RU2761264C2 - Способы лечения мышечной дистрофии - Google Patents
Способы лечения мышечной дистрофии Download PDFInfo
- Publication number
- RU2761264C2 RU2761264C2 RU2018121289A RU2018121289A RU2761264C2 RU 2761264 C2 RU2761264 C2 RU 2761264C2 RU 2018121289 A RU2018121289 A RU 2018121289A RU 2018121289 A RU2018121289 A RU 2018121289A RU 2761264 C2 RU2761264 C2 RU 2761264C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- ano5
- muscle
- seq
- acid sequence
- nucleic acid
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 87
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 title claims abstract description 70
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 116
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 94
- 101000928364 Homo sapiens Anoctamin-5 Proteins 0.000 claims abstract description 65
- 102100036524 Anoctamin-5 Human genes 0.000 claims abstract description 62
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 claims abstract description 55
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract description 44
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 43
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 40
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 37
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 30
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims abstract description 24
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 22
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims abstract description 13
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 4
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 7
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 claims description 152
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 claims description 122
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 claims description 110
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 claims description 110
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 claims description 83
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 claims description 49
- 201000009623 Myopathy Diseases 0.000 claims description 49
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 42
- 235000017471 coenzyme Q10 Nutrition 0.000 claims description 42
- ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q10 Natural products COC1=C(OC)C(=O)C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N coenzyme Q10 Chemical compound COC1=C(OC)C(=O)C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)=C(C)C1=O ACTIUHUUMQJHFO-UPTCCGCDSA-N 0.000 claims description 40
- 235000019136 lipoic acid Nutrition 0.000 claims description 39
- 229960002663 thioctic acid Drugs 0.000 claims description 39
- 229940110767 coenzyme Q10 Drugs 0.000 claims description 37
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 33
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 33
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 33
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 33
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 claims description 31
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 claims description 30
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 28
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims description 27
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims description 27
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims description 27
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 25
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 21
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 claims description 21
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 21
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 21
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 21
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 21
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 claims description 18
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 claims description 18
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 claims description 18
- 101150008952 ANO5 gene Proteins 0.000 claims description 17
- 101100269860 Homo sapiens ANO5 gene Proteins 0.000 claims description 17
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 claims description 17
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 claims description 17
- 102000004168 Dysferlin Human genes 0.000 claims description 16
- 108090000620 Dysferlin Proteins 0.000 claims description 16
- 235000021466 carotenoid Nutrition 0.000 claims description 16
- 150000001747 carotenoids Chemical class 0.000 claims description 16
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims description 16
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 claims description 16
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims description 16
- 208000022583 Qualitative or quantitative defects of dysferlin Diseases 0.000 claims description 15
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 15
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 claims description 14
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims description 14
- 208000006304 Bethlem myopathy Diseases 0.000 claims description 12
- 102100036912 Desmin Human genes 0.000 claims description 12
- 108010044052 Desmin Proteins 0.000 claims description 12
- 201000009564 autosomal recessive limb-girdle muscular dystrophy type 2A Diseases 0.000 claims description 12
- 210000005045 desmin Anatomy 0.000 claims description 12
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 claims description 11
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 claims description 10
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 claims description 10
- 108090000362 Lymphotoxin-beta Proteins 0.000 claims description 10
- 230000036461 convulsion Effects 0.000 claims description 10
- 101001023021 Homo sapiens LIM domain-binding protein 3 Proteins 0.000 claims description 9
- 102100035112 LIM domain-binding protein 3 Human genes 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 9
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 claims description 7
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 7
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims description 7
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 claims description 7
- 210000000107 myocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims description 5
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims description 5
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 claims description 5
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 claims description 5
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims description 5
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 claims description 5
- 241000649046 Adeno-associated virus 11 Species 0.000 claims description 5
- 241000649047 Adeno-associated virus 12 Species 0.000 claims description 5
- 241000300529 Adeno-associated virus 13 Species 0.000 claims description 5
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 claims description 5
- 206010021143 Hypoxia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010028347 Muscle twitching Diseases 0.000 claims description 5
- 108010065729 Troponin I Proteins 0.000 claims description 5
- 239000003862 glucocorticoid Substances 0.000 claims description 5
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M lipoate Chemical compound [O-]C(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 6
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims 3
- 201000000306 sarcoidosis Diseases 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 104
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 45
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 35
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 33
- AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 29
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 28
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 25
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 23
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 23
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 23
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 23
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 20
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 19
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 18
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 17
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 17
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 17
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 17
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 15
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 15
- 101000783356 Naja sputatrix Cytotoxin Proteins 0.000 description 14
- 239000002340 cardiotoxin Substances 0.000 description 14
- 231100000677 cardiotoxin Toxicity 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 14
- 102000019259 Succinate Dehydrogenase Human genes 0.000 description 13
- 108010012901 Succinate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 13
- 230000006870 function Effects 0.000 description 13
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 201000000585 muscular atrophy Diseases 0.000 description 13
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 13
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 13
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 13
- 230000008602 contraction Effects 0.000 description 12
- 210000003470 mitochondria Anatomy 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 11
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 11
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 11
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 10
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 10
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 10
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 10
- 210000000518 sarcolemma Anatomy 0.000 description 10
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 10
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 description 10
- AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N (R)-lipoic acid Chemical compound OC(=O)CCCC[C@@H]1CCSS1 AGBQKNBQESQNJD-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 9
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 9
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 9
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 9
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 9
- 108010030844 2-methylcitrate synthase Proteins 0.000 description 8
- 108010071536 Citrate (Si)-synthase Proteins 0.000 description 8
- 102000006732 Citrate synthase Human genes 0.000 description 8
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 8
- 230000008437 mitochondrial biogenesis Effects 0.000 description 8
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000004220 muscle function Effects 0.000 description 8
- 230000009756 muscle regeneration Effects 0.000 description 8
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 8
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 8
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 8
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 206010028289 Muscle atrophy Diseases 0.000 description 7
- 208000037328 Qualitative or quantitative defects of sarcoglycan Diseases 0.000 description 7
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 7
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 7
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 7
- 208000010532 sarcoglycanopathy Diseases 0.000 description 7
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 6
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 6
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 6
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 6
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 6
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 6
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 6
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 description 6
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 5
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 5
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 5
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 5
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 5
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 5
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 description 5
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 5
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 5
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 5
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 5
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 description 5
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 5
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 5
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 5
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 description 5
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 description 5
- 208000031782 Anoctamin-5-related limb-girdle muscular dystrophy R12 Diseases 0.000 description 4
- 241000255789 Bombyx mori Species 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 201000009342 Limb-girdle muscular dystrophy Diseases 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 4
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 4
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 4
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000035508 accumulation Effects 0.000 description 4
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 239000005441 aurora Substances 0.000 description 4
- 201000009538 autosomal recessive limb-girdle muscular dystrophy type 2L Diseases 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 4
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 4
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 4
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 4
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 4
- 208000002086 myofibrillar myopathy Diseases 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Chemical compound [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 4
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 4
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 4
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 3
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 3
- 102100028188 Cystatin-F Human genes 0.000 description 3
- 101710169749 Cystatin-F Proteins 0.000 description 3
- 108010069440 Dystrophin-Associated Protein Complex Proteins 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 3
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 3
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 102100027697 Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1 Human genes 0.000 description 3
- 101710109122 Sarcoplasmic/endoplasmic reticulum calcium ATPase 1 Proteins 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N all-trans-retinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-OVSJKPMPSA-N 0.000 description 3
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 230000003542 behavioural effect Effects 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 230000027721 electron transport chain Effects 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 238000005755 formation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N genistein Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O TZBJGXHYKVUXJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 3
- 102000050919 human ANO5 Human genes 0.000 description 3
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101150066555 lacZ gene Proteins 0.000 description 3
- 108010044056 leucyl-phenylalanine Proteins 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 3
- 230000004898 mitochondrial function Effects 0.000 description 3
- 230000020763 muscle atrophy Effects 0.000 description 3
- 230000004118 muscle contraction Effects 0.000 description 3
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 3
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 3
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 3
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 3
- 235000021194 placebo diet Nutrition 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 3
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 210000001908 sarcoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 3
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 13-cis retinol Natural products OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 3,4-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 YQUVCSBJEUQKSH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100524317 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep40 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100524321 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep68 gene Proteins 0.000 description 2
- 101100524324 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep78 gene Proteins 0.000 description 2
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 2
- HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N Arg-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N HJVGMOYJDDXLMI-AVGNSLFASA-N 0.000 description 2
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001203868 Autographa californica Species 0.000 description 2
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 230000004543 DNA replication Effects 0.000 description 2
- 241000450599 DNA viruses Species 0.000 description 2
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 2
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 2
- 241000537219 Deltabaculovirus Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 2
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N Glu-Phe-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O JDUKCSSHWNIQQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 2
- VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N Glu-Val-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O VIPDPMHGICREIS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SVZFKLBRCYCIIY-CYDGBPFRSA-N Ile-Pro-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O SVZFKLBRCYCIIY-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 2
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 2
- 102000004218 Insulin-Like Growth Factor I Human genes 0.000 description 2
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 description 2
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N L-leucyl-L-phenylalanine Natural products CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 KFKWRHQBZQICHA-STQMWFEESA-N 0.000 description 2
- OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O OGCQGUIWMSBHRZ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 2
- SVBJIZVVYJYGLA-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SVBJIZVVYJYGLA-DCAQKATOSA-N 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101100269861 Mus musculus Ano5 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- KZRQONDKKJCAOL-DKIMLUQUSA-N Phe-Leu-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O KZRQONDKKJCAOL-DKIMLUQUSA-N 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N Thr-Val-Thr Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O KZTLZZQTJMCGIP-ZJDVBMNYSA-N 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- XWCYDHJOKKGVHC-UHFFFAOYSA-N Vitamin A2 Chemical compound OCC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C=CCC1(C)C XWCYDHJOKKGVHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 2
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N all-trans-alpha-carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1C(C)=CCCC1(C)C ANVAOWXLWRTKGA-XHGAXZNDSA-N 0.000 description 2
- KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N alpha-L-glutamyl-L-glutamic acid Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O KOSRFJWDECSPRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 108010013835 arginine glutamate Proteins 0.000 description 2
- 108010068265 aspartyltyrosine Proteins 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- FDSDTBUPSURDBL-LOFNIBRQSA-N canthaxanthin Chemical compound CC=1C(=O)CCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)CCC1(C)C FDSDTBUPSURDBL-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 2
- 206010061592 cardiac fibrillation Diseases 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N chlorobutanol Chemical compound CC(C)(O)C(Cl)(Cl)Cl OSASVXMJTNOKOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 2
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N curcumin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(\C=C\C(=O)CC(=O)\C=C\C=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-FCXRPNKRSA-N 0.000 description 2
- VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O cyanidin cation Chemical compound [O+]=1C2=CC(O)=CC(O)=C2C=C(O)C=1C1=CC=C(O)C(O)=C1 VEVZSMAEJFVWIL-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 2
- ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N daidzein Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=COC2=CC(O)=CC=C2C1=O ZQSIJRDFPHDXIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 238000002567 electromyography Methods 0.000 description 2
- 210000001671 embryonic stem cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- 230000002600 fibrillogenic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 210000003811 finger Anatomy 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 108010042598 glutamyl-aspartyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 108010055341 glutamyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 230000007954 hypoxia Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 239000007972 injectable composition Substances 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000003041 ligament Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 2
- JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N nitro blue tetrazolium(2+) Chemical compound COC1=CC(C=2C=C(OC)C(=CC=2)[N+]=2N(N=C(N=2)C=2C=CC=CC=2)C=2C=CC(=CC=2)[N+]([O-])=O)=CC=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 JPXMTWWFLBLUCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N octanoic acid Chemical compound CCCCCCCC(O)=O WWZKQHOCKIZLMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 2
- 150000007965 phenolic acids Chemical class 0.000 description 2
- 108010073025 phenylalanylphenylalanine Proteins 0.000 description 2
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 108010090894 prolylleucine Proteins 0.000 description 2
- NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N reduced coenzyme Q9 Natural products COC1=C(O)C(C)=C(CC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC NPCOQXAVBJJZBQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 101150066583 rep gene Proteins 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 2
- 102220000858 rs137854521 Human genes 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 230000035939 shock Effects 0.000 description 2
- PCMORTLOPMLEFB-ONEGZZNKSA-N sinapic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC(OC)=C1O PCMORTLOPMLEFB-ONEGZZNKSA-N 0.000 description 2
- 210000002460 smooth muscle Anatomy 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J sodium diphosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O FQENQNTWSFEDLI-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 2
- 229940048086 sodium pyrophosphate Drugs 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 2
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 235000019818 tetrasodium diphosphate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001577 tetrasodium phosphonato phosphate Substances 0.000 description 2
- 108010061238 threonyl-glycine Proteins 0.000 description 2
- 210000003813 thumb Anatomy 0.000 description 2
- QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N trans-caffeic acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-DUXPYHPUSA-N 0.000 description 2
- KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N trans-lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C KBPHJBAIARWVSC-XQIHNALSSA-N 0.000 description 2
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 2
- 238000011870 unpaired t-test Methods 0.000 description 2
- 108010073969 valyllysine Proteins 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 2
- 239000001100 (2S)-5,7-dihydroxy-2-(3-hydroxy-4-methoxyphenyl)chroman-4-one Substances 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N (3R,3'R)-beta,beta-carotene-3,3'-diol Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-JLGXGRJMSA-N 0.000 description 1
- ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N (E)-3,4,5-trihydroxycinnamic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 ACEAELOMUCBPJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M (E)-Ferulic acid Natural products COC1=CC(\C=C\C([O-])=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-M 0.000 description 1
- FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N (S)-naringenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 FTVWIRXFELQLPI-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 3-O-Caffeoylquinic acid Natural products O[C@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-FWCWNIRPSA-N 0.000 description 1
- FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 FJKROLUGYXJWQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100036009 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Human genes 0.000 description 1
- 101150079978 AGRN gene Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 101100524319 Adeno-associated virus 2 (isolate Srivastava/1982) Rep52 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000701242 Adenoviridae Species 0.000 description 1
- 108010057856 Adenovirus E2 Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000256173 Aedes albopictus Species 0.000 description 1
- 102100040026 Agrin Human genes 0.000 description 1
- 108700019743 Agrin Proteins 0.000 description 1
- FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N Ala-Ala-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN FJVAQLJNTSUQPY-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N Ala-Arg-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JAMAWBXXKFGFGX-KZVJFYERSA-N 0.000 description 1
- BLGHHPHXVJWCNK-GUBZILKMSA-N Ala-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BLGHHPHXVJWCNK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JPGBXANAQYHTLA-DRZSPHRISA-N Ala-Gln-Phe Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JPGBXANAQYHTLA-DRZSPHRISA-N 0.000 description 1
- CBCCCLMNOBLBSC-XVYDVKMFSA-N Ala-His-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CBCCCLMNOBLBSC-XVYDVKMFSA-N 0.000 description 1
- HHRAXZAYZFFRAM-CIUDSAMLSA-N Ala-Leu-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HHRAXZAYZFFRAM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NINQYGGNRIBFSC-CIUDSAMLSA-N Ala-Lys-Ser Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NINQYGGNRIBFSC-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N Ala-Pro-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O XWFWAXPOLRTDFZ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- JNLDTVRGXMSYJC-UVBJJODRSA-N Ala-Pro-Trp Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(O)=O JNLDTVRGXMSYJC-UVBJJODRSA-N 0.000 description 1
- MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HCBKAOZYACJUEF-XQXXSGGOSA-N Ala-Thr-Gln Chemical compound N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)O HCBKAOZYACJUEF-XQXXSGGOSA-N 0.000 description 1
- JJHBEVZAZXZREW-LFSVMHDDSA-N Ala-Thr-Phe Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](NC(=O)[C@H](C)N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(O)=O JJHBEVZAZXZREW-LFSVMHDDSA-N 0.000 description 1
- WZGZDOXCDLLTHE-SYWGBEHUSA-N Ala-Trp-Ile Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)NC(=O)[C@H](C)N)=CNC2=C1 WZGZDOXCDLLTHE-SYWGBEHUSA-N 0.000 description 1
- 239000012109 Alexa Fluor 568 Substances 0.000 description 1
- 239000012110 Alexa Fluor 594 Substances 0.000 description 1
- 206010002027 Amyotrophy Diseases 0.000 description 1
- 102100022992 Anoctamin-1 Human genes 0.000 description 1
- 102100022991 Anoctamin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102100036523 Anoctamin-6 Human genes 0.000 description 1
- 208000019901 Anxiety disease Diseases 0.000 description 1
- KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N Arg-Asp-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)NCC(O)=O KMSHNDWHPWXPEC-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N Arg-Asp-Tyr Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 FBLMOFHNVQBKRR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- FEZJJKXNPSEYEV-CIUDSAMLSA-N Arg-Gln-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O FEZJJKXNPSEYEV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- YBIAYFFIVAZXPK-AVGNSLFASA-N Arg-His-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O YBIAYFFIVAZXPK-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- GNYUVVJYGJFKHN-RVMXOQNASA-N Arg-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N GNYUVVJYGJFKHN-RVMXOQNASA-N 0.000 description 1
- LLUGJARLJCGLAR-CYDGBPFRSA-N Arg-Ile-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N LLUGJARLJCGLAR-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N Arg-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OTZMRMHZCMZOJZ-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- NMRHDSAOIURTNT-RWMBFGLXSA-N Arg-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N NMRHDSAOIURTNT-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N Arg-Lys-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O RIQBRKVTFBWEDY-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- GSUFZRURORXYTM-STQMWFEESA-N Arg-Phe-Gly Chemical compound NC(N)=NCCC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CC1=CC=CC=C1 GSUFZRURORXYTM-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N Arg-Phe-Ser Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N AOHKLEBWKMKITA-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QCTOLCVIGRLMQS-HRCADAONSA-N Arg-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)C(=O)O QCTOLCVIGRLMQS-HRCADAONSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 241000490515 Ascalapha odorata Species 0.000 description 1
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 1
- KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asn-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KXFCBAHYSLJCCY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N Asn-Glu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BZMWJLLUAKSIMH-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- COUZKSSMBFADSB-AVGNSLFASA-N Asn-Glu-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N COUZKSSMBFADSB-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N Asn-His-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O SUEIIIFUBHDCCS-PBCZWWQYSA-N 0.000 description 1
- WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N Asn-Leu-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(O)=O WIDVAWAQBRAKTI-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- NTWOPSIUJBMNRI-KKUMJFAQSA-N Asn-Lys-Tyr Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 NTWOPSIUJBMNRI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- MVXJBVVLACEGCG-PCBIJLKTSA-N Asn-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MVXJBVVLACEGCG-PCBIJLKTSA-N 0.000 description 1
- RBOBTTLFPRSXKZ-BZSNNMDCSA-N Asn-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O RBOBTTLFPRSXKZ-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- GZXOUBTUAUAVHD-ACZMJKKPSA-N Asn-Ser-Glu Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O GZXOUBTUAUAVHD-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KZYSHAMXEBPJBD-JRQIVUDYSA-N Asn-Thr-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O KZYSHAMXEBPJBD-JRQIVUDYSA-N 0.000 description 1
- IPPFAOCLQSGHJV-WFBYXXMGSA-N Asn-Trp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O IPPFAOCLQSGHJV-WFBYXXMGSA-N 0.000 description 1
- YNCHFVRXEQFPBY-BQBZGAKWSA-N Asp-Gly-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N YNCHFVRXEQFPBY-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N Asp-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N SPKCGKRUYKMDHP-GUDRVLHUSA-N 0.000 description 1
- DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N Asp-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O DWOGMPWRQQWPPF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- QNMKWNONJGKJJC-NHCYSSNCSA-N Asp-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QNMKWNONJGKJJC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N Asp-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O UZFHNLYQWMGUHU-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- PWAIZUBWHRHYKS-MELADBBJSA-N Asp-Phe-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=CC=C2)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N)C(=O)O PWAIZUBWHRHYKS-MELADBBJSA-N 0.000 description 1
- AHWRSSLYSGLBGD-CIUDSAMLSA-N Asp-Pro-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O AHWRSSLYSGLBGD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- HICVMZCGVFKTPM-BQBZGAKWSA-N Asp-Pro-Gly Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O HICVMZCGVFKTPM-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- BRRPVTUFESPTCP-ACZMJKKPSA-N Asp-Ser-Glu Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O BRRPVTUFESPTCP-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N Asp-Val-Pro Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)N QPDUWAUSSWGJSB-NGZCFLSTSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N Astaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C(=C/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)/C)C=CC=C(/C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)C(O)CC2(C)C JEBFVOLFMLUKLF-IFPLVEIFSA-N 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108700003860 Bacterial Genes Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N Caffeoylquinic acid Natural products CC(CCC(=O)C(C)C1C(=O)CC2C3CC(O)C4CC(O)CCC4(C)C3CCC12C)C(=O)O PZIRUHCJZBGLDY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007590 Calpain Human genes 0.000 description 1
- 108010032088 Calpain Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000557626 Corvus corax Species 0.000 description 1
- XXDLUZLKHOVPNW-IHRRRGAJSA-N Cys-Arg-Tyr Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CS)N)O XXDLUZLKHOVPNW-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- FEJCUYOGOBCFOQ-ACZMJKKPSA-N Cys-Asp-Gln Chemical compound C(CC(=O)N)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N FEJCUYOGOBCFOQ-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- KXUKWRVYDYIPSQ-CIUDSAMLSA-N Cys-Leu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXUKWRVYDYIPSQ-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MFMDKTLJCUBQIC-MXAVVETBSA-N Cys-Phe-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O MFMDKTLJCUBQIC-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- DQUWSUWXPWGTQT-DCAQKATOSA-N Cys-Pro-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CS DQUWSUWXPWGTQT-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 101100447432 Danio rerio gapdh-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108020005199 Dehydrogenases Proteins 0.000 description 1
- UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N Demethoxycapillarisin Natural products C1=CC(O)=CC=C1OC1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 UBSCDKPKWHYZNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 1
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 241000255925 Diptera Species 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- 102100032248 Dysferlin Human genes 0.000 description 1
- 102000007623 Dystroglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010071885 Dystroglycans Proteins 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031780 Endonuclease Human genes 0.000 description 1
