KR102375444B1 - 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물 제조에서 이소발레릴 스피라마이신i, ii 및/또는 iii의 응용 및 약물 - Google Patents
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Abstract
이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III을 포함하는 약물, 그리고 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물 제조에서 이의 응용 및 이의 약물.
Description
본 발명은 약물 응용 분야에 관한 것으로, 구체적으로, 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물 제조에서 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III의 응용 및 약물에 관한 것이다.
종양은 흔히 발생하는 다발성 질병의 일종이며, 신체의 조직 세포가 체내와 체외에서 오는 각종 종양 형성 요인의 장기적인 영향을 받아, 유전자 돌연 변이가 발생하여 정상적인 성장과 분화 조절 능력을 상실하고, 클론성 비정상적 증식 및 분화가 발생하여 형성된 신생물 또는 증식물이다. 종양은 양성 종양 및 악성 종양으로 분류되며, 악성 종양은 또 상피 조직에서 발생하는 암, 간엽 조직에서 발생하는 육종 및 암육종을 포함하여 총 3가지로 세분할 수 있다. 대중들이 말하는 "암"은 일반적으로 모든 악성 종양을 가리킨다.
악성 종양은 인류 건강을 위협하는 주된 악성 질환 중 하나이며, 현재 전 세계 인구의 사망 원인 중 1위이다. 최근 통계 데이터에 따르면, 2007년 전 세계 약 790만 명이 다양한 유형의 암으로 사망하였으며, 이는 총 사망자수의 13%를 차지하며, 1,200만 건을 초과하는 종양 발병 사례가 진단되었고, 여기서 72% 이상의 종양 환자 및 사망 사례가 저개발국가에서 발생하였으며, 지속적으로 증가하는 추세를 보이고 있다. 2015년 전 세계 종양 사망자가 900만 명으로 늘어났으며, 2030년에는 1,200만 명을 넘어설 것으로 예상되며; 현재, 중국의 연간 암 발병자는 약 280만 명이며, 그 중 사망자는 40만 명을 초과하여, 중국에서 질병별 사망 원인 중 1위가 되었으며, 지속적으로 증가하는 양상을 보이고 있다. 현대 사회에서 생활 리듬은 빨라지고, 경쟁 스트레스는 커졌으며, 인류의 생활 방식 및 환경이 변화함에 따라, 종양의 발병률 및 사망자수는 해마다 증가하고 있으며, 현대 사회에서 흔한 발병과 높은 발병율로, 환자의 삶의 질에 심각한 영향을 줄 뿐만 아니라, 가정과 사회에 무거운 경제적 및 정신적 부담을 주고 있으며, 전 세계를 괴롭히는 중대한 사회적 문제가 되었는바, 암의 치료 및 예방은 전 세계적으로 해결이 가장 시급한 문제 중 하나이다. 현재, 화학 약물 치료는 종양을 퇴치하는 가장 주요한 수단이며, 비교적 좋은 치료 효과가 있지만, 골수 억제 및 면역 기능 저하와 같은 부작용을 빈번히 일으키기 때문에, 환자가 치료를 지속하기 어려우며, 화학 요법 약물 치료 과정에서 나타나는 약제 내성은 오늘날 임상 치료에서의 하나의 난제로 떠올랐다. 최근 들어, 전 세계 항종양 의약품 시장은 빠른 성장세를 보이고 있으며, 미국 FDA 통계 데이터에 따르면, 전 세계 함암제 시장의 매출총액은 2004년 240억 달러에서, 2007년 396억 달러로 급증했다. 세계적으로 해마다 새로운 종류의 항종양제가 개발되고 있지만, 아직까지 암을 이겨낼 수 있는 효과적인 수단은 없으며, 새로운 암의 종류가 지속적으로 나타나고 있고, 종양의 약제 저항성/내성이 발생되고 강화되고 있어, 새로운 종류의 효과적인 항암 약물을 발견하는 것이 특히 절실하다.
캐리마이신(Carrimycin)은 유전자변형 기술에 의해 카보마이신 생성균의 4" 이소발레릴 전이효소 유전자(4"-o-acyl-transferase)를 스피라마이신 생성균에 클론 발현하고, 스피라마이신 4"-OH를 정향 아실화하고, 4"-에 이소발레릴 측쇄를 첨가하여 형성한 4"-이소발레릴 스피라마이신을 주요 조성 성분으로 하는 신형 항생제이다.
캐리마이신은 다양한 스피라마이신 파생물로 조성되며, 주요 활성 성분인 이소발레릴 스피라마이신(I+II+III)의 총함량은 60% 이상이며, 약학적으로 수용 가능한 약학 조성물이다. 중심 구조는 16 원자 락톤 고리이며, 1개의 포로사민(Forosamine) 분자, 1개의 미카미노즈(mycaminose) 분자 및 1개의 미카로즈(Mycarose) 분자와 연결되며, 주요 성분인 이소발레릴 스피라마이신I, II, III의 구조와 스피라마이신 구조의 차이점은 미카로즈 4"-에 연결된 라디칼은 하이드록실이 아닌 이소발레릴인 것에 있다. 상기 약물은 쉔양 통리엔 등이 공동으로 1.1류 신약으로 등록했다.
캐리마이신의 주성분 화학 구조는 다음 식(I)과 같다:
식(I)
여기서, R=H, R=COCH2CH(CH3)2일 경우, 이소발레릴 스피라마이신I이고;
R=COCH3, R'=COCH2CH(CH3)2일 경우, 이소발레릴 스피라마이신II이며;
R=COCH2CH3, R'=COCH2CH(CH3)2일 경우, 이소발레릴 스피라마이신III이며;
캐리마이신은 16 원자 마크로라이드계 항생제이며, 자유라디칼인 카르복실기, 알콕시기, 에폭시기, 케톤기, 알데하이드기 및 한쌍의 공액 C=C를 가지며, 분자량은 약 884~982이다. 유사한 화학 구조로 인해, 캐리마이신은 마크로라이드계 항생제와 많은 공통점을 가지며, 에스테르, 아세톤, 클로로포름, 알코올 등과 같은 다수의 유기 용제에 쉽게 용해되고, 석유 에테르에 약간 용해되며, 물에 용해되기 어렵고; 분자 구조는 2개의 디메틸아민기를 함유하고 있어 약 알칼리성이며, 산성 수용액에 잘 용해되며; 온도가 상승함에 따라 용해도는 감소하는 "음의 용해도" 특성을 가진다. 캐리마이신의 주성분인 이소발레릴 스피라마이신 4"- 탄소 사슬은 비교적 길기 때문에, 친수성이 떨어지고, 이의 수중 용해도는 스피라마이신 및 4" - 아세틸 스피라마이신보다 낮다.
캐리마이신은 백색의 비결정 분말이며, 약간의 흡습성을 지니며, 비선광도는 약 -80.8°이고, 자외선의 최대 흡수 파장은 231~232nm이며, 자체적으로 약간의 형광 발색 라디칼을 가지고 있기 때문에, 진한 황산 또는 염산과 만나면 자색을 보이는 반응이 일어나고, 강한 자색 형광이 나타나며, 231~232nm 지점에서 최대 흡광도를 가진다.
이 약물은 친지성이 좋고, 조직 삼투력이 강하며, 내복 흡수력이 빠르고, 체내에서 유지되는 시간이 길며, 지속적인 항생제 지발효과가 있다. 약효와 화학 배위의 관계에 따르면, 마크로라이드계 항생제 4"-는 아실화된 다음, 이의 친지성 및 체내 활성은 향상되고, 체내 항균 활성과 임상 치료 효과 모두 현저하게 향상되었으며, 체내에서 항생제의 안정성이 4"- 하이드록시 에스테르의 탄소 사슬 증가에 따가 강화되며, 즉 이소발레릴 스피라마이신 > 부티릴 스피라마이신 > 프로피오닐 스피라마이신 > 아세틸 스피라마이신이다.
초보적인 체내 체외 테스트 결과에 따르면, 이 약물은 다수의 G+균에 대해 비교적 좋은 항균 활성을 보일 뿐만 아니라, 일부 G-균에도 일정한 작용을 하며, 각 항 기술적 스펙이 아지트로마이신, 에리트로마이신, 아세틸 스피라마이신 및 메디마이신보다 현저하게 우수하며, 특히 폐렴 마이코프라즈마에 대한 항균 활성이 제일 강하며, 에리트로마이신 약제에 내성이 있는 균, 네이세리아 고노로이애, 폐렴구균, 황색포토상구균, 녹농균, 인플루엔자 바실러스, 헤모필루스 인플루엔자, 박테로이데스 프라길리스, 레지오넬라, 박테로이데스 테타이오타오미크론 및 클로스트리디움 퍼프린젠스에 대해서도 일정한 항균 활성을 가지며, 임상적으로 에리트로마이신에 내성을 가지는 황색포도상구균에 대해서만 극히 적은 교차내성이 있다. 캐리마이신은 주로 그람양성균의 감염성 질병 치료에 사용되며, 특히 기관지 감염 치료에 적용될 것이며, 비뇨기 계통의 감염 등에 사용될 수도 있다.
