RU2773659C1 - Штамм А 2205/G IV вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А - Google Patents
Штамм А 2205/G IV вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А Download PDFInfo
- Publication number
- RU2773659C1 RU2773659C1 RU2021113564A RU2021113564A RU2773659C1 RU 2773659 C1 RU2773659 C1 RU 2773659C1 RU 2021113564 A RU2021113564 A RU 2021113564A RU 2021113564 A RU2021113564 A RU 2021113564A RU 2773659 C1 RU2773659 C1 RU 2773659C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- foot
- mouth disease
- strain
- type
- virus
- Prior art date
Links
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 title claims abstract description 38
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 title claims abstract description 17
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title abstract description 8
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 title abstract 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 33
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 14
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 3
- 241000710189 Aphthovirus Species 0.000 claims description 2
- 230000000890 antigenic Effects 0.000 abstract description 16
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 229960005486 vaccines Drugs 0.000 abstract description 7
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 abstract description 3
- 241001250094 Capra sibirica Species 0.000 abstract description 2
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 abstract description 2
- 102000016350 Viral Proteins Human genes 0.000 abstract description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 abstract description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 abstract 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 14
- 210000004027 cells Anatomy 0.000 description 13
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 11
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 7
- 230000002068 genetic Effects 0.000 description 7
- 230000002458 infectious Effects 0.000 description 7
- 230000003612 virological Effects 0.000 description 7
- 210000002845 Virion Anatomy 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000009910 diseases by infectious agent Diseases 0.000 description 6
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 6
- 230000004301 light adaptation Effects 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 241000710202 Foot-and-mouth disease virus - type A Species 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 229920000160 (ribonucleotides)n+m Polymers 0.000 description 4
- 210000003734 Kidney Anatomy 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 229920001850 Nucleic acid sequence Polymers 0.000 description 4
- 101710003000 ORF1/ORF2 Proteins 0.000 description 4
- 101710043203 P23p89 Proteins 0.000 description 4
- 210000002966 Serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000000295 complement Effects 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 239000002609 media Substances 0.000 description 4
- 208000002399 Aphthous Stomatitis Diseases 0.000 description 3
- 230000002949 hemolytic Effects 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 230000001717 pathogenic Effects 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 229940064005 Antibiotic throat preparations Drugs 0.000 description 2
- 229940083879 Antibiotics FOR TREATMENT OF HEMORRHOIDS AND ANAL FISSURES FOR TOPICAL USE Drugs 0.000 description 2
- 229940042052 Antibiotics for systemic use Drugs 0.000 description 2
- 229940042786 Antitubercular Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 2
- 210000003743 Erythrocytes Anatomy 0.000 description 2
- 210000003414 Extremities Anatomy 0.000 description 2
- 229940093922 Gynecological Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 2
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 2
- 229940024982 Topical Antifungal Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000038129 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007172 antigens Proteins 0.000 description 2
- 230000003115 biocidal Effects 0.000 description 2
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000000521 hyperimmunizing Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 229940079866 intestinal antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic Effects 0.000 description 2
- 229940005935 ophthalmologic Antibiotics Drugs 0.000 description 2
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 2
- 244000052769 pathogens Species 0.000 description 2
- OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N precursor Substances N#CC(C)(C)N=NC(C)(C)C#N OZAIFHULBGXAKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000017613 viral reproduction Effects 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- 101710036216 ATEG_03556 Proteins 0.000 description 1
- 210000004369 Blood Anatomy 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101700027702 CYSD1 Proteins 0.000 description 1
- 101700028762 CYSD2 Proteins 0.000 description 1
- 102000004040 Capsid Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N D-sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 210000000003 Hoof Anatomy 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 210000003205 Muscles Anatomy 0.000 description 1
- 101700015696 PHL12 Proteins 0.000 description 1
- 102000014961 Protein Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010078762 Protein Precursors Proteins 0.000 description 1
- 108010012057 RNA Replicase Proteins 0.000 description 1
- 102100010794 SLC26A1 Human genes 0.000 description 1
- 101710028993 ST3GAL4 Proteins 0.000 description 1
- 102100015668 ST3GAL4 Human genes 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N Sucrose Natural products O([C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O1)[C@@]1(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-GDQSFJPYSA-N 0.000 description 1
- 101700003161 TXLR2 Proteins 0.000 description 1
- 210000001364 Upper Extremity Anatomy 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101710024925 alv Proteins 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 102000004965 antibodies Human genes 0.000 description 1
- 108090001123 antibodies Proteins 0.000 description 1
- 101700053124 asa1 Proteins 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structures Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding Effects 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic Effects 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 1
- -1 freon Chemical compound 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth media Substances 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative Effects 0.000 description 1
- 239000003228 hemolysin Substances 0.000 description 1
- 101700027420 hly Proteins 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 101700005116 plc Proteins 0.000 description 1
- 229920000346 polystyrene-polyisoprene block-polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological Effects 0.000 description 1
- 101710010431 shlA Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 231100000803 sterility Toxicity 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и касается нового штамма вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, депонированного в Коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером №339 - деп/20-127 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ» штамм A 2205/G - IV типа А вируса ящура. Представленный штамм репродуцируется в перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), в перевиваемой культуре клеток почки свиньи IBRS-2, в перевиваемой культуре клеток почки сирийского хомяка ВНК - 21/2-17 в течение 19-20,5 часов инкубирования, урожай вируса достигает значений 2,13±0,05 мкг/см3 общего вирусного белка, сохраняя исходные характеристики при пассировании в клеточной культуре на протяжении 5-10 пассажей. Представленный штамм может быть использован для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А и для контроля антигенной активности противоящурных вакцин. 4 табл., 2 пр.
