CN101568343A - 用于治疗癌症的方法 - Google Patents

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Abstract

大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的药剂的用途，该大环内酯抗菌素为以下的一种或多种：泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。也提供了用于治疗或预防上文提到的癌症的药物组合物及方法及用于在哺乳动物中治疗或预防表达突变APC基因的癌症的方法。

Description

用于治疗癌症的方法
发明领域
本发明涉及癌症的治疗及更具体地涉及用于治疗结肠直肠癌、韧带样纤维瘤(Desmoid tumor)、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的方法。
现有技术
以下为现有技术的列表，认为其对于描述本发明领域的技术状态是相关的。将通过在括号中指出它们在下文列表中的编号，引证此处这些文献。
1.Bedwell，D.M.等人(1997).Suppression of a CFTR premature stopmutation in a bronchial epithelial cellline(支气管上皮细胞系中CFTR提前终止突变的抑制).Nat.Med.3：1280-1284。
2.Wilschanski，M.，Yahav，Y.，Yaacov，Y.，Blau，H.，Bentur，L.，Rivlin，J.，Aviram，M.，Bdolah-Abram，T.，Bebok，Z.，Shushi，L.，Kerem，B.和Kerem，E.(2003).  Gentamicin-induced correction of CFTR function in patients withcystic fibrosis and CFTR stop mutations (在患有囊性纤维化和CFTR终止突变的患者中，庆大霉素诱发的CFTR功能修正).N.Engl.J.Med.15：1433-1441。
3.Barton-Davis，E.R.，Cordier，L.，Shoturma，D.J.，Leland，S.E.和Sweeney，H.L.(1999).Aminoglycoside antibiotics restore dystrophin functionto skeletal muscles of mdx mice (氨基糖苷类抗菌素恢复mdx小鼠的骨骼肌抗肌萎缩蛋白功能).J.Clin.Invest.104：375-38。
4.Politano，L.，Nigro，G.，Nigro，V.，Piluso，G.，Papparella，S.，Paciello，O.和Comi，L.I.(2003).Gentamicin administration in Duchenne patients withpremature stop codon：Preliminary results(在具有提前终止密码子的Duchenne型患者中的庆大霉素施用：初步结果).Acta Myol.1：15-21。
5.Kerem，E.(2004).Pharmacologic therapy for stop mutations howmuch CFTR activity is enough？(对于终止突变的药理疗法：多少CFTR活性才足够？).Curr.Opin.Pulm.Med.6：547-52。
6.Laurent-Puig，P.，Beroud，C.和Soussi，T(1998).APC gene：database ofgermline and somatic mutations in human tumors and celllines(APC基因：在人类肿瘤和细胞系中的生殖细胞突变和体细胞突变数据库).Nucleic AcidsResearch，26：269-270。
7.Thompson，J.，Pratt，c.a.和Dahlberg，A.E.(2004).Effects of a numberof classes of 50S inhibitors on stop codon readthrough during protein synthesis(在蛋白合成期间，许多类别的50S抑制剂对终止密码子通读的作用).Antimicrob.Agents Chemother 12：4889-4891。
8.Atkinson，J和Martin，R.(1994).Mutations to nonsense codons inhuman genetic disease：implications for gene therapy by nonsense suppressortRNAs(人类遗传病中的无义密码子的突变：暗示通过无义抑制剂tRNA应用到基因疗法).Nucleic Acids Res.8：1327-1334。
9.美国专利第5,324,720号
10.美国专利申请公布第2005/0171032号
11.Alman，B.A.，Li，C.Pajerski，M.E.，Diaz-Cano，S.和Wolfe，H.J.(1997).Increased beta-catenin protein and somatic APC mutations in sporadicaggressive fibromatoses(desmoid tumors)(在散发性侵袭性纤维瘤病(韧带样纤维瘤)中增加的β-链蛋白和体细胞APC突变).Am.J.Pathol.151：329-334。
12.Bohm，M.，Kirch，H.，Otto，T.，Rubben，H.和Wieland，I.(1997).Deletion analysis at the DEL-27，APC and MTS1 loci in bladder cancer：LOHat the DEL-27locus on 5p 13-12is a prognostic marker of tumor progression(在膀胱癌中DEL-27、APC和MTS1基因座的缺失分析：位于5p13-12的DEL-27基因座的LOH是肿瘤进展的预后标记物).Int.J.Cancer 74：291-295。
