RU2766176C2 - Применение изовалерил-спирамицина i, ii и/или iii при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли и получения лекарственного препарата - Google Patents

Применение изовалерил-спирамицина i, ii и/или iii при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли и получения лекарственного препарата Download PDF

Info

Publication number
RU2766176C2
RU2766176C2 RU2020102713A RU2020102713A RU2766176C2 RU 2766176 C2 RU2766176 C2 RU 2766176C2 RU 2020102713 A RU2020102713 A RU 2020102713A RU 2020102713 A RU2020102713 A RU 2020102713A RU 2766176 C2 RU2766176 C2 RU 2766176C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
spiramycin
isovaleryl
tumor
iii
drug
Prior art date
Application number
RU2020102713A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2020102713A (ru
RU2020102713A3 (ru
Inventor
Енхонг ДЖИАНГ
Вейкинг Хе
Джианлю ДАИ
Янг ДЖИАНГ
Ксюнлей ДЖИАНГ
Ксиаофенг ЖАО
Original Assignee
Шенянг Фуянг Фармасьютекал Технолоджи Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Шенянг Фуянг Фармасьютекал Технолоджи Ко., Лтд. filed Critical Шенянг Фуянг Фармасьютекал Технолоджи Ко., Лтд.
Publication of RU2020102713A publication Critical patent/RU2020102713A/ru
Publication of RU2020102713A3 publication Critical patent/RU2020102713A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2766176C2 publication Critical patent/RU2766176C2/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0019—Injectable compositions; Intramuscular, intravenous, arterial, subcutaneous administration; Compositions to be administered through the skin in an invasive manner
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0087—Galenical forms not covered by A61K9/02 - A61K9/7023
    • A61K9/0095—Drinks; Beverages; Syrups; Compositions for reconstitution thereof, e.g. powders or tablets to be dispersed in a glass of water; Veterinary drenches
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/141—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers
    • A61K9/145—Intimate drug-carrier mixtures characterised by the carrier, e.g. ordered mixtures, adsorbates, solid solutions, eutectica, co-dried, co-solubilised, co-kneaded, co-milled, co-ground products, co-precipitates, co-evaporates, co-extrudates, co-melts; Drug nanoparticles with adsorbed surface modifiers with organic compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/16—Agglomerates; Granulates; Microbeadlets ; Microspheres; Pellets; Solid products obtained by spray drying, spray freeze drying, spray congealing,(multiple) emulsion solvent evaporation or extraction
    • A61K9/1605—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/1617—Organic compounds, e.g. phospholipids, fats
    • A61K9/1623—Sugars or sugar alcohols, e.g. lactose; Derivatives thereof; Homeopathic globules
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
    • A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/2027—Organic macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyvinyl pyrrolidone, poly(meth)acrylates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A61K9/2004—Excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/2022—Organic macromolecular compounds
    • A61K9/205—Polysaccharides, e.g. alginate, gums; Cyclodextrin
    • A61K9/2054—Cellulose; Cellulose derivatives, e.g. hydroxypropyl methylcellulose
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/48—Preparations in capsules, e.g. of gelatin, of chocolate
    • A61K9/4841—Filling excipients; Inactive ingredients
    • A61K9/4866—Organic macromolecular compounds
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Pyrane Compounds (AREA)

