin Thr Ala GIn Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp 270 265 260
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gin Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp 285 280 275
Thr lle Lys Tyr Tyr Ser lle lle Pro His Ser lle Arg Ser lle 0 300 295 290
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu GIn Pro 5 320 315 310 305
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr lle Arg Arg Ala 335 330 325 10 lle Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser GIn Leu His Cys Ser Tyr Glu 350 345 340
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala 365 360 355
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gin Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp 380 375 370
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gin Val Tyr Asn Phe Lys 400 395 390 385
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser 10 415 410 405
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gin lle Ser Pro Ala Ala 430 425 420 15 lle Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu lle Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr 445 440 435
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro lle 460 455 450
Ser GIn Phe Asn Tyr Lys Gln Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu lle 480 475 470 465
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr lle Thr Lys Pro Leu Lys 495 490 485
Tyr Ser Tyr lle Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr 15 510 505 500
Glu Val Pro Gin Leu Val Asn Ala Asn GIn Tyr Ser Pro Cys Val Ser
525 520 515 lle Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys 0 540 535 530 5
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr 560 555 550 545
Val Ala Met Thr Glu GIn Leu Gin Met Gly Phe Gly lle Thr Val Gin 575 570 565
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn 590 585 580
Asp Thr Lys lle Ala Ser 60 Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu 605 600 595
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gln Asn Cys Thr Ala Val Gly 5 620 615 610
Val Arg Gin GIn Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gln Asn Leu Val Gly 640 635 630 625 10
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser 655 650 645
Val Pro Val Ser Val lle Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr 670 665 660
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His lle Ser Ser Thr Met Ser Gin 685 680 675
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr 700 695 690
Gly Pro Leu GIn Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser 10 720 715 710 705
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly 60 Ser Leu Cys 735 730 725 15
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser 750 745 740
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser lle Ala Phe Asn His Pro lle 765 760 755
Gln Val Asp GIn Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser lle Pro Thr 780 775 770
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gin Glu Tyr lle Gin Thr Thr lle Gin 800 795 790 785
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys GIn Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gin Lys 5 815 810 805
Cys Glu GIn Leu Leu Arg Glu Tyr Gly 60 Phe Cys Ser Lys lle Asn
830 825 820
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gin Asp Asp Ser Val Arg Asn 845 840 835 5
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser GIn Ser Ser Pro lle lle Pro Gly 860 855 850
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser lle Ser 880 875 870 865
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala lle Glu Asp Leu Leu Phe Asp 895 890 885
Lys Val Thr lle Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gin Gly Tyr Asp Asp Cys 910 905 900
Met Gin GIn Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu lle Cys Ala GIn Tyr 5 925 920 915
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu 940 935 930 10
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser lle Ala Gly Val Gly Trp 960 955 950 945
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala lle Pro Phe Ala GIn Ser lle 975 970 965
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly lle Thr Gln ‏0ا6‎ Val Leu Ser Glu 990 985 980
Asn GIn Lys Leu lle Ala Asn Lys Phe Asn GIn Ala Leu Gly Ala Met 1005 1000 995
GIn Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe Gin Lys Val Gin 0 1020 1015 1010
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gin Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser 1035 1030 1025 15
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala lle Ser Ala Ser lle Gly Asp 1050 1045 1040 lle lle Gin Arg Leu Asp Val Leu Glu GIn Asp Ala Gin lle Asp 1065 1060 1055
Arg Leu lle Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala 1080 1075 1070
Gln GIn Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gin Leu 1095 1090 1085
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala GIn Ser Lys Arg 5 1110 1105 1100
Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His lle Val Ser Phe Val Val
1125 1120 1115
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro 1140 1135 1130 5
Ser Asn His lle Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala 1155 1150 1145
Ala Asn Pro Thr Asn Cys lle Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe lle 1170 1165 1160
Lys Thr Asn Asn Thr Arg lle Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly 1185 1180 1175
Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro lle Thr Ser Leu Asn Thr Lys 1200 1195 1190
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr Gin Asn lle Ser Thr Asn Leu 5 1215 1210 1205
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly lle Asp Phe GIn Asp 1230 1225 1220 10
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser lle Pro Asn 1245 1240 1235
Phe Gly Ser Leu Thr Gin lle Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr 1260 1255 1250
Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gin GIn Val Val Lys Ala Leu Asn Glu 1275 1270 1265
Ser Tyr lle Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn 1290 1285 1280
Lys Trp Pro Trp Tyr lle Trp Leu Gly Phe lle Ala Gly Leu Val 10 1305 1300 1295
Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe lle Leu Cys Cys Thr Gly Cys 1320 1315 1310 15
Gly
13 <210> 4005 >211<
DNA <212> 5
Artificial Sequence <213> <220>
Middle Easter Respiratory Syndrom Coronavirus spike <223> glycoprotein 10 tuncation — 19 amino acid deleted from the C-terminus 13 <400> atgatacact cagtgtttct actgatgttc ttgttaacac ctacagaaag ttacgttgat 60 gtagggccag attctgttaa gtctgcttgt attgaggttg atatacaaca gactttcttt 120 gataaaactt ggcctaggcc aattgatgtt tctaaggctg acggtattat ataccctcaa 180 ggccgtacat attctaacat aactatcact tatcaaggtc tttttcccta tcagggagac 240 catggtgata tgtatgttta ctctgcagga catgctacag gcacaactcc acaaaagttg 300 ttigtagcta actattctca ggacgtcaaa cagtttgcta atgggtttgt cgtccgtata 360 ggagcagctg ccaattccac tggcactgtt attattagcc catctaccag cgctactata 420 cgaaaaattt accctgcttt tatgctgggt tcttcagttg gtaatttctc agatggtaaa 480 10 atgggccgct tcttcaatca tactctagtt ctittgcceg atggatgtgg cactttactt 540 agagcttttt attgtattct agagcctcgce tectggaaate attgtcctge tggcaattee 600 tatacttctt ttgccactta tcacactcct gcaacagatt gttctgatgg caattacaat 660 cgtaatgcca gtctgaactc ttttaaggag tattttaatt tacgtaactg cacctttatg 720 tacacttata acattaccga agatgagatt ttagagtggt ttggcattac acaaactgct 780 caaggtgttc acctcttctc atctcggtat gttgattigt acggcggcaa tatgtticaa 840 tttgccacct tgcctgttta tgatactatt aagtattatt ctatcattcc tcacagtatt 900 5 cgttctatcc aaagtgatag aaaagcttgg gctgcecttct acgtatataa acttcaaccg 960 ttaactttcc tgttggattt ttctgttgat ggttatatac gcagagctat agactgtggt 1020 tttaatgatt tgtcacaact ccactgctca tatgaatcct tcgatgttga atctggagtt 1080 tattcagttt cgtctttcga agcaaaacct tctggctcag ttgtggaaca ggctgaaggt 1140 gttgaatgtg atttttcacc tcttctgtct ggcacacctc ctcaggttta taatttcaag 1200 15 cgtttggttt ttaccaattg caattataat cttaccaaat tgctttcact tttttctgtg 1260 aatgatttta cttgtagtca aatatctcca gcagcaattg ctagcaactg ttattcttca 1320 ctgattttgg attacttttc atacccactt agtatgaaat ccgatctcag tgttagttct 10 gctggtccaa tatcccagtt taattataaa cagtcctttt ctaatcccac atgtttgatt 140 ttagcgactg ttcctcataa ccttactact attactaagc ctcttaagta cagcetatatt 10 aacaagtgct ctcgtcttct ttctgatgat cgtactgaag tacctcagtt agtgaacget 1560 aatcaatact caccctgtgt atccattgtc ccatccactg tgtgggaaga cggtgattat 1620 0 tataggaaac aactatctcc acttgaaggt ggtggctggc ttgtigctag tggctcaact 1680 gttgccatga ctgagcaatt acagatgggc tttggtatta cagttcaata tggtacagac 1740 accaatagtg tttgccccaa gcttgaattt gctaatgaca caaaaattgc ctctcaatta 1800 ggcaattgcg tggaatattc cctctatggt gtttcgggec gtggtgtttt tcagaattge 1860 acagctgtag gtgttcgaca gcagcgcttt gtttatgatg cgtaccagaa tttagttggc 1920 tattattctg atgatggcaa ctactactgt ttgcgtgctt gtgttagtgt tcctgtttct 1980 gtcatctatg ataaagaaac taaaacccac gctactctat ttggtagtgt tgcatgtgaa 2040 5 cacatttctt ctaccatgtc tcaatactcc cgttctacge gatcaatgcet taaacggcga 2100 gattctacat atggccccct tcagacacct gttggtigtg tcctaggact tgttaattcc 160 tctttgttcg tagaggactg caagttgcct cttggtcaat ctctetgtge tcttcctgac 2220 acacctagta ctctcacacc tcgcagtgtg cgctctgttc caggtgaaat gcgcettggca 2280 tccattgctt ttaatcatcc tattcaggtt gatcaactta atagtagtta ttttaaatta 2340 agtataccca ctaatttttc ctttggtgtg actcaggagt acattcagac aaccattcag 2400 aaagttactg ttgattgtaa acagtacgtt tgcaatggtt tccagaagtg tgagcaatta 60 ctgcgegagt atggccagtt tigttccaaa ataaaccagg ctctccatgg tgccaattta 2520 cgccaggatg attctgtacg taatttgttt gcgagcgtga aaagctctca atcatctcct 2580 5 atcataccag gttttggagg tgactttaat ttgacactic tagaacctgt tictatatct 60 actggcagtc gtagtgcacg tagtgctatt gaggatttgc tatttgacaa agtcactata 2700 gctgatcctg gttatatgca aggttacgat gattgcatgc agcaaggtcc agcatcagcet 2760 cgtgatctta tttgtgctca atatgtggct ggttacaaag tattacctcc tcttatggat 2820 gttaatatgg aagccgcgta tacttcatct ttgcttggca gcatagcagg tgttggetgg 0 actgctggct tatcctectt tgctgctatt ccatttgcac agagtatctt ttataggtta 2940 aacggtgttg gcattactca acaggttctt tcagagaacc aaaagcttat tgccaataag 3000 tttaatcagg ctctgggagce tatgcaaaca ggcttcacta caactaatga agcttttcag 3060 5 aaggttcagg atgctgtgaa caacaatgca caggctctat ccaaattagc tagcgagcta 3120 tctaatactt ttggtgctat ttccgcectct attggagaca tcatacaacg tettgatgtt 3180 0 ctcgaacagg acgcccaaat agacagactt attaatggcc gtttgacaac actaaatgct 3240 tttgttgcac agcagctigt tcgttccgaa tcagctgcetc tttccgetca attggctaaa 3300 5 gataaagtca atgagtgtgt caaggcacaa tccaagcgtt ctggattttg cggtcaaggc 3360 acacatatag tgtcctttgt tgtaaatgcc cctaatggcc tttacttcat gcatgttggt 3420 20 tattacccta gcaaccacat tgaggttgtt tctgcttatg gtctttgcga tgcagctaac 3480 cctactaatt gtatagcccc tgttaatggc tactttatta aaactaataa cactaggatt 3540 gttgatgagt ggtcatatac tggctcgtcc ttctatgcac ctgagcccat tacctcectt | 3600 aatactaagt atgttgcacc acaggtgaca taccaaaaca tttctactaa cctccctect 3660 cctcttctcg gcaattccac cgggattgac ticcaagatg agttggatga gtttttcaaa 370 aatgttagca ccagtatacc taattttggt tccctaacac agattaatac tacattactic 3780 gatcttacct acgagatgtt gtctcticaa caagttgtta aagcccttaa tgagtcttac 3840 5 atagacctta aagagcttgg caattatact tattacaaca aatggccgtg gtacatttgg 3900 cttggtttca ttgctgggct tgttgcctta gctctatgeg tcttcttcat actgtgetge 3960 actggttgtg gcacaaactg tatgggaaaa cttaagtgta attaa 4005 14 <210> 5 1334 <211>
PRT <212>
Artificial Sequence <213> <220> 10
Middle Easter Respiratory Syndrom Coronavirus spike <223> glycoprotein tuncation — 19 amino acid deleted from the C-terminus 14 <400> 15
Met lle His Ser Val Phe Leu Leu Met Phe Leu Leu Thr Pro Thr Glu 10 5 1
Ser Tyr Val Asp Val Gly Pro Asp Ser Val Lys Ser Ala Cys lle Glu 30 25 20
Val Asp lle Gln GIn Thr Phe Phe Asp Lys Thr Trp Pro Arg Pro lle 40 35
Asp Val Ser Lys Ala Asp Gly lle lle Tyr Pro GIn Gly Arg Thr Tyr 10 60 55 50
Ser Asn lle Thr lle Thr Tyr Gin Gly Leu Phe Pro Tyr Gln Gly Asp 80 75 70 65 15
His Gly Asp Met Tyr Val Tyr Ser Ala Gly His Ala Thr Gly Thr Thr 95 90 85
Pro GIn Lys Leu Phe Val Ala Asn Tyr Ser Gin Asp Val Lys Gln Phe 110 105 100
Ala Asn Gly Phe Val Val Arg lle Gly Ala Ala Ala Asn Ser Thr Gly 125 120 115
Thr Val lle lle Ser Pro Ser Thr Ser Ala Thr lle Arg Lys lle Tyr 140 135 130
Pro Ala Phe Met Leu Gly Ser Ser Val Gly Asn Phe Ser Asp Gly Lys 5 160 155 150 145
Met Gly Arg Phe Phe Asn His Thr Leu Val Leu Leu Pro Asp Gly Cys
175 170 165
Gly Thr Leu Leu Arg Ala Phe Tyr Cys lle Leu Glu Pro Arg Ser Gly 190 185 180 5
Asn His Cys Pro Ala Gly Asn Ser Tyr Thr Ser Phe Ala Thr Tyr His 205 200 195
Thr Pro Ala Thr Asp Cys Ser Asp Gly Asn Tyr Asn Arg Asn Ala Ser 220 215 210
Leu Asn Ser Phe Lys Glu Tyr Phe Asn Leu Arg Asn Cys Thr Phe Met 240 235 230 225
Tyr Thr Tyr Asn lle Thr Glu Asp Glu lle Leu Glu Trp Phe Gly lle 255 250 245
Thr Gln Thr Ala GIn Gly Val His Leu Phe Ser Ser Arg Tyr Val Asp 5 270 265 260
Leu Tyr Gly Gly Asn Met Phe Gin Phe Ala Thr Leu Pro Val Tyr Asp 285 280 275 10
Thr lle Lys Tyr Tyr Ser lle lle Pro His Ser lle Arg Ser lle 0 300 295 290
Ser Asp Arg Lys Ala Trp Ala Ala Phe Tyr Val Tyr Lys Leu Gln Pro 320 315 310 305
Leu Thr Phe Leu Leu Asp Phe Ser Val Asp Gly Tyr lle Arg Arg Ala 335 330 325 lle Asp Cys Gly Phe Asn Asp Leu Ser GIn Leu His Cys Ser Tyr Glu 350 345 340
Ser Phe Asp Val Glu Ser Gly Val Tyr Ser Val Ser Ser Phe Glu Ala 10 365 360 355
Lys Pro Ser Gly Ser Val Val Glu Gin Ala Glu Gly Val Glu Cys Asp 380 375 370 15
Phe Ser Pro Leu Leu Ser Gly Thr Pro Pro Gin Val Tyr Asn Phe Lys 400 395 390 385
Arg Leu Val Phe Thr Asn Cys Asn Tyr Asn Leu Thr Lys Leu Leu Ser 415 410 405
Leu Phe Ser Val Asn Asp Phe Thr Cys Ser Gin lle Ser Pro Ala Ala 430 425 420 lle Ala Ser Asn Cys Tyr Ser Ser Leu lle Leu Asp Tyr Phe Ser Tyr 445 440 435
Pro Leu Ser Met Lys Ser Asp Leu Ser Val Ser Ser Ala Gly Pro lle 5 460 455 450
Ser Gln Phe Asn Tyr Lys GIn Ser Phe Ser Asn Pro Thr Cys Leu lle
480 475 470 465
Leu Ala Thr Val Pro His Asn Leu Thr Thr lle Thr Lys Pro Leu Lys 495 490 485 5
Tyr Ser Tyr lle Asn Lys Cys Ser Arg Leu Leu Ser Asp Asp Arg Thr 510 505 500
Glu Val Pro Gin Leu Val Asn Ala Asn GIn Tyr Ser Pro Cys Val Ser 525 520 515 lle Val Pro Ser Thr Val Trp Glu Asp Gly Asp Tyr Tyr Arg Lys 0 540 535 530
Leu Ser Pro Leu Glu Gly Gly Gly Trp Leu Val Ala Ser Gly Ser Thr 560 555 550 545
Val Ala Met Thr Glu GIn Leu Gin Met Gly Phe Gly lle Thr Val GIn 5 575 570 565
Tyr Gly Thr Asp Thr Asn Ser Val Cys Pro Lys Leu Glu Phe Ala Asn 590 585 580 10
Asp Thr Lys lle Ala Ser 0 Leu Gly Asn Cys Val Glu Tyr Ser Leu 605 600 595
Tyr Gly Val Ser Gly Arg Gly Val Phe Gin Asn Cys Thr Ala Val Gly 620 615 610
Val Arg ‏ماى‎ GIn Arg Phe Val Tyr Asp Ala Tyr Gin Asn Leu Val Gly 640 635 630 625
Tyr Tyr Ser Asp Asp Gly Asn Tyr Tyr Cys Leu Arg Ala Cys Val Ser 655 650 645
Val Pro Val Ser Val lle Tyr Asp Lys Glu Thr Lys Thr His Ala Thr 0 670 665 660
Leu Phe Gly Ser Val Ala Cys Glu His lle Ser Ser Thr Met Ser 0 685 680 675 15
Tyr Ser Arg Ser Thr Arg Ser Met Leu Lys Arg Arg Asp Ser Thr Tyr 700 695 690
Gly Pro Leu 60 Thr Pro Val Gly Cys Val Leu Gly Leu Val Asn Ser 720 715 710 705
Ser Leu Phe Val Glu Asp Cys Lys Leu Pro Leu Gly 60 Ser Leu Cys 735 730 725
Ala Leu Pro Asp Thr Pro Ser Thr Leu Thr Pro Arg Ser Val Arg Ser 750 745 740
Val Pro Gly Glu Met Arg Leu Ala Ser lle Ala Phe Asn His Pro lle 5 765 760 755
Gln Val Asp GIn Leu Asn Ser Ser Tyr Phe Lys Leu Ser lle Pro Thr
780 775 770
Asn Phe Ser Phe Gly Val Thr Gin Glu Tyr lle Gin Thr Thr lle Gin 800 795 790 785 5
Lys Val Thr Val Asp Cys Lys GIn Tyr Val Cys Asn Gly Phe Gin Lys 815 810 805
Cys Glu GIn Leu Leu Arg Glu Tyr Gly 60 Phe Cys Ser Lys lle Asn 830 825 820
Gln Ala Leu His Gly Ala Asn Leu Arg Gin Asp Asp Ser Val Arg Asn 845 840 835
Leu Phe Ala Ser Val Lys Ser Ser GIn Ser Ser Pro lle lle Pro Gly 860 855 850
Phe Gly Gly Asp Phe Asn Leu Thr Leu Leu Glu Pro Val Ser lle Ser 5 880 875 870 865
Thr Gly Ser Arg Ser Ala Arg Ser Ala lle Glu Asp Leu Leu Phe Asp 895 890 885 10
Lys Val Thr lle Ala Asp Pro Gly Tyr Met Gln Gly Tyr Asp Asp Cys 910 905 900
Met Gin GIn Gly Pro Ala Ser Ala Arg Asp Leu lle Cys Ala Gin Tyr 925 920 915
Val Ala Gly Tyr Lys Val Leu Pro Pro Leu Met Asp Val Asn Met Glu 940 935 930
Ala Ala Tyr Thr Ser Ser Leu Leu Gly Ser lle Ala Gly Val Gly Trp 960 955 950 945
Thr Ala Gly Leu Ser Ser Phe Ala Ala lle Pro Phe Ala 60 Ser lle 10 975 970 965
Phe Tyr Arg Leu Asn Gly Val Gly lle Thr Gin ‏ماي‎ Val Leu Ser Glu 990 985 980 15
Asn GIn Lys Leu lle Ala Asn Lys Phe Asn GIn Ala Leu Gly Ala Met 1005 1000 995
GIn Thr Gly Phe Thr Thr Thr Asn Glu Ala Phe 60 Lys Val 0 1020 1015 1010
Asp Ala Val Asn Asn Asn Ala Gin Ala Leu Ser Lys Leu Ala Ser 1035 1030 1025
Glu Leu Ser Asn Thr Phe Gly Ala lle Ser Ala Ser lle Gly Asp 1050 1045 1040 lle lle Gin Arg Leu Asp Val Leu Glu GIn Asp Ala Gin lle Asp 5 1065 1060 1055
Arg Leu lle Asn Gly Arg Leu Thr Thr Leu Asn Ala Phe Val Ala
1080 1075 1070
Gln GIn Leu Val Arg Ser Glu Ser Ala Ala Leu Ser Ala Gin Leu 1095 1090 1085 5