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, может быть использовано для разработки и изготовления средств диагностики, специфической профилактики ящура типа А и контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин.
Ящур является вирусным, высоко контагиозным заболеванием сельскохозяйственных и диких парнокопытных и мозоленогих животных. Ящур относится к «трансграничным инфекциям», способным к быстрому распространению независимо от национальных границ, имеющим большую эконмическую значимость и влияющих на торговлю и продовольственную безопасность стран.
Возбудитель характеризуется выраженной антигенной вариабельностью. Существует 7 типов вируса ящура (О, А, С, Азия-1, SAT-1, SAT-2, SAT-3) и множество топотипов - устойчивых генетических групп, в пределах каждой из которых различают многочисленные генетические линии вируса ящура, отличающиеся по генетическим и антигенным свойствам [2]. Антигенная изменчивость происходит внутри типов, главным образом в результате процесса ступенчатого «дрейфа», в процессе которого возникает замена аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков вируса ящура. Изменчивость вируса в пределах одного генотипа приводит к возникновению новых изолятов, которые отличаются по степени вирулентности и иммуногенности от ранее выделенных штаммов вируса ящура. Антигенная изменчивость наиболее выражена у вируса ящура типа А, что приводит к проблемам в специфической профилактики ящура при применении противоящурных вакцин, а также затрудняется штаммоспецифическая диагностика выделенных изолятов вируса ящура. В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.
На территории Российской Федерации вспышки ящура имеют спорадический характер и вызваны заносом возбудителя с территории сопредельных стран. Регионы РФ, граничащие с Китаем, Монголией, Азербайджаном и Грузией подвержены очень высокой степени риска заноса ящура [1].
В Российской Федерации вспышки ящура типа А регистрировались в 2013-2014 гг. На территории Забайкальского края и Амурской области был выявлен вирус ящура типа А, относящийся к генетической линии A Asia SEA-97. На территории Карачаево-Черкесской Республики и Краснодарского края вспышки ящура были вызваны вирусом, относящимся к типу А генетической линии Iran 05, сублинии SIS 10, топотипа ASIA [5].
В настоящее время известны производственные штаммы вируса ящура типа А, которые применяются для производства средств специфической профилактики ящура:
- штамм ящура А №550/Азербайджан/64,
- штамм А22 /Ирак 24/64,
- штамм А /Иран/97,
- штамм А /Турция/06,
- штамм А №2155 /Забайкальский/2013,
- штамм А №2166 /Краснодарский/2013,
- штамм А №2269/ВНИИЗЖ/2015.
В ФГБУ «ВНИИЗЖ» в 2020 г. был доставлен изолят вируса ящура типа А, выделенный на территории Арабской Республики Египет от крупного рогатого скота.
По результатам сравнительного анализа нуклеотидных последовательностей выделенный изолят принадлежит к топотипу AFRICA, генетической линии G IV вируса ящура типа А, который значительно отличается от производственных штаммов вируса ящура типа А.