Abstract

Изобретение относится к применению изовалерил-спирамицина I или III или их фармацевтически приемлемых солей при изготовлении препарата для лечения опухоли, при этом опухоль включает в себя рак молочной железы, рак печени, рак легких, рак почек, опухоль головного мозга, рак шейки матки, рак предстательной железы, лимфому, рак поджелудочной железы, рак пищевода, рак желудка, рак толстой кишки, рак щитовидной железы, рак мочевого пузыря, лейкемию или рак кожи, при этом доза изовалерил-спирамицина I или III в препарате находится в диапазоне от 5 до 1500 мг. 6 з.п. ф-лы, 52 табл., 2 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к области техники лекарственных препаратов, а конкретно - к применению изовалерил-спирамицина I, II и/или III при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли и получения лекарственного препарата.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Опухоль - распространенное и часто встречающееся заболевание, относящееся к новообразованиям, или неоплазмам, образующимся посредством клональной атипической пролиферации и дифференциации по причине генетической мутации и утраты нормальной регуляции роста и дифференциации гистиоцита организма при продолжительном воздействии онкогенных факторов in vivo и in vitro. Опухоли подразделяют на доброкачественные и злокачественные. Злокачественные опухоли дополнительно разделяются на три вида: карциномы, возникающие в эпителиальных тканях, саркомы, возникающие в мезенхиме, и карциносаркомы. В отношении всех злокачественных опухолей в целом используется термин «рак».
Злокачественные опухоли - одно из основных опасных заболеваний, угрожающих здоровью человека, и причина смертности номер один в мире. Согласно новейшим статистическим данным в 2007 году около 7,9 миллионов человек в мире умерли от различных видов рака, что составило 13% от всех летальных исходов, а также были диагностированы более 12 миллионов случаев заболевания раком, причем 72% или более пациентов с опухолями и летальных исходов пришлись на развивающиеся страны, и это число постоянно растет. В 2015 году от опухолей в мире умерли 9 миллионов человек, и ожидается, что еще свыше 12 миллионов людей умрут от опухолей в 2030 году. В настоящее время ежегодное количество случаев заболевания раком в Китае составляет около 2,8 миллионов, а количество смертей от рака превышает 400000, занимая первое место среди всех заболеваний в Китае и демонстрируя тенденцию к возрастанию. По мере ускорения социальной жизни, возрастания конкурентного давления и изменений человеческого образа жизни и окружающей среды случаи возникновения опухолей и летальных исходов растут от года к году, и опухоли стали распространенным и часто встречаемым заболеванием в современном обществе, не только оказывая серьезное влияние на качество жизни пациентов, но также ложась тяжелым экономическим и моральным бременем на семьи пациентов и общество. Также опухоли важная общественная проблема в мире. Лечение и профилактика рака всегда были одними из наиболее сложных проблем в мире. В настоящее время химиотерапия основное средство борьбы с опухолями. Несмотря на то, что химиотерапия обеспечивает лучшее лечебное воздействие, она часто провоцирует возникновение побочных эффектов, таких как миелосупрессия и снижение иммунитета, усложняя прохождение лечения для пациентов. Также резистентность к препаратам в процессе лечения посредством химиотерапии стала одной из наиболее сложных проблем клинического лечения в настоящий момент. В последние годы мировой рынок противоопухолевых препаратов быстро рос. Согласно статистике Управления по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных препаратов США общий объем продаж противораковых препаратов в мире вырос с 24 миллиардов в 2004 году до 39,6 миллиардов долларов США в 2007. Несмотря на ежегодное появление в мире новых противоопухолевых препаратов, на данный момент эффективные средства борьбы с раком у людей отсутствуют. В то же время, постоянно открывают новые виды рака, и выработка опухолевой резистентности/резистентности к препаратам делает необходимость поиска новых эффективных противораковых препаратов все более срочной.
Карримицин - это новый вид антибиотика, в качестве основного компонента включающий 4''-изовалерил-спирамицин, который образуется посредством клонирования 4''-о-ацил-трансферазы штамма-продуцента карбомицина в штамме-продуценте спирамицина посредством технологии генной модификации, направленного ацилирования спирамицина 4''-ОН и добавления боковой цепи в положение 4''.
Карримицин состоит из множества производных спирамицина, основной активный компонент которого, изовалерил-спирамицин (I+II+III), занимает не менее 60% и является фармацевтически приемлемой композицией. Центральная структура основного компонента представляет собой 16-членное лактоновое кольцо, и это кольцо включает в себя одну молекулу форозамина, одну молекулу микаминозы и одну молекулу микарозы. Его основной компонент, изовалерил-спирамицин I, II, III, отличается от строения спирамицина тем, что группа, объединенная с положением 4' микарозы, представлена изовалерилом, а не гидроксилом. Компанией Tonglian Shengyang Group препарат коллективно объявлен новым видом типа 1.1.
Химическое строение основного компонента карримицина приведено в формуле (I):
Figure 00000001
где при R=H, R'=СОСН2СН(СН3)2 основной компонент изовалерил-спирамицин I;
при R=COCH3, R'=СОСН2СН(СН3)2 основной компонент - изовалерил-спирамицин II;
при R=COCH2CH3, R'=COCH2CH(CH3)2 основной компонент - изовалерил-спирамицин III;
Карримицин относится к 16-членным макролидным антибиотикам, имеет активные группы, такие как карбоксильная, алкоксильная, эпокси-группа, кетонная и альдегидная группы, а также пару сопряженных С=С, и обладает молекулярной массой приблизительно от 884 до 982. Благодаря своему химическому строению карримицин и макролидные антибиотики имеют много общего: они легкорастворимы в большинстве органических растворителей, таких как сложные эфиры, ацетон, хлороформ, спирты и т.д., слаборастворимы в петролейном эфире и нерастворимы в воде. Вследствие наличия двух диметиламинных групп в молекулярном строении карримицин представляет собой слабую щелочь и легко растворяется в кислом водном растворе. Карримицин обладает «отрицательной растворимостью», при которой с повышением температуры растворимость падает. Поскольку изовалерил-спирамицин, главный компонент карримицина, обладает более длинной углеродной цепью в положении 4'' и слабой гидрофильностью, растворимость карримицина в воде меньше, чем у спирамицина и 4''-ацетилспир амицина.
Карримицин - белый некристаллический порошок со слабой гигроскопичностью и удельным вращением около -80,8°, с максимальной длиной волны ультрафиолетовой абсорбции, равной 231-232 нм. Карримицин содержит слабо флуоресцирующие хромофоры и выдает реакцию фиолетового цвета, светясь насыщенным фиолетовым цветом в случае использования концентрированной серной или соляной кислоты, а также обладает максимумом поглощения при 231-232 нм.
Препарат обладает хорошей липофильностью, хорошей проникаемостью в ткани, быстрой оральной абсорбцией, долгой сохраняемостью в организме и устойчивым постантибиотическим эффектом. В соответствии с отношением фармакодинамики и химической конформации, после положения 4'' при ацеляции макролидных антибиотиков у последних улучшилась липофильность и специфическая активность in vivo, а также значительно улучшились противобактериальная активность in vivo и клинические терапевтические эффекты; при этом стабильность антибиотиков in vivo возрастает по мере роста углеродной цепи 4''-сложного гидроксиэфира, то есть, изовалерил-спирамицин > бутирил-спирамицин > пропионил-спирамицин > ацетил-спирамицин.
Предварительные фармакодинамические испытания in vitro и in vivo показали, что препарат не только обладает хорошей противо бактериальной активностью против большинства грамположительных бактерий (G+), но также оказывает определенное воздействие на грамотрицательные бактерии (G-), а его технические показатели явно превосходят азитромицин, эритромицин, ацетил-спирамицин и медемицин. Он обладает наибольшей противомикробной активностью, особенно против микоплазмы пневмонии, а также некоторой противомикробной активностью против бактерий, резистентных к эритромицину, против гонококка, пневмококка, золотистого стафилококка, синегнойной палочки, гемофильной палочки, бактероидов фрагилис, легионеллы, мультилинейной бациллы и палочки газовой гангрены, а также обладает слабой перекрестной резистентностью к золотистому стафилококку с клинической устойчивостью к эритромицину. В основном, карримицин будет применяться в лечении грамположительных инфекций, особенно инфекций верхних дыхательных путей, а также может применяться против инфекций мочевыводящих путей.
В недавнем исследовании заявитель установил, что при оценке изовалерил-спирамицина I, II и/или III относительно антипролиферативной активности человеческих клеток рака молочной железы in vitro MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2 или мышиных клеток гепатомы Н22, человеческих не мелкоклеточных клеток рака легких А549, клеток карциномы легкого Льюиса, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и Н1299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-O, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3, человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC7901, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29, человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60, человеческих клеток рака щитовидной железы ТРС-1, а также человеческих клеток рака мочевого пузыря Т-24 образцы показали хорошую антипролиферативную активность на испытуемых клетках, указывая на то, что ожидается, что изовалерил-спирамицин I, II и/или III станет новым препаратом для лечения опухолей, тем самым достигая цели настоящего изобретения.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Техническая задача, которую надлежит решить посредством настоящего изобретения, заключается в преодолении недостатков предыдущего уровня техники и предложении применения изовалерил-спирамицина I, II и/или III при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли.
Для решения технической задачи, приведенной выше, в настоящем изобретении применяется следующее техническое решение:
В первую очередь, в настоящем изобретении предлагается применение изовалерил-спирамицина I, II и/или III при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли.
Опухоль включает в себя солидную и несолидную опухоли.
Кроме того, солидная опухоль включает в себя доброкачественную и злокачественную солидные опухоли; несолидные опухоли представлены лимфомой или лейкозом.
Кроме того, злокачественная солидная опухоль представлена раком молочной железы, раком печени, раком легких, раком почек, опухолью мозга, раком шейки матки, раком предстательной железы, лимфомой, раком поджелудочной железы, раком пищевода, раком желудка, раком толстой кишки, раком щитовидной железы, раком мочевого пузыря или злокачественной опухолью кожи.
Предпочтительно, опухоль головного мозга представлена глиомой или менингиомой, а рак желудка - аденокарциномой желудка.
Экспериментальным путем в настоящем изобретении приводится, что изовалерил-спирамицин I, II и/или III демонстрирует хорошую антипролиферативную активность относительно человеческих клеток рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2, человеческих не мелко клеточных клеток рака легких А549, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и H1299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC7901, человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60, человеческих клеток рака щитовидной железы ТРС-1 и человеческих клеток рака мочевого пузыря Т-24, что подтверждает, что изовалерил-спирамицин I, II и/или III может быть использован для лечения опухолей или раковых заболеваний, провоцируемых этими клетками.
Кроме того, препарат представлен в различных лекарственных формах, состоящих из изовалерил-спирамицина I, II и/или III и его фармацевтически приемлемых солей, а также фармацевтически приемлемыми вспомогательными лекарственными средствами.
Препарат дополнительно представлен в различных лекарственных формах, состоящих из изовалерил-спирамицина I, II и/или III и его фармацевтически приемлемых солей, а также противоопухолевыми препаратами и фармацевтически приемлемыми вспомогательными лекарственными средствами.
Согласно настоящему изобретению из изовалерил-спирамицина I, II и/или III и как минимум одного противоопухолевого препарата может быть получен сложный препарат.
В дополнение к этому, при приготовлении сложного препарата соотношение дозировок изовалерил-спирамицина I, II и/или III и второго активного компонента составляет 1-99:99-1, предпочтительно 5-95:95-5, более предпочтительно 10-90:90-10, наиболее предпочтительно - 20-80:80-20.
Кроме того, препарат представляет собой сочетание первого и второго веществ, причем первое вещество содержит изовалерил-спирамицин I, II и/или III и его фармацевтически приемлемые соли, а второе вещество противоопухолевый препарат.
Согласно настоящему изобретению первое вещество, содержащее активный компонент изовалерил-спирамицин I, II и/или III, может быть использовано со вторым веществом, содержащим один или несколько препаратов, подобранных из группы, содержащей препарат для химиотерапии, препарат для радиационной терапии, препарат для прицельной терапии или иммунотерапевтический препарат. При их использовании в сочетании первое и второе вещества могут быть введены без конкретного порядка, а именно - первым может быть введено как первое, так и второе вещество, либо же оба вещества могут быть использованы одновременно.
При их использовании в сочетании соотношение дозировок первого и второго веществ составляет 1-99: 99-1, предпочтительно - 5-95:95-5, более предпочтительно -10-90:90-10, наиболее предпочтительно - 20-80:80-20.
Кроме того, противоопухолевый препарат представляет собой препарат для химиотерапии, препарат для радиационной терапии, препарат для прицельной терапии и/или иммунотерапевтический препарат.
В настоящем изобретении также предлагается препарат для лечения и/или профилактики опухоли, активный компонент которого включает в себя изовалерил-спирамицин I, II и/или III.
Кроме того, препарат также включает в себя второй активный компонент.
Второй активный компонент дополнительно включает в себя один или несколько препаратов, подобранных из группы, содержащей препарат для химиотерапии, препарат для радиационной терапии, препарат для прицельной терапии и иммунотерапевтический препарат.
По настоящему изобретению также предлагается комбинированный лекарственный препарат для лечения и/или профилактики опухоли, включающий в себя первое и второе вещества, причем активный компонент первого вещества представлен изовалерил-спирамицином I, II и/или III, а второе вещество включает в себя один или несколько препаратов, подобранных из группы, содержащей препарат для химиотерапии, препарат для радиационной терапии, препарат для прицельной терапии и иммунотерапевтический препарат.
Более того, препарат или первое вещество представляет собой фармацевтически приемлемую лекарственную форму.
Кроме того, доза изовалерил-спирамицина I, II и/или III в медицинском препарате или первом веществе колеблется в диапазоне от 5 до 1 500 мг; предпочтительно - в диапазоне от 50 до 1000 мг; еще более предпочтительно - в диапазоне от 100 до 400 мг.
Изовалерил-спирамицин I по настоящему изобретению может быть выделен и получен согласно методам из предыдущего уровня техники, например, согласно методу из примера 1 в документе CN 101785778 A. Изовалерил-спирамицин II по настоящему изобретению может быть выделен и получен согласно методам из предыдущего уровня техники, например, согласно методу из примера 1 в документе CN 101785779 А. Изовалерил-спирамицин III по настоящему изобретению может быть выделен и получен согласно методам из предыдущего уровня техники, например, согласно методу из примера 1 в документе CN 101773510 A.