Ala Lys Asp Lys Val Asn Glu Cys Val Lys Ala Gln Ser Lys Arg 1110 1105 1100
Ser Gly Phe Cys Gly Gln Gly Thr His lle Val Ser Phe Val Val 1125 1120 1115
Asn Ala Pro Asn Gly Leu Tyr Phe Met His Val Gly Tyr Tyr Pro 1140 1135 1130
Ser Asn His lle Glu Val Val Ser Ala Tyr Gly Leu Cys Asp Ala 1155 1150 1145
Ala Asn Pro Thr Asn Cys lle Ala Pro Val Asn Gly Tyr Phe lle 5 1170 1165 1160
Lys Thr Asn Asn Thr Arg lle Val Asp Glu Trp Ser Tyr Thr Gly 1185 1180 1175 10
Ser Ser Phe Tyr Ala Pro Glu Pro lle Thr Ser Leu Asn Thr Lys 1200 1195 1190
Tyr Val Ala Pro Gln Val Thr Tyr GIn Asn lle Ser Thr Asn Leu 1215 1210 1205
Pro Pro Pro Leu Leu Gly Asn Ser Thr Gly lle Asp Phe Gin Asp 1230 1225 1220
Glu Leu Asp Glu Phe Phe Lys Asn Val Ser Thr Ser lle Pro Asn 1245 1240 1235
Phe Gly Ser Leu Thr Gin lle Asn Thr Thr Leu Leu Asp Leu Thr 0 1260 1255 1250
Tyr Glu Met Leu Ser Leu Gin GIn Val Val Lys Ala Leu Asn Glu 1275 1270 1265 15
Ser Tyr lle Asp Leu Lys Glu Leu Gly Asn Tyr Thr Tyr Tyr Asn 1290 1285 1280
Lys Trp Pro Trp Tyr lle Trp Leu Gly Phe lle Ala Gly Leu Val 1305 1300 1295
Ala Leu Ala Leu Cys Val Phe Phe lle Leu Cys Cys Thr Gly Cys 1320 1315 1310
Gly Thr Asn Cys Met Gly Lys Leu Lys Cys Asn 1330 1325 <210> 5 2123 <211>
DNA <212>
Rabies virus <213>
>400< aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaactattaa catccctcaa aagacttagg 60 gaaagatggt tccgcaagct cttctgcettg tacccattct gggtttttce tegtgtttcg 120 5 ggaaattccc tatttacacg ataccagaca cacttggtcc ctggagcccg atcgatatac 180 atcatctcag ttgcccaaac aatttggttg tagaggacga aggatgcacc aacctgtcag 10 240 ggttctccta catggaactt aaagttggac acatctcagc cataaaggtg aacgggttca 300
15 cttgcacagg cgttgtaaca gaggcagaaa cctacactaa ctttgttggt tatgtcacca 360 ccactttcaa aagaaagcat ttccgcccaa caccagatgce ttgtagagct gcgtacaact
420 20 ggaagatggc cggtgacccc agatatgaag agtctctaca cagtccgtac cctgactacc 480 attggcttcg aactgtaaaa accacaaagg agtccctcgt tatcatatct ccaagtgtgg 540 5 tagatttgga cccatatgac aactcccttc actcgagggt cttccctage ggaaagtgct 600 caggaataac agtatcttct gtctactgct caactaacca cgattacacc gtttggatgce 660 ctgaaagtct gagactaggg acatcttgtg acatttttac caatagtaga gggaagagag 720 tatccaaggg gagcaagacc tgtggctttg tagatgaaag aggcctatat aagtctctaa 780 15 aaggcgcatg caaactcaag ttgtgtggag ttcgtggact tagacttatg gacggaacat 840 gggtcgcgat gcagacatca aatgagacca aatggtgtcc tcccgatcag ttggttaatc 20 900 tgcacgacct tcgctcagat gaaatcgagc atcttgttat agaggagttg gtcaagaaaa 960 gagaggagtg tctggatgca ttagagtcca tcataaccac caagtcagtg agtttcagac 5 1020 gtctcagtta tttaagaaaa cttgtccccg ggttcggaaa agcatatacc atattcaaca 1080 agaccttgat ggaggctgaa gctcactaca agtcagtcag gacttggaat gagatcatcc 1140 cctcaaaagg atgtttgaga gttggaggga ggtgtcatcc tcatgtaaac ggggtgtttt 1200 15 tcaatggtat aatattaggg cctgacggtc atgttttaat cccagagatg caatcatccc 1260 tcctccagca acatatagag ttattggaat cctcagttat tccectgatg cacccccttg 1320 cagacccgtt cacagttttc aaggacggcg atgagactga ggattttata gaagttcacc 1380 ttcccgatgt gcacgaacaa gtctcagggg ttgacctggg tctcccgaac tggggggagt 1440 5 atgtattact aagtgcaggg accttgattg ccttgatgtt gataattttc ctaatgacat 1500 gttgtagaaa agtcgatcgg ccagaatcta cacaacgcag tctcagaggg acaggaagga 1560 10 atgtgtcagt cacctcccaa agcgggaaat tcataccttc atgggagtcg tataaaagtg 1620 ggggtgagac tggactgtga agatttgtca tcttttcgac gcttcaagtt ctgaagataa 1680 15 ccttccctet aagetggggg gaatctectga gttcaatagt cctecttgaa ctccattcaa 1740 cagggtggat tcaaaagtca tgagactttc attaatcatc tcagttgatc aaacaaggtc 1800 20 atgtagattc tcataattcg ggaaatctic tagtagtttc agtgaccgac agtgcttica 1860 ttccccagga actgatgtca aaggttgttg acgggtcaag aggtatttct gatgactccg 1920 5 tgcgtgggcec cggacagagg tcatagtacg tcccatgata gcggactcag catgagtcga 1980 ttgagaaaag taatctgcct cccatgaagg acaccggcaa taactcacaa tcatcttgca 10 2040 tctcagcgaa gtgtgcataa ttataaaggg gctagatcat ctaagctttt cagttgagaa 2100 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaa 2123 5 16 <210> 524 <211>
PRT <212> 20
Rabies virus <213> 16 <400>
Met Val Pro Gln Val Leu Leu Phe Ala Pro Leu Leu Val Phe Pro Leu 5 10 5 1
Cys Phe Gly Lys Phe Pro lle Tyr Thr lle Pro Asp Lys Leu Gly Pro 25 20 10
Trp Ser Pro lle Asp Leu His His Leu Ser Cys Pro Asn Asn Leu Val 40 35 15
Val Glu Asp Glu Gly Cys Thr Asn Leu Ser Gly Phe Ser Tyr Met Glu 60 55 50
Leu Lys Val Gly Tyr lle Ser Ala lle Lys Val Asn Gly Phe Thr Cys 80 75 70 65
Thr Gly Val Val Thr Glu Ala Glu Thr Tyr Thr Asn Phe Val Gly Tyr 95 90 85
Val Thr Thr Thr Phe Lys Arg Lys His Phe Arg Pro Thr Pro Asp Ala 0 110 105 100
Cys Arg Ala Ala Tyr Asn Trp Lys Met Ala Gly Asp Pro Arg Tyr Glu 125 120 115 15
Glu Ser Leu His Asn Pro Tyr Pro Asp Tyr His Trp Leu Arg Thr Val 140 135 130
Lys Thr Thr Lys Glu Ser Leu Val lle lle Ser Pro Ser Val Thr Asp 160 155 150 145
Leu Asp Pro Tyr Asp Lys Ser Leu His Ser Arg Val Phe Pro Gly Gly 175 170 165
Asn Cys Ser Gly lle Thr Val Ser Ser Thr Tyr Cys Ser Thr Asn His 190 185 180
Asp Tyr Thr lle Trp Met Pro Glu Asn Leu Arg Leu Gly Thr Ser Cys 5 205 200 195
Asp lle Phe Thr His Ser Arg Gly Lys Arg Ala Ser Lys Gly Asp Lys
220 215 210
Thr Cys Gly Phe Val Asp Glu Arg Gly Leu Tyr Lys Ser Leu Lys Gly 240 235 230 225 5
Ala Cys Lys Leu Lys Leu Cys Gly Val Leu Gly Leu Arg Leu Met Asp 255 250 245
Gly Thr Trp Val Ala Met GIn Thr Ser Asp Glu Thr Lys Trp Cys Pro 270 265 260
Pro Gly Gin Leu Val Asn Leu His Asp Phe Arg Ser Asp Glu lle Glu 285 280 275
His Leu Val Glu Glu Glu Leu Val Lys Lys Arg Glu Glu Cys Leu Asp 300 295 290
Ala Leu Glu Ser lle Met Thr Thr Lys Ser Val Ser Phe Arg Arg Leu 5 320 315 310 305
Ser His Leu Arg Lys Leu Val Pro Gly Phe Gly Lys Ala Tyr Thr lle 335 330 325 10
Phe Asn Lys Thr Leu Met Glu Ala Asp Ala His Tyr Lys Ser Val GIn 350 345 340
Thr Trp Asn Glu lle lle Pro Ser Lys Gly Cys Leu Arg Val Gly Glu 365 360 355
Arg Cys His Pro His Val Asn Gly Val Phe Phe Asn Gly lle lle Leu 380 375 370
Gly Ser Asp Gly His Val Leu lle Pro Glu Met Gin Ser Ser Leu Leu 400 395 390 385
GIn Gin His Met Glu Leu Leu Glu Ser Ser Val lle Pro Leu Met His 0 415 410 405
Pro Leu Ala Asp Pro Ser Thr Val Phe Lys Asp Gly Asp Glu Val Glu 430 425 420 15
Asp Phe Val Glu Val His Leu Pro Asp Val His Lys GIn Val Ser Gly 445 440 435
Val Asp Leu Gly Leu Pro Lys Trp Gly Lys Tyr Val Leu Met lle Ala 460 455 450
Gly Ala Leu lle Ala Leu Met Leu lle lle Phe Leu Met Thr Cys Cys 480 475 470 465
Arg Arg Val Asn Arg Pro Glu Ser Thr Gln Ser Asn Leu Gly Gly Thr 495 490 485
Gly Arg Asn Val Ser Val Pro Ser Gin Ser Gly Lys Val lle Ser Ser 5 510 505 500
Trp Glu Ser Tyr Lys Ser Gly Gly Glu Thr Arg Leu
520 515 17 <210> 25 <211> 5
DNA <212>
Artificial Sequence <213> <220>
TRFC forward primer <223> 10 17 <400> atgacgttga attgaacctg gacta 25 18 <210> 21 <211>
DNA <212>
Artificial Sequence <213>
<220>
TRFC reverse primer <223> 18 <400> 5 gtctccacga gcggaataca g 21 19 <210> 32 <211> 10
DNA <212>
Artificial Sequence <213> <220>
TRC probe <223> 15 <220> misc feature <221>
(1)..(1) <222>
Fluorochrome <223> <220> misc feature <221> 5 (32)..(32) <222>
Quencher <223> 19 <400> natcagggat atgggtctaa gtctacagtg gn 32 0 <210> 11928 <211>
DNA <212> 15
Artificial Sequence <213> <220>
Rabies virus vector SAD B19 genome <223>
20 <400> acgcttaaca accagatcaa agaaaaaaca gacattgtca attgcaaagc aaaaatgtaa 60 cacccctaca atggatgccg acaagattgt attcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120 gaagcctgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgccatca aagatttgaa 180 aaagccctgt ataaccctag gaaaggctcc cgatttaaat aaagcataca agtcagtttt 240 gtcaggcatg agcgccgcca aacttaatcc tgacgatgta tgttcctatt tggcagegge 300 15 aatgcagttt tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa ttgtgattgc 360 acgaaaagga gataagatca ccccaggttc tctggtggag ataaaacgta ctgatgtaga 20 420 agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaaga gaccccactg tccctgagca 480 tgcgtcctta gtcggtctte tcttgagtct gtataggttg agcaaaatat ccgggcaaaa 540 5 cactggtaac tataagacaa acattgcaga caggatagag cagatttttg agacagcccc 600 ttttgttaaa atcgtggaac accatactct aatgacaact cacaaaatgt gtgctaattg 660 10 gagtactata ccaaacttca gatttttggc cggaacctat gacatgtttt tctcccggat 720 tgagcatcta tattcagcaa tcagagtggg cacagttgtc actgcttatg aagactgttc 780 aggactggta tcatttactg ggttcataaa acaaatcaat ctcaccgcta gagaggcaat 840 actatatttc ttccacaaga actttgagga agagataaga agaatgtttg agccagggca 900 20 ggagacagct gttcctcact cttatttcat ccacttccgt tcactaggct tgagtgggaa 960 atctccttat tcatcaaatg ctgttggtca cgtgttcaat ctcattcact ttgtaggatg 1020 ctatatgggt caagtcagat ccctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg ctcctcatga 1080 aatgtctgtt ctagggggct atctgggaga ggaattctic gggaaaggga catttgaaag 1140 aagattcttc agagatgaga aagaacttca agaatacgag gcggctgaac tgacaaagac 1200 tgacgtagca ctggcagatg atggaactgt caactctgac gacgaggact acttttcagg
1260 5 tgaaaccaga agtccggagg ctgtttatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactaaa 1320 gagatctcac atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc 1380 attcgccgag tttctaaaca agacatattc gagtgactca taagaagttg aataacaaaa 1440 5 tgccggaaat ctacggattg tgtatatcca tcatgaaaaa aactaacacc cctcctttcg 1500 aaccatccca aacatgagca agatctttgt caatcctagt gctattagag ccggtctgge 10 1560 cgatcttgag atggctgaag aaactgttga tctgatcaat agaaatatcg aagacaatca 1620 ggctcatctc caaggggaac ccatagaggt ggacaatctc cctgaggata tggggcgact 1680 tcacctggat gatggaaaat cgcccaacca tggtgagata gccaaggtgg gagaaggcaa 1740 20 gtatcgagag gactttcaga tggatgaagg agaggatcct agcttcctgt tccagtcata 1800 cctggaaaat gttggagtcc aaatagtcag acaaatgagg tcaggagaga gatttctcaa 1860 5 gatatggtca cagaccgtag aagagattat atcctatgtc gcggtcaact ttcccaaccc 1920 tccaggaaag tcttcagagg ataaatcaac ccagactact ggccgagagc tcaagaagga 10 1980 gacaacaccc actccttctc agagagaaag ccaatcatcg aaagccagga tggcggctca 2040 aattgcttct ggccctccag cccttgaatg gtcggctacc aatgaagagg atgatctate 2100 agtggaggct gagatcgctc accagattgc agaaagtttc tccaaaaaat ataagtttcc 2160 0 ctctcgatcce tcagggatac tcttgtataa ttttgagcaa ttgaaaatga accttgatga 2220 tatagttaaa gaggcaaaaa atgtaccagg tgtgacccgt ttagcccatg acgggtccaa 2280 actcccccta agatgtgtac tgggatgggt cgctttggcc aactctaaga aattccagtt 0 gltagtcgaa tccgacaagc tgagtaaaat catgcaagat gacttgaatc gctatacatc 2400 ttgctaaccg aacctctcce ctcagtcect ctagacaata aaatccgaga tgtcccaaag 2460 tcaacatgaa aaaaacaggc aacaccactg ataaaatgaa cctcctacgt aagatagtga 2520 15 aaaaccgcag ggacgaggac actcaaaaat cctctccege gtcagceccct ctggatgacg 2580 atgacttgtg gcttccaccc cctgaatacg tcccgctgaa agaacttaca ggcaagaaga 20 2640 acatgaggaa 111101316 aacggaaggg ttaaagtgtg tagcccgaat ggttactcgt 2700 tcaggatcct gcggcacatt ctgaaatcat tcgacgagat atattctggg aatcatagga 5 2760 tgatcgggtt agtcaaagtg gttattggac tggctttgtc aggatctcca gtccctgagg 0 gcctgaactg ggtatacaaa ttgaggagaa cctttatctt ccagtgggct gattccaggg 0 2880 gccctcttga aggggaggag ttggaatact ctcaggagat cacttgggat gatgatactg 2940 agttcgtcgg attgcaaata agagtgattg caaaacagtg tcatatccag ggcagagtct 3000 0910131038 catgaacccg agagcatgtc aactatggtc tgacatgtct cttcagacac 3060 20 aaaggtccga agaggacaaa gattcctctc tgcttctaga ataatcagat 31812666
3120 aaatttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatatg ggctcaactc caacccttgg 3180 gagcaatata acaaaaaaca tgttatggtg ccattaaacc gctgcatttc atcaaagtca
3240 agttgattac ctttacattt tgatcctctt ggatgtgaaa aaaactatta acatccctca 3300 aaagactcaa ggaaagatgg ttcctcaggc tctcctgttt gtacccectic tggttittcc 3360 attgtgtttt gggaaattcc ctatttacac gataccagac aagcttggtc cctggagtcc 3420 gattgacata catcacctca gctgcccaaa caatttggta gtggaggacg aaggatgcac 5
3480 caacctgtca gggttctcct acatggaact taaagttgga tacatcttag ccataaaagt
3540 gaacgggttc acttgcacag gcgttgtgac ggaggctgaa acctacacta acttcgttgg 3600 ttatgtcaca accacgttca aaagaaagca tttccgccca acaccagatg 810130306 3660 5 cgcgtacaac tggaagatgg ccggtgaccc cagatatgaa gagtctctac acaatccgta 3720 ccctgactac cgcetggcettc gaactgtaaa aaccaccaag gagtctctcg ttatcatatc 10 3780 tccaagtgtg gcagatttgg acccatatga cagatccctt cactcgaggg tcttccctag 3840 cgggaagtgc tcaggagtag cggtgtcttc tacctactgc tccactaacc acgattacac 3900 catttggatg cccgagaatc cgagactagg gatgtcttgt gacattttta ccaatagtag 3960 agggaagaga gcatccaaag ggagtgagac ttgcggcttt gtagatgaaa gaggcctata 4020 taagtcttta aaaggagcat gcaaactcaa gttatgtgga gttctaggac ttagacttat 080 ggatggaaca tgggtctcga tgcaaacatc aaatgaaacc aaatggtgcc ctcccgataa 4140 gltggtgaac ctgcacgact ttcgctcaga cgaaattgag caccttgttg tagaggagtt 4200 10 ggtcaggaag agagaggagt gtctggatgc actagagtcc atcatgacaa ccaagtcagt 4260 gagtttcaga cgtctcagtc atttaagaaa acttgtccct gggtttggaa aagcatatac 4320 5 catattcaac aagaccttga tggaagccga tgctcactac aagtcagtca gaacttggaa 4380 tgagatcctc ccttcaaaag ggtgtttaag agttgggggg aggtgtcatc ctcatgtgaa 0 4440 cggggtgttt ttcaatggta taatattagg acctgacggce aatgtcttaa tcccagagat 4500 gcaatcatcc ctcctccage aacatatgga gttgttggaa tccteggtta tcccecttgt 4560 gcaccccctg gcagacccgt ctaccgtttt caaggacggt gacgaggctg aggattttgt
4620 tgaagttcac cttcccgatg tgcacaatca ggtctcagga gttgacttgg gtctcccgaa 4680 10 ctgggggaag tatgtattac tgagtgcagg ggccctgact gccttgatgt tgataatttt 4740 cctgatgaca tgttgtagaa gagtcaatcg atcagaacct acgcaacaca atctcagagg 4800 15 gacagggagg gaggtgtcag tcactcccca aagcgggaag atcatatctt catgggaatc
4860 acacaagagt gggggtgaga ccagactgta aggactggcc gtcctttcaa cgatccaagt
4920 cctgaagatc acctccectt ggggggttct ttttgaaaaa cctgggttca atagtcctcc - 4980 ttgaactcca tgcaactggg tagattcaag agtcatgaga ttttcattaa tcctctcagt 500 tgatcaagca agatcatgtc gattctcata ataggggaga tcttctagca gtttcagtga 500 ctaacggtac tttcattctc caggaactga caccaacagt tgtagacaaa ccacggggtg 10
5160 tctcgggtga ctetgtgctt gggcacagac aaaggtcatg gtgtgttcca tgatagcgga
5220 ctcaggatga gttaattgag agaggcagtc ttcctcccgt gaaggacata agcagtagcet
5280 cacaatcatc tcgcgtctca gcaaagtgtg cataattata aagtgctggg tcatctaagc 5340 20 ttttcagtcg agaaaaaaac attagatcag aagaacaact ggcaacactt ctcaacctga 5400 gacttacttc aagatgctcg atcctggaga ggtctatgat gaccctattg acccaatcga 5
5460 gttagaggct gaacccagag gaacccccat tgtccccaac atcttgagga actctgacta
5520 caatctcaac tctcctitga tagaagatce tgctagacta atgttagaat ggttaaaaac 580 agggaataga ccttatcgga tgactctaac agacaattgc tccaggtctt tcagagtttt 5640 gaaagattat ttcaagaagg tagatttggg ttctctcaag gtgggcggaa tggctgcaca 5
5700 gtcaatgatt tctctctggt tatatggtgc ccactctgaa tccaacagga gecggagatg 0 tataacagac ttggcccatt tctattccaa gtcgtcccce atagagaage tgttgaatct 5820 0 cacgctagga aatagagggc tgagaatccc cccagaggga gtgttaagtt ‏9ه‎ ‎5880 ‎ggttgattat gataatgcat ttggaaggta tcttgccaac acgtattcct cttacttgtt 5940 5 cttccatgta atcaccttat acatgaacgc cctagactgg gatgaagaaa agaccatcct 6000 agcattatgg aaagatttaa cctcagtgga catcgggaag gacttggtaa agttcaaaga 10 6060 ccaaatatgg ggactgctga tcgtgacaaa ggactttgtt tactcccaaa gttccaattg 6120 tctttttgac agaaactaca cacttatgct aaaagatctt ticttgtctc gcttcaactc 6180 cttaatggtc ttgctctctc ccccagagcec ccgatactca gatgacttga tatctcaact 7 0 atgccagctg tacattgctg gggatcaagt cttgtctatg tgtggaaact ccggctatga 6300 20 agtcatcaaa atattggagc catatgtcgt gaatagttta gtccagagag cagaaaagtt 6360 taggcctctc attcattcct tgggagactt tcctgtattt ataaaagaca aggtaagtca 6420 5 acttgaagag acgttcggtc cctgtgcaag aaggttcttt agggctctgg atcaattcga 6480 caacatacat gacttggttt ttgtgtttgg ctgttacagg cattgggggc acccatatat 6540 10 agattatcga aagggtctgt caaaactata tgatcaggtt caccttaaaa aaatgataga 6600 taagtcctac caggagtgct tagcaagcga cctagccagg aggatcctta gatggggttt 15 6660 tgataagtac tccaagtggt atctggattc aagattccta gcccgagacc accccttgac 6720 tccttatatc aaaacccaaa catggccacc caaacatatt gtagacttgg tgggggatac
6780 atggcacaag ctcccgatca cgcagatctt tgagattcct gaatcaatgg atccgtcaga
6840 5 aatattggat gacaaatcac attctttcac cagaacgaga ctagcttctt ggctgtcaga
6900 aaaccgaggg gggcctgttc ctagcgaaaa agttattatc acggccctgt ctaagccgce 0
6960 tgtcaatccc cgagagtttc tgaggtctat agacctcgga ggattgccag atgaagactt
7020 gataattggc ctcaagccaa aggaacggga attgaagatt gaaggtcgat tctttgctct