13.Oh，S.T.，Yoo，N.J.和Lee，J.Y.(1999).Frequent somatic mutations fothe beta-catenin gene in intestinal-type gastric cancer(肠型胃癌中的β-链蛋白基因的频繁体细胞突变).Cancer Res.59：4257-4260。
14.Wills，J.C.等人(2002).“Hot spots”can burn you(“热点”会灼伤你)，Am.J.Gastroenterology 97(3)：757-758。
15.Fearnhead等人(2001).The ABC of APC(APC的ABC).Hum.Mol.Genet.10：721-723。
16.Crabtree等人(2003).Oncogene 22：4257-4265。
17.Albuquerque等人(2002).Hum.Mol.Genet.11：1549-1560。
发明背景
结肠直肠癌(CRC)是大肠癌症且在男性和女性中为第三大常见癌症，占所有癌症的13％。约20％患者在诊断时患有转移性疾病，且所有结肠直肠癌患者的50％将发展转移灶并最终死于该疾病。仅在美国，约131,000人将被诊断为患有结肠直肠癌且每年将死亡56,000人。在普通人群中的终生CRC风险为5％，但此数字随年龄急剧上升：到70岁的年龄，约一半西方人群将发展腺瘤。所有CRC病例中有近85％在起源上为偶发性(“体细胞CRC”)而其余作为遗传性基因突变(“遗传性CRC”)的结果发生。
结肠直肠癌源自腺瘤，其是在结肠中发育异常但非恶性的前驱病变。向恶瘤的进展发生于多个体细胞突变的积累过程中，最终导致恶性转化并形成侵害性癌症。在向CRC进展中突变的最关键基因中的一个为腺瘤性结肠息肉病(APC)肿瘤抑制物。因为APC突变可在腺瘤-恶瘤顺序中非常早地被检测，已经建议将APC蛋白用作结肠直肠致癌作用的守门人，这意味着APC功能缺失与未来向恶性肿瘤进展非常紧密地相关。所有偶发性和遗传性结肠直肠肿瘤中有约85％显示了APC功能缺失。除了在遗传性CRC和体细胞CRC中的作用，APC中的突变也已经在其它癌症类型如韧带样纤维瘤(侵袭性纤维瘤病(fibromatose))(11)、膀胱癌(12)、胃癌(13)和乳腺癌(14)中被阐明。
APC是具有许多良好表征的功能区并与许多其它蛋白相互作用的大(312kDa)蛋白。然而，它在肿瘤发生中的关键作用似乎在于控制β-链蛋白(β-catenin)的细胞水平，因此其作为Wnt信号通路的负调节物起作用。当APC突变时，Wnt信号通路的效应蛋白β-链蛋白积累并转移到细胞核中。到达那里后，它结合到Tcf/LEF转录因子且引发范围广泛的基因的转录。β-链蛋白的下游转录激活靶包括许多在结肠直肠恶瘤的发育和进展中涉及的基因，包括细胞周期蛋白D1和致癌基因c-myc。除了它在Wnt信号通路中的作用，APC功能缺失导致在缺乏APC的癌细胞中的细胞-细胞粘附的破坏。
在CRC中的几乎所有(95％)APC突变为产生具有异常功能的截短的蛋白产物的无义突变或移码突变。APC突变位点通常不随机；存在对于APC-截短突变的良好表征的热点。
与在CRC中相同，数目庞大的其它人类遗传性疾病产生自导致由突变基因编码的蛋白合成的提前(premature)终止的突变，且治疗这些疾病的一种方式是补充具有野生型拷贝的突变基因。
若干年来，已知氨基糖苷类抗菌素可通过允许氨基酸结合到终止密码子的位置，从而允许翻译继续直到转录的正常结束而抑制疾病-相关的提前终止突变。近期研究已经显示氨基糖苷类可在哺乳动物转录子中，在体外及体内两种情况下，将提前终止突变抑制至恢复生理上相关量的功能性蛋白的水平(1-5)。先前以常染色体隐性疾病囊性纤维化(CF)及在具有无义突变的Duchenne型肌肉萎缩症(DMD)患者中阐述了此方法的使用。在CF和DMD两种患者中，所有病例中仅5％到10％归因于编码序列中的无义突变。相比之下，在患有结肠直肠肿瘤的患者中，在所有病例的约85％中，发现APC基因中的提前终止密码子(6)。然而，目的为将全长APC蛋白恢复到缺少功能性APC蛋白的细胞中的研究迄今尚未被执行。
氨基糖苷类如庆大霉素具有严重的剂量-限制性毒性且需要静脉内施用，因此使它们成为对癌症的无吸引力的长期治疗。
抑制终止密码子突变的方法可有利于患有产生自一个重要基因中的终止密码子突变的疾病的其它患者(例如，在患有APTR缺陷、抗凝血酶(antithromnin)III、acid spingumyelias和Hailey-Hailey疾病的患者中，在(8)中综述)。
最近，已经显示大环内酯家族抗菌素可靶向核糖体50S亚基且诱导终止密码子在原核系统通读(7)。美国专利第5,324,720号和美国专利申请公布第2005/0171032号涉及使用某些大环内酯抗菌素治疗癌症的方法(9，10)。
发明概述
本发明涉及大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的药剂的用途，该大环内酯抗菌素为以下的一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；和螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
另外，本发明涉及用于治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的药物组合物，该药物组合物包括作为活性成分的治疗有效量的大环内酯抗菌素及药学上可接受的载体，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