После применения вышеприведенного технического решения в сравнении с предыдущим уровнем техники изобретение демонстрирует следующие положительные эффекты:
согласно настоящему изобретению демонстрируется, что изовалерил-спирамицин I, II и/или III обеспечивает хорошее противоопухолевое действие, а в особенности обладает хорошими лечебными эффектами при лечении опухолей, включая рак молочной железы, рак печени, рак легких, лимфому, рак шейки матки, рак предстательной железы, рак толстой кишки или лейкемию. В настоящем изобретении не только предлагается теоретическое обоснование применения и клинического продвижения изовалерил-спирамицина I, II и/или III при приготовлении препаратов для лечения и/или профилактики опухоли, но также оно обеспечивает важные экономические и социальные полезные эффекты.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Для пояснения целей, технических решений и преимуществ вариантов осуществления настоящего изобретения ниже будет приведено четкое и полное описание технических решений, примененных в этих вариантах осуществления. Для демонстрации настоящего изобретения, но не для ограничения объема его правовой охраны применяются следующие варианты осуществления.
Вариант осуществления 1. Таблетированный изовалерил-спирамицин I
Характеристики: 200/350 мг
Рецептура ядра таблетки:
Figure 00000002
Рецептура жидкости для оболочки:
Figure 00000003
Процесс приготовления:
Приготовление ядра таблетки: основной препарат и вспомогательные лекарственные средства в соответствующем порядке пропускались через сито 100 меш, а затем выполнялось перемешивание рецептурного количества изовалерил-спирамицина I, рецептурного количества микрокристаллической целлюлозы и 1/2 рецептурного количества карбоксиметилкрахмала натрия до однородного состояния, после чего добавлялся водный раствор повидона K30 5% для получения мягкого материала. Для гранулирования использовалось сито 18 меш, и влажные гранулы просушивались в условиях обдува при температуре 60°С в течение 2 часов. После сушки влажных гранул для рассеивания гранул использовалось сито 18 меш, после чего добавлялась 1/2 рецептурного количества карбоксиметилкрахмала натрия и рецептурное количество стеарата магния. После равномерного перемешивания материалов смесь таблетировалась с помощью узкого вогнутого штампа диаметром 11 мм для получения ядра таблетки, содержащего препараты, причем масса таблетки составляла 350 мг, а твердость - 6,5 кг.
Приготовление жидкости для оболочки: было проведено взвешивание Opadry II (белого), в емкость для приготовления жидкостей было добавлено необходимое количество воды и партия Opadry II. После добавления всего количества Opadry II скорость перемешивания была снижена до исчезновения завихрения, и для получения жидкости для оболочки перемешивание продолжалось в течение 30 мин.
Приготовление таблеток с тонкопленочной оболочкой: ядро таблетки размещали на установке для нанесения оболочки, устанавливались условия нанесения оболочки и производилось ее нанесение с частотой 20 об/мин при температуре воздуха на входе 40°С и 30°С на выходе, давлении распыла 0,02 МПа и расходом жидкого раствора 1 мл/мин. По достижении стабильного состояния оболочка распылялась в течение 1,5 часов до тех пор, пока поверхность таблеток не становилась гладкой и не приобретала однородный цвет, причем производился приемочный контроль на соответствие по нормативу контроля относительно пленочных оболочек. Оболочка прибавляет приблизительно 5% массы.
Вариант осуществления 2. Таблетированный изовалерил-спирамицин I (из расчета на 10000 таблеток)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина I 1000 г
Гидроксипропилцеллюлоза (5%)
с низкой степенью замещения 92,5 г
Карбоксиметилкрахмал натрия (3%) 55,5 г
Стеарат магния (1%) 18,5 г
Крахмал суммарная масса минус масса другого
сырья и вспомогательных материалов
Суммарная масса 1850 г
Процесс приготовления: соответствующее количество крахмала было взвешено, разбавлено до концентрации 15% и нагрето до образования пасты для получения вяжущего вещества; основной материал изовалерил-спирамицин I, а также вспомогательные материалы в виде крахмала, гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения, карбоксиметилкрахмала натрия и стеарата магния были пропущены через сито 100 меш в соответствующем порядке, и затем необходимые основной и вспомогательные материалы были взвешены согласно количеству, указанному в рецептуре. После полного смешивания изовалерил-спирамицина I, крахмала и гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения до однородного состояния была использована крахмальная паста с концентрацией крахмала 15% для преобразования смеси в мягкий материал, который был гранулирован посредством сита 14 меш, и затем эти гранулы были высушены при температуре 50-60°С до получения влажности 3-5%. Для рассеивания гранул использовалось сито 14 меш, после чего для смешивания были добавлены карбоксиметилкрахмал натрия и стеарат магния, и была измерена концентрация гранул. Согласно концентрации гранул была вычислена масса таблетки, и смесь была таблетирована (посредством узкого вогнутого штампа диаметром 9 мм), после чего была проведена проверка на разность массы таблеток. После прохождения проверки таблетки были упакованы.
Вариант осуществления 3. Капсулированный изовалерил-спирамицин I (из расчета на 10000 гранул) Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина I 1000 г
Крахмал 1080 г минус масса порошка-сырца
изовалерил-спирамицина I
Лекарственная капсула №3 1000 гранул
Вазелиновое масло 50 мл
Процесс приготовления: основной материал в виде изовалерил-спирамицина I и вспомогательный материал в виде медицинского крахмала были по-отдельности взвешены согласно количеству по формуле для данного процесса, а затем полностью перемешаны в миксере в течение 1,5-2 часов. Данные, полученные при отборе образцов и проверке концентраций, в целом должны были совпадать с теоретическими данными (масса каждой капсулы составляла приблизительно 0,105 г), и затем сертифицированные лекарственные капсулы №3 и смешанное сырье для загрузки были помещены в приспособление для заполнения в соответствии с требованиями автоматической капсюлировочной машины, после чего заполненные капсулы подверглись испытанию на различие образцов (±10% или менее,<0,3 г) для определения соответствия скорости растворения требованиям. Капсулы, соответствовавшие требованиям после испытания, были помещены в глянцовочную машину для глянцевания в течение 15-20 минут с добавлением вазелинового масла, после чего они были извлечены для проверки их соответствия упаковке для готовой продукции.
Вариант осуществления 4. Изовалерил-спирамицин I в форме сухого сиропа (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина I 1250 г
Лимонная кислота (0,5%) 15 г
Сахароза суммарная масса минус масса
другого сырья и вспомогательных материалов
Суммарная масса около 500 г
Пигмент (куркумин) около 1 г
Процесс приготовления: порошок-сырец изовалерил-спирамицина I, лимонная кислота и сахароза были в соответствующем порядке измельчены до получения гранул посредством скоростной вихревой мельницы, и 85% гранул были пропущены через сито 300 меш, а 15% - через сито 180 меш. Затем мелкоизмельченный порошок был отвешен в количестве, предусмотренном рецептурой, и полностью перемешивался в течение 1-1,5 часов, были измерены значения концентрации, рассчитана норма загрузки (теоретическая норма загрузки составила 500 мг на пакет). После этого смесь была помещена в машину для упаковки в пакеты, была установлена бумага с алюминиевой фольгой и проведено заполнение в соответствии с требованиями машины для заполнения. Допуск по расхождениям находился в пределах ±5%, и после заполнения и прохождения осмотра изготавливалась наружная упаковка.
Вариант осуществления 5. Гранулированный изовалерил-спирамицин I (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина I 1250 г
Сахарная пудра 20000 г
Декстрин 9000 г
Повидон K30 5% соответствующее количество
Процесс приготовления: порошок-сырец изовалерил-спирамицина I, сахарная пудра и декстрин были пропущены через сито 120 меш, а затем отвешены в количестве, предусмотренном рецептурой, и равномерно перемешаны. Вышеприведенные смешанные материалы были преобразованы в мягкий материал с помощью повидона K30 5% в виде клейкого вещества, после чего этот мягкий материал был гранулирован с помощью колебательного гранулятора, высушен при 70°С, а гранулы были распределены и предварительно упакованы после прохождения проверки.
Вариант осуществления 6. Изовалерил-спирамицин I в форме лиофилизированного порошка для инъекций
500 мг порошка-сырца изовалерил-спирамицина I были перемешаны до однородного состояния с равномолярным количеством адипиновой кислоты, и эта смесь была растворена в 5 мл воды для получения светло-желтого прозрачного раствора со значением рН от 4,6 до 5,6 единиц. Далее в форме лиофилизированного пропанта в светло-желтый прозрачный раствор были добавлены 40 г маннитола, и после быстрой заморозки при низкой температуре в течение 9 часов материал был лиофилизирован для получения рыхлого вещества светло-желтого цвета, которое перед использованием было растворено в 10 мл стерилизованной воды.
Вариант осуществления 7. Таблетированный изовалерил-спирамицин II
Характеристики: 200/350 мг
Рецептура ядра таблетки:
Figure 00000004
Рецептура жидкости для оболочки:
Figure 00000005
Процесс приготовления:
Приготовление ядра таблетки: основной препарат и вспомогательные лекарственные средства в соответствующем порядке пропускались через сито 100 меш, а затем выполнялось перемешивание рецептурного количества изовалерил-спирамицина II, рецептурного количества микрокристаллической целлюлозы и 1/2 рецептурного количества карбоксиметилкрахмала натрия до однородного состояния, после чего добавлялся водный раствор повидона K30 5% для получения мягкого материала. Для гранулирования использовалось сито 18 меш, и влажные гранулы просушивались в условиях обдува при температуре 60°С в течение 2 часов. После сушки влажных гранул для рассеивания гранул использовалось сито 18 меш, после чего добавлялось 1/2 рецептурного количества карбоксиметилкрахмала натрия и рецептурное количество стеарата магния. После равномерного перемешивания материалов смесь таблетировалась с помощью узкого вогнутого штампа диаметром 11 мм для получения ядра таблетки, содержащего препараты, причем масса таблетки составляла 350 мг, а твердость - 6,5 кг.
Приготовление жидкости для оболочки: было проведено взвешивание Opadry II (белого), в емкость для приготовления жидкостей было добавлено необходимое количество воды и партия Opadry II. После добавления всего количества Opadry II скорость перемешивания была снижена до исчезновения завихрения, и для получения жидкости для оболочки перемешивание продолжалось в течение 30 мин.
Приготовление таблеток с тонкопленочной оболочкой: ядро таблетки размещали на установке для нанесения оболочки, устанавливались условия нанесения оболочки и производилось ее нанесение с частотой 20 об/мин при температуре воздуха на входе 40°С и 30°С на выходе, давлении распыла 0,02 МПа и расходом жидкого раствора 1 мл/мин. По достижении стабильного состояния оболочка распылялась в течение 1,5 часов до тех пор, пока поверхность таблеток не становилась гладкой и не приобретала однородный цвет, причем производился приемочный контроль на соответствие по нормативу контроля относительно пленочных оболочек. Оболочка прибавляет приблизительно 5% массы.
Вариант осуществления 8. Таблетированный изовалерил-спирамицин II (из расчета на 10000 таблеток)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина II 1000 г
Гидроксипропилцеллюлоза (5%)
с низкой степенью замещения 92,5 г
Карбоксиметилкрахмал натрия (3%) 55,5 г
Стеарат магния (1%) 18,5 г
Крахмал суммарная масса минус масса другого
сырья и вспомогательных материалов
Суммарная масса 1850 г
Процесс приготовления: соответствующее количество крахмала было взвешено, разбавлено до концентрации 15% и нагрето до образования пасты для получения вяжущего вещества. Основной материал изовалерил-спирамицин II, а также вспомогательные материалы в виде крахмала, гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения, карбоксиметилкрахмала натрия и стеарата магния были пропущены через сито 100 меш в соответствующем порядке, и затем необходимые основной и вспомогательные материалы были взвешены согласно количеству, указанному в рецептуре. После полного смешивания изовалерил-спирамицина II, крахмала и гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения до однородного состояния была использована крахмальная паста с концентрацией крахмала 15% для преобразования смеси в мягкий материал, который был гранулирован посредством сита 14 меш, и затем эти гранулы были высушены при температуре 50-60°С до получения влажности 3-5%. Для рассеивания гранул использовалось сито 14 меш, после чего для смешивания были добавлены карбоксиметилкрахмал натрия и стеарат магния, и была измерена концентрация гранул. Согласно концентрации гранул была вычислена масса таблетки, и смесь была таблетирована (посредством узкого вогнутого штампа диаметром 9 мм), после чего была проведена проверка на разность массы таблеток. После прохождения проверки таблетки были упакованы.
Вариант осуществления 9. Капсул про ванный изовалерил-спирамицин II (из расчета 10000 гранул)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина II 1000 г
Крахмал 1080 г минус масса порошка-сырца
изовалерил-спирамицина II
Лекарственная капсула №3 1000 гранул
Вазелиновое масло 50 мл
Процесс приготовления: основной материал в виде изовалерил-спирамицина II и вспомогательный материал в виде медицинского крахмала были по-отдельности взвешены согласно количеству по формуле для данного процесса, а затем полностью перемешаны в миксере в течение 1,5-2 часов. Данные, полученные при отборе образцов и проверке концентраций, в целом должны были совпадать с теоретическими данными (масса каждой капсулы составляла приблизительно 0,105 г), и затем сертифицированные лекарственные капсулы №3 и смешанное сырье для загрузки были помещены в приспособление для заполнения в соответствии с требованиями автоматической капсюлировочной машины, после чего заполненные капсулы подверглись испытанию на различие образцов (±10% или менее, <0,3 г) для определения соответствия скорости растворения требованиям. Капсулы, соответствовавшие требованиям после испытания, были помещены в глянцовочную машину для глянцевания в течение 15-20 минут с добавлением вазелинового масла, после чего они были извлечены для проверки их соответствия упаковке для готовой продукции.
Вариант осуществления 10. Изовалерил-спирамицин II в форме сухого сиропа (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина II 1250 г
Лимонная кислота (0,5%) 15 г
Сахароз а суммарная масса минус масса другого
сырья и вспомогательных материалов
Суммарная масса около 500 г
Пигмент (куркумин) около 1 г
Процесс приготовления: порошок-сырец изовалерил-спирамицина II, лимонная кислота и сахароза были в соответствующем порядке измельчены до получения гранул посредством скоростной вихревой мельницы, и 85% гранул были пропущены через сито 300 меш, а 15% - через сито 180 меш. Затем мелкоизмельченный порошок был отвешен в количестве, предусмотренном рецептурой, и полностью перемешивался в течение 1-1,5 часов, были измерены значения концентрации, рассчитана норма загрузки (теоретическая норма загрузки составила 500 мг на пакет). После этого смесь была помещена в машину для упаковки в пакеты, была установлена бумага с алюминиевой фольгой и проведено заполнение в соответствии с требованиями машины для заполнения. Допуск по расхождениям находился в пределах ±5%, и после заполнения и прохождения осмотра изготавливалась наружная упаковка.
Вариант осуществления 11. Гранулированный изовалерил-спирамицин II (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина II 1250 г
Сахарная пудра 20000 г