7080 aatgtcatgg aatctaagat tgtatttigt catcactgaa aaactcttgg ccaactacat 7140 cttgccactt 11103-90209026 tgactatgac agacaacctg aacaaggtgt ttaaaaagct 7200 gatcgacagg gtcaccgggc aagggctttt ggactattca agggtcacat atgcatttca 7260 5 cctggactat gaaaagtgga acaaccatca aagattagag tcaacagagg atgtattttc 7320 tgtcctagat caagtgtitg gattgaagag agtgttttct agaacacacg agttttttca 7380 0 aaaggcctgg atctattatt cagacagatc agacctcatc gggttacggg aggatcaaat 7440 atactgctta gatgcgtcca acggcccaac ctgttggaat ggccaggatg gecgggcetaga 5 7500 aggcttacgg cagaagggct ggagtctagt cagcttattg atgatagata gagaatctca 7560 aatcaggaac acaagaacca aaatactagc tcaaggagac aaccaggttt tatgtccgac 7620 atacatgttg tcgccagggc tatctcaaga ggggctcctc tatgaattgg agagaatatc 7680 5 aaggaatgca ctttcgatat acagagccgt cgaggaaggg gcatctaagc tagggctgat 7740 catcaagaaa gaagagacca tgtgtagtta tgacttcctc atctatggaa aaaccccttt 0 7800 gittagaggt aacatattgg tgcctgagtc caaaagatgg gccagagtct cttgcgtctc 7860 taatgaccaa atagtcaacc tcgccaatat aatgtcgaca gtgtccacca atgcgctaac 7920 agtggcacaa cactctcaat ctttgatcaa accgatgagg gattttctgc tcatgtcagt 7980 acaggcagtc tttcactacc tgctatttag cccaatctta aagggaagag tttacaagat 8040 tctgagcgct gaaggggaga gctttctcct agccatgtca aggataatct atctagatcce 8100 5 ttctttggga gggatatctg gaatgtccct cggaagattc catatacgac agttctcaga 8160 ccctgtctct gaagggttat cctictggag agagatctgg ttaagctccc aagagtectg 8220 gattcacgcg ttgtgtcaag aggctggaaa cccagatctt ggagagagaa cactcgagag 8280 cttcactcgc cttctagaag atccgaccac cttaaatatc agaggagggg ccagtcctac 8340 15 cattctactc aaggatgcaa tcagaaaggc tttatatgac gaggtggaca aggtggaaaa 8400 ttcagagttt cgagaggcaa tcctgttgic caagacccat agagataatt ttatactctt 8460 20 cttaatatct gttgagcctc tgtttcctcg atttctcagt gagctattca gttcgtcttt 8520 tttgggaatc cccgagtcaa tcattggatt gatacaaaac tcccgaacga taagaaggca 8580 5 gtttagaaag agtctctcaa aaactttaga agaatccttc tacaactcag agatccacgg 8640 gattagtcgg atgacccaga cacctcagag 9911099999 gtgtggcectt gctcttcaga 10 8700 gagggcagat ctacttaggg agatctcttg gggaagaaaa gtggtaggca cgacagttcc 8760 tcacccttct gagatgttgg gattacttcc caagtcctct atttcttgca cttgtggage 8820 aacaggagga ggcaatccta gagtttctgt atcagtactc ccgtcctttg atcagtcatt 0 tttttcacga ggccccctaa agggatactt gggctcgtce acctctatgt cgacccagct 8940 20 attccatgca tgggaaaaag tcactaatgt tcatgtggtg aagagagctc tatcgttaaa 9000 agaatctata aactggttca ttactagaga ttccaacttg gctcaagctc taattaggaa 9060 5 cattatgtct ctgacaggcc ctgatttccc tctagaggag gcccctgtct tcaaaaggac 9120 ggggtcagcc ttgcataggt tcaagtctgc cagatacagc gaaggagggt attcttctgt 10 9180 ctgcccgaac ctectctcte atattictgt tagtacagac accatgtctg atttgaccca 90 agacgggaag aactacgatt tcatgttcca gccattgatg ctttatgcac agacatggac 5 9300 atcagagctg gtacagagag acacaaggct aagagactct acgtttcatt ggcacctccg 9360 atgcaacagg tgtgtgagac ccattgacga cgtgaccctg gagacctctc agatcttcga
9420 gtttccggat gtgtcgaaaa gaatatccag aatggtttct ggggcetgtge ctcacticca 90 gaggcttccc gatatccgtc tgagaccagg agattttgaa tctctaagcg gtagagaaaa
9540 gtctcaccat atcggatcag ctcaggggct cttatactca atcttagtgg caattcacga ~~ 9600 ctcaggatac aatgatggaa ccatcttccc tgtcaacata tacggcaagg tttcccctag
9660 agactatttg agagggctcg caaggggagt attgatagga tcctcgattt gcttcttgac 9720 aagaatgaca aatatcaata ttaatagacc tcttgaattg gtctcagggg taatctcata 9780 tattctcctg aggctagata accatccctc cttgtacata atgctcagag aaccgtctct 0 tagaggagag atattttcta tccctcagaa 33160260066 gcttatccaa ccactatgaa 9900 agaaggcaac agatcaatct tgtgttatct ccaacatgtg ctacgctatg agcgagagat 9960 5 aatcacggcg tctccagaga atgactggct atggatcttt tcagacttta gaagtgccaa 10020 aatgacgtac ctatccctca ttacttacca gtctcatctt ctactccaga gggttgagag 10080 0 aaacctatct aagagtatga gagataacct gcgacaattg agttctttga tgaggcaggt 10140 gctgggeggg cacggagaag ataccttaga gtcagacgac aacattcaac gactgctaaa 5 10200 agactcttta cgaaggacaa gatgggtgga tcaagaggtg cgccatgcag ctagaaccat 10260 gactggagat tacagcccca acaagaaggt gtcccgtaag gtaggatgtt cagaatgggt 10320 ctgctctgct caacaggttg cagtctctac ctcagcaaac ccggcccctg tctcggagct 10380 5 tgacataagg gccctctcta agaggttcca gaaccctttg atctcgggct tgagagtggt 10440 tcagtgggca accggtgctc attataagct taagcctatt ctagatgatc tcaatgtttt 10500 10 cccatctctc tgccttgtag ttggggacgg gtcagggggg atatcaaggg cagtcctcaa 10560 catgtttcca gatgccaagc ttgtgticaa cagtctttta gaggtgaatg acctgatgge 10620 5 ttccggaaca catccactgce ctccttcage aatcatgagg ggaggaaatg atatcgtcte 10680 cagagtgata gatcttgact caatctggga aaaaccgtcc gacttgagaa acttggcaac 0 10740 ctggaaatac ttccagtcag tccaaaagca ggtcaacatg tcctatgacc tcattatttg 10800 cgatgcagaa gttactgaca ttgcatctat caaccggatc accctgttaa tgtccgattt 10860 5 tgcattgtct atagatggac cactctattt ggtcttcaaa acttatggga ctatgctagt 10920 aaatccaaac tacaaggcta ttcaacacct gtcaagagcg ttcccctcgg tcacagggtt 10980 10 tatcacccaa gtaacttcgt ctttttcatc tgagctctac ctccgattct ccaaacgagg 10 gaagtttttc agagatgctg agtacttgac ctcttccacc cttcgagaaa tgagecttgt 11100 gttattcaat tgtagcagcc ccaagagtga gatgcagaga gctcgttcct tgaactatca 11160 ggatcttgtg agaggatttc ctgaagaaat catatcaaat ccttacaatg agatgatcat 11220 0 aactctgatt gacagtgatg tagaatcttt tctagtccac aagatggttg atgatcttga 11280 gttacagagg ggaactctgt ctaaagtggc tatcattata gccatcatga tagttttctc 1130 caacagagtc ttcaacgttt ccaaacccct aactgacccc tcgttctatc caccgtctga
11400 tcccaaaatc ctgaggcact tcaacatatg ttgcagtact atgatgtatc tatctactgc 11460 tttaggtgac gtccctagct tcgcaagact tcacgacctg tataacagac ctataactta
11520 ttacttcaga aagcaagtca ttcgagggaa cgtttatcta tcttggagtt ggtccaacga 11580 15 cacctcagtg ttcaaaaggg tagcctgtaa tictagcctg agtctgtcat ctcactggat 1160 caggttgatt tacaagatag tgaagactac cagactcgtt ggcagcatca aggatctatc 11700 20 cagagaagtg gaaagacacc ttcataggta caacaggtgg atcaccctag aggatatcag 11760 atctagatca tccctactag actacagttg cctgtgaacc ggatactcct ggaagectge 5 11820 ccatgctaag actcttgtgt gatgtatctt gaaaaaaaca agatcctaaa tctgaacctt 11880 tggttgtttg attgtttttc tcatttttgt tgtttatttg ttaagcgt 11928 21 <210> 14108 <211> 15
DNA <212>
Artificial Sequence <213> <220>
Recombinant Rabies virus vector BNSP333 expressing a chimeric <223> 0 protein comprising the 51 domain of Middle East Respiratory
Syndrome Coronavirus fused to the C-terminal part of the Rabies (virus G glycoprotein (amino acids 428-524 21 <400> 5 acgcttaaca accagatcaa agaaaaaaca gacattgtca attgcaaagc aaaaatgtaa 60 cacccctaca atggatgccg acaagattgt attcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120 gaagcctgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgccatca aagatttgaa 180 aaagccctgt ataaccctag gaaaggctcc cgatttaaat aaagcataca agtcagtttt 240 15 gtcaggcatg agcgccgcca aacttaatcc tgacgatgta tgttcctatt tggcagegge 300 aatgcagttt tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa 01081106 360 acgaaaagga gataagatca ccccaggttc tctggtggag ataaaacgta ctgatgtaga 420 5 agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaaga gaccccactg tccctgagca 480 tgcgtcctta gtcggtctte tcttgagtct gtataggttg agcaaaatat ccgggcaaaa 540 10 cactggtaac tataagacaa acattgcaga caggatagag cagatttttg agacagcccc 600 ttttgttaaa atcgtggaac accatactct aatgacaact cacaaaatgt gtgctaattg 660 15 gagtactata ccaaacttca gatttttggc cggaacctat gacatgtttt tctcccggat 720 tgagcatcta tattcagcaa tcagagtggg cacagttgtc actgcttatg aagactgttc 780 aggactggta tcatttactg ggttcataaa acaaatcaat ctcaccgcta gagaggcaat 840 actatatttc ttccacaaga actttgagga agagataaga agaatgtttg agccagggca 900 5 ggagacagct gttcctcact cttatttcat ccacttccgt tcactaggcet tgagtgggaa 960 atctccttat tcatcaaatg ctgttggtca cgtgttcaat ctcattcact ttgtaggatg 1020 ctatatgggt caagtcagat ccctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg ctcctcatga 1080 aatgtctgtt ctagggggct atctgggaga ggaattctic gggaaaggga catttgaaag 1140 aagattcttc agagatgaga aagaacttca agaatacgag gcggctgaac tgacaaagac 1200 tgacgtagca ctggcagatg atggaactgt caactctgac gacgaggact acttttcagg
1260 20 tgaaaccaga agtccggagg ctgtttatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactaaa 1320 gagatctcac atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc 5 1380 attcgccgag tttctaaaca agacatattc gagtgactca taacatgaaa aaaactaaca 1440
6001:0091 acgecgecac catgattcac tetgtgttee tgctgatgtt cetgetgaca 1500 ccaacagagt cctatgtgga tgtgggacct gactctgtga agtctgcctg tattgaggtg 1560 gacatccaac agaccttctt tgacaagacc tggccaagac caattgatgt gagcaaggct 1620 gatggcatca tctacccaca gggcaggacc tacagcaaca tcaccatcac ctaccaggga 1680 20 ctgtttccat accagggaga tcatggagat atgtatgtct actctgctgg tcatgccaca 1740 ggcaccacac cacagaaact gtttgtggct aactacagcc aggatgtgaa gcagtttgec 1800 aatggctttg tggtgaggat tggagcagca gccaacagca caggcacagt gattatcagc 1860 ccaagcacct ctgccaccat caggaagatt taccctgcct ttatgctggg ctectetgtg 1920 ggcaacttct ctgatggcaa gatgggcagg ttcttcaacc acaccctggt getgctgect 1980 gatggctgtg gcaccctgct gagggctttc tactgtatct tggaaccaag gtctggcaac 2040 15 cactgtcctg ctggcaactc ctacacctcc tttgccacct accacacacc tgccacagac 2100 tgttctgatg gcaactacaa caggaatgcc tccctgaact ccttcaagga atacttcaac 0 2160 ctgaggaact gtacctttat gtacacctac aacatcacag aggatgagat 09 2220 tttggcatca cccagacagce ccagggagtg catctgttct cgagcagata tgtggacctc 5 2280 tatggaggca atatgticca gtttgccacc ctgcctgtct atgacaccat caaatactac 22340 agcatcatcc cacacagcat caggagcatc cagtctgaca ggaaggcttg ggctgecttc 10 2400 tatgtctaca aactccaacc actgaccttc ctgctggact tctctgtgga tggctacatc 2460 aggagggcta ttgactgtgg cttcaatgac ctgagccaac ttcactgttc ctatgagtcc 2520 15 tttgatgtgg agtctggagt ctactctgtg tcctectttg aggctaagcce atctggcetct 2580 gtggtggaac aggctgaggg agtggagtgt gacttcagcc cactgctgtc tggcacacct 2640 0 ccacaggtct acaacttcaa gagactggtg ttcaccaact gtaactacaa cctgaccaaa 2700 ctgctgtcce tgttctctgt gaatgacttc acttgtagcc agattagecc tgctgecatt 2760 5 gccagcaact gttactcctc cctgattctg gactacttct cctacccact gagtatgaag 2820 tctgacctgt ctgtgtcctc tgctggacca atcagccagt tcaactacaa gecagtecttc 0 agcaacccaa cttgtctgat tctggctaca gtgccacaca acctgaccac catcaccaag 2940 ccactgaaat actcctacat caacaagtgt agcagactgc tgtctgatga caggacagag 3000 15 gtgccacaac tagtgaatgc caaccaatac agcccatgtg tgagcattgt gccaagcaca 3060
0191099399 atggagacta ctacaggaag caacttagcc cattggaggg 3080-09 3120 ctggtggcat ctggcagcac agtggctatg acagaacaac tccaaatggg ctttggcatc 3180 5 acagtccaat atggcacaga caccaactct gtgtgtccaa aattggagtt tgccaatgac 3240 accaagattg ccagccaact tggcaactgt gtggaatact ccctctatgg agtgtctgge 10 3300 aggggagtgt tccagaactg tactgctgtg ggagtgagac aacagaggtt tgtctatgat 3360 gcctaccaga acctggtggg ctactactct gatgatggca actactactg tctgagggct 3420 tgtgtgtctg tgcctgtgte tgtgatttat gacaaggaga ccaagaccca tgccaccctg 3480 tttggctctg tggcttgtga acacatctcc agcacaatga gtcaatacag caggagcacc 3540 aggagtatgc tgaaaaggag ggacagcaca tatggaccac tccaaacacc tgtgggctgt 3600 5 gtgctgggac tggtgaactc ctcccetgttt gtggaggact gtaaactgcc actgggacaa 3660 tccetgtgtg ccctgectga cacaccaage accctgacac caaggtetgt gggagatgag 10 3720 gccgaagact ttgtggaagt ccacctgcect gatgtgcata accaggtgtc tggcgtcgac 3780 ctgggactgc caaattgggg caagtacgtg ctgctgagtg ctggagcact gactgccctg 3840 atgctgatca ttttcctgat gacctgctgt cggcgegtga acagaagtga gcccactcag 3900 20 cacaatctgc gaggaaccgg gagagaagtg tcagtcacac ctcagagcgg gaaaatcatt 3960 agtagttggg aatcacataa aagcgggggc gagaccaggc tgtgagctag ccatgaaaaa 4020 5 aactaacacc cctcctttcg aaccatccca aacatgagca agatctttgt caatcctagt 4080 gctattagag ccggtctgge cgatcttgag atggctgaag aaactgttga tctgatcaat 10 4140 agaaatatcg aagacaatca ggctcatctc caaggggaac ccatagaggt ggacaatctc 4200 cctgaggata tggggcgact tcacctggat gatggaaaat cgcccaacca tggtgagata 4260 gccaaggtgg gagaaggcaa gtatcgagag gactttcaga tggatgaagg agaggatcct 4320 0 agcttcctgt tccagtcata cctggaaaat gttggagtcc aaatagtcag acaaatgagg 4380 tcaggagaga gatttctcaa gatatggtca cagaccgtag aagagattat atcctatgtc 4440 5 gcggtcaact ttcccaaccc tccaggaaag tcttcagagg ataaatcaac ccagactact 4500 ggccgagagc tcaagaagga gacaacaccc actcctictc agagagaaag ccaatcatcg 10 4560 aaagccagga tggcggctca aattgcttct ggccctccag cecttgaatg gtcggctacce 4620 aatgaagagg atgatctatc agtggaggct gagatcgctc accagattgc agaaagtttc 4680 tccaaaaaat ataagtttcc ctctcgatcc tcagggatac tcttgtataa ttttgagcaa 4740 ttgaaaatga accttgatga tatagttaaa gaggcaaaaa atgtaccagg tgtgacccgt 4800 ttagcccatg acgggtccaa actccccecta agatgtgtac tgggatgggt cgcetttggee 4860 5 aactctaaga aattccagtt gttagtcgaa tccgacaagc tgagtaaaat catgcaagat 4920 gacttgaatc gctatacatc ttgctaaccg aacctctcce ctcagtcect ctagacaata 4980 0 aaatccgaga tgtcccaaag tcaacatgaa aaaaacaggc aacaccactg ataaaatgaa 5040 cctcctacgt aagatagtga aaaaccgcag ggacgaggac actcaaaaat cctctccecge 5 5100 gtcagcccct ctggatgacg atgacttgtg gettccacce cctgaatacg tcecgetgaa 5160 agaacttaca ggcaagaaga acatgaggaa cttttgtatc aacggaaggg ttaaagtgtg 5220 tagcccgaat ggttactcgt tcaggatcct gcggcacatt ctgaaatcat tcgacgagat 5280 5 atattctggg aatcatagga tgatcgggtt agtcaaagtg gttattggac tggctttgtc 0 aggatctcca gtccctgagg gcctgaactg ggtatacaaa ttgaggagaa cctttatctt
5400 10 ccagtgggct gattccaggg gccctcttga aggggaggag ttggaatact ctcaggagat 5460 cacttgggat gatgatactg agttcgtcgg attgcaaata agagtgattg caaaacagtg 15 5520 tcatatccag ggcagagtct ggtgtatcaa catgaacccg agagcatgtc aactatggtc 5580 tgacatgtct cttcagacac aaaggtccga agaggacaaa gattcctctc tgcttctaga
5640 ataatcagat tatatcccgc aaatttatca cttgtttacc tctggaggag agaacatatg 5700 ggctcaactc caacccttgg gagcaatata acaaaaaaca tgttatggtg ccattaaacc
5760 gctgcatttc atcaaagtca agttgattac ctttacattt tgatcctctt ggatgtgaaa 0 aaaactatta acatccctca aaagaccccg ggaaagatgg ttcctcaggce tetectgttt
5880 gtaccccttc tggtttttcc attgtgtttt gggaaattcc ctatttacac gataccagac 940 aagcttggtc cctggagtcc gattgacata catcacctca gctgcccaaa caatttggta
6000 gtggaggacg aaggatgcac caacctgtca gggttctcct acatggaact taaagttgga 6060 20 tacatcttag ccataaaagt gaacgggttc acttgcacag gcgttgtgac ggaggctgaa 6120 acctacacta acttcgttgg ttatgtcaca accacgttca aaagaaagca tttccgccca 5 6180 acaccagatg catgtagagc cgcgtacaac tggaagatgg ccggtgaccc cagatatgaa 6240 gagtctctac acaatccgta ccctgactac cgctggcttc gaactgtaaa aaccaccaag 6300 gagtctctcg ttatcatatc tccaagtgtg gcagatttgg acccatatga cagatccctt 6360 cactcgaggg tcttccctag cgggaagtge tcaggagtag cggtgtcttc tacctactge 6420 tccactaacc acgattacac catttggatg cccgagaatc cgagactagg gatgtcttgt 6480 20 gacattttta ccaatagtag agggaagaga gcatccaaag ggagtgagac ttgcggcttt 6540 gtagatgaaa gaggcctata taagtcttta aaaggagcat gcaaactcaa gttatgtgga 6600 5 gttctaggac ttagacttat ggatggaaca tgggtctcga tgcaaacatc aaatgaaacc 6660 aaatggtgcc ctcccgataa gttggtgaac ctgcacgact ttcgctcaga cgaaattgag 0 6720 caccttgttg tagaggagtt ggtcaggaag agagaggagt gtctggatgc actagagtcc 6780 atcatgacaa ccaagtcagt gagtttcaga cgtctcagtc atttaagaaa actigtccct 6840 gggtttggaa aagcatatac catattcaac aagaccttga tggaagccga tgctcactac 6900 aagtcagtcg agacttggaa tgagatcctc ccttcaaaag ggtgtttaag agttggggag
6960 aggtgtcatc ctcatgtgaa cggggtgttt ttcaatggta taatattagg acctgacgge 7020 aatgtcttaa tcccagagat gcaatcatcc ctcctccage aacatatgga gttgttggaa
7080 tcctecggtta tcececttgt gcaccecctg gcagaccegt ctaccgtttt caaggacggt 7140 gacgaggctg aggattttgt tgaagttcac cttcccgatg tgcacaatca ggtctcagga
7200 gttgacttgg gtctcccgaa ctgggggaag tatgtattac tgagtgcagg ggccctgact 7260 15 gccttgatgt tgataatttt cctgatgaca tgttgtagaa gagtcaatcg atcagaacct ~~ 7320 acgcaacaca atctcagagg gacagggagg gaggtgtcag tcactcccca aagcgggaag 7380 20 atcatatctt catgggaatc acacaagagt gggggtgaga ccagactgta attaattaac 7440 gtcctttcaa cgatccaagt ccatgaaaaa aactaacacc cctccegtac ctagcttata 5 7500 aagtgctggg tcatctaagc ttttcagtcg agaaaaaaac attagatcag aagaacaact 7560 ggcaacactt ctcaacctga gacttacttc aagatgctcg atcctggaga ggtctatgat 7620 gaccctattg acccaatcga gttagaggct gaacccagag gaacccccat tgtccccaac 7680 15 atcttgagga actctgacta caatctcaac tctcctitga tagaagatcc tgctagacta 7740 atgttagaat ggttaaaaac agggaataga ccttatcgga tgactctaac agacaattgc 7800 20 tccaggtctt tcagagtttt gaaagattat ttcaagaagg tagatttggg ttctctcaag 7860 gtgggcggaa tggctgcaca gtcaatgatt tctctetggt tatatggtge ccactctgaa 7920 tccaacagga gccggagatg tataacagac ttggcccatt tctattccaa gtcgtcccece 5 7980 atagagaagc tgttgaatct cacgctagga aatagagggc tgagaatccc cccagaggga 8040 gtgttaagtt gccttgagag ggttgattat gataatgcat ttggaaggta tcttgccaac 8100 acgtattcct cttacttgtt cticcatgta atcaccttat acatgaacgc cctagactgg 0 gatgaagaaa agaccatcct agcattatgg aaagatttaa cctcagtgga catcgggaag 15 8220 gacttggtaa agttcaaaga ccaaatatgg ggactgctga tcgtgacaaa ggactttgtt 8280 tactcccaaa gttccaattg tctttttgac agaaactaca cacttatgct aaaagatctt 340 ttcttgtctc gcettcaactc cttaatggtce ttgctctctc ccccagagcece ccgatactca 8400 gatgacttga tatctcaact atgccagctg tacattgctg gggatcaagt cttgtctatg 8460 5 tgtggaaact ccggctatga agtcatcaaa atattggagc catatgtcgt gaatagttta 8520 gtccagagag cagaaaagtt taggcctctc attcattcct tgggagactt tcctgtattt 580 ataaaagaca aggtaagtca acttgaagag acgttcggtc cctgtgcaag aaggttcttt
8640 agggctctgg atcaattcga caacatacat gacttggttt ttgtgtttgg ctgttacagg 700 cattgggggc acccatatat agattatcga aagggtctgt caaaactata tgatcaggtt
8760 caccttaaaa aaatgataga taagtcctac caggagtgct tagcaagcga cctagccagg 8820 20 aggatcctta gatggggttt tgataagtac tccaagtggt atctggattc aagattccta 0 gcccgagacc accccttgac tccttatatc aaaacccaaa catggccacc caaacatatt 8940 5 gtagacttgg tgggggatac atggcacaag ctcccgatca cgcagatctt tgagattcct
9000 gaatcaatgg atccgtcaga aatattggat gacaaatcac attctttcac cagaacgaga 10
9060 ctagcttctt ggctgtcaga aaaccgaggg gggcctgttc ctagcgaaaa agttattatc
9120 acggccctgt ctaagccgcce tgtcaatccc cgagagtttc tgaggtctat agacctcgga
9180 ggattgccag atgaagactt gataattggc ctcaagccaa aggaacggga attgaagatt 9240 20 gaaggtcgat tctttgctct aatgtcatgg aatctaagat tgtattttgt catcactgaa 9300 aaactcttgg ccaactacat cttgccactt tttgacgcgc tgactatgac agacaacctg 9360 aacaaggtgt ttaaaaagct gatcgacagg gtcaccgggc aagggctttt ggactattca 9420 agggtcacat atgcatttca cctggactat gaaaagtgga acaaccatca aagattagag 9480 10 tcaacagagg atgtattttc tgtcctagat caagtgtttg gattgaagag agtgttttct 9540 agaacacacg agttttttca aaaggcctgg atctattatt cagacagatc agacctcatc 9600 15 gggttacggg aggatcaaat atactgctta gatgcgtcca acggcccaac ctgttggaat 9660 ggccaggatg gcgggctaga aggcttacgg cagaagggct ggagtctagt cagcttattg 20 9720 atgatagata gagaatctca aatcaggaac acaagaacca aaatactagc tcaaggagac 9780 aaccaggttt tatgtccgac atacatgttg tcgccagggc tatctcaaga ggggctcctc 5