- 108010042407 Endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 101150112014 Gapdh gene Proteins 0.000 description 1
- SXIJQMBEVYWAQT-GUBZILKMSA-N Gln-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N SXIJQMBEVYWAQT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- RBWKVOSARCFSQQ-FXQIFTODSA-N Gln-Gln-Ser Chemical compound NC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O RBWKVOSARCFSQQ-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- PNENQZWRFMUZOM-DCAQKATOSA-N Gln-Glu-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O PNENQZWRFMUZOM-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N Gln-Leu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LGIKBBLQVSWUGK-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- DOMHVQBSRJNNKD-ZPFDUUQYSA-N Gln-Met-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O DOMHVQBSRJNNKD-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- LHMWTCWZARHLPV-CIUDSAMLSA-N Gln-Met-Ser Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N LHMWTCWZARHLPV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- QBEWLBKBGXVVPD-RYUDHWBXSA-N Gln-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N QBEWLBKBGXVVPD-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- QFXNFFZTMFHPST-DZKIICNBSA-N Gln-Phe-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N QFXNFFZTMFHPST-DZKIICNBSA-N 0.000 description 1
- MKRDNSWGJWTBKZ-GVXVVHGQSA-N Gln-Val-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)N MKRDNSWGJWTBKZ-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- GCYFUZJHAXJKKE-KKUMJFAQSA-N Glu-Arg-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O GCYFUZJHAXJKKE-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- RJONUNZIMUXUOI-GUBZILKMSA-N Glu-Asn-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RJONUNZIMUXUOI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VAIWPXWHWAPYDF-FXQIFTODSA-N Glu-Asp-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O VAIWPXWHWAPYDF-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- XHWLNISLUFEWNS-CIUDSAMLSA-N Glu-Gln-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O XHWLNISLUFEWNS-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- WPLGNDORMXTMQS-FXQIFTODSA-N Glu-Gln-Ser Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O WPLGNDORMXTMQS-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Cys Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NUSWUSKZRCGFEX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- OGNJZUXUTPQVBR-BQBZGAKWSA-N Glu-Gly-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O OGNJZUXUTPQVBR-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- DRLVXRQFROIYTD-GUBZILKMSA-N Glu-His-Asn Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N DRLVXRQFROIYTD-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- YVYVMJNUENBOOL-KBIXCLLPSA-N Glu-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N YVYVMJNUENBOOL-KBIXCLLPSA-N 0.000 description 1
- VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N Glu-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O VGUYMZGLJUJRBV-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N Glu-Leu-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O NJCALAAIGREHDR-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N Glu-Lys-Arg Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(O)=O SJJHXJDSNQJMMW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- YKBUCXNNBYZYAY-MNXVOIDGSA-N Glu-Lys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O YKBUCXNNBYZYAY-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N Glu-Lys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ILWHFUZZCFYSKT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- JHSRJMUJOGLIHK-GUBZILKMSA-N Glu-Met-Glu Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N JHSRJMUJOGLIHK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N Glu-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O JWNZHMSRZXXGTM-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N Glu-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MXJYXYDREQWUMS-XKBZYTNZSA-N 0.000 description 1
- RXJFSLQVMGYQEL-IHRRRGAJSA-N Glu-Tyr-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 RXJFSLQVMGYQEL-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BGVYNAQWHSTTSP-BYULHYEWSA-N Gly-Asn-Ile Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O BGVYNAQWHSTTSP-BYULHYEWSA-N 0.000 description 1
- IXKRSKPKSLXIHN-YUMQZZPRSA-N Gly-Cys-Leu Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O IXKRSKPKSLXIHN-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- UYPPAMNTTMJHJW-KCTSRDHCSA-N Gly-Ile-Trp Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O UYPPAMNTTMJHJW-KCTSRDHCSA-N 0.000 description 1
- XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N Gly-Ile-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XVYKMNXXJXQKME-XEGUGMAKSA-N 0.000 description 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N Gly-Lys-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CCCCN VEPBEGNDJYANCF-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- MHZXESQPPXOING-KBPBESRZSA-N Gly-Lys-Phe Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O MHZXESQPPXOING-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- DUAWRXXTOQOECJ-JSGCOSHPSA-N Gly-Tyr-Val Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O DUAWRXXTOQOECJ-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N H-Gly-Phe-OH Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 JBCLFWXMTIKCCB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 108091027305 Heteroduplex Proteins 0.000 description 1
- MWAJSVTZZOUOBU-IHRRRGAJSA-N His-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 MWAJSVTZZOUOBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- LSQHWKPPOFDHHZ-YUMQZZPRSA-N His-Asp-Gly Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)NCC(=O)O)N LSQHWKPPOFDHHZ-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- WGVPDSNCHDEDBP-KKUMJFAQSA-N His-Asp-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O WGVPDSNCHDEDBP-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- VTZYMXGGXOFBMX-DJFWLOJKSA-N His-Ile-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O VTZYMXGGXOFBMX-DJFWLOJKSA-N 0.000 description 1
- PYNPBMCLAKTHJL-SRVKXCTJSA-N His-Pro-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PYNPBMCLAKTHJL-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000783681 Homo sapiens 5'-AMP-activated protein kinase catalytic subunit alpha-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000757261 Homo sapiens Anoctamin-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000757263 Homo sapiens Anoctamin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000928362 Homo sapiens Anoctamin-6 Proteins 0.000 description 1
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 241001135569 Human adenovirus 5 Species 0.000 description 1
- 229920002153 Hydroxypropyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- ASCFJMSGKUIRDU-ZPFDUUQYSA-N Ile-Arg-Gln Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O ASCFJMSGKUIRDU-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- HDODQNPMSHDXJT-GHCJXIJMSA-N Ile-Asn-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O HDODQNPMSHDXJT-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- JDAWAWXGAUZPNJ-ZPFDUUQYSA-N Ile-Glu-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N JDAWAWXGAUZPNJ-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- KIMHKBDJQQYLHU-PEFMBERDSA-N Ile-Glu-Asp Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N KIMHKBDJQQYLHU-PEFMBERDSA-N 0.000 description 1
- CDGLBYSAZFIIJO-RCOVLWMOSA-N Ile-Gly-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)NCC(=O)NCC([O-])=O CDGLBYSAZFIIJO-RCOVLWMOSA-N 0.000 description 1
- VOBYAKCXGQQFLR-LSJOCFKGSA-N Ile-Gly-Val Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O VOBYAKCXGQQFLR-LSJOCFKGSA-N 0.000 description 1
- QZZIBQZLWBOOJH-PEDHHIEDSA-N Ile-Ile-Val Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O QZZIBQZLWBOOJH-PEDHHIEDSA-N 0.000 description 1
- PWUMCBLVWPCKNO-MGHWNKPDSA-N Ile-Leu-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 PWUMCBLVWPCKNO-MGHWNKPDSA-N 0.000 description 1
- NZGTYCMLUGYMCV-XUXIUFHCSA-N Ile-Lys-Arg Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)N NZGTYCMLUGYMCV-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- OVDKXUDMKXAZIV-ZPFDUUQYSA-N Ile-Lys-Asn Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N OVDKXUDMKXAZIV-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- RENBRDSDKPSRIH-HJWJTTGWSA-N Ile-Phe-Met Chemical compound N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O RENBRDSDKPSRIH-HJWJTTGWSA-N 0.000 description 1
- CIDLJWVDMNDKPT-FIRPJDEBSA-N Ile-Phe-Phe Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC2=CC=CC=C2)C(=O)O)N CIDLJWVDMNDKPT-FIRPJDEBSA-N 0.000 description 1
- NSPNUMNLZNOPAQ-SJWGOKEGSA-N Ile-Tyr-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)N2CCC[C@@H]2C(=O)O)N NSPNUMNLZNOPAQ-SJWGOKEGSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108010065920 Insulin Lispro Proteins 0.000 description 1
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 1
- 108010079091 KRDS peptide Proteins 0.000 description 1
- PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N L-Arginyl-L-glutamin-acetat Natural products NC(=N)NCCCC(N)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(O)=O PMGDADKJMCOXHX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N L-Leucyl-L-Arginyl-L-Proline Natural products CC(C)CC(N)C(=O)NC(CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCCC1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N L-valyl-L-tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(NC(=O)C(N)C(C)C)C(O)=O)=CNC2=C1 LZDNBBYBDGBADK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000255777 Lepidoptera Species 0.000 description 1
- CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N Leu-Ala-Glu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O CQQGCWPXDHTTNF-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N Leu-Ala-Trp Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=CC=CC=C21)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N HXWALXSAVBLTPK-NUTKFTJISA-N 0.000 description 1
- IBMVEYRWAWIOTN-RWMBFGLXSA-N Leu-Arg-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(O)=O IBMVEYRWAWIOTN-RWMBFGLXSA-N 0.000 description 1
- WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N Leu-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O WUFYAPWIHCUMLL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N Leu-Asn-Lys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N POJPZSMTTMLSTG-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N Leu-Asn-Phe Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 MDVZJYGNAGLPGJ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N Leu-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DLCOFDAHNMMQPP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N Leu-Glu-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O QVFGXCVIXXBFHO-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- HVJVUYQWFYMGJS-GVXVVHGQSA-N Leu-Glu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HVJVUYQWFYMGJS-GVXVVHGQSA-N 0.000 description 1
- YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N Leu-Gly-Pro Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O YFBBUHJJUXXZOF-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- BKTXKJMNTSMJDQ-AVGNSLFASA-N Leu-His-Gln Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)N)C(=O)O)N BKTXKJMNTSMJDQ-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N Leu-Ile-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O DBSLVQBXKVKDKJ-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N Leu-Lys-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O HVHRPWQEQHIQJF-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- MVVSHHJKJRZVNY-ACRUOGEOSA-N Leu-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O MVVSHHJKJRZVNY-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- FYPWFNKQVVEELI-ULQDDVLXSA-N Leu-Phe-Val Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 FYPWFNKQVVEELI-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Arg Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N IDGZVZJLYFTXSL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N Leu-Ser-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RGUXWMDNCPMQFB-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- GOFJOGXGMPHOGL-DCAQKATOSA-N Leu-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C GOFJOGXGMPHOGL-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N Leu-Thr-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O VDIARPPNADFEAV-WEDXCCLWSA-N 0.000 description 1
- UIIMIKFNIYPDJF-WDSOQIARSA-N Leu-Trp-Met Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC(C)C)=CNC2=C1 UIIMIKFNIYPDJF-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- BGGTYDNTOYRTTR-MEYUZBJRSA-N Leu-Tyr-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CC=C(C=C1)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)N)O BGGTYDNTOYRTTR-MEYUZBJRSA-N 0.000 description 1
- YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N Leu-Val-Lys Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN YQFZRHYZLARWDY-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- MSFITIBEMPWCBD-ULQDDVLXSA-N Leu-Val-Tyr Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 MSFITIBEMPWCBD-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N Lycopene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1C(=C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=C)CCCC2(C)C UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N Lycophyll Natural products OC/C(=C/CC/C(=C\C=C\C(=C/C=C/C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=C(/CC/C=C(/CO)\C)\C)/C)\C)/C)\C)/C)/C JEVVKJMRZMXFBT-XWDZUXABSA-N 0.000 description 1
- PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N Lys-Ala-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O PNPYKQFJGRFYJE-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- NRQRKMYZONPCTM-CIUDSAMLSA-N Lys-Asp-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O NRQRKMYZONPCTM-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GKFNXYMAMKJSKD-NHCYSSNCSA-N Lys-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O GKFNXYMAMKJSKD-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- YVMQJGWLHRWMDF-MNXVOIDGSA-N Lys-Gln-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)N)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YVMQJGWLHRWMDF-MNXVOIDGSA-N 0.000 description 1
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- GRADYHMSAUIKPS-DCAQKATOSA-N Lys-Glu-Gln Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O GRADYHMSAUIKPS-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VEGLGAOVLFODGC-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VEGLGAOVLFODGC-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- SPCHLZUWJTYZFC-IHRRRGAJSA-N Lys-His-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O SPCHLZUWJTYZFC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- YWJQHDDBFAXNIR-MXAVVETBSA-N Lys-Ile-His Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CN=CN1)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N YWJQHDDBFAXNIR-MXAVVETBSA-N 0.000 description 1
- ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N Lys-Ile-Leu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N ZXFRGTAIIZHNHG-AJNGGQMLSA-N 0.000 description 1
- PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N Lys-Ile-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN PRSBSVAVOQOAMI-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 1
- VUTWYNQUSJWBHO-BZSNNMDCSA-N Lys-Leu-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O VUTWYNQUSJWBHO-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N Lys-Tyr-Pro Chemical compound C1C[C@@H](N(C1)C(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N)C(=O)O IEIHKHYMBIYQTH-YESZJQIVSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 108010059343 MM Form Creatine Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- IZLCDZDNZFEDHB-DCAQKATOSA-N Met-Cys-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N IZLCDZDNZFEDHB-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- GPVLSVCBKUCEBI-KKUMJFAQSA-N Met-Gln-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O GPVLSVCBKUCEBI-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- PQPMMGQTRQFSDA-SRVKXCTJSA-N Met-Glu-His Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(O)=O PQPMMGQTRQFSDA-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DGNZGCQSVGGYJS-BQBZGAKWSA-N Met-Gly-Asp Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(O)=O DGNZGCQSVGGYJS-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- QGRJTULYDZUBAY-ZPFDUUQYSA-N Met-Ile-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O QGRJTULYDZUBAY-ZPFDUUQYSA-N 0.000 description 1
- HZLSUXCMSIBCRV-RVMXOQNASA-N Met-Ile-Pro Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)N HZLSUXCMSIBCRV-RVMXOQNASA-N 0.000 description 1
- QLESZRANMSYLCZ-CYDGBPFRSA-N Met-Pro-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O QLESZRANMSYLCZ-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- CIIJWIAORKTXAH-FJXKBIBVSA-N Met-Thr-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(O)=O CIIJWIAORKTXAH-FJXKBIBVSA-N 0.000 description 1
- WXJLBSXNUHIGSS-OSUNSFLBSA-N Met-Thr-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WXJLBSXNUHIGSS-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- YIGCDRZMZNDENK-UNQGMJICSA-N Met-Thr-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O YIGCDRZMZNDENK-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- YGNUDKAPJARTEM-GUBZILKMSA-N Met-Val-Ala Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O YGNUDKAPJARTEM-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 102000008934 Muscle Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010074084 Muscle Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010062575 Muscle contracture Diseases 0.000 description 1
- 208000029549 Muscle injury Diseases 0.000 description 1
- 102100031790 Myelin expression factor 2 Human genes 0.000 description 1
- 101710107751 Myelin expression factor 2 Proteins 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 201000002481 Myositis Diseases 0.000 description 1
- IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N Myricetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 IKMDFBPHZNJCSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N N-L-arginyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CCCN=C(N)N WYBVBIHNJWOLCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N N-L-cysteinyl-L-phenylalanine Natural products SCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XZFYRXDAULDNFX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N N-glycyl-L-proline Natural products NCC(=O)N1CCCC1C(O)=O KZNQNBZMBZJQJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010002311 N-glycylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N Neochlorogenin-saeure Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O CWVRJTMFETXNAD-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 1
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 1
- 206010030113 Oedema Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- KIAWKQJTSGRCSA-AVGNSLFASA-N Phe-Asn-Glu Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N KIAWKQJTSGRCSA-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- WMGVYPPIMZPWPN-SRVKXCTJSA-N Phe-Asp-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N WMGVYPPIMZPWPN-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- KYYMILWEGJYPQZ-IHRRRGAJSA-N Phe-Glu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KYYMILWEGJYPQZ-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N Phe-His-Asn Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)N RVRRHFPCEOVRKQ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- BYAIIACBWBOJCU-URLPEUOOSA-N Phe-Ile-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BYAIIACBWBOJCU-URLPEUOOSA-N 0.000 description 1
- KDYPMIZMXDECSU-JYJNAYRXSA-N Phe-Leu-Glu Chemical compound OC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 KDYPMIZMXDECSU-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N Phe-Leu-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 MSHZERMPZKCODG-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- JKJSIYKSGIDHPM-WBAXXEDZSA-N Phe-Phe-Ala Chemical compound C[C@H](NC(=O)[C@H](Cc1ccccc1)NC(=O)[C@@H](N)Cc1ccccc1)C(O)=O JKJSIYKSGIDHPM-WBAXXEDZSA-N 0.000 description 1
- RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N Phe-Phe-Lys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RBRNEFJTEHPDSL-ACRUOGEOSA-N 0.000 description 1
- AGTHXWTYCLLYMC-FHWLQOOXSA-N Phe-Tyr-Glu Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 AGTHXWTYCLLYMC-FHWLQOOXSA-N 0.000 description 1
- ZOGICTVLQDWPER-UFYCRDLUSA-N Phe-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O ZOGICTVLQDWPER-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- MWQXFDIQXIXPMS-UNQGMJICSA-N Phe-Val-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC1=CC=CC=C1)N)O MWQXFDIQXIXPMS-UNQGMJICSA-N 0.000 description 1
- OOUTWVMJGMVRQF-DOYZGLONSA-N Phoenicoxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)C(=O)C(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)C(=O)CCC2(C)C OOUTWVMJGMVRQF-DOYZGLONSA-N 0.000 description 1
- 102100030477 Plectin Human genes 0.000 description 1
- 108010054050 Plectin Proteins 0.000 description 1
- 101710182846 Polyhedrin Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- ILMLVTGTUJPQFP-FXQIFTODSA-N Pro-Asp-Asp Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O ILMLVTGTUJPQFP-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N Pro-Asp-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 KPDRZQUWJKTMBP-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N Pro-Gly-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H]1CCCN1 UIMCLYYSUCIUJM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N Pro-Leu-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 FXGIMYRVJJEIIM-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- CDGABSWLRMECHC-IHRRRGAJSA-N Pro-Lys-His Chemical compound C1C[C@H](NC1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC2=CN=CN2)C(=O)O CDGABSWLRMECHC-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QGLFRQCECIWXFA-RCWTZXSCSA-N Pro-Met-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@@H]1CCCN1)O QGLFRQCECIWXFA-RCWTZXSCSA-N 0.000 description 1
- AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N Pro-Phe-Gly Chemical compound C([C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H]1NCCC1)C1=CC=CC=C1 AJBQTGZIZQXBLT-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- GFHOSBYCLACKEK-GUBZILKMSA-N Pro-Pro-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O GFHOSBYCLACKEK-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N Pro-Ser-Glu Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O FNGOXVQBBCMFKV-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N Pro-Ser-Ser Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H]1CCCN1 MKGIILKDUGDRRO-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N Pro-Thr-Asn Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WVXQQUWOKUZIEG-VEVYYDQMSA-N 0.000 description 1
- 101710150114 Protein rep Proteins 0.000 description 1
- LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M Pyruvate Chemical compound CC(=O)C([O-])=O LCTONWCANYUPML-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013614 RNA sample Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 101100409194 Rattus norvegicus Ppargc1b gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710152114 Replication protein Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000009661 Repressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010034634 Repressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108091027981 Response element Proteins 0.000 description 1
- QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N Resveratrol Natural products OC1=CC=CC(C=CC=2C=C(O)C(O)=CC=2)=C1 QNVSXXGDAPORNA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 241000220317 Rosa Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 1
- FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N Ser-Arg-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O FCRMLGJMPXCAHD-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N Ser-Arg-Trp Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(O)=O HZWAHWQZPSXNCB-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asp-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KNZQGAUEYZJUSQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- QPFJSHSJFIYDJZ-GHCJXIJMSA-N Ser-Asp-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CO QPFJSHSJFIYDJZ-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- DSSOYPJWSWFOLK-CIUDSAMLSA-N Ser-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O DSSOYPJWSWFOLK-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N Ser-His-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC=N1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O CICQXRWZNVXFCU-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N Ser-Leu-Lys Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O UBRMZSHOOIVJPW-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N Ser-Leu-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IXZHZUGGKLRHJD-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- XKFJENWJGHMDLI-QWRGUYRKSA-N Ser-Phe-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)NCC(O)=O XKFJENWJGHMDLI-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N Ser-Phe-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UPLYXVPQLJVWMM-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HHJFMHQYEAAOBM-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N Ser-Ser-Arg Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCNC(N)=N KQNDIKOYWZTZIX-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- VFWQQZMRKFOGLE-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Cys Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O VFWQQZMRKFOGLE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N Ser-Ser-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BMKNXTJLHFIAAH-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N Ser-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O PYTKULIABVRXSC-BWBBJGPYSA-N 0.000 description 1
- HAYADTTXNZFUDM-IHRRRGAJSA-N Ser-Tyr-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O HAYADTTXNZFUDM-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 244000000231 Sesamum indicum Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 1
- 241000256251 Spodoptera frugiperda Species 0.000 description 1
- 206010042566 Superinfection Diseases 0.000 description 1
- SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N Thr-Asn-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SKHPKKYKDYULDH-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- RKDFEMGVMMYYNG-WDCWCFNPSA-N Thr-Gln-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O RKDFEMGVMMYYNG-WDCWCFNPSA-N 0.000 description 1
- GMXIJHCBTZDAPD-QPHKQPEJSA-N Thr-Ile-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)N GMXIJHCBTZDAPD-QPHKQPEJSA-N 0.000 description 1
- MECLEFZMPPOEAC-VOAKCMCISA-N Thr-Leu-Lys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N)O MECLEFZMPPOEAC-VOAKCMCISA-N 0.000 description 1
- DCRHJDRLCFMEBI-RHYQMDGZSA-N Thr-Lys-Met Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(O)=O DCRHJDRLCFMEBI-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- SIEZEMFJLYRUMK-YTWAJWBKSA-N Thr-Met-Pro Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N)O SIEZEMFJLYRUMK-YTWAJWBKSA-N 0.000 description 1
- LKJCABTUFGTPPY-HJGDQZAQSA-N Thr-Pro-Gln Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O LKJCABTUFGTPPY-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- VTMGKRABARCZAX-OSUNSFLBSA-N Thr-Pro-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O VTMGKRABARCZAX-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N Thr-Thr-Ser Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ZMYCLHFLHRVOEA-HEIBUPTGSA-N 0.000 description 1
- KAJRRNHOVMZYBL-IRIUXVKKSA-N Thr-Tyr-Gln Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O KAJRRNHOVMZYBL-IRIUXVKKSA-N 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 108700029229 Transcriptional Regulatory Elements Proteins 0.000 description 1
- 241000255993 Trichoplusia ni Species 0.000 description 1
- 102000004903 Troponin Human genes 0.000 description 1
- 108090001027 Troponin Proteins 0.000 description 1
- TWJDQTTXXZDJKV-BPUTZDHNSA-N Trp-Arg-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O TWJDQTTXXZDJKV-BPUTZDHNSA-N 0.000 description 1
- OBWQLWYNNZPWGX-QEJZJMRPSA-N Trp-Gln-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O OBWQLWYNNZPWGX-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- QEJHHFFFCUDPDV-WDSOQIARSA-N Trp-His-Val Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC1=CN=CN1)NC(=O)[C@H](CC2=CNC3=CC=CC=C32)N QEJHHFFFCUDPDV-WDSOQIARSA-N 0.000 description 1
- UPNRACRNHISCAF-SZMVWBNQSA-N Trp-Lys-Gln Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(O)=O)=CNC2=C1 UPNRACRNHISCAF-SZMVWBNQSA-N 0.000 description 1
- QJIOKZXDGFZQJP-OYDLWJJNSA-N Trp-Trp-Arg Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CC1=CNC2=C1C=CC=C2)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O QJIOKZXDGFZQJP-OYDLWJJNSA-N 0.000 description 1
- UIRVSEPRMWDVEW-RNXOBYDBSA-N Trp-Tyr-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)NC(=O)[C@H](CC3=CNC4=CC=CC=C43)N UIRVSEPRMWDVEW-RNXOBYDBSA-N 0.000 description 1
- OSMTVLSRTQDWHJ-JBACZVJFSA-N Tyr-Glu-Trp Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 OSMTVLSRTQDWHJ-JBACZVJFSA-N 0.000 description 1
- KCPFDGNYAMKZQP-KBPBESRZSA-N Tyr-Gly-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O KCPFDGNYAMKZQP-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N Tyr-Leu-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O KSCVLGXNQXKUAR-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- GYBVHTWOQJMYAM-HRCADAONSA-N Tyr-Met-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC2=CC=C(C=C2)O)N GYBVHTWOQJMYAM-HRCADAONSA-N 0.000 description 1
- VBFVQTPETKJCQW-RPTUDFQQSA-N Tyr-Phe-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O VBFVQTPETKJCQW-RPTUDFQQSA-N 0.000 description 1
- PHKQVWWHRYUCJL-HJOGWXRNSA-N Tyr-Phe-Tyr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O PHKQVWWHRYUCJL-HJOGWXRNSA-N 0.000 description 1
- FGVFBDZSGQTYQX-UFYCRDLUSA-N Tyr-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O FGVFBDZSGQTYQX-UFYCRDLUSA-N 0.000 description 1
- BIWVVOHTKDLRMP-ULQDDVLXSA-N Tyr-Pro-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O BIWVVOHTKDLRMP-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 1
- HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N Tyr-Ser-Phe Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 HRHYJNLMIJWGLF-BZSNNMDCSA-N 0.000 description 1
- LUMQYLVYUIRHHU-YJRXYDGGSA-N Tyr-Ser-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O LUMQYLVYUIRHHU-YJRXYDGGSA-N 0.000 description 1
- GAKBTSMAPGLQFA-JNPHEJMOSA-N Tyr-Thr-Tyr Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 GAKBTSMAPGLQFA-JNPHEJMOSA-N 0.000 description 1
- AKRHKDCELJLTMD-BVSLBCMMSA-N Tyr-Trp-Arg Chemical compound C1=CC=C2C(=C1)C(=CN2)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC3=CC=C(C=C3)O)N AKRHKDCELJLTMD-BVSLBCMMSA-N 0.000 description 1
- LVILBTSHPTWDGE-PMVMPFDFSA-N Tyr-Trp-Lys Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 LVILBTSHPTWDGE-PMVMPFDFSA-N 0.000 description 1
- MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N Tyr-Tyr-Ala Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 MWUYSCVVPVITMW-IGNZVWTISA-N 0.000 description 1
- WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N Tyr-Tyr-Gly Chemical compound C([C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)NCC(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 WYOBRXPIZVKNMF-IRXDYDNUSA-N 0.000 description 1
- KRXFXDCNKLANCP-CXTHYWKRSA-N Tyr-Tyr-Ile Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C=CC(O)=CC=1)C1=CC=C(O)C=C1 KRXFXDCNKLANCP-CXTHYWKRSA-N 0.000 description 1
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 1
- 102000011856 Utrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010075653 Utrophin Proteins 0.000 description 1
- OGNMURQZFMHFFD-NHCYSSNCSA-N Val-Asn-Lys Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N OGNMURQZFMHFFD-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- BWVHQINTNLVWGZ-ZKWXMUAHSA-N Val-Cys-Asp Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)N BWVHQINTNLVWGZ-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- BRPKEERLGYNCNC-NHCYSSNCSA-N Val-Glu-Arg Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N BRPKEERLGYNCNC-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- BVWPHWLFGRCECJ-JSGCOSHPSA-N Val-Gly-Tyr Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)N BVWPHWLFGRCECJ-JSGCOSHPSA-N 0.000 description 1
- FTKXYXACXYOHND-XUXIUFHCSA-N Val-Ile-Leu Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O FTKXYXACXYOHND-XUXIUFHCSA-N 0.000 description 1
- LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)[C@@H](C)O)C(O)=O LCHZBEUVGAVMKS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- GVNLOVJNNDZUHS-RHYQMDGZSA-N Val-Thr-Lys Chemical compound [H]N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O GVNLOVJNNDZUHS-RHYQMDGZSA-N 0.000 description 1
- OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N Val-Thr-Ser Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C(C)C)N)O OFTXTCGQJXTNQS-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- YLBNZCJFSVJDRJ-KJEVXHAQSA-N Val-Thr-Tyr Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(O)=O YLBNZCJFSVJDRJ-KJEVXHAQSA-N 0.000 description 1
- XNLUVJPMPAZHCY-JYJNAYRXSA-N Val-Val-Phe Chemical compound CC(C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 XNLUVJPMPAZHCY-JYJNAYRXSA-N 0.000 description 1
- FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N Vitamin A Natural products OC/C=C(/C)\C=C\C=C(\C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C FPIPGXGPPPQFEQ-BOOMUCAASA-N 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N Z-zeaxanthin Natural products C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1C=CC(C)=CC=CC(C)=CC=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C[C@@H](O)CC1(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LQFQNGICSA-N 0.000 description 1
- QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCC(O)C1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C QOPRSMDTRDMBNK-RNUUUQFGSA-N 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 108700010877 adenoviridae proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N all-trans beta-carotene Natural products CC=1CCCC(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- OBODKGDXEIUEIH-DAWLFQHYSA-N all-trans-3-hydroxyretinol Chemical compound OC\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CC(O)CC1(C)C OBODKGDXEIUEIH-DAWLFQHYSA-N 0.000 description 1
- JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N all-trans-Zeaxanthin Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=C(C)CC(O)CC2(C)C JKQXZKUSFCKOGQ-LOFNIBRQSA-N 0.000 description 1
- 239000011795 alpha-carotene Substances 0.000 description 1
- 235000003903 alpha-carotene Nutrition 0.000 description 1
- ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N alpha-carotene Natural products C(=C\C=C\C=C(/C=C/C=C(\C=C\C=1C(C)(C)CCCC=1C)/C)\C)(\C=C\C=C(/C=C/[C@H]1C(C)=CCCC1(C)C)\C)/C ANVAOWXLWRTKGA-HLLMEWEMSA-N 0.000 description 1
- OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N alpha-ethylcaproic acid Natural products CCCCC(CC)C(O)=O OBETXYAYXDNJHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010050025 alpha-glutamyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 238000000540 analysis of variance Methods 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 description 1
- 235000010208 anthocyanin Nutrition 0.000 description 1