Настоящее изобретение позволяет расширить арсенал производственных штаммов вируса ящура серотипа А, обладающих высокой инфекционной, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде, пригодный для контроля антигенной и иммуногенной активности вакцин, изготовления чувствительных и высокоспецифичных диагностических тест-систем и высоко иммуногенных вакцинных препаратов путем получения штамма вируса ящура А 2205/G IV для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А.
Изолят вируса ящура, послуживший источником для получения штамма А 2205/G IV был выделен от крупного рогатого скота на территории Арабской Республики Египет в 2018 г.
Штамм вируса ящура А 2205/G IV депонирован в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером: №339 - деп/20-127 штамм A 2205/G IV вируса ящура.
Экспериментально подтверждена возможность использования штамма ВЯ A 2205/G IV для изготовления средств диагностики и профилактики ящура типа А.
Сущность изобретения отражена на графическом изображении. Представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма A 2205/G IV вируса ящура с эпизоотическими и вакцинными штаммами серологического типа А. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.
Сущность изобретения пояснена следующими перечнями последовательностей:
SEQ ID NO: 1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма A 2205/G IV вируса ящура типа А;
SEQ ID NO: 2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма A 2205/G IV вируса ящура типа А.
Штамм A 2205/G IV вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.
Морфологические признаки
Штамм ВЯ A 2205/G IV типа А относится к семейству Picornaviridae, роду Aphthovirus, серотипу А и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона иксаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.
Антигенные свойства
По своим антигенным свойствам штамм ВЯ A 2205/G IV относится к серотипу А. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются типоспецифические антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН).
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 штамма A 2205/G IV вируса ящура. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм A 2205/G IV вируса ящура принадлежит к генетической линии G IV топотипа AFRICA.
Антигенное родство (r1) штамма A 2205/G IV вируса ящура изучено в перекрестном исследовании штамма со специфическими сыворотками, полученными на производственные штаммы вируса ящура А №550/Азербайджан/64, А22 /Ирак 24/64, А /Иран/97, А /Турция/06, А №2155 /Забайкальский/2013, А №2166 /Краснодарский/2013, А №2269/ВНИИЗЖ/2015 в реакции микронейтрализации (РМН). Титр референтных сывороток крови КРС, полученных путем иммунизации КРС моновалентными вакцинами из производственных штаммов ВЯ типа А, против 100 ТЦД50 гомологичного и гетерологичного вируса определяли в РМН при перекрестном титровании, рассчитывая значения с использованием уравнения линейной регрессии, и выражали в lg. Значение r1 определяли, как антилогарифм разности lg титров сыворотки против гетерологичного и гомологичного вируса [4].
Значение r1 в РМН интерпретировали:
при ≥0,3 - исследуемый и производственный штаммы ВЯ являются близкородственными;
при <0,3 - исследуемый образец штамма ВЯ отличается от производственного штамма.
Показатели антигенного родства при изучении штамма A 2205/G IV ВЯ составили r1 0,06-0,25, что свидетельствует об отсутствии антигенного родства с производственными штаммами ВЯ типа А (табл. 1).
Гено- и хемотаксономическая характеристики
Штамм A 2205/G IV вируса ящура является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106 Д.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.
Физические свойства
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.
Устойчивость к внешним факторам
Штамм вируса ящура A 2205/G IV устойчив к детергентам и органическим растворителям, таким как эфир, хлороформ, фреон, ацетон. Наиболее стабилен при рН 7,4-7,6. Сдвиги рН как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам (выше 38°С).
Дополнительные признаки и свойства:
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения) на перевиваемых культурах.
Биотехнологические характеристики
Штамм А 2205/G IV вируса ящура репродуцируется в перевиваемых культурах клеток: почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки свиньи (IB-RS-2), почки сирийского хомяка (ВНК-21).
При испытании было проведено 5 последовательных пассажей штамма ВЯ A 2205/G IV в перевиваемых культурах клеток IB-RS-2, ПСГК-30, ВНК-21. Биологические свойства характеризовали путем определения инфекционной активности вируса каждого пассажа в перевиваемой культуре клеток IB-RS-2 и на естественно восприимчивых животных - крупном рогатом скоте (КРС) и свиньях.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исследования, которые не ограничивают объем изобретения.
Пример 1 Оценка биологических свойств штамма A 2205/G IV вируса ящура при репродукции в монослойных перевиваемых клеточных культурах.
При выделении изолята вируса A 2205/G IV с целью получения его однородной популяции, обладающей оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов, предусмотренных методическими указаниями по выявлению и идентификации штаммов вируса ящура [3].