9840 tatgaattgg agagaatatc aaggaatgca ctttcgatat acagagccgt cgaggaaggg 9900 gcatctaagc tagggctgat catcaagaaa gaagagacca tgtgtagtta tgacttcctc 9960 atctatggaa aaaccccttt gtttagaggt aacatattgg tgcctgagtc caaaagatgg
10020 5 gccagagtct cttgcgtctc taatgaccaa atagtcaacc tcgccaatat aatgtcgaca 10080 gtgtccacca atgcgctaac agtggcacaa cactctcaat ctttgatcaa accgatgagg 0 10140 gattttctgc tcatgtcagt acaggcagtc tttcactacc tgctatttag cccaatctta 10200 aagggaagag tttacaagat tctgagcgct gaaggggaga gctttctcct agccatgtca 10260 5 aggataatct atctagatcc ttctttggga gggatatctg gaatgtccct cggaagattc 10320 catatacgac agttctcaga ccctgtctct gaagggttat ccttictggag agagatctgg 10380 10 ttaagctccc aagagtcctg gattcacgeg ttgtgtcaag aggctggaaa cccagatctt 10440 ggagagagaa cactcgagag cttcactcgc ctictagaag atccgaccac cttaaatatc 5 10500 agaggagggg ccagtcctac cattctactc aaggatgcaa tcagaaaggc tttatatgac 10560 gaggtggaca aggtggaaaa ttcagagttt cgagaggcaa tcctgttgtc caagacccat 10620 agagataatt ttatactctt cttaatatct gttgagcctc tgtttcctcg atttctcagt 10680 gagctattca gttcgtcttt tttgggaatc cccgagtcaa tcattggatt gatacaaaac 10740 tcccgaacga taagaaggca gtttagaaag agtctctcaa aaactttaga agaatccttc 10800 tacaactcag agatccacgg gattagtcgg atgacccaga cacctcagag ggttggggag 10860 gtgtggcctt gctcttcaga gagggcagat ctacttaggg agatctctty gggaagaaaa 10920 15 gtggtaggca cgacagttcc tcacccttct gagatgttgg gattacttcc caagtcctct 10980 atttcttgca cttgtggagc aacaggagga ggcaatccta gagtttctgt atcagtactc 11040 20 ccgtectttg atcagtcatt titttcacga ggccccctaa agggatactt gggetegtce 11100 acctctatgt cgacccagct attccatgca tgggaaaaag tcactaatgt tcatgtggtg 11160 5 aagagagctc tatcgttaaa agaatctata aactggttca ttactagaga ttccaacttg 11220 gctcaagctc taattaggaa cattatgtct ctgacaggcc ctgatttcce tctagaggag 10 11280 gcccctgtct tcaaaaggac ggggtcagcece ttgcataggt tcaagtctgc cagatacage 11340 gaaggagggt attcttctgt ctgcccgaac ctectetete atatttetgt tagtacagac 11400 accatgtctg atttgaccca agacgggaag aactacgatt tcatgttcca gccattgatg 11460 ctttatgcac agacatggac atcagagctg gtacagagag acacaaggct aagagactct 11520 acgtttcatt ggcacctccg atgcaacagg tgtgtgagac ccattgacga cgtgaccctg 11580 5 gagacctctc agatcttcga gtttccggat gtgtcgaaaa gaatatccag aatggtttct 11640 ggggctgtgc ctcacttcca gaggcttcce gatatcegtc tgagaccagg agattttgaa 0 11700 tctctaagcg gtagagaaaa gtctcaccat atcggatcag ctcaggggct cttatactca 11760 atcttagtgg caattcacga ctcaggatac aatgatggaa ccatcttccc tgtcaacata 11820 tacggcaagg tttcccctag agactatttg agagggctcg caaggggagt attgatagga 11880 20 tcctcgattt gettcttgac aagaatgaca aatatcaata ttaatagacc tettgaattg 11940 gtctcagggg taatctcata tattctcctg aggctagata accatcccte cttgtacata 1200 atgctcagag aaccgtctct tagaggagag atattticta tccctcagaa aatccccgee 5
12060 gcttatccaa ccactatgaa agaaggcaac agatcaatct tgtgttatct ccaacatgtg
12120 ctacgctatg agcgagagat aatcacggcg tctccagaga atgactggct atggatcttt
12180 tcagacttta gaagtgccaa aatgacgtac ctatccctca ttacttacca gtctcatctt 12240 ctactccaga gggttgagag aaacctatct aagagtatga gagataacct gcgacaattg
12300 agttctttga tgaggcaggt gctgggcggg cacggagaag ataccttaga gtcagacgac 12360 20 aacattcaac gactgctaaa agactcttta cgaaggacaa gatgggtgga tcaagaggtg 12420 cgccatgcag ctagaaccat gactggagat tacagcccca acaagaaggt gtccecgtaag 5 12480 gtaggatgtt cagaatgggt ctgctctgct caacaggttg cagtctctac ctcagcaaac 12540 ccggceccctg tctcggagcet tgacataagg gecctctcta agaggttcca gaaccctttg 12600 atctcgggct tgagagtggt tcagtgggca accggtgctc attataagct taagcctatt 12660 15 ctagatgatc tcaatgtttt cccatctctc tgccttgtag ttggggacgg gtcagggaggg 12720 atatcaaggg cagtcctcaa catgtticca gatgccaagc tigtgttcaa cagtctttta 12780 gaggtgaatg acctgatggc ttccggaaca catccactgc ctccttcage aatcatgagg 12840 ggaggaaatg atatcgtctc cagagtgata gatcttgact caatctggga aaaaccgtcc 12900 5 gacttgagaa acttggcaac ctggaaatac ttccagtcag tccaaaagca ggtcaacatg 12960 tcctatgacc tcattatttg cgatgcagaa gttactgaca ttgcatctat caaccggatc 13020 10 accctgttaa tgtccgattt tgcattgtct atagatggac cactctattt ggtcttcaaa 13080 acttatggga ctatgctagt aaatccaaac tacaaggcta ttcaacacct gtcaagagcg 13140 15 ttcccetegg tcacagggtt tatcacccaa gtaacttegt ctttttcatc tgagetctac 10 ctccgattct ccaaacgagg gaagtttttc agagatgctg agtacttgac ctcttccacc 13260 20 cttcgagaaa tgagccttgt gttattcaat tgtagcagcc ccaagagtga gatgcagaga 13320 gctcgttcct tgaactatca ggatctigtg agaggatttc ctgaagaaat catatcaaat 13380 5 ccttacaatg agatgatcat aactctgatt gacagtgatg tagaatcttt tctagtccac 13440 aagatggttg atgatcttga gttacagagg ggaactctgt ctaaagtggc tatcattata
13500 10 gccatcatga tagttttctc caacagagtc ttcaacgttt ccaaacccct aactgacccc 13560 tcgttctatc caccgictga tcccaaaatc ctgaggcact tcaacatatg ttigcagtact 13620 5 atgatgtatc tatctactgc tttaggtgac gtccctagct tcgcaagact tcacgacctg 13680 tataacagac ctataactta ttacttcaga aagcaagtca ttcgagggaa cgtttatcta
13740 20 tcttggagtt ggtccaacga cacctcagtg ttcaaaaggg tagcctgtaa ttctagectg 13800 agtctgtcat ctcactggat caggttgatt tacaagatag tgaagactac cagactcgtt 5 13860 ggcagcatca aggatctatc cagagaagtg gaaagacacc ttcataggta caacaggtgg 13920 atcaccctag aggatatcag atctagatca tccctactag actacagttg cctgtgaacc 13980 ggatactcct ggaagcctge ccatgctaag actcttgtgt gatgtatctt gaaaaaaaca 14040 15 agatcctaaa tctgaacctt tggttgtttg attgtttttc tcatttttgt tgtttatttg 14100 ttaagcgt 14108
22 <210> 15629 <211>
DNA <212>
Artificial Sequence <213> 5 <220>
Recombinant Rabies virus vector BNSP333 expressing a wild <223> type .Middle East Respiratory Syndrome spike glycoprotein 10 22 <400> acgcttaaca accagatcaa agaaaaaaca gacattgtca attgcaaagc aaaaatgtaa 60 cacccctaca atggatgccg acaagattgt attcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120 gaagcctgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgccatca aagatttgaa 180 aaagccctgt ataaccctag gaaaggctcc cgatttaaat aaagcataca agtcagtttt 240 gtcaggcatg agcgccgcca aacttaatcc tgacgatgta tgttcctatt tggcagegge 300 5 aatgcagttt tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa ttgtgattgc 360 acgaaaagga gataagatca ccccaggttc tctggtggag ataaaacgta ctgatgtaga 10 420 agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaaga gaccccactg tccctgagca 480 tgcgtcctta gtcggtctte tcttgagtct gtataggttg agcaaaatat ccgggcaaaa 540 cactggtaac tataagacaa acattgcaga caggatagag cagatttttg agacagcccc 600 ttttgttaaa atcgtggaac accatactct aatgacaact cacaaaatgt gtgctaattg 660 gagtactata ccaaacttca gatttttggc cggaacctat gacatgtttt tctcccggat 720 tgagcatcta tattcagcaa tcagagtggg cacagttgtc actgcttatg aagactgttc 780 aggactggta tcatttactg ggttcataaa acaaatcaat ctcaccgcta gagaggcaat 840 actatatttc ttccacaaga actttgagga agagataaga agaatgtttg agccagggca 900 10 ggagacagct gttcctcact cttatttcat ccacttccgt tcactaggcet tgagtgggaa 960 atctccttat tcatcaaatg ctgttggtca cgtgttcaat ctcattcact ttgtaggatg 1020 ctatatgggt caagtcagat ccctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg ctcctcatga 1080 aatgtctgtt ctagggggct atctgggaga ggaattctic gggaaaggga catttgaaag 1140 aagattcttc agagatgaga aagaacttca agaatacgag gcggctgaac tgacaaagac 1200 tgacgtagca ctggcagatg atggaactgt caactctgac gacgaggact acttttcagg 1260 5 tgaaaccaga agtccggagg ctgtttatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactaaa 1320 gagatctcac atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc 10 1380 attcgccgag tttctaaaca agacatattc gagtgactca taacatgaaa aaaactaaca 1440 ccccteeegt acgecgcecac catgatacac tcagtgtttc tactgatgtt ctigttaaca 0 cctacagaaa gttacgttga tgtagggcca gattctgtta agtctgcttg tattgaggtt 1560 gatatacaac agactttctt tgataaaact tggcctaggc caattgatgt ttctaagget 1620 0 gacggtatta tataccctca aggccgtaca tattctaaca taactatcac ttatcaaggt 1680 ctttttccct atcagggaga ccatggtgat atgtatgttt actctgcagg acatgctaca 1740 ggcacaactc cacaaaagtt gtttgtagct aactattctc aggacgtcaa acagtttgct 1800 aatgggtttg tcgtccgtat aggagcagcet gccaattcca ctggcactgt tattattage 1860 ccatctacca gcgctactat acgaaaaatt taccctgctt ttatgctggg ttcttcagtt 1920 0 ggtaatttct cagatggtaa aatgggccgce ttcttcaatc atactctagt ‏معو‎ 1980 gatggatgtg gcactttact tagagctttt tattgtattc tagagcctcg ctctggaaat ~~ 2040 cattgtcctg ctggcaattc ctatacttct tttgccactt atcacactcc tgcaacagat 2100 tgttctgatg gcaattacaa tcgtaatgcc agtctgaact ctittaagga gtattttaat 160 ttacgtaact gcacctttat gtacacttat aacattaccg aagatgagat tttagagtgg 0 tttggcatta cacaaactgc tcaaggtgtt cacctcttct catctcggta tgttgatttg 2280 tacggcggca atatgtttca atttgccacc ttgcctigtit atgatactat taagtattat 2340 5 tctatcattc ctcacagtat tcgttctatc caaagtgata gaaaagcttg ggctgecttc 2400 tacgtatata aacttcaacc gttaacttic ctgttggatt tttctgttga tggttatata 60 cgcagagcta tagactgtgg ttttaatgat ttgtcacaac tccactgctc atatgaatcc 2520 ttcgatgttg aatctggagt ttattcagtt tcgtctttcg aagcaaaacc ttctggctca 2580 gttgtggaac aggctgaagg tgttgaatgt gatttttcac ctctictgtc tggcacacct 2640 15 cctcaggttt ataatttcaa gcgtttggtt tttaccaatt gcaattataa tcttaccaaa 2700 ttgctttcac ttttttctgt gaatgatttt acttgtagtc aaatatctcc agcagcaatt 760 gctagcaact gttattcttc actgattttg gattactttt catacccact tagtatgaaa 2820 tccgatctca gtgttagttc tgctggtcca atatcccagt ttaattataa acagtecttt 80 tctaatccca catgtttgat tttagcgact gttcctcata accttactac tattactaag 2940 cctcttaagt acagctatat taacaagtgc tctegtcttc tttctgatga tcgtactgaa 3000 gtacctcagt tagtgaacgc taatcaatac tcaccctgtg tatccattgt cccatccact 3060 0 gtgtgggaag acggtgatta ttataggaaa caactatctc cacttgaagg tggtggctgg 3120 cttgttgcta gtggctcaac tgttgccatg actgagcaat tacagatggg ctttggtatt 3180 5 acagttcaat atggtacaga caccaatagt gtttgcccca agcttgaatt tgctaatgac 3240 acaaaaattg cctctcaatt aggcaattgc gtggaatatt ‏ووتقاعاءعم‎ tgtttcggge 30 cgtggtgttt ttcagaattg cacagctgta ggtgttcgac agcagcgctt tgtttatgat 160 gcgtaccaga atttagttgg ctattattct gatgatggca actactactg tttgcgtget 3420 5 tgtgttagtg ttcctgtttc tgtcatctat gataaagaaa ctaaaaccca cgctactcta 10 tttggtagtg ttgcatgtga acacatttct tctaccatgt ctcaatactc cegttctacg 3540 cgatcaatgc ttaaacggcg agattctaca tatggccccc ttcagacacc tgttggttgt 3600 gtcctaggac ttgttaattc ctetttgttc gtagaggact gcaagttgcc tcttggtcaa 3660 tctctetgtg cicttcctga cacacctagt actctcacac ctcgeagtgt gegetetgtt 3720 5 ccaggtgaaa tgcgcttggc atccattgct tttaatcatc ctattcaggt tgatcaactt 3780 aatagtagtt attttaaatt aagtataccc actaattttt cctttggtgt gactcaggag 0 tacattcaga caaccattca gaaagttact gttgattgta aacagtacgt ttgcaatggt 3900 ttccagaagt gtgagcaatt actgcgcgag tatggccagt tttgttccaa aataaaccag 3960 5 gctctccatg gtgccaattt acgccaggat gattctgtac gtaatttgtt tgecgagegty 40 aaaagctctc aatcatctcc tatcatacca ggttttggag gtgactttaa tttgacactt 4080 ctagaacctg tttctatatc tactggcagt cgtagtgcac gtagtgctat tgaggatttg 4140 ctatttgaca aagtcactat agctgatcct ggttatatgc aaggttacga tgattgcatg 4200 cagcaaggtc cagcatcagc tcgtgatctt attigtgctc aatatgtggc tggttacaaa 4260 5 gtattacctc ctcttatgga tgttaatatg gaagccgcgt atacttcatc tttgcttggce 4320 agcatagcag gtgttggctg gactgctggc ttatcctect ttgctgctat tccatttgca 0 cagagtatct tttataggtt aaacggtgtt ggcattactc aacaggttct ttcagagaac 440 caaaagctta ttgccaataa gtttaatcag gctctgggag ctatgcaaac aggcttcact 4500 5 acaactaatg aagcttttca gaaggttcag gatgctgtga acaacaatgc acaggctcta 4560 tccaaattag ctagcgagct atctaatact tttggtgcta tttccgectc tattggagac 4620 0 atcatacaac gtcttgatgt tctcgaacag gacgcccaaa tagacagact tattaatggc 4680 cgtttgacaa cactaaatgc ttttgttgca cagcagcttg ticgttccga atcagctget 4740 5 ctttccgctc aattggctaa agataaagtc aatgagtgtg tcaaggcaca atccaagcgt 4800 tctggatttt gcggtcaagg cacacatata gtgtccittg tigtaaatgc ccctaatgge 4860 20 ctttacttca tgcatgttgg ttattaccct agcaaccaca ttgaggttgt tictgcttat 4920 ggtctttgcg atgcagctaa ccctactaat tgtatagccc ctgttaatgg ctactttatt 4980 aaaactaata acactaggat tgttgatgag tggtcatata ctggctcgtc cttctatgca 5040 cctgagccca ttacctcect taatactaag tatgttgcac cacaggtgac ataccaaaac 5100 atttctacta acctccctece tectettctc ggcaattcca ccgggattga cttccaagat 5160 gagttggatg agtttttcaa aaatgttagc accagtatac ctaattttgg ttccctaaca 0 cagattaata ctacattact cgatcttacc tacgagatgt tgtctctica acaagtigtt 5280 5 aaagccctta atgagtctta catagacctt aaagagcttg gcaattatac ttattacaac 5340 aaatggccgt ggtacatttg gcttggtttc attgctgggce ttgttgectt agetctatge 5400 gtcttcttca tactgtgctg cactggttgt ggcacaaact gtatgggaaa acttaagtgt 60 aatcgttgtt gtgatagata cgaggaatac gacctcgagc cgcataaggt tcatgttcac 5520 5 taattagcta gccatgaaaa aaactaacac ccctcctttc gaaccatccc 38886810806 5580 aagatctttg tcaatcctag tgctattaga gccggtctgg ccgatcttga gatggctgaa 5640 10 gaaactgttg atctgatcaa tagaaatatc gaagacaatc aggctcatct ccaaggggaa 5700 cccatagagg tggacaatct ccctgaggat atggggcgac ttcacctgga tgatggaaaa 5 5760 tcgcccaacc atggtgagat agccaaggtg ggagaaggca agtatcgaga ggactttcag 5820 atggatgaag gagaggatcc tagcttcctg ttccagtcat acctggaaaa tgttggagtc 5880 caaatagtca gacaaatgag gtcaggagag agatttctca agatatggtc acagaccgta 5940 5 gaagagatta tatcctatgt cgcggtcaac tttcccaacc ctccaggaaa gtcttcagag 6000 gataaatcaa cccagactac tggccgagag ctcaagaagg agacaacacc cactccttct 10 6060 cagagagaaa gccaatcatc gaaagccagg atggcggctc aaattgcttc tggccctcca 6120 gcccttgaat ggtcggctac caatgaagag gatgatctat cagtggaggce tgagatcgct 6180 caccagattg cagaaagttt ctccaaaaaa tataagtttc cctctcgatc ctcagggata 6240 20 ctcttgtata attttgagca attgaaaatg aaccttgatg atatagttaa agaggcaaaa 6300 aatgtaccag gtgtgacccg tttagcccat gacgggtcca aactccccct aagatgtgta 6360 ctgggatggg tcgctttgge caactctaag aaattccagt tgttagtcga atccgacaag 6420 ctgagtaaaa tcatgcaaga tgacttgaat cgctatacat cttgctaacc gaacctctcc
6480 10 cctcagtccc tctagacaat aaaatccgag atgtcccaaa gtcaacatga aaaaaacagg 6540 caacaccact gataaaatga acctcctacg taagatagtg aaaaaccgca gggacgagga 15 6600 cactcaaaaa tcctctcccg cgtcagceccc tectggatgac gatgacttgt ggcttccace 6660 ccctgaatac ١91-60902198 aagaacttac aggcaagaag aacatgagga acttttgtat 6720 caacggaagg gttaaagtgt gtagcccgaa tggttactcg ttcaggatcc tgcggcacat 6780 5 tctgaaatca ttcgacgaga tatattctgg gaatcatagg atgatcgggt tagtcaaagt 6840 ggttattgga ctggctitgt caggatctcc agtccctgag ggcctgaact gggtatacaa 0 6900 attgaggaga acctttatct tccagtgggc tgattccagg ggccctcttg aaggggagga 6960 gttggaatac tctcaggaga tcacttggga tgatgatact gagttcgtcg gattgcaaat 7020 aagagtgatt gcaaaacagt gtcatatcca gggcagagtc tggtgtatca acatgaaccc 7080 gagagcatgt caactatggt ctgacatgtc tcttcagaca caaaggtccg aagaggacaa
7140 agattcctct ctgctictag aataatcaga ttatatcccg caaatttatc acttgtttac 7/200 ctctggagga gagaacatat gggctcaact ccaacccttg ggagcaatat aacaaaaaac
7260 atgttatggt gccattaaac cgctgcattt catcaaagtc aagttgatta cctttacatt 7320 ttgatcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc aaaagacccc gggaaagatg
7380 gttcctcagg ctctectgtt tgtaccectt ctggtitttc cattgtgttt tgggaaattc 740 cctatttaca cgataccaga caagcttggt ccctggagtc cgattgacat acatcacctc
7500 agctgcccaa acaatttggt agtggaggac gaaggatgca ccaacctgtc agggttctcc 7560 0 tacatggaac ttaaagttgg atacatctta gccataaaag tgaacgggtt cacttgcaca 7620 ggcgttgtga cggaggctga aacctacact aacttcgttg gttatgtcac aaccacgttc 5
7680 aaaagaaagc atttccgccc aacaccagat gcatgtagag ccgcgtacaa ctggaagatg 7740 gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt accctgacta ccgetggctt 7800 cgaactgtaa aaaccaccaa ggagtctctc gttatcatat ctccaagtgt ggcagatttg
7860 15 gacccatatg acagatccct tcactcgagg gtcttcccta gcgggaagtg ctcaggagta 7920 gcggtgtctt ctacctactg ctccactaac cacgattaca ccatttggat gcccgagaat 7980 20 ccgagactag ggatgtcttg tgacattttt accaatagta gagggaagag agcatccaaa 8040 gggagtgaga cttgcggctt tgtagatgaa agaggcctat ataagtcttt aaaaggagca 8100 5 tgcaaactca agttatgtgg agttctagga cttagactta tggatggaac atgggtctcg 8160 atgcaaacat caaatgaaac caaatggtgc cctcccgata agttggtgaa cctgcacgac 8220 10 tttcgctcag acgaaattga gcaccttgtt gtagaggagt tggtcaggaa gagagaggag 8280 tgtctggatg cactagagtc catcatgaca accaagtcag tgagtttcag acgtctcagt 5 8340 catttaagaa aacttgtccc tgggtttgga aaagcatata ccatattcaa caagaccttg 8400 atggaagccg atgctcacta caagtcagtc gagacttgga atgagatcct cccttcaaaa 8460 009191138 gagttggggg gaggtgtcat cctcatgtga acggggtgtt tttcaatggt 0 ataatattag gacctgacgg caatgtctta atcccagaga tgcaatcatc cctcctccag 8580 caacatatgg agttgttgga atcctcggtt atcccccttg tgcaccecct ggcagaccceg 8640 10 tctaccgttt tcaaggacgg tgacgaggct gaggattttg ttgaagttca ccttcccgat 8700 gtgcacaatc aggtctcagg agttgacttg ggtctcccga actgggggaa gtatgtatta 8760 15 ctgagtgcag gggccctgac tgccttgatg ttgataattt tcctgatgac atgttgtaga 8820 agagtcaatc gatcagaacc tacgcaacac aatctcagag ggacagggag ggaggtgtca 8880 0 gtcactcccc aaagcgggaa gatcatatct tcatgggaat cacacaagag tgggggtgag 8940 accagactgt aattaattaa cgtcctttca acgatccaag tccatgaaaa aaactaacac 5