- 239000004410 anthocyanin Substances 0.000 description 1
- 229930002877 anthocyanin Natural products 0.000 description 1
- 150000004636 anthocyanins Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 230000036506 anxiety Effects 0.000 description 1
- XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N apigenin Natural products C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 XADJWCRESPGUTB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008714 apigenin Nutrition 0.000 description 1
- KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N apigenin Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=CC(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 KZNIFHPLKGYRTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940117893 apigenin Drugs 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010008355 arginyl-glutamine Proteins 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 108010077245 asparaginyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 108010093581 aspartyl-proline Proteins 0.000 description 1
- 235000013793 astaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001168 astaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940022405 astaxanthin Drugs 0.000 description 1
- MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N astaxanthin Chemical compound C([C@H](O)C(=O)C=1C)C(C)(C)C=1/C=C/C(/C)=C/C=C/C(/C)=C/C=C/C=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)C(=O)[C@@H](O)CC1(C)C MQZIGYBFDRPAKN-ZWAPEEGVSA-N 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 description 1
- 210000001142 back Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013734 beta-carotene Nutrition 0.000 description 1
- 239000011648 beta-carotene Substances 0.000 description 1
- TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N beta-carotene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2=CCCCC2(C)C TUPZEYHYWIEDIH-WAIFQNFQSA-N 0.000 description 1
- 229960002747 betacarotene Drugs 0.000 description 1
- 229920002988 biodegradable polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004621 biodegradable polymer Substances 0.000 description 1
- 230000008436 biogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 210000002459 blastocyst Anatomy 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000004883 caffeic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940074360 caffeic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002308 calcification Effects 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 235000012682 canthaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001659 canthaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940008033 canthaxanthin Drugs 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N carbonyl sulfide Chemical compound O=C=S JJWKPURADFRFRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000001196 cardiac muscle myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 108091092356 cellular DNA Proteins 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000000460 chlorine Substances 0.000 description 1
- 229910052801 chlorine Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004926 chlorobutanol Drugs 0.000 description 1
- 229940074393 chlorogenic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000001368 chlorogenic acid Nutrition 0.000 description 1
- CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N chlorogenic acid Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)C[C@H]1OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C(O)=C1 CWVRJTMFETXNAD-JUHZACGLSA-N 0.000 description 1
- FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N chlorogenic acid Natural products O[C@@H]1C[C@](O)(C[C@@H](CC(=O)C=Cc2ccc(O)c(O)c2)[C@@H]1O)C(=O)O FFQSDFBBSXGVKF-KHSQJDLVSA-N 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 1
- BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N cis-3-O-p-coumaroylquinic acid Natural products O[C@H]1C[C@@](O)(C[C@@H](OC(=O)C=Cc2ccc(O)cc2)[C@@H]1O)C(=O)O BMRSEYFENKXDIS-KLZCAUPSSA-N 0.000 description 1
- QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N cis-caffeic acid Natural products OC(=O)C=CC1=CC=C(O)C(O)=C1 QAIPRVGONGVQAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 208000006111 contracture Diseases 0.000 description 1
- 238000011443 conventional therapy Methods 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000012754 curcumin Nutrition 0.000 description 1
- 239000004148 curcumin Substances 0.000 description 1
- 229940109262 curcumin Drugs 0.000 description 1
- 235000007336 cyanidin Nutrition 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004292 cytoskeleton Anatomy 0.000 description 1
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 1
- 235000007240 daidzein Nutrition 0.000 description 1
- 238000013480 data collection Methods 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 238000009795 derivation Methods 0.000 description 1
- 229960000633 dextran sulfate Drugs 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N diferuloylmethane Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C=CC(=O)CC(=O)C=CC=2C=C(OC)C(O)=CC=2)=C1 VFLDPWHFBUODDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K dihydroxy(stearato)aluminium Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)O[Al](O)O UGMCXQCYOVCMTB-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 231100001129 embryonic lethality Toxicity 0.000 description 1
- 210000002257 embryonic structure Anatomy 0.000 description 1
- BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N ethenylcyclopentane Chemical compound C=CC1CCCC1 BEFDCLMNVWHSGT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 235000001785 ferulic acid Nutrition 0.000 description 1
- KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N ferulic acid Chemical compound COC1=CC(\C=C\C(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-HWKANZROSA-N 0.000 description 1
- 229940114124 ferulic acid Drugs 0.000 description 1
- KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N ferulic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC=C1O KSEBMYQBYZTDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 1
- 150000002213 flavones Chemical class 0.000 description 1
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 description 1
- HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N flavonol Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C(O)=C1C1=CC=CC=C1 HVQAJTFOCKOKIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002216 flavonol derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000011957 flavonols Nutrition 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 108010063718 gamma-glutamylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 235000006539 genistein Nutrition 0.000 description 1
- 229940045109 genistein Drugs 0.000 description 1
- ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N genistein 7-O-beta-D-glucoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(C=3C=CC(O)=CC=3)=COC2=C1 ZCOLJUOHXJRHDI-CMWLGVBASA-N 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000002780 gingerol Nutrition 0.000 description 1
- NLDDIKRKFXEWBK-AWEZNQCLSA-N gingerol Chemical compound CCCCC[C@H](O)CC(=O)CCC1=CC=C(O)C(OC)=C1 NLDDIKRKFXEWBK-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- JZLXEKNVCWMYHI-UHFFFAOYSA-N gingerol Natural products CCCCC(O)CC(=O)CCC1=CC=C(O)C(OC)=C1 JZLXEKNVCWMYHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- NNUVCMKMNCKPKN-UHFFFAOYSA-N glycitein Natural products COc1c(O)ccc2OC=C(C(=O)c12)c3ccc(O)cc3 NNUVCMKMNCKPKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000008466 glycitein Nutrition 0.000 description 1
- DXYUAIFZCFRPTH-UHFFFAOYSA-N glycitein Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC(C2=O)=C1OC=C2C1=CC=C(O)C=C1 DXYUAIFZCFRPTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 description 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010084264 glycyl-glycyl-cysteine Proteins 0.000 description 1
- 108010010147 glycylglutamine Proteins 0.000 description 1
- 108010050848 glycylleucine Proteins 0.000 description 1
- 108010081551 glycylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 108010077515 glycylproline Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 1
- 210000005003 heart tissue Anatomy 0.000 description 1
- AIONOLUJZLIMTK-AWEZNQCLSA-N hesperetin Chemical compound C1=C(O)C(OC)=CC=C1[C@H]1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 AIONOLUJZLIMTK-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- AIONOLUJZLIMTK-UHFFFAOYSA-N hesperetin Natural products C1=C(O)C(OC)=CC=C1C1OC2=CC(O)=CC(O)=C2C(=O)C1 AIONOLUJZLIMTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010209 hesperetin Nutrition 0.000 description 1
- 229960001587 hesperetin Drugs 0.000 description 1
- 108010040030 histidinoalanine Proteins 0.000 description 1
- FTODBIPDTXRIGS-UHFFFAOYSA-N homoeriodictyol Natural products C1=C(O)C(OC)=CC(C2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C2)=C1 FTODBIPDTXRIGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N hydrogen iodide Chemical compound I XMBWDFGMSWQBCA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229930005346 hydroxycinnamic acid Natural products 0.000 description 1
- 235000010359 hydroxycinnamic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000001863 hydroxypropyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010977 hydroxypropyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N iodixanol Chemical compound IC=1C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C=1N(C(=O)C)CC(O)CN(C(C)=O)C1=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C(I)C(C(=O)NCC(O)CO)=C1I NBQNWMBBSKPBAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004359 iodixanol Drugs 0.000 description 1
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001788 irregular Effects 0.000 description 1
- CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N isoflavone Natural products C1=C(OC)C(OC)=CC(OC)=C1C1=COC2=C(C=CC(C)(C)O3)C3=C(OC)C=C2C1=O CJWQYWQDLBZGPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002515 isoflavone derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000008696 isoflavones Nutrition 0.000 description 1
- 108010044374 isoleucyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- 108010060857 isoleucyl-valyl-tyrosine Proteins 0.000 description 1
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 235000008777 kaempferol Nutrition 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 108010053037 kyotorphin Proteins 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 108010008097 laminin alpha 2 Proteins 0.000 description 1
- 108010088360 laminin alpha5 Proteins 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 210000002414 leg Anatomy 0.000 description 1
- 108010030617 leucyl-phenylalanyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000012680 lutein Nutrition 0.000 description 1
- 239000001656 lutein Substances 0.000 description 1
- 229960005375 lutein Drugs 0.000 description 1
- KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N lutein Chemical compound C([C@H](O)CC=1C)C(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\[C@H]1C(C)=C[C@H](O)CC1(C)C KBPHJBAIARWVSC-RGZFRNHPSA-N 0.000 description 1
- ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N lutein Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=CC(O)CC2(C)C)C ORAKUVXRZWMARG-WZLJTJAWSA-N 0.000 description 1
- LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N luteolin Natural products OC1=CC(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=CC(O)=C3C(=O)C=2)=C1 LRDGATPGVJTWLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009498 luteolin Nutrition 0.000 description 1
- IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N luteolin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 IQPNAANSBPBGFQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000012661 lycopene Nutrition 0.000 description 1
- 239000001751 lycopene Substances 0.000 description 1
- 229960004999 lycopene Drugs 0.000 description 1
- OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N lycopene Chemical compound CC(C)=CCC\C(C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)CCC=C(C)C OAIJSZIZWZSQBC-GYZMGTAESA-N 0.000 description 1
- 108010009298 lysylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 1
- WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L manganese(2+);methyl n-[[2-(methoxycarbonylcarbamothioylamino)phenyl]carbamothioyl]carbamate;n-[2-(sulfidocarbothioylamino)ethyl]carbamodithioate Chemical compound [Mn+2].[S-]C(=S)NCCNC([S-])=S.COC(=O)NC(=S)NC1=CC=CC=C1NC(=S)NC(=O)OC WPBNNNQJVZRUHP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 210000002783 mesonephros Anatomy 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 108010056582 methionylglutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000007625 mitochondrial abnormality Effects 0.000 description 1
- 230000006676 mitochondrial damage Effects 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N morin Natural products OC1=CC(O)=CC(C2=C(C(=O)C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)O)=C1 UXOUKMQIEVGVLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028320 muscle necrosis Diseases 0.000 description 1
- 230000037191 muscle physiology Effects 0.000 description 1
- 230000021268 myoblast fusion Effects 0.000 description 1
- 101150042523 myod gene Proteins 0.000 description 1
- 230000001114 myogenic effect Effects 0.000 description 1
- PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N myricetin Natural products OC1=C(O)C(O)=CC(C=2OC3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C(=O)C=2)=C1 PCOBUQBNVYZTBU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007743 myricetin Nutrition 0.000 description 1
- 229940116852 myricetin Drugs 0.000 description 1
- WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N naringenin Natural products C1(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC(C1)C1=CC=C(CC1)O WGEYAGZBLYNDFV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000007625 naringenin Nutrition 0.000 description 1
- 229940117954 naringenin Drugs 0.000 description 1
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 230000006911 nucleation Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 150000002898 organic sulfur compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000012285 osmium tetroxide Substances 0.000 description 1
- 229910000489 osmium tetroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007800 oxidant agent Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 238000006213 oxygenation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- HKUHOPQRJKPJCJ-UHFFFAOYSA-N pelargonidin Natural products OC1=Cc2c(O)cc(O)cc2OC1c1ccc(O)cc1 HKUHOPQRJKPJCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000006251 pelargonidin Nutrition 0.000 description 1
- YPVZJXMTXCOTJN-UHFFFAOYSA-N pelargonidin chloride Chemical compound [Cl-].C1=CC(O)=CC=C1C(C(=C1)O)=[O+]C2=C1C(O)=CC(O)=C2 YPVZJXMTXCOTJN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003742 phenol Drugs 0.000 description 1
- 235000009048 phenolic acids Nutrition 0.000 description 1
- 108010064486 phenylalanyl-leucyl-valine Proteins 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 108010083476 phenylalanyltryptophan Proteins 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 230000037081 physical activity Effects 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001566 pro-viral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 108010004914 prolylarginine Proteins 0.000 description 1
- 108010053725 prolylvaline Proteins 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 238000004153 renaturation Methods 0.000 description 1
- 230000008263 repair mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000003362 replicative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036387 respiratory rate Effects 0.000 description 1
- 230000003938 response to stress Effects 0.000 description 1
- 229960003471 retinol Drugs 0.000 description 1
- 235000020944 retinol Nutrition 0.000 description 1
- 239000011607 retinol Substances 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 102200079448 rs143777403 Human genes 0.000 description 1
- 210000003079 salivary gland Anatomy 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000003497 sciatic nerve Anatomy 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000009291 secondary effect Effects 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 108010069117 seryl-lysyl-aspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 238000004904 shortening Methods 0.000 description 1
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 230000003584 silencer Effects 0.000 description 1
- PCMORTLOPMLEFB-UHFFFAOYSA-N sinapinic acid Natural products COC1=CC(C=CC(O)=O)=CC(OC)=C1O PCMORTLOPMLEFB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012232 skeletal muscle contraction Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 210000001057 smooth muscle myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000010199 sorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004334 sorbic acid Substances 0.000 description 1
- 229940075582 sorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000010473 stable expression Effects 0.000 description 1
- 235000000891 standard diet Nutrition 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 230000007847 structural defect Effects 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 230000000153 supplemental effect Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000001839 systemic circulation Effects 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008719 thickening Effects 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 108010031491 threonyl-lysyl-glutamic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 229950003937 tolonium Drugs 0.000 description 1
- HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M tolonium chloride Chemical compound [Cl-].C1=C(C)C(N)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 HNONEKILPDHFOL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 239000012049 topical pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- NGSWKAQJJWESNS-ZZXKWVIFSA-N trans-4-coumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 NGSWKAQJJWESNS-ZZXKWVIFSA-N 0.000 description 1
- QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N trans-isoferulic acid Natural products COC1=CC=C(C=CC(O)=O)C=C1O QURCVMIEKCOAJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N trans-isorenieratene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/c1c(C)ccc(C)c1C)C=CC=C(/C)C=Cc2c(C)ccc(C)c2C ZCIHMQAPACOQHT-ZGMPDRQDSA-N 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 230000014621 translational initiation Effects 0.000 description 1
- 230000008733 trauma Effects 0.000 description 1
- 230000004102 tricarboxylic acid cycle Effects 0.000 description 1
- 230000001228 trophic effect Effects 0.000 description 1
- 108010029599 tyrosyl-glutamyl-tryptophan Proteins 0.000 description 1
- 108010051110 tyrosyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 229960004747 ubidecarenone Drugs 0.000 description 1
- 229940040064 ubiquinol Drugs 0.000 description 1
- QNTNKSLOFHEFPK-UPTCCGCDSA-N ubiquinol-10 Chemical compound COC1=C(O)C(C)=C(C\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CC\C=C(/C)CCC=C(C)C)C(O)=C1OC QNTNKSLOFHEFPK-UPTCCGCDSA-N 0.000 description 1
- 229940035936 ubiquinone Drugs 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 238000012762 unpaired Student’s t-test Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 description 1
- -1 vectors Chemical class 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003501 vero cell Anatomy 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- 229940045997 vitamin a Drugs 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 1
- 238000011816 wild-type C57Bl6 mouse Methods 0.000 description 1
- FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N xanthophyll Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1=C(C)CC(O)CC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C=C(C)C(O)CC2(C)C FJHBOVDFOQMZRV-XQIHNALSSA-N 0.000 description 1
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 1
- 235000010930 zeaxanthin Nutrition 0.000 description 1
- 239000001775 zeaxanthin Substances 0.000 description 1
- 229940043269 zeaxanthin Drugs 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N β-Carotene Chemical compound CC=1CCCC(C)(C)C=1\C=C\C(\C)=C\C=C\C(\C)=C\C=C\C=C(/C)\C=C\C=C(/C)\C=C\C1=C(C)CCCC1(C)C OENHQHLEOONYIE-JLTXGRSLSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New breeds of animals
- A01K67/027—New breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0276—Knockout animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/12—Ketones
- A61K31/122—Ketones having the oxygen directly attached to a ring, e.g. quinones, vitamin K1, anthralin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
- A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
- A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline
- A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
- A61K31/355—Tocopherols, e.g. vitamin E
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P39/00—General protective or antinoxious agents
- A61P39/06—Free radical scavengers or antioxidants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4707—Muscular dystrophy
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/07—Animals genetically altered by homologous recombination
- A01K2217/075—Animals genetically altered by homologous recombination inducing loss of function, i.e. knock out
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; CARE OF BIRDS, FISHES, INSECTS; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0306—Animal model for genetic diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
- C12N2015/8518—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic expressing industrially exogenous proteins, e.g. for pharmaceutical use, human insulin, blood factors, immunoglobulins, pseudoparticles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
- C12N2015/8527—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic for producing animal models, e.g. for tests or diseases
- C12N2015/8536—Animal models for genetic diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
Abstract
Группа изобретений относится к медицине и касается способа лечения мышечной дистрофии, включающего введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (AAV-вектора), содержащего 1) последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, 2) нуклеотид, который гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, или 3) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, который по меньшей мере на 85% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, или 4) фрагмент нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, кодирующий белок, который проявляет активность ANO5. Группа изобретений также касается композиции, содержащей терапевтически эффективное количество рекомбинантного AAV-вектора, для лечения мышечной дистрофии у субъекта; Применение указанного рекомбинантного AAV-вектора, для получения лекарственного средства для лечения мышечной дистрофии у субъекта. Группа изобретений обеспечивает лечение мышечной дистрофии. 3 н. и 37 з.п. ф-лы, 5 пр., 1 табл., 8 ил.
Description
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно предварительной заявке на патент США №62/254539, поданной 12 ноября 2015 г., и предварительной заявке на патент США №62/419793, поданной 9 ноября 2016 г., которые полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
[0002] В настоящем изобретении предложены векторы на основе аденоассоциированного вируса (AAV-векторы), экспрессирующие ген ANO5, а также антиоксидантная терапия в качестве способов индукции регенерации мышц и способ лечения мышечной дистрофии.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
[0003] Важность мышечной массы и мышечной силы для осуществления различных видов повседневной активности, таких как двигательная активность и дыхание, а также для обмена веществ во всем организме, не вызывает сомнений. Нарушения функции мышц вызывают мышечные дистрофии (МД), которые характеризуются слабостью и атрофией мышц и оказывают серьезное влияние на качество жизни. Наиболее подробно охарактеризованные МД вызваны мутациями в генах, кодирующих члены ассоциированного с дистрофином белкового комплекса (DAPC). Указанные МД вызваны непрочностью мембраны, связанной с утратой связывания (тетеринга) сарколеммы с цитоскелетом, которое обеспечивает DAPC. Напротив, МД другой подгруппы, как полагают, вызваны нарушениями процесса восстановления сарколеммы. Вследствие механического стресса, который возникает в сарколемме во время сокращения, даже здоровая мышца постоянно нуждается в механизмах восстановления, чтобы устранить разрывы поврежденной мембраны. Восстановление разрывов сарколеммы основано на слиянии мембранных везикул в участках повреждения, и ослабление этого процесса предположительно считается основной причиной дисферлинопатий, видов мышечной дистрофии, вызванных мутациями дисферлина.
[0004] Новый вид мышечной дистрофии, признаки которой сходны с таковыми при дисферлинопатиях и которая характеризуется поражениями сарколеммы, был недавно связан с рецессивными мутациями в ANO5 (TMEM16E). Мутации ANO5 вызывают пояснично-тазовую мышечную дистрофию (мышечную дистрофию Лейдена) типа 2L (LGMD2L) и миопатическую дистрофию Миоши типа 3 (MMD3). Фенотип, связанный с мутациями ANO5, является изменчивым, однако заболевание обычно проявляется во взрослом возрасте (в возрасте от 20 до 50 лет) слабостью проксимальной группы мышц нижних конечностей, высоким уровнем креатинкиназы в сыворотке крови, асимметричной атрофией и слабостью мышц и обычно сопровождается поражениями сарколеммы, как и в случае дисферлинопатии (Bolduc et al., American journal of human genetics 86, 213-221 (2010)) Hicks et al., Brain: a journal of neurology 134, 171-182 (2011), Bouquet et al., Revue neurologique 168, 135-141 (2012)). В настоящее время ~ 72 различные мутации ANO5 были зарегистрированы у пациентов с МД, и скрининговые исследования для выявления мутаций ANO5 у пациентов с LGMD, у которых отсутствуют мутации в других известных генах LGMD, указывают на то, что мутации ANO5 могут быть одной из наиболее распространенных причин LGMD (Bolduc et al., American journal of human genetics 86, 213-221 (2010), Hicks et al., Brain: a journal of neurology 134, 171-182 (2011), Penttila et al., Neurology 78, 897-903 (2012)).
[0005] Семейство аноктамин/TMEM16 было функционально разделено на две категории. Исходные члены семейства, ANO1 (TMEM16A) и ANO2 (TMEM16B), кодируют активируемые кальцием каналы, проницаемые для хлорида, в то время как другие ANO не способны проводить токи, обусловленные анионами хлора, и были выявлены благодаря их роли в перераспределении фосфолипидов (PLS). Однако было установлено, что ANO5 не демонстрирует ни один из двух указанных видов активности, что свидетельствует о его новой функции в скелетных мышцах. Учитывая новые данные, остается неясным, как потеря функции ANO5 индуцирует развитие фенотипа LGMD, и, в частности, почему клиническое проявление мутаций Ano5 сходно с таковым для МД, ассоциированных с дисферлином.
[0006] Аденоассоциированный вирус (AAV) представляет собой парвовирус, дефицитный по репликации, одноцепочечная геномная ДНК которого содержит примерно 4,7 т.п.н., включая инвертированный концевой повтор (ITR), состоящий из 145 нуклеотидов. Существует несколько серотипов AAV. Известны нуклеотидные последовательности геномов серотипов AAV. Например, нуклеотидная последовательность генома AAV серотипа 2 (AAV2) представлена в Srivastava et al., J Virol, 45: 555-564 (1983) и исправлена Ruffing et al., J Gen Virol, 75: 3385-3392 (1994). В качестве других примеров полный геном AAV-1 предоставлен в GenBank под номером доступа NC_002077; полный геном AAV-3 представлен в GenBank под номером доступа NC_1829; полный геном AAV-4 представлен в GenBank под номером доступа NC_001829; геном AAV-5 предоставлен в GenBank под номером доступа AF085716; полный геном AAV-6 представлен в GenBank под номером доступа NC_001862; по меньшей мере части геномов AAV-7 и AAV-8 представлены в GenBank под номером доступа AX753246 и AX753249, соответственно (см. также патенты США №№7282199 и 7790449, относящиеся к AAV-8); геном AAV-9 представлен в Gao et al., J. Virol., 78: 6381-6388 (2004); геном AAV-10 представлен в Mol. Ther., 13(1): 67-76 (2006); и геном AAV-11 предоставлен в Virology, 330(2): 375-383 (2004). Последовательность генома AAV rh.74 представлена в настоящем документе. Цис-действующие последовательности, контролирующие репликацию вирусной ДНК (rep), инкапсидирование/упаковку и интеграцию в хромосому клетки-хозяина, содержатся в ITR. Три промотора AAV (называемые p5, p19 и p40 вследствие их относительных положений на карте генома) контролируют экспрессию двух внутренних открытых рамок считывания AAV, кодирующих гены rep и cap. Два промотора rep (p5 и p19), совместно с дифференциальным сплайсингом одиночного интрона AAV (например, в нуклеотидах 2107 и 2227 AAV2), приводят к получению четырех белков rep (rep 78, rep 68, rep 52 и rep 40) в результате экспрессии гена rep. Белки rep обладают несколькими ферментативными свойствами, которые в конечном итоге отвечают за репликацию вирусного генома. Ген cap экспрессируется под контролем промотора p40 и кодирует три белка капсида VP1, VP2 и VP3. Альтернативный сплайсинг и неконсенсусные сайты начала трансляции обеспечивают выработку трех родственных белков капсида. Один консенсусный сайт полиаденилирования находится в положении 95 на карте генома AAV. Жизненный цикл и генетика AAV рассмотрены в Muzyczka, Current Topics in Microbiology and Immunology, 158: 97-129 (1992).
[0007] AAV обладает уникальными особенностями, которые делают его предпочтительным в качестве вектора для доставки чужеродной ДНК в клетки, например, при генной терапии. Инфекция AAV клеток в культуре не является цитопатической, и инфекция человека и других животных в природе является скрытой и бессимптомной. Кроме того, AAV инфицирует многие клетки млекопитающих, что позволяет нацелено воздействовать на различные типы тканей в условиях in vivo. Помимо этого, AAV трансдуцирует медленно делящиеся и не делящиеся клетки и может по существу сохраняться в течение жизни этих клеток в качестве транскрипционно активной ядерной эписомы (внехромосомного элемента). Провирусный геном AAV является инфекционным в виде клонированной ДНК в плазмидах, что позволяет конструировать рекомбинантные геномы. Кроме того, поскольку сигналы, контролирующие репликацию, инкапсидирование и интеграцию генома AAV, содержатся в ITR генома AAV, часть или вся внутренняя последовательность генома, содержащая приблизительно 4,3 т.п.н. (кодирующая контролирующие репликацию белки и структурные белки капсида, rep-cap), может быть заменена чужеродной ДНК, такой как генная кассета, содержащая промотор, представляющую интерес ДНК и сигнал полиаденилирования. Белки rep и cap могут быть обеспечены в транс-конфигурации. Еще одна важная особенность AAV заключается в том, что он является чрезвычайно стабильным и высококопийным вирусом. Он легко выдерживает условия, используемые для инактивации аденовируса (от 56°C до 65°C в течение нескольких часов), что уменьшает важность хранения AAV при низких температурах. AAV даже может быть лиофилизован. Наконец, AAV-инфицированные клетки не резистентны к суперинфекции.
[0008] Результаты многочисленных исследований продемонстрировали долгосрочную (>1,5 года) экспрессию белка в мышцах, опосредованную рекомбинантным AAV. См. Clark et al., Hum Gene Ther, 8: 659-669 (1997); Kessler et al., Proc Nat. Acad Sc. USA, 93: 14082-14087 (1996); и Xiao et al., J Virol, 70: 8098-8108 (1996). См. также Chao et al., Mol Ther, 2:619-623 (2000) и Chao et al., Mol Ther, 4:217-222 (2001). Более того, поскольку мышца сильно васкуляризована, трансдукция рекомбинантным AAV приводила к появлению трансгенных продуктов в системном кровотоке после внутримышечной инъекции, как описано в Herzog et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94: 5804-5809 (1997) и Murphy et al., Proc Natl Acad Sci USA, 94: 13921-13926 (1997). Помимо этого в работе Lewis et al., J Virol, 76: 8769-8775 (2002) продемонстрировано, что скелетные мышечные волокна обладают необходимыми клеточными факторами для правильного гликозилирования, сворачивания (фолдинга) и секреции антител, это указывает на то, что мышца способна к устойчивой экспрессии секретируемых белковых терапевтических средств.
[0009] В настоящем документе показано, что повреждение гена Ano5 у мышей вызывает развитие нескольких гистопатологических признаков дистрофии мышц, непереносимость физической нагрузки, дисфункцию восстановления сарколеммы и нарушение слияния миобластов. Помимо этого представленные данные демонстрируют, что указанные нарушения связаны с изменениями динамики субклеточной мембраны и/или мембраны и/или сарколеммальной мембраны, опосредованными ANO5. Настоящее изобретение относится к применению AAV-векторов, экспрессирующих ген Ano5, в способах индукции восстановления мышц и/или лечения МД.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00010] Настоящее изобретение относится к AAV-векторам, содержащим нуклеотидную последовательность, кодирующую белок ANO5 или его функционально активный фрагмент. Эксперименты, описанные в Примерах 1-4, демонстрируют существенную роль Ano5 в регенерации и восстановлении мышц. Потеря ANO5 вызывает развитие дистрофического фенотипа у мышей, напоминающего таковой у пациентов с LGMD2L, который характеризуется гистопатологией легкой степени тяжести, которая различается в зависимости от мышц, непереносимостью физической нагрузки, нарушенной регенерацией и повышенными уровнями креатинкиназы. Патологические изменения митохондрий наблюдали у молодых и взрослых мышей Ano5 -/- . Помимо структурного дефекта митохондрий, выявленного путем визуализации с помощью электронной микроскопии, количественные исследования цитратсинтазы также продемонстрировали, что митохондрии имеют функциональное нарушение. Количественный ферментный анализ цитратсинтазы указывает на присутствие поврежденных митохондрий. Полученные результаты свидетельствуют о том, что патологические изменения митохондрий могут быть вторичным эффектом, вызванным потерей белка аноктамина 5. Результаты экспериментов, описанных в настоящем документе, указывают на ослабление восстановления разрывов сарколеммы в мышечных волокнах Ano5 -/- , которые восстанавливаются с помощью вирусной экспрессии ANO5 человека, и свидетельствуют о том, что повреждение Ano5 нарушает способность первичных миобластов к слиянию.
[00011] Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение относится к рекомбинантному AAV-вектору, содержащему полинуклеотид, содержащий последовательность нуклеиновой кислоты ANO5. Последовательность нуклеиновой кислоты ANO5 представлена в Genbank под номером доступа NM_213599.2 (SEQ ID NO: 13). В качестве примера последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей белок ANO5, в векторе AAV представлена в последовательности SEQ ID NO: 1. Рекомбинантные векторы согласно настоящему изобретению содержат полинуклеотидную последовательность, которая по меньшей мере на 85% идентична нуклеиновой кислоте, представленной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13, или содержат нуклеотид, который гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью, представленной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13, или содержат фрагмент нуклеиновой кислоты, приведенной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13, кодирующий белок, который проявляет активность ANO5. Согласно одному аспекту настоящего изобретения рекомбинантные AAV-векторы согласно настоящему изобретению представляют собой AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13 или AAV rh.74.