본 출원인은 최근의 한 연구를 통해, 이소발레릴 스피라마이신I, II 또는 III에 대한 인체 유방암 세포 MCF-7 및 MDA-MB-231, 인체 간암 세포 HepG2 또는 쥐 간암 세포 H22, 인체 비소세포 폐암 세포 A549, Lewis 폐암 세포, 인체 대세포 폐암 세포 H460 및 H1299, 인체 신장 투명세포 선암 세포 786-O, 인체 신장 선암 세포 769-P, 인체 신경교종 세포 U251, 인체 교모세포종 세포 A172, 인체 조직 림프종 세포 U937, 인체 자궁경부암 세포 HeLa, 인체 전립선암 세포 PC3, 인체 췌장암 세포 PANC-1, 인체 식도암 세포 TE-1, 인체 위선암 세포 SGC7901, 인체 결장암 세포 HT-29, 인체 전골수성 백혈병 세포 HL-60, 인체 갑상선암 세포 TPC-1, 인체 방광암 세포 T-24의 체외 항증식 활성 평가에서 샘플로 시험된 세포에 대해 모두 양호한 항증식 활성을 나타낸 것을 발견하였으며, 이는 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III이 종양을 치료하는 새로운 약물이 될 가능성을 시사하며, 따라서 본 발명을 완성했다.
본 발명이 해결하려 하는 기술문제는 종래 기술의 단점을 보완하여, 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물 제조에서 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III의 응용을 제공하는 것이다.
상술한 기술문제를 해결하기 위해, 본 발명은 다음과 같은 기술적 방안을 채용한다:
본 발명은 우선 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물 제조에서 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III의 응용을 제공한다.
본 발명에서, 상기 종양은 고형 종양 및 비고형 종양을 포함한다.
나아가, 상기 고형 종양은 양성 고형 종양 및 악성 고형 종양을 포함하며; 상기 비고형 종양은 림프종양 또는 백혈병이다.
나아가, 상기 악성 고형 종양은 유방암, 간암, 폐암, 신장암, 뇌종양, 자궁경부암, 전립선암, 림프종, 췌장암, 식도암, 위암, 결장암, 갑상선암, 방광암 또는 악성 피부 종양이며;
바람직하게, 상기 뇌종양은 신경교종 또는 수막종이며, 상기 위암은 위선암이다.
본 발명은 실험을 통해 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III은 인체 유방암 세포 MCF-7 및 MDA-MB-231, 인체 간암 세포 HepG2, 인체 비소세포 폐암 세포 A549, 인체 대세포 폐암 세포 H460 및 H1299, 인체 신장 투명세포 선암 세포 786-O, 인체 신장 선암 세포 769-P, 인체 조직 림프종 세포 U937, 인체 자궁경부암 세포 HeLa, 인체 전립선암 세포 PC3, 인체 신경교종 세포 U251, 인체 교모세포종 세포 A172, 인체 췌장암 세포 PANC-1, 인체 결장암 세포 HT-29, 인체 식도암 세포 TE-1, 인체 위선암 세포 SGC7901, 인체 전골수성 백혈병 세포 HL-60, 인체 갑상선암 세포 TPC-1, 인체 방광암 세포 T-24 모두에 대해 양호한 항증식 활성을 나타내는 것을 발견하였으며, 따라서 상기 세포로 인한 종양 또는 암 질병의 치료에 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III을 이용할 수 있음을 증명했다.
나아가, 상기 약물은 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III, 그리고 이의 약학적으로 수용 가능한 염과 약학적으로 수용 가능한 보조재료로 제조된 각종 제형일 수 있다.
나아가, 상기 약물은 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III, 그리고 이의 약학적으로 수용 가능한 염, 항종양제와 약학적으로 수용 가능한 보조재료로 제조된 각종 제형일 수 있다.
본 발명에서, 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III과 항종양 약물 중의 1종 이상으로 화합물 제제를 제조할 수 있다.
나아가, 화합물 제제를 제조할 경우, 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III과 제2 활성 성분의 비율은 1~99: 99~1이며, 바람직하게 5~95: 95~5, 더 바람직하게 10~90: 90~10, 보다 더 바람직하게 20~80: 80~20이다.
나아가, 상기 약물은 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III, 그리고 이의 약학적으로 수용 가능한 염의 제1 약제 및 항종양 약물을 포함하는 제2 약제의 결합이다.
본 발명에서, 활성 성분인 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III을 포함하는 제1 약제와 화학 요법, 방사선 요법, 표적 치료 또는 면역 치료 약물 중의 1종 이상을 포함하는 제2 약제를 결합하여 사용할 수 있으며, 결합하여 사용할 경우, 제1 약제와 제2 약제의 사용 순서에는 제한이 없으며, 제1 약제를 우선 사용할 수 있고, 제2 약제를 우선 사용할 수도 있으며, 두 가지 약제를 동시에 사용할 수도 있다.
약제를 결합하여 사용할 경우, 제1 약제와 제2 약제의 비율은 1~99: 99~1이며, 바람직하게 5~95: 95~5, 더 바람직하게 10~90: 90~10, 보다 더 바람직하게 20~80: 80~20이다.
나아가, 상기 항종양제는 화학 요법, 방사선 요법, 표적 치료 및/또는 면역 치료 약물이다.
본 발명은 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물을 제공하며, 여기서, 상기 약물의 활성 성분에는 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III이 포함된다.
나아가, 상기 약물에는 제2 활성 성분이 더 포함된다.
나아가, 상기 제2 활성 성분은 화학 요법, 방사선 요법, 표적 치료 또는 면역 치료 약물 중의 1종 이상을 포함한다.
본 발명은 종양을 치료 및/또는 예방하는 복합 약물을 더 제공하며, 상기 복합 약물은 제1 약제 및 제2 약제를 포함하며, 상기 제1 약제의 활성 성분은 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III이고, 상기 제2 약제는 화학 요법, 방사선 요법, 표적 치료 또는 면역 치료 약물 중의 1종 이상을 포함한다.
나아가, 상기 약물 또는 제1 약제는 약학적으로 수용 가능한 제형이다.
나아가, 상기 약물 또는 제1 약제에서 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III의 용량은 5~1500mg이고; 바람직하게는 50~1000mg이며; 더 바람직하게는 100~400mg이다.
본 발명에서, 상기 이소발레릴 스피라마이신I은 예컨대 CN101785778A의 실시예 1의 방법에 따라 종래 기술의 방법에 의해 분리제조할 수 있으고; 상기 이소발레릴 스피라마이신II는 예컨대 CN101785779A의 실시예 1의 방법에 따라 종래 기술의 방법에 의해 분리제조하여 얻을 수 있으며; 상기 상기 이소발레릴 스피라마이신III은 예컨대 CN101773510A의 실시예 1의 방법에 따라 종래 기술의 방법에 의해 분리제조하여 얻을 수 있다.
상술한 기술방안을 채용하면, 본 발명은 종래의 기술에 비해 다음과 같은 유익한 효과가 있다:
본 발명은 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III에 비교적 좋은 항종양 효과가 있고, 특히 유방암, 간암, 폐암, 림프종, 자궁경부암, 전립선암, 결장암 또는 백혈병과 같은 종양에 비교적 좋은 치료 효과가 있음을 증명하였으며, 종양을 치료 및/또는 예방하는 약물 제조에서의 이소발레릴 스피라마이신I, II 및/또는 III의 응용 및 그 임상시험에 이론적 근거를 제공했을 뿐만 아니라, 중요한 경제적 효익 및 사회적 효익을 가져온다.