本发明进一步涉及大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防表达突变APC(腺瘤性结肠息肉病)基因的癌症的药剂的用途，该大环内酯抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
另外，本发明涉及在哺乳动物中治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；
从而治疗或预防所述癌症。
本发明进一步涉及用于在哺乳动物中治疗或预防表达突变APC基因的癌症的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
另外，本发明涉及通过抑制APC基因中的提前终止突变而在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；和螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；
从而抑制APC基因中的提前终止突变。
附图简述
图1：显示了APC基因中体细胞和生殖细胞突变谱。APC基因中的体细胞(n＝829)和生殖细胞(n＝915)突变根据密码子数目的分布。数据产生自：Thierry Soussi(1998)，APC gene：database of germline and somatic mutationsin human tumors and cell lines(APC基因：在人类肿瘤和细胞系中的生殖细胞和体细胞突变数据库).Nucleic Acids Research 26(1)：269-270。
图2：显示了泰乐菌素-诱导的突变的APC终止密码子通读。(A)构建成可以通读特异性APC终止突变的筛选化合物的报道质粒图解。(B-D)使用此构建物获得的结果显示分别在APC热点1061、1554和1450处与红霉素、螺旋霉素和庆大霉素相比，泰乐菌素诱导更高水平的通读。
图3：显示了泰乐菌素下调β-链蛋白/Tcf信号转导。
用pTOPFLASH转染对照或泰乐菌素-治疗的CX-1细胞。转染后48h，收集细胞并测量荧光素酶水平。
图4：显示了泰乐菌素治疗抑制细胞肿瘤发生。五周大的裸鼠被注射HT-29CRC细胞。注射后2天，0.4μg/ml泰乐菌素被添加到治疗的小鼠组的饮用水中。每2天替换水。(A-D)注射后10天，泰乐菌素-治疗的小鼠(B，D)的肿瘤尺寸与对照组(A，C)的肿瘤尺寸相比更小。(E)在第16天，处死小鼠。切除肿瘤并称重。对于对照小鼠和泰乐菌素-治疗的小鼠，按克计的平均肿瘤质量被显示。
图5：显示了泰乐菌素治疗改变了肿瘤的组织学特性。从对照和泰乐菌素-治疗的小鼠中除去肿瘤。固定肿瘤并用苏木精和曙红(H&E)染色剂染色。(A-F)染色结果揭示泰乐菌素治疗导致肿瘤坏死而不影响血液供应(血管被箭头表示)。显示了来自三种不同的泰乐菌素-治疗的小鼠(D-F)和三种不同的对照小鼠(A-C)的肿瘤的截面。
图6：显示了泰乐菌素治疗导致全长APC表达。从对照(“NT”)小鼠和泰乐菌素-治疗的(0.8mg/ml、0.4mg/ml)小鼠中除去肿瘤。裂解肿瘤并用抗-APC抗体探查物质。HCT116细胞携带起尺寸标注物作用的野生型APC蛋白。泰乐菌素治疗导致全长APC表达，且较高量的泰乐菌素相应地增加全长蛋白的表达。
发明详述
本发明基于泰乐菌素、红霉素和螺旋霉素(抗菌素大环内酯家族的成员)可诱导APC基因中的提前终止密码子突变通读的发现。
目前本发明人已经确定，大环内酯抗菌素可具有和可以导致对于APC基因中的提前终止密码子的致癌热点通读的化合物一样的临床用途。
本发明人调查了大环内酯是否可以通读在APC中的致癌提前终止密码子突变。本文提供了证据，说明抗菌素大环内酯家族的一个成员泰乐菌素及其他大环内酯化合物(如红霉素、螺旋霉素)可诱导APC基因中提前终止密码子的通读。本发现在最大化对APC的终止密码子抑制物的作用同时最小化副作用中可具有临床应用性。
临床上有用的抑制APC基因中的提前终止突变的方法的鉴别可对患有CRC的患者和其它患有表达突变APC的不同类型的癌症患者有利。例如，APC突变已经在其它癌症类型如韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌中被发现。
因此，根据本发明一方面，提供了大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的药剂的用途，所述大环内酯抗菌素为以下的一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
根据本发明另一方面，提供了用于治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的药物组合物，该组合物包括作为活性成分的治疗有效量的大环内酯抗菌素及药学上可接受的载体，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
根据本发明除此以外的另一方面，提供了大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防表达突变APC基因的癌症的药剂的用途，该大环内酯抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
根据优选实施方式，癌症选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌。
优选地，大环内酯抗菌素为泰乐菌素或酒石酸泰乐菌素。
根据本发明其它方面，提供了在哺乳动物中治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；
从而治疗或预防所述癌症。
根据本发明除此以外的其它方面，提供了在哺乳动物中治疗或预防表达突变APC基因的癌症的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