[00012] Рекомбинантные AAV-векторы согласно настоящему изобретению содержат фрагмент последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1, кодирующий белок, который содержат домен, участвующий в активности PLS, причем указанный белок сохраняет активность PLS. Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения вектор AAV содержит фрагмент последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13, кодирующий белок, который сохраняет активность ANO5.
[00013] Рекомбинантные AAV-векторы согласно настоящему изобретению содержат полинуклеотидную последовательность, которая, например, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% или 89%, более типично по меньшей мере на 90%, 91%, 92%, 93% или 94% и даже более типично по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13, причем указанный полинуклеотид кодирует белок, который сохраняет активность ANO5.
[00014] Рекомбинантные AAV-векторы согласно настоящему изобретению содержат полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок ANO5, которая, например, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88% или 89%, более типично по меньше мере на 90%, 91%, 92%, 93% или 94% и даже более типично по меньшей мере на 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична последовательности, приведенной в SEQ ID NO: 2, причем указанный полинуклеотид кодирует белок, который сохраняет активность ANO5.
[00015] Рекомбинантные AAV-векторы согласно настоящему изобретению содержат полинуклеотидную последовательность, которая гибридизуется в жестких условиях с последовательностью нуклеиновой кислоты, приведенной в SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 13, или комплементарными им последовательностями, фрагмент которых содержит более приблизительно 5 нуклеотидов, предпочтительно более 7 нуклеотидов, более предпочтительно более 9 нуклеотидов и наиболее предпочтительно более 17 нуклеотидов. В область настоящего изобретения включены фрагменты содержащие, например, 15, 17 или 20 нуклеотидов или более, которые являются селективными (т.е. специфично гибридизуются с любым из полинуклеотидов согласно настоящему изобретению), причем указанные фрагменты сохраняют активность ANO5. Зонды, способные специфично гибридизоваться с полинуклеотидом, могут устанавливать отличие полинуклеотидных последовательностей NTHi согласно настоящему изобретению от других полинуклеотидных последовательностей в одном и том же семействе генов или могут устанавливать отличие генов NTHi от других бактериальных генов и предпочтительно основаны на уникальных нуклеотидных последовательностях.
[00016] Термин «жесткий» используется для обозначения условий, которые обычно понимают в данной области техники как жесткие. Жесткость условий гибридизации в основном определяется температурой, ионной силой и концентрацией денатурирующих агентов, таких как формамид. Примеры жестких условий гибридизации и промывки включают 0,015 М хлорида натрия, 0,0015 М цитрата натрия при 65-68°C или 0,015 М хлорида натрия, 0,0015 М цитрата натрия и 50% формамида при 42°C. См. Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, (Cold Spring Harbor, N.Y. 1989). Более жесткие условия (такие как более высокая температура, более низкая ионная сила, более высокая концентрация формамида или другого денатурирующего агента) также могут быть использованы, однако скорость гибридизации будет ухудшена. В тех случаях, когда рассматривают гибридизацию дезоксиолигонуклеотидов, дополнительные примерные жесткие условия гибридизации включают промывку в 6× SSC с добавлением 0,05% пирофосфата натрия при 37°C (для 14-членных олигонуклеотидов), 48 °C (для 17-членных олигонуклеотидов), 55°C (для 20-членных олигонуклеотидов) и 60°C (для 23-членных олигонуклеотидов).
[00017] Другие агенты могут быть включены в буферы для гибридизации и промывки для уменьшения неспецифичной и/или фоновой гибридизации. Примеры включают 0,1% бычий сывороточный альбумин, 0,1% поливинилпирролидон, 0,1% пирофосфат натрия, 0,1% додецилсульфат натрия, NaDodSO4 (ДСН), фиколл, раствор Денхардта, обработанную ультразвуком ДНК из спермы лосося (или другую некомплементарную ДНК) и сульфат декстрана, хотя могут быть использованы другие подходящие агенты. Концентрация и типы указанных добавок могут быть изменены без существенного влияния на жесткость условий гибридизации. Эксперименты по гибридизации обычно проводят при рН=6,8-7,4, однако при обычных условиях ионной силы скорость гибридизации практически не зависит от рН. См. Anderson et al., Nucleic Acid Hybridisation: A Practical Approach, Ch. 4, IRL Press Limited (Oxford, England). Специалисты в данной области техники могут скорректировать условия гибридизации, чтобы приспособить указанные переменные и обеспечить образование гибридов ДНК, имеющих различную степень сходства последовательней.
[00018] Согласно другому аспекту настоящего изобретения рекомбинантные AAV-векторы согласно настоящему изобретению могут быть функционально соединены с регуляторным элементом, специфичным для мышц. Например, регуляторный элемент, специфичный для мышц, представляет собой элемент гена актина скелетных мышц человека, элемент гена актина мышц сердца, фактор, связывающийся с энхансером, специфичным для миоцитов (MEF), элемент энхансера креатинкиназы мыши (MCK), тройные копии MCK (tMCK), элемент гена тропонина C быстро сокращающихся скелетных мышц, элемент гена тропонина C медленно сокращающихся мышц сердца, элемент гена тропонина I медленно сокращающихся мышц, индуцируемые гипоксией ядерные факторы, индуцируемый стероидом элемент или глюкокортикоид-отвечающий элемент (GRE).
[00019] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способам получения частицы рекомбинантного AAV-вектора, включающим культивирование клетки, которая была трансфецирована любым рекомбинантным AAV-вектором согласно настоящему изобретению, и выделение частиц рекомбинантного AAV из супернатанта трансфецированных клеток. Настоящее изобретение также относится к вирусным частицам, содержащим любой из рекомбинантных AAV-векторов согласно настоящему изобретению.
[00020] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способам лечения мышечной дистрофии, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого рекомбинантного AAV-вектора согласно настоящему изобретению. Согласно одному аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, имеет рецессивную мутацию в гене ANO5. Указанные способы могут обеспечить лечение дисферлин-ассоциированной мышечной дистрофии, пояснично-тазовой мышечной дистрофии типа 2L, миопатии Миоши типа 3, миопатии Бетлема, калпаинопатии, десмин-зависимой миопатии, дисферлинопатии, миофибриллярной миопатии, саркогликанопатии или связанной с ZASP миопатии. Помимо этого любой из вышеперечисленных способов лечения мышечной дистрофии дополнительно включает этап введения субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов. Например, композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. В частности, композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E.
[00021] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способам регенерации мышцы у субъекта, который нуждается в этом, включающим введение терапевтически эффективного количества любого рекомбинантного AAV-вируса согласно настоящему изобретению субъекту, нуждающемуся в этом. Согласно одному аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, имеет рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, страдает мышечной дистрофией, такой как дисферлин-ассоциированная мышечная дистрофия, пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2L, миопатия Миоши типа 3, миопатия Бетлема, калпаинопатия, десмин-зависимая миопатия, дисферлинопатия, миофибриллярная миопатия, саркогликанопатия или связанная с ZASP миопатия. Помимо этого любой из вышеперечисленных способов регенерации мышц дополнительно включает стадию введения терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов субъекту, нуждающемуся в этом. Например, композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. В частности, композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E.
[00022] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способам лечения хронической мышечной атрофии, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества любого из рекомбинантных AAV-векторов согласно настоящему изобретению. Согласно одному аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, имеет рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, страдает мышечной дистрофией, такой как дисферлин-ассоциированная мышечная дистрофия, пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2L или миопития Миоши типа 3, миопатия Бетлема, калпаинопатия, десмин-зависимая миопатия, дисферлинопатия, миофибриллярная миопатия, саркогликанопатия или связанная с ZASP миопатия. Помимо этого любой из вышеперечисленных способов лечения хронической мышечной атрофии дополнительно включает этап введения терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов субъекту, нуждающемуся в этом. Например, композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. В частности, композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E.
[00023] Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей любой рекомбинантный AAV-вектор согласно настоящему изобретению для лечения мышечной дистрофии или синдрома хронической мышечной атрофии у субъекта, нуждающегося в этом. Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей любой рекомбинантный AAV-вектор согласно настоящему изобретению для регенерации мышцы у субъекта, нуждающегося в этом. Согласно одному аспекту настоящего изобретения композицию согласно настоящему изобретению вводят субъекту, имеющему рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения композицию согласно настоящему изобретению вводят субъекту, страдающему мышечной дистрофией, такой как дисферлин-ассоциированная мышечная дистрофия, пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2L, миопатия Миоши типа 3, миопатия Бетлема, калпаинопатия, десмин-зависимая миопатия, дисферлинопатия, миофибриллярная миопатия, саркогликанопатия или связанная с ZASP миопатия. Любая из композиций согласно настоящему изобретению изготовлена для внутримышечной или внутривенной инъекции. Любая из композиций согласно настоящему изобретению дополнительно содержит терапевтически эффективное количество композиции антиоксидантов. Например, композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. В частности, композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E.
[00024] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к применению любого рекомбинантного AAV-вектора согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для лечения мышечной дистрофии или синдрома хронической мышечной атрофии у субъекта, нуждающегося в этом. Помимо этого настоящее изобретение относится к применению любого из рекомбинантных AAV-векторов согласно настоящему изобретению для получения лекарственного средства для регенерации мышцы у субъекта, нуждающегося в этом. Согласно одному аспекту настоящего изобретения лекарственное средство вводят субъекту, имеющему рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения лекарственное средство согласно настоящему изобретению вводят субъекту, страдающему мышечной дистрофией, такой как дисферлин-ассоциированная мышечная дистрофия, пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2L, миопатия Миоши типа 3, миопатия Бетлема, калпаинопатия, десмин-зависимая миопатия, дисферлинопатия, миофибриллярная миопатия, саркогликанопатия или связанная с ZASP миопатия. Любое из лекарственных средств согласно настоящему изобретению изготовлено для внутримышечной или внутривенной инъекции. Любое из лекарственных средств согласно настоящему изобретению дополнительно содержит терапевтически эффективное количество композиции антиоксидантов. Например, композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. В частности, композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E.
[00025] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способам лечения мышечной дистрофии или хронической мышечной атрофии, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов. Композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. Согласно некоторым аспектам композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E. Согласно одному аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, имеет рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения окислительный стресс в скелетной мышце субъекта снижается. Согласно другому аспекту настоящего изобретения улучшается функция скелетной мышцы субъекта. Согласно другому аспекту настоящего изобретения субъект страдает дисферлин-ассоциированной мышечной дистрофией, пояснично-тазовой мышечной дистрофией типа 2L, миопатией Миоши типа 3, миопатией Бетлема, калпаинопатией, десмин-зависимой миопатией, дисферлинопатией, миофибриллярной миопатией, саркогликанопатией или связанной с ZASP миопатией.
[00026] Настоящее изобретение также относится к способам замедления прогрессирования мышечной дистрофии или хронической мышечной атрофии, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов. Композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. Согласно некоторым аспектам композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин E. Согласно одному аспекту настоящего изобретения субъект, нуждающийся в лечении, имеет рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения окислительный стресс в скелетной мышце субъекта снижается. Согласно другому аспекту настоящего изобретения улучшается функция скелетной мышцы субъекта. Согласно другому аспекту настоящего изобретения субъект страдает дисферлин-ассоциированной мышечной дистрофией, пояснично-тазовой мышечной дистрофией типа 2L, миопатией Миоши типа 3, миопатией Бетлема, калпаинопатией, десмин-зависимой миопатией, дисферлинопатией, миофибриллярной миопатией, саркогликанопатией или связанной с ZASP миопатией.
[00027] В любом из способов согласно настоящему изобретению композицию антиоксидантов вводят перорально. В любом из способов согласно настоящему изобретению антиоксиданты вводят в составе одной и той же композиции или антиоксиданты вводят в виде отдельных композиций. В некоторых случаях антиоксиданты вводят по отдельности, но совместно. Помимо этого в любом из способов согласно настоящему изобретению антиоксиданты вводят в разные моменты времени или последовательно. В любом из способов согласно настоящему изобретению композицию антиоксидантов вводят один раз в сутки, один раз в неделю, два раза в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, ежемесячно или один раз каждые два месяца.
[00028] Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей терапевтически эффективное количество композиции антиоксидантов. Композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида для лечения мышечной дистрофии или синдрома хронической атрофии мышц у субъекта, нуждающегося в этом.
[00029] Настоящее изобретение также относится к композиции, содержащей терапевтически эффективное количество композиции антиоксидантов. Композиции антиоксидантов содержат по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида для замедления прогрессирования мышечной дистрофии или хронической мышечной атрофии у субъекта, нуждающегося в этом. Согласно некоторым аспектам композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин Е.
[00030] Согласно одному аспекту настоящего изобретения любую из композиций согласно настоящему изобретению вводят субъекту, имеющему рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения окислительный стресс снижается в скелетной мышце субъекта после введения композиции. Согласно другому аспекту настоящего изобретения функция скелетной мышцы субъекта улучшается после введения композиции. Согласно другому аспекту настоящего изобретения любые из композиций согласно настоящему изобретению вводят субъекту, страдающему мышечной дистрофией, такой как дисферлин-ассоциированная мышечная дистрофия, пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2L, миопатия Миоши типа 3, миопатия Бетлема, калпаинопатия, десмин-зависимая миопатия, дисферлинопатия, миофибриллярная миопатия, саркогликанопатия или связанная с ZASP миопатия. Любая из композиций согласно настоящему изобретению изготовлена для внутримышечной или внутривенной инъекции.
[00031] Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к применению композиции антиоксидантов для получения лекарственного средства для лечения мышечной дистрофии или синдрома хронической атрофии мышц у субъекта, нуждающегося в этом. Композиция антиоксидантов в любом из лекарственных средств согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида.
[00032] Помимо этого настоящее изобретение относится к применению композиции антиоксидантов для получения лекарственного средства для регенерации мышцы у субъекта, нуждающегося в этом. Композиция антиоксидантов в любом из лекарственных средств согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. Согласно некоторым аспектам композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин Е.
[00033] Помимо этого настоящее изобретение относится к применению композиции антиоксидантов для получения лекарственного средства для замедления прогрессирования мышечной дистрофии или синдрома атрофии мышц у субъекта, нуждающегося в этом. Композиция антиоксидантов в любом из лекарственных средств согласно настоящему изобретению содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида. Согласно некоторым аспектам композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин Е.
[00034] Любое лекарственное средство согласно настоящему изобретению вводят субъекту, имеющему рецессивную мутацию в гене ANO5. Согласно другому аспекту настоящего изобретения окислительный стресс в скелетной мышце субъекта снижается. Согласно другому аспекту настоящего изобретения улучшается функция скелетной мышцы субъекта. Согласно другому аспекту настоящего изобретения любое из лекарственных средств согласно настоящему изобретению вводят субъекту, страдающему мышечной дистрофией, такой как дисферлин-ассоциированная мышечная дистрофия, пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2L, миопатия Миоши типа 3, миопатия Бетлема, калпаинопатия, десмин-зависимая миопатия, дисферлинопатия, миофибриллярная миопатия, саркогликанопатия или связанная с ZASP миопатия. Помимо этого любое из лекарственных средств согласно настоящему изобретению изготовлено для внутримышечной или внутривенной инъекции.
[00035] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения композицию антиоксидантов вводят перорально. Согласно некоторым аспектам антиоксиданты входят в состав одной композиции. Согласно другим аспектам настоящего изобретения антиоксиданты входят в состав отдельных композиций. Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения антиоксиданты указанной композиции антиоксидантов вводят совместно. Согласно некоторым аспектам настоящего изобретения антиоксиданты указанной композиции антиоксидантов вводят в разные моменты времени или последовательно. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения композицию антиоксидантов вводят один раз в сутки, один раз в неделю, два раза в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, ежемесячно или один раз каждые два месяца.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[00036] На Фигуре 1A-1D представлена схема создания мышиной модели Ano5 -/- . На панели (а) представлен вектор, нацеленный к Ano5, содержащий экзогенный интрон и lacZ-кодирующий экзон с терминирующим сигналом полиаденилирования. Полученная мРНК заканчивается экзоном 8. На панели (b) представлена геномная ДНК, выделенная из кусочков хвостов животных в одном помете. Дорожка 1 - мышь дикого типа (WT), дорожка 2 - мышь Ano5 +/-, дорожка 3 - мышь Ano5 -/- , фрагмент аллеля дикого типа массой 300 п.н., аллель Ano5 - фрагмент массой 200 п.н. На панели (с) представлены продукты ОТ-ПЦР, которые свидетельствуют об отсутствии транскрипта Ano5 в мышечной ткани Ano5 -/- при использовании двух наборов праймеров, нацеленных к Ano5. Дорожка 1: контроль GAPDH; дорожка 2 -праймеры e10-14, охватывающие экзоны 10-14; дорожка 3 -праймеры e17-20, охватывающие экзоны 17-20. На панели (d) представлены результаты, свидетельствующие о том, что >99% снижение относительной экспрессии ANO5 на уровне РНК было подтверждено с помощью кОТ-ПЦР в четырехглавой мышце (QD), икроножной мышце (GAS) и передней большеберцовой мышце (TA), полученной от мыши Ano5 -/- (P<0,001).
[00037] На Фигуре 2A-2F представлены характеристики Ano5 -/- -дефицитных мышей. На панели (a) представлены результаты, указывающие на то, что уровни креатинкиназы в сыворотке крови значительно повышены у мышей Ano5 -/- через 9 месяцев (P<0,05, t-тест). На панели (b) представлены результаты, указывающие на то, что удельная сила сжатия полосок диафрагмы от 9-месячных мышей Ano5 -/- была значительно уменьшена по сравнению с контрольными мышами (P<0,01, t-тест). На панели (c) представлены результаты, указывающие на то, что удельная сила сжатия длинного разгибателя пальцев (EDL) и передней большеберцовой мышцы (TA) 9-месячных мышей Ano5 -/- существенно не отличалась по сравнению с контрольными животными (P>0,05, t-тест). На панели (d) изображены срезы ткани, окрашенные гематоксилином и эозином, которые демонстрируют дистрофическую патологию легкой степени тяжести, включая центральные ядра, изменчивость размеров волокон и области некроза в TA и GAS мыши Ano5 -/- по сравнению с контрольными животными дикого типа. Масштабная метка=50 мкм. На панели (e) представлены результаты измерения диаметра мышечных волокон, свидетельствующие об уменьшении диаметра волокон по сравнению с животными дикого типа, особенно в мышцах GAS (P<0,0001, t-тест). На панели (f) представлены результаты, свидетельствующие о том, что мыши Ano5 -/- имели частые паузы во время проведения исследований для оценки утомления на беговой дорожке.
[00038] На Фигуре 3A-3E представлена физиологическая характеристика мышей Ano5 -/- . Панель (а). Уровни молочной кислоты были незначительно снижены у мышей Ano5 -/- по сравнению с контрольными животными дикого типа после бега на беговой дорожке (P=0,15). Панель (b). Электрофизиологические характеристики мышцы. Амплитуда CMAP существенно не различалась у мышей Ano5 -/- (45,1±2,2 мВ) и мышей дикого типа (40,8±2,4 мВ) (p=0,22). Потенциал фибрилляции не был обнаружен у мышей Ano5 -/- или мышей дикого типа. Панели (c-e). Характеристики сопротивления мышцы при 50 кГц (фаза, реактивность, сопротивление, соответственно). Не было обнаружено различий между волокнами у мышей Ano5 -/- (31,0±2,7, 248,1±37,8 Ом, 411,4±34,6 Ом) и мышей дикого типа (31,7±3,9, 269,0±83,9 Ом, 424,3±73,9 Ом) (фаза: p=0,59, реактивность: p=0,44, сопротивление: p=0,59). Не было обнаружено различий при 100 кГц между волокнами мышей Ano5 -/- (36,5±2,4, 216,2±27,3 Ом, 290,7±22,0 Ом) и мышей дикого типа (37,0±4,8, 228,4±63,9 Ом, 295,8±36,1 Ом) (фаза: p=0,77, реактивность: p=0,55, сопротивление: p=0,68).
[00039] На Фигуре 4А-4G представлены результаты оценки субклеточной гистопатологии в мышце мышей Ano5 -/- . На панели (a) представлены результаты трехцветной окраски по Гомори мышц TA 10-месячных мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа. Мышца Ano5 -/- содержит мембранные агрегаты (стрелки). Масштабная метка=20 мкм. На панели (b) представлены результаты определения количества волокон, содержащих агрегаты в мышцах TA и GAS мышей Ano5 -/- по сравнению с мышами дикого типа (p<0,0001, однофакторный дисперсионный анализ). На панелях (c, d) представлены изображения, полученные с помощью электронной микроскопии, демонстрирующие присутствие мембранных агрегатов в мышцах Ano5 -/- . Агрегаты были либо рыхло упакованы, соединяя трубчатые образования с нечеткими внутренними трубочками (белые стрелки), либо представляли собой плотно упакованные скопления везикулярных или трубчатых мембран (черные стрелки). Масштабные метки=500 нм. На панели (e) представлены результаты, свидетельствующие о том, что субсарколеммальные скопления митохондрий (стрелки) и разрушающихся митохондрий (звездочка) часто выявляли с помощью электронной микроскопии в мышцах Ano5 -/- . Масштабные метки=500 нм (слева) и 2 мкм (справа). На панели (f) предоставлены результаты окрашивания сукцинатдегидрогеназы мышц TA 10-месячных мышей Ano5 -/- , свидетельствующие о присутствии утолщения сарколеммы и уплотненных областей в волокнах, которые отсутствовали у мышей дикого типа. Масштабные метки=10 мкм. На панели (g) представлены криосрезы мышцы TA 10-месячных мышей Ano5 -/- , окрашенные для выявления сукцинатдегидрогеназы (SDH). Стрелки указывают на агрегаты, которые лишены окраски SDH (слева). Последовательные срезы от 10-месячных мышей Ano5 -/- свидетельствуют о том, что многие мембранные агрегаты (белые стрелки), наблюдаемые при трехцветном окрашивании, являются положительными в отношении SERCA1 (справа), это указывает на то, что они получены из саркоплазматического ретикулума. Масштабная метка=40 мкм.
[00040] На Фигуре 5A-4E представлены результаты, свидетельствующие о том, что у мышей Ano5 -/- нарушено восстановление мембраны. На панели (a) представлены изображения мышечных волокон мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа через 5 с и 19 с после повреждения лазерным импульсом. Красные стрелки указывают участок повреждения, при этом краситель FM1-43 накапливался быстрее в мышцах мышей Ano5 -/- по сравнению с мышами дикого типа. Масштабная метка=50 мкм. На панели (b) представлены результаты измерения интенсивности флуоресценции после лазерного повреждения. Мышца Ano5 -/- статистически достоверно отличается от волокон мышей дикого типа и волокон AAV.ANO5 во всех временных точках через >100 секунд после повреждения (двухфакторный дисперсионный анализ, P<0,001). На панели (c) представлены уровни экспрессии ANO5-FLAG в мышцах Ano5 -/- , инъецированных 5×1010 генома вектора AAV.ANO5.FLAG. Иммунофлуоресцентные исследования с применением антитела к FLAG выявили экспрессию ANO5-FLAG на поверхности клеток в обработанной мышце (сверху), которая отсутствовала в необработанной мышце Ano5 -/- (внизу). Масштабная метка=40 мкм. На панели (d) представлены результаты, указывающие на восстановление мышц от повреждения, вызванного кардиотоксином. Представлены срезы тканей, окрашенные гематоксилином и эозином, мышц TA мышей дикого типа и Ano5 -/- через 1, 3, 7, 14, 30 и 90 дней после инъекции кардиотоксина (представлены данные для 3, 7, 14 и 30 дня). Мышца Ano5 -/- была повреждена более сильно и проявила нарушение регенерации по сравнению с диким типом. На панели (e) представлены результаты, свидетельствующие о том, что размер мышечных волокон остается достоверно меньшим в мышце Ano5 -/- по сравнению с диким типом через 30 дней (кардиотоксин D30) и 90 дней (кардиотоксин D90) после инъекции кардиотоксина (P<0,05, t-тест).
[00041] На Фигуре 6 представлены результаты исследования произвольной активности мышей Ano5 -/- , получавших антиоксидантную терапию или рацион с плацебо. На графике представлены результаты исследования произвольной активности (количество раз, когда мыши пересекали горизонтальные и/или вертикальные лазерные лучи в течение 45 минут) для мышей Ano5 -/- , получавших антиоксидантную диету или плацебо-контроль в течение 12 и 16 недель. Мыши Ano5 -/- , получавшие тройную антиоксидантную терапию, имели значительно повышенную активность по сравнению с мышами, получавшими плацебо, через 16 недель.
[00042] На Фигуре 7 представлены результаты измерения удельной силы на диафрагме мышей Ano5 -/- , получавших тройную антиоксидантную терапию или рацион с плацебо, и контрольных мышей дикого типа, получавших рацион с плацебо. Мыши Ano5 -/- , получавшие тройную антиоксидантную терапию, имели значительно повышенную удельную силу диафрагмы по сравнению с мышами, получавшими плацебо, через 16 недель.
[00043] На Фигуре 8A-8B представлены результаты исследования влияния тройной антиоксидантной терапии на биогенез и функцию митохондрий. Ткань икроножной мышцы самцов мышей использовали для измерения маркера митохондриального биогенеза, экспрессии маркера митохондриального биогенеза PGC-1a и активности цитратсинтазы у мышей, получавших рацион с тройной антиоксидантной терапией. На панели (а) представлены результаты оценки экспрессии PGC-1a у мышей, получавших тройную антиоксидантную терапию или рацион с плацебо. На панели (b) представлены результаты оценки активности цитратсинтазы (CS) у самцов и самок мышей Ano5 -/- и дикого типа, получавших тройную антиоксидантную терапию или рацион с плацебо.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
[00044] ANO5 играет существенную роль в восстановлении мышц, и согласно настоящему изобретению предложены AAV-векторы, содержащие ген ANO5, для лечения МД. Разрушение ANO5 точно фенокопирует потерю экспрессии дисферлина в мышиных моделях, и мутации дисферлина вызывают МД, сходные с миопатиям, связанными с ANO5 (пояснично-тазовая мышечная дистрофия типа 2B (LGMD2B) и миопатическая дистрофия Миоши типа 1 (MMD1) в сравнении с пояснично-тазовой мышечной дистрофией типа 2L (LGMD2L) и миопатической дистрофией Миоши типа 3 (MMD3)).
[00045] Мыши Ano5 -/- представляет собой важную модель для исследования ANO5-миопатии, восстановления сарколеммы и слияния миогенных клеток. Экспериментальные данные, представленные в приведенных ниже примерах, поддерживают способы генной заместительной терапии в качестве стратегии лечения ANO5-миопатии путем частичного спасения фенотипа восстановления мембраны при лечении мышей Ano5 -/- с помощью AAV.ANO5-FLAG.
AAV
[00046] В настоящей заявке термин «AAV» является стандартной аббревиатурой для аденоассоциированного вируса. Аденоассоциированный вирус представляет собой парвовирус, содержащий одноцепочечную ДНК, который размножается только в клетках, в которых определенные функции обеспечены коинфицирующим вспомогательным вирусом. В настоящее время существует тринадцать охарактеризованных серотипов AAV, которые представлены ниже в таблице 1. Общая информация и обзоры AAV могут быть найдены, например, в Carter, 1989, Handbook of Parvoviruses, Vol. 1, pp. 169-228, и Berns, 1990, Virology, pp. 1743-1764, Raven Press, (New York). Однако без сомнений ожидается, что аналогичные принципы будут применимы к дополнительным серотипам AAV, поскольку хорошо известно, что различные серотипы довольно тесно связаны структурно и функционально даже на генетическом уровне. (См., например, Blacklowe, 1988, pp. 165-174 of Parvoviruses and Human Disease, J. R. Pattison, ed.; и Rose, Comprehensive Virology 3:1-61 (1974)). Например, все серотипы AAV очевидно обладают очень сходными репликативными свойствами, опосредованными гомологичными генами rep; и все они имеют три родственных капсидных белка, таких как те, которые экспрессируются в AAV2. Степень родства дополнительно подтверждается с помощью гетеродуплексного анализа, который выявляет интенсивную кросс-гибридизацию между серотипами по всей длине генома, а также присутствием аналогичных сегментов, способных к внутримолекулярной ренатурации на концах, которые соответствуют «последовательностям инвертированных концевых повторов» (ITR). Сходные характеристики инфекционности также позволяют предположить, что функции репликации в каждом серотипе находятся под сходным регуляторным контролем.
[00047] В настоящей заявке термин «AAV-вектор» относится к вектору, содержащему один или более представляющих интерес полинуклеотидов (или трансгенов), которые фланкированы последовательностями концевых повторов AAV (ITR). Подходящие AAV-векторы могут быть реплицированы и упакованы в инфекционные вирусные частицы, когда они присутствуют в клетке-хозяине, которая была трансфецирована вектором, кодирующим и экспрессирующим продукты генов rep и cap.
[00048] Термин «вирион AAV» или «вирусная частица AAV» или «частица AAV-вектора» относится к вирусной частице, состоящей из по меньшей мере одного капсидного белка AAV и инкапсидированного полинуклеотида AAV-вектора. Если частица содержит гетерологичный полинуклеотид (т.е. полинуклеотид, отличный от генома AAV дикого типа, такой как трансген, который должен быть доставлен в клетку млекопитающего), его, как правило, называют «частицей AAV-вектора» или просто «AAV-вектором». Следовательно, получение частицы AAV-вектора обязательно включает получение AAV-вектора, поскольку такой вектор содержится в частице AAV-вектора.
[00049] AAV-вектор может представлять собой одноцепочечную или двухцепочечную нуклеиновую кислоту, содержащую 5'-концевую последовательность инвертированного концевого повтора (ITR) AAV и 3'-концевой ITR AAV, фланкирующие последовательность, кодирующую белок, функционально соединенную с регуляторными элементами транскрипции, т.е. с одним или более промоторами и/или энхансерами, и с последовательностью полиаденилирования и, необязательно, с одним или более интронами, вставленными между экзонами последовательности, кодирующей белок. Одноцепочечный AAV-вектор относится к нуклеиновым кислотам, которые присутствуют в геноме вирусной частицы AAV, и может представлять собой смысловую цепь или антисмысловую цепь последовательностей нуклеиновых кислот, раскрытых в настоящем документе. Размер подходящих одноцепочечных нуклеиновых кислот предоставлен в виде количества пар нуклеотидов. Двухцепочечный AAV-вектор относится к нуклеиновым кислотам, которые присутствуют в ДНК плазмид, например, pUC19, или в геноме двухцепочечного вируса, например, бакуловируса, используемого для экспрессии или переноса нуклеиновых кислот AAV-вектора. Размер подходящих двухцепочечных нуклеиновых кислот представлен в виде количества пар нуклеотидов (п.н.).
[00050] В настоящей заявке термин «инвертированный концевой повтор» (ITR) относится к областям, принятым в данной области техники, обнаруженным на 5'- и 3'-концах генома AAV, которые функционируют как цис-элементы в качестве точек начала репликации ДНК и в качестве сигналов упаковки для вирусного генома. AAV ITR, совместно с участком, кодирующим rep AAV, обеспечивают эффективное вырезание, восстановление и интеграцию нуклеотидной последовательности, помещенной между двумя фланкирующими ITR в геном клетки-хозяина. Последовательности некоторых AAR-ассоциированных ITR раскрыты в работе Y Yan et al., J. Virol. 79(1):364-379 (2005), которая полностью включена в настоящую заявку посредством ссылки.
[00051] Термин «элемент, контролирующий транскрипцию» относится к нуклеотидным последовательностям гена, вовлеченным в регуляцию генетической транскрипции, включая промотор, а также элементы ответа, активаторные и энхансерные последовательности для связывания транскрипционных факторов, чтобы облегчить связывание РНК-полимеразы и стимулировать экспрессию, а также последовательности операторов или сайленсеров, с которыми связываются репрессорные белки, чтобы блокировать присоединение РНК-полимеразы и предотвратить экспрессию.
[00052] Гены «rep» и «cap» AAV представляют собой гены, кодирующие белки, участвующие в репликации и инкапсидировании, соответственно. Гены rep и cap AAV были обнаружены во всех серотипах AAV, изученных на сегодняшний день, и описаны в настоящем документе и в процитированных ссылках. В AAV дикого типа гены rep и cap обычно обнаруживаются в вирусном геноме рядом друг с другом (т.е. они «соединены» как смежные или перекрывающиеся транскрипционные единицы), и они обычно являются консервативными среди серотипов AAV. Гены rep и cap AAV также индивидуально и в совокупности называются «генами упаковки AAV». Ген cap AAP в соответствии с настоящим изобретением кодирует белок Cap, который способен упаковывать AAV-векторы в присутствии вспомогательных функциональных элементов rep и аденовируса и способен связываться с клеточными рецепторами-мишенями. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения ген cap AAV кодирует белок капсида, содержащий аминокислотную последовательность, полученную из определенного серотипа AAV, например, серотипов, представленных в таблице 1 и AAV rh.74 (см. патент США №9434928). В область настоящего изобретения также включены другие типы вариантов rAAV, например, rAAV с мутациями капсида. См., например, Marsic et al., Mol Ther, 22(11): 1900-1909 (2014).
[00053] Таблица 1. Серотипы AAV
Серотип AAV | Номер доступа в Genbank |
AAV-1 | NC_002077.1 |
AAV-2 | NC_001401.2 |
AAV-3 | NC_001729.1 |
AAV-3B | AF028705.1 |
AAV-4 | NC_001829.1 |
AAV-5 | NC_006152.1 |
AAV-6 | AF028704.1 |
AAV-7 | NC_006260.1 |
AAV-8 | NC_006261.1 |
AAV-9 | AX753250.1 |
AAV-10 | AY631965.1 |
AAV-11 | AY631966.1 |
AAV-12 | DQ813647.1 |
AAV-13 | EU285562.1 |
[00054] Последовательности AAV, применяемые для получения AAV, могут быть получены из генома любого серотипа AAV. Обычно серотипы AAV имеют геномные последовательности со значительной гомологией на уровнях аминокислот и нуклеиновых кислот, обеспечивают аналогичный набор генетических функций, вырабатывают вирионы, которые по существу физически и функционально эквивалентны, и реплицируются и собираются с помощью практически идентичных механизмов. Геномную последовательность серотипов AAV и обсуждение сходных геномных элементов можно найти, например, в GenBank под номером доступа U89790; в GenBank под номером доступа J01901; в GenBank под номером доступа AF043303; в GenBank под номером доступа AF085716; Chlorini et al., J. Vir. 71: 6823-33(1997); Srivastava et al., J. Vir. 45:555-64 (1983); Chlorini et al., J. Vir. 73:1309-1319 (1999); Rutledge et al., J. Vir. 72:309-319 (1998); и Wu et al., J. Vir. 74: 8635-47 (2000).
[00055] Геномная организация всех известных серотипов AAV очень сходна. Геном AAV представляет собой линейную одноцепочечную молекулу ДНК, которая содержит менее 5000 нуклеотидов (нк.) в длину. Инвертированные концевые повторы (ITR) фланкируют уникальные кодирующие нуклеотидные последовательности для неструктурных белков репликации (Rep) и структурных (VP) белков. Белки VP образуют капсид. Концевые 145 нуклеотидов являются самокомплементарными и организованы так, что может быть образован энергетически стабильный внутримолекулярный дуплекс, образующий Т-образную шпильку. Упомянутые шпилечные структуры функционируют как точка начала репликации вирусной ДНК, выполняя функцию праймеров для клеточного комплекса ДНК-полимеразы. Гены Rep кодируют белки Rep, Rep78, Rep68, Rep52 и Rep40. Rep78 и Rep68 транскрибируются с промотора p5, и Rep 52 и Rep40 транскрибируются с промотора p19. Гены cap кодируют белки VP, VP1, VP2 и VP3. Гены cap транскрибируются с промотора р40.
[00056] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующая белок капсида AAV, функционально соединена с последовательностями, контролирующими экспрессию, для экспрессии в определенном типе клеток, таких как клетки линии Sf9 или HEK. Для практического применения настоящего изобретения могут быть использованы методики, известные специалисту в данной области техники, для экспрессии чужеродных генов в клетках-хозяевах насекомых или клетках-хозяевах млекопитающих. Методология молекулярной инженерии и экспрессии полипептидов в клетках насекомых описана, например, в Summers and Smith. 1986. A Manual of Methods for Baculovirus Vectors and Insect Culture Procedures, Texas Agricultural Experimental Station Bull. No. 7555, College Station, Tex.; Luckow. 1991. В Prokop et al., Cloning and Expression of Heterologous Genes in Insect Cells with Baculovirus Vectors' Recombinant DNA Technology and Applications, 97-152; King, L. A. and R. D. Possee, 1992, The baculovirus expression system, Chapman and Hall, United Kingdom; O'Reilly, D. R., L. K. Miller, V. A. Luckow, 1992, Baculovirus Expression Vectors: A Laboratory Manual, New York; W.H. Freeman and Richardson, C. D., 1995, Baculovirus Expression Protocols, Methods in Molecular Biology, volume 39; патентах США №№4745051; US2003148506; и WO 03/074714. Особенно подходящим промотором для транскрипции нуклеотидной последовательности, кодирующей белок капсида AAV, является, например, промотор полиэдрина. Однако в область настоящего изобретения включены другие промоторы, которые активны в клетках насекомых, известные в данной области техники, например, промоторы р10, р35 или IE-1, а также дополнительные промоторы, описанные в вышеупомянутых ссылках.
[00057] Применение клеток насекомых для экспрессии гетерологичных белков, а также способы введения нуклеиновых кислот, таких как векторы, например, векторы, совместимые с клетками насекомых, в такие клетки и способы поддержания таких клеток в культуре, хорошо документированы. См., например, METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY, ed. Richard, Humana Press, NJ (1995); O'Reilly et al., BACULOVIRUS EXPRESSION VECTORS, A LABORATORY MANUAL, Oxford Univ. Press (1994); Samulski et al., J. Vir. 63:3822-8 (1989); Kajigaya et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 88: 4646-50 (1991); Ruffing et al., J. Vir. 66:6922-30 (1992); Kirnbauer et al., Vir. 219:37-44 (1996); Zhao et al., Vir. 272:382-93 (2000); и Samulski et al., патент США №6204059. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения конструкция нуклеиновой кислоты, кодирующая AAV в клетках насекомых, представляет собой вектор, совместимый с клетками насекомых. В настоящей заявке термин «вектор, совместимый с клеткой насекомого» или «вектор» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, способной к продуктивной трансформации или трансфекции насекомого или клетки насекомого. Примерные биологические векторы включают плазмиды, линейные молекулы нуклеиновых кислот и рекомбинантные вирусы. Любой вектор может быть применен, если он совместим с клетками насекомых. Вектор может интегрироваться в геном клеток насекомых, однако присутствие вектора в клетке насекомых не обязательно должно быть постоянным, и временные эписомальные векторы также включены в область настоящего изобретения. Векторы могут быть введены любыми известными способами, например, путем химической обработки клеток, электропорации или инфекции. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бакуловирус, вирусный вектор или плазмиду. Согласно более предпочтительному варианту реализации настоящего изобретения вектор представляет собой бакуловирус, т.е. конструкция представляет собой бакуловирусный вектор. Бакуловирусные векторы и способы их применения описаны в приведенных выше ссылках по молекулярной модификации клеток насекомых.
[00058] Бакуловирусы представляют собой покрытые оболочкой ДНК-вирусы членистоногих, два члена из которых являются хорошо известными векторами экспрессии для получения рекомбинантных белков в клеточных культурах. Бакуловирусы имеют кольцевые двухцепочечные геномы (80-200 т.п.н.), которые могут быть модифицированы так, чтобы обеспечить доставку большого фрагмента генома в конкретные клетки. Вирусы, применяемые в качестве вектора, обычно представляют собой многокапсидный нуклеополиэдровирус Autographa californica (AcMNPV) или Bombyx mori (Bm) NPV) (Kato et al., 2010).
[00059] Бакуловирусы обычно применяют для инфицирования клеток насекомых, чтобы экспрессировать рекомбинантные белки. В частности, экспрессию гетерологичных генов у насекомых можно осуществлять, как описано, например, в патенте США №4745051; Friesen et al. (1986); EP 127,839; EP 155476; Vlak et al. (1988); Miller et al. (1988); Carbonell et al. (1988); Maeda et al. (1985); Lebacq-Verheyden et al. (1988); Smith et al. (1985); Miyajima et al. (1987); и Martin et al. (1988). Многочисленные штаммы и варианты бакуловирусов и соответствующие чувствительные клетки-хозяева насекомых, которые могут быть использованы для получения белка, описаны в Luckow et al (1988), Miller et al. (1986); Maeda et al. (1985) и McKenna (1989).
[00060] Согласно одному аспекту настоящее изобретение относится к геномам rAAV. Геномы rAAV содержит один или более ITR AAV, фланкирующих полинуклеотидную последовательность, кодирующую белок ANO5. Если полинуклеотид кодирует белок ANO5, то указанный полинуклеотид функционально соединен с ДНК, контролирующей транскрипцию, в частности промоторной ДНК и последовательностью ДНК сигнала полиаденилирования, которые являются функциональными в клетках-мишенях, например, мышечных клетках, с образованием генной кассеты. Генная кассета также может содержать интронные последовательности, чтобы облегчить процессинг транскрипта РНК при экспрессии в клетках млекопитающих. Например, геном AAV содержит один или более ITR AAV, фланкирующих один или более экзонов гена ANO5, таких как экзон 8 и экзон 9 гена ANO5. Геном AAV может также содержать один или более из следующих: интрон, ген-репортер, такой как Lac-Zβ-галактозидаза, или ген устойчивости к неомицину, сайты рекомбинации CRE-Lox, такие как LoxP, и сайт внутренней посадки рибосомы (IRES).
Способы получения рекомбинантных AAV
[00061] Согласно настоящему изобретению предложены материалы и способы получения рекомбинантных AAV в клетках насекомых или млекопитающих. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вирусная конструкция дополнительно содержит промотор и сайт рестрикции, расположенный после промотора, чтобы обеспечить возможность введения полинуклеотида, кодирующего один или более представляющих интерес белков, причем промотор и сайт рестрикции расположены в направлении 3'-конца относительно 5'-концевого ITR AAV и в направлении 5'-конца относительно 3'-концевого ITR AAV. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вирусная конструкция дополнительно содержит посттранскрипционный регуляторный элемент, расположенный в направлении 3'-конца относительно сайта рестрикции и в направлении 5'-конца относительно 3'-концевого ITR AAV. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вирусная конструкция дополнительно содержит полинуклеотид, введенный в сайт рестрикции и функционально соединенный с промотором, причем указанный полинуклеотид содержит кодирующую область белка, представляющего интерес. Специалист в данной области техники поймет, что любой из AAV-векторов, раскрытых в настоящей заявке, может быть использован в способе согласно настоящему изобретению в качестве вирусной конструкции для получения рекомбинантного AAV. ДНК-плазмиды переносят в клетки, чувствительные к инфицированию, с помощью вспомогательного вируса AAV (например, аденовируса, аденовируса, дефицитного по E1, или герпесвируса), для сборки генома rAAV в инфекционные вирусные частицы. Методики получения частиц rAAV, в которых в клетке обеспечен геном AAV, который должен быть упакован, гены rep и cap, и функциональные элементы вспомогательного вируса, являются стандартными в данной области техники. Для получения rAAV необходимо присутствие в одной клетке (обозначенной в настоящем документе как упаковывающая клетка) следующих компонентов: генома rAAV, генов rep и cap AAV, отделенных от (т.е. не входящих в состав) генома rAAV, и функциональных элементов вспомогательного вируса.
[00062] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения вспомогательные функции обеспечены одной или более вспомогательными плазмидами или вспомогательными вирусами, содержащими аденовирусные или бакуловирусные вспомогательные гены. Неограничивающие примеры аденовирусных или бакуловирусных вспомогательных генов включают, но не ограничиваются ими, E1A, E1B, E2A, E4 и VA, которые могут обеспечивать вспомогательные функции для упаковки AAV.
[00063] Вспомогательные вирусы AAV известны в данной области техники и включают, например, вирусы семейства Adenoviridae и семейства Herpesviridae. Примеры вспомогательных вирусов AAV включают, но не ограничиваются ими, вспомогательный вирус SAdV-13 и вспомогательный вирус, сходный с SAdV-13, описанный в публикации US20110201088 (содержание которой включено в настоящую заявку посредством ссылки), вспомогательные векторы pHELP (Applied Viromics). Специалист в данной области техники поймет, что любой вспомогательный вирус или вспомогательная плазмида AAV, которая может обеспечить надлежащую вспомогательную функцию для AAV, могут быть использованы согласно настоящему изобретению.
[00064] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения гены cap AAV присутствуют в плазмиде. Плазмида может дополнительно содержать ген rep AAV. Гены cap и/или ген rep из любого серотипа AAV (включая, но не ограничиваясь ими, AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13, AAV rh.74 и любые их варианты) могут быть использованы согласно настоящему изобретению для получения рекомбинантного AAV. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения гены cap AAV кодируют капсид из серотипа 1, серотипа 2, серотипа 4, серотипа 5, серотипа 6, серотипа 7, серотипа 8, серотипа 9, серотипа 10, серотипа 11, серотипа 12, серотипа 13 или их варианта.
[00065] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения клетка насекомого или млекопитающего может быть трансфецирована вспомогательной плазмидой или вспомогательным вирусом, вирусной конструкцией и плазмидой, кодирующей гены cap AAV; и рекомбинантный вирус AAV может быть собран в различные моменты времени после совместной трансфекции. Например, рекомбинантный вирус AAV может быть собран через приблизительно 12 часов, приблизительно 24 часа, приблизительно 36 часов, приблизительно 48 часов, приблизительно 72 часа, приблизительно 96 часов, приблизительно 120 часов или в любой момент времени в период между любыми из двух указанных временных точек после совместной трансфекции.
[00066] Рекомбинантный AAV также может быть получен с использованием любых стандартных способов, известных в данной области техники, подходящих для получения инфекционного рекомбинантного AAV. В некоторых случаях рекомбинантный AAV может быть получен с использованием клетки насекомого или млекопитающего, которая стабильно экспрессирует некоторые из необходимых компонентов для получения частиц AAV. Например, в геном клетки может быть интегрирована плазмида (или несколько плазмид), содержащая гены rep и cap AAV, и селективный маркер, такой как ген устойчивости к неомицину. Клетка насекомого или млекопитающего затем может быть совместно инфицирована вспомогательным вирусом (например, аденовирусом или бакуловирусом, обеспечивающим вспомогательные функции), и вирусным вектором, содержащим 5'-концевые и 3'-концевые ITR AAV (и нуклеотидную последовательность, кодирующую гетерологичный белок, если необходимо). Преимущества указанного способа заключаются в том, что клетки могут быть отобраны и пригодны для крупномасштабного производства рекомбинантного AAV. В качестве еще одного неограничивающего примера, аденовирус или бакуловирус, а не плазмиды, могут быть использованы, чтобы ввести гены rep и cap в упаковывающие клетки. В качестве еще одного неограничивающего примера, вирусный вектор, содержащий 5'-концевые и 3'-концевые LTR AAV, и гены rep-cap могут быть стабильно интегрированы в ДНК вырабатывающих клеток, и вспомогательные функции могут быть обеспечены аденовирусом дикого типа для получения рекомбинантного AAV.
[00067] Способ создания упаковывающей клетки заключается в создании линии клеток, которые стабильно экспрессируют все необходимые компоненты для получения частиц AAV. Например, плазмиду (или несколько плазмид), содержащую геном rAAV, лишенный генов rep и cap AAV, гены rep и cap AAV, отделенные от генома rAAV, и селективный маркер, такой как ген устойчивости к неомицину, интегрируют в геном клетки. Геномы AAV были введены в бактериальные плазмиды с помощью таких процедур как присоединение GC (Samulski et al., 1982, Proc. Natl. Acad. S6. USA, 79:2077-2081), добавление синтетических линкеров, содержащих сайты расщепления эндонуклеазами (Laughlin et al., 1983, Gene, 23:65-73) или с помощью прямого лигирования тупых концов (Senapathy & Carter, 1984, J. Biol. Chem., 259:4661-4666). Линию упаковывающих клеток затем инфицируют вспомогательным вирусом, таким как аденовирус. Преимущества указанного способа заключаются в том, что клетки могут быть отобраны и подходят для крупномасштабного получения rAAV. Другие примеры подходящих способов основаны на применении аденовируса или бакуловируса, а не плазмиды, для введения геномов rAAV и/или генов rep и cap в упаковывающие клетки.
[00068] Общие принципы получения rAAV рассмотрены, например, в Carter, 1992, Current Opinions in Biotechnology, 1533-539; и Muzyczka, 1992, Curr. Topics in Microbial. and Immunol., 158:97-129). Различные подходы описаны в Ratschin et al., Mol. Cell. Biol. 4:2072 (1984); Hermonat et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6466 (1984); Tratschin et al., Mo1. Cell. Biol. 5:3251 (1985); McLaughlin et al., J. Virol., 62:1963 (1988); и Lebkowski et al., 1988 Mol. Cell. Biol., 7:349 (1988). Samulski et al. (1989, J. Virol., 63:3822-3828); патенте США №5173414; WO 95/13365 и соответствующем патенте США №5655876; WO 95/13392; WO 96/17947; PCT/US98/18600; WO 97/09441 (PCT/US96/14423); WO 97/08298 (PCT/US96/13872); WO 97/21825 (PCT/US96/20777); WO 97/06243 (PCT/FR96/01064); WO 99/11764; Perrin et al. (1995) Vaccine 13:1244-1250; Paul et al. (1993) Human Gene Therapy 4:609-615; Clark et al. (1996) Gene Therapy 3:1124-1132; патенте США №5786211; патенте США №5871882; и патенте США №6258595. Вышеупомянутые документы полностью включены в настоящую заявку посредством ссылки, причем особое внимание уделено разделам документов, относящимся к получению rAAV.
[00069] Следовательно, согласно настоящему изобретению предложены упаковывающие клетки, которые вырабатывают инфекционный rAAV. Согласно одному варианту реализации упаковывающие клетки могут представлять собой стабильно трансформированные раковые клетки, такие как клетки линии HeLa, клетки линии HEK293 и клетки линии PerC.6 (линия, родственная 293). Согласно другому варианту реализации настоящего изобретения упаковывающие клетки представляют собой клетки, которые не являются трансформированными раковыми клетками, такими как клетки HEK293 на ранних этапах пассирования (клетки мезонефроса человека, трансформированные E1 аденовируса), клетки MRC-5 (фетальные фибробласты человека), клетки WI-38 (фетальные фибробласты человека), клетки Vero (клетки почек обезьян) и клетки FRhL-2 (фетальные клетки легких макак-резусов).
[00070] rAAV может быть очищен с помощью способов, стандартных в данной области техники, таких как колоночная хроматография или градиенты хлорида цезия. Способы очистки векторов rAAV от вспомогательного вируса известны в данной области техники и включают способы, описанные, например, в Clark et al., Hum. Gene Ther., 10(6): 1031-1039 (1999); Schenpp and Clark, Methods Mol. Med., 69 427-443 (2002); патенте США №6566118 и WO 98/09657.
Типы клеток, используемые в получении AAV
[00071] Вирусные частицы, содержащие AAV-векторы согласно настоящему изобретению, могут быть введены с использованием любого типа клеток беспозвоночных, которые позволяют получать AAV или биологические продукты и которые можно поддерживать в культуре. Например, используемая линия клеток насекомых может быть получена из Spodoptera frugiperda, например, SF9, SF21, SF900+, линий клеток дрозофилы, линий клеток москитов, например, линии клеток, полученные из Aedes albopictus, линий клеток домашнего шелкопряда, например, линии клеток Bombyx mori, линий клеток Trichoplusia ni, таких как клетки High Five, или линий клеток Lepidoptera, таких как линии клеток Ascalapha odorata. Предпочтительными клетками насекомых являются клетки из видов насекомых, которые восприимчивы к бакуловирусной инфекции, включая High Five, Sf9, Se301, SeIZD2109, SeUCR1, Sf9, Sf900+, Sf21, BTI-TN-5B1-4, MG-1, Tn368, HzAm1, BM-N, Ha2302, Hz2E5 и Ao38.
[00072] Бакуловирусы представляют собой покрытые оболочкой ДНК-вирусы членистоногих, два из которых являются хорошо известными векторами экспрессии для получения рекомбинантных белков в клеточных культурах. Бакуловирусы имеют кольцевые двухцепочечные геномы (80-200 т.п.н.), которые могут быть модифицированы так, чтобы обеспечить доставку большого фрагмента генома в конкретные клетки. Вирусы, используемые в качестве вектора, обычно представляют собой многокапсидный нуклеополиэдровирус Autographa californica (AcMNPV) или Bombyx mori (Bm NPV) (Kato et al., 2010).
[00073] Бакуловирусы обычно используют для инфицирования клеток насекомых, чтобы экспрессировать рекомбинантные белки. В частности, экспрессию гетерологичных генов у насекомых можно осуществлять, как описано, например, в патенте США №4745051; Friesen et al. (1986); EP 127,839; EP 155,476; Vlak et al. (1988); Miller et al. (1988); Carbonell et al. (1988); Maeda et al. (1985); Lebacq-Verheyden et al. (1988); Smith et al. (1985); Miyajima et al. (1987); и Martin et al. (1988). Многочисленные штаммы и варианты бакуловирусов и соответствующие чувствительные клетки-хозяева насекомых, которые могут быть использованы для получения белка, описаны в Luckow et al. (1988), Miller et al. (1986); Maeda et al. (1985) и McKenna (1989).
[00074] Согласно другому аспекту настоящего изобретения способы согласно настоящему изобретению также осуществляют с использованием любого типа клеток млекопитающих, которые обеспечивают репликацию AAV или выработку биологических продуктов и которые можно поддерживать в культуре. Предпочтительные клетки млекопитающих могут представлять собой клетки линий HEK293, HeLa, CHO, NS0, SP2/0, PER.C6, Vero, RD, BHK, HT 1080, A549, Cos-7, ARPE-19 и MRC-5.
Композиции
[00075] Согласно другому варианту реализации в область настоящего изобретения включены композиции, содержащие rAAV и/или антиоксиданты согласно настоящему изобретению. Указанные композиции можно применять для регенерации, усиления или восстановления мышц и/или улучшения функции мышц.
[00076] Композиции согласно настоящему изобретению содержат rAAV в фармацевтически приемлемом носителе. Композиции также могут содержать другие ингредиенты, такие как разбавители и адъюванты. Приемлемые носители, разбавители и адъюванты являются нетоксичными для реципиентов и предпочтительно являются инертными в используемых дозировках и концентрациях и включают буферы, такие как фосфат, цитрат или другие органические кислоты; антиоксиданты; низкомолекулярные полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины; хелатирующие агенты, такие как ЭДТА; сахарные спирты, такие как маннит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; и/или неионные поверхностно-активные вещества, такие как Твин, плюроновые кислоты или полиэтиленгликоль (ПЭГ).
[00077] В область настоящего изобретения включены способы трансдукции клетки-мишени с использованием rAAV, в условиях in vivo или в условиях in vitro. Способы в условиях in vivo включают этап введения эффективной дозы, или нескольких эффективных доз, композиции, содержащей rAAV, согласно настоящему изобретению животному (включая пациента-человека), нуждающемуся в этом. Эффективная доза, или несколько эффективных доз, комбинации композиций, содержащих rAAV, согласно настоящему изобретению для субъекта представляет собой дозу, которая предотвращает, замедляет прогрессирование или улучшает (устраняет или снижает) мышечную патологию, связанную с заболеванием, которое лечат. Влияние на мышечную патологию может быть продемонстрировано на основании улучшения одного или более показателей, стандартных в данной области техники, таких как: абсолютная удельная сила мышц; декремент силы при эксцентрических сокращениях мышц; уровень CK в сыворотке крови; уровень тропонина в сыворотке крови; уровень MMP9 в сыворотке крови; сила сцепления; вращение конечности; подвижность или гибкость конечности; ходьба; ходьба в течение 6 минут; сила сгибателя или разгибателя колена; максимальное произвольное изометрическое сокращение мышц; показатели амбулаторного обследования «Северная Звезда»; мышечная масса, уменьшение количества жира или отека, согласно показателям Т2-взвешенных снимков МРТ; мышечные контрактуры; угол сустава конечности; сердечная функция (пульс, сердечный выброс, фракция укорочения в процентах, систолический объем); дыхание (включая частоту дыхания, оксигенацию крови, потребность в дополнительном кислороде); некроз мышц; регенерация мышц; атрофия мышц; воспаление мышц; кальцификация мышц; мышечная центральная нуклеация; размер мышц или размер мышечных волокон; продолжительность жизни; и экспрессия суррогатного белка дистрофина или ламинина альфа 2 (утрофин, плектин 1, ламинин альфа 5, агрин). См., например, Forbes et al., Radiology, 269(1): 198-207 (2013); Govoni et al., Cell Mol. Life Sci., 70(23): 4585-4602 (2013); и Chandrasekharan and Martin, Methods Enzymol., 479: 291-322 (2010). Если дозу вводят до развития заболевания, введение является профилактическим. Если дозу вводят после развития заболевания, введение является терапевтическим. Следовательно, лечение субъекта с помощью способов, описанных в настоящем документе, предназначено для предотвращения, замедления или предотвращения прогрессирования, уменьшения интенсивности, обеспечения ремиссии (частичной или полной) и/или продления выживания для заболевания, которое лечат.
[00078] В область настоящего изобретения также включены способы комбинированной терапии. Комбинированная терапия, используемая согласно настоящему изобретению, включает одновременное лечение и последовательное лечение. Комбинации способов согласно настоящему изобретению со стандартными медицинскими препаратами (например, кортикостероидами для лечения мышечных дистрофий) конкретно включены в область настоящего изобретения, также как и комбинации с новыми способами терапии. В этом отношении возможной является индукция экспрессии ANO5, чтобы уменьшить или ингибировать повреждение мышц, чтобы усилить мышцу или индуцировать восстановление мышц, и затем обеспечить дополнительное лечение. Подходящие дополнительные способы лечения мышечной дистрофии могут включать использование антиоксидантов (например, липоевой кислоты, кофермента Q10 и α-токоферола), IGF-1, подходы на основе интерферирующих РНК, пропуск экзона, ингибирование калпаина, активацию дистрофина и экспрессию дистрогликана. Помимо этого можно использовать добавки к экспрессии ANO5, чтобы увеличить эффект усиления мышц. Например, можно добавлять IGF-1 или другие трофические факторы или инъекции клеток-предшественников мышц.
[00079] Доза rAAV, которая будет введена в способах, описанных в настоящем документе, будет варьироваться в зависимости, например, от конкретного rAAV, способа введения, цели лечения, индивидуума и типа (типов) клетки-мишени, и может быть определена с помощью способов, известных в данной области техники. Титры каждого введенного rAAV могут варьироваться от приблизительно 1×106, приблизительно 1×107, приблизительно 1×108, приблизительно 1×109, приблизительно 1×1010, приблизительно 1×1011, приблизительно 1×1012, приблизительно 1×1013, приблизительно 1×1014 и до приблизительно 1×1015 или более ДНКаза-резистентных частиц (DRP) на 1 мл. Дозировки также могут быть выражены в единицах вирусных геномов (в.г.) (т.е. 1×107 в.г., 1×108 в.г., 1×109 в.г., 1×1010 в.г., 1×1011 в.г., 1×1012 в.г., 1×1013 в.г., 1×1014 в.г., 1×1015 в.г., соответственно). Способы титрования AAV описаны в Clark et al., Hum. Gene Ther., 10: 1031-1039 (1999).
[00080] Введение эффективной дозы композиций можно осуществлять с помощью стандартных путей введения, включая, но не ограничиваясь ими, внутримышечный, парентеральный, внутривенный, пероральный, буккальный, назальный, легочной, внутричерепной, внутрикостный, внутриглазной, ректальный или вагинальный путь введения. Путь (пути) введения и серотип (серотипы) компонентов AAV в rAAV (в частности, ITR AAV и белок капсида) согласно настоящему изобретению могут быть выбраны и/или подобраны специалистами в данной области техники с учетом патологического состояния, которое лечат, и целевой клетки/ткани (тканей), которые должны экспрессировать белок ANO5. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения путь представляет собой одну или более внутримышечных инъекций в четырехглавую мышцу пациента. Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения путь представляет собой одну или более внутримышечных инъекций в каждую из трех основных групп мышц четырехглавой мышцы пациента.
[00081] В частности, фактическое введение rAAV согласно настоящему изобретению может быть выполнено с использованием любого физического способа, который будет переносить рекомбинантный вектор rAAV в ткань-мишень животного. Введение в соответствии с настоящим изобретением включает, но не ограничивается ими, инъекцию в мышцу, кровоток и/или непосредственно в печень. Было показано, что простое ресуспендирование rAAV в забуференном фосфатом физиологическом растворе является достаточным для того чтобы обеспечить носитель, подходящий для экспрессии в мышечной ткани, при этом отсутствуют какие-либо известные ограничения в отношении носителей или других компонентов, которые могут быть введены совместно с rAAV (однако, как правило, при введении rAAV следует избегать использования композиций, которые разрушают ДНК). Капсидные белки rAAV могут быть модифицированы так, чтобы rAAV был нацелен к конкретной ткани-мишени, представляющей интерес, такой как мышца. См., например, WO 02/053703, содержание указанного документа включено в настоящую заявку посредством ссылки. Фармацевтические композиции могут быть получены в виде составов для инъекций или в виде составов для местного введения, которые должны быть доставлены в мышцы с помощью трансдермального транспорта. Многочисленные составы для внутримышечной инъекции и трансдермального транспорта были разработаны ранее и могут быть использованы при осуществлении настоящего изобретения. rAAV можно использовать с любым фармацевтически приемлемым носителем для удобства введения и манипуляций.
[00082] Для внутримышечной инъекции могут быть использованы растворы в адъюванте, таком как кунжутное или арахисовое масло, или в водном растворе пропиленгликоля, а также стерильные водные растворы. При необходимости указанные водные растворы могут быть забуферены, и жидкий разбавитель сначала делают изотоническим с помощью солевого раствора или глюкозы. Растворы rAAV в виде свободной кислоты (ДНК содержит кислые фосфатные группы) или фармакологически приемлемой соли могут быть получены в воде, подходящим образом смешанной с поверхностно-активным веществом, таким как гидроксипропилцеллюлоза. Дисперсия rAAV также может быть получена в глицерине, жидких полиэтиленгликолях и их смесях, а также в маслах. При обычных условиях хранения и использования указанные препараты содержат консервант, чтобы предотвратить размножение микроорганизмов. В этой связи, применяемые стерильные водные среды могут быть легко получены с помощью стандартных методик, хорошо известных специалистам в данной области техники.
[00083] Фармацевтические формы, пригодные для инъекционного применения, включают стерильные водные растворы или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления стерильных растворов или дисперсий для инъекций. Во всех случаях форма должна быть стерильной и должна быть текучей в той степени, чтобы обеспечить прохождение через иглу. Форма должна быть стабильной в условиях производства и хранения и должна быть устойчива к загрязнению микроорганизмами, такими как бактерии и грибы. Носитель может представлять собой растворитель или дисперсионную среду, содержащую, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие смеси и растительные масла. Надлежащую текучесть можно поддерживать, например, путем использования покрытия, такого как лецитин, путем поддержания требуемого размера частиц в случае дисперсии и путем использования поверхностно-активных веществ. Влияние микроорганизмов может быть предотвращено с помощью различных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, сорбиновой кислоты, тимеросала и т.п. Во многих случаях предпочтительным является включение изотонических агентов, например, сахаров или хлорида натрия. Пролонгированное всасывание композиций для инъекций может быть достигнуто за счет использования агентов, замедляющих всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина.
[00084] Стерильные растворы для инъекций получают путем включения rAAV в необходимом количестве в соответствующий растворитель совместно с различными другими ингредиентами, перечисленными выше, при необходимости с последующей стерилизацией путем фильтрации. Обычно дисперсии получают путем включения стерилизованного активного ингредиента в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и другие необходимые ингредиенты из перечисленных выше. В случае стерильных порошков для приготовления стерильных растворов для инъекций предпочтительными способами получения являются вакуумная сушка и методика сублимационной сушки, которые позволяют получить порошок активного ингредиента с любым дополнительным желательным ингредиентом из его раствора, стерилизованного путем фильтрования ранее.
[00085] Трансдукцию с применением rAAV также можно осуществлять в условиях in vitro. Согласно одному варианту реализации желательные мышечные клетки-мишени субъекта выделяют, трансдуцируют rAAV и повторно вводят указанному субъекту. В другом варианте можно применять сингенные или ксеногенные мышечные клетки, если указанные клетки не будут вызывать неприемлемый иммунный ответ у субъекта.
[00086] Подходящие способы трансдукции и повторного введения трансдуцированных клеток субъекту известны в данной области техники. Согласно одному варианту реализации клетки могут быть трансдуцированы в условиях in vitro путем комбинирования rAAV с мышечными клетками, например, в соответствующих средах, и проведения скрининга для выявления клеток, несущих ДНК, представляющую интерес, с использованием стандартных методик, таких как Саузерн-блоттинг и/или ПЦР, или с использованием селективных маркеров. Затем трансдуцированные клетки могут быть изготовлены в виде фармацевтических композиций, и указанная композиция может быть введена субъекту с помощью различных методик, таких как внутримышечная, внутривенная, подкожная и внутрибрюшинная инъекция, или путем инъекции в гладкую мышцу и сердечную мышцу, используя, например, катетер.
[00087] Трансдукция клеток с применением rAAV согласно настоящему изобретению приводит к устойчивой экспрессии белка ANO5. Следовательно, согласно настоящему изобретению предложены способы введения/доставки rAAV, которые экспрессируют ANO5, животному, предпочтительно человеку. Подходящие способы включают трансдукцию тканей (включая, но не ограничиваясь ими, ткани, такие как мышцы, органы, такие как печень и мозг, и железы, такие как слюнные железы) с применением одного или более rAAV согласно настоящему изобретению. Трансдукцию можно осуществлять с помощью генных кассет, содержащих специфичные для ткани регуляторные элементы. Например, согласно одному варианту реализации настоящего изобретения предложены способы трансдукции мышечных клеток и мышечных тканей, направленные с помощью специфичных для мышц регуляторных элементов, включая, но не ограничиваясь ими, те, которые получены из семейств генов актина и миозина, например, из семейства генов myoD [См. Weintraub et al., Science, 251: 761-766 (1991)], фактор, связывающийся с энхансером, специфичным для миоцитов, MEF-2 [Cserjesi and Olson, Mol Cell Biol 11: 4854-4862 (1991)], регуляторные элементы, полученные из гена актина скелетных мышц человека [Muscat et al., Mol Cell Biol, 7: 4089-4099 (1987)], гена актина сердечной мышцы, элементы последовательности креатинкиназы мышц [см. Johnson et al., Mol Cell Biol, 9:3393-3399 (1989)] и элемент энхансера креатинкиназы мыши (mCK), такой как MCK7 или tMCK, который представляет собой тройную копию mCK мыши, регуляторные элементы, полученные из гена тропонина C быстро сокращающихся скелетных мышц, гена тропонина C медленно сокращающихся сердечных мышц и гена тропонина I медленного сокращающихся мышц, индуцируемые гипоксией ядерные факторы (Semenza et al., Proc Natl Acad Sci USA, 88: 5680-5684 (1991)), индуцируемые стероидами элементы и промоторы, включая глюкокортикоид-отвечающий элемент (GRE) [см. Mader and White, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5603-5607 (1993)], а также другие регуляторные элементы.
[00088] Мышечная ткань является привлекательной мишенью для доставки генов в условиях in vivo и генной терапии, поскольку она не является жизненно важным органом и легко доступна. В область настоящего изобретения включена устойчивая экспрессия биологически активных белков ANO5 из трансдуцированных мышечных волокон.
[00089] Под термином «мышечная клетка» или «мышечная ткань» понимают клетку или группу клеток, полученных из мышцы любого вида (например, скелетной мышцы и гладкой мышцы, например, из пищеварительного тракта, мочевого пузыря, кровеносных сосудов или ткани сердца). Указанные мышечные клетки могут быть дифференцированными или недифференцированными, такими как миобласты, миоциты, миотрубочки, кардиомиоциты и кардиомиобласты. Поскольку мышечная ткань легко доступна для системы кровообращения, то белок, вырабатываемый и секретируемый мышечными клетками и тканью в условиях in vivo, следовательно, попадает в кровоток для системной доставки, обеспечивая тем самым устойчивые терапевтические уровни секреции белка из мышцы.
[00090] Термин «трансдукция» используется для обозначения введения/доставки ДНК ANO5 в клетку-реципиент в условиях in vivo или в условиях in vitro посредством дефицитного по репликации rAAV согласно настоящему изобретению, что приводит к экспрессии функционального белка ANO5 клеткой-реципиентом.
Композиции антиоксидантов
[00091] Выработка активных форм кислорода во время сокращения скелетных мышц хорошо доказана. Во время продолжительной физической нагрузки повышенные количества указанных окислителей вызывают повреждение белков и липидов и приводят к активации множества сигнальных путей ответа на стресс (Powers et al., Free Radic Biol Med 51: 942-50 (2011)). Следовательно, в нескольких исследованиях было изучено использование добавки антиоксидантов в течение длительного времени в качестве средства облегчения окислительного стресса в скелетных мышцах. В одном недавнем исследовании сообщалось, что состав из трех антиоксидантов (витамин Е, α-липоевая кислота и кофермент Q10), добавленный к рациону самок мышей, улучшил результативность бега, а также маркеры митохондриальной функции (Abadi et al., PLoS One. 8:e60722 (2013)). Однако в других исследованиях сообщалось, что аналогично модифицированный рацион (витамин Е+α-липоевая кислота) приводил к снижению митохондриального биогенеза у крыс (Strobel et al., Med Sci Sports Exerc. 43:1017-24 (2011)). В настоящее время в данной области техники отсутствует единое мнение относительно влияния добавки антиоксидантов в течение длительного времени на здоровье скелетных мышц, и очень мало внимания уделялось мышцам, ослабленным заболеванием. Однако в настоящем изобретении представлены доказательства того, что антиоксидантная диета оказывает благотворное влияние на скелетную мышцу мышей Ano5 -/- .
Антиоксиданты
[00092] Согласно настоящему изобретению предложено введение композиции антиоксидантов для улучшения физиологии и функции мышц у субъекта, страдающего мышечной дистрофией. В композиции антиоксидантов, описанной в настоящем документе, применяется по меньшей мере один антиоксидант. Помимо этого согласно настоящему изобретению предложены композиции антиоксидантов (антиоксидантные композиции), которые содержат по меньшей мере два или по меньшей мере три антиоксиданта, и в указанных композициях антиоксиданты будут иметь разные клеточные функции. Предпочтительными антиоксидантами являются те, которые, как было показано, специфично обращают повреждение митохондрий в результате старения. Например, согласно настоящему изобретению предложены композиции антиоксидантов, содержащие по меньшей мере один из кофермента Q10, α-липоевой кислоты, каротиноидов (α-каротин, β-каротин, ликопин, лютеин, астаксантин, кантаксантин и зеаксантин), витаминов, таких как витамин A (ретинол, 3,4-дидегидроретинол и 3-гидроксиретинол), витамина C (аскорбиновая кислота) и витамина E (α-токоферол), кофакторов витаминов, полифенолов и флавоноидов (ресвератол, гингерол, куркумин) или минералов (железо, магний, селен, цинк, марганец, йодид). Согласно предпочтительным вариантам реализации указанные антиоксиданты включают кофермент Q10, витамин E, α-липоевую кислоту.
[00093] Кофермент Q10, также известный как Q10, витамин Q10, убихинон, убидекаренон или кофермент Q, представляет собой жирорастворимое вещество. Кофермент Q10 представляет собой соединение, участвующее в переносе электронов, которое является особенно важным для цепи переноса электронов (ETC). ETC управляет синтезом АТФ, который является жизненно важным источником энергии для клетки. Витамин Е, также известный как α-токоферол, является важным компонентом мембран (включая мембраны митохондрий) и удаляет свободные радикалы липидов.
[00094] α-Липоевая кислота, также известная как тиоктовая кислота, представляет собой сероорганическое соединение, полученное из октановой кислоты, которая является важным кофактором для митохондриальных дегидрогеназ, таких как пируватдегидрогеназа, для правильного функционирования цикла Кребса, что в конечном итоге приводит к синтезу АТФ. α-Липоевая кислота также непосредственно влияет на скелетные мышцы, активируя AMPK, сенсор энергии в клетке, который регулирует митохондриальный биогенез посредством PGC1α.
[00095] Полифенолы включают феноловую кислоту и флавоноиды. Например, феноловые кислоты включают протокатеховую кислоту, галловую кислоту, гидроксибензойную кислоту, гидроксикоричную кислоту, например, кофейную кислоту, хлорогеновую кислоту, кумаровую кислоту, феруловую кислоту, синаповую кислоту, антоцианины, такие как цианидин, пеларгонидин, пеонидин, делфинидин и малвидин. Примеры флавоноидов включают флавонолы, такие как кверцетин, кемпферол, мирицетин, флавоны, такие как апигенин и лютеолин, главононы, такие как гесперетин, нарингенин и эридиктиол, изофлавоны, такие как даидзеин, генистеин и глицитеин, и мономерные флавонолы, такие как катехин и эпикатехин.
Введение и дозировка
[00096] Согласно настоящему изобретению предложены материалы и способы лечения мышечной дистрофии и хронической мышечной атрофии с использованием по меньшей мере одного антиоксиданта. Примерные композиции и способы лечения мышечной дистрофии включают введение по меньшей мере одного антиоксиданта или введение по меньшей мере двух антиоксидантов, или введение по меньшей мере трех антиоксидантов. Например, согласно настоящему изобретению предложены композиции антиоксидантов, содержащие α-липоевую кислоту, кофермент Q10 и α-токоферол (также известный как витамин E). Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения композиция антиоксидантов, описанная в настоящем документе, может быть введена отдельно или в комбинации с AAV-векторами, содержащими нуклеотидную последовательность, кодирующую белок ANO5 или его функционально активный фрагмент.
[00097] Способы согласно настоящему изобретения осуществляют с использованием любых средств, приемлемых с медицинской точки зрения, для непосредственного или косвенного введения агентов субъекту-млекопитающему, включая, но не ограничиваясь ими, инъекции, пероральный прием, интраназальное, местное, трансдермальное, парентеральное введение, введение с помощью ингаляционного спрея, вагинальное или ректальное введение. В настоящей заявке термин «парентеральный» включает подкожные, внутривенные, внутримышечные и интрацистернальные инъекции, а также методики введения с помощью катетера или инфузии. В область настоящего изобретения также включено введение путем внутрикожной, внутрибрюшинной, интратекальной, ретробульбарной, внутрилегочной инъекции и/или хирургической имплантации в конкретном месте.
[00098] Согласно одному варианту реализации введение осуществляют в пораженную ткань (например, мышцу), нуждающуюся в лечении, путем прямой инъекции в конкретное место или с помощью механизма с замедленной доставкой или с замедленным высвобождением, который может обеспечить доставку состава внутрь организма. Например, биоразлагаемые микросферы или капсулы или другие биоразлагаемые полимерные конфигурации, способные к замедленной доставке композиции (например, растворимого полипептида, антитела или малой молекулы), могут быть включены в составы согласно настоящему изобретению, имплантированные в пораженную ткань или вблизи нее.
[00099] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения совместное введение антиоксидантов и AAV-векторов, содержащих ANO5, не требует одновременного введения агентов или введения с помощью аналогичного пути, при условии, что периоды времени, в течение которых агенты оказывают свое терапевтическое действие, перекрываются. В область настоящего изобретения включено одновременное или последовательное введение, а также введение в разные дни или недели.
[000100] Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения композиции антиоксидантов и/или AAV-векторов также могут быть доставлены пациенту в нескольких местах. Несколько введений можно осуществлять одновременно или в течение определенного периода времени. В некоторых случаях непрерывный поток терапевтической композиции является благоприятным. Дополнительную терапию можно вводить в течение определенных периодов, например, ежечасно, ежедневно, через день, два раза в неделю, три раза в неделю, еженедельно, каждые 2 недели, каждые 3 недели, ежемесячно или в течение более длительного периода.
[000101] В область настоящего изобретения включено одновременное введение агентов согласно настоящему изобретению в одном составе. В область настоящего изобретения также включено введение агентов в различных составах и совместное введение, при этом совместное введение относится к агентам, вводимым с интервалом в 30 минут.
[000102] Соответственно, согласно настоящему изобретению предложены способы введения пациенту, нуждающемуся в этом, эффективной дозы (или доз, вводимых по существу одновременно, или доз, вводимых с определенными интервалами) rAAV, которые кодируют, например, ANO5, и/или антиоксидантов.
[000103] Количество антиоксидантов в композициях в конкретной дозировке может варьироваться в зависимости от размера индивидуума, которому вводят терапию, а также характеристик расстройства, которое лечат. В примерных способах лечения может потребоваться применение антиоксидантной диеты, содержащей приблизительно 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1,0% липоевой кислоты, приблизительно 0,1%, 0,2%, 0,3%, 0,4%, 0,5%, 0,6%, 0,7%, 0,8%, 0,9%, 1,0% кофермента Q10 и приблизительно 10, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 2000, 3000, 4000, 5000 МЕ α-токоферола или витамина Е. Указанные концентрации можно вводить в виде единичной стандартной лекарственной формы или в виде нескольких доз. Стандартные исследования зависимости ответа от дозы, проведенные сначала на моделях у животных и затем в клинических условиях, выявили оптимальные дозировки для конкретных патологических состояний и популяций пациентов.
[000104] Также будет очевидно, что дозирование может быть модифицировано, если стандартные терапевтические средства вводят в комбинации с терапевтическими средствами согласно настоящему изобретению.
ПРИМЕРЫ
Пример 1
Выведение и создание мышиной модели
Ano5
-/-
[000105] Модель с подавленным геном Ano5 создавали с использованием вектора, нацеленного к Ano5 от экзона 8 до экзона 9, чтобы получить укороченный транскрипт, как показано на Фиг. 1a. Нацеленную конструкцию разрабатывали как условную готовую конструкцию «knock-out first» так, что нулевой аллель создавали путем сплайсинга с элементом для обнаружения, lacZ, как описано Tesla et al. (Genesis 38, 151-158 (2004). Нацеленный вектор Ano5:tm1a(KOMP)Wtsi, содержащий указанный lacZ-меченый мутантный аллель, получали из хранилища UC Davis KOMP (PG00097_Z_1_G0; Karnes. Nature 474, 337-342 (2011)). Кассету для нацеливания вставляли после экзона 8, при этом фланкирующие сайты FRT и loxP присутствовали, чтобы создать условный аллель, если была отмечена эмбриональная летальность.
[000106] После нацеливания и переноса эмбриональных стволовых клеток генотипы подтверждали с помощью геномной ПЦР (Фиг. 1b). Клоны подвергали скринингу с помощью ОТ-ПЦР с использованием следующих наборов праймеров, охватывающих экзоны 1-6 (e1-6) или экзоны 17-20 (e17-20), которые формировали ампликон, содержащий 300 п.н., с эндогенного локуса Ano5 и ампликон, содержащий 200 п.н., с локуса вставки кассеты Ano5, как показано на Фиг. 1c:
генотипирование F 5'-AGTCCTTTTCAGCACAGTCTTTG-3' (SEQ ID NO: 3) генотипирование R 5'-TGAGGCAGTGTGGAGTGAGTA- 3' (SEQ ID NO: 4)
DF38700 5'-GCCAATCATATGGTCTCAGT-3' (SEQ ID NO: 5)
LR-loxp R 5'-ACTGATGGCGAGCTCAGACC-3' (SEQ ID NO: 6)
[000107] Успешно нацеленные эмбриональные стволовые клетки затем инъецировали в бластоцисты мышей линии C57BL/6, и эмбрионы переносили для получения химер для передачи зародышевой линии. Трансгенных гетерозиготных животных проверяли с помощью генотипирования и скрещивали четыре раза с мышами C57BL/6 дикого типа, перед селекцией для получения гомозиготности. Ядра линий животных Ano5 -/- и C57BL/6 разводили и поддерживали как гомозиготных животных в стандартизованных условиях в виварии в RINCH. Колонии поддерживали на рационе для грызунов Teklad Global (корм, содержащий 3,8% волокон, 18,8% белка, 5% жиров) с циклом свет/тьма 12:12 ч.
[000108] Количественную ПЦР проводили и анализировали с помощью системы Fast Real-Time PCR (Thermo Fisher Scientific). Реакции проводили с использованием коктейлей праймер-краситель FAM (Applied Biosystems) для Ano5 (Mm00624629_m1, Mm01335981_m1), Ano6 (Mm00614693_m1) и Gapdh (Mm99999915_g1), в трех повторах для каждого образца. Способ ΔΔCt использовали для расчета нормированного относительного снижения уровня мРНК Ano5 и Ano6 в мышцах Ano5 -/- по сравнению с диким типом. Общую РНК выделяли из срезов свежезамороженной мышцы с использованием тризола (Life Technologies, Карлсбад, Калифорния, США), согласно протоколу производителя. РНК затем очищали на колонке с использованием способа RNAEasy (Qiagen, Валенсия, Калифорния, США) и количество определяли методом спектрофотометрии с использованием NanoDropLite (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). кДНК получали с помощью высокопроизводительного набора для обратной транскрипции кДНК (Thermo Fisher Scientific) с использованием эквивалентных количеств образца РНК на реакцию (200-500 нг). Для полуколичественной ПЦР равные объемы кДНК подвергали 30 циклам ПЦР с последующим электрофорезом в агарозном геле. Использовали праймеры:
mβACt-rt-5' CCTGGCCGTCAGGCAGAT (SEQ ID NO: 7) mβAct-rt-3' GACATGGAGAAGATCTGGCACC (SEQ ID NO: 8) mAno5-rt-F1 CCAACAGAATGAGAACCT (SEQ ID NO: 9) mAno5-rt-R1 GACAGGGGTGGGTACTTTGG (SEQ ID NO: 10) mAno5-rt-F3 CGTTGGCAGCAAGATCAT (SEQ ID NO: 11) mAno5-rt-R3 GGGTACCTATAATCTCTGTACCTGC (SEQ ID NO: 12)
[000109] Результаты количественной ОТ-ПЦР выявили ~80% снижение уровня прекассетного транскрипта и снижение >99% посткассетного транскрипта ANO5 во всех испытанных мышцах (Фиг. 1d). Не было отмечено эмбриональной летальности или проблем с размножением. Поскольку последовательность Ano5 значительно гомологична Ano6, и Ano6, как известно, экспрессируется в скелетных мышцах при некоторых условиях, ОТ-ПЦР проводили для измерения относительной экспрессии кДНК ANO6 мышц Ano5 -/- . Результаты количественной ОТ-ПЦР выявили умеренное, но статистически недостоверное, повышение количества транскрипта Ano6 в дефицитных по Ano5 мышцах.
Пример 2
Клиническая и гистопатологическая оценка мыши
Ano5
-/-
[000110] Мышь Ano5 -/- проявляет многие особенности, характерные для ANO5-миопатии человека, включая повышенные уровни креатинкиназы сыворотки крови, изменчивую слабость разных мышц, измененный диаметр мышечных волокон и непереносимость физической нагрузки. У мышей Ano5 -/- уровень креатинкиназы в сыворотке крови повышается приблизительно в 2 раза (Фиг. 2а).
[000111] Оценки силы тетанического сокращения получали для разгибателя большого пальца (EDL) 10-месячных мышей (n=6 мышей на линию), передней большеберцовой мышцы (TA) 4-месячных мышей (n=5 мышей на линию) и мышц диафрагмы 10-месячных мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа (n=4 мыши на линию). EDL иссекали возле сухожилий и исследовали с использованием физиологического протокола для оценки функции, как описано ранее Rodino-Klapac et al. (J. Transl. Med. 5: 45, 2007) и Liu et al. (Mol. Ther. 11:245-256, 2005) с изменениями. Во время выполнения протокола для оценки эксцентрического сокращения процедуру 5% растяжения-повторного удлинения выполняли в течение 500-700 мс (5% растяжение в течение 100 мс с последующим возвращением к оптимальной длине в течение 100 мс). После протокола для оценки тетанического и эксцентрического сокращения мышей подвергали эвтаназии и мышцы иссекали, взвешивали в увлаженном состоянии, закрепляли на патроне с использованием трагаканта, и затем замораживали в метилбутане, охлажденном в жидком азоте. Измерения силы в TA выполняли, как описано Hakim et al. (J. Appl. Physiol. 110: 1656-1663, 2011) и Wein et al. (Nat. Med. 20:992-1000, 2014).
[000112] Для измерения силы диафрагмы мышей подвергали эвтаназии, и диафрагму иссекали, сохраняя интактными реберные связки и центральное сухожилие, и помещали в буфер Кребса-Хенселейта (KH), как описано ранее Beastrom et al. (Am. J. Pathol. 179: 2464-2474, 2011), Rafeal-Fortney et al. Circ. 124: 582-588, 2011) и Grose et al. (Ann. Clin. Trans. Neurol. 1: 34-44, 2014). Выделяли срезы диафрагмы шириной 2-4 мм. Полоски диафрагмы прочно связывали плетеным хирургическим шелком (6/0, Surgical Specialties, Ридинг, Пенсильвания, США) в центральном сухожилии и сшивали через часть реберной кости, прикрепленной к дистальному концу полосы. Каждую мышцу переносили в водяную баню, наполненную насыщенным кислородом раствором KH, который поддерживали при 37 °C. Мышцы выравнивали горизонтально и привязывали непосредственно между неподвижным штифтом и работающим в двух режимах преобразователем силы-серводвигателем (305C; Aurora Scientific, Аврора, Онтарио, Канада). Два платиновых пластинчатых электрода помещали в ванну с органом, чтобы фланкировать длину мышцы. Мышцу растягивали до оптимального натяжения 1 г и затем оставляли в покое на 10 минут до начала протокола тетанического сокращения. После стабилизации мышцу подвергали подготовительной стимуляции, состоящей из трех сокращений при 1 Гц каждые 30 секунд, за которыми следовали три сокращения при 150 Гц каждую минуту. После периода покоя в течение 3 мин диафрагму стимулировали при 20, 50, 80, 120, 150, 180 Гц с периодом покоя в течение 2 мин между каждым стимулом, каждый длительностью 250 мс, чтобы определить максимальную тетаническую силу. Измеряли длину и массу мышцы. Силу нормировали для массы и длины мышцы (CSA: мышечная масса (мг)/{Lf (мм)×плотность мышц (1,06 мг/мм3))}). Статистическую значимость оценивали с использованием непарного t-критерия Стьюдента для удельной силы и двухфакторного дисперсионного анализа с повторными измерениями для устойчивости к протоколу эксцентрического сокращения.
[000113] Удельная сила сокращения мышцы значительно уменьшилась на ~15% в диафрагме (Фиг. 2b), однако по существу не изменилась в разгибателе большого пальца (EDL) и передней большеберцовой мышце (TA) (Фиг. 2c) мышей Ano5 -/- . Такая изменчивость среди мышц характерна для миопатий, связанных с ANO5, а также наблюдалась при гистологическом анализе различных мышц. По сравнению с диким типом (WT) средний диаметр мышечного волокна был значительно меньше в икроножной мышце (GAS) у мышей Ano5 -/- (Ano5 -/- 35,8±8,3 мкм, WT: 41,8±11,0 мкм, P<0,001) и в меньшей степени в TA мышце (Ano5 -/- 38,1±11,8 мкм, WT: 44,3±12,2 мкм, P<0,001) (Фиг. 2d,e). Мышцы Ano5 -/- проявили умеренную гистопатологию, включая центральные ядра и случайные некротические волокна (Фиг. 2d,e).
[000114] Для оценки переносимости физической нагрузки мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа, в возрасте 7,5 месяца в обеих группах, еженедельно подвергали физической нагрузке в течение 1 ч на протяжении 2 месяцев. Каждая мышь проходила исследование на результативность бега один раз в неделю при уклоне беговой дорожки -10° со скоростью 15 м/мин, которую увеличивали на 1 м каждую минуту до тех пор, пока не было достигнуто истощение (n=3 мыши на линию). Каждый индивидуальный тест останавливали, когда мышь оставалась на электрошоковой пластине (Columbus Instruments) при электрическом стимуле, установленном на 20 В, более чем на 10 секунд без попытки продолжить физическое упражнение. Перерывы определяли как время, когда мыши переставали бежать и отдыхали до тех пор, пока беговая дорожка не возвращалась к электрошоковой пластине. В то время как контрольные мыши дикого типа бежали с постоянной скоростью без перерывов, мыши Ano5 -/- были склонны к частым перерывам на беговой дорожке (14 пауз/мин), где они переставали бежать до тех пор, пока беговая дорожка не возвращалась к электрошоковой пластине (Фиг. 2f).
[000115] Электрофизиологическое исследование проводили на мышцах 6-8 месячных мышей Ano5 -/- и контрольных мышей, используя способы, аналогичные описанным в Arnold et al. (Ann. Clin. Trans. Neurol. 1:34-44, 2014). Мышей анестезировали с использованием ингаляционного изофлурана и размещали в положении лежа на животе с задними конечностями, вытянутыми на 45 °C от тела животного. Амплитуды суммарных потенциалов действия мышцы (CMAP) измеряли от билатеральных трехглавых мышц голени после супрамаксимальной стимуляции седалищного нерва у мутированных (n=6 животных, 12 задних конечностей) и контрольных (n=7 животных, 14 задних конечностей) мышей. Игловую электромиографию проводили в правой мышце GAS для оценки присутствия или отсутствия потенциалов фибрилляции. Локализованные измерения сопротивления, или миографию электрического сопротивления (EIM) выполняли в билатеральных мышцах GAS при частоте от 1000 Гц до 10 МГц с помощью системы Skulpt Inc EIM1103 (Сан-Франциско, Калифорния, США) с использованием способов, аналогичных тем, которые ранее были описаны в мышиных моделях амиотрофического бокового склероза и мышечной дистрофии (Li et al. PLoS One 8:e65976, 2013; Li et al. Muscle & Nerve 49: 829-835, 2014). Вместо поверхностных электродов использовали неподвижную электродную матрицу с четырьмя изолированными электромиографическими игольчатыми электродами 26 калибра (Natus, Миддлетон, Висконсин, США), расположенными на расстоянии 1 мм друг от друга. Электродную матрицу вставляли в брюшко билатеральных икроножных мышц в продольной конфигурации относительно направления мышечного волокна, и в каждой мышце измерения сопротивления проводили с двумя повторами и усредняли с получением одного значения в каждой конечности (n=6 животных, 12 задних конечностей для каждой группы). Используя стандартные процедуры из ранее опубликованных исследований EIM и для упрощения, реактивность, сопротивление и фазу анализировали при двух значениях частоты тока 50 кГц и 100 кГц. Амплитуды CMAP и характеристики сопротивления сравнивали с использованием двухстороннего t-теста. Игольчатую электромиографию, регистрацию индуцированных суммарных потенциалов действия мышц, а также миографию электрического сопротивления проводили в задних конечностях мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа, однако не было обнаружено значительных изменений, сходных с таковыми при заболевании человека (Фиг. 3).
[000116] Другой характерной особенностью зависимой от ANO5 миопатии человека является присутствие чрезмерного количества мышечных волокон с внутримышечными отложениями. Диаметры поперечного сечения мышц определяли в мышцах TA и икроножной мышце (GAS) 6-месячных мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа (n=3 мыши на линию). Мышцы нарезали на срезы и окрашивали гематоксилином и эозином (H&E). Четыре случайных изображения при 20-кратном увеличении на срез для каждого животного получали с помощью камеры Zeiss AxioCam MRC5. Диаметры волокон определяли путем измерения кратчайшего расстояния поперек мышечного волокна с помощью программного обеспечения Zeiss Axiovision LE4. Гистограммы распределения диаметров волокон получали в среднем от 500-600 волокон для TA и 600-700 волокон для GAS. Непарный t-тест использовали для проверки статистической достоверности различий между размерами волокон Ano5 -/- и мышей дикого типа (****p <0,0001).
[000117] Агрегаты в мышцах определяли количественно. Срезы мышц TA и GAS 10-месячных мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа (n=3 мыши на ткань и линию) окрашивали с помощью способа трехцветного окрашивания по Гомори. Получали четыре изображения при 20-кратном увеличении, количество волокон с одним или более агрегатами подсчитывали с использованием программного обеспечения ImageJ и выражали в процентах от общего количества волокон. Статистическую значимость различий между волокнами Ano5 -/- и дикого типа проверяли с помощью однофакторного дисперсионного анализа, используя программное обеспечение GraphPad Prism (****p <0,0001).
[000118] Помимо этого окрашивание для выявления сукцинатдегидрогеназы (SDH) проводили на агрегатах и мышце: переднюю большеберцовую мышцу (ТА) и четырехглавую мышцу разрезали на 18 мкм срезы и окрашивали раствором для выявления SDH, состоящим из 0,2% нитросинего тетразолия (NBT), растворенного в 0,1 М янтарной кислоты и 0,1 М фосфатного буфера с рН=7,4, и инкубировали при 37°C в течение 3 часов. После инкубации срезы промывали водой и обезвоживали в последовательных разведениях спирта, затем очищали ксилолом. Изображения срезов получали с помощью камеры Zeiss AxioCam MRC5.
[000119] Сегменты мышцы TA от 4- и 10-месячных мышей Ano5 -/- и контрольных мышей извлекали, растягивали до их длины в условиях in situ поперек деревянного шпателя и погружали в 3% глутаровый альдегид в 0,1 М фосфатном буфере с рН=7,0 на 4 часа. Мышцу нарезали на блоки ткани длинной 2 мм, хранили в 0,1 М фосфатном буфере с рН=7,4 в течение ночи, и затем после фиксации обрабатывали 1% тетраоксидом осмия в течение 2 ч и обезвоживали в растворах этанола различной концентрации до заливки пластиком. Поперечные срезы толщиной 1 мкм окрашивали толуидиновым синим, исследовали методом световой микроскопии, и срезы тканей из выбранных блоков исследовали под электронным микроскопом Hitachi H-7650 TEM с использованием камеры и программного обеспечения Advanced Microscopy Techniques.
[000120] В мышце мыши Ano5 -/- упомянутые структуры выглядят как четко определенные, нерегулярно очерченные области, окрашенные в красный цвет с помощью модифицированного трехцветного окрашивания, описанного в Pavlocicova et al. (Gen. Physiol. Biophysics 22: 425-440, 2003). Цитоплазматические агрегаты были очевидны уже с 9-месячного возраста и увеличивались с течением времени (Фиг. 4a). Поскольку агрегаты сходного внешнего вида были отмечены у нормальных старых мышей, количество агрегатов определяли количественно. Приблизительно 25% волокон Ano5 -/- проявляли неправильно очерченные красные области при трехцветном окрашивании, в то время как <0,02% контрольных волокон имели указанные агрегаты (Фиг. 4b). Результаты исследования методом электронной микроскопии (ЭМ) выявили, что указанные агрегаты состоят из мембранного материала. Многие мышечные волокна Ano5 -/- имели плотно упакованные скопления везикулярных или трубчатых мембран или случайно ориентированные и неплотно упакованные соединительные трубчатые образования с нечеткими внутренними трубочками, которые соответствовали агрегатам, наблюдаемым при световой микроскопии (Фиг. 4c,d). Мыши ANO5 -/- имели аналогичные результаты гистопатологического исследования, сходные с результатами пациентов, у которых диагностирован дефицит ANO5. Результаты исследования методом электронной микроскопии мышцы пациента со сложной гетерозиготной двукратной мутацией [c.155A>G (p.Asn52Ser)]+[c.191dupA (p.Asn64Lysfs*15)] в кодирующей области гена ANO5 выявили многочисленные агрегаты и множественные участки, имеющие области разрушающихся митохондрий. Агрегаты в мышце Ano5 -/- имели положительные результаты окрашивания для выявления SERCA1, но не активности сукцинатдегидрогеназы (SDH), это указывает на то, что они происходят из саркоплазматического ретикулума, а не из митохондрий (Фиг. 4g). Однако помимо указанных мембранных агрегатов у мышей Ano5 -/- наблюдали разрушающиеся митохондрии и субсарколеммальное накопление митохондрий (Фиг. 4e). Субсарколеммальное накопление митохондрий подтверждали путем окрашивания замороженных срезов для выявления SDH, которая была локализована в плотных пятнах вблизи поверхности мышечных волокон (Фиг. 4f). Чтобы выявить, имеет ли наблюдаемое разрушение митохондрий функциональное значение, активность цитратсинтазы количественно определяли в качестве меры оценки интактных митохондрий и обнаружили значительное уменьшение активности фермента в экстрактах мышц Ano5 -/- по сравнению с контролем дикого типа.
Пример 3
Ano5 облегчает восстановление мембраны
[000121] У здоровых индивидуумов нормальные физические нагрузки приводят к небольшим повреждениям в плазматической мембране, которые заживляются с помощью двух процессов: (i) небольшие разрывы повторно закрываются путем сборки новой плазматической мембраны и (ii) участки с более серьезным нарушением восстанавливаются спутниковыми клетками, которые дифференцируются в миобластоподобные клетки и сливаются для регенерации многоядерных мышечных волокон. Для того чтобы протестировать как потеря экспрессии ANO5 влияет на восстановление мембраны, исследовали эффект повреждения мембраны, полученного с помощью интенсивного лазерного импульса, нанесенного на выделенное мышечное волокно короткого сгибателя пальцев (FDB). Криосрезы размером 12 мкм помещали на предметные стекла микроскопа Fisher Superfrost и блокировали 10% козьей сывороткой и 0,1% твин-20 в фосфатно-солевом буфере (ФСБ) в течение 1 ч при комнатной температуре. Стекла инкубировали в растворе первичного антитела в течение 1 часа при комнатной температуре (антитело к FLAG F7425 Sigma-Aldrich, 1: 175), Serca1 CaF2-5D2 (Developmental Studies Hybridoma Bank, 1:50). Стекла затем промывали 3 раза с использованием ФСБ в течение 1 часа при комнатной температуре с последующим блокированием в течение 30 мин. Вторичные козьи антитела к иммуноглобулину мыши, конъюгированные с Alexa Fluor 594 (A21125, Life Technologies), или вторичные козьи антитела к иммуноглобулину кролика, конъюгированные с Alexa Fluor 568 (A11011, Life Technologies), разводили в соотношении 1:250 в блокирующем растворе и инкубировали в течение 45 мин, затем промывали 3 раза с использованием ФСБ в течение 1 ч. Срезы закрепляли с использованием сред для закрепления Vectashield (Vector Labs, Берлингейм, Калифорния, США) и анализировали с помощью микроскопа Zeiss Axioskop 2 с использованием фильтра Cy5 (возбуждение 578 нм-590 нм, эмиссия 603 нм-671 нм) (Zeiss, Торнвуд, Нью-Йорк, США). Время экспозиции изображения стандартизировали с использованием положительного контроля для каждого антитела каждый день. Изображения получали с использованием программного обеспечения Axiovision 4.5.
[000122] Повреждение мембран оценивали по накоплению FM1-43, стирилового катионного красителя, не способного пересечь мембрану, который не является флуоресцентным в водном растворе, однако ярко флуоресцирует в липидной среде и широко использовался для изучения восстановления мембраны. Небольшой участок, испускающий флуоресцентный сигнал, детектировали в месте повреждения в волокнах дикого типа и Ano5 -/- сразу же после лазерного повреждения (Фиг. 5a). Увеличение интенсивности флуоресценции было более значительным и происходило с ~2-кратно более высокой начальной скоростью в мышечных волокнах Ano5 -/- , по сравнению с волокнами дикого типа. В то время как флуоресцентный сигнал выходил на плато через 190 сек в волокнах дикого типа, интенсивность флуоресценции продолжала увеличиваться в волокнах Ano5 -/- на всем протяжении эксперимента (Фиг. 5b).
[000123] Чтобы проверить, связано ли нарушение восстановления мембраны непосредственно с экспрессией ANO5, кДНК ANO5 человека экспрессировали с помощью аденоассоциированного вируса (AAV) в мышцах Ano5 -/- (Фиг. 4b,c). кДНК ANO5 человека (SEQ ID NO: 1) клонировали в плазмиду AAV2 ITR с использованием сайтов рестрикции Not1 между промотором MHCK7 и сигналом полиаденилирования. rAAV-векторы получали с помощью модифицированного подхода перекрестной упаковки, в соответствии с которым ITR AAV типа 2 могут быть упакованы в несколько серотипов капсида AAV, как описано в Rabinowitz et al. (J. Virol. 76: 791-801, 200). Получение осуществляли с использованием стандартного способа осаждения 3-плазмидной ДНК с Ca3(PO4)2 с использованием клеток линии HEK293. Клетки HEK293 поддерживали в DMEM с добавлением 10% сыворотки теленка Cosmic calf (CCS, Hyclone). Плазмиды для получения вектора включали: (i) pAAV.MHCK7.ANO5, (ii) rep2-cap8 модифицированные AAV-вспомогательные плазмиды, кодирующие изолят rh.74, сходный с cap серотипа 8, и (3) вспомогательную плазмиду аденовируса типа 5 (pAdhelper), экспрессирующую гены аденовируса E2A, E4 ORF6 и VA I/II RNA. Векторы очищали из осветленных клеточных лизатов HEK293 путем последовательной очистки в градиенте йодиксанола и с помощью колоночной анионообменной хроматографии с использованием линейного градиента соли NaCl, как описано ранее в Clark et al. (Human Gene Ther. 10: 1031-10398, 1999). Способ титрования на основе количественной ПЦР использовали для определения титра инкапсидированного векторного генома (в.г.) с использованием детекторной системы Prism 7500 Taqman (PE Ap plied Biosystems, Карлсбад, Калифорния, США).
[000124] AAV-вектор доставляли с помощью внутримышечной инъекции в мышцу мыши. Мыши Ano5 -/- в возрасте 4-5 недель получали внутримышечную инъекцию 1×1011 в.г. rAAVrh.74.MHCK7.huANO5.FLAG в мышцы TA (n=4) или FDB (n=4). Мышцы TA собирали через 4 недели после инъекции и обрабатывали для гистологического и иммунофлуоресцентного исследования.
[000125] Мышечные волокна короткого сгибателя пальцев (FDB) собирали через 10 недель после лечения и подвергали лазерному повреждению. Количественное исследование восстановления мембраны проводили на левой и правой мышцах FDB Ano5 -/- (n=4) и подобранных по возрасту мышей C57BL6 (n=4), как описано Sondergaard et al. (Ann. Clin. Trans. Neurol. 2:256-270, 2015). В общих чертах, волокна FDB выделяли с использованием раствора, содержащего 2% мас./об. коллагеназы типа I, суспендированной в DMEM. После диссоциации мышцы волокна помещали в чашку со стеклянным дном, содержащую 2,5 мкМ красителя FM1-43 в ФСБ в модификации Дульбекко (без Ca/Mg), дополненного 1,5 мМ Са2+. Волокна подвергали лазерному повреждению с использованием двухфотонного конфокального лазерного сканирующего микроскопа FluoView® FV1000 (Olympus). Волокна повреждали, используя точку размером 4,479 мм лазера с длиной волны 850 нм при мощности 20%, и получали изображения каждые 5 секунд в течение 190 с, чтобы визуализировать поглощение красителя FM1-43. В среднем визуализировали 7-10 волокон на мышцу на одну мышь (всего 31 волокно дикого типа, 39 волокон Ano5 -/- и 30 волокон Ano5 -/- , восстановленных с помощью AAV-ANO5). Интенсивность флуоресценции инфильтратов красителя, окружающих участок повреждения на мембране, анализировали с помощью программного обеспечения ImageJ путем измерения интегральной плотности интенсивности пикселей в пределах определенной области. Для проведения указанного анализа с помощью ImageJ прямоугольный блок размером 0,75 пикселя на 1,00 пиксель рисовали в условиях двукратного увеличения и использовали для измерения интенсивности красителя в этом участке. Интенсивность флуоресценции в отдельный момент времени, измеренную в ходе анализа, нормировали к исходной интенсивности, измеренной при t=-5 с (до повреждения). При анализе интенсивности флуоресценции значения для всех волокон из каждой линии усредняли. Для определения статистической значимости различий между обработанными и необработанными волокнами в каждый момент времени проводили двухфакторный дисперсионный анализ (p<0,001). Чтобы количественно оценить изменение интенсивности флуоресценции точки данных аппроксимировали к уравнению Хилла с использованием Origin Pro9.1. Все кривые аппроксимировали с использованием скорректированного R2>0,998. Волокна Ano5 -/- , волокна WT и волокна Ano5 -/ , - обработанные AAV.ANO5, значительно различались, начиная с 100 секунды после повреждения. AAV.ANO5 частично восстанавливал повторное запечатывание мембраны мышцы Ano5 -/- (Фиг. 5a,b,c).
Пример 4
Нарушение регенерации у мышей Ano5 KO
[000126] Чтобы изучить, нарушена ли регенерация мышц также у мышей Ano5 -/- , исследовали способность мышц к восстановлению после травмы, полученной путем инъекции кардиотоксина (Фиг. 5d). Мышей анестезировали с помощью ингаляционного изофлурана и кардиотоксин (разведенный до концентрации 10 мкМ стерильным физиологическим раствором) вводили путем инъекции каждые две недели в общей сложности в 3 этапа. По 30 мкл и 50 мкл кардиотоксина вводили в левую мышцу TA и левую мышцу GAS, соответственно, 8-недельным мышам Ano5 -/- и подобранным по возрасту контрольным мышам. Стерильный физиологический раствор вводили путем инъекции в контралатеральную мышцу в качестве плацебо-контроля. Группы мышей подвергали эвтаназии, и их мышцы собирали через 1, 3, 7, 14, 30 и 90 дней после последней инъекции кардиотоксина (n=3 мыши на линию на точку данных). Получали четыре изображения ТА при 20-кратном увеличении, и диаметр волокна измеряли на криосрезах, окрашенных гематоксилином и эозином, через 1 и 3 месяца после последней инъекции кардиотоксина с использованием AxioVision 4.8. Измеряли в среднем 500-600 мышечных волокон, и статистическую значимость различий между размером мышечного волокна пораженных мышей Ano5 -/- и пораженных контрольных мышей определяли с помощью непарного t-теста (GraphPad Prism) (****p<0,0001).
[000127] Чтобы отслеживать временные изменения некроза и регенерации, в мышцы TA и GAS 8-недельных мышей 3 раза вводили кардиотоксин с двухнедельным интервалом между введениями. Ткани собирали через 1, 3, 7, 14, 30 и 90 дней после последней инъекции (Фиг. 5d). Контралатеральную сторону использовали в качестве контрольной стороны, в которую вводили только физиологический раствор. Мышца дикого типа регенерировала после обработки кардиотоксином, так, что к 1 месяцу после обработки мышца в целом имела нормальный вид, за исключением центральных ядер в новых регенерированных волокнах. Однако у мышей Ano5 -/- наблюдали значительную задержку регенерации и длительный некроз. Через 3 месяца средний диаметр волокна мышцы Ano5 -/- оставался значительно сниженным по сравнению с диким типом, и многие волокна проявляли центральные ядра (Фиг. 5d,e).
Пример 5
Оценка действия антиоксидантной терапии
[000128] Чтобы исследовать потенциальные преимущества тройной антиоксидантной диеты на скелетной мышце дефицитных по аноктамину 5 мышей (Ano5 -/- ), когорты 2-месячных мышей дикого типа (WT) BL6 и мышей Ano5 -/- получали нормальный корм для мышей или рацион с добавлением тройной композиции антиоксидантов, содержащей 1000 МЕ витамина E, 0,1% α-липоевой кислоты и 0,25% кофермента Q10 (в виде восстановленной формы, убихинола). Мыши проходили испытания на беговой дорожке до изнеможения в течение 3 дней подряд каждую 4-ю неделю в течение 16 недель, и животных умерщвляли для исследования выходных функциональных показателей, связанных со здоровьем мышц (активность и сила диафрагмы) и окислительным стрессом (активность цитратсинтазы и экспрессия pgc1α).
Лазерный мониторинг активности в клетке с открытым полем
[000129] Камеру для оценки активности в открытом поле использовали для определения общей активности экспериментальных мышей в соответствии с ранее описанным протоколом (Kobayashi et al., Nature 456: 511-5 (2008); Beastrom et al., Am J Pathol 179: 2464-74 (2011)) с несколькими модификациями. Всех мышей испытывали в одно и то же время дня ранним утром, непосредственно перед завершением ночного цикла, когда мыши наиболее активны. Всех мышей испытывали в изолированной комнате, при неярком свете, каждый раз в присутствии одного и того же исследователя. Помимо этого авторы настоящего изобретения испытывали мышей, которые не были индивидуально размещены (Voikar et al., Genes Brain Behav 4: 240-52(2005)), в соответствии с процедурой, описанной в предыдущих отчетах, чтобы уменьшить беспокойство и свести к минимуму поведенческие переменные, что может потенциально повлиять на нормальную активность мышей и, следовательно, результаты анализа. Активность мышей контролировали с использованием Photobeam Activity System (San Diego Instruments, Сан-Диего, Калифорния, США). В данной системе используется сетка невидимых инфракрасных световых лучей, которые пересекают камеру животного спереди назад и слева направо, чтобы следить за положением и движением мыши в плоскости XYZ. Активность регистрировали в циклах продолжительностью 1 ч с 5-минутными интервалами. Мышей акклиматизировали к комнате для исследования активности для начальной 1-часовой сессии за несколько дней до начала сбора данных. Мышей испытывали в отдельных камерах в группах по 4 особи. Оборудование для испытаний очищали между каждым использованием, чтобы уменьшить реакционные поведенческие переменные мыши, которые могли бы изменить результаты авторов настоящего изобретения. Собранные данные конвертировали в рабочий лист Microsoft Excel, и все вычисления выполняли в программе Excel. Индивидуальные пересечения луча света для движения в плоскостях X и Y добавляли для каждой мыши, чтобы представить общую траекторию движения, и пересечения луча света в плоскости Z добавляли для получения вертикальной активности в течение 1-часового интервала времени.
[000130] В конце 12 и 16 недели двух мышей из каждой группы помещали в клетку для оценки активности для мониторинга произвольной активности. Общую активность мышей измеряли как количество раз, когда мыши пересекали горизонтальные и/или вертикальные лазерные лучи в течение 45-минутного периода после изнурения на беговой дорожке (Фиг. 6). Было обнаружено, что через 16 недель мыши Ano5 -/- , получавшие антиоксидантный рацион, были более активными, чем мыши, получавшие стандартный корм (плацебо), это указывает на то, что антиоксиданты оказали положительное влияние на произвольную активность после изнурения.
Тетаническое сокращение диафрагмы для функциональной оценки
[000131] Несмотря на то, что результаты поведенческих количественных исследований указывали на определенное терапевтическое действие, указанные показатели исхода зависят от нескольких переменных, не связанных с рационом. Для того чтобы исследовать влияние антиоксидантов на функцию скелетных мышц, проводили измерения силы на диафрагме мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа (Фиг. 7). Диафрагма была выбрана, поскольку ранее было показано, что мыши Ano5 -/- имеют недостаточную силу диафрагмы, но не мышц конечностей (Griffin et al., Hum Mol Genet 25: 1900-1911 (2016)).
[000132] Мышей подвергали эвтаназии, и диафрагму иссекали с реберными связками и центральным сухожилием и помещали в буфер KH, как описано ранее (Beastrom et al., Am J Pathol 179: 2464-74 (2011); Rafael-Fortney et al., Circulation 124: 582-8 (2011); Moorwood et al., Journal of Visualized Experiments 71: e50036 (2013)). Выделяли срезы диафрагмы шириной 2-4 мм. Полоски диафрагмы прочно связывали плетеным хирургическим шелком (6/0, Surgical Specialties, Ридинг, Пенсильвания, США) в центральном сухожилии и сшивали через часть реберной кости, прикрепленной к дистальному концу полосы. Каждую мышцу переносили в водяную баню, наполненную насыщенным кислородом раствором KH, который поддерживали при 37 °C. Мышцы выравнивали горизонтально и привязывали непосредственно между неподвижным штифтом и работающим в двух режимах преобразователем силы-серводвигателем (305C; Aurora Scientific, Аврора, Онтарио, Канада). Два платиновых пластинчатых электрода помещали в ванну с органом, чтобы фланкировать длину мышцы. Мышцу растягивали до оптимального натяжения, чтобы измерить судорожные сокращения, и затем оставляли на 10 минут в покое до начала протокола тетанического сокращения. После стабилизации мышцу растягивали до оптимальной длины 1 г и подвергали подготовительной стимуляции, состоящей из трех сокращений при 1 Гц каждые 30 секунд, за которыми следовали три сокращения при 150 Гц каждую минуту. После периода покоя в течение 3 мин диафрагму стимулировали при 20, 50, 80, 120, 150, 180 Гц с периодом покоя в течение 2 мин между каждым стимулом, каждый длительностью 250 мс, чтобы определить максимальную тетаническую силу. Измеряли длину и массу мышцы. Силу нормировали для массы и длины мышцы. Значительное улучшение удельной силы диафрагмы наблюдали у мышей ano5 -/- , получавших рацион с композицией трех антиоксидантов, по сравнению с мышами ano5 -/ , получавшими плацебо (Фиг. 7).
Митохондриальный биогенез
[000133] После установления связи тройной антиоксидантной терапии с содержанием окислительных волокон, исследовали биогенез и функции митохондрий. Результаты предыдущих исследований выявили, что упражнения стимулируют пути, ведущие к митохондриальному биогенезу, в то время как антиоксидантная терапия снижает указанную передачу сигналов. Результаты, полученные на ткани икроножной мышцы самцов, подтверждают, что лечение антиоксидантами уменьшает экспрессию ключевого регулятора митохондриального биогенеза PGC-1a (Фиг. 8a). Интересно отметить, что было обнаружено, что активность цитратсинтазы выше у мышей, получавших рацион с антиоксидантами, среди всех комбинаций генотип-пол (Фиг. 8b). Данный факт можно объяснить тем, что увеличение доли окислительных волокон, которые имеют высокое содержание митохондрий, маскирует любое уменьшение митохондриального биогенеза в индивидуальном волокне.
[000134] В заключение следует отметить, что было обнаружено, что тройная антиоксидантная терапия оказывает значительное влияние на некоторые показатели физиологии и функции мышц, включая произвольную активность, прочность диафрагмы, размер волокна, состав волокна и активность митохондриального фермента. Было обнаружено, что полученные результаты, в некоторых случаях, зависят от пола. LGMD2L имеет гендерную специфику, поскольку самцы подвержены этому заболеванию в большей степени.
сукцинатдегидрогеназы (SDH). Стрелки указывают на агрегаты, которые лишены окраски SDH (слева). Последовательные срезы от 10-месячных мышей Ano5 -/- свидетельствуют о том, что многие мембранные агрегаты (белые стрелки), наблюдаемые при трехцветном окрашивании, являются положительными в отношении SERCA1 (справа), это указывает на то, что они получены из саркоплазматического ретикулума. Масштабная метка=40 мкм.
[00040] На Фигуре 5A-5E представлены результаты, свидетельствующие о том, что у мышей Ano5 -/- нарушено восстановление мембраны. На панели (a) представлены изображения мышечных волокон мышей Ano5 -/- и мышей дикого типа через 5 с и 19 с после повреждения лазерным импульсом. Красные стрелки указывают участок повреждения, при этом краситель FM1-43 накапливался быстрее в мышцах мышей Ano5 -/- по сравнению с мышами дикого типа. Масштабная метка=50 мкм. На панели (b) представлены результаты измерения интенсивности флуоресценции после лазерного повреждения. Мышца Ano5 -/- статистически достоверно отличается от волокон мышей дикого типа и волокон AAV.ANO5 во всех временных точках через >100 секунд после повреждения (двухфакторный дисперсионный анализ, P<0,001). На панели (c) представлены уровни экспрессии ANO5-FLAG в мышцах Ano5 -/- , инъецированных 5×1010 генома вектора AAV.ANO5.FLAG. Иммунофлуоресцентные исследования с применением антитела к FLAG выявили экспрессию ANO5-FLAG на поверхности клеток в обработанной мышце (сверху), которая отсутствовала в необработанной мышце Ano5 -/- (внизу). Масштабная метка=40 мкм. На панели (d) представлены результаты, указывающие на восстановление мышц от повреждения, вызванного кардиотоксином. Представлены срезы тканей, окрашенные гематоксилином и эозином, мышц TA мышей дикого типа и Ano5 -/- через 1, 3, 7, 14, 30 и 90 дней после инъекции кардиотоксина (представлены данные для 3, 7, 14 и 30 дня). Мышца Ano5 -/- была повреждена более сильно и проявила нарушение регенерации по сравнению с диким типом. На панели (e) представлены результаты, свидетельствующие о том, что размер мышечных волокон остается достоверно меньшим в мышце Ano5 -/- по сравнению с диким типом
--->
ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> Исследовательский институт при Общенациональном детском
госпитале
<120> Способы лечения мышечной дистрофии
<130> 28335/49966A
<150> 62/254,539
<151> 2015-11-12
<150> 62/419,793
<151> 2016-11-09
<160> 13
<170> PatentIn версия 3.5
<210> 1
<211> 2739
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<400> 1
atgggcgacc cggatctcct ggaagtgttg gcggaggaag gggaaaaagt caataagcat 60
atagactact ctttccaaat gagtgagcag agcctgagca gcagagagac cagctttctc 120
atcaatgaag aaacaatgcc tgcaaagcga ttcaatttgt tcctgaggcg gcggcttatg 180
tttcaaaaaa atcagcaaag caaagattct atcttcttcc gagatgggat taggcaaatt 240
gattttgtgc tttcctacgt tgatgacgta aagaaagacg cagagttaaa ggcggaaaga 300
agaaaagagt ttgaaactaa tctcagaaaa acaggtcttg agttggaaat agaagacaaa 360
agggactcgg aagatggaag aacttatttt gtcaagatcc atgccccttg ggaggtatta 420
gttacctatg ctgaagtctt gggaatcaaa atgcctatta aggagagtga tattccccgc 480
cctaagcaca ctcctataag ctatgtgctt ggacctgtaa gactcccact gagtgtgaag 540
tatccccatc ctgaatattt tactgcacaa ttcagcagac atcggcagga gctcttcctc 600
atcgaagatc aggcaacctt ctttccatcc tcatcaagaa acagaattgt gtactatatt 660
ctctcaagat gtccttttgg catagaagat gggaagaaaa ggtttgggat tgaaagactg 720
ctaaactcta acacttactc atctgcctat ccactccatg atggccaata ttggaagcca 780
tcagaacctc ccaatcctac caatgaaaga tacacacttc accagaattg ggctcgattt 840
tcctatttct acaaggagca gcctttagac ttgattaaga attattatgg agaaaaaatt 900
ggtatctatt ttgtctttct tggattttac acagaaatgc tattctttgc agctgtagtt 960
ggcttagctt gttttattta tggcttatta tcaatggaac ataacacaag cagcactgaa 1020
atctgtgacc ctgagattgg tggtcagatg atcatgtgcc cactctgtga tcaagtgtgt 1080
gattattgga gactaaatag tacgtgtttg gcttcaaagt tctcccattt gtttgataat 1140
gagtcaacag tgttctttgc aatattcatg ggaatttggg tcaccttatt tttggagttt 1200
tggaaacaac gacaagccag actggaatat gaatgggacc tggtggactt tgaagaggaa 1260
cagcagcagc ttcagctgag accagaattt gaagctatgt gtaaacacag gaaattgaat 1320
gcagtgacta aggagatgga accttacatg cctctataca cgcgtattcc atggtacttt 1380
ctttcaggag ccacagtgac attatggatg tctcttgtcg tcaccagtat ggtagctgta 1440
attgtgtacc gcctgtcagt ctttgctaca tttgctagtt tcatggaaag tgatgcatcc 1500
ttaaagcagg tcaaaagctt ccttactcct cagataacca catcactcac aggatcatgc 1560
ttgaacttta ttgtcatctt gatcttgaat ttcttttatg aaaagatatc tgcctggatc 1620
acaaaaatgg aaattcctcg aacataccag gagtatgaga gcagtcttac cttgaaaatg 1680
ttcctgtttc agtttgtaaa tttttactca tcctgcttct acgtagcttt ctttaaaggg 1740
aagttcgtag gctatcctgg aaaatacaca tatttattta atgagtggag aagtgaagag 1800
tgtgatcctg gaggctgtct tatagaattg acaacccaat tgaccattat aatgaccggg 1860
aaacagattt ttggaaacat taaagaagcc atttatccct tggctttgaa ttggtggaga 1920
cgccgaaaag ctcggacaaa ctctgagaag ctgtatagtc gatgggagca ggatcatgac 1980
cttgaaagtt ttggacccct tgggcttttc tatgagtact tagaaacagt tactcaattt 2040
ggatttgtta cactatttgt ggcctctttt cctttggctc ctcttcttgc tctcataaat 2100
aatattgtag agattcgagt ggatgcctgg aaacttacca ctcaatacag gagaactgta 2160
gcttctaaag ctcatagcat aggtgtttgg caagacattc tttatggaat ggctgtcctt 2220
tctgttgcaa ctaatgcctt tattgttgca tttacgtcag acatcattcc ccgtctagtt 2280
tactactatg cttactcaac aaatgccaca cagcctatga caggatatgt gaataatagc 2340
ctgtcagtat tcctgatagc tgattttcca aaccacactg caccttcgga aaaacgagac 2400
ttcatcactt gcaggtacag agattacaga tatcctcctg atgacgagaa taaatatttt 2460
cataatatgc aattctggca tgtccttgct gccaagatga ccttcatcat tgttatggaa 2520
catgttgtgt ttttagttaa atttttgctg gcctggatga tacctgatgt tccaaaagat 2580
gttgtggaga gaatcaagag agaaaagtta atgactatca agattctcca tgattttgag 2640
ctcaacaaat taaaagagaa cttgggaatt aattctaatg aatttgccaa gcatgtcatg 2700
attgaggaaa acaaagcaca gctggctaaa tcaacactc 2739
<210> 2
<211> 913
<212> БЕЛОК
<213> Homo sapiens
<400> 2
Met Gly Asp Pro Asp Leu Leu Glu Val Leu Ala Glu Glu Gly Glu Lys
1 5 10 15
Val Asn Lys His Ile Asp Tyr Ser Phe Gln Met Ser Glu Gln Ser Leu
20 25 30
Ser Ser Arg Glu Thr Ser Phe Leu Ile Asn Glu Glu Thr Met Pro Ala
35 40 45
Lys Arg Phe Asn Leu Phe Leu Arg Arg Arg Leu Met Phe Gln Lys Asn
50 55 60
Gln Gln Ser Lys Asp Ser Ile Phe Phe Arg Asp Gly Ile Arg Gln Ile
65 70 75 80
Asp Phe Val Leu Ser Tyr Val Asp Asp Val Lys Lys Asp Ala Glu Leu
85 90 95
Lys Ala Glu Arg Arg Lys Glu Phe Glu Thr Asn Leu Arg Lys Thr Gly
100 105 110
Leu Glu Leu Glu Ile Glu Asp Lys Arg Asp Ser Glu Asp Gly Arg Thr
115 120 125
Tyr Phe Val Lys Ile His Ala Pro Trp Glu Val Leu Val Thr Tyr Ala
130 135 140
Glu Val Leu Gly Ile Lys Met Pro Ile Lys Glu Ser Asp Ile Pro Arg
145 150 155 160
Pro Lys His Thr Pro Ile Ser Tyr Val Leu Gly Pro Val Arg Leu Pro
165 170 175
Leu Ser Val Lys Tyr Pro His Pro Glu Tyr Phe Thr Ala Gln Phe Ser
180 185 190
Arg His Arg Gln Glu Leu Phe Leu Ile Glu Asp Gln Ala Thr Phe Phe
195 200 205
Pro Ser Ser Ser Arg Asn Arg Ile Val Tyr Tyr Ile Leu Ser Arg Cys
210 215 220
Pro Phe Gly Ile Glu Asp Gly Lys Lys Arg Phe Gly Ile Glu Arg Leu
225 230 235 240
Leu Asn Ser Asn Thr Tyr Ser Ser Ala Tyr Pro Leu His Asp Gly Gln
245 250 255
Tyr Trp Lys Pro Ser Glu Pro Pro Asn Pro Thr Asn Glu Arg Tyr Thr
260 265 270
Leu His Gln Asn Trp Ala Arg Phe Ser Tyr Phe Tyr Lys Glu Gln Pro
275 280 285
Leu Asp Leu Ile Lys Asn Tyr Tyr Gly Glu Lys Ile Gly Ile Tyr Phe
290 295 300
Val Phe Leu Gly Phe Tyr Thr Glu Met Leu Phe Phe Ala Ala Val Val
305 310 315 320
Gly Leu Ala Cys Phe Ile Tyr Gly Leu Leu Ser Met Glu His Asn Thr
325 330 335
Ser Ser Thr Glu Ile Cys Asp Pro Glu Ile Gly Gly Gln Met Ile Met
340 345 350
Cys Pro Leu Cys Asp Gln Val Cys Asp Tyr Trp Arg Leu Asn Ser Thr
355 360 365
Cys Leu Ala Ser Lys Phe Ser His Leu Phe Asp Asn Glu Ser Thr Val
370 375 380
Phe Phe Ala Ile Phe Met Gly Ile Trp Val Thr Leu Phe Leu Glu Phe
385 390 395 400
Trp Lys Gln Arg Gln Ala Arg Leu Glu Tyr Glu Trp Asp Leu Val Asp
405 410 415
Phe Glu Glu Glu Gln Gln Gln Leu Gln Leu Arg Pro Glu Phe Glu Ala
420 425 430
Met Cys Lys His Arg Lys Leu Asn Ala Val Thr Lys Glu Met Glu Pro
435 440 445
Tyr Met Pro Leu Tyr Thr Arg Ile Pro Trp Tyr Phe Leu Ser Gly Ala
450 455 460
Thr Val Thr Leu Trp Met Ser Leu Val Val Thr Ser Met Val Ala Val
465 470 475 480
Ile Val Tyr Arg Leu Ser Val Phe Ala Thr Phe Ala Ser Phe Met Glu
485 490 495
Ser Asp Ala Ser Leu Lys Gln Val Lys Ser Phe Leu Thr Pro Gln Ile
500 505 510
Thr Thr Ser Leu Thr Gly Ser Cys Leu Asn Phe Ile Val Ile Leu Ile
515 520 525
Leu Asn Phe Phe Tyr Glu Lys Ile Ser Ala Trp Ile Thr Lys Met Glu
530 535 540
Ile Pro Arg Thr Tyr Gln Glu Tyr Glu Ser Ser Leu Thr Leu Lys Met
545 550 555 560
Phe Leu Phe Gln Phe Val Asn Phe Tyr Ser Ser Cys Phe Tyr Val Ala
565 570 575
Phe Phe Lys Gly Lys Phe Val Gly Tyr Pro Gly Lys Tyr Thr Tyr Leu
580 585 590
Phe Asn Glu Trp Arg Ser Glu Glu Cys Asp Pro Gly Gly Cys Leu Ile
595 600 605
Glu Leu Thr Thr Gln Leu Thr Ile Ile Met Thr Gly Lys Gln Ile Phe
610 615 620
Gly Asn Ile Lys Glu Ala Ile Tyr Pro Leu Ala Leu Asn Trp Trp Arg
625 630 635 640
Arg Arg Lys Ala Arg Thr Asn Ser Glu Lys Leu Tyr Ser Arg Trp Glu
645 650 655
Gln Asp His Asp Leu Glu Ser Phe Gly Pro Leu Gly Leu Phe Tyr Glu
660 665 670
Tyr Leu Glu Thr Val Thr Gln Phe Gly Phe Val Thr Leu Phe Val Ala
675 680 685
Ser Phe Pro Leu Ala Pro Leu Leu Ala Leu Ile Asn Asn Ile Val Glu
690 695 700
Ile Arg Val Asp Ala Trp Lys Leu Thr Thr Gln Tyr Arg Arg Thr Val
705 710 715 720
Ala Ser Lys Ala His Ser Ile Gly Val Trp Gln Asp Ile Leu Tyr Gly
725 730 735
Met Ala Val Leu Ser Val Ala Thr Asn Ala Phe Ile Val Ala Phe Thr
740 745 750
Ser Asp Ile Ile Pro Arg Leu Val Tyr Tyr Tyr Ala Tyr Ser Thr Asn
755 760 765
Ala Thr Gln Pro Met Thr Gly Tyr Val Asn Asn Ser Leu Ser Val Phe
770 775 780
Leu Ile Ala Asp Phe Pro Asn His Thr Ala Pro Ser Glu Lys Arg Asp
785 790 795 800
Phe Ile Thr Cys Arg Tyr Arg Asp Tyr Arg Tyr Pro Pro Asp Asp Glu
805 810 815
Asn Lys Tyr Phe His Asn Met Gln Phe Trp His Val Leu Ala Ala Lys
820 825 830
Met Thr Phe Ile Ile Val Met Glu His Val Val Phe Leu Val Lys Phe
835 840 845
Leu Leu Ala Trp Met Ile Pro Asp Val Pro Lys Asp Val Val Glu Arg
850 855 860
Ile Lys Arg Glu Lys Leu Met Thr Ile Lys Ile Leu His Asp Phe Glu
865 870 875 880
Leu Asn Lys Leu Lys Glu Asn Leu Gly Ile Asn Ser Asn Glu Phe Ala
885 890 895
Lys His Val Met Ile Glu Glu Asn Lys Ala Gln Leu Ala Lys Ser Thr
900 905 910
Leu
<210> 3
<211> 23
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 3
agtccttttc agcacagtct ttg 23
<210> 4
<211> 21
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 4
tgaggcagtg tggagtgagt a 21
<210> 5
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 5
gccaatcata tggtctcagt 20
<210> 6
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 6
actgatggcg agctcagacc 20
<210> 7
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 7
cctggccgtc aggcagat 18
<210> 8
<211> 22
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 8
gacatggaga agatctggca cc 22
<210> 9
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 9
ccaacagaat gagaacct 18
<210> 10
<211> 20
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 10
gacaggggtg ggtactttgg 20
<210> 11
<211> 18
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 11
cgttggcagc aagatcat 18
<210> 12
<211> 25
<212> ДНК
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Синтетический праймер
<400> 12
gggtacctat aatctctgta cctgc 25
<210> 13
<211> 6661
<212> ДНК
<213> Homo sapiens
<300>
<308> NCBI / NM_213599.2
<309> 2015-03-15
<313> (1)..(6661)
<400> 13
agagcgccca ggagcgctac cggctgaggg tggggaagcg cagggccaag cgcgcgaagc 60
aggttgtggg ggaccgggtc gagtggaagt acccgccgga gaggaaggcc ggctggctgt 120
ggcgcccaga gacggtggag tccgaggagg aggagaagga ggcctgcaga aggaagagca 180
ggcccttaga agtccagcag cagcaactcc ggcggcccac agtcagattc agcacctgcc 240
tcagatctcc acgtctgtct cagctgcccc tctcctgctg cctctcaggc accagtgcca 300
ttaacgagct ggcgaagatg ggcgacccgg atctcctgga agtgttggcg gaggaagggg 360
aaaaagtcaa taagcatata gactactctt tccaaatgag tgagcagagc ctgagcagca 420
gagagaccag ctttctcatc aatgaagaaa caatgcctgc aaagcgattc aatttgttcc 480
tgaggcggcg gcttatgttt caaaaaaatc agcaaagcaa agattctatc ttcttccgag 540
atgggattag gcaaattgat tttgtgcttt cctacgttga tgatgtaaag aaagacgcag 600
agttaaaggc ggaaagaaga aaagagtttg aaactaatct cagaaaaaca ggtcttgagt 660
tggaaataga agacaaaagg gactcggaag atggaagaac ttattttgtc aagatccatg 720
ccccttggga ggtattagtt acctatgctg aagtcttggg aatcaaaatg cctattaagg 780
agagtgatat tccccgccct aagcacactc ctataagcta tgtgcttgga cctgtaagac 840
tcccactgag tgtgaagtat ccccatcctg aatattttac tgcacaattc agcagacatc 900
ggcaggagct cttcctcatc gaagatcagg caaccttctt tccatcctca tcaagaaaca 960
gaattgtgta ctatattctc tcaagatgtc cttttggcat agaagatggg aagaaaaggt 1020
ttgggattga aagactgcta aactctaaca cttactcatc tgcctatcca ctccatgatg 1080
gccaatattg gaagccatca gaacctccca atcctaccaa tgaaagatac acacttcacc 1140
agaattgggc tcgattttcc tatttctaca aggagcagcc tttagacttg attaagaatt 1200
attatggaga aaaaattggt atctattttg tctttcttgg attttacaca gaaatgctat 1260
tctttgcagc tgtagttggc ttagcttgtt ttatttatgg cttattatca atggaacata 1320
acacaagcag cactgaaatc tgtgaccctg agattggtgg tcagatgatc atgtgcccac 1380
tctgtgatca agtgtgtgat tattggagac taaatagtac gtgtttggct tcaaagttct 1440
cccatttgtt tgataatgag tcaacagtgt tctttgcaat attcatggga atttgggtca 1500
ccttattttt ggagttttgg aaacaacgac aagccagact ggaatatgaa tgggacctgg 1560
tggactttga agaggaacag cagcagcttc agctgagacc agaatttgaa gctatgtgta 1620
aacacaggaa attgaatgca gtgactaagg agatggaacc ttacatgcct ctatacacgc 1680
gtattccatg gtactttctt tcaggagcca cagtgacatt atggatgtct cttgtcgtca 1740
ccagtatggt agctgtaatt gtgtaccgcc tgtcagtctt tgctacattt gctagtttca 1800
tggaaagtga tgcatcctta aagcaggtca aaagcttcct tactcctcag ataaccacat 1860
cactcacagg atcatgcttg aactttattg tcatcttgat cttgaatttc ttttatgaaa 1920
agatatctgc ctggatcaca aaaatggaaa ttcctcgaac ataccaggag tatgagagca 1980
gtcttacctt gaaaatgttc ctgtttcagt ttgtaaattt ttactcatcc tgcttctacg 2040
tagctttctt taaagggaag ttcgtaggct atcctggaaa atacacatat ttatttaatg 2100
agtggagaag tgaagagtgt gatcctggag gctgtcttat agaattgaca acccaattga 2160
ccattataat gaccgggaaa cagatttttg gaaacattaa agaagccatt tatcccttgg 2220
ctttgaattg gtggagacgc cgaaaagctc ggacaaactc tgagaagctg tatagtcgat 2280
gggagcagga tcatgacctt gaaagttttg gaccccttgg gcttttctat gagtacttag 2340
aaacagttac tcaatttgga tttgttacac tatttgtggc ctcttttcct ttggctcctc 2400
ttcttgctct cataaataat attgtagaga ttcgagtgga tgcctggaaa cttaccactc 2460
aatacaggag aactgtagct tctaaagctc atagcatagg tgtttggcaa gacattcttt 2520
atggaatggc tgtcctttct gttgcaacta atgcctttat tgttgcattt acgtcagaca 2580
tcattccccg tctagtttac tactatgctt actcaacaaa tgccacacag cctatgacag 2640
gatatgtgaa taatagcctg tcagtattcc tgatagctga ttttccaaac cacactgcac 2700
cttcggaaaa