본 발명 실시예의 목적, 기술방안 및 장점을 더 명확하게 설명하기 위해, 이하에서 본 발명의 실시예와 결합하여, 실시예의 기술방안을 명확하고 완정하게 설명하며, 이하 실시예는 본 발명을 설명할 뿐, 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
실시예 1. 이소발레릴 스피라마이신I 정제
규격: 200mg/350mg
정제 핵의 처방:
이소발레릴 스피라마이신I 200g
아비셀 110g
카르복시메틸스타치나트륨 22g
포비돈 K30(5%) 15g
스테아린산마그네슘 3g
제조 1,000알
코팅액 처방:
오파드라이II 21g
증류수 적당량
제조 105ml
제조공정:
정제 핵의 제조: 주재료와 보조재료를 각각 눈이 100개인 체로 치고, 처방량의 이소발레릴 스피라마이신I 및 아비셀과 1/2 처방량의 카르복시 메틸 스타치나트륨을 골고루 섞은 후, 5% 포비돈 K30수용액을 첨가하여 연제를 만들며, 눈이 18개인 체로 알을 만들고, 젖은 입자를 60℃ 통풍 조건 하에서 2h 건조하며; 건조한 다음 눈이 18개인 체로 알을 정리하고, 1/2 처방량의 카르복시 메틸 스타치나트륨과 스테아린산 마그네슘을 더 첨가사여 골고루 섞은 후, 직경 11mm의 얕은 오목형 다이로 정제함으로써, 정제 중량 350mg, 경도 6.5kg의 정제 코어를 얻는다.
코팅액의 제조: 필요한 오파드라이II(백색)의 무게를 잰 후, 여러 차례에 나누어 필요한 양의 물을 배액 용기에 첨가하고, 전부 부은 다음, 교반 속도를 늦추어, 소용돌이가 사라지도록, 계속하여 30min 동안 교반하여 얻는다.
필름 코팅의 제조: 정제 코어를 코팅 솥에 넣고, 코팅 조건을 확인해야 하며, 메인 설비 속도 20r/min, 입풍 온도 40℃, 송풍 온도 30℃, 분사 압력 0.02Mpa, 분사 유량 1ml/min로 코팅하며, 안정된 다음 지속적으로 1.5h 동안 분사 코팅하며, 정제 표면이 매끄럽고, 색갈이 균일하며, 필름 코팅 검수 기준에 부합되면 합격이다. 코팅 후 무게는 5% 정도 증가한다.
실시예 2. 이소발레릴 스피라마이신I 정제(10,000알로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신I 원분 1,000g
저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스(5%) 92.5g
카르복시메틸스타치나트륨(3%) 55.5g
스테아린산마그네슘(1%) 18.5g
전분 총 중량 - 기타 원료와 보조재료
총 중량 1,850g
제조공정: 적당한 량의 전분을 취하여, 농도 15%로 희석한 후에, 크림처럼 될 때까지 가열하여, 접착제를 만들고; 주재료 이소발레릴 스피라마이신I, 보조재료 전분, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스, 카르복시 메틸 스타치나트륨, 스테아린산 마그네슘을 눈이 100개인 체로 각각 친다. 처방량에 따라, 필요한 만큼 주재료와 보조재료를 취하고; 이소발레릴 스피라마이신I, 전분, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스를 충분히 골고루 섞은 후, 농도 15%로 희석한 전분 크림에 넣고 연제를 만들며, 눈이 14개인 체로 치고 알을 만들고, 50~60℃ 온도에서 건조하고, 수분은 3~5%로 제한해야 하며, 눈이 14개인 체로 침으로써 알을 정리하고, 카르복시 메틸 스타치나트륨과 스테아린산 마그네슘을 혼합하여, 입자의 함량을 측정하며; 입자의 함량에 따라, 정제의 무게를 측정하며, 정제를 프레스하여(Φ9mm 얕은 오목형 펀치), 정제 중량 차이를 검사하고; 검사 합격한 후 포장한다.
실시예 3. 이소발레릴 스피라마이신I 캡슐(10,000알로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신I 원분 1,000g
전분 1,080 - 이소발레릴 스피라마이신I 원분 중량
약용 3호 캡슐 1,000알
액체 파라핀 50ml
제조공정: 공정 처방에 따라 주재료 이소발레릴 스피라마이신I과 보조재료 약용 전분의 무게를 각각 잰 후, 혼합기에 넣어 1.5~2시간을 충분히 혼합하고; 표본을 추출하여 측정한 함량의 수치는 이론수치와 기본적으로 일치해야 하며(캡슐 하나의 내용량은 약 0.105g), 자동 캡슐기기 작동 요구에 따라 검증 합격한 약용 3호 캡슐 및 혼합된 포장을 기다리고 있는 원료를, 각각 포장용 기계에 넣어 충전하고, 충전된 캡슐에 대해 차이를 검증하며(±10%이내,<0.3g), 용해율은 요구에 부합되어야 하며, 검증 후 요구에 부합되는 캡슐을 폴리싱 머신에 넣고 액체 파라핀을 첨가하여 15~20분간 폴리싱한 다음, 꺼내어 완성품 포장 용기 점검을 진행한다.
실시예 4. 이소발레릴 스피라마이신I 드라이 시럽(10,000 팩으로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신I 원분 1,250g
구연산(0.5%) 15g
사카로즈 총 중량 - 기타 원료와 보조재료
총 중량 500g
색소(쿠르쿠민) 약 1g
제조공정: 고속 제트 분쇄기로 이소발레릴 스피라마이신I 원분, 구연산, 사카로즈를 각각 분쇄하여 알갱이로 만들고, 그 중에 85%는 눈이 300개인 체로 치고, 나머지 15%는 눈이 180개인 체로 치며, 분쇄된 가루를 처방에 따라 무게를 단 후, 1~1.5시간 동안 충분히 혼합하여, 그 함량을 측정하고, 팩당 함량을 계산하며(이론적인 팩당 함량은 500mg), 혼합물을 비닐 포장용 기계에 넣고, 알루미늄 박지를 넣은 후, 분리기 제어 요구에 따라 나누어 담되, 팩당 함량 차이는 ±5% 이내로 제한해야 하며, 패킹하고 테스트에 합격하면 겉포장을 한다.
실시예 5. 이소발레릴 스피라마이신I 과립제(10,000팩으로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신I 원분 1,250g
슈가파우더 20,000g
덱스트린 9,000g
5%PVP-K30 적당량
제조공정: 이소발레릴 스피라마이신I, 슈가파우더와 덱스트린을 눈이 120개인 체로 치고, 처방량에 따라 이소발레릴 스피라마이신I, 슈가파우더와 덱스트린 무게를 잰 후 균일하게 혼합하며, 균일하게 혼합한 상기 재료를 5%PVP-K30의 점액을 이용하여 연제를 만들며, 진동 과립기로 과립을 만들고, 70℃의 온도에서 건조하고, 과립을 정리하여, 테스트에 합격한 후에 분리하여 포장한다.
실시예 6. 이소발레릴 스피라마이신I 동결건조 주사용 분말
이소발레릴 스피라마이신I 500mg을 무게를 재고 몰 량이 동일한 아디프산과 균일하게 혼합하여 5ml의 정제수에 용해하여, 담황색 투명액체를 얻되, pH는 4.6~5.6 이어야 한다. 이어서 동결건조 프롭프엔트로 40mg의 마니톨을 넣고, 저온에서 쾌속으로 9h 냉동 후, 동결건조하여, 담황색의 푸석한 덩어리를 얻을 수 있으며, 사용 전에 10ml의 무균수를 사용하여 용해한다.
실시예 7. 이소발레릴 스피라마이신II 정제
규격: 200mg/350mg
정제 핵의 처방:
이소발레릴 스피라마이신II 200g
아비셀 110g
카르복시메틸스타치나트륨 22g
포비돈 K30(5%) 15g
스테아린산마그네슘 3g
제조 1,000알
코팅액 처방:
오파드라이II 21g
증류수 적당량
제조 105ml
제조공정:
정제 핵의 제조: 주재료와 보조재료를 각각 눈이 100개인 체로 치고, 처방량의 이소발레릴 스피라마이신II 및 아비셀과 1/2 처방량의 카르복시 메틸 스타치나트륨을 골고루 섞은 후, 5% 포비돈 K30수용액을 첨가하여 연제를 만들며, 눈이 18개인 체로 알을 만들고, 젖은 입자를 60℃ 통풍 조건 하에서 2h 건조하며; 건조한 다음 눈이 18개인 체로 알을 정리하고, 1/2 처방량의 카르복시 메틸 스타치나트륨과 스테아린산 마그네슘을 더 첨가사여 골고루 섞은 후, 직경 11mm의 얕은 오목형 다이로 정제함으로써, 정제 중량 350mg, 경도 6.5kg의 정제 코어를 얻는다.
코팅액의 제조: 필요한 오파드라이II(백색)의 무게를 잰 후, 여러 차례에 나누어 필요한 양의 물을 배액 용기에 첨가하고, 전부 부은 다음, 교반 속도를 늦추어, 소용돌이가 사라지도록, 계속하여 30min 동안 교반하여 얻는다.