9000 ccctecegta cctagcttat aaagtgetgg gtcatctaag cttttcagtc gagaaaaaaa 9060 cattagatca gaagaacaac tggcaacact tctcaacctg agacttactt caagatgctc 9120 gatcctggag aggtctatga tgaccctatt gacccaatcg agttagaggc tgaacccaga
9180 15 ggaaccccca ttgtccccaa catcttgagg aactctgact acaatctcaa ctctectttg 9240 atagaagatc ctgctagact aatgttagaa tggttaaaaa cagggaatag accttatcgg
9300 20 atgactctaa cagacaattg ctccaggtct ttcagagttt tgaaagatta tttcaagaag 9360 gtagatttgg gttctctcaa ggtgggcgga atggctgcac agtcaatgat ttctctctgg 9420 ttatatggtg cccactctga atccaacagg agccggagat gtataacaga cttggcccat 5
9480 ttctattcca agtcgtccce catagagaag ctgttgaatc tcacgctagg aaatagaggg
9540 ctgagaatcc ccccagaggg agtgttaagt tgccttgaga gggttgatta tgataatgca
9600 tttggaaggt atcttgccaa cacgtattcc tcttacttgt tcticcatgt aatcacctta 9660 tacatgaacg ccctagactg ggatgaagaa aagaccatcc tagcattatg gaaagattta
9720 acctcagtgg acatcgggaa ggacttggta aagttcaaag accaaatatg gggactgctg 9780 20 atcgtgacaa aggactttgt ttactcccaa agticcaatt gtctttttga cagaaactac 90 acacttatgc taaaagatct tttcttgtct cgcttcaact ccttaatggt cttgctctct ~~ 9900 cccccagagce cccgatactc agatgacttg atatctcaac tatgccagcet gtacattgcet 9960 ggggatcaag tcttgtctat gtgtggaaac tccggctatg aagtcatcaa aatattggag 10020 10 ccatatgtcg tgaatagttt agtccagaga gcagaaaagt ttaggcctct cattcattcc 10080 ttgggagact ttcctgtatt tataaaagac aaggtaagtc aacttgaaga gacgttcggt 10140 5 ccctgtgcaa gaaggttctt tagggctctg gatcaattcg acaacataca tgacttggtt 10200 tttgtgtttg gctgttacag gcattggggg cacccatata tagattatcg aaagggtctg 10260 tcaaaactat atgatcaggt tcaccttaaa aaaatgatag ataagtccta ccaggagtgc 10320 ttagcaagcg acctagccag gaggatcctt agatggggtt ttgataagta ctccaagtgg 10380 5 tatctggatt caagattcct agcccgagac caccccttga ctccttatat caaaacccaa 10440 acatggccac ccaaacatat tgtagacttg gtgggggata catggcacaa gctcccgatc 10 10500 acgcagatct ttgagattcc tgaatcaatg gatccgtcag aaatattgga tgacaaatca 10560 cattctttca ccagaacgag actagcttct tggctgtcag aaaaccgagg ggggcctgtt 10620 cctagcgaaa aagttattat cacggccctg tctaagccgce ctgtcaatcc ccgagagttt 10680 20 ctgaggtcta tagacctcgg aggattgcca gatgaagact tgataattgg cctcaagcca 10740 aaggaacggg aattgaagat tgaaggtcga ttctttgctc taatgtcatg gaatctaaga 10800 5 ttgtattttg tcatcactga aaaactcttg gccaactaca tcttgccact tittgacgeg 10 ctgactatga cagacaacct gaacaaggtg tttaaaaagc tgatcgacag ggtcaccggg 10920 10 caagggcttt tggactattc aagggtcaca tatgcatttc acctggacta tgaaaagtgg 10980 aacaaccatc aaagattaga gtcaacagag gatgtatttt ctgtcctaga tcaagtgttt 15 11040 ggattgaaga gagtgttttc tagaacacac gagtttttic aaaaggcctg gatctattat 11100 tcagacagat cagacctcat cgggttacgg gaggatcaaa tatactgctt agatgcgtcc 0 11160 aacggcccaa cctgttggaa tggccaggat ggcgggctag aaggcttacg 080880906 11220 tggagtctag tcagcttatt gatgatagat agagaatctc aaatcaggaa cacaagaacc 5 11280 aaaatactag ctcaaggaga caaccaggtt ttatgtccga catacatgtt gtcgccaggg 11340 ctatctcaag aggggctcct ctatgaattg gagagaatat caaggaatgc actttcgata 11400 tacagagccg tcgaggaagg ggcatctaag ctagggctga tcatcaagaa agaagagacc 11460 15 atgtgtagtt atgacttcct catctatgga aaaacccctt tgtttagagg taacatattg 11520 gtgcctgagt ccaaaagatg ggccagagtc tcttgcgtct ctaatgacca aatagtcaac 11580 20 ctcgccaata taatgtcgac agtgtccacc aatgcgctaa cagtggcaca acactctcaa 11640 tctttgatca aaccgatgag ggattttctg ctcatgtcag tacaggcagt ctttcactac 11700 ctgctattta gcccaatctt aaagggaaga gtttacaaga ttctgagcgc tgaaggggag 11760 agctttctcc tagccatgtc aaggataatc tatctagatc ctictttggg agggatatct 11820 ggaatgtccc tcggaagatt ccatatacga cagttctcag accctgtctc tgaagggtta 11880 tccttctgga gagagatctg gttaagctcc caagagtcct ggattcacge gttgtgtcaa 11940 15 gaggctggaa acccagatct tggagagaga acactcgaga gcttcactcg ccttctagaa 12000 gatccgacca ccttaaatat cagaggaggg gccagtccta ccattctact caaggatgca 0 12060 atcagaaagg 1118132108 cgaggtggac aaggtggaaa attcagagtt tcgagaggca 12120 atcctgtigt ccaagaccca tagagataat tttatactct tcttaatatc tgttgagect 12180 5 ctgtttcctc gatttctcag tgagctattc agttcgtctt ttttgggaat ccccgagtca 10 atcattggat tgatacaaaa ctcccgaacg ataagaaggc agtttagaaa gagtctctca
12300 10 aaaactttag aagaatcctt ctacaactca gagatccacg ggattagtcg gatgacccag 12360 acacctcaga gggttggggg ggtgtggcct tgctcttcag agagggcaga tctacttagg 5 12420 gagatctctt ggggaagaaa agtggtaggc acgacagttc ctcacccttc tgagatgttg 12480 ggattacttc ccaagtcctc tatttcttgc acttgtggag caacaggagg aggcaatcct 12540 agagtttctg tatcagtact cccgtccttt gatcagtcat ttttttcacg aggccececta 12600 aagggatact tgggctcgtc cacctctatg tcgacccagc tattccatgc atgggaaaaa 12660 gtcactaatg ticatgtggt gaagagagct ctatcgttaa aagaatctat aaactggttc 1720 attactagag attccaactt ggctcaagct ctaattagga acattatgtc tctgacagge 12780 cctgatttcc ctctagagga ggcccctgtc ttcaaaagga cggggtcagce cttgcatagg 12840 ttcaagtctg ccagatacag cgaaggaggg tattcttctg tctgcccgaa cctectetct 12900 catatttctg ttagtacaga caccatgtct gatttgaccc aagacgggaa gaactacgat 12960 ttcatgttcc agccattgat gctttatgca cagacatgga catcagagct ggtacagaga 13020 gacacaaggc taagagactc tacgtttcat tggcacctcc gatgcaacag gtgtgtgaga 13080 5 cccattgacg acgtgaccct ggagacctct cagatcttcg agtttccgga tgtgtcgaaa 13140 agaatatcca gaatggtttc tggggctgtg cctcacttcc agaggcttce cgatatcegt 10 13200 ctgagaccag gagattttga atctctaagc ggtagagaaa agtctcacca tatcggatca 13260 gctcaggggc tcttatactc aatcttagtg gcaattcacg actcaggata caatgatgga 13320 accatcttcc ctgtcaacat atacggcaag gtttccccta gagactattt gagagggctc 13380 20 gcaaggggag tattgatagg atcctcgatt tgcttcttga caagaatgac aaatatcaat 13440 attaatagac ctcttgaatt ggtctcaggg gtaatctcat atattctcct gaggctagat 13500 aaccatccct ccttgtacat aatgctcaga gaaccgtctc ttagaggaga gatattttct 10 atccctcaga aaatccccge cgcttatcca accactatga aagaaggcaa 808108816 13620 ttgtgttatc tccaacatgt gctacgctat gagcgagaga taatcacggc gtctccagag 13680 aatgactggc tatggatctt ttcagacttt agaagtgcca aaatgacgta cctatccctc 1370 attacttacc agtctcatct tctactccag agggttgaga gaaacctatc taagagtatg 13800 agagataacc tgcgacaatt gagttctttg atgaggcagg tgctgggcgg gcacggagaa 13860 gataccttag agtcagacga caacattcaa cgactgctaa aagactcttt acgaaggaca 13920 agatgggtgg atcaagaggt gcgccatgca gctagaacca tgactggaga ttacagcccc 13980 5 aacaagaagg tgtcccgtaa ggtaggatgt tcagaatggg tctgctctge tcaacaggtt 14040 gcagtctcta cctcagcaaa cccggceccct gtctcggage ttgacataag ggcecctetet 0 14100 aagaggttcc agaacccttt gatctcgggce ttgagagtgg ttcagtgggc aaccggtgct 14160 cattataagc ttaagcctat tctagatgat ctcaatgttt tcccatctct ctgectigta 14220 gttggggacg ggtcaggggg gatatcaagg gcagtcctca acatgtttcc agatgccaag 14280 cttgtgttca acagtctttt agaggtgaat gacctgatgg cttccggaac acatccactg 14340 cctccttcag caatcatgag gggaggaaat gatatcgtct ccagagtgat agatcttgac 14400 tcaatctggg aaaaaccgtc cgacttgaga aacttggcaa cctggaaata cttccagtca 5 14460 gtccaaaagc aggtcaacat gtcctatgac ctcattattt gcgatgcaga agttactgac 14520 attgcatcta tcaaccggat caccctgtta atgtccgatt ttgcattgtc tatagatgga 14580 ccactctatt tggtcttcaa aacttatggg actatgctag taaatccaaa ctacaagget 14640 attcaacacc tgtcaagagc gttcccctcg gtcacagggt ttatcaccca agtaacttcg 5 14700 tctttttcat ctgagctcta cctccgattc tccaaacgag ggaagttttt cagagatget 14760 gagtacttga cctcttccac ccttcgagaa atgagccttg tgttattcaa ttgtagcagec 14820 0 cccaagagtg agatgcagag agctcgttcc ttgaactatc aggatcttgt gagaggattt 14880 cctgaagaaa tcatatcaaa tccttacaat gagatgatca taactctgat tgacagtgat 5 14940 gtagaatctt ttctagtcca caagatggtt gatgatcttg agttacagag gggaactctg 15000 tctaaagtgg ctatcattat agccatcatg atagttttct ccaacagagt cttcaacgtt 15060 10 tccaaacccc taactgaccc ctcgttctat ccaccgtctg atcccaaaat cctgaggcac 15120 ttcaacatat gttgcagtac tatgatgtat ctatctactg ctttaggtga cgtccctage 15180 5 ttcgcaagac ttcacgacct gtataacaga cctataactt attacttcag aaagcaagtc 15240 attcgaggga acgtttatct atcttggagt tggtccaacg acacctcagt 1-9
15300 gtagcctgta attctagcct gagtctgtca tetcactgga tcaggttgat ttacaagata 0 gtgaagacta ccagactcgt tggcagcatc aaggatctat ccagagaagt ggaaagacac
15420 cttcataggt acaacaggtg gatcacccta gaggatatca gatctagatc atccctacta 15480 10 gactacagtt gcctgtgaac cggatactcc tggaagcctg cccatgctaa gactcttgtg
15540 tgatgtatct tgaaaaaaac aagatcctaa atctgaacct ttggttgttt gattgttttt 15600 15 ctcatttttg ttgtttattt gttaagcgt 15629 23 <210> 20
15539 <211>
DNA <212>
Artificial Sequence <213> <220> 5
Recombinant Rabies virus vector BNSP333 expressing a Middle <223>
East
Respiratory Syndrome Coronavirus spike glycoprotein with a 29 amino acid C-terminal truncation 23 <400> acgcttaaca accagatcaa agaaaaaaca gacattgtca attgcaaagc aaaaatgtaa 60 cacccctaca atggatgccg acaagattgt attcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120 15 gaagcctgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgccatca aagatttgaa 180 aaagccctgt ataaccctag gaaaggctcc cgatttaaat aaagcataca agtcagtttt 240 gtcaggcatg agcgccgcca aacttaatcc tgacgatgta tgttcctatt tggcagegge 300 5 aatgcagttt tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa ttgtgattgc 360 acgaaaagga gataagatca ccccaggttc tctggtggag ataaaacgta ctgatgtaga 10 420 agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaaga gaccccactg tccctgagca 480 tgcgtcctta gtcggtctte tcttgagtct gtataggttg agcaaaatat ccgggcaaaa 540 cactggtaac tataagacaa acattgcaga caggatagag cagatttttg agacagcccc 600 ttttgttaaa atcgtggaac accatactct aatgacaact cacaaaatgt gtgctaattg 660 gagtactata ccaaacttca gatttttggc cggaacctat gacatgtttt tctcccggat 720 tgagcatcta tattcagcaa tcagagtggg cacagttgtc actgcttatg aagactgttc 780 aggactggta tcatttactg ggttcataaa acaaatcaat ctcaccgcta gagaggcaat 840 actatatttc ttccacaaga actttgagga agagataaga agaatgtttg agccagggca 900 10 ggagacagct gttcctcact cttatttcat ccacttccgt tcactaggcet tgagtgggaa 960 atctccttat tcatcaaatg ctgttggtca cgtgttcaat ctcattcact ttgtaggatg 1020 ctatatgggt caagtcagat ccctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg ctcctcatga 1080 aatgtctgtt ctagggggct atctgggaga ggaattctic gggaaaggga catttgaaag 1140 aagattcttc agagatgaga aagaacttca agaatacgag gcggctgaac tgacaaagac 1200 tgacgtagca ctggcagatg atggaactgt caactctgac gacgaggact acttttcagg 1260 5 tgaaaccaga agtccggagg ctgtttatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactaaa 1320 gagatctcac atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc 10 1380 attcgccgag tttctaaaca agacatattc gagtgactca taacatgaaa aaaactaaca 1440 ccccteeegt acgecgcecac catgatacac tcagtgtttc tactgatgtt ctigttaaca 0 cctacagaaa gttacgttga tgtagggcca gattctgtta agtctgcttg tattgaggtt 1560 gatatacaac agactttctt tgataaaact tggcctaggc caattgatgt ttctaagget 1620 0 gacggtatta tataccctca aggccgtaca tattctaaca taactatcac ttatcaaggt 1680 ctttttccct atcagggaga ccatggtgat atgtatgttt actctgcagg acatgctaca 1740 ggcacaactc cacaaaagtt gtttgtagct aactattctc aggacgtcaa acagtttgct 1800 aatgggtttg tcgtccgtat aggagcagcet geccaattcca ctggceactgt tattattage 1860 ccatctacca gcgctactat acgaaaaatt taccctgctt ttatgctggg ttcttcagtt 1920 0 ggtaatttct cagatggtaa aatgggccgce ttcttcaatc atactctagt ‏معو‎ 1980 gatggatgtg gcactttact tagagctttt tattgtattc tagagcctcg ctctggaaat |2040 cattgtcctg ctggcaattc ctatacttct tttgccactt atcacactcc tgcaacagat 2100 tgttctgatg gcaattacaa tcgtaatgcc agtctgaact ctittaagga gtattttaat 160 ttacgtaact gcacctttat gtacacttat aacattaccg aagatgagat tttagagtgg 220 tttggcatta cacaaactgc tcaaggtgtt cacctcttct catctcggta tgttgatttg 2280 tacggcggca atatgtttca atttgccacc ttgcctigtit atgatactat taagtattat 2340 5 tctatcattc ctcacagtat tcgttctatc caaagtgata gaaaagcttg ggctgectic 2400 tacgtatata aacttcaacc gttaactttc ctgttggatt titctgttga tggttatata 2460 cgcagagcta tagactgtgg ttttaatgat ttgtcacaac tccactgctc atatgaatcc 2520 ttcgatgttg aatctggagt ttattcagtt tcgtctttcg aagcaaaacc ttctggctca 2580 gttgtggaac aggctgaagg tgttgaatgt gatttttcac ctctictgtc tggcacacct 2640 5 cctcaggttt ataatttcaa gcgtttggtt tttaccaatt gcaattataa tcttaccaaa 2700 ttgctttcac ttttttctgt gaatgatttt acttgtagtc aaatatctcc agcagcaatt 760 gctagcaact gttattcttc actgattttg gattactttt catacccact tagtatgaaa 2820 tccgatctca gtgttagttc tgctggtcca atatcccagt ttaattataa acagtecttt 80 tctaatccca catgtttgat tttagcgact gttcctcata accttactac tattactaag 2940 cctcttaagt acagctatat taacaagtgc tctegtcttc tttctgatga tcgtactgaa 3000 gtacctcagt tagtgaacgc taatcaatac tcaccctgtg tatccattgt cccatccact 3060 0 gtgtgggaag acggtgatta ttataggaaa caactatctc cacttgaagg tggtggctgg 3120 cttgttgcta gtggctcaac tgttgccatg actgagcaat tacagatggg ctttggtatt 3180 5 acagttcaat atggtacaga caccaatagt gtttgcccca agcttgaatt tgctaatgac 3240 acaaaaattg cctctcaatt aggcaattgc gtggaatatt ‏ووتقاعاءعم‎ tgtttcggge 30 cgtggtgttt ttcagaattg cacagctgta ggtgttcgac agcagcgctt tgtttatgat 160 gcgtaccaga atttagttgg ctattattct gatgatggca actactactg tttgcgtget 3420 5 tgtgttagtg ttcctgtttc tgtcatctat gataaagaaa ctaaaaccca cgctactcta 10 tttggtagtg ttgcatgtga acacatttct tctaccatgt ctcaatactc cegttctacg 3540 cgatcaatgc ttaaacggcg agattctaca tatggccccc ttcagacacc tgttggttgt 3600 gtcctaggac ttgttaattc ctctttgttc gtagaggact gcaagttgcc tcttggtcaa 3660 tctctetgtg cicttcctga cacacctagt actctcacac ctcgeagtgt gegetetgtt 3720 5 ccaggtgaaa tgcgcttggc atccattgct tttaatcatc ctattcaggt tgatcaactt 3780 aatagtagtt attttaaatt aagtataccc actaattttt cctttggtgt gactcaggag 3840 tacattcaga caaccattca gaaagttact gttgattgta aacagtacgt ttgcaatggt 3900 ttccagaagt gtgagcaatt actgcgcgag tatggccagt tttgttccaa aataaaccag 3960 5 gctctccatg gtgccaattt acgccaggat gattctgtac gtaatttgtt tgcgagegtg 4020 aaaagctctc aatcatctcc tatcatacca ggttttggag gtgactttaa tttgacactt 4080 ctagaacctg tttctatatc tactggcagt cgtagtgcac gtagtgctat tgaggatttg 4140 ctatttgaca aagtcactat agctgatcct ggttatatgc aaggttacga tgattgcatg 4200 cagcaaggtc cagcatcagc tcgtgatctt attigtgctc aatatgtggc tggttacaaa 4260 5 gtattacctc ctcttatgga tgttaatatg gaagccgcgt atacttcatc tttgcttggce 4320 agcatagcag gtgttggctg gactgctggc ttatcctect ttgctgctat tccatttgca 0 cagagtatct tttataggtt aaacggtgtt ggcattactc aacaggttct ttcagagaac 540 caaaagctta ttgccaataa gtttaatcag gctctgggag ctatgcaaac aggcttcact 4500 5 acaactaatg aagcttttca gaaggttcag gatgctgtga acaacaatgc acaggctcta 4560 tccaaattag ctagcgagct atctaatact tttggtgcta tttccgectc tattggagac 4620 0 atcatacaac gtcttgatgt tctcgaacag gacgcccaaa tagacagact tattaatggc 4680 cgtttgacaa cactaaatgc ttttgttgca cagcagcttg ticgttccga atcagctget 4740 5 ctttccgctc aattggctaa agataaagtc aatgagtgtg tcaaggcaca atccaagcgt 4800 tctggatttt gcggtcaagg cacacatata gtgtcctttg tigtaaatgc ccctaatgge 4860 20 ctttacttca tgcatgttgg ttattaccct agcaaccaca ttgaggttgt tictgcttat 4920 ggtctttgcg atgcagctaa ccctactaat tgtatagccc ctgttaatgg ctactttatt 4980 aaaactaata acactaggat tgttgatgag tggtcatata ctggctcgtc ctictatgca 5040 cctgagccca ttacctcect taatactaag tatgttgcac cacaggtgac ataccaaaac 5100 atttctacta acctccctece tectettctc ggcaattcca ccgggattga cttccaagat 5160 gagttggatg agtttttcaa aaatgttagc accagtatac ctaattttgg ttccctaaca 5220 cagattaata ctacattact cgatcttacc tacgagatgt tgtctctica acaagtigtt 5280 5 aaagccctta atgagtctta catagacctt aaagagcttg gcaattatac ttattacaac 5340 aaatggccgt ggtacatttg gcttggtttc attgctgggce ttgttgectt agetctatge 5400 gtcttcttca tactgtgctg cactggttgt ggctaagcta gtcatgaaaa aaactaacac 5460 ccctectttc gaaccatcce aaacatgage aagatctitg tcaatcctag tgctattaga 0 gccggtctgg ccgatcttga gatggctgaa gaaactgttg atctgatcaa tagaaatatc 5580 gaagacaatc aggctcatct ccaaggggaa cccatagagg tggacaatct ccctgaggat 5640 10 atggggcgac ttcacctgga tgatggaaaa tcgcccaacc atggtgagat agccaaggtg 5700 ggagaaggca agtatcgaga ggactttcag atggatgaag gagaggatcc tagcttcctg 5 5760 ttccagtcat acctggaaaa tgttggagtc caaatagtca gacaaatgag gtcaggagag 5820 agatttctca agatatggtc acagaccgta gaagagatta tatcctatgt cgcggtcaac 5880 tttcccaacc ctccaggaaa gtcttcagag gataaatcaa cccagactac tggccgagag 5940 5 ctcaagaagg agacaacacc cactccttct cagagagaaa gccaatcatc gaaagccagg 6000 atggcggctc aaattgcttc tggccctcca geccttgaat ggtcggctac caatgaagag 10 6060 gatgatctat cagtggaggc tgagatcgct caccagattg cagaaagttt ctccaaaaaa 6120 tataagtttc cctctcgatc ctcagggata ctcttgtata attttgagca attgaaaatg 6180 aaccttgatg atatagttaa agaggcaaaa aatgtaccag gtgtgacccg tttagcccat 6240 gacgggtcca aactccccct aagatgtgta ctgggatggg tcgcetttgge caactctaag 6300 aaattccagt tgttagtcga atccgacaag ctgagtaaaa tcatgcaaga tgacttgaat 6360 5 cgctatacat cttgctaacc gaacctctcc cctcagtcce tctagacaat aaaatccgag 6420 atgtcccaaa gtcaacatga aaaaaacagg caacaccact gataaaatga acctcctacg 10 6480 taagatagtg aaaaaccgca gggacgagga cactcaaaaa tcctctcccg cgtcageccce 6540 tctggatgac gatgacttgt ggcttccacc ccctgaatac gtcccgectga aagaacttac 6600 aggcaagaag aacatgagga acttttgtat caacggaagg gttaaagtgt gtagcccgaa 6660 20 tggttactcg ttcaggatcc tgcggcacat tctgaaatca ttcgacgaga tatattctgg 6720 gaatcatagg atgatcgggt tagtcaaagt ggttattgga ctggctttgt caggatctcc - 6780 agtccctgag ggcctgaact gggtatacaa attgaggaga acctttatct tccagtggge 5 6840 tgattccagg ggccctcttg aaggggagga gttggaatac tctcaggaga tcacttggga 6900 tgatgatact gagttcgtcg gattgcaaat aagagtgatt gcaaaacagt gtcatatcca 6960 gggcagagtc tggtgtatca acatgaaccc gagagcatgt caactatggt ctgacatgtc 7020 5 tcttcagaca caaaggtccg aagaggacaa agattcctct ctgcttctag aataatcaga 7080 ttatatcccg caaatttatc acttgtttac ctctggagga gagaacatat gggctcaact 7140 20 ccaacccttg ggagcaatat aacaaaaaac atgttatggt gccattaaac cgctgcattt 7200 catcaaagtc aagttgatta cctttacatt ttgatcctct tggatgtgaa aaaaactatt 7260 5 aacatccctc aaaagacccc gggaaagatg gttcctcagg ctctectgtt tgtaccectt 7320 ctggtttttc cattgtgttt tgggaaattc cctatttaca cgataccaga caagcttggt 7380 10 ccctggagtc cgattgacat acatcacctc agctgcccaa acaatttggt agtggaggac 7440 gaaggatgca ccaacctgtc agggttctcc tacatggaac ttaaagttgg atacatctta 5 7500 gccataaaag tgaacgggtt cacttgcaca ggcgttgtga cggaggctga aacctacact 7560 aacttcgttg gttatgtcac aaccacgttc aaaagaaagc atttccgccc aacaccagat 7620 gcatgtagag ccgcgtacaa ctggaagatg gccggtgacc ccagatatga agagtctcta 7680 5 cacaatccgt accctgacta ccgctggctt cgaactgtaa aaaccaccaa ggagtctctc 7740 gttatcatat ctccaagtgt ggcagatttg gacccatatg acagatccct tcactcgagg 7800 10 gtcttcccta gcgggaagtg ctcaggagta gecggtgtcett ctacctactg ctccactaac 7860 cacgattaca ccatttggat gcccgagaat ccgagactag ggatgtcttg tgacattttt 7920 5 accaatagta gagggaagag agcatccaaa gggagtgaga cttgcggctt tgtagatgaa 7980 agaggcctat ataagtcttt aaaaggagca tgcaaactca agttatgtgg agttctagga 20 8040 cttagactta tggatggaac atgggtctcg atgcaaacat caaatgaaac 888109106 8100 cctccegata agttggtgaa cctgcacgac tttcgectcag acgaaattga gcaccttgtt 5 8160 gtagaggagt tggtcaggaa gagagaggag tgtctggatg cactagagtc catcatgaca 8220 accaagtcag tgagtttcag acgtctcagt catttaagaa aacttgtccc tgggtttgga 8280 aaagcatata ccatattcaa caagaccttg atggaagccg atgctcacta caagtcagtc 8340 gagacttgga atgagatcct cccttcaaaa gggtgtttaa gagttggggg gaggtgtcat 8400 cctcatgtga acggggtgtt titcaatggt ataatattag gacctgacgg caatgtctta ~~ 8460 atcccagaga tgcaatcatc cctcctccag caacatatgg agttgttgga 316011 8520 atcccccttg tgcaccccct ggcagacccg tctaccgttt tcaaggacgg tgacgaggct 8580 5 gaggattttg ttgaagttca ccttcccgat gtgcacaatc aggtctcagg agttgacttg 8640 ggtctcccga actgggggaa gtatgtatta ctgagtgcag gggccctgac tgccttgatg