根据本发明进一步方面，提供了通过抑制APC基因中的提前终止突变而在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，该方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；和螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；
从而抑制APC基因中的提前终止突变。
根据优选实施方式，癌症选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌。
优选地，大环内酯抗菌素为泰乐菌素或酒石酸泰乐菌素。
大环内酯抗菌素可为单一的活性剂(即单一大环内酯抗菌素)或两种或(ore)更多种活性剂的组合。
本文使用的术语“药剂”指药物组合物。特别是，它指包括在任何适合的药学上可接受的载体(如赋形剂或稀释剂)中的至少一种在本发明中描述的大环内酯抗菌素的药物组合物，而且也指不同施用途径要求的不同制剂。例如，药剂可被配制用于口服施用，或可被配制用于不经肠或直肠施用。
本文公开的药物组合物的活性成分可包括至少一种大环内酯抗菌素，即单一活性剂(大环内酯抗菌素)或两种或更多种活性剂。
本文使用的术语“哺乳动物”指哺乳动物纲任何成员，包括人类。优选地，本文的哺乳动物为人类。
本文使用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”疾病或症状或疾病特征(如结肠直肠癌、结肠直肠腺瘤和腺癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌、乳腺癌、与任何一种类型的上文说明的癌症相关的腺瘤和腺癌)可包括以下的任何一种或多种：(1)预防疾病，即导致临床症状或疾病的征兆不在可能暴露于或预暴露于疾病的哺乳动物(如，在体细胞或生殖细胞中表达突变APC基因或显示了疾病的家族史的哺乳动物)中发展而且除此以外不经历或展现该疾病症状或征兆；(2)抑制疾病，即，停滞或降低疾病或它的临床症状或征兆的发展速率；(3)缓解疾病，即，导致疾病或它的临床症状或征兆的部分或完全消退；和(4)上文的涵盖了不同临床症状或征兆的(1)、(2)或(3)的组合。本文使用的术语“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”也包括根除、除去、改变或控制原发性、局部或转移的癌症组织；及最小化或延迟癌症(如结肠直肠癌)的扩散(转移)。
本文使用的术语“预防(preventing)”或“预防(prevention)”包括预防患者中的癌症的复发、扩散或发作。
术语“预防(preventing)”或“预防(prevention)”也包括预防与任何上文说明的类型的癌症相关的腺瘤和腺癌。
应理解，根据本发明治疗或预防癌症可涉及抑制提前终止突变的机制。提前终止密码子产生截短的(突变的)蛋白。
当用在提及提前终止突变或提前终止密码子时，本文使用的术语“抑制(suppression)”或“抑制(suppressing)”指存在于突变的等位基因中但不存在于野生型基因(如APC基因(SEQ.ID.NO：2))中的终止密码子的通读过程。
当提及翻译过程时，本文使用的术语“通读”指将终止密码子(“无义”密码子)当作“有义”密码子(即编码氨基酸的密码子)解读或绕过所述终止密码子。
当提及终止密码子时，本文使用的术语“提前”指作为DNA(mRNA)序列中的体细胞、生殖细胞或偶发性突变(如，移码或无义突变)的结果而产生，但不存在于野生型DNA(mRNA)序列中的终止密码子。
“治疗有效量”指当施用给哺乳动物以治疗疾病(如结肠直肠癌、结肠直肠腺瘤或腺癌)时，足够实现部分或完全治疗或预防疾病的化合物(在本发明中描述的大环内酯抗菌素(antbiotic))的量。本文使用的“治疗有效量”也包括足够破坏、改变、控制或除去原发性、局部或转移的癌细胞或组织；延迟或最小化癌症的扩散；或在癌症的治疗或管理中提供治疗益处的本发明化合物的量。“治疗有效量”也包括足够导致癌细胞死亡的本发明化合物的量。
“治疗有效量”另外包括足够诱导通读APC基因中提前终止密码子的本发明大环内酯抗菌素(antiobiotic)的量。
“治疗有效量”另外包括足够抑制APC基因中的提前终止突变的大环内酯抗菌素的量。
“治疗有效量”可根据化合物、疾病和它的状态或严重性、将被治疗的哺乳动物的年龄、体重、其它医学条件等而变化。治疗有效量也可根据一种或多种以往或并存医学、外科或放射疗法干涉而改变。
本文使用的术语“药学上可接受的盐”指一种或多种任何无毒的有机酸或无机酸分子与本发明化合物的反应产物。形成适合的盐的示例性无机酸包括氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸和酸性金属盐如磷酸氢二钠(sodium monohydrogen orthophosphate)和硫酸氢钾。形成适合的盐的示例性有机酸包括单-、双-和三羧酸。示例性的此类酸为，例如乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、丁二酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、羟基马来酸、苯甲酸、羟基苯甲酸、苯基乙酸、肉桂酸、水杨酸(salacylic acid)、甲磺酸、乙磺酸等。
如在“泰乐菌素或其衍生物”、“红霉素或其衍生物”、“竹桃霉素或其衍生物”或“螺旋霉素或其衍生物”中使用的术语“衍生物”指衍生自母体化合物(如泰乐菌素、红霉素、竹桃霉素、螺旋霉素)的化学改性化合物，其与母体化合物的一种或多种元素、取代基和/或官能团不同，以致衍生物具有与如在术语“治疗”或“预防”(如减小肿瘤尺寸和质量，诱导通读APC基因中的提前终止密码子)下定义的母体化合物相同或相似的生物特性/活性。
衍生物的例子为当施用给哺乳动物时，能够提供(如通过代谢过程)本发明化合物或其活性代谢物的母体化合物的前药，例如其酯或酰胺。