필름 코팅의 제조: 정제 코어를 코팅 솥에 넣고, 코팅 조건을 확인해야 하며, 메인 설비 속도 20r/min, 입풍 온도 40℃, 송풍 온도 30℃, 분사 압력 0.02Mpa, 분사 유량 1ml/min로 코팅하며, 안정된 다음 지속적으로 1.5h 동안 분사 코팅하며, 정제 표면이 매끄럽고, 색갈이 균일하며, 필름 코팅 검수 기준에 부합되면 합격이다. 코팅 후 무게는 5% 정도 증가한다.
실시예 8. 이소발레릴 스피라마이신II 정제(10,000알로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신II 원분 1,000g
저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스(5%) 92.5g
카르복시메틸스타치나트륨(3%) 55.5g
스테아린산마그네슘(1%) 18.5g
전분 총 중량 - 기타 원료와 보조재료
총 중량 1,850g
제조공정: 적당한 량의 전분을 취하여, 농도 15%로 희석한 후에, 크림처럼 될 때까지 가열하여, 접착제를 만들고; 주재료 이소발레릴 스피라마이신II, 보조재료 전분, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스, 카르복시 메틸 스타치나트륨, 스테아린산 마그네슘을 눈이 100개인 체로 각각 친다. 처방량에 따라, 필요한 만큼 주재료와 보조재료를 취하고; 이소발레릴 스피라마이신II, 전분, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스를 충분히 골고루 섞은 후, 농도 15%로 희석한 전분 크림에 넣고 연제를 만들며, 눈이 14개인 체로 치고 알을 만들고, 50~60℃온도에서 건조하고, 수분은 3~5%로 제한해야 하며, 눈이 14개인 체로 침으로써 알을 정리하고, 카르복시 메틸 스타치나트륨과 스테아린산 마그네슘을 혼합하여, 입자의 함량을 측정하며; 입자의 함량에 따라, 정제의 무게를 측정하며, 정제를 프레스하여(Φ9mm 얕은 오목형 펀치), 정제 중량 차이를 검사하고; 검사 합격한 후 포장한다.
실시예 9. 이소발레릴 스피라마이신II 캡슐(10,000알로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신II 원분 1,000g
전분 1,080 - 이소발레릴 스피라마이신II 원분 중량
약용 3호 캡슐 1,000알
액체 파라핀 50ml
제조공정: 공정 처방에 따라 주재료 이소발레릴 스피라마이신II와 보조재료 약용 전분의 무게를 각각 잰 후, 혼합기에 넣어 1.5~2시간을 충분히 혼합하고; 표본을 추출하여 측정한 함량의 수치는 이론수치와 기본적으로 일치해야 하며(캡슐 하나의 내용량은 약 0.105g), 자동 캡슐기기 작동 요구에 따라 검증 합격한 약용 3호 캡슐 및 혼합된 포장을 기다리고 있는 원료를, 각각 포장용 기계에 넣어 충전하고, 충전된 캡슐에 대해 차이를 검증하며(±10%이내,<0.3g), 용해율은 요구에 부합되어야 하며, 검증 후 요구에 부합되는 캡슐을 폴리싱 머신에 넣고 액체 파라핀을 첨가하여 15~20분간 폴리싱한 다음, 꺼내어 완성품 포장 용기 점검을 진행한다.
실시예 10. 이소발레릴 스피라마이신II 드라이 시럽(10,000 팩으로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신II 원분 1,250g
구연산(0.5%) 15g
사카로즈 총 중량 - 기타 원료와 보조재료
총 중량 500g
색소(쿠르쿠민) 약 1g
제조공정: 고속 제트 분쇄기로 이소발레릴 스피라마이신II 원분, 구연산, 사카로즈를 각각 분쇄하여 알갱이로 만들고, 그 중에 85%는 눈이 300개인 체로 치고, 나머지 15%는 눈이 180개인 체로 치며, 분쇄된 가루를 처방에 따라 무게를 단 후 1~1.5시간 동안 충분히 혼합하여, 그 함량을 측정하고, 팩당 함량을 계산하며(이론적인 팩당 함량은 500mg), 혼합물을 비닐 포장용 기계에 넣고, 알루미늄 박지를 넣은 후, 분리기 제어 요구에 따라 나누어 담되, 팩당 함량 차이는 ±5% 이내로 제한해야 하고, 패킹하고 테스트에 합격하면 겉포장을 한다.
실시예 11. 이소발레릴 스피라마이신II 과립제(10,000팩으로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신II 원분 1,250g
슈가파우더 20,000g
덱스트린 9,000g
5%PVP-K30 적당량
제조공정: 이소발레릴 스피라마이신II, 슈가파우더와 덱스트린을 눈이 120개인 체로 치고, 처방량에 따라 이소발레릴 스피라마이신II, 슈가파우더와 덱스트린 무게를 잰 후 균일하게 혼합하며, 균일하게 혼합한 상기 재료를 5%PVP-K30의 점액을 이용하여 연제를 만들고, 진동 과립기로 과립을 만들며, 70℃의 온도에서 건조하고, 과립을 정리하여, 테스트에 합격한 후에 분리하여 포장한다.
실시예 12. 이소발레릴 스피라마이신II 동결건조 주사용 분말
이소발레릴 스피라마이신II 500mg을 무게를 달아 몰 량이 동일한 아디프산과 균일하게 혼합하여 5ml의 정제수에 용해하여, 담황색 투명액체를 얻되, pH는 4.6~5.6 이어야 한다. 이어서 동결건조 프롭프엔트로 40mg의 마니톨을 넣고, 저온에서 쾌속으로 9h 냉동 후, 동결건조하여, 담황색의 푸석한 덩어리를 얻을 수 있으며, 사용 전에 10ml의 무균수를 사용하여 용해한다.
실시예 13. 이소발레릴 스피라마이신III 정제
규격: 200mg/350mg
정제 핵의 처방:
이소발레릴 스피라마이신III 200g
아비셀 110g
카르복시메틸스타치나트륨 22g
포비돈 K30(5%) 15g
스테아린산마그네슘 3g
제조 1,000알
코팅액 처방:
오파드라이II 21g
증류수 적당량
제조 105ml
제조공정:
정제 핵의 제조: 주재료와 보조재료를 각각 눈이 100개인 체로 치고, 처방량의 이소발레릴 스피라마이신III 및 아비셀과 1/2 처방량의 카르복시 메틸 스타치나트륨을 골고루 섞은 후, 5% 포비돈 K30수용액을 첨가하여 연제를 만들며, 눈이 18개인 체로 알을 만들고, 젖은 입자를 60℃통풍 조건 하에서 2h 건조하며; 건조한 다음 눈이 18개인 체로 알을 정리하고, 1/2 처방량의 카르복시 메틸 스타치나트륨과 스테아린산 마그네슘을 더 첨가사여 골고루 섞은 후, 직경 11mm의 얕은 오목형 다이로 정제함으로써, 정제 중량 350mg, 경도 6.5kg의 정제 코어를 얻는다.
코팅액의 제조: 필요한 오파드라이II(백색)의 무게를 잰 후, 여러 차례에 나누어 필요한 양의 물을 배액 용기에 첨가하고, 전부 부은 다음, 교반 속도를 늦추어, 소용돌이가 사라지도록, 계속하여 30min 동안 교반하여 얻는다.
필름 코팅의 제조: 정제 코어를 코팅 솥에 넣고, 코팅 조건을 확인해야 하며, 메인 설비 속도 20r/min, 입풍 온도 40℃, 송풍 온도 30℃, 분사 압력 0.02Mpa, 분사 유량 1ml/min로 코팅하며, 안정된 다음 지속적으로 1.5h 동안 분사 코팅하며, 정제 표면이 매끄럽고, 색깔이 균일하며, 필름 코팅 검수 기준에 부합되면 합격이다. 코팅 후 무게는 5% 정도 증가한다.