Биологические и вирусологические методы включали в себя выделение и адаптацию вируса ящура к перевиваемым культурам клеток.
Выделение вируса проводили на культуре монослойных перевиваемых линий клеток ПСГК-30, IB-RS-2, ВНК - 21 с последующей адаптацией (5 пассажей). Культуры клеток выращивали на соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10%-ной суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50 на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов вирусную суспензию предварительно обрабатывали 10%-ным раствором хлороформа. После 30-минутного контакта вируса с клеточной культурой при 37°С во флаконы вносили по 5 см3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°С до появления ЦПД на культуре клеток. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) не менее 80-95% клеток, флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 g в течение 15 мин. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей. Вирус считался адаптированным к культурам клеток, если в течение не менее 24 часов проявлялось 90-100% ЦПД в монослое клеточных культур. Адаптация эпизоотического изолята A 2205/G IV к различным клеточным линиям наступала на уровне пятого пассажа. Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 2.
Данные, приведенные в таблице 2, свидетельствуют о высокой адаптационной способности штамма A 2205/G IV вируса ящура к использованным клеточным культурам.
Пример 2. Оценка биологических свойств штамма A 2205/G IV вируса ящура на крупном рогатом скоте.
Заражение КРС исходным штаммом вируса ящура проводили интрадермолингвально (I пассаж). Адаптацию и наработку штамма A 2205/G IV ВЯ на КРС вели в течение 2 последовательных пассажей. С целью определения инфекционной активности адаптированного штамма, из афт 2 пассажа на КРС получали 10%-ную вирусную суспензию из которой готовили последовательные 10-кратные разведения на ФБР. Подготовленные разведения с 10-2 по 10-6 вводили интрадермолингвально в 4 точки по 0,1 см3 двум КРС.
Учет результатов титрования проводили через 28 ч по наличию афт на месте введения разведений ВЯ. Титр инфекционной активности для КРС штамма А 2205/G IV ВЯ, 2 пассаж на КРС, в виде 10%-ной вирусной суспензии из афт КРС на ФБР с глицерином , составил 5,50 lg ИД50/0,1 см3.
Пример 3. Оценка биологических свойств штамма A 2205/G IV вируса ящура на свиньях.
Заражение свиней исходным штаммом A 2205/G IV ВЯ проводили внутрикожно (I пассаж) в область венчика передних конечностей. Адаптацию и наработку штамма ВЯ на свиньях вели в течение 2 последовательных пассажей. С целью определения инфекционной активности адаптированного штамма из афт 2 пассажа на свиньях, получали 10%-ную вирусную суспензию, из которой готовили последовательные 10-кратные разведения на ФБР. Подготовленные разведения с 10-2 по 10-6 вводили внутрикожно в венчики копытец по 0,1 см3 в 4 точки на каждый палец конечности одного разведения, из расчета 1 разведение на 2 копытца 1 конечности каждому из 2 подопытных подсвинков.
Учет результатов титрования проводили через 28 ч по наличию афт на месте введения разведений. Титр инфекционной активности для свиней штамма А 2205/G IV ВЯ, 2 пассаж на свиньях в виде 10% в/с суспензии из афт свиней на ФБР с глицерином , составил 5,00 lg ИД50/0,1 см3.
Пример 4. Оценка биологических свойств штамма A 2205/G IV вируса ящура при репродукции в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17.
Штамм вируса ящура A 2205/G IV репродуцировали в суспензионной перевиваемой культуре клеток из почки новорожденного сирийского хомячка ВНК-21/2-17. В качестве поддерживающей среды использовали раствор Эрла, с добавлением ферментативного гидролизата мышц сухого (ФГМС), гидролизата белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при рН среды 7,4-7,6. Клеточную линию заражали вирусом из расчета 0,001-0,1 ТЦД50/клетка.
Культивирование вируса осуществляли при температуре 35-38°С в течении 19-20,5 ч до достижения цитопатического действия вируса, соответствующего 90-100%. После этого репродукцию вируса ящура прекращали, полученную суспензию контролировали на стерильность и содержание 146S компонента и общего вирусного белка (ОВБ). Концентрация ОВБ в суспензии составляла 2,13±0,05 мкг/см3. Значения титра инфекционной активности вируса, а также процентное содержание 146S компонента штамма A 2205/G IV вируса ящура отражены в таблице 3, из данных которой видно, что при средней концентрации клеток ВНК-21/2-17, равной 3,10±0,11 млн клеток/см3, дозе заражения 0,005 ТЦД50/кл и продолжительности репродукции вируса 19,5±0,53 ч средний титр инфекционной активности возбудителя ящура равен 6,43±0,17 lg ТЦД50/0,1 см и концентрация 146S компонента составляет 75,60±1,17% (1,61±0,03 мкг/см3).