8700 10 ttgataattt tcctgatgac atgttgtaga agagtcaatc gatcagaacc tacgcaacac 8760 aatctcagag ggacagggag ggaggtgtca gtcactcccc aaagcgggaa gatcatatct 5 8820 tcatgggaat cacacaagag tgggggtgag accagactgt aattaattaa cgtcctttca 8880 acgatccaag tccatgaaaa aaactaacac 001260609013 cctagcettat aaagtgetgg
8940 gtcatctaag cttttcagtc gagaaaaaaa cattagatca gaagaacaac tggcaacact
9000 5 tctcaacctg agacttactt caagatgctc gatcctggag aggtctatga tgaccctatt 9060 gacccaatcg agttagaggc tgaacccaga ggaaccccca ttgtccccaa catcttgagg 9120 10 aactctgact acaatctcaa ctctcctttg atagaagatc ctgctagact aatgttagaa 9180 tggttaaaaa cagggaatag accttatcgg atgactctaa cagacaattg ctccaggtct 9240 15 ttcagagttt tgaaagatta tttcaagaag gtagatttgg gttctctcaa ggtgggcgga 9300 atggctgcac agtcaatgat ttctctctgg ttatatggtg cccactctga atccaacagg 9360 agccggagat gtataacaga cttggcccat ttctattcca agtcgtccce catagagaag
9420 ctgttgaatc tcacgctagg aaatagaggg ctgagaatcc ccccagaggg agtgttaagt
9480 5 tgccttgaga gggttgatta tgataatgca tttggaaggt atcttgccaa cacgtattcc 9540 tcttacttgt tcttccatgt aatcacctta tacatgaacg ccctagactg ggatgaagaa 9600 aagaccatcc tagcattatg gaaagattta acctcagtgg acatcgggaa ggacttggta
9660 aagttcaaag accaaatatg gggactgctg atcgtgacaa aggactttgt ttactcccaa 9720 15 agttccaatt gtctttttga cagaaactac acacttatgc taaaagatct tttcttgtct 9780 cgcttcaact ccttaatggt cttgctctct cccccagage cccgatactc agatgacttg 980 atatctcaac tatgccagct gtacattgct ggggatcaag tcttgtctat gtgtggaaac 9900 tccggctatg aagtcatcaa aatattggag ccatatgtcg tgaatagttt agtccagaga 9960 gcagaaaagt ttaggcctct cattcattcc ttgggagact ttcctgtatt tataaaagac 10020 aaggtaagtc aacttgaaga gacgttcggt ccctgtgcaa gaaggttctt tagggctctg 10080 gatcaattcg acaacataca tgacttggtt tttgtgtttg gctgttacag gcattggggg 1010 cacccatata tagattatcg aaagggtctg tcaaaactat atgatcaggt tcaccttaaa 10200 aaaatgatag ataagtccta ccaggagtgc ttagcaagcg acctagccag gaggatcctt 10260 8031099911 ttgataagta ctccaagtgg tatctggatt caagattcct agcccgagac
10320 20 caccccttga ctccttatat caaaacccaa acatggccac ccaaacatat tgtagacttg 10380 gtgggggata catggcacaa gctcccgatc acgcagatct ttgagattcc tgaatcaatg 5
10440 gatccgtcag aaatattgga tgacaaatca cattctttca ccagaacgag actagcttct 10500 tggctgtcag aaaaccgagg ggggcctgtt cctagcgaaa aagttattat cacggccctg 10560 tctaagccgce ctgtcaatcc ccgagagttt ctgaggtcta tagacctcgg aggattgcca
10620 15 gatgaagact tgataattgg cctcaagcca aaggaacggg aattgaagat tgaaggtcga 10680 ttctttgctc taatgtcatg gaatctaaga ttgtattttg tcatcactga aaaactcttg 10740 20 gccaactaca tcttgccact ttttgacgcg ctgactatga cagacaacct gaacaaggtg 10800 tttaaaaagc tgatcgacag ggtcaccggg caagggcttt tggactattc aagggtcaca 10860 5 tatgcatttc acctggacta tgaaaagtgg aacaaccatc aaagattaga gtcaacagag 10920 gatgtatttt ctgtcctaga tcaagtgttt ggattgaaga gagtgtittc tagaacacac 10980 10 gagttttttc aaaaggcctg gatctattat tcagacagat cagacctcat cgggttacgg 11040 gaggatcaaa tatactgctt agatgcgtcc aacggcccaa cctgttggaa tggccaggat 5 11100 ggcgggctag aaggcttacg gcagaagggc tggagtctag tcagcttatt gatgatagat 11160 agagaatctc aaatcaggaa cacaagaacc aaaatactag ctcaaggaga caaccaggtt 11220 ttatgtccga catacatgtt gtcgccaggg ctatctcaag aggggctcct ctatgaattg 11280 gagagaatat caaggaatgc actttcgata tacagagccg tcgaggaagg ggcatctaag 11340 ctagggctga tcatcaagaa agaagagacc atgtgtagtt atgacttcct catctatgga 11400 10 aaaacccctt tgtttagagg taacatattg gtgcctgagt ccaaaagatg ggccagagtc 11460 tcttgegtct ctaatgacca aatagtcaac ctcgccaata taatgtcgac agtgtccace 5 11520 aatgcgctaa cagtggcaca acactctcaa tctttgatca aaccgatgag ggattttctg 11580 ctcatgtcag tacaggcagt ctttcactac ctgctattta gcccaatctt aaagggaaga 11640 gittacaaga ttctgagcgc tgaaggggag agctttctcc tagccatgtc aaggataatc 11700 5 tatctagatc cttctttggg agggatatct ggaatgtcce tcggaagatt ccatatacga 11760 cagttctcag accctgtctc tgaagggtta tccttctgga gagagatctg gttaagctcc 11820 caagagtcct ggattcacgc gttgtgtcaa gaggctggaa acccagatct tggagagaga 11880 acactcgaga gcttcactcg ccttctagaa gatccgacca ccttaaatat cagaggaggg 11940 15 gccagtccta ccattctact caaggatgca atcagaaagg ctttatatga cgaggtggac 12000 aaggtggaaa attcagagtt tcgagaggca atcctgttgt ccaagaccca tagagataat 0 12060 tttatactct tcttaatatc tgttgagcect ctgtttcctc gatttctcag tgagcetattc 12120 agttcgtctt ttttgggaat ccccgagtca atcattggat tgatacaaaa ctcccgaacg 12180 ataagaaggc agtttagaaa gagtctctca aaaactttag aagaatcctt ctacaactca 12240 gagatccacg ggattagtcg gatgacccag acacctcaga gggttggggg ggtgtggcect 12300 10 tgctcttcag agagggcaga tctacttagg gagatctctt ggggaagaaa agtggtagge 12360 acgacagttc ctcacccttc tgagatgttg ggattacttc ccaagtcctc tatttcttgc 12420 15 acttgtggag caacaggagg aggcaatcct agagtttctg tatcagtact cccgtccttt 12480 gatcagtcat ttttttcacg aggcccccta aagggatact tgggctcgtc cacctetatg 12540 0 tcgacccagc tattccatgc atgggaaaaa gtcactaatg ttcatgtggt gaagagagct 12600 ctatcgttaa aagaatctat aaactggttc attactagag attccaactt ggctcaagct 12660 5 ctaattagga acattatgtc tctgacaggc cctgatttcc ctctagagga ggcccctgtc 12720 ttcaaaagga cggggtcagc cttgcatagg ttcaagtctg ccagatacag cgaaggaggg 10 12780 tattcttctg tctgcccgaa cctectetct catatttctg ttagtacaga caccatgtct 12840 gatttgaccc aagacgggaa gaactacgat ttcatgttcc agccattgat gctttatgca 5 12900 cagacatgga catcagagct ggtacagaga gacacaaggc taagagactc tacgtttcat 12960 tggcacctcc gatgcaacag gtgtgtgaga cccattgacg acgtgaccct ggagacctct 13020 cagatcttcg agtttccgga tgtgtcgaaa agaatatcca gaatggtttc tggggctgtg 13080 5 cctcacttcc agaggcttcc cgatatccgt ctgagaccag gagattttga atctctaagce 13140 ggtagagaaa agtctcacca tatcggatca gctcaggggc tcttatactc aatcttagtg 10 13200 gcaattcacg actcaggata caatgatgga accatcttcc ctgtcaacat atacggcaag 13260 gtttccccta gagactattt gagagggctc gcaaggggag tattgatagg atcctcgatt 13320 tgcttcttga caagaatgac aaatatcaat attaatagac ctcttgaatt ggtctcaggg 13380 gtaatctcat atattctcct gaggctagat aaccatccct ccttgtacat aatgctcaga 00 gaaccgtctc ttagaggaga gatattttct atccctcaga aaatccccge cgcttatcca 13500 accactatga aagaaggcaa cagatcaatc ttgtgttatc tccaacatgt gctacgctat 5 13560 gagcgagaga taatcacggc gtctccagag aatgactggc tatggatctt ttcagacttt 13620 agaagtgcca aaatgacgta cctatccctc attacttacc agtctcatct tctactccag 10 agggttgaga gaaacctatc taagagtatg agagataacc tgcgacaatt gagttctttg 13740 atgaggcagg tgctgggcgg gcacggagaa gataccttag agtcagacga caacattcaa 13800 cgactgctaa aagactcttt acgaaggaca agatgggtgg atcaagaggt gcgccatgca 13860 20 gctagaacca tgactggaga ttacagcccc aacaagaagg tgtcccgtaa ggtaggatgt 13920 tcagaatggg tctgctctgc tcaacaggtt gcagtctcta cctcagcaaa cccggceccct 13980 5 gtctcggagc ttgacataag ggccctctct aagaggttcc agaacccttt gatctcggge 14040 ttgagagtgg ttcagtgggc aaccggtgct cattataagc ttaagcctat tctagatgat 14100 0 ctcaatgttt tcccatctct ctgccttgta gttggggacg ggtcaggggg gatatcaagg 14160 gcagtcctca acatgtttcc agatgccaag cttgtgttca acagtctitt agaggtgaat 14220 gacctgatgg cttccggaac acatccactg cctccttcag caatcatgag gggaggaaat 14280 gatatcgtct ccagagtgat agatcttgac tcaatctggg aaaaaccgtc cgacttgaga 14340 20 aacttggcaa cctggaaata cttccagtca gtccaaaagc aggtcaacat gtcctatgac 14400 ctcattattt gcgatgcaga agttactgac attgcatcta tcaaccggat caccctgtta 14460 5 atgtccgatt ttgcattgtc tatagatgga ccactctatt tggtcttcaa aacttatggg 14520 actatgctag taaatccaaa ctacaaggct attcaacacc tgtcaagagc gttcccctcg
14580 10 gtcacagggt ttatcaccca agtaacticg tctttticat ctgagctcta cctccgattc 14640 tccaaacgag ggaagttttt cagagatgct gagtacttga cctcttccac ccttcgagaa
14700 15 atgagccttg tgttattcaa ttgtagcagc cccaagagtg agatgcagag agctcgttcc 14760 ttgaactatc aggatctigt gagaggattt cctgaagaaa tcatatcaaa tccttacaat 14820 20 gagatgatca taactctgat tgacagtgat gtagaatctt tictagtcca caagatggtt 14880 gatgatcttg agttacagag gggaactctg tctaaagtgg ctatcattat agccatcatg 14940 5 atagttttct ccaacagagt cttcaacgtt tccaaacccc taactgaccc ctegttctat 10 ccaccgtctg atcccaaaat cctgaggcac ttcaacatat gttgcagtac tatgatgtat 15060 10 ctatctactg ctttaggtga cgtccctage ttcgcaagac ttcacgacct gtataacaga 15120 cctataactt attacttcag aaagcaagtc attcgaggga acgtttatct atcttggagt 15180 5 tggtccaacg acacctcagt gttcaaaagg gtagcctgta attctagcect gagtctgtca 15240 tctcactgga tcaggttgat ttacaagata gtgaagacta ccagactcgt tggcagcatc 15300 aaggatctat ccagagaagt ggaaagacac cttcataggt acaacaggtg gatcacccta 15360 5 gaggatatca gatctagatc atccctacta gactacagtt gcctgtgaac cggatactcc 15420 tggaagcctg cccatgctaa gactcttgtg tgatgtatct tgaaaaaaac aagatcctaa 0 15480 atctgaacct ttggttgttt gattgttttt ctcatttttg ttgtttattt gttaagcgt 15539 24 <210> 15569 <211>
DNA <212>
Artificial Sequence <213>
<220>
Recombinant Rabies virus vector BNSP333 expressing a Middle <223>
East
Respiratory Syndrome Coronavirus spike glycoprotein with a 19 amino acid C-terminal truncation 5 24 <400> acgcttaaca accagatcaa agaaaaaaca gacattgtca attgcaaagc aaaaatgtaa 60 cacccctaca atggatgccg acaagattgt attcaaagtc aataatcagg tggtctcttt 120 gaagcctgag attatcgtgg atcaatatga gtacaagtac cctgccatca aagatttgaa 180 aaagccctgt ataaccctag gaaaggctcc cgatttaaat aaagcataca agtcagtttt 240 gtcaggcatg agcgccgcca aacttaatcc tgacgatgta tgttcctatt tggcagegge 300 20 aatgcagttt tttgagggga catgtccgga agactggacc agctatggaa 01081106 360 acgaaaagga gataagatca ccccaggttc tctggtggag ataaaacgta ctgatgtaga 5 420 agggaattgg gctctgacag gaggcatgga actgacaaga gaccccactg tccctgagca 480 tgcgtcctta gtcggtctte tcttgagtct gtataggttg agcaaaatat ccgggcaaaa 540 cactggtaac tataagacaa acattgcaga caggatagag cagatttttg agacagcccc 600 ttttgttaaa atcgtggaac accatactct aatgacaact cacaaaatgt gtgctaattg 660 gagtactata ccaaacttca gatttttggc cggaacctat gacatgtttt tctcccggat 720 tgagcatcta tattcagcaa tcagagtggg cacagttgtc actgcttatg aagactgttc 780 20 aggactggta tcatttactg ggttcataaa acaaatcaat ctcaccgcta gagaggcaat 840 actatatttc ttccacaaga actttgagga agagataaga agaatgtttg agccagggca 5 900 ggagacagct gttcctcact cttatttcat ccacttccgt tcactaggcet tgagtgggaa 960 atctccttat tcatcaaatg ctgttggtca cgtgttcaat ctcattcact ttgtaggatg 1020 10 ctatatgggt caagtcagat ccctaaatgc aacggttatt gctgcatgtg ctcctcatga 1080 aatgtctgtt ctagggggct atctgggaga ggaattctic gggaaaggga catttgaaag 1140 15 aagattcttc agagatgaga aagaacttca agaatacgag gcggctgaac tgacaaagac 1200 tgacgtagca ctggcagatg atggaactgt caactctgac gacgaggact acttttcagg
1260 tgaaaccaga agtccggagg ctgtttatac tcgaatcatg atgaatggag gtcgactaaa
1320 5 gagatctcac atacggagat atgtctcagt cagttccaat catcaagccc gtccaaactc
1380 attcgccgag tttctaaaca agacatattc gagtgactca taacatgaaa aaaactaaca 10
1440 ccccteeegt acgecgcecac catgatacac tcagtgtttc tactgatgtt ctigttaaca 0 cctacagaaa gttacgttga tgtagggcca gattctgtta agtctgcttg tattgaggtt 1560 5 gatatacaac agactttctt tgataaaact tggcctaggc caattgatgt ttctaaggct 1620 gacggtatta tataccctca aggccgtaca tattctaaca taactatcac ttatcaaggt 1680 ctttttccct atcagggaga ccatggtgat atgtatgttt actctgcagg acatgctaca 1740 ggcacaactc cacaaaagtt gtttgtagct aactattctc aggacgtcaa acagtttgct 1800 aatgggtttg tcgtccgtat aggagcagcet gccaattcca ctggcactgt tattattage 1860 5 ccatctacca gcgctactat acgaaaaatt taccctgctt ttatgctggg ttcttcagtt 1920 ggtaatttct cagatggtaa aatgggccgce ttcttcaatc atactctagt ‏معو‎ 1980 gatggatgtg gcactttact tagagctttt tattgtattc tagagcctcg ctctggaaat 2040 cattgtcctg ctggcaattc ctatacttct tttgccactt atcacactcc tgcaacagat 2100 tgttctgatg gcaattacaa tcgtaatgcc agtctgaact ctittaagga gtattttaat 2160 5 ttacgtaact gcacctttat gtacacttat aacattaccg aagatgagat tttagagtgg 0 tttggcatta cacaaactgc tcaaggtgtt cacctcttct catctcggta tgttgatttg 2280 tacggcggca atatgtttca atttgccacc ttgcctgtit atgatactat taagtattat 2340 tctatcattc ctcacagtat tcgttctatc caaagtgata gaaaagcttg ggctgectic 2400 tacgtatata aacttcaacc gttaacttic ctgttggatt tttctgttga tggttatata 60 cgcagagcta tagactgtgg ttttaatgat ttgtcacaac tccactgctc atatgaatcc 2520 ttcgatgttg aatctggagt ttattcagtt tcgtctttcg aagcaaaacc ttctggctca 2580 10 gttgtggaac aggctgaagg tgttgaatgt gatttttcac ctctictgtc tggcacacct 0 cctcaggttt ataatttcaa gcgtttggtt tttaccaatt gcaattataa tcttaccaaa 2700 ttgctttcac ttttttctgt gaatgatttt acttgtagtc aaatatctcc agcagcaatt 760 gctagcaact gttattcttc actgattttg gattactttt catacccact tagtatgaaa 2820 tccgatctca gtgttagttc tgctggtcca atatcccagt ttaattataa acagtecttt 80 tctaatccca catgtttgat tttagcgact gttcctcata accttactac tattactaag 2940 cctcttaagt acagctatat taacaagtgc tctcgtcttc tttctgatga tcgtactgaa 3000 5S gtacctcagt tagtgaacgc taatcaatac tcaccctgtg tatccattgt cccatccact 60 gtgtgggaag acggtgatta ttataggaaa caactatctc cacttgaagg tggtggctgg
3120 0 cttgttgcta gtggctcaac tgttgccatg actgagcaat tacagatggg ctttggtatt 10 acagttcaat atggtacaga caccaatagt gtttgcccca agcttgaatt tgctaatgac
3240 15 acaaaaattg cctctcaatt aggcaattgc gtggaatatt ccctctatgg tgtttcggge 30 cgtggtgttt ttcagaattg cacagctgta ggtgttcgac agcagcgctt tgtttatgat 160 gcgtaccaga atttagttgg ctattattct gatgatggca actactactg tttgcgtgct 3420 tgtgttagtg ttcctgtttc tgtcatctat gataaagaaa ctaaaaccca cgctactcta 10 tttggtagtg ttgcatgtga acacatttct tctaccatgt ctcaatactc cegttctacg 3540 cgatcaatgc ttaaacggcg agattctaca tatggccccc ttcagacacc tgttggttgt 600 gtcctaggac ttgttaattc ctctttgtic gtagaggact gcaagttgec tcttggtcaa 3660 0 tctctetgtg ctcttcctga cacacctagt actctcacac ctcgeagtgt gegetetgtt 3720 ccaggtgaaa tgcgcttggc atccattgct tttaatcatc ctattcaggt tgatcaactt 3780 aatagtagtt attttaaatt aagtataccc actaattttt cctttggtgt gactcaggag 3840 tacattcaga caaccattca gaaagttact gttgattgta aacagtacgt ttgcaatggt 3900 ttccagaagt gtgagcaatt actgcgcgag tatggccagt tttgttccaa aataaaccag
3960 gctctccatg gtgccaattt acgccaggat gattctgtac gtaatttgtt tgcgagegtg 0 aaaagctctc aatcatctcc tatcatacca ggttttggag gtgactttaa tttgacactt 4080 ctagaacctg tttctatatc tactggcagt cgtagtgcac gtagtgctat tgaggatttg 4140 ctatttgaca aagtcactat agctgatcct ggttatatgc aaggttacga tgattgcatg 4200 10 cagcaaggtc cagcatcagc tcgtgatctt atttgtgctc aatatgtggc tggttacaaa 4260 gtattacctc ctcttatgga tgttaatatg gaagccgcgt atacttcatc tttgcttggce 4320 agcatagcag gtgttggctg gactgctggc ttatcctcct ttgctgctat tccatttgca 50 cagagtatct tttataggtt aaacggtgtt ggcattactc aacaggttct ttcagagaac ~~ 4440 caaaagctta ttgccaataa gtttaatcag gctctgggag ctatgcaaac aggcttcact 4500 acaactaatg aagcttttca gaaggttcag gatgctgtga acaacaatgc acaggctcta 4560 5 tccaaattag ctagcgagct atctaatact tttggtgcta tttccgcectc tattggagac 4620 atcatacaac gtcttgatgt tctcgaacag gacgcccaaa tagacagact tattaatggc 4680 10 cgtttgacaa cactaaatgc ttttgttgca cagcagcttg ttcgttccga atcagctget 470 ctttccgctc aattggctaa agataaagtc aatgagtgtg tcaaggcaca atccaagcgt 4800 15 tctggatttt gcggtcaagg cacacatata gtgtcctttg ttgtaaatgc ccctaatggce 4860 ctttacttca tgcatgttgg ttattaccct agcaaccaca ttgaggttgt tictgcttat 4920 ggtctttgcg atgcagctaa ccctactaat tgtatagccc ctgttaatgg ctactttatt 4980 aaaactaata acactaggat tgttgatgag tggtcatata ctggctcgtc cttctatgca 5040 cctgagccca ttacctcect taatactaag tatgttgcac cacaggtgac ataccaaaac 5