실시예 14. 이소발레릴 스피라마이신III 정제(10,000알로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신III 원분 1,000g
저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스(5%) 92.5g
카르복시메틸스타치나트륨(3%) 55.5g
스테아린산마그네슘(1%) 18.5g
전분 총 중량 - 기타 원료와 보조재료
총 중량 1,850g
제조공정: 적당한 량의 전분을 취하여, 농도 15%로 희석한 후에, 크림처럼 될 때까지 가열하여, 접착제를 만들고; 주재료 이소발레릴 스피라마이신III, 보조재료 전분, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스, 카르복시 메틸 스타치나트륨, 스테아린산 마그네슘을 눈이 100개인 체로 각각 친다. 처방량에 따라, 필요한 만큼 주재료와 보조재료를 취하고; 이소발레릴 스피라마이신III, 전분, 저치환도 하이드록시프로필셀룰로오스를 충분히 골고루 섞은 후, 농도 15%로 희석한 전분 크림에 넣고 연제를 만들며, 눈이 14개인 체로 치고 알을 만들고, 50~60℃ 온도에서 건조하고, 수분은 3~5%로 제한해야 하며, 눈이 14개인 체로 침으로써 알을 정리하고, 카르복시 메틸 스타치나트륨과 스테아린산 마그네슘을 혼합하여, 입자의 함량을 측정하며; 입자의 함량에 따라, 정제의 무게를 측정하며, 정제를 프레스하여(Φ9mm 얕은 오목형 펀치), 정제 중량 차이를 검사하고; 검사 합격한 후 포장한다.
실시예 15. 이소발레릴 스피라마이신III 캡슐(10,000알로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신III 원분 1,000g
전분 1,080 - 이소발레릴 스피라마이신III 원분 중량
약용 3호 캡슐 1,000알
액체 파라핀 50ml
제조공정: 공정 처방에 따라 주재료 이소발레릴 스피라마이신III과 보조재료 약용 전분의 무게를 각각 단 다음, 혼합기에 넣어 1.5~2시간을 충분히 혼합하고; 표본을 추출하여 측정한 함량의 수치는 이론수치와 기본적으로 일치해야 하며(캡슐 하나의 내용량은 약 0.105g), 자동 캡슐기기 작동 요구에 따라 검증 합격한 약용 3호 캡슐 및 혼합된 포장을 기다리고 있는 원료를, 각각 포장용 기계에 넣어 충전하고, 충전된 캡슐에 대해 차이를 검증하며(±10%이내,<0.3g), 용해율은 요구에 부합되어야 하며, 검증 후 요구에 부합되는 캡슐을 폴리싱 머신에 넣고 액체 파라핀을 첨가하여 15~20분간 폴리싱한 다음, 꺼내어 완성품 포장 용기 점검을 진행한다.
실시예 16. 이소발레릴 스피라마이신III 드라이 시럽(10,000 팩으로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신III 원분 1,250g
구연산(0.5%) 15g
사카로즈 총 중량 - 기타 원료와 보조재료
총 중량 500g
색소(쿠르쿠민) 약 1g
제조공정: 고속 제트 분쇄기로 이소발레릴 스피라마이신III 원분, 구연산, 사카로즈를 각각 분쇄하여 알갱이로 만들고, 그 중에 85%는 눈이 300개인 체로 치고, 나머지 15%는 눈이 180개인 체로 치며, 분쇄된 가루를 처방에 따라 무게를 단 후 1~1.5시간 동안 충분히 혼합하여, 그 함량을 측정하고, 팩당 함량을 계산하며(이론적인 팩당 함량은 500mg), 혼합물을 비닐 포장용 기계에 넣고, 알루미늄 박지를 넣은 후, 분리기 제어 요구에 따라 나누어 담되, 팩당 함량 차이는 ±5% 이내로 제한해야 하고, 패킹하고 테스트에 합격하면 겉포장을 한다.
실시예 17. 이소발레릴 스피라마이신III 과립제(10,000팩으로 계산함)
처방:
이소발레릴 스피라마이신III 원분 1,250g
슈가파우더 20,000g
덱스트린 9,000g
5%PVP-K30 적당량
제조공정: 이소발레릴 스피라마이신III, 슈가파우더와 덱스트린을 눈이 120개인 체로 치고, 처방량에 따라 이소발레릴 스피라마이신III, 슈가파우더와 덱스트린 무게를 잰 후 균일하게 혼합하며, 균일하게 혼합한 상기 재료를 5%PVP-K30의 점액을 이용하여 연제를 만들고, 진동 과립기로 과립을 만들고, 70℃의 온도에서 건조하고, 과립을 정리하여, 테스트에 합격한 후에 분리하여 포장한다.
실시예 18. 이소발레릴 스피라마이신III 동결건조 주사용 분말
이소발레릴 스피라마이신III 500mg을 무게를 달아 몰 량이 동일한 아디프산과 균일하게 혼합하여 5ml의 정제수에 용해하여, 담황색 투명액체를 얻되, pH는 4.6~5.6 이어야 한다. 이어서 동결건조 프롭프엔트로 40mg의 마니톨을 넣고, 저온에서 쾌속으로 9h 냉동 후, 동결건조하여, 담황색의 푸석한 덩어리를 얻을 수 있으며, 사용 전에 10ml의 무균수를 사용하여 용해한다.
시험예 1. 항종양 활성에 대한 생물 측정
측정의 목적은 측정된 샘플의 체외 세포 증식에 대한 억제 작용 또는 세포 독성 활성을 평가하는 것이다.
세포주:
인체 유방암 세포 MCF-7 및 MDA-MB-231, 인체 간암 세포 HepG2, 인체 비소세포 폐암 세포 A549, 인체 대세포 폐암 세포 H460 및 H1299, 인체 신장 투명세포 선암 세포 786-O, 인체 신장 선암 세포 769-P, 인체 신경교종 세포 U251, 인체 교모세포종 세포 A172, 인체 조직 림프종 세포 U937, 인체 자궁경부암 세포 HeLa, 인체 전립선암 세포 PC3, 인체 췌장암 세포 PANC-1, 인체 식도암 세포 TE-1, 인체 위선암 세포 SGC7901, 인체 결장암 세포 HT-29, 인체 전골수성 백혈병 세포 HL-60, 인체 갑상선암 세포 TPC-1, 인체 방광암 세포 T-24.
시약제:
RPMI 1640 배양액, MEM 배양액, DMEM 저당 배양액 및 송아지 태아 혈청은 미국 Gibco사에서 구매하였고, 트립신, 글루타민, 페니실린, 스트렙토 마이신, 디메틸 술폭 시드(DMSO), 메틸 티아졸 테트라졸리움(MTT)은 미국 Sigma사에서 구매하였다.
측정 기구:
이산화탄소 인큐베이터(Sanyo, Japan), 효소 결합 면역 측정기(Tecan, Austria), 96 웰 배양 플레이트(Corning, USA), 도립 현미경(Motic, China).
동작 단계는 다음과 같다:
부착세포:
MCF-7, MDA-MB-231, HepG2, A549, H460, H1299, 786-O, 769-P, U251, A172, HeLa, PC3, PANC-1, TE-1, SGC7901, HT-29는 부착세포이며, 로그 생장기의 종양 부착 세포를 선택하여, 판크레아틴으로 소화한 다음, 10% 송아지 태아 혈청을 포함하는 배양액을 사용하여 4~5X104/ml의 세포 현탁액을 제조하고, 96 웰 배양 플레이트에 접종하여, 웰당 100μL씩, 37℃, 5%CO2에서 24h 배양한다. 실험군은 상이한 농도의 테스트 대상 샘플을 포함하는 이소발레릴 스피라마이신I, 이소발레릴 스피라마이신II, 이소발레릴 스피라마이신III 배양액으로 교체하고, 대조군은 동일 부피의 용매를 포함하는 배양액으로 교체하여, 각 그룹은 3개의 평행 홀을 구비하고, 37℃, 5%CO2에서 48h 배양한다. 상청액을 버리고, PBS를 사용하여 조심스럽게 3번 세척하고, 0.5mg/ml MTT를 함유하는 새로 제조된 배양액 100μL를 각 웰에 첨가하고, 37℃에서 계속하여 4h 배양한다. 상청액을 조심스럽게 버리고, DMSO 150μL를 첨가하고, 마이크로 발진기로 10min 동안 골고루 혼합한 다음, 효소 면역 측정기를 사용하여 492nm에서 광학밀도를 측정한다.
부유세포:
U937, HL-60은 부유 세포이며, 로그 생장기의 세포를 사용하여, 10% 송아지 태아 혈청을 포함하는 RPMI l640 배양액으로 2X105/ml의 세포 현탁액을 제조하고, 96 웰 배양 플레이트에 접종하여, 웰당 50μL, 37℃, 5%CO2로 24h 배양한다. 실험군에 상이한 농도의 테스트 대상 샘플을 포함하는 캐리마이신 배양액 50μL를 첨가하고, 대조군에는 동일 부피의 용매를 포함하는 배양액을 첨가하며, 각 그룹은 3개의 평행 홀을 구비하고, 37℃, 5%CO2에서 48h 배양하며, 5mg/ml MTT를 함유하는 새로 제조된 배양액 10μL를 각 웰에 첨가하고, 37℃에서 계속하여 4h 배양한다. 삼중용액(SDS 10g, 10M HCl 0.1mL, 이소부틸알콜 5mL를 증류수로 100mL까지 희석함) 100μL를 사용하여 결정을 용해하고, 37℃에서 12h 부화한다. 효소 면역 측정기를 사용하여 492nm에서 광학밀도를 측정한다.