Декстрин 9000 г
Повидон K30 5% соответствующее количество
Процесс приготовления: порошок-сырец изовалерил-спирамицина II, сахарная пудра и декстрин были пропущены через сито 120 меш, а затем отвешены в количестве, предусмотренном рецептурой, и равномерно перемешаны. Вышеприведенные смешанные материалы были преобразованы в мягкий материал с помощью повидона K30 5% в виде клейкого вещества, после чего этот мягкий материал был гранулирован с помощью колебательного гранулятора, высушен при 70°С, а гранулы были распределены и предварительно упакованы после прохождения проверки.
Вариант осуществления 12. Изовалерил-спирамицин II в форме лиофилизированного порошка для инъекций
500 мг порошка-сырца изовалерил-спирамицина II были отвешены и перемешаны до однородного состояния с равномолярным количеством адипиновой кислоты, и эта смесь была растворена в 5 мл воды для получения светло-желтого прозрачного раствора со значением рН от 4,6 до 5,6 единиц. Далее в форме лиофилизированного пропанта в светло-желтый прозрачный раствор были добавлены 40 г маннитола, и после быстрой заморозки при низкой температуре в течение 9 часов материал был лиофилизирован для получения рыхлого вещества светло-желтого цвета, которое перед использованием было растворено в 10 мл стерилизованной воды.
Вариант осуществления 13. Таблетированный изовалерил-спирамицин III
Характеристики: 200/350 мг Рецептура ядра таблетки:
Figure 00000006
Рецептура жидкости для оболочки:
Figure 00000007
Процесс приготовления:
Приготовление ядра таблетки: основной препарат и вспомогательные лекарственные средства в соответствующем порядке пропускались через сито 100 меш, а затем выполнялось перемешивание рецептурного количества изовалерил-спирамицина III, рецептурного количества микрокристаллической целлюлозы и 1/2 рецептурного количества карбоксиметилкрахмала натрия до однородного состояния, после чего добавлялся водный раствор повидона K30 5% для получения мягкого материала. Для гранулирования использовалось сито 18 меш, и влажные гранулы просушивались в условиях обдува при температуре 60°С в течение 2 часов. После сушки влажных гранул для рассеивания гранул использовалось сито 18 меш, после чего добавлялось 1/2 рецептурного количества карбоксиметилкрахмала натрия и рецептурное количество стеарата магния. После равномерного перемешивания материалов смесь таблетировалась и спрессовывалась с помощью узкого вогнутого штампа диаметром 11 мм для получения ядра таблетки, содержащего препараты, причем масса таблетки составляла 350 мг, а твердость - 6,5 кг.
Приготовление жидкости для оболочки: было проведено взвешивание Opadry II (белого), в емкость для приготовления жидкостей было добавлено необходимое количество воды и партия Opadry II. После добавления всего количества Opadry II скорость перемешивания была снижена до исчезновения завихрения, и для получения жидкости для оболочки перемешивание продолжалось в течение 30 мин.
Приготовление таблеток с тонкопленочной оболочкой: ядро таблетки размещали на установке для нанесения оболочки, устанавливались условия нанесения оболочки и производилось ее нанесение с частотой 20 об/мин при температуре воздуха на входе 40°С и 30°С на выходе, давлении распыла 0,02 МПа и расходом жидкого раствора 1 мл/мин. По достижении стабильного состояния оболочка распылялась в течение 1,5 часов до тех пор, пока поверхность таблеток не становилась гладкой и не приобретала однородный цвет, причем производился приемочный контроль на соответствие по нормативу контроля относительно пленочных оболочек. Оболочка прибавляет приблизительно 5% массы.
Вариант осуществления 14. Таблетированный изовалерил-спирамицин III (из расчета на 10000 таблеток)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина III 1000 г
Гидроксипропилцеллюлоза (5%)
с низкой степенью замещения 92,5 г
Карбоксиметилкрахмал натрия (3%) 55,5 г
Стеарат магния (1%) 18,5 г
Крахмал суммарная масса минус масса другого
сырья и вспомогательных материалов
Суммарная масса 1850 г
Процесс приготовления: соответствующее количество крахмала было взвешено, разбавлено до концентрации 15% и нагрето до образования пасты для получения вяжущего вещества. Основной материал изовалерил-спирамицин III, а также вспомогательные материалы в виде крахмала, гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения, карбоксиметилкрахмала натрия и стеарата магния были пропущены через сито 100 меш в соответствующем порядке, и затем необходимые основной и вспомогательные материалы были взвешены согласно количеству, указанному в рецептуре. После полного смешивания изовалерил-спирамицина III, крахмала и гидроксипропилцеллюлозы с низкой степенью замещения до однородного состояния была использована крахмальная паста с концентрацией крахмала 15% для преобразования смеси в мягкий материал, который был гранулирован посредством сита 14 меш, и затем эти гранулы были высушены при температуре 50-60°С до получения влажности 3-5%. Для рассеивания гранул использовалось сито 14 меш, после чего для смешивания были добавлены карбоксиметилкрахмал натрия и стеарат магния, и была измерена концентрация гранул. Согласно концентрации гранул была вычислена масса таблетки, и смесь была таблетирована (посредством узкого вогнутого штампа диаметром 9 мм), после чего была проведена проверка на разность массы таблеток. После прохождения проверки таблетки были упакованы.
Вариант осуществления 15. Капсулированный изовалерил-спирамицин III (из расчета 10000 гранул)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина III 1000 г
Крахмал 1080 г минус масса порошка-сырца
изовалерил-спирамицина II
Лекарственная капсула №3 1000 гранул
Вазелиновое масло 50 мл
Процесс приготовления: основной материал в виде изовалерил-спирамицина III и вспомогательный материал в виде медицинского крахмала были по-отдельности взвешены согласно количеству по формуле для данного процесса, а затем полностью перемешаны в миксере в течение 1,5-2 часов. Данные, полученные при отборе образцов и проверке концентраций, в целом должны были совпадать с теоретическими данными (масса каждой капсулы составляла приблизительно 0,105 г), и затем сертифицированные лекарственные капсулы №3 и смешанное сырье для загрузки были помещены в приспособление для заполнения в соответствии с требованиями автоматической капсюлировочной машины, после чего заполненные капсулы подверглись испытанию на различие образцов (±10% или менее, <0,3 г) для определения соответствия скорости растворения требованиям. Капсулы, соответствовавшие требованиям после испытания, были помещены в глянцовочную машину для глянцевания в течение 15-20 минут с добавлением вазелинового масла, после чего они были извлечены для проверки их соответствия упаковке для готовой продукции.
Вариант осуществления 16. Изовалерил-спирамицин III в форме сухого сиропа (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина III 1250 г
Лимонная кислота (0,5%) 15 г
Сахароза суммарная масса минус масса другого
сырья и вспомогательных материалов
Суммарная масса около 500 г
Пигмент (куркумин) около 1 г
Процесс приготовления: порошок-сырец изовалерил-спирамицина III, лимонная кислота и сахароза были в соответствующем порядке измельчены до получения гранул посредством скоростной вихревой мельницы, и 85% гранул были пропущены через сито 300 меш, а 15% - через сито 180 меш. Затем мелкоизмельченный порошок был отвешен в количестве, предусмотренном рецептурой, и полностью перемешивался в течение 1-1,5 часов, были измерены значения концентрации, рассчитана норма загрузки (теоретическая норма загрузки составила 500 мг на пакет). После этого смесь была помещена в машину для упаковки в пакеты, была установлена бумага с алюминиевой фольгой и проведено заполнение в соответствии с требованиями машины для заполнения. Допуск по расхождениям находился в пределах ±5%, и после заполнения и прохождения осмотра изготавливалась наружная упаковка.
Вариант осуществления 17. Гранулированный изовалерил-спирамицин III (из расчета на 10000 упаковок)
Рецептура:
Порошок-сырец изовалерил-спирамицина III 1250 г
Сахарная пудра 20000 г
Декстрин 9000 г
Повидон K30 5% соответствующее количество
Процесс приготовления: порошок-сырец изовалерил-спирамицина III, сахарная пудра и декстрин были пропущены через сито 120 меш, а затем отвешены в количестве, предусмотренном рецептурой, и равномерно перемешаны. Вышеприведенные смешанные материалы были преобразованы в мягкий материал с помощью повидона K30 5% в виде клейкого вещества, после чего этот мягкий материал был гранулирован с помощью колебательного гранулятора, высушен при 70°С, а гранулы были распределены и предварительно упакованы после прохождения проверки.
Вариант осуществления 18. Изовалерил-спирамицин III в форме лиофилизированного порошка для инъекций
500 мг порошка-сырца изовалерил-спирамицина III были перемешаны до однородного состояния с равномолярным количеством адипиновой кислоты, и эта смесь была растворена в 5 мл воды для получения светло-желтого прозрачного раствора со значением рН от 4,6 до 5,6 единиц. Далее в форме лиофилизированного пропанта в светло-желтый прозрачный раствор были добавлены 40 г маннитола, и после быстрой заморозки при низкой температуре в течение 9 часов материал был лиофилизирован для получения рыхлого вещества светло-желтого цвета, которое перед использованием было растворено в 10 мл стерилизованной воды.
Пример испытания 1. Биопроба на противоопухолевую активность
Цель анализа оценка ингибирования пролиферации или цитотоксической активности клетки испытуемого образца способом in vitro.
Клеточные штаммы:
человеческие клетки рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческие клетки гепатомы HepG2, человеческие немелкоклеточные клетки рака легких А549, человеческие крупноклеточные клетки рака легких Н460 и H1299, человеческие прозрачные клетки почечного эпителия аденокарциномы 786-0, человеческие клетки почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческие клетки глиомы U251, человеческие клетки глиобластомы А172, клетки человеческой ткани лимфомы U937, человеческие клетки рака шейки матки HeLa, человеческие клетки рака предстательной железы РС3, человеческие клетки рака поджелудочной железы PANC-1, человеческие клетки рака пищевода ТЕ-1, человеческие клетки аденокарциномы желудка SGC7901, человеческие клетки рака толстой кишки НТ-29, человеческие клетки промиелоцитарного лейкоза HL-60, человеческие клетки рака щитовидной железы ТРС-1 и человеческие клетки рака мочевого пузыря Т-24. Реагенты:
среда RPMI1640, среда MEM, среда DMEM с пониженным содержанием сахара, эмбриональная телячья сыворотка, приобретенная у компании Gibco, США, трипсин, глютамин, пенициллин, стрептомицин, диметилсульфоксид (ДМСО) и метил-тиазол-тетразолий (МТТ), приобретенный у компании Sigma, США.
Инструменты:
углекислотный инкубатор (Sanyo, Япония), анализатор иммуносорбентов с иммобилизированными ферментами (Tecan, Австрия), 96-луночный культуральный планшет (Corning, США), инвертированный микроскоп (Motic, Китай).
Этапы процедуры следующие:
адгезивные клетки:
MCF-7, MDA-MB-231, HepG2, А549, Н460, Н1299, 786-O, 769-Р, U251, А172, HeLa, РС3, PANC-1, ТЕ-1, SGC7901 и НТ-29 были опухолевыми адгезивными клетками. Были отобраны и подкормлены трипсином адгезивные опухолевые клетки в фазе логарифмического роста, после чего они были преобразованы во взвесь отмытых клеток с концентрацией от 4 до 5×104/мл с помощью среды, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Взвесь отмытых клеток была посеяна на 96-луночный культуральный планшет, и каждая лунка вмещала 100 мкл. При температуре 37°С и концентрации CO2 5% в течение 24 часов проводилась культивация на 96-луночном планшете. Группа сравнения была заменена новой культурной средой с другой концентрацией образцов для испытания, а именно изовалерил-спирамицином I, изовалерил-спирамицином II или изовалерил-спирамицином III, в то время как контрольная группа была заменена культурной средой, содержащей аналогичный объем растворителя. Также каждая группа получила 3 параллельных лунки, культивация которых проводилась при 37°С и концентрации СО2 5% в течение 48 часов. После удаления супернатанта лунки были трижды тщательно промыты фосфатно-солевым буферным раствором. Также в каждую лунку были добавлены 100 мкл свежеприготовленной культурной среды с концентрацией МТТ 0,5 мг/мл для непрерывной инкубации в течение 4 часов при 37°С.После тщательного удаления супернатанта в каждую лунку были добавлены 150 мкл ДМСО, и после смешивания материала в течение 10 минут посредством микроосциллятора с помощью микропланшетного ридера было измерено значение оптической плотности при длине волны 492 нм.
Клетки во взвеси:
клетками во взвеси выступали U937 и HL-60, а в фазе логарифмического роста клетки были отобраны и преобразованы во взвесь отмытых клеток 2×105/мл с помощью культурной среды RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки. Взвесь отмытых клеток была посеяна на 96-луночный культуральный планшет, и каждая лунка вмещала 50 мкл, после чего при температуре 37°С и концентрации СО2 5% в течение 24 часов проводилась культивация на 96-луночном планшете. В группу сравнения были добавлены 50 мкл культурной среды с разной концентрацией испытуемого образца изовалерил-спирамицина I, изовалерил-спирамицина II или изовалерил-спирамицина III, в то время как в контрольную группу была добавлена культурная среда, содержащая такой же объем растворителя. Каждая группа получила 3 параллельных лунки, культивация которых проводилась при 37°С и концентрации СО2 5% в течение 48 часов. Также в каждую лунку были добавлены 10 мкл свежеприготовленной культурной среды с концентрацией МТТ 5 мг/мл для непрерывной инкубации в течение 4 часов при 37°С. Кристаллы были растворены в 100 мкл тройного раствора (10 г додедилсульфата натрия, 0,1 мл HCl 10 моль, 5 мл изобутанола, разбавленного 100 мл дистиллированной воды) и инкубированы при 37°С в течение 12 часов. С помощью микропланшетного ридера было измерено значение оптической плотности при длине волны 492 нм.
Оценка результатов:
степень ингибирования роста опухолевых клеток медицинского препарата рассчитывается по следующей формуле:
степень ингибирования роста опухолевой клетки (%) = [А492 (негативный контроль)-А492 (дозовая группа)]/А492 (негативный контроль) × 100%
С ее помощью определяется концентрация полумаксимального ингибирования (IC50) образца.
Результаты:
результаты оценки антипролиферативной активности in vitro образцов, подобранных из человеческих клеток рака молочной железы MCF-7 и MDA-MB-231, человеческих клеток гепатомы HepG2, человеческих немелкоклеточных клеток рака легких А549, человеческих крупноклеточных клеток рака легких Н460 и Н1299, человеческих прозрачных клеток почечного эпителия аденокарциномы 786-O, человеческих клеток почечного эпителия аденокарциномы 769-Р, человеческих клеток глиомы U251, человеческих клеток глиобластомы А172, человеческих клеток ткани лимфомы U937, человеческих клеток рака шейки матки HeLa, человеческих клеток рака предстательной железы РС3, человеческих клеток рака поджелудочной железы PANC-1, человеческих клеток рака пищевода ТЕ-1, человеческих клеток аденокарциномы желудка SGC7901, человеческих клеток рака толстой кишки НТ-29 человеческих клеток промиелоцитарного лейкоза HL-60, человеческих клеток рака щитовидной железы ТРС-1 и человеческих клеток рака мочевого пузыря Т-24 приведены в таблице 1, таблице 2 и таблице 3:
Figure 00000008
Figure 00000009
Figure 00000010
Figure 00000011
Имеющиеся результаты показывают, что образцы изовалерил-спирамицина I, изовалерил-спирамицина II и изовалерил-спирамицина III демонстрируют хорошую антипролиферативную активность в отношении испытуемых клеток.
Пример испытания 2. Испытание способом in vivo
1. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих крупноклеточных клетках рака легких Н460 на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки Н460 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 4 и 5).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 20,70%, 46,33% и 70,11% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 14,22%, 34,43% и 61,12% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 17,41%, 23,31% и 63,93% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 56,56%, 49,00% и 31,96% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 51,97%, 46,49% и 37,89% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 63,03%, 42,54% и 35,95% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000012
Figure 00000013
Figure 00000014
2. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих немелкоклеточных клетках рака легких Н1299 на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки Н1299 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 6 и 7).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 22,11%, 43,83% и 69,95% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 17,32%, 44,21% и 58,37% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 13,11%, 49,38% и 62,78% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 89,42%, 49,81% и 27,43% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 83,01%, 46,94% и 36,86% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 89,88%, 48,11% и 32,43% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000015
Figure 00000016
Figure 00000017
3. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака пищевода на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки ТЕ-1 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 8 и 9).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 30,92%, 51,01% и 69,71% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 24,87%, 43,78% и 72,4 8% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 22,64%, 40,17% и 65,46% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 60,55%, 40,70% и 20,61% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 70,32%, 50,51% и 36,49% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 66,52%, 50,71% и 30,72% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000018
Figure 00000019
Figure 00000020
4. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках аденокарциномы желудка на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки SGC7901 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 10 и 11).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 31,56%, 53,13% и 70,78% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 24,44%, 41,76% и 70,24% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 21,68%, 41,13% и 63,34% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 61,13%, 42,67% и 20,23% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 70,48%, 51,42% и 36,95% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 65,48%, 49,44% и 30,34% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000021
Figure 00000022
Figure 00000023
Figure 00000024
5. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака предстательной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки РС3 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 12 и 13).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 33,87%, 51,33% и 71,01% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 23,49%, 40,16% и 50,44% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 25,44%, 40,16% и 60,37% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 70,43%, 49,14% и 30,72% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 83,04%, 60,08% и 44,48% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 75,75%, 55,02% и 34,57% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Figure 00000028
6. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака молочной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки MCF-7 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 14 и 15).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 31,10%, 51,72% и 70,12% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 20,55%, 41,72% и 56,81% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 26,75%, 39,08% и 61,78% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 71,92%, 49,05% и 30,80% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 79,23%, 60,58% и 44,44% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 75,03%, 54,92% и 34,91% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000029
Figure 00000030
Figure 00000031
7. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака молочной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки MDA-MB-231 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 16 и 17).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 22,84%, 55,17% и 69,11% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 18,17%, 29,66% и 58,91% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 24,35%, 21,01% и 62,93% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 69,71%, 44,18% и 27,74% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 80,22%, 58,78% и 30,89% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составила 68,36%, 50,12% и 35,27% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000032
Figure 00000033
Figure 00000034
8. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака поджелудочной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки PANC-1 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 18 и 19).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 31,10%, 51,72% и 70,12% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 20,55%, 41,72% и 56,81% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 26,75%, 39,08% и 61,78% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 71,92%, 49,05% и 30,80% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 79,23%, 60,58% и 44,44% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 75,03%, 54,92% и 34,91% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000035
Figure 00000036
9. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках гепатомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки HepG-2 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 20 и 21).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 24,43%, 57,93% и 68,22% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 21,07%, 31,43% и 61,56% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 38,92%, 60,54% и 63,28% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 65,03%, 42,12% и 27,49% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 81,03%, 57,02% и 39,31% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 64,69%, 43,18% и 32,71% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000037
Figure 00000038
Figure 00000039
10. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих немелкоклеточных клетках рака легких на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки А549 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 22 и 23).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 24,00%, 58,10% и 69,52% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 20,73%, 31,87% и 60,19% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 37,99%, 55,95% и 66,53% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 67,18%, 41,93% и 28,35% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 83,41%, 58,75% и 39,42% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 65,93%, 47,25% и 33,04% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000040
Figure 00000041
Figure 00000042
11. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках глиомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки U251 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 24 и 25).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 30,94%, 44,53% и 69,21% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 10,91%, 15,81% и 40,26% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 15,45%, 32,74% и 59,56% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 76,40%, 44,54% и 25,80% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 76,14%, 51,88% и 43,26% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 68,16%, 54,34% и 41,10% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000043
Figure 00000044
Figure 00000045
Figure 00000046
12. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках глиобластомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки А172 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, темозоломидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 26 и 27).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 30,75%, 44,26% и 68,79% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 10,85%, 15,71% и 40,01% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 15,35%, 32,54% и 59,19% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 74,49%, 43,43% и 25,16% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 74,24%, 50,59% и 42,18% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 66,45%, 52,89% и 40,08% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000047
Figure 00000048
Figure 00000049
Figure 00000050
13. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках лимфомы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки U937 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы / RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы / средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 28 и 29).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 41,73%, 50,73% и 65,03% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 25,61%, 35,44% и 43,63% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 41,19%, 53,03% и 61,77% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 68,65%, 39,74% и 35,25% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 74,19%, 52,10% и 46,09% соответственно.
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 63,36%, 49,30% и 38,66% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000051
Figure 00000052
Figure 00000053
14. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака шейки матки на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки HeLa в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%)=RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 30 и 31).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 46,69%, 51,57% и 65,55% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 30,67%, 42,90% и 43,30% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 39,33%, 52,41% и 61,68% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 69,18%, 39,57% и 30,91% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 30,67%, 42,90% и 43,30% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 39,33%, 52,41% и 61,68% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000054
Figure 00000055
Figure 00000056
15. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих прозрачных клетках почечного эпителия аденокарциномы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки 786-O в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 32 и 33).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 34,70%, 39,22% и 64,36% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 19,69%, 41,09% и 60,00% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 35,80%, 52,14% и 62,49% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 37,88%, 37,19% и 36,89% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 76,92%, 53,61% и 35,74% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 73,13%, 51,33% и 34,20% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000057
Figure 00000058
Figure 00000059
16. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках почечного эпителия аденокарциномы на модели с голой мышью Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки 769-Р в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: эталонную, циклофосфамидную, изовалерил-спирамициновые I с дозами 22, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%)=RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 34 и 35).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 33,68%, 47,33% и 68,82% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 38,29%, 47,61% и 61,79% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 40,87%, 60,50% и 64,46% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 75,78%, 57,12% и 36,88% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 68,22%, 42,64% и 34,76% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 61,59%, 51,59% и 35,55% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000060
Figure 00000061
Figure 00000062
17. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках НТ-29 на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки НТ-29 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%)=RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 36 и 37).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 16,10%, 49,72% и 70,14% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 16,24%, 32,41% и 55,74% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 19,22%, 41,35% и 63,19% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 81,60%, 49,22% и 29,11% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 84,18%, 79,34% и 44,05% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 85,54%, 53,48% и 35,63% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000063
Figure 00000064
Figure 00000065
18. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках HL-60 на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки HL-60 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши. Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%)=RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 38 и 39).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 11,57%, 34,78% и 64,19% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 15,92%, 29,48% и 51,81% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 17,10%, 29,92% и 55,05% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 84,96%, 59,54% и 32,70% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 75,39%, 65,18% и 41,36% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 76,09%, 61,90% и 39,87% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000066
Figure 00000067
Figure 00000068
Figure 00000069
19. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака щитовидной железы на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки ТРС-1 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV=V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 40 и 41).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 23,88%, 57,28% и 67,49% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 20,91%, 31,61% и 62,04% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 39,06%, 60,25% и 62,94% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 65,45%, 43,43% и 28,11% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 86,15%, 59,08% и 38,61% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 61,93%, 45,01% и 34,75% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000070
Figure 00000071
Figure 00000072
Figure 00000073
20. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в человеческих клетках рака мочевого пузыря на модели с голой мышью
Установление солидной опухоли на мышиной модели
Были отобраны клетки Т-24 в логарифмической фазе роста и подвергнуты эксперименту по методу исключения трипанового синего, показавшего, что жизнеспособность клеток составила более 95%, затем клетки обработали трипсином, центрифугировали и удалили супернатант. Концентрация клеток была доведена до 1×107/мл с помощью матригеля, после чего каждой голой мыши через правую подмышечную впадину были подкожно привиты 0,2 мл клеток, и это было запротоколировано как первый день посева. После разрастания опухоли более или ровно до 100 мм3, мыши были произвольным образом разделены на 11 групп с 6 особями в каждой: изовалерил-спирамициновые I с дозами 25, 50 и 100 мг/кг, изовалерил-спирамициновые II с дозами 25, 50 и 100 мг/кг и изовалерил-спирамициновые III группы с дозами 25, 50 и 100 мг/кг. В каждой группе в течение 30 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг. Мыши были умерщвлены через день после прекращения приема препарата, и были проверены показатели. Наибольший и наименьший диаметры опухоли и масса тела каждой мыши регистрировались каждые 3 дня с момента после приема препарата и до умерщвления мыши.