红霉素盐及衍生物可包括(无限制性地)乳糖酸红霉素、琥乙红霉素、硬脂酸红霉素、依托红霉素、红霉素estorate(erythromycin estorate)、醋硬脂红霉素、葡庚糖酸红霉素、红霉素丙酸酯、红霉素沙那西丁、红霉素A、红霉素B、红霉素C、红霉素D或红霉素E、罗红霉素、克拉霉素、阿奇霉素、地红霉素、氟红霉素，及诸如在美国专利第6777543、6825171和5,602,106号和WO2002/050093(其每一个通过引用以它们的全部内容被合并于本文)中显示的那些的衍生物。
泰乐菌素衍生物的非限制性例子为，例如替米考星(desmycosin)、泰乐菌素B或泰乐菌素衍生物如在美国专利第5,602,106、4,092,473、4,205,163和4,268,665号(其每一个通过引用以它们的全部内容被合并于本文)中描述的那些。
竹桃霉素盐及衍生物的非限制性例子为，如磷酸竹桃霉素(夹竹桃霉素(matromycin))、竹桃霉素2′-O-磷酸盐、醋竹桃霉素和三乙酰竹桃霉素及衍生物如在美国专利第5,602,106、4,429,116、4,124,755和4,064,143号(其每一个通过引用以它们的全部内容被合并于本文)中描述的那些。
应理解，大环内酯抗菌素“螺旋霉素”涵盖了在The Merck Index，AnEncyclopedia of Chemicals，Drugs，and Biologicals，第11版，1989(第8708段)(其通过引用以其全部内容被合并于本文)中描述的化合物螺旋霉素I、II或III，或其任何组合(如螺旋霉素I、II和III的组合)中任何一个。
螺旋霉素衍生物的一些非限制性例子为，如新螺旋霉素、二氢螺旋霉素及衍生物如在美国专利第5,602,106和4,174,391号(其每一个通过引用以它们的全部内容被合并于本文)中描述的那些。
应理解，在本发明中描述的活性成分(大环内酯抗菌素)也涵盖其溶剂化物。
本文使用的术语“溶剂化物”指由溶质(在本发明中为大环内酯抗菌素或盐或其衍生物)和溶剂形成的化学计量可变的复合物。出于本发明目的，此类溶剂可能不影响溶质的生物活性。适合溶剂的例子包括，但不限于水、乙醇和乙酸。
治疗有效量的大环内酯抗菌素优选地以药物组合物被施用给哺乳动物。
本文使用的“药物组合物”指本文描述的一种或多种化合物(大环内酯抗菌素)，与其它惰性化学组分如适合的药学上可接受的载体的配制品。药物组合物的目的为促进活性成分(大环内酯抗菌素)向哺乳动物的施用。
本文使用的术语“药学上可接受的载体”指不引起对受治疗者(哺乳动物)的显著刺激且不消去施用的活性成分的生物活性和特性的惰性无毒载体或稀释剂。
载体的例子(无限制地)为乳糖、蔗糖、水、有机溶剂和聚乙二醇。
载体可包括其它赋形剂，如粘合剂、崩解剂、润滑剂、表面活性剂(surface active agent)(表面活性剂(surfactant))、乳化剂、防腐剂和矫味剂。
用于在本发明背景下使用的药物组合物包括其中活性成分以有效实现计划目的的量被包括的组合物。
根据本发明优选实施方式，组合物的施用途径选自口服、不经肠或直肠。
不经肠施用途径可为，例如静脉内、肌肉内、腹膜内、肿瘤内和皮下施用。
特定的实施方式为口服途径施用。
适于口服施用的活性剂(活性成分)的剂型包括，例如固体、半固体、液体或气体状态的形式。特定的例子包括片剂、胶囊、粉末、颗粒、溶液、悬浮液、糖浆和酏剂。然而，剂的形式不限于这些形式。
剂型可被设计为提供即时释放、持续释放或脉冲释放的抗癌活性剂(大环内酯抗菌素)。
另外，本发明的抗癌活性剂可以通过将液体或精细粉末形式的活性剂与气体或液体喷雾剂以及(如果必要的话)已知的助剂如发泡剂一起填充到非加压容器如气溶胶容器或喷雾器而制备的气溶胶或吸入剂形式被施用。作为喷雾剂可使用加压的气体，例如，二氯氟甲烷、丙烷或氮气。
可通过利用已知方法，将本发明抗癌活性成分溶解、悬浮或乳化在水或非水溶剂如植物油、合成树脂酸的甘油酯、高级脂肪酸的酯或丙二醇中而制备注射剂，且如果期望的话，进一步添加可常规地使用的添加剂如增溶剂、渗透调节剂(osmoregulating agent)、乳化剂、稳定剂或防腐剂。
对于直肠施用，可使用栓剂。可通过利用已知方法，将本发明抗癌活性成分与可在体温下熔化但在室温下为固体的赋形剂，如可可脂、碳蜡或聚乙二醇混合并模制所产生的物质而制备栓剂。
抗癌活性剂可与化学疗法、放射疗法或其它活性剂共同施用。
本发明抗癌活性成分的剂量可根据施用形式、施用途径、靶疾病的程度或阶段及类似因素被适当设置或调整。例如，对于治疗结肠直肠癌，本发明化合物的有效施用速率的一般范围可为2-100mg/kg体重/天。优选地，对于口服施用活性成分，剂量可被设置为2-30mg/kg体重/天，但剂量不被其限制。
对于治疗其它癌症类型，如韧带样纤维瘤(侵袭性纤维瘤病(fibromatoses))、膀胱癌、胃癌和乳腺癌，剂量可在2-100mg/kg体重/天的范围内。优选地，对于口服施用活性成分，剂量可被设置为2-50mg/kg体重/天，但剂量不被其限制。
施用给哺乳动物，尤其人类的剂量应该足以预防癌症、延迟它的发作或减慢(或终止)它的进展。本领域技术人员将意识到剂量将取决于各种因素，包括所用特定化合物的强度，及哺乳动物的年龄、物种、身体条件和体重。剂量的大小也将通过途径、时间安排和施用频率及任何可能伴随特定化合物的施用的不利副作用的存在、性质和程度及预期生理效应被确定。
适合剂量和剂量方案可通过本领域一般技术人员已知的传统测距(range-finding)技术确定。一般，以小于化合物的最优剂量的较小剂量开始治疗。此后，剂量以小的增量增加直到达到环境下的最优作用。
有效剂量和治疗草案可通过常规及传统方式确定，以在实验动物中以低剂量开始并随后增加剂量，同时监控作用，并也系统地改变剂量方案。动物研究，优选哺乳动物研究，通常用于确定每千克重量生物活性剂的最大耐受剂量(“MTD”)。本领域技术人员按照规律外推在其它物种(包括人类)中有效的剂量，同时避免毒性。
因此，根据上文，在治疗应用中，根据本发明使用的活性剂的剂量除了其它影响选择的剂量的因素之外根据活性剂、接受的患者的年龄、体重和临床病况及施用疗法的临床医师或从业者的经验和判断而变化。一般，剂量应该足以导致减慢，及优选地消退肿瘤生长及最优选地，导致癌症的完全消退。活性成分(大环内酯抗菌素)的有效量为提供如被临床医师或其它具备资格的观察者注意到的客观可鉴别的改进的剂量。在患者中肿瘤的消退通常是就肿瘤的直径进行测量。肿瘤直径的减小表示消退。消退也可由治疗已经停止后，肿瘤不能复发而表示。