Пример 5. Оценка типовой специфичности и активности штамма A 2205/G IV вируса ящура
Оценку типовой специфичности и активности штамма A 2205/G IV ВЯ проводили в реакции связывания комплемента (РСК).
К полученному антигену штамма A 2205/G IV ВЯ, взятому в объеме 0,4 см3 в цельном виде и в разведениях 1:2, 1:4, 1:8, добавляли по 0,1 см3 гомологичной и гетерологичных гипериммунных сывороток, полученных на вирус ящура типов А, О, Азия-1 в рабочем (удвоенном) титре и 0,1 см3 комплемента в рабочем разведении. Смесь выдерживали в водяной бане в течение 20 мин при температуре 37°С. Затем вносили по 0,2 см3 гемолитической системы и выдерживали 30 мин при температуре 37°С. Положительный результат реакции соответствовал 100%-ной задержке гемолиза эритроцитов барана («4 креста»). Параллельно проводили контрольные реакции без сыворотки, без комплемента и компонентов реакции.
В качестве реагентов в РСК использовали сыворотки ящурные типоспецифические гипериммунные морских свинок, полученные на производственные штаммы вируса ящура А/Иран/05, О PanAsia 2, Азия-1/Шамир/89, комплемент сухой для РСК, гемолизин (сыворотка гемолитическая), эритроциты барана 2% (взвесь на физиологическом растворе, рН 7,1). В качестве контроля использовали антигены вируса ящура А/Иран/05, О PanAsia 2, Азия-1/Шамир/89.
Из результатов испытания (таблица 4) следует, что штамм A 2205/G IV вируса ящура обладает выраженной типовой специфичностью, относится к вирусу ящура серотипа А и активен в РСК в разведении 1:4.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента Российской Федерации на изобретение «Штамм A 2205/G IV вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А
1. Анализ эпизоотической ситуации по ящуру в России с 2010 г. по март 2019 г. / В.П. Семакина, Т.П. Акимова, В.А. Мищенко, А.К. Караулов // Ветеринария. - 2019. - №11. - С. 16-20.
2. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур. / Под ред. А.Н. Бурдова. - М, Агропромиздат, 1990, 320 с.
3. Методические рекомендации по выделению и идентификации штаммов вируса ящура /А.А. Гусев, В.М. Захаров, Ж.А. Шажко и др.; ФГУ "ВНИИЗЖ". - Владимир. 2002. - 31 с.
4. Методические рекомендации по определению антигенного соответствия между эпизоотическими изолятами и производственными штаммами вируса ящура в перекрестной реакции микронейтрализации /С.Р. Кременчугская, М.В. Жильцова, Т.К. Майорова; ФГБУ "ВНИИЗЖ". - Владимир: 2012. - 36 с.
5. Эпизоотологические особенности ящура типа А, вызванного гетерологичными штаммами вируса / А.В. Мищенко, В.А. Мищенко, В.В. Дрыгин [и др.] // Ветеринария. - 2014. - №11. - С. 20-24;
Claims (1)
- Штамм вируса ящура Aphtae epizooticae типа А сем. Picomaviridae, рода Aphthovirus, вида Food-and-mouth disease virus, генотипа A/ASIA/G-IV, депонированный в Государственной коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером: №339 - деп/20-127 - ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ» штамм «А 2205/G IV» типа А вируса ящура, для изготовления биопрепаратов для диагностики ящура типа А.