Расчет объема опухоли и относительной скорости ее пролиферации
Масса тела голой мыши, а также наибольший (а) и наименьший (b) диаметры пересаженной опухоли измерялись каждые 3 дня, а объем опухоли (v), относительный объем опухоли (RTV) и относительная скорость пролиферации опухоли (Т/С) соответствующим образом вычислялись по одной из следующих формул: V=a×b2/2; RTV = V/V0 (V0 - объем опухоли перед введением, V - объем опухоли перед умерщвлением), а Т/С (%) = RTV терапевтической группы/RTV эталонной контрольной группы × 100%.
Расчет степени ингибирования роста опухоли
Все мыши были взвешены и умерщвлены. После полного извлечения опухоли из тела мыши такие неопухолевые ткани, как кровоподтеки и жир, были удалены для взвешивания опухоли и расчета степени ингибирования ее роста. В качестве показателя эффективности в каждой группе мышей используется средняя масса опухоли. Степень ингибирования роста опухоли (%) = (1 - средняя масса опухоли терапевтической группы/средняя масса опухоли в эталонной группе) × 100%.
Результаты испытания показывают, что по сравнению с контрольной группой в каждой группе, которая получала препарат, наблюдалась определенная степень ингибирования роста опухоли, ее объема, относительного объема и относительной скорости пролиферации (см. таблицы 42 и 43).
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 20,55%, 49,20% и 65,84% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 15,57%, 41,99% и 59,25% соответственно.
Степень ингибирования роста опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин III в малых, средних и высоких дозах, составляет 21,00%, 44,84% и 61,30% соответственно.
Объем опухоли и ее относительный объем в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, значительно меньше, чем в эталонной группе (Р<0,05).
Относительная скорость пролиферации в группах, получавших изовалерил-спирамицин I в малых, средних и высоких дозах, составляет 77,78%, 58,92% и 33,95% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 81,39%, 64,89% и 46,70% соответственно.
Относительная скорость пролиферации опухоли в группах, получавших изовалерил-спирамицин II в малых, средних и высоких дозах, составляет 80,34%, 62,35% и 39,39% соответственно.
В сравнении с эталонной группой значительные изменения массы тела мышей в группах, получавших изовалерил-спирамицин I, II и III в малых, средних и высоких дозах, отсутствуют.
Figure 00000074
Figure 00000075
Figure 00000076
21. Ингибирование пересаженных опухолей мышиных клеток Н22 рака печени и карциномы легкого Льюиса
Установление солидной опухоли на мышиной модели:
Криоконсервированные в жидком азоте штаммы клеток Н22 были реанимированы в куныминских мышах. Спустя 3 поколения асциты куныминских мышей были отобраны и помещены в центрифужную пробирку объемом 50 мл, в которую были добавлены 10 мл раствора хлорида натрия 0,9%, после чего в течение 5 мин выполнялось центрифугирование со скоростью 1 000 об/мин при комнатной температуре с последующим удалением супернатанта. Затем в пробирку был добавлен раствор хлорида натрия 0,9% для качественной продувки и смешивания, а смесь была разбавлена до концентрации 5×106 живых клеток/мл раствором хлорида натрия после подсчета. Пробирка хранилась в ледяной воде, и для дезинфекции кожи в подмышечных впадинах мышей был использован этиловый спирт 75%. Вскоре каждой куныминской мыши в подмышечную впадину правой передней конечности было подкожно введено 0,2 мл клеток.
Клетки карциномы легкого Льюиса были культивированы в культурной среде RPMI 1640, содержащей 10% эмбриональной телячьей сыворотки, при температуре 37°С в инкубаторе с 5% СО2. Клетки в логарифмической фазе роста были обработаны трипсином 0,25%, после чего они были собраны для центрифугирования с целью удаления полученного супернатанта, а затем дважды промыты стерильным раствором хлорида натрия. После этого клетки были суспендированы в растворе хлорида натрия для проведения анализа окрашивания трипановым синим, который показал, что жизнеспособность клеток превысила 95%, после чего был произведен подсчет клеток. Концентрация клеток карциномы легкого Льюиса была доведена до 1×107/мл, и они были сохранены в ледяной воде. Для дезинфекции кожи в подмышечных впадинах мышей использовался этиловый спирт 75%, и вскоре каждой мыши C57BL/6 в правую подмышечную впадину было подкожно введено 0,2 мл клеток.
Метод группирования мышей и введения
В модели с мышами с клетками рака печени Н22 мыши, которым была введена опухоль, на следующий день после введения были в произвольном порядке разделены на группы по 10 особей в каждой. Группы состояли из: эталонной контрольной группы, положительной контрольной циклофосфамидной группы с введением препарата (СТХ, 26 мг/кг), изовалерил-спирамициновых групп I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг; изовалерил-спирамициновых групп II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг; изовалерил-спирамициновых групп III с дозами в объме 13, 26 и 52 мг/кг. В каждой группе в течение 7 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг.
В модели с мышами с клетками карциномы легкого Льюиса мыши, которым была введена опухоль, на следующий день после введения были в произвольном порядке разделены на группы по 10 особей в каждой. Группы состояли из: эталонной контрольной группы, положительной контрольной циклофосфамидной группы с введением препарата (СТХ, 30 мг/кг), изовалерил-спирамициновых групп I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг; изовалерил-спирамициновых групп II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг; изовалерил-спирамициновых групп III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг. В каждой группе в течение 15 дней осуществлялось внутрижелудочное введение дозы 20 мл/кг.
Расчет степени ингибирования опухоли:
Мыши с опухолями были взвешены и умерщвлены на следующий день после последнего приема препарата. Подкожные опухоли были препарированы и взвешены. В каждой группе была вычислена средняя масса опухоли, а также степень ее ингибирования.
Степень ингибирования опухоли = (1-Т/С) × 100%
Т - средняя масса опухоли группы, получавшей препарат; С - средняя масса опухоли контрольной группы без введения препарата.
Результаты:
1. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в пересаженных мышиных опухолевых клетках рака печени Н22
По результатам в таблице 44 видно, что в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата степень ингибирования опухолей клеток рака печени Н22 куныминских мышей составляет 73,03%. В изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг наблюдалось значительное ингибирование роста мышиных клеток рака печени Н22.
В положительной циклофосфамидной группе с введением препарата наблюдается незначительное увеличение массы в сравнении с нормальной контрольной группой. Масса мышей в каждой изовалерил-спирамициновой группе I, II и III возросла по сравнению с моментом до введения препарата, но в сравнении с эталонной контрольной группой эта разница незначительна.
Figure 00000077
Figure 00000078
Figure 00000079
2. Ингибирование изовалерил-спирамицином I, II и III в пересаженных мышиных опухолевых клетках карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 46 видно, что в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата степень ингибирования опухолей клеток карциномы легкого Льюиса куныминских мышей составляет 76,43%. В изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг наблюдалось значительное ингибирование роста мышиных клеток карциномы легкого Льюиса. Масса мышей в каждой изовалерил-спирамициновой группе I, II и III возросла по сравнению с моментом до введения препарата, но в сравнении с эталонной контрольной группой эта разница незначительна.
Figure 00000080
Figure 00000081
Figure 00000082
22. Воздействие изовалерил-спирамицина I, II и III на иммунную функцию мышей с опухолями
Метод
1. Воздействие на тимический и селезеночный индексы мышей с опухолями
После умерщвления мышей с опухолями проводится взвешивание селезенки и тимуса и вычисление селезеночного и тимического индексов.
2. Воздействие на пролиферативную активность лимфоцитов и активность клеток-естественных киллеров (NK-клеток) мышей с опухолями
2.1 Подготовка лимфоцитов селезенки
В чашку была помещена бессывороточная среда RPMI 1640, после чего чашка была помещена на лед. Селезенка была стерильным способом извлечена и помещена на стерильное предметное стекло для приготовления суспензии отдельных клеток. Суспензия отдельных клеток была отфильтрована через двухслойную фильтровальную сетку, дважды промыта бессывороточной средой RPMI 1640, а затем подвергнута центрифугированию в течение 5 мин со скоростью 1 500 об/мин для удаления полученного супернатанта. В обработанную суспензию были добавлены 2 мл лизата эритроцитов, смесь была отстояна в течение 2 мин, после чего были добавлены 8 мл среды RPMI 1640, проведено центрифугирование в течение 5 мин со скоростью 1 500 об/мин для удаления полученного супернатанта, а затем двукратное промывание средой RPMI 1640. Для подсчета количества живых клеток был проведен анализ окрашивания трипановым синим, и жизнеспособность клеток превысила 95%. Посредством использования среды RPMI 1640 с содержанием 10% эмбриональной телячьей сыворотки была приготовлена суспензия отдельных клеток.
2.2 Анализ пролиферативной активности лимфоцитов
Была взята суспензия клеток селезенки, а плотность клеток была доведена до 1×107/мл. Для каждой мыши были предоставлены: А. контрольная лунка: были добавлены 100 мкл среды RPMI 1640; В. лунка стимуляции с конкавалином А (КонА): были добавлены 100 мкл (10 мг/л) раствора конкавалинаА (КонА); и С.лунка стимуляции с бактериальным эндотоксином (ЛПС): были добавлены 100 мкл (20 мг/л) раствора бактериального эндотоксина (ЛПС). Вышеприведенные клетки были помещены на 96-луночный планшет, после чего в каждую из лунок были добавлены 100 мкл суспензии клеток селезенки. После помещения культурального планшета в условия насыщенной влажности с объемной долей СО2 5% при температуре 37°С с целью инкубации в течение 72 ч в каждую лунку были добавлены 10 мкл раствора МТТ (5 г/л), а инкубация была продолжена еще на 4 часа в тех же условиях, после чего культивирование было остановлено. Были добавлены 100 мкл тройного раствора (10 г додедилсульфата натрия, 0,1 мл HCl 10 моль, 5 мл изобутанола, разбавленных до 100 мл дистиллированной водой), и планшет подвергался встряхиванию в течение 10 мин для полного растворения кристаллов. При длине волны 570 нм была измерена оптическая плотность (ОП) каждой лунки и была вычислена скорость пролиферации лимфоцитов. Скорость пролиферации лимфоцитов (%)=[(Т-С)/С]×100%, где Т - оптическая плотность лунки стимуляции, а С - оптическая плотность контрольной лунки.
2.3 Анализ активности клеток-естественных киллеров (NK-клеток) Была взята суспензия клеток селезенки, а плотность клеток была доведена до 1×107/мл (эффекторные клетки). Была приготовлена суспензия клеток K562 с плотностью 1×105/мл (клетки-мишени). Для каждой мыши были предоставлены: А. эффекторные клетки: лунка клеток-мишеней (количественное соотношение 20:1), в которую были добавлены 20 мкл суспензии клеток селезенки и 100 мкл суспензии клеток K562; В. контрольная лунка эффекторных клеток, в которую были добавлены 100 мкл суспензии клеток селезенки и 100 мкл среды RPMI 1640; и С. контрольная лунка клеток-мишеней, в которую были добавлены 100 мкл суспензии клеток K562 и 100 мкл среды RPMI 1640. Вышеприведенные клетки были помещены на 96-луночный планшет. После помещения 96-луночного планшета в условия насыщенной влажности с объемной долей СО2 5% при температуре 37°С с целью инкубации в течение 22 ч в каждую лунку были добавлены 10 мкл раствора МТТ (5 г/л), а инкубация была продолжена еще на 4 часа в тех же условиях, после чего культивирование было остановлено. Были добавлены 100 мкл тройного раствора (10 г додедилсульфата натрия, 0,1 мл HCl 10 моль, 5 мл изобутанола, разбавленных 100 мл дистиллированной воды), и планшет подвергался встряхиванию в течение 10 мин для полного растворения кристаллов, а затем при длине волны 490 нм была измерена оптическая плотность (ОП) каждой лунки и вычислена активность NK-клеток. Активность NK-клеток (%) = [TO-(S-E)]/TO×100%, где ТО - оптическая плотность контрольной лунки клеток-мишеней, S - оптическая плотность контрольной лунки эффекторных клеток, а Е - оптическая плотность эффекторной клетки.
Результаты:
1. Воздействие на тимический и селезеночный индексы мышей с опухолями клеток рака печени Н22
По результатам в таблице 48 видно, что тимический и селезеночный индексы в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,01). В изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг значительное изменение в сравнении с контрольной группой не наблюдалось.
Figure 00000083
Figure 00000084
2. Воздействие на тимический и селезеночный индексы мышей с опухолями клеток карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 49 видно, что селезеночный индекс в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,01). В изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг значительное различие в сравнении с контрольной группой не наблюдалось.
Figure 00000085
Figure 00000086
3. Воздействие на активность NK-клеток мышей с опухолями клеток карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 50 видно, что активность NK-клеток в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,05). Активность NK-клеток в изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг значительно возрастает в сравнении с контрольной группой (Р<0,01).
Figure 00000087
Figure 00000088
4. Воздействие на пролиферативную активность лимфоцитов мышей с опухолями клеток карциномы легкого Льюиса
По результатам в таблице 51 видно, что активность лимфоцитов в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ингибирована (Р<0,05). Активность лимфоцитов в изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг значительно возрастает в сравнении с контрольной группой (Р<0,05, Р<0,01).
Figure 00000089
Figure 00000090
5. Воздействие на селезеночный индекс мышей с опухолями клеток рака легких А549
По результатам в таблице 52 видно, что селезеночный индекс в положительной контрольной циклофосфамидной группе с введением препарата значительно ниже, чем в контрольной группе (Р<0,01). Селезеночные индексы мышей в изовалерил-спирамициновых группах I с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг, изовалерил-спирамициновых группах II с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг и изовалерил-спирамициновых группах III с дозами в объеме 13, 26 и 52 мг/кг в сравнении с таковыми в контрольной группе значительных различий не имеют.
Figure 00000091
Figure 00000092
Вышеприведенное представляет собой исключительно предпочтительные варианты осуществления настоящего изобретения, и они не предназначены для ограничения объема последнего в какой-либо форме. Несмотря на то, что настоящее изобретение было раскрыто в вышеприведенных предпочтительных вариантах осуществления, оно не ограничивается последними. Любой технический специалист, ознакомившийся с настоящим изобретением, может вносить незначительные изменения или модификации в эквивалентные варианты осуществления с эквивалентными изменениями, используя техническое содержание вышеприведенных вариантов без отступления от объема технического решения по настоящему изобретению. В случае отсутствия отклонений от технического содержания относительно технического решения по настоящему изобретению любые незначительные, эквивалентные изменения и модификации, вносимые в вышеприведенные варианты осуществления согласно технической сущности настоящего изобретения, по-прежнему остаются в рамках объема настоящего изобретения.