给药可为一种施用或两种或更多种施用的组合，如每日一次、每日两次、每周一次、每月一次，或以其它方式根据临床医师或从业者的判断，将如年龄、体重、疾病严重性及每次施用中施用的剂量的因素考虑进来。
实施例
方法和材料：
细胞培养
在补充了10％胎牛血清(FCS)和100单位/ml青霉素或链霉素的Dulbecco改良的Eagle培养基(DMEM)中，培养HCT116CRC细胞(携带野生型APC的对照细胞)。在37℃下，将细胞保持在潮湿的、5％CO2气氛中。使用JetPEI(PolyPlus Transfection)转染细胞。用0.5μg所描述的构建物转染细胞，且48小时后，根据生产商说明书，用荧光素酶检验试剂盒(Promega，USA)测量荧光素酶水平。
按上文所述保持细胞。用0.5μg pTOPFLASH和0.05μgRenilla(Promega，USA)转染细胞。48小时后，通过使用荧光素酶检验试剂盒(Promega，USA)测量荧光素酶水平。
体内小鼠实验
六只雌性裸鼠(SCID)被注射以1×107HT-29细胞。治疗的组被喂以正常的小鼠饮食并接受含有0.4mg/ml泰乐菌素的饮用水，持续14天。对照组接受普通饮用水。14天后，处死小鼠，除去并称重肿瘤。
用H&E染色剂将来自对照小鼠和治疗小鼠的肿瘤切片染色。载玻片被专业病理学家检查。
来自对照小鼠和治疗小鼠的肿瘤被裂解、在SDS-PAGE凝胶上运行并转移到硝酸纤维素膜(nitrocellulose membrane)。用抗-APC抗体(致癌基因APC AB-2)孵育膜。
APC基因中的体细胞突变和生殖细胞突变谱。
大多数已知的偶发性和遗传性APC突变的位点在下文显示。大多数常见APC中的生殖细胞突变在密码子1061和1309处出现。大多数APC体细胞突变在密码子1309、1450和1554(图1)处具有热点的MCR(突变密集区域)中簇集。在它们的热点的大多数中具有突变的CRC细胞系是市场上可购买的且在实验室生长。
APC热点和周边序列
提供全长野生型APC蛋白序列(SEQ ID NO：1)和全长野生型APC DNA序列(SEQ ID NO：2)。
下表阐述了终止密码子序列，及在APC基因的突变热点上在它们周边的序列。注意热点1061、1450和1554，形成的移码或无义终止密码子是TGA，而在热点1309，终止密码子为TAG(参见表1)。
Figure A20078002759100201
表1.该表显示了终止密码子和通过热点中的突变而产生的周边序列。在突变位点1061和1309中，矩形显示了突变事件的位点，其导致5-bp缺失，恰在缺失下游引发终止密码子的形成。在密码子1450，矩形显示了产生终止密码子(无义突变)的错义突变的位点。恰在密码子1554后的三角形说明了导致下游形成终止密码子的腺嘌呤插入位点。在所有情况下，黑体密码子代表了由无义突变或读码突变形成的终止密码子。
实施例1
泰乐菌素-诱导的突变APC终止密码子通读
在以下实验中使用的泰乐菌素为从Sigma Chemicals，Israel(目录号T6134)购买的商业酒石酸泰乐菌素；螺旋霉素购自Sigma Chemicals，Israel(目录号S-9132)；及红霉素购自Fluka，Switzerland(目录号45673)。竹桃霉素可从Sigma Chemicals，Israel(目录号T6514)获得。
双荧光素酶报道质粒系统用于测量泰乐菌素对结肠直肠组织培养物细胞中的APC热点终止密码子突变的通读的作用。在此系统中，海肾荧光素酶报道基因位于APC野生型或突变的序列中的热点上游，且萤火虫荧光素酶报道基因位于APC野生型或突变的序列中的热点下游，且两个基因都在APC启动子的转录控制下(图2a)。海肾荧光素酶基因作为对于转染效率、mRNA丰度和翻译起始的水平的内部标准化对照起作用，因为两种酶的翻译皆起源于相同的翻译起始信号。标准化之后，在萤火虫荧光素酶活性中的不同反映了终止密码子通读的频率。含有野生型或在APC热点密码子1061或1554处的APC突变序列的构建物被转染到在不同量的大环内酯家族抗菌素存在下生长的HCT116结肠直肠癌细胞。数据显示，当细胞以各种量(4-80μg/ml)泰乐菌素治疗时，APC终止密码子通读水平显著(图2b，2c)。螺旋霉素、红霉素和庆大霉素(氨基糖苷类抗菌素)诱导了更适中水平的终止密码子通读(图2b、2c、2d)。
实施例2
泰乐菌素导致β-链蛋白/Tcf信号转导的下调
由于导致Wnt信号通路过度激活的突变，结肠直肠细胞系显示了高水平的β-链蛋白/Tcf-介导的转录。为了测量泰乐菌素对β-链蛋白/Tcf-介导的转录水平的作用，在APC热点1554处含有终止突变的CX-1CRC细胞被pTOPFLASH转染，所述pTOPFLASH是一种广泛用于测量Tcf和β-链蛋白转录活性的荧光素酶报道质粒(pTOPFLASH含有连接到荧光素酶报道基因的多聚Tcf-结合位点)。数据显示以8μg/ml泰乐菌素治疗CX-1细胞导致了在β-链蛋白/Tcf/LEF转录信号转导中约50％的降低(图3)。对于在密码子1450处含有APC热点突变的SW1417细胞，显示了相似结果(结果未显示)。
实施例3
泰乐菌素治疗抑制细胞肿瘤发生
APC截短与肿瘤形成有关(15)。本发明人预言，在仅含截短APC的细胞系中的功能性全长APC蛋白的恢复将会导致肿瘤发生的降低。1×107个在APC密码子1554处含有热点突变的HT-29CRC细胞被注射到12只裸SCID小鼠中。治疗小鼠组(6只小鼠)接受了0.4μg/ml泰乐菌素的饮用水溶液。监控肿瘤的生长并在对照小鼠和泰乐菌素-治疗的小鼠之间的肿瘤尺寸上观察到显著不同。治疗的小鼠具有与对照小鼠相比减小的肿瘤尺寸(图4a)。在接受含有或不含泰乐菌素的饮用水14天后，处死小鼠并除去肿瘤。称重肿瘤且泰乐菌素-治疗的小鼠的肿瘤质量比对照组平均低约40％(图4b)。
实施例4
对照小鼠和泰乐菌素-治疗的小鼠之间肿瘤组织学特性不同