결과 평가:
종양 세포에 대한 약물의 억제율은 하기 식에 따라 계산한다:
종양 세포 성장 억제율(%) = [A492(음성대조군) - A492(투여군)] / A492(음성대조군) X 100%
이에 근거하여 샘플의 반억제농도(IC50)를 얻는다.
결과:
인체 유방암 세포 MCF-7 및 MDA-MB-231, 인체 간암 세포 HepG2, 인체 비소세포 폐암 세포 A549, 인체 대세포 폐암 세포 H460 및 H1299, 인체 신장 투명세포 선암 세포 786-O, 인체 신장 선암 세포 769-P, 인체 신경교종 세포 U251, 인체 교모세포종 세포 A172, 인체 조직 림프종 세포 U937, 인체 자궁경부암 세포 HeLa, 인체 전립선암 세포 PC3, 인체 췌장암 세포 PANC-1, 인체 식도암 세포 TE-1, 인체 위선암 세포 SGC7901, 인체 결장암 세포 HT-29, 인체 전골수성 백혈병 세포 HL-60, 인체 갑상선암 세포 TPC-1, 인체 방광암 세포 T-24.
샘플에 대해 진행한 체외 항증식 활성 평가 결과는 표 1, 표 2 및 표 3과 같다:
결과에 따르면, 이소발레릴 스피라마이신I, 이소발레릴 스피라마이신II, 이소발레릴 스피라마이신III 샘플은 테스트된 모든 세포에 양호한 항증식 활성을 보인다.
시험예 2. 체내 시험
I. 인체 대세포 폐암 세포 H460 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 H460 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 4, 표 5).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 20.70%, 46.33% 및 70.11%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 14.22%, 34.43% 및 61.12%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 17.41%, 23.31% 및 63.93%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 56.56%, 49.00% 및 31.96%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 51.97%, 46.49% 및 37.89%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 63.03%, 42.54% 및 35.95%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
II. 인체 비소세포 폐암 H1299 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 H1299 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 6, 표 7).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 22.11%, 43.83% 및 69.95%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 17.32%, 44.21% 및 58.37%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 13.11%, 49.38% 및 62.78%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 89.42%, 49.81% 및 27.43%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 83.01%, 46.94% 및 36.86%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 89.88%, 48.11% 및 32.43%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
III. 인체 식도암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 TE-1 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 모델군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 8, 표 9).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 30.92%, 51.01% 및 69.71%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 24.87%, 43.78% 및 72.48%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 22.64%, 40.17% 및 65.46%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 60.55%, 40.70% 및 20.61%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 70.32%, 50.51% 및 36.49%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 66.52%, 50.71% 및 30.72%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
IV. 인체 위선암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 SGC7901 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 10, 표 11).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 31.56%, 53.13% 및 70.78%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 24.44%, 41.76% 및 70.24%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 21.68%, 41.13% 및 63.34%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 61.13%, 42.67% 및 20.23%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 70.48%, 51.42% 및 36.95%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 65.48%, 49.44% 및 30.34%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
V. 인체 전립선암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 PC3 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 12, 표 13).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 33.87%, 51.33% 및 71.01%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 23.49%, 40.16% 및 50.44%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 25.44%, 40.16% 및 60.37%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 70.43%, 49.14% 및 30.72%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 83.04%, 60.08% 및 44.48%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 75.75%, 55.02% 및 34.57%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
VI. 인체
유방암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 MCF-7 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a Υ b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 14, 표 15).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 31.10%, 51.72% 및 70.12%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 20.55%, 41.72% 및 56.81%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 26.75%, 39.08% 및 61.78%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 71.92%, 49.05% 및 30.80%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 79.23%, 60.58% 및 44.44%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 75.03%, 54.92% 및 34.91%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
VII. 인체
유방암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 MDA-MB-231 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 16, 표 17).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 22.84%, 55.17% 및 69.11%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 18.17%, 29.66% 및 58.91%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 24.35%, 21.01%62.93%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 69.71%, 44.18% 및 27.74%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 80.22%, 58.78% 및 30.89%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 68.36%, 50.12% 및 35.27%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
VIII. 인체 췌장암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 PANC-1 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 18, 표 19).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 31.10%, 51.72% 및 70.12%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 20.55%, 41.72% 및 56.81%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 26.75%, 39.08% 및 61.78%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 71.92%, 49.05% 및 30.80%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 79.23%, 60.58% 및 44.44%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 75.03%, 54.92% 및 34.91%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
IX.
인체 간암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 HepG-2 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 20, 표 21).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 24.43%, 57.93% 및 68.22%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 21.07%, 31.43% 및 61.56%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 38.92%, 60.54% 및 63.28%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 65.03%, 42.12% 및 27.49%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 81.03%, 57.02% 및 39.31%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 64.69%, 43.18% 및 32.71%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
X. 인체 비소세포 폐암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 A549 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 22, 표 23).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 24.00%, 58.10% 및 69.52%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 20.73%, 31.87% 및 60.19%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 37.99%, 55.95% 및 66.53%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 67.18%, 41.93% 및 28.35%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 83.41%, 58.75% 및 39.42%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 65.93%, 47.25% 및 33.04%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XI. 인체 신경교종 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 U251 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 24, 표 25).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 30.94%, 44.53% 및 69.21%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 10.91%, 15.81% 및 40.26%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 15.45%, 32.74% 및 59.56%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 76.40%, 44.54% 및 25.80%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 76.14%, 51.88% 및 43.26%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 68.16%, 54.34% 및 41.10%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XII.
인체 교모세포종 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 A172 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 26, 표 27).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 30.75%, 44.26% 및 68.79%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 10.85%, 15.71% 및 40.01%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 15.35%, 32.54% 및 59.19%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 74.49%, 43.43% 및 25.16%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 74.24%, 50.59% 및 42.18%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 66.45%, 52.89% 및 40.08%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XIII. 인체 림프종 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 U937 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 28, 표 29).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 41.73%, 50.73% 및 65.03%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 25.61%, 35.44% 및 43.63%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 41.19%, 53.03% 및 61.77%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 68.65%, 39.74% 및 35.25%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 74.19%, 52.10% 및 46.09%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 63.36%, 49.30% 및 38.66%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XIV. 인체 자궁경부암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 HeLa 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 30, 표 31).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 46.69%, 51.57% 및 65.55%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 30.67%, 42.90% 및 43.30%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 39.33%, 52.41% 및 61.68%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 69.18%, 39.57% 및 30.91%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 30.67%, 42.90% 및 43.30%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 39.33%, 52.41% 및 61.68%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XV. 인체 신장 투명세포 선암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 786-O 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 32, 표 33).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 34.70%, 39.22% 및 64.36%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 19.69%, 41.09% 및 60.00%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 35.80%, 52.14% 및 62.49%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 37.88%, 37.19% 및 36.89%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 76.92%, 53.61% 및 35.74%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 73.13%, 51.33% 및 34.20%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XVI. 인체 신장 세포 선암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 769-P 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 34, 표 35).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 33.68%, 47.33% 및 68.82%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 38.29%, 47.61% 및 61.79%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 40.87%, 60.50% 및 64.46%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 75.78%, 57.12% 및 36.88%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 68.22%, 42.64% 및 34.76%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 61.59%, 51.59% 및 35.55%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XVII. 인체 HT-29 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 HT-29 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 36, 표 37).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 16.10%, 49.72% 및 70.14%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 16.24%, 32.41% 및 55.74%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 19.22%, 41.35% 및 63.19%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 81.60%, 49.22% 및 29.11%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 84.18%, 79.34% 및 44.05%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 85.54%, 53.48% 및 35.63%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XVIII. 인체 HL-60 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 HL-60 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 38, 표 39).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 11.57%, 34.78% 및 64.19%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 15.92%, 29.48% 및 51.81%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 17.10%, 29.92% 및 55.05%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 84.96%, 59.54% 및 32.70%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 75.39%, 65.18% 및 41.36%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 76.09%, 61.90% 및 39.87%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XIX. 인체 갑상선암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 TPC-1 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 40, 표 41).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 23.88%, 57.28% 및 67.49%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 20.91%, 31.61% 및 62.04%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 39.06%, 60.25% 및 62.94%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 65.45%, 43.43% 및 28.11%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 86.15%, 59.08% 및 38.61%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 61.93%, 45.01% 및 34.75%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XX. 인체 방광암 누드 마우스 모델에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
로그 생장기 T-24 세포를 취하고, 트리판 블루를 이용한 색소 배제 시험 생존 세포 > 95%이며, 판크레아틴으로 소화한 다음, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, matrigel을 사용하여 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 누드 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피하에 마리당 0.2ml씩 세포를 접종하고, 접종 1일차로 기재한다. 종양이 ≥ 100mm3까지 성장한 후, 동물을 그룹당 6마리씩 11개 그룹: 모델군, 시클로포스파미드군, 이소발레릴 스피라마이신I 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군, 이소발레릴 스피라마이신III 25, 50 및 100mg/kg 3개 용량군에 무작위로 나눈다. 각 그룹의 동물에게 30일간 지속적으로 20ml/kg의 부피로 위관 투여한다. 약을 끊은 이튿날 마우스를 희생시켜, 지표를 측정한다. 투약 개시로부터 누드 마우스의 희생 시점까지, 3일마다 종양의 장경, 단경 및 체중을 기록한다.