Claims (7)

1. Применение изовалерил-спирамицина I или III или фармацевтически приемлемые соли изовалерил-спирамицина I или III при изготовлении препарата для лечения опухоли, при этом опухоль включает в себя рак молочной железы, рак печени, рак легких, рак почек, опухоль головного мозга, рак шейки матки, рак предстательной железы, лимфому, рак поджелудочной железы, рак пищевода, рак желудка, рак толстой кишки, рак щитовидной железы, рак мочевого пузыря, лейкемию или рак кожи, отличающееся тем, что доза изовалерил-спирамицина I или III в препарате находится в диапазоне от 5 до 1500 мг.
2. Применение по п. 1, где опухоль головного мозга представлен глиомой, а рак желудка – аденокарциномой желудка.
3. Применение по любому из пп. 1 или 2, отличающееся тем, что препарат представлен в различных лекарственных формах, включающих изовалерил-спирамицин I или III и его фармацевтически приемлемые вспомогательные лекарственные средства, или препарат представлен в различных лекарственных формах, включающих фармацевтически приемлемые соли изовалерил-спирамицина I или III и фармацевтически приемлемые вспомогательные лекарственные средства.
4. Применение по любому из пп. 1 или 2, отличающееся тем, что препарат представлен в различных лекарственных формах, включающих изовалерил-спирамицин I или III и его фармацевтически приемлемые вспомогательные лекарственные средства, или препарат представлен в различных лекарственных формах, включающих фармацевтически приемлемые соли изовалерил-спирамицина I или III, а также противоопухолевые препараты и фармацевтически приемлемые вспомогательные лекарственные средства.
5. Применение по любому из пп. 1 или 2, отличающееся тем, что препарат представляет собой сочетание первого и второго веществ, причем первое вещество содержит изовалерил- спирамицин I или III и его фармацевтически приемлемые соли, а второе вещество – противоопухолевый препарат.
6. Применение по любому из пп. 1 или 2, отличающееся тем, что доза изовалерил-спирамицина I или III находится в диапазоне от 50 до 1000 мг.
7. Применение по пп. 1, 2, отличающееся тем, что доза изовалерил-спирамицина I или III находится в диапазоне от 100 до 400 мг.
RU2020102713A 2017-07-04 2018-07-04 Применение изовалерил-спирамицина i, ii и/или iii при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли и получения лекарственного препарата RU2766176C2 (ru)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710537958 2017-07-04
CN201710537958.8 2017-07-04
CN201711450300.X 2017-12-27
CN201711497546.2 2017-12-27
CN201711497546 2017-12-27
CN201711450396.X 2017-12-27
CN201711450300 2017-12-27
CN201711450396 2017-12-27
PCT/CN2018/094504 WO2019007368A1 (zh) 2017-07-04 2018-07-04 异戊酰螺旋霉素i、ii和/或iii在制备治疗和/或预防肿瘤药物方面的应用和药物