5100 atttctacta acctccctece tectettctc ggcaattcca ccgggattga cttccaagat 5160 gagttggatg agtttttcaa aaatgttagc accagtatac ctaattttgg ttccctaaca 5220 10 cagattaata ctacattact cgatcttacc tacgagatgt tgtctcttca acaagttgtt 5280 aaagccctta atgagtctta catagacctt aaagagcttg gcaattatac ttattacaac 5340 aaatggccgt ggtacatttg gcttggtttc attgctgggce ttgttgectt agetctatge 5400 gtcttcttca tactgtgctg cactggttgt ggcacaaact gtatgggaaa acttaagtgt 0 aattaagcta gtcatgaaaa aaactaacac ccctcctttc gaaccatccc 8880810806 5520 aagatctttg tcaatcctag tgctattaga gccggtctgg ccgatcttga gatggctgaa 2 5580 gaaactgttg atctgatcaa tagaaatatc gaagacaatc aggctcatct ccaaggggaa 5640 cccatagagg tggacaatct ccctgaggat atggggcgac ttcacctgga tgatggaaaa 5700 10 tcgcccaacc atggtgagat agccaaggtg ggagaaggca agtatcgaga ggactttcag 5760 atggatgaag gagaggatcc tagcttcctg ttccagtcat acctggaaaa tgttggagtc 5 5820 caaatagtca gacaaatgag gtcaggagag agatttctca agatatggtc acagaccgta 5880 gaagagatta tatcctatgt cgcggtcaac tttcccaacc ctccaggaaa gtcttcagag 5940 gataaatcaa cccagactac tggccgagag ctcaagaagg agacaacacc cactccttct 6000 5 cagagagaaa gccaatcatc gaaagccagg atggcggctc aaattgcttc tggccctcca 6060 gcccttgaat ggtcggctac caatgaagag gatgatctat cagtggaggce tgagatcget 10 6120 caccagattg cagaaagttt ctccaaaaaa tataagtttc cctctcgatc ctcagggata 6180 ctcttgtata attttgagca attgaaaatg aaccttgatg atatagttaa agaggcaaaa 6240 aatgtaccag gtgtgacccg tttagcccat gacgggtcca aactccccct aagatgtgta 6300 ctgggatggg tcgctttgge caactctaag aaattccagt tgttagtcga atccgacaag 6360 ctgagtaaaa tcatgcaaga tgacttgaat cgctatacat cttgctaacc gaacctctcc 6420 5 cctcagtccc tctagacaat aaaatccgag atgtcccaaa gtcaacatga aaaaaacagg 6480 caacaccact gataaaatga acctcctacg taagatagtg aaaaaccgca gggacgagga 10 6540 cactcaaaaa tcctctcccg cgtcageccce tctggatgac gatgacttgt ggcttccace 6600 ccctgaatac gtcccgetga aagaacttac aggcaagaag aacatgagga acttttgtat 6660 caacggaagg gttaaagtgt gtagcccgaa tggttactcg ttcaggatcc tgcggcacat 6720 20 tctgaaatca ttcgacgaga tatattctgg gaatcatagg atgatcgggt tagtcaaagt 6780 ggttattgga ctggctitgt caggatctcc agtccctgag ggcectgaact gggtatacaa 6840 5 attgaggaga acctttatct tccagtgggc tgattccagg ggccctcttg aaggggagga 6900 gttggaatac tctcaggaga tcacttggga tgatgatact gagticgtcg gattgcaaat 6960 0 aagagtgatt gcaaaacagt gtcatatcca gggcagagtc tggtgtatca acatgaaccc 7020 gagagcatgt caactatggt ctgacatgtc tcttcagaca caaaggtccg aagaggacaa 15 7080 agattcctct ctgctictag aataatcaga ttatatcccg caaatttatc acttgtttac 710 ctctggagga gagaacatat gggctcaact ccaacccttg ggagcaatat aacaaaaaac 0 7200 atgttatggt gccattaaac cgctgcattt catcaaagtc aagttgatta cctttacatt 7260 ttgatcctct tggatgtgaa aaaaactatt aacatccctc aaaagacccc gggaaagatg 7320 5 gttcctcagg ctctectgtt tgtaccectt ctggtitttc cattgtgttt tgggaaattic 7380 cctatttaca cgataccaga caagcttggt ccctggagtc cgattgacat acatcacctc 7440 0 agctgcccaa acaatttggt agtggaggac gaaggatgca ccaacctgtc agggttctcc 7500 tacatggaac ttaaagttgg atacatctta gccataaaag tgaacgggtt cacttgcaca 15 7560 ggcgttgtga cggaggctga aacctacact aacttcgttg gttatgtcac aaccacgttc 7620 aaaagaaagc atttccgccc aacaccagat gcatgtagag ccgcgtacaa ctggaagatg 7680 gccggtgacc ccagatatga agagtctcta cacaatccgt accctgacta ccgetggctt 7740 5 cgaactgtaa aaaccaccaa ggagtctctc gttatcatat ctccaagtgt ggcagatttg 7800 gacccatatg acagatccct tcactcgagg gtcttcccta gcgggaagtg ctcaggagta 10 7860 gcggtgtctt ctacctactg ctccactaac cacgattaca ccatttggat gcccgagaat 7920 ccgagactag ggatgtcttg tgacattttt accaatagta gagggaagag agcatccaaa 15 7980 gggagtgaga cttgcggctt tgtagatgaa agaggcctat ataagtcttt aaaaggagca 8040 tgcaaactca agttatgtgg agttctagga cttagactta tggatggaac atgggtctcg 8100 atgcaaacat caaatgaaac caaatggtgc cctcccgata agttggtgaa cctgcacgac 8160 tttcgctcag acgaaattga gcacctigtt gtagaggagt tggtcaggaa gagagaggag 5 8220 tgtctggatg cactagagtc catcatgaca accaagtcag tgagtttcag acgtctcagt 8280 catttaagaa aacttgtccc tgggtttgga aaagcatata ccatattcaa caagaccttg 8340 atggaagccg atgctcacta caagtcagtc gagacttgga atgagatcct cccttcaaaa 8400 15 gggtgtttaa gagttggggg gaggtgtcat cctcatgtga acggggtgtt tttcaatggt 8460 ataatattag gacctgacgg caatgtctta atcccagaga tgcaatcatc cctcctccag 8520 20 caacatatgg agttgttgga atcctcggtt 316000010 tgcaccecct ggcagaccceg
8580 tctaccgttt tcaaggacgg tgacgaggcet gaggattttg ttgaagttca ccttcccgat 7 0 gtgcacaatc aggtctcagg agttgacttg ggtctcccga actgggggaa gtatgtatta
8700 ctgagtgcag gggccctgac tgccttgatg ttgataattt tcctgatgac atgttgtaga 8760 agagtcaatc gatcagaacc tacgcaacac aatctcagag ggacagggag ggaggtgtca
8820 gtcactcccc aaagcgggaa gatcatatct tcatgggaat cacacaagag tgggggtgag 8880 15 accagactgt aattaattaa cgtcctttca acgatccaag tccatgaaaa aaactaacac
8940 ccctecegta cctagcttat aaagtgetgg gtcatctaag cttttcagtc gagaaaaaaa 0
9000 cattagatca gaagaacaac tggcaacact tctcaacctg agacttactt caagatgctc 9060 gatcctggag aggtctatga tgaccctatt gacccaatcg agttagaggce tgaacccaga 5 9120 ggaaccccca ttgtccccaa catcttgagg aactctgact acaatctcaa ctctectttg 9180 atagaagatc ctgctagact aatgttagaa tggttaaaaa cagggaatag accttatcgg 10 9240 atgactctaa cagacaattg ctccaggtct ttcagagttt tgaaagatta tttcaagaag 9300 gtagatttgg gtictctcaa ggtgggcgga atggctgcac agtcaatgat ttctctctgg 9360 5 ttatatggtg cccactctga atccaacagg agccggagat gtataacaga cttggcccat 9420 ttctattcca agtcgtccce catagagaag ctgttgaatc tcacgctagg aaatagaggg 9480 ctgagaatcc ccccagaggg agtgttaagt tgccttgaga gggttgatta tgataatgca 9540 5 tttggaaggt atcttgccaa cacgtattcc tcttacttgt tcttccatgt aatcacctta 9600 tacatgaacg ccctagactg ggatgaagaa aagaccatcc tagcattatg gaaagattta 9660 10 acctcagtgg acatcgggaa ggacttggta aagttcaaag accaaatatg gggactgctg 9720 atcgtgacaa aggactttgt ttactcccaa agttccaatt gtctttttga cagaaactac 9780 5 acacttatgc taaaagatct tttcttgtct cgcttcaact ccttaatggt cttgectctct 9840 cccccagagce cccgatactc agatgacttg atatctcaac tatgccagcet gtacattgcet 9900 20 ggggatcaag tcttgtctat gtgtggaaac tccggctatg aagtcatcaa aatattggag 9960 ccatatgtcg tgaatagttt agtccagaga gcagaaaagt ttaggcctct cattcattcc 10020 5 ttgggagact ttcctgtatt tataaaagac aaggtaagtc aacttgaaga gacgttcggt 10080 ccctgtgcaa gaaggttctt tagggctctg gatcaattcg acaacataca tgacttggtt 10140 0 tttgtgtttg gctgttacag gcattggggg cacccatata tagattatcg aaagggtctg 100 tcaaaactat atgatcaggt tcaccttaaa aaaatgatag ataagtccta ccaggagtgc
10260 15 ttagcaagcg acctagccag gaggatcctt agatggggtt ttgataagta ctccaagtgg 10320 tatctggatt caagattcct agcccgagac caccccttga ctccttatat caaaacccaa 10380 acatggccac ccaaacatat tgtagacttg gtgggggata catggcacaa gctcccgatc 10440 5 acgcagatct ttgagattcc tgaatcaatg gatccgtcag aaatattgga tgacaaatca 10500 cattctttca ccagaacgag actagcttct tggctgtcag aaaaccgagg ggggectgtt 10 10560 cctagcgaaa aagttattat cacggccctg tctaagccgce ctgtcaatcc ccgagagttt 10620 ctgaggtcta tagacctcgg aggattgcca gatgaagact tgataattgg cctcaagcca 10680 aaggaacggg aattgaagat tgaaggtcga ttctttgctc taatgtcatg gaatctaaga 10740 0 ttgtattttg tcatcactga aaaactcttg gccaactaca tcttgccact 038-2060 100 ctgactatga cagacaacct gaacaaggtg tttaaaaagc tgatcgacag ggtcaccggg 10860 caagggcttt tggactattc aagggtcaca tatgcatttc acctggacta tgaaaagtgg 10920 aacaaccatc aaagattaga gtcaacagag gatgtatttt ctgtcctaga tcaagtgttt 10980 10 ggattgaaga gagtgttttc tagaacacac gagtttttic aaaaggcctg gatctattat 11040 tcagacagat cagacctcat cgggttacgg gaggatcaaa tatactgctt agatgcgtcc 11100 15 aacggcccaa cctgttggaa tggccaggat ggcgggctag aaggcttacg gcagaagggc 11160 tggagtctag tcagcttatt gatgatagat agagaatctc aaatcaggaa cacaagaacc 20 11220 aaaatactag ctcaaggaga caaccaggtt ttatgtccga catacatgtt gtcgccaggg 11280 ctatctcaag aggggctcct ctatgaattg gagagaatat caaggaatgc actttcgata 5
11340 tacagagccg tcgaggaagg ggcatctaag ctagggctga tcatcaagaa agaagagacc 11400 atgtgtagtt atgacttcct catctatgga aaaacccctt tgtttagagg taacatattg 11460 gtgcctgagt ccaaaagatg ggccagagtc tcttgcgtct ctaatgacca aatagtcaac 11520 ctcgccaata taatgtcgac agtgtccacc aatgcgctaa cagtggcaca acactctcaa 11580 tctttgatca aaccgatgag ggattttctg ctcatgtcag tacaggcagt ctttcactac 1160 ctgctattta gcccaatctt aaagggaaga gtttacaaga ttctgagcgc tgaaggggag 11700 agctttctcc tagccatgtc aaggataatc tatctagatc ctictttggg agggatatct 11760 ggaatgtccc tcggaagatt ccatatacga cagttctcag accctgtctc tgaagggtta 11820 tccttctgga gagagatctg gttaagctcc caagagtcct ggattcacge gttgtgtcaa
11880 10 gaggctggaa acccagatct tggagagaga acactcgaga gcttcactcg ccttctagaa 11940 gatccgacca ccttaaatat cagaggaggg gccagtccta ccattctact caaggatgca 15 12000 atcagaaagg cftttatatga cgaggtggac aaggtggaaa attcagagtt tcgagaggca 12060 atcctgtigt ccaagaccca tagagataat tttatactct tcttaatatc tgttgagcct 12120 ctgtttcctc gatttctcag tgagctattc agttcgtctt ttttgggaat ccccgagtca 10 atcattggat tgatacaaaa ctcccgaacg ataagaaggc agtttagaaa gagtctctca 12240 5 aaaactttag aagaatcctt ctacaactca gagatccacg ggattagtcg gatgacccag 12300 acacctcaga 9991109999 ggtgtggcct tgctcttcag agagggcaga tctacttagg 10 12360 gagatctctt ggggaagaaa agtggtaggc acgacagttc ctcacccttc tgagatgttg 12420 ggattacttc ccaagtcctc tatttcttgc acttgtggag caacaggagg aggcaatcct 12480 agagtttctg tatcagtact cccgtccttt gatcagtcat ttttttcacg aggcccecta 12540 aagggatact tgggctcgtc cacctctatg tcgacccagc tattccatgc atgggaaaaa
12600 gtcactaatg ticatgtggt gaagagagct ctatcgttaa aagaatctat aaactggtic 12660 attactagag attccaactt ggctcaagct ctaattagga acattatgtc tctgacagge 12720 cctgatttcc ctctagagga ggcccctgtc ttcaaaagga cggggtcagce cttgcatagg
12780 ttcaagtctg ccagatacag cgaaggaggg tattcttctg tctgcccgaa cctectetct 12840 catatttctg ttagtacaga caccatgtct gatttgaccc aagacgggaa gaactacgat
12900 ttcatgttcc agccattgat gctttatgca cagacatgga catcagagct ggtacagaga
12960 gacacaaggc taagagactc tacgtttcat tggcacctcc gatgcaacag gtgtgtgaga 13020 20 cccattgacg acgtgaccct ggagacctct cagatcttcg agtttccgga tgtgtcgaaa 13080 agaatatcca gaatggtttc tggggctgtg cctcacticc agaggcttcc cgatatcegt 5
13140 ctgagaccag gagattttga atctctaagc ggtagagaaa agtctcacca tatcggatca 13200 gctcaggggc tcttatactc aatcttagtg gcaattcacg actcaggata caatgatgga 13260 accatcttcc ctgtcaacat atacggcaag gtttccccta gagactattt gagagggctc
13320 15 gcaaggggag tattgatagg atcctcgatt tgcttcttga caagaatgac aaatatcaat 13380 attaatagac ctcttgaatt ggtctcaggg gtaatctcat atattctcct gaggctagat 13440 20 aaccatccct ccttgtacat aatgctcaga gaaccgtctc ttagaggaga gatattttct 13500 atccctcaga aaatccccge cgcttatcca accactatga aagaaggcaa 808108816 13560 ttgtgttatc tccaacatgt gctacgctat gagcgagaga taatcacggc gtctccagag 13620 aatgactggc tatggatctt ttcagacttt agaagtgcca aaatgacgta cctatccctc 13680 attacttacc agtctcatct tctactccag agggttgaga gaaacctatc taagagtatg 13740 agagataacc tgcgacaatt gagttctttg atgaggcagg tgctgggcgg gcacggagaa 13800 gataccttag agtcagacga caacattcaa cgactgctaa aagactcttt acgaaggaca 13860 agatgggtgg atcaagaggt gcgccatgca gctagaacca tgactggaga ttacagcccc 13920 20 aacaagaagg tgtcccgtaa ggtaggatgt tcagaatggg tctgctctge tcaacaggtt 13980 gcagtctcta cctcagcaaa cccggceccct gtctcggage ttgacataag ggccctctet 5
14040 aagaggttcc agaacccttt gatctcgggce ttgagagtgg ttcagtgggc aaccggtgct 14100 cattataagc ttaagcctat tctagatgat ctcaatgttt tcccatctct ctgectigta 14160 gttggggacg ggtcaggggg gatatcaagg gcagtcctca acatgtttcc agatgccaag 14220 cttgtgttca acagtctttt agaggtgaat gacctgatgg cttccggaac acatccactg 14280 cctccttcag caatcatgag gggaggaaat gatatcgtct ccagagtgat agatcttgac 14340 tcaatctggg aaaaaccgtc cgacttgaga aacttggcaa cctggaaata cttccagtca 14400 gtccaaaagc aggtcaacat gtcctatgac ctcattattt gcgatgcaga agttactgac 14460 5 attgcatcta tcaaccggat caccctgtta atgtccgatt ttgcattgtc tatagatgga 14520 ccactctatt tggtcttcaa aacttatggg actatgctag taaatccaaa ctacaaggct 14580 attcaacacc tgtcaagagc gttcccctcg gtcacagggt ttatcaccca agtaacttcg 14640 tctttttcat ctgagctcta cctccgattc tccaaacgag ggaagttttt cagagatget 14700 gagtacttga cctcttccac ccttcgagaa atgagccttg tgttattcaa ttgtagcage 14760 cccaagagtg agatgcagag agctcgttcc ttgaactatc aggatcttgt gagaggattt 14820 cctgaagaaa tcatatcaaa tccttacaat gagatgatca taactctgat tgacagtgat
14880 gtagaatctt ttctagtcca caagatggtt gatgatcttg agttacagag gggaactctg 1490 tctaaagtgg ctatcattat agccatcatg atagtttict ccaacagagt cttcaacgtt 15000 tccaaacccc taactgaccc ctcgttctat ccaccgtctg atcccaaaat cctgaggcac
15060 ttcaacatat gttgcagtac tatgatgtat ctatctactg ctttaggtga cgtccctage 15120 ttcgcaagac ttcacgacct gtataacaga cctataactt attacttcag aaagcaagtc
15180 attcgaggga acgtttatct atcttggagt tggtccaacg acacctcagt gttcaaaagg
15240 gtagcctgta attctagcct gagtctgtca tctcactgga tcaggttgat ttacaagata 15300 gtgaagacta ccagactcgt tggcagcatc aaggatctat ccagagaagt ggaaagacac 15360 cttcataggt acaacaggtg gatcacccta gaggatatca gatctagatc atccctacta 15420 5 gactacagtt gcctgtgaac cggatactcc tggaagcctg cccatgctaa gactcttgtg 15480 tgatgtatct tgaaaaaaac aagatcctaa atctgaacct ttggttgttt gattgttttt 15540 0 ctcatttttg ttgtttattt gttaagcgt 15569 ‏قائمة التتابع:‎
Nhel ‏مركبات‎ BsiWl MERS-S "fr
BNSP " ‏'ب‎ ‎RABV-G 'z'
G RABV-a 20
CoV S1 MERS-a "a"
BNSP 3330 GP ‏'و‎
19BNSP333-SA 'y 29BNSP333-SA re 1BNSP333-SA "Ly
BNSP 333/ VERO ‏في"‎ ‎BNSP 333-S/ VERO ‏'ك"‎ 5
BNSP 333-S/ BSR "J
SPBN/BSR 5
BNSP333 ‏أن"‎ ‎1815-5 ‏"لس"‎ 0 "ع ‎BNSP333-S1‏ ‏'ف" ‎BNSP333-GP‏ ‏لص" تخفيف 'ق" الكثافة الضوئية ‎PBS "yy‏ "ش' اليوم 28 ات" اليوم 35

Claims (1)

  1. عناصر الحماية 1 ناقل فيروس سعار مأشوب ‎(RABV) recombinant rabies virus vector‏ يشتمل على تسلسل نيوكليوتيدي ‎nucleotide sequence‏ مشفر لبروتين سكري مستمتع ‎immunogenic glycoprotein‏ واحد على الأقل » يكون هذا البروتين السكري ‎glycoprotein‏ عبارة عن بروتين خيمري ‎chimeric‏ ‎protein‏ يشتمل على مجال 51 للبروتين الشوكي ‎spike protein‏ من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ‎(MERS-CoV) Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus‏ ومرساة غشاء ‎Gus membrane anchor‏ تشتمل مرساة الغشاء ‎membrane anchor‏ على بروتين من البروتين السكري ‎J8W glycoprotein‏ فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus vector‏ ‎(RABY)‏ يشتمل البروتين المذكور على المجال السيتويلازمي ‎ceytoplasmic domain‏ المجال عبر الغشائي ‎ctransmembrane domain‏ وبروتين من المجال الخارجي ‎-ectodomain‏ ‏10
    ‏2. ناقل فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus vector‏ وفقاً لعنصر الحماية 1 ‎Gua‏ ‏يشتمل تسلسل حمض أميني ‎amino acid sequence‏ للبروتين السكري المستمنع ‎immunogenic‏ ‎glycoprotein‏ الواحد على الأقل على المتوالية رقم: 8. ‏5 3. ناقل فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus vector‏ وفقاً لعنصر الحماية 1 أو 2 حيث يكون جينوم ناقل فيروس السعار ‎rabies virus vector genome‏ ضعيف أو خامد 4 ناقل فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus vector‏ وفقاً لعنصر الحماية 1 حيث يعبر ناقل فيروس السعار ‎Lal rabies virus vector‏ عن واحد أو ‎SST‏ من بروتينات الفيروسات ‏20 التاجية ‎coronavirus proteins‏ الإضافية أو أجزاء مناعية ‎lie immunogenic fragments‏ ¢ واختياركًا ‎Cua‏ يتم اختيار بروتين الفيروس التاجي ‎coronavirus protein‏ الإضافي من المجموعة التي تتكون من بولي بروتين مستنسخ ‎«replicase polyprotein‏ بروتين إي ‎¢E protein‏ بروتين إن ‎protein‏ آل بروتين ‎<M protein af‏ بروتينات غير تركيبية ‎nonstructural proteins‏ من الفيروس التاجي لمتلازمة تنفس الشرق الأوسط ‎(MERS-CoV) Middle East Respiratory Syndrome Coronavirus‏ أو
    الفيروس التاجي لمتلازمة التنفس الحادة الشديدة تنفس الشرق الأوسط ‎Severe Acute Respiratory‏ ‎-(SARS-CoV) Syndrome Coronavirus‏
    5. خلية مضيف ‎host cell‏ مشتملة على ناقل فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus‏ ‎vector 5‏ وفقاً لعنصر الحماية 1.
    6. فيريون معزول ‎isolated virion‏ محضر من خلية مضيف ‎host cell‏ مصابة بناقل فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus vector‏ وفقاً لعنصر الحماية 1. 10 7. لقاح متعدد التكافؤ ‎multivalent vaccine‏ فعال للحماية ضد كل من فيروس السعار ‎rabies‏ ‎virus‏ وواحد على ا لأقل من الفيروسات التاجية 5ه المشتملة على ناقل فيروس السعار المأشوب ‎recombinant rabies virus vector‏ وفقاً لعنصر الحماية 1.
    6. تركيبة لقاح ‎vaccine composition‏ مشتملة على اللقاح متعدد ‎multivalent vaccine Sill‏ وفقاً لعنصر الحماية 7» وحامل ‎carrier‏ مقبول دوائيا؛ اختيارياً تشتمل ‎Load‏ على عامل علاجي إضافي واحد على الأقل؛ على سبيل المثال؛ عقار مضاد للفيروسات ‎drug‏ 800-710 جسم مضاد مضاد للفيروسات ‎canti-viral antibody‏ عامل حث مناعي ‎cimmunostimulatory agent‏ محفز ‎cadjuvant‏ ‏أو خليط منهم.
    0 9. اللقاح متعدد التكافؤؤ ‎multivalent vaccine‏ وفقاً لعنصر الحماية 7 أو تركيبة اللقاح ‎vaccine‏ ‎composition‏ وفقاً لعنصر الحماية 8 للاستخدام في ‎aa‏ استجابة مناعية فعالة ضد الفيروس التاجي ‎coronavirus‏ و/أو فيروس السعار ‎rabies virus‏ في هدف.
    0. اللقاح متعدد التكافؤ ‎multivalent vaccine‏ وفقاً لعنصر الحماية 7 أو تركيبة اللقاح ‎vaccine‏ ‎composition 25‏ وفقاً لعنصر الحماية 8 للاستخدام في طريقة علاج هدف مصاب بالفيروس التاجي ‎coronavirus‏ و/أو فيروس السعار ‎Gus crabies virus‏ تشتمل الطريقة على إعطاء الهدف كمية
    فعالة دوائيا من لقاح متعدد التكاف ‎multivalent vaccine‏ أو تركيبة لفاح ‎«vaccine composition‏ حيث يقوم اللقاح متعدد التكافؤ ‎ssl multivalent vaccine‏ تركيبة اللقاح ‎vaccine‏ ‎composition‏ المذكورة بحث استجابة مناعية فعالة ضد أحد أو كلا الفيروسات المذكورة.