종양 부피 및 상대 종양 증식률의 계산
3일마다 누드 마우스의 체중 및 이식 종양의 장경(a) 및 단경(b)을 측정하고, 하기 식에 따라 종양 부피(v), 상대 종양 부피(RTV) 및 상대 종양 증식률(T/C)을 계산하며, V = a X b2 / 2; RTV = V / V0이고(V0은 투약 이전의 종양 부피이고, V는 희생 이전의 종양 부피임), T/C(%) = 치료군 RTV / 모델 대조군 RTV Х 100%이다.
종양 성장 억제율의 계산
마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 종양을 완전한 상태로 적출하며, 혈액 얼룩 및 지방 등 비 종양 조직을 제거하고 종양 무게를 확인한 다음, 종양 성장 억제율을 계산한다. 각 그룹 마우스의 평균 종양 무게를 약효의 지표로 사용한다. 종양 성장 억제율(%) = (1 - 치료군 평균 종양 무게 / 모델군 평균 종양 무게) Х 100%.
테스트 결과에 따르면, 대조군에 비해, 각 투여군은 종양 성장 억제율, 종양 부피, 상대 종양 부피 및 상대 종양 증식률에 대해 모두 일정한 억제 작용이 있다(표 42, 표 43).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 20.55%, 49.20% 및 65.84%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 15.57%, 41.99% 및 59.25%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 성장 억제율은 각각 21.00%, 44.84% 및 61.30%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 종양 부피 및 상대 종양 부피는 모델군보다 현저히 낮다(P<0.05).
이소발레릴 스피라마이신I 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 77.78%, 58.92% 및 33.95%이다;
이소발레릴 스피라마이신II 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 81.39%, 64.89% 및 46.70%이다;
이소발레릴 스피라마이신III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 상대 종양 증식률은 각각 80.34%, 62.35% 및 39.39%이다;
이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III 저용량군, 중용량군, 고용량군 3개 그룹의 동물 체중은 모델군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
XXI. 마우스에 이종이식된 H
22
간암 세포 및 Lewis 폐암 세포 종양에 대한 억제 작용
마우스 고형 종양 모델의 구축
액체 질소에 동결 보존된 H22 세포주를 쿤밍 마우스 체내에 주입하여 소생시키고, 3대 후 복수를 취하여, 50ml 원심 분리 튜브에 넣고, 10ml의 0.9% 생리 식염수를 첨가하고, 1000rpm으로 5min 동안 실온에서 원심 분리하고, 상청액을 버린다. 10ml의 0.9% 생리 식염수를 첨가하고, 취타하여 균일하게 혼합한 다음, 계량하고 생리 식염수를 사용하여 5Х106개의 생존 세포/ml가 될 때까지 희석한다. 얼음물에 넣어 저장하고, 75% 에탄올로 마우스의 오른쪽 겨드랑이 피부를 소독한다. 쿤밍 마우스의 오른쪽 앞다리 겨드랑이 피하에 빠르게 접종하며, 한 마리에 0.2ml씩 접종한다.
Lewis 폐암 세포는 10% 송아지 태아 혈청을 포함하는 RPMI 1640 배양액을 사용하여, 37℃, 5%CO2의 인큐베이터에서 배양한다. 로그 생장기의 세포를 취하고, 0.25% 판크레아틴으로 소화한 다음, 세포를 수집하고, 원심 분리하고, 상청액을 버리고, 멸균 생리 식염수로 2번 세척하며, 세포를 생리 식염수에 현탁시키고, 트리판 블루 색소 배제 시험 생존 세포 분석은 95%보다 커야 하며, 세포를 통계한다. Lewis 세포 농도를 1X107/ml로 조절하며, 얼음물에 넣어 저장 한다. 75% 에탄올로 마우스의 우측 겨드랑이 피부를 소독하고, C57BL/6 마우스의 우측 겨드랑이 피하에 0.2mL를 신속하게 주사한다.
동물 그룹 분류 및 투약 방법
H22 간암 세포 모델에서, 접종 다음날, 종양을 접종한 마우스를 그룹당 10마리씩 무작위로 분류한다. 그룹에는: 모델 대조군, 양성 약물 시클로포스파미드 대조군(CTX, 26mg/kg), 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군이 포함된다. 각 그룹의 동물에게 7일간 지속적으로 위관 투여하며, 투약 부피는 20mg/kg이다.
Lewis 폐암 모델에서, 접종 이튿날, 종양을 접종한 마우스를 그룹당 10마리씩 무작위로 분류한다. 그룹에는: 모델 대조군, 양성 약물 시클로포스파미드 대조군(CTX, 30mg/kg), 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군이 포함된다. 각 그룹의 동물에게 지속적으로 15일간 위관 투여하며, 투약 부피는 20ml/kg이다.
종양 억제율의 계산:
종양 마우스에 마지막으로 투약한 이튿날 마우스의 무게를 확인한 후 희생시키고, 피하 종양 덩어리를 제거하여 무게를 달고, 각 그룹 암의 평균 무게를 확인하여, 종양 억제율을 계산한다.
종양 억제율 = (1-T/C)X100%
T: 약물 투여 그룹의 평균 종양 무게; C: 블랭크 대조군의 평균 종양 무게.
결과:
1. 마우스에 이종이식된 H
22
간암 종양에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
표 44의 결과에서 보다시피, 쿤밍 마우스 H22 간암에 대한 억제율은 양성 대조약 시클로포스파미드의 73.03%이다. 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군은 마우스 H22 간암의 성장에 모두 뚜렷한 억제 작용이 있다.
정상 대조군에 비해 양성 대조약 시클로포스파미드군의 체중은 약간 줄었다. 이소발레릴 스피라마이신 각 약물 투여군의 동물 체중은 약물 투여 전에 비해 모두 증가 하였으며, 모델 대조군에 비해 뚜렷한 차이가 없다.
2. 마우스에 이종이식된 Lewis
폐암 종양에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 억제 작용
표 46의 결과에서 보다시피, 마우스 Lewis 폐암에 대한 양성 대조약 시클로포스파미드의 억제율은 76.43%이다. 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군은 마우스 Lewis 폐암의 성장에 모두 뚜렷한 억제 작용이 있다. 이소발레릴 스피라마이신 각 약물 투여군의 동물 체중은 약물 투여 전에 비해 모두 증가 하였으며, 모델 대조군에 비해 뚜렷한 차이가 없다.
XXII. 종양 마우스의 면역 기능에 대한 이소발레릴 스피라마이신I, II 및 III의 영향
방법
1. 종양 마우스의 흉선 지수 및 비장 지수에 대한 영향
종양 마우스를 희생시킨 다음, 비장과 흉선을 취하여 무게를 달고, 비장 지수 및 흉선 지수를 계산한다.