来自对照小鼠和泰乐菌素-治疗的小鼠的肿瘤切片以一种常规用于组织切片的染色剂，苏木精和曙红(H&E)染色剂染色且被专业病理学家检查。此染色显示了泰乐菌素治疗导致肿瘤细胞的坏死和死亡(图5)，其可解释在治疗小鼠中的较小肿瘤尺寸。虽然对肿瘤的血液供给未受影响，但是在泰乐菌素-治疗的小鼠中发生肿瘤坏死，暗示泰乐菌素可到达肿瘤且导致细胞死亡。
实施例5
大环内酯抗菌素对寿命的作用
1×107个在APC的密码子1554处含有热点突变的HT-29CRC细胞被注射到10只三周大的裸SCID小鼠中。治疗的小鼠被给予0.3-0.8μg/ml泰乐菌素、螺旋霉素、红霉素或竹桃霉素的饮用水溶液。10只对照小鼠接受不含抗菌素的饮用水。比较治疗的小鼠的平均寿命与对照小鼠的寿命。
另外，具有APC中的终止突变且自发发展肿瘤并最终死亡的Apc-/-小鼠C57BL/6J-ApcMin/J(Jackson Laboratories，货号002020)被大环内酯抗菌素中每一个治疗。比较治疗的小鼠的寿命与对照未治疗小鼠的寿命。
实施例6
在结肠癌症模型中，以大环内酯盐及衍生物的治疗
雌性裸SCID小鼠被注射以1×107个在APC的密码子1554处含有热点突变的HT-29CRC细胞或注射以1×107个在APC的密码子1450处含有热点突变的SW1417CRC细胞。14天来，治疗组被喂以正常小鼠饮食和含有0.4μg/ml以下一种的饮用水：泰乐菌素盐或泰乐菌素衍生物；红霉素盐或红霉素衍生物；螺旋霉素盐或螺旋霉素衍生物；或竹桃霉素盐或竹桃霉素衍生物。也被注射以1×107个HT-29或SW1414CRC细胞的对照组被给予不含有大环内酯抗菌素衍生物或大环内酯抗菌素盐的饮用水且被喂以同样饮食。处死所有小鼠，除去肿瘤并称重。来自10只对照小鼠及来自以泰乐菌素、红霉素、螺旋霉素或竹桃霉素的盐或衍生物中每一个治疗的各组中的10只小鼠的肿瘤切片以H&E染色剂染色，且被专业病理学家检查。病理学家检查每个肿瘤切片的肿瘤坏死。剂量根据试验化合物和预期达到的作用变化。
另外，使用(治疗的)和不使用(对照)大环内酯抗菌素中的每一个对C57BL/6J-ApcMin/J小鼠执行与上文相似的实验(不提供致癌细胞)。
讨论：
在西方世界，结肠癌症是癌症死亡的主导原因中的一个。结肠癌症的进展已经与为治疗剂和诊断剂提供潜在靶点的分子变化密切相关。结肠癌症的独特特征为在单一基因中的突变在大多数肿瘤中被发现。在编码腺瘤性结肠息肉病(APC)蛋白的基因中的截短突变在＞80％的偶发性结肠肿瘤中被发现且也对家族性腺瘤性息肉病(FAP)，结肠癌症的一种遗传形式负责。APC蛋白功能缺失在大多数偶发性结肠肿瘤的发展中是极早的事件并在腺瘤前体息肉形成之前。这暗示APC蛋白对于维持肠和结肠上皮是必需的，且它的表达可为干涉提供适合的靶点。
APC基因编码在Wnt-信号通路及在细胞间粘附中起不可缺少的作用(integral role)的大的多域蛋白。多数(95％)的截短生殖细胞突变为产生具有异常功能的截短蛋白产物的无义突变或移码突变。大多数普遍生殖细胞突变在密码子1061和1309(在它们之间其占所有生殖细胞突变的三分之一)处发生(图1)。
在热点1061和1309处的突变被发现为移码型和无义型。因此，一个等位基因可在密码子1061或1309处含有移码突变，且等位基因在密码子1061或1309处可为无义(提前终止)突变(16，17)。相似地，在热点1554处的突变可为移码型或无义型。然而，迄今仅无义突变已经在密码子1450处被鉴别。
在大多数结肠直肠腺瘤和恶瘤，包括尺寸＜5mm的腺瘤中发现了体细胞突变。超过60％的所有APC中的体细胞突变在＜10％的位于密码子1286和1513之间的基因编码序列中发生；此区域被命名为突变密集区域(MCR)。在MCR中，存在对于体细胞突变的三个热点，在密码子1309、1450和1554处(图1)。最可能APC在Wnt-信号转导的作用为负责它在结肠直肠致癌作用中的作用。突变APC也可破坏细胞间粘附及细胞骨架的稳定性，这两者皆在癌症进展中起作用。另一个在密码子1307处的APC突变已经在一些患有结肠直肠癌和乳腺癌的人，及少数患有黑素瘤、皮肤癌和膀胱癌的个体中发现(14)。
如同在结肠直肠癌中，数目庞大的其它人类遗传性疾病(如囊性纤维化(CF)、Duchenne型肌肉萎缩症(DMD)(8))产生自导致由突变基因编码的蛋白合成提前终止的突变，且治疗这些疾病的一种方式可为补充具有野生型拷贝的细胞。
多年来，已知氨基糖苷类抗菌素可通过使氨基酸结合在无义终止密码子的位置中，从而允许翻译继续直至转录正常结束而抑制疾病-相关的提前终止突变。对终止密码子抑制的易感性取决于终止密码子类型且取决于终止密码子周边的局部序列环境。与UAA相比，UGA和UAG显示了较高翻译通读。在APC基因突变热点中的终止密码子序列及在它周边的序列已经被阐明。如可从表1中看出，在列举的APC热点上形成的提前终止密码子的类型为TGA或TAG。
先前以常染色体隐性疾病囊性纤维化(CF)及在具有无义突变的Duchenne(DMD)患者的子集中阐述了此方法的使用。在CF和DMD两种患者中，所有病例中仅5％到10％归因于编码序列中的无义突变。相比之下，在患有结肠直肠肿瘤的患者中，在所有病例的约85％中，发现APC基因中的提前终止密码子。虽然准确数字未被确定，但是少于80％的结肠直肠癌病例仅具有无义突变，而在其它病例下，个体可具有一个具有移码突变的等位基因和具有无义突变的另一个等位基因。
迄今尚未进行目标为将全长APC蛋白恢复到缺少功能性APC蛋白的细胞中的研究。然而，氨基糖苷类如庆大霉素具有严重的剂量-限制性毒性且目前必须静脉内施用，因此使它们成为对于这些类型疾病的无吸引力的长期治疗。本发明人筛选了可通读APC基因中致癌终止密码子且导致在含有非功能性截短的APC蛋白产物的结肠直肠癌细胞中的功能性全长APC蛋白表达的其它化合物。
为了筛选可通读提前APC终止突变的化合物，本发明人构建了可有效且快速地测量不同化合物对特异提前APC终止密码子的通读水平的作用的报道检验系统。结果表明，先前已仅显示了通读原核终止密码子的抗菌素大环内酯家族的成员泰乐菌素可通读特异APC热点突变。