    # ‏ا‎ . lend Ty ‏ات‎ ‏ال و با تاج ل‎ EN ‏#يه+‎ _- 8# Pm] 5# 1 © ‏ب‎ ep —— S| L 13 Yé © EX] Sp RETA eR ‏ل ا جا ل ل ا‎ I TD TA 3 ‏با 8 + اي‎ ERR ‏ا اال الا ل اا‎ 4 RAR ARR ‏ل لاا سه‎ HE He YY rey ow ay a ‏ا ل ا ا ا ب ويس‎ ES sao ‏ا ا‎ en I Sa aa, : a ee By oo ele nen, . : ‏ا‎ ‎= a En ‏ا‎ ‎Ye 1PYS BC WF ْ 4 ‏ا ا ل ب واس‎ pe TORE Ty ‏؟؟*1‎ ‏جد ال‎ wom Yo & ‏اع‎ 3 Bas SIRT IANA REY PRR 0 La Im ‏ليا الخد الي لي م ترمد يفيه‎ ea 2 ‏خا‎ x 5 & Food Er be 8 + Vos
    بن ل و * ب 5
    سم .ا = شك ‎iY‏
    > ب 2 ‎wi‏ ب ا ‎a=‏ ‎a BE‏ ا د ا ا اا ال ا الا م ‎oh Ha‏ ا لا ‎aetna‏ ا للها ‎١‏ 0 ‎Ge a‏ اانا ا اق ال شكل آب ‎CR ,‏ * ‎gE ya‏ 4 1 ‎ow 3 2 Jo‏ اا ا ل د اا ا ‎SS‏ ‏كأ ؟ وو ينض ” ب © 3 © ‎ed‏ 3 ‎Fn‏ ‎Sy‏ الى ‎Ia‏ ‏ل الل ل ل ‎I SE A IS RHONA NM SDD 2 I BR EE‏ ‎Rh SEE‏ ال اك ست ا سات ا ا ‎TREC‏ ‏اا انار ا اذ ‎rg.‏ ‏ا ا ‎ae‏ ‏== ‏م ‎sR PR‏ مح لكام ب ‎Sl BRR:‏ ‎Le‏ ل شكل ‎AY‏ ‎BW‏ ‏= ‏» م ب ‎ww‏ ‎mm i»‏ ا ا ا ‎Fr roa‏ ا ا ل ا ‎qo‏ ‎ee‏ ا ل ا ‎A 0 I< ES‏
    ل بو امال ميت ا تان الاي ‎Le‏ ات ا تت تي ال ا ال ل : اش ا ال ال ا الت ا 0 ل 0 ‎ee‏ ا الت ا ب الت ‎ean‏ ال 0 ‎y ps‏ ل : ا لاا ‎IR‏ المت ‎x x nL TE A LE‏ ا الا لع م لت لير ‎ETE‏ ‏ا ا لش لنت لل ات الي اميا يت تا ل ات الا ا و ل ا 2 . ‎WL :‏ الا ل ا مات الم ا ل 8 ‎UTERUS mem hii ww‏ ‎nn :‏ ص ‎TE SEL DSR TE‏ 8 3 5 . سه الا ‎eee‏ ا ‎a‏ لتو ل ا ل الا ا ‎I i‏ ال لشت ا الت ‎I‏ ‏ل ال م ل ‎CE‏ ‏م ا ال تع الات ‎TE‏ ‏ا ‎eT i‏ الا لاو ا ‎RE‏ ‏اساي الا اتن ات الي لس ال ا ا ٍِ ل الم ‎Cn ERA hi‏ 3 ل ا ‎J‏ ‏شا لي اتا لز لا ‎SE‏ ات ا ب لانت لي ال ام اا الا اا الجا الا ا ال ا ع اال تس الت ا ل ا امم امج : اتح تك ‎nT‏ ل ا + ال ا شح جد الح ا اج ا ل ‎Ea‏ ا الجا ل ‎RRR‏ ‎AR SE. he RE ER -‏ 1 3 ‎Hae ahd ER Aa :‏ الح الم ا لما لدت د ال لا ‎RRR SE‏ لمجت ا ا ال ا ‎Se‏ لماي الح ‎OER RSE RR NE‏ ‎DRIES TRE ERR ERR A TE‏ * ا ‎HL RE‏ وت ال وو اا ا ¥ انا ‎Ee‏ ادا ا ‎NEN‏ & ‎iy‏ الت وي ال ا امس الا ‎RIT SN RR RR‏ ] ‎ra‏ الا ا ‎LE RN‏ ‎In RRR I‏ ‎EE i Sn‏ 3 ‎Eran Ca RI RR‏ الس ‎LE REE Se ER‏ ‎SpE Daw CAREER ERE‏ ال الت ‎UNE eR‏ اتا ا ‎aw SER‏ ال الس لح ‎a Sa‏ ® ‎Sra‏ ل ‎ee SEI TRE‏ ‎i ARS RE Re ANE :‏ ‎Rw A a SNR‏ ل ‎rE CRSA DR IR RE‏ ‎ERT RO ENE asin‏ اريت ل ليك اا ‎CRNA ERR‏ متيو م لكا ل ‎LR‏ الك لات ا ‎rE‏ ‏ل ل اش م ل من الم د ليد الات الت ‎TE‏ ‎RRR‏ ل ا ا ااي ا ‎w‏ ‎oo En, en ps‏ ل ل ‎ELE FIRE‏ شيا ا لاا اي ‎Sn ERT‏ الع يات الما تك تت ا اال العامة م ‎RR TE‏ الت ا ل ل ا ‎A‏ ا ا اراد ل د المج تج ا الم وه ال حا ‎RE EE IR Rh‏ 5 ‎aS EEA EI ERA Se‏ 8 ل ‎SER‏ ال 05 ‎HR 5‏ ال ا ‎ORIN‏ ل ل حا الكت ا ا ‎CREAR REET SER‏ ال ا المت م ل ‎CET‏ ‎ERR‏ ا ليا ا اليم ‎RR‏ ‏ا ال ا ا ال لا ا ل ا ‎ERY‏ متي م ا ل سا كن ا شا الت ل ا لش ا 3 ‎“uy 2‏ 8 8 3 التي اللا تيه الت اه الاك الا ا اا ‎i Re‏ ا ‎A ANN RC RV A RY‏ الت ‎ENE Se EN‏ ‎RA SAE NNER a RY‏ سو § ‎NY EERE‏ ‎LEIS rR‏ ‎A A RT NC ey‏ ابر رركت ليحي 7 الج وت ‎FINENESS ENR‏ ا خخ ات
    © 5% ‏بخ‎ 2 2 ‏يي‎ 0 = ow i FF semis eines ‏ا‎ ‎SE SNARE IIR RARE RAN FRE ‏يها الل خخ‎ ‏ا‎ ‏ل ا ا‎ ‏ل‎ NER ‏ا‎ ‏ا ال ل ال ل‎ ‏ا ا‎ Rr RN NY A 8 SRO SR I NE ER RRR ‏ااا اا‎ AR DR Le ES EE 0007 ‏لتحت ا ا حا ل ا‎ ‏ا‎ RA ‏ا‎ AT ‏الام ااا ا‎ Re ERAS RY ‏ا‎ A Ny ‏اش ا اه ا‎ 2 ‏ال ا ا‎ ‏ا ل‎ DE Bnet Hl EE EA I TY I I i A
    3 + ‏ا‎ © 7 T ‏من لال‎ = ‏نت‎ = + + x» Th Gen ‏ا‎ aa x ‏اله‎ we
    Y¥e.! oa Ca Yel ‏ا‎ ‎a ‎Vroegi 0 0 ed Co ‏ا ل‎ 80 - Wi ‏سد‎ SO Ea Em EER ER ‏ا‎ ‎; ‏ل ا‎ a ‏ل 4مك‎ aa ‏ل‎ meee ae ‏ااا ا‎ CRRA RRR AT RE RT aa Bea
    Ye... I ‏ا‎ EERE ‏ا ا‎ NL ‏تا‎ Te ‏ال ل ا ا‎ It ‏شكل‎
    3 كل > ‎KE 2‏ + خ ,3 5 َ
    ل ا
    ا ا ‎RHE‏ 1
    ‎nn nn‏ ال ل ا ا ل ا ‎be Ses‏ مات ا اا ‎EN‏ ‏ا ل ‎Ee‏ ا ‎a ey‏ ا ا ا 0 ا ا ا ‎NPR <n RR »‏ هو ل ‎A SE A SNR al A EE A Se‏ ‎AER E TINNY 0191 3 NT a RNR RE iT‏ ل 2 ‎I rn‏ 5 ا 0 ‎RY a‏ ال اا ليا ا ل ا لا ‎ry‏ أ أ[ 5 ا ا الت ‎tN nh‏ لي ل ل ا ا ا ‎RN a da ee te ERR TE Ee a‏ ا ‎Se Be ES CREAR AT La I hn SE‏ ا ‎a‏ ‎Sn‏
    3< غلا يا 3 ا اكلا ‎J‏ ‎IER‏ ‏ا ا ‎BRE‏ ا ا ‎RE‏ ‏5 ‎ESS‏ ادا ‎Cx Sh ATT ae‏ ‎SAT EE TE‏ 5 ‎EE EE TR‏ د ‎a i‏ # 3 ب ‎eh‏ م ا اد و له ات ات ‎rr‏ ل جل ل 1 ~ ات ا ال شا ان اال ا ا ا ايت اا ا الج ا ل ا ا 8 ا ‎a 0‏ : اا . ‎rE‏ 1 3 ‎RE Dom‏ — & ‎SER CR EE‏ ‎BT Ne‏ شاي تا ل أ ‎RAR Tol‏ ال ‎EEN TR ans TL‏ ا ا ‎A EE ET‏ ‎COT ERLISTE EER‏ ‎TERRIER Ra a‏ لي ا ا المع ات إن ‎A‏ حش ا اولخ ااه تاوت ذا ‎dd‏ احج ب احج لج جور اال دي ‎an‏ م اما د دا اللا رات 1 : ‎TRE‏ الت ا اا ا : ‎ps CORE ESR‏ 3 ‎Bana Ed Ce RRA‏ ‎AR ie aaa‏ : 1 ‎a‏ ‎Rea‏ ات ا ‎ESSN TT‏ ‎SE ERS I SE‏ الت ا ا ااي بم سات ات ا :0 ل © ل ا ال ا لبا : ‎Tee‏ ا ‎ww USER‏ ‎Ti eae‏ ا ال ا ل ‎Ih NT I‏ ‎AT EE TT‏ الاكم جه شين ‎RR AT RI rn‏ ‎Ee‏ ‏ا ال ل ل ل 1 0 ا ل ‎han‏ حك ‎RR‏ الي ‎E SAR‏ ‎RRR‏ سل ل ا ل د البييا % ا 7 0 م1011 ‎RE‏ « الا ا ‎TERR or‏ ا ‎EN‏ ‎er‏ م ا ‎CASE I‏ ‎or ER So SE‏ اا ا لاا اال ‎SEERA an‏ ا يه الاي ا وا ‎SRR RA TN SARE‏ ا تا اح د ‎A‏ مما ا أ وا يا ا ‎OR‏ ‏اال لا ‎EI CRE‏ ا ا اي ل ا ا م ا ا ا اله ال ‎SEES‏ & ‎IIRL hn A‏ 3 ‎LL NT an RE ERA‏ ا وحم اجيج ‎rN Nl TT En Nl ee‏ ‎RS I ENE Le‏ ‎RRR‏ عل ‎SERRE AAT nan‏ ال ‎TERR EE nn i‏ ‎Re ARR‏ أيه ‎ERR‏ يا الت اما ا ات ااا اا تشم اي ا له اه أ ا ا ا اه ا يه الا الم ا الا ات لاا لتر ا ا ياه الج ا ا 7 اش . ‎SHEE:‏ ا ‎oS AREER‏ ‎AR‏ ا 1 ااا 9 ‎ee RRR DANN‏ ‎RRR a‏ ‎ea‏ الج ال ا كيه و ‎RET‏ ‏ل ‎SERRE TT aR i‏ ا ‎ELA NERA‏ الت ‎i ID‏ الت ا جار ‎BEA NNT NT‏ ‎RE TR RRR‏ wn & ‏ججح + جع‎ ww Wn 8 ‏ب‎ ‎SUIT ‎SR ‏ل‎ 3 ‏أن الس‎ an ‏ال‎ J) aa YS NE fn AR : & ‏جع‎ ‎: a Se 8 ‏تريخ‎ ‏نس‎ Sobor LE i or R no ‏ل ع‎ ‏شل‎ — § ‏اع‎ 2 3 i ow ‏ل “ف‎ 2 i ‏و‎ 3 i « 8" : #11 ‏ا‎ #11 0 ely Yi 8: 2 sir © # vo ele ‏ب‎ xl ‏ل‎ + PhO ‏مل 1 م 4 ب‎ ‏امو اا‎ EN ‏ا ساس ل با ب ا مشا‎ ¥ oan Yoo vw Ver ox Yon oes Yoox Yoo ae ‏ةوك‎ Noxon
    Ww.» & om We ‏ص‎ ‎i - be ‏ع‎ ‎| ‏شكل ل‎
    Hoan ‏ان ا‎ = - : | £ L 0 ‏ما 8 اس‎ Sco, me PBLE TE a ee TE Le ¥ 1g RE wl ‏بط‎ i i Boe =v Wn ¢ ) RR Wn Sg + . die ‏ل‎ i 2 x : 3 v3 age 8 3 | hE x8 8 ; ‏ااه‎ ‎: ‏اج‎ rat i i, Nex 1 ‏اب‎ oh ‏ابد 3 الاك ا‎ “gn Yi RON oy ¥ ‏ف خا‎ 3 ‏ا لخر أده الهلء لل مج‎ gt : Nbr ‏اس‎ HWE = Neat gor Lk pe AK 0 i 5 Hay 3 ik ‏ا حير‎ , 8 % =f 0 ‏ب ِ ا‎ io 0 8 wf LANE Eo WER 3 ‏اكت ب‎ Fors i ‏لذ يا‎ foe ‏ات ا‎ hi WE : NEOs i ad My . oo : =. ٠ 8 ‏ل‎ ‎Ya ‏ا عيبي اميا‎ Fees 7.١. Rae NOTIN TL ‏مف‎ ‎“wo” & » WF = yo
    Woon EH {i al Le, LE A © ‏الل‎ ‏اين‎ wn : 0“ re : Rel, “er “3 | A ‏ق ج‎ Rl x £ v | Roe ‏وج & فج‎ ٍ Wie Ey & 2 ٍِ ‏ام ا‎ : he od “hee szy 5! wy 2 #1 vd z _ z¥ SEY « BON ST i BR p Br i 3 ‏دج بن‎ ١ ! gy 0 wee \ Ae = Tt : Bh i ET ‏مج*#‎ ‎٠ ‏مس 1 الله ل اا سم‎ $e» Yow Yue wa Vea sxx Yow ١٠١ ‏ايلا و‎ bok ‏و + رجز بيك‎ ‏من“ 7ض‎ j fe EN ‏شكل‎ non Bo, ‏تت م‎ 4 ‏ا‎ ‎ ‎n ¥ « » “3 35 { "3 = i 3 i £53 { @ OY wi 4 i ; Ai gov Y £ oy 2 i ‏د “مدل‎ : oF wl We Sed ; . A El 5 ho ase 1} 45 : : “by 8 4 : 3 > 5 Wis 1 : § TN Lo . . x Eh. ‏ااا ةج هالتبا‎ & (BN ad inns ‏اجاج‎ ‎ay Seay taxed Yoon $5 a Yoox Fuwsw Yaw Esky « ” : 5 @® » ‏ص‎ o 4 ‏شكل‎ we
    الحاضهة الهيلة السعودية الملضية الفكرية ‎Swed Authority for intallentual Property pW‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § ام 5 + < ‎Ne‏ ‎ge‏ ”بن اج > عي كي الج دا لي ايام ‎TEE‏ ‏ببح ةا ‎Nase eg‏ + ‎Ed - 2 -‏ 3 .++ .* وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. »> صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > ”+ ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ uo‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA518400172A 2016-04-04 2018-10-04 لقاحات متعددة التكافؤ لفيروس السعار والفيروس التاجي SA518400172B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662318087P 2016-04-04 2016-04-04
PCT/US2017/025623 WO2017176596A1 (en) 2016-04-04 2017-03-31 Multivalent vaccines for rabies virus and coronaviruses

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA518400172B1 true SA518400172B1 (ar) 2023-02-15

Family

ID=58549242

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA518400172A SA518400172B1 (ar) 2016-04-04 2018-10-04 لقاحات متعددة التكافؤ لفيروس السعار والفيروس التاجي

Country Status (4)

Country Link
US (2) US11041170B2 (ar)
EP (2) EP4104854A3 (ar)
SA (1) SA518400172B1 (ar)
WO (1) WO2017176596A1 (ar)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP4104854A3 (en) * 2016-04-04 2023-03-08 The United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Multivalent vaccines for rabies virus and coronaviruses
GB201708444D0 (en) * 2017-05-26 2017-07-12 Univ Oxford Innovation Ltd Compositions and methods for inducing an immune response
WO2019151632A1 (ko) * 2018-01-31 2019-08-08 (주)셀트리온 중동호흡기증후군 코로나바이러스에 중화활성을 갖는 결합 분자
RU2711553C1 (ru) * 2018-12-29 2020-01-17 Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Московский государственный университет имени М.В. Ломоносова" (МГУ) Препарат на основе нейтрализующих моноклональных антител, связывающихся с гликопротеином вируса бешенства
CN111979120B (zh) * 2019-05-23 2022-09-27 比欧联科供应链管理(北京)有限公司 一种狂犬疫苗核酸消化去除装置及实验方法
US11478543B1 (en) * 2020-03-06 2022-10-25 Thomas Jefferson University Coronavirus disease (COVID-19) vaccine
RU2720614C9 (ru) * 2020-04-23 2021-02-09 федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации Иммунобиологическое средство и способ его использования для индукции специфического иммунитета против вируса тяжелого острого респираторного синдрома SARS-CoV-2 (варианты)
WO2021233989A1 (en) * 2020-05-20 2021-11-25 Hennrich Alexandru Adrian Viral vaccine vector for immunization against a betacoronavirus
US20220193225A1 (en) * 2020-08-31 2022-06-23 Bruce Lyday Compositions and methods for sars-2 vaccine with virus replicative particles and recombinant glycoproteins
WO2022081823A1 (en) * 2020-10-14 2022-04-21 Temple University -Of The Commonwealth System Of Higher Education Pharmacologic approach for suppression of coronaviruses
GB202017649D0 (en) * 2020-11-09 2020-12-23 Autolus Ltd Polypeptide
US20240000920A1 (en) * 2020-11-12 2024-01-04 Intervet Inc. Recombinant vectors encoding chimeric coronavirus spike proteins and use thereof
CN114349868B (zh) * 2020-12-01 2023-12-08 中国医学科学院基础医学研究所 一种含寡聚化结构域的新型冠状病毒s蛋白受体结合域融合蛋白及其用途
CN115040644B (zh) * 2021-04-08 2023-03-07 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（中国动物卫生与流行病学中心哈尔滨分中心） 新冠肺炎重组狂犬病病毒载体疫苗
WO2022241760A1 (en) * 2021-05-21 2022-11-24 Huiru Wang Safer vaccines
WO2023283642A2 (en) * 2021-07-09 2023-01-12 Modernatx, Inc. Pan-human coronavirus concatemeric vaccines
CN114231502A (zh) * 2021-10-29 2022-03-25 吉林大学 一种表达新型冠状病毒rbd蛋白的重组狂犬病毒及其应用
CN115015549B (zh) * 2022-07-14 2023-01-13 深圳市卫光生物制品股份有限公司 一种狂犬病疫苗灭活验证的试验方法

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4945050A (en) 1984-11-13 1990-07-31 Cornell Research Foundation, Inc. Method for transporting substances into living cells and tissues and apparatus therefor
US5015580A (en) 1987-07-29 1991-05-14 Agracetus Particle-mediated transformation of soybean plants and lines
US5149655A (en) 1990-06-21 1992-09-22 Agracetus, Inc. Apparatus for genetic transformation
WO1995019799A1 (en) 1994-01-21 1995-07-27 Agracetus, Inc. Gas driven gene delivery instrument
US5908635A (en) 1994-08-05 1999-06-01 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Method for the liposomal delivery of nucleic acids
US5753613A (en) 1994-09-30 1998-05-19 Inex Pharmaceuticals Corporation Compositions for the introduction of polyanionic materials into cells
CA2200952C (en) 1994-09-30 2006-04-11 Inex Pharmaceuticals Corp. Novel compositions comprising quaternary ammonium compounds and neutral lipids for the introduction of polyanionic materials into cells
EP1489184A1 (en) 1995-06-07 2004-12-22 Inex Pharmaceutical Corp. Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5981501A (en) 1995-06-07 1999-11-09 Inex Pharmaceuticals Corp. Methods for encapsulating plasmids in lipid bilayers
US5705385A (en) 1995-06-07 1998-01-06 Inex Pharmaceuticals Corporation Lipid-nucleic acid particles prepared via a hydrophobic lipid-nucleic acid complex intermediate and use for gene transfer
US5756122A (en) 1995-06-07 1998-05-26 Georgetown University Liposomally encapsulated nucleic acids having high entrapment efficiencies, method of manufacturer and use thereof for transfection of targeted cells
IL115199A (en) 1995-09-07 2005-05-17 Opperbas Holding Bv Composition comprising a polynucleic acid molecule in a liposome and method using said composition
JP4340330B2 (ja) 1996-05-24 2009-10-07 アイシー‐ヴェック・リミテッド トランスフェクション剤としてのポリカチオン性ステロール誘導体
US6126965A (en) 1997-03-21 2000-10-03 Georgetown University School Of Medicine Liposomes containing oligonucleotides
US20030229040A1 (en) 1997-03-21 2003-12-11 Georgetown University Cationic liposomal delivery system and therapeutic use thereof
CA2289702C (en) 1997-05-14 2008-02-19 Inex Pharmaceuticals Corp. High efficiency encapsulation of charged therapeutic agents in lipid vesicles
ATE321882T1 (de) 1997-07-01 2006-04-15 Isis Pharmaceuticals Inc Zusammensetzungen und verfahren zur verabreichung von oligonukleotiden über die speiseröhre
US20030073640A1 (en) 1997-07-23 2003-04-17 Ribozyme Pharmaceuticals, Inc. Novel compositions for the delivery of negatively charged molecules
WO1999004819A1 (en) 1997-07-24 1999-02-04 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for the delivery of nucleic acid catalysts
US6110745A (en) 1997-07-24 2000-08-29 Inex Pharmaceuticals Corp. Preparation of lipid-nucleic acid particles using a solvent extraction and direct hydration method
US6320017B1 (en) 1997-12-23 2001-11-20 Inex Pharmaceuticals Corp. Polyamide oligomers
ATE356202T1 (de) 1998-11-27 2007-03-15 Intervet Int Bv Attenuierte stabile tollwutvirusmutante und lebende impfstoffe
AU3703100A (en) 1999-02-22 2000-09-14 Georgetown University Antibody fragment-targeted immunoliposomes for systemic gene delivery
US7112337B2 (en) 1999-04-23 2006-09-26 Alza Corporation Liposome composition for delivery of nucleic acid
US6200599B1 (en) 1999-10-07 2001-03-13 The Regents Of The University Of California Ortho ester lipids
US20050037086A1 (en) 1999-11-19 2005-02-17 Zycos Inc., A Delaware Corporation Continuous-flow method for preparing microparticles
US20020012998A1 (en) 2000-03-29 2002-01-31 Igor Gonda Cationic liposomes
US20030072794A1 (en) 2000-06-09 2003-04-17 Teni Boulikas Encapsulation of plasmid DNA (lipogenes™) and therapeutic agents with nuclear localization signal/fusogenic peptide conjugates into targeted liposome complexes
MXPA03008864A (es) 2001-03-26 2004-12-06 Johnson & Johnson Composicion de liposoma para el suministro intracelular mejorado en un agente terapeutico.
US20020192274A1 (en) 2001-03-26 2002-12-19 Ponnappa Biddanda C. pH sensitive liposomal drug delivery
US20030026831A1 (en) 2001-04-20 2003-02-06 Aparna Lakkaraju Anionic liposomes for delivery of bioactive agents
WO2002089728A2 (en) * 2001-04-20 2002-11-14 Thomas Jefferson University Recombinant rhabdoviruses as live-viral vaccines
DE60208854T2 (de) 2001-04-23 2006-08-17 Akzo Nobel N.V. Attenuierte rekombinante stabile Tollwutvirusmutanten und Lebendimpfstoffe
CA2445947A1 (en) 2001-04-30 2002-11-07 Targeted Genetics Corporation Lipid-comprising drug delivery complexes and methods for their production
EP1434862A4 (en) 2001-07-20 2005-04-06 Univ Georgia Res Found NUCLEOPROTEIC MUTATION-RELATED VIRUS AT A PHOSPHORYLATION SITE FOR OBTAINING A VACCINE AGAINST RABIES AND GENE THERAPY IN THE CENTRAL NERVOUS SYSTEM
AU2002323151A1 (en) 2001-08-13 2003-03-03 University Of Pittsburgh Application of lipid vehicles and use for drug delivery
DE10152145A1 (de) 2001-10-19 2003-05-22 Novosom Ag Stabilisierung von Liposomen und Emulsionen
WO2003057190A1 (en) 2001-12-31 2003-07-17 Elan Pharmaceuticals, Inc. Efficient nucleic acid encapsulation into medium sized liposomes
EP1478341A4 (en) 2002-01-09 2009-05-20 Transave Inc EFFICIENT ENCAPSULATION OF NUCLEIC ACIDS IN MEDIUM SIZE LIPOSOMES
DE10207177A1 (de) 2002-02-19 2003-09-04 Novosom Ag Fakultativ kationische Lipide
US7037520B2 (en) 2002-03-22 2006-05-02 Baylor College Of Medicine Reversible masking of liposomal complexes for targeted delivery
AU2003233464A1 (en) 2002-03-29 2003-10-13 Bristol-Myers Squibb Corporation Lipid mediated screening of drug candidates for identification of active compounds
WO2007010399A2 (en) * 2005-06-28 2007-01-25 HKU-PASTEUR RESEARCH CENTRE LIMITED Dexter HC Man Building Purified trimeric s protein as vaccine against severe acute respiratory syndrome virus infections
US8316429B2 (en) 2006-01-31 2012-11-20 Blue Coat Systems, Inc. Methods and systems for obtaining URL filtering information
US8282939B2 (en) * 2009-09-11 2012-10-09 Thomas Jefferson University Attenuated live triple G protein recombinant rabies virus vaccine for pre- and post-exposure prophylaxis of rabies
JP5195991B2 (ja) 2010-10-04 2013-05-15 ソニー株式会社 照明装置および表示装置
EP2670843B1 (en) * 2011-02-03 2014-10-29 The Government Of The U.S.A, As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Multivalent vaccines for rabies virus and filoviruses
US9889192B2 (en) * 2012-10-01 2018-02-13 Thomas Jefferson University Immunization with rabies virus vector expressing foreign protein antigen
EP4104854A3 (en) * 2016-04-04 2023-03-08 The United States of America as represented by the Secretary of the Department of Health and Human Services Multivalent vaccines for rabies virus and coronaviruses
US11478543B1 (en) * 2020-03-06 2022-10-25 Thomas Jefferson University Coronavirus disease (COVID-19) vaccine

Also Published As

Publication number Publication date
US20220072697A1 (en) 2022-03-10
EP4104854A3 (en) 2023-03-08
US11041170B2 (en) 2021-06-22
EP4104854A2 (en) 2022-12-21
WO2017176596A1 (en) 2017-10-12
EP3439695A1 (en) 2019-02-13
US20190062785A1 (en) 2019-02-28
EP3439695B1 (en) 2022-05-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA518400172B1 (ar) لقاحات متعددة التكافؤ لفيروس السعار والفيروس التاجي
US11103578B2 (en) Respiratory virus nucleic acid vaccines
US20240139309A1 (en) Variant strain-based coronavirus vaccines
US20240100151A1 (en) Variant strain-based coronavirus vaccines
AU2021203492A1 (en) Nucleic acid vaccines
KR102070463B1 (ko) 발현 시스템
US20210338804A1 (en) Vaccine Compositions For Preventing Coronavirus Disease
EP2346990B1 (en) Live, attentuated respiratory syncytial virus
JPH11507510A (ja) インフルエンザの新規組換え温度感受性変異体
US20230303614A1 (en) Capping compounds, compositions and methods of use thereof
US10329584B2 (en) Modified Sendai virus vaccine and imaging vector
JP2023093566A (ja) Ｒｓｖ ｇを発現する組換えキメラウシ／ヒトパラインフルエンザウイルス３およびその使用法
CA3178344A1 (en) Universal influenza vaccine using nucleoside-modified mrna
US20210401969A1 (en) Rsv virus-like particles and methods of use thereof
US10792357B2 (en) Optimized HIV envelope gene and expression thereof
CN112739359A (zh) Apmv及其用于治疗癌症的用途
WO2020167813A1 (en) Chimeric rsv and hmpv f proteins, immunogenic compositions, and methods of use
KR101908905B1 (ko) 인플루엔자 바이러스의 h9 및 h5의 다중 아형에 대한 교차 면역반응을 형성하는 신규한 재조합 인플루엔자 바이러스 및 이를 포함하는 백신
TW202330922A (zh) 核糖核酸呼吸道融合病毒(rsv)疫苗之組合物及方法
WO2023064993A1 (en) Chimeric betacoronavirus spike polypeptides
CA3231893A1 (en) Piv5-based coronavirus vaccines and methods of use thereof
CN115698295A (zh) 一种疫苗试剂和接种方法
US20100247624A1 (en) Vaccine compositions and methods containing an immunogen derived from equine arteritis virus
KR20230038205A (ko) 키메라 rsv 및 코로나바이러스 단백질, 면역원성 조성물, 및 사용 방법
RU2813150C2 (ru) Выделенный рекомбинантный вирус на основе вируса гриппа для индукции специфического иммунитета к вирусу гриппа и/или профилактики заболеваний, вызванных вирусом гриппа