2. 종양 마우스의 림프 세포 증식 활성 및 자연 살해(NK) 세포 활성에 대한 영향
2.1 비장 림프 세포의 제조
무혈청 RPMI 1640 배양액을 접시에 넣고, 얼음 위에 놓고, 무균 상태에서 비장을 취하고, 멸균 유리 슬라이드로 비장을 부드럽게 분쇄하여, 단일 세포 현탁액을 제조한다. 이중층 멸균 거즈로 여과하고, 무혈청 RPMI 1640 배양액으로 2회 세척하고, 1,500rpm으로 5min 동안 원심 분리하고, 상청액을 제거한다. 2mL의 적혈구 가수분해 용액을 첨가하고, 2min 동안 그대로 둔 다음, RPMI 1640 배양액 8mL를 첨가하여, 1,500rpm으로 5min 동안 원심 분리하고, 상청액을 제거하고, RPMI 1640 배양액으로 2회 세척한다. 트리판 블루 색소 배제 시험 생존 세포를 계산하고, 생존 세포는 >95%여야 한다. 부피율 10%인 송아지 태아 혈청을 포함하는 RPMI 1640 배양액을 사용하여 단일 세포 현탁액을 제조한다.
2.2 비장 림프 세포의 증식 활성 테스트
비장 세포 현탁액을 취하고, 세포 밀도를 1Х107/mL로 조절한다. 각 마우스에 하기 웰을 조성한다: A. 대조군 웰: 100μL의 RPMI 1640 배양액 첨가; B. 콘카나발린A(ConA) 자극 웰: 콘카나발린A(ConA) 용액 100μL(10mg/L) 첨가; C. 세균내독소(LPS) 자극 웰: 세균내독소(LPS) 용액 100μL(20mg/L) 첨가. 상기 세포를 96웰 플레이트에 첨가한 다음, 상기 각 웰에 100μL의 비장 세포 현탁액을 첨가한다. 배양 플레이트를 부피율 5%인 CO2, 37℃, 포화 습도 조건에서 72h 부화한 다음, 각 웰에 MTT 용액(5g/L) 10μL를 첨가하고, 동일 조건으로 계속하여 4h 부화한 다음 배양을 마친다. 삼중용액(SDS 10g, 10M HCl 0.1mL, 아이소부틸알콜 5mL를, 증류수로 100mL까지 희석함) 100μL를 첨가하고, 10min 동안 진동시키고, 결정을 충분히 용해하고, 570nm 지점에서 각 웰의 흡광도(OD) 값을 테스트하고, 림프 세포 증식률을 계산한다. 림프 세포 증식률(%) = [(T-C)/C] X100%이고, 식에서 T는 자극군 웰의 흡광도 값이고, C는 대조군 웰의 흡광도 값이다.
2.3 자연 살해(NK) 세포의 활성 테스트
비장 세포 현탁액을 취하고, 세포 밀도를 1Х107/mL로 조절한다(작동세포). K562 세포 현탁액을 제조하고, 세포 밀도를 1Х105/mL로 조절한다(표적세포). 각 마우스에 하기 웰을 조성한다: A. 작동세포: 표적세포 웰(수량 비율은 20:1), 20μL의 세포 현탁액 및 100μL의 K562 세포 현탁액 첨가; B. 작동세포 대조군 웰, 100μL의 비장 세포 현탁액 및 100μL의 RPMI 1640 배양액 첨가; C. 표적세포 대조군 웰, 100μL의 K562 세포 현탁액 및 100μL의 RPMI 1640 배양액 첨가. 상기 세포를 96웰 플레이트에 첨가한 다음, 배양 플레이트를 부피율 5%인 CO2, 37℃, 포화 습도 조건에서 22h 배양한 다음, 각 웰에 MTT 용액(5g/L) 10 μL를 첨가하고, 동일 조건으로 계속하여 4h 부화한 다음 배양을 마친다. 삼중용액(SDS 10g, 10M HCl 0.1mL, 아이소부틸알콜 5mL를, 증류수로 100mL까지 희석함) 100μL를 첨가하고, 10min 동안 진동시키고, 결정을 충분히 용해하고, 490nm 지점에서 각 웰의 흡광도 값을 테스트하고, NK 세포 활성을 계산한다. NK 세포 활성(%) = [TO-(S-E)]/TOХ100%, 식에서 TO는 목표세포 대조군 웰의 흡광도 값이고, S는 작동세포 대조군 웰의 흡광도 값이며, E는 작동세포의 흡광도 값이다.
결과
1. H
22
간암 종양 마우스의 흉선 지수 및 비장 지수에 대한 영향
표 48의 결과에서 보다시피, 양성 대조약 시클로포스파미드군의 동물 흉선 지수 및 비장 지수는 대조군에 비해 현저하게 떨어졌다(P<0.01). 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군의 동물 흉선 지수는 대조군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
2. Lewis
폐암 종양 마우스의 흉선 지수 및 비장 지수에 대한 영향
표 49의 결과에서 보다시피, 양성 대조약 시클로포스파미드군의 동물 비장 지수는 대조군에 비해 현저하게 떨어졌다(P<0.01). 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군의 동물 흉선 지수는 대조군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
3. Lewis
폐암 종양 마우스의 NK 세포 활성에 대한 영향
표 50의 결과에서 보다시피, 양성 대조약 시클로포스파미드군의 동물 NK 세포 활성 지수는 대조군에 비해 현저하게 떨어졌다(P<0.05). 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군의 동물 NK 세포 활성은 대조군에 비해 현저하게 증가했다(P<0.01).
4. Lewis
폐암 종양 마우스의 림프 세포 증식 활성에 대한 영향
표 51의 결과에서 보다시피, 양성 대조약 시클로포스파미드군의 동물 림프 세포 활성은 뚜렷하게 억제된다(P<0.05). 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군의 동물 림프 세포 활성은 대조군에 비해 현저하게 증가했다(P<0.05, P<0.01).
5. A549 폐암 종양 마우스의 비장 지수에 대한 영향
표 52의 결과에서 보다시피, 양성 대조약 시클로포스파미드군의 동물 비장 지수는 대조군에 비해 현저하게 떨어졌다(P<0.01). 이소발레릴 스피라마이신I 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신II 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군; 이소발레릴 스피라마이신III 13, 26, 52mg/kg 3개 용량군의 동물 비장 지수는 대조군에 비해 뚜렷한 변화가 없다.
상기 내용은 본 발명의 비교적 바람직한 실시예일뿐, 어떠한 형식으로든 본 발명을 한정하는 것은 아니며, 본 발명은 비교적 바람직한 실시예를 들어 상기와 같이 공개했지만, 본 발명을 한정하는 것은 아니며, 본 발명을 익숙히 아는 기술자가 본 발명의 기술 방안을 벗어나지 않는 범위 내에서, 상기 제시된 기술 내용을 적용하여 일부를 변경하거나 동등한 변화를 주는 동등한 실시예로 수정할 경우, 본 발명의 기술 방안의 내용을 벗어나지 않는 한, 본 발명의 기술적 본질에 근거하여 상기 실시예에 대해 임의의 간단한 수정, 동등한 변화 및 수정을 할 경우, 모두 본 발명의 방안에 포함된다.
Claims (14)
- 종양을 치료 또는 예방하는 약학 조성물에 있어서, 상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III을 포함하며,
상기 종양은 유방암, 간암, 폐암, 신장암, 뇌종양, 자궁경부암, 전립선암, 악성 림프종, 췌장암, 식도암, 위암, 결장암, 갑상선암, 방광암, 악성 피부종양, 림프종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 뇌종양은 신경교종 또는 수막종이고, 상기 위암은 위선암인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III과 약학적으로 수용 가능한 보조재료로 제조된 각종 제형이며, 또는
상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 약학적으로 수용 가능한 염과 약학적으로 수용 가능한 보조재료로 제조된 각종 제형인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III 및 항종양 약물과 약학적으로 수용 가능한 보조재료로 제조된 각종 제형이며, 또는
상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 약학적으로 수용 가능한 염 및 항종양 약물과 약학적으로 수용 가능한 보조재료로 제조된 각종 제형인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III을 포함하는 제1 약제와 항종양 약물을 포함하는 제2 약제의 결합이며, 또는
상기 약학 조성물은 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 약학적으로 수용 가능한 염의 제1 약제와 항종양 약물을 포함하는 제2 약제의 결합인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제4항 또는 제5항에 있어서,
상기 항종양 약물은 화학 요법, 방사선 요법, 표적 치료 또는 면역 요법 치료 약물인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 약학 조성물에서 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 용량은 5~1500mg이며; 또는
상기 약학 조성물에서 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 용량은 50~1000mg이며; 또는
상기 약학 조성물에서 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 용량은 100~400mg인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 제5항에 있어서,
상기 제1 약제에서 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 용량은 5~1500mg이며; 또는
상기 제1 약제에서 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 용량은 50~1000mg이며; 또는
상기 제1 약제에서 이소발레릴 스피라마이신I 또는 III의 용량은 100~400mg인 것을 특징으로 하는 약학 조성물. - 삭제
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