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2773659C1 true RU2773659C1 (ru) | 2022-06-07 |
Family
ID=
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2798510C1 (ru) * | 2022-08-22 | 2023-06-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Тест-система для количественного определения уровня гуморального иммунитета животных против антигена вируса ящура A N 2205/G-IV генотипа A/AFRICA/G-IV с помощью жидкофазного блокирующего непрямого "сэндвич"-варианта ИФА |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2560268C1 (ru) * | 2014-02-19 | 2015-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | ШТАММ ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А И ИХ КОНТРОЛЯ |
RU2640261C1 (ru) * | 2016-07-12 | 2017-12-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Штамм А N2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А |
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2560268C1 (ru) * | 2014-02-19 | 2015-08-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | ШТАММ ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА А ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА А И ИХ КОНТРОЛЯ |
RU2640261C1 (ru) * | 2016-07-12 | 2017-12-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Штамм А N2269/ВНИИЗЖ/2015 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для контроля антигенной и иммуногенной активности и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
PATON D.J. ET AL. Selection of foot and mouth disease vaccine strains - a review, Rev Sci Tech. 2005 Dec; 24(3):981-93. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2798510C1 (ru) * | 2022-08-22 | 2023-06-23 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Тест-система для количественного определения уровня гуморального иммунитета животных против антигена вируса ящура A N 2205/G-IV генотипа A/AFRICA/G-IV с помощью жидкофазного блокирующего непрямого "сэндвич"-варианта ИФА |
RU2818811C1 (ru) * | 2023-07-31 | 2024-05-06 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Тест-система для определения титра антител против структурных белков вируса ящура штамма "А/Танзания/2013" с помощью жидкофазного иммуноферментного анализа |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Gebauer et al. | Rapid selection of genetic and antigenic variants of foot-and-mouth disease virus during persistence in cattle | |
RU2773659C1 (ru) | Штамм А 2205/G IV вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А | |
RU2665849C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
RU2799602C1 (ru) | Штамм А/Иран/2018 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А | |
RU2799601C1 (ru) | Штамм А/Афганистан/2017 вируса ящура Aphtae epizooticae типа А для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа А | |
RU2801950C1 (ru) | Штамм O N 2356/Пакистан/2018 вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа O/ME-SA/PanAsia2ANT-10 для изготовления биопрепаратов для диагностики ящура | |
RU2242513C1 (ru) | Штамм а (грузия) 1999/№1721 вируса ящура типа а для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
RU2808493C1 (ru) | Штамм вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-2/VII | |
RU2809223C1 (ru) | Штамм "O N 2241/Эфиопия/2011" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа О/ЕА-3 для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура | |
RU2799606C1 (ru) | Штамм "SAT-1/Танзания/2012" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа SAT-1/I для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-1/I | |
RU2793828C1 (ru) | Штамм "О/Кения/2017" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа O/EA-2 для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа O/EA-2 | |
RU2563522C1 (ru) | ШТАММ О №2102/Забайкальский/2010 ВИРУСА ЯЩУРА Aphtae epizooticae ТИПА О ДЛЯ КОНТРОЛЯ АНТИГЕННОЙ И ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ПРОТИВОЯЩУРНЫХ ВАКЦИН И ДЛЯ ИЗГОТОВЛЕНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ ЯЩУРА ТИПА О | |
RU2806606C1 (ru) | Штамм "О N 2620/Оренбургский/2021" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа O/ME-SA/Ind-2001e для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура | |
RU2744791C1 (ru) | Штамм Азия-1 N 2356/14/2018 вируса ящура Aphtae epizooticae типа Азия-1 для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа Азия-1 | |
RU2804634C1 (ru) | Штамм "SAT-1/Кения/2017" вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-1/NWZ | |
RU2807038C1 (ru) | Штамм вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа SAT-1/X | |
RU2817257C1 (ru) | Штамм "SAT-2/XIV/2023" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа SAT-2/XIV для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура | |
RU2806602C1 (ru) | Штамм "SAT-2/Кения/19/2017" вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления средств диагностики и профилактики ящура генотипа SAT-2/IV | |
RU2682876C1 (ru) | Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О | |
RU2140452C1 (ru) | Штамм n 1707 "армения-98" вируса ящура типа a для изготовления диагностических и вакцинных препаратов | |
RU2811585C1 (ru) | Штамм "O/ARRIAH/Mya-98" вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура | |
RU2817256C1 (ru) | Штамм А/Египет/EURO-SA/2022 вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура генотипа A/EURO-SA | |
RU2817031C1 (ru) | Штамм "О N 2222/Тайвань/1/2012" вируса ящура Aphtae epizooticae для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура | |
RU2816943C1 (ru) | Штамм "Азия-1/G-V/2006" вируса ящура Aphtae epizooticae генотипа Азия-1/G-V для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура | |
RU2658608C1 (ru) | Штамм О N 2311/Забайкальский/2016 вируса ящура Aphtae epizooticae типа О для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа О |