既然Wnt信号转导水平是对于CRC细胞的肿瘤发生特性的标志，本发明人首先检查了泰乐菌素是否可降低在CRC细胞中观察的Wnt信号转导的高水平。结果显示泰乐菌素治疗的确可降低试验的CRC细胞中Tcf/β-链蛋白-依赖性转录的水平。
在下一步骤中，发明人调查了泰乐菌素是否可体内降低肿瘤发展。出于此目的，含有APC热点突变(密码子1554)的HT-29CRC细胞被注射到裸鼠中。治疗小鼠组接受泰乐菌素的饮用水溶液。数据显示，与对照组相比，泰乐菌素治疗导致肿瘤尺寸和质量的减小。另外，泰乐菌素治疗导致了肿瘤细胞增多的死亡，但不影响微血管。
提前终止密码子通读为对于在结肠直肠癌早期的患者或具有对于发展此类型癌症的遗传性背景的患者潜在的替代治疗策略。总体看来，现在的结果说明了泰乐菌素和其它大环内酯抗菌素可实现在大量结肠直肠癌患者中突变的APC基因中的致病提前终止密码子的通读。此新方法可在产生自重要的编码序列中的提前终止密码子的结肠直肠癌和其它遗传性人类疾病的临床治疗中开辟新的道路。
实施例7
在乳腺癌、膀胱癌、胃癌和韧带样纤维瘤模型中，以大环内酯抗菌素及它们的盐及衍生物治疗
雌性裸SCID小鼠被注射以已知可在小鼠模型中引发乳腺癌且在APC热点突变处含有突变的细胞。14天来，治疗组被喂以正常小鼠饮食及含有0.3-0.8μg/ml以下中一种的饮用水：泰乐菌素或泰乐菌素盐或泰乐菌素衍生物；红霉素或红霉素盐或红霉素衍生物；螺旋霉素或螺旋霉素盐或螺旋霉素衍生物；或竹桃霉素或竹桃霉素盐或竹桃霉素衍生物。也注射了相同乳腺癌细胞的对照组被给予不含大环内酯(macroloide)抗菌素或大环内酯抗菌素衍生物或大环内酯抗菌素盐的饮用水，并喂以相同饮食。处死所有小鼠，除去肿瘤并称重。来自对照小鼠及来自以泰乐菌素、红霉素、螺旋霉素或竹桃霉素或大环内酯抗菌素盐或大环内酯抗菌素衍生物中每一个治疗的小鼠的肿瘤切片以H&E染色剂染色，并被专业病理学家检查。病理学家检查每一个肿瘤切片的肿瘤坏死。
重复上文关于乳腺癌的方法，用于确定试验活性剂关于膀胱癌、胃癌和韧带样纤维瘤的作用，除了诱发小鼠模型各自癌症的适合细胞被注射入治疗小鼠和对照小鼠中。
实施例8
在子宫内，大环内酯抗菌素对细胞肿瘤发生的作用
10只怀有胎儿的怀孕的APC-/-小鼠被给予0.3-0.8μg/ml泰乐菌素、螺旋霉素、红霉素或竹桃霉素的饮用水溶液。10只怀孕对照小鼠接受不含抗菌素的饮用水。出生后，治疗组的仔(幼)鼠继续接受同样的大环内酯抗菌素的饮用水溶液，而对照仔鼠接受不含抗菌素的饮用水。在它们出生后8周，处死仔鼠，并从它们的胃肠道除去肿瘤并称重。仔鼠对照组的肿瘤质量与泰乐菌素-、螺旋霉素-、红霉素-或竹桃霉素-治疗组的仔鼠(在子宫内及在出生后皆接触大环内酯)的肿瘤质量比较。
实施例9
在对照小鼠和大环内酯抗菌素-治疗的小鼠之间的肿瘤组织学特性不同
在上述实验中，来自对照小鼠和大环内酯抗菌素-治疗的小鼠的肿瘤切片被苏木精和曙红(H&E)染色剂，一种常规用于组织切片的染色剂染色并被专业病理学家检查。检查染色以确定大环内酯治疗是否导致肿瘤细胞的坏死和死亡。
在本说明书中提到的所有公布、专利和专利申请通过引用以它们的全部内容被本文合并于说明书中，如同每个独立的公布、专利或专利申请被详细并单独地说明通过引用合并于本文。

Claims (11)

1.大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的药剂的用途，所述大环内酯抗菌素为以下的一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
2.一种药物组合物，其用于治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症，该组合物包括作为活性成分的治疗有效量的大环内酯抗菌素及药学上可接受的载体，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
3.大环内酯抗菌素用于制备治疗或预防表达突变APC基因的癌症的药剂的用途，所述大环内酯抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
4.根据权利要求3所述的用途，其中所述癌症选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌。
5.根据权利要求1或3所述的用途，其中所述大环内酯抗菌素为泰乐菌素或酒石酸泰乐菌素。
6.根据权利要求2所述的药物组合物，其中所述大环内酯抗菌素为泰乐菌素或酒石酸泰乐菌素。
7.一种在哺乳动物中治疗或预防选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌的癌症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；
从而治疗或预防所述癌症。
8.一种在哺乳动物中治疗或预防表达突变APC基因的癌症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物。
9.一种通过抑制APC基因中的提前终止突变而在哺乳动物中治疗或预防癌症的方法，所述方法包括向所述哺乳动物施用治疗有效量的大环内酯抗菌素，该抗菌素为以下一种或多种：
泰乐菌素、其药学上可接受的盐及其衍生物；红霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；竹桃霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；及螺旋霉素、其药学上可接受的盐及其衍生物；
从而抑制所述APC基因中的提前终止突变。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述癌症选自结肠直肠癌、韧带样纤维瘤、膀胱癌、胃癌和乳腺癌。
11.根据权利要求7到9中任一项所述的方法，其中所述大环内酯抗菌素为泰乐菌素或酒石酸泰乐菌素。
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