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2020102713A RU2020102713A (ru) 2021-08-04
RU2020102713A3 RU2020102713A3 (ru) 2021-08-04
RU2766176C2 true RU2766176C2 (ru) 2022-02-08

Family

ID=64950608

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020102713A RU2766176C2 (ru) 2017-07-04 2018-07-04 Применение изовалерил-спирамицина i, ii и/или iii при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли и получения лекарственного препарата

Country Status (12)

Country Link
US (1) US20200163984A1 (ru)
EP (1) EP3639829B1 (ru)
JP (1) JP7060631B2 (ru)
KR (1) KR102375444B1 (ru)
CN (1) CN110869027B (ru)
AU (1) AU2018298187A1 (ru)
CA (1) CA3068921A1 (ru)
DK (1) DK3639829T3 (ru)
ES (1) ES2912734T3 (ru)
MX (1) MX2019015676A (ru)
RU (1) RU2766176C2 (ru)
WO (1) WO2019007368A1 (ru)

Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20200405739A1 (en) * 2018-01-19 2020-12-31 Shenyang Fuyang Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Mtor inhibitor, pharmaceutical composition and use thereof
EP3741373B1 (en) 2018-01-19 2022-10-12 Shenyang Fuyang Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Use of carrimycin or active ingredient thereof
CN111939168B (zh) * 2019-05-16 2023-02-03 沈阳福洋医药科技有限公司 一种用于预防、缓解和/或治疗纤维化的药物、组合产品及其应用
US11351185B2 (en) 2020-03-11 2022-06-07 Asclea Corporation Use of isovalerylspiramycins as anti-cancer agents to inhibit metastasis
CN113577086B (zh) * 2020-04-30 2023-05-02 沈阳福洋医药科技有限公司 异戊酰螺旋霉素类化合物或其组合物在制备治疗免疫失调的药物中的应用
CN113372397A (zh) * 2021-06-22 2021-09-10 天方药业有限公司 一种己二酸螺旋霉素的制备方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101568343A (zh) * 2006-06-12 2009-10-28 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 用于治疗癌症的方法
CN102229634A (zh) * 2010-05-25 2011-11-02 沈阳同联集团有限公司 左旋异戊酰螺旋霉素i、其制剂、制备方法及应用
RU2012156420A (ru) * 2010-05-25 2014-06-27 Шенянг Тонглиан Груп Ко., Лтд Левовращающие изовалерил-спирамицины 1, ii, iii, их препараты, способ приготовления и употребление

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB1540397A (en) * 1976-12-08 1979-02-14 May & Baker Ltd Spiramycin esters
CA2127578A1 (en) * 1993-07-08 1995-01-09 Keiichi Ajito 16-membered macrolide derivatives and process for producing the same
US7087237B2 (en) 2003-09-19 2006-08-08 Advanced Ocular Systems Limited Ocular solutions
CN101362784A (zh) 2008-10-06 2009-02-11 山东大学 埃博霉素苷类化合物和以其为活性成分的组合物及其应用
CN101785778A (zh) * 2010-03-09 2010-07-28 沈阳同联集团有限公司 异戊酰螺旋霉素i的分离制备及其应用
CN101785779B (zh) 2010-03-09 2014-03-05 沈阳同联集团有限公司 异戊酰螺旋霉素ii的分离制备
CN101773510B (zh) 2010-03-09 2013-06-05 沈阳同联集团有限公司 异戊酰螺旋霉素iii的分离制备
PL2578596T3 (pl) * 2010-05-25 2017-09-29 Shenyang Fuyang Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Lewokarymycyna, kompozycje farmaceutyczne, sposoby otrzymywania i jej zastosowania
US11077126B2 (en) * 2017-04-06 2021-08-03 Shenyang Fuyang Pharmaceutical Technology Co., Ltd. Use of carrimycin and pharmaceutically acceptable salts of carrimycin in manufacturing medicament for treating and/or preventing tumor

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101568343A (zh) * 2006-06-12 2009-10-28 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 用于治疗癌症的方法
CN102229634A (zh) * 2010-05-25 2011-11-02 沈阳同联集团有限公司 左旋异戊酰螺旋霉素i、其制剂、制备方法及应用
RU2012156420A (ru) * 2010-05-25 2014-06-27 Шенянг Тонглиан Груп Ко., Лтд Левовращающие изовалерил-спирамицины 1, ii, iii, их препараты, способ приготовления и употребление

Also Published As

Publication number Publication date
DK3639829T3 (da) 2022-05-16
CA3068921A1 (en) 2019-01-10
CN110869027A (zh) 2020-03-06
KR102375444B1 (ko) 2022-03-17
EP3639829B1 (en) 2022-02-09
US20200163984A1 (en) 2020-05-28
RU2020102713A (ru) 2021-08-04
JP7060631B2 (ja) 2022-04-26
EP3639829A1 (en) 2020-04-22
JP2020528047A (ja) 2020-09-17
MX2019015676A (es) 2022-03-17
EP3639829A4 (en) 2020-06-24
ES2912734T3 (es) 2022-05-27
RU2020102713A3 (ru) 2021-08-04
AU2018298187A1 (en) 2020-02-06
KR20200024280A (ko) 2020-03-06
WO2019007368A1 (zh) 2019-01-10
CN110869027B (zh) 2023-09-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2766176C2 (ru) Применение изовалерил-спирамицина i, ii и/или iii при изготовлении препарата для лечения и/или профилактики опухоли и получения лекарственного препарата
RU2746047C1 (ru) Применение карримицина и его фармацевтически приемлемой соли для производства медикаментов для лечения и/или профилактики опухоли
CN102114010B (zh) 一种治疗肠胃疾病的药物组合物及其制备方法和用途
RU2771046C2 (ru) Применение карримицина или его активных ингредиентов
CN107362158B (zh) 马钱苷元在制备抗肿瘤药物中的用途
KR20200144568A (ko) 통증 및/또는 발열을 예방 및/또는 치료하는 의약품, 조합 산물 및 그 응용
CN110423254A (zh) 一种具有不对称单取代香豆素四价铂结构化合物、制备方法及其在制备抗肿瘤药物中的应用
CN109336891B (zh) 5-（呋喃-2’-羰基）-2,3-二氢-1h-吡咯嗪-7-羧酸及其衍生物
CN111995629B (zh) 大根香叶衍生物及其药物组合物和其在医药中的用途
CN113234064B (zh) 一种替加氟衍生物及其制备方法与应用
CN112972455B (zh) 一种化合物在制备抗肿瘤药物的应用
CN110384710B (zh) 一种用于预防和/或治疗疼痛的药物、组合产品及其应用
CN100427087C (zh) 含氧化槐定碱或氧化槐定碱盐的药物组合物、制备方法及用途
Pooja et al. Formulation and evaluation of sustained release tablet of cefixime using mucilage of Mimosa pudica seed
JPH02200631A (ja) 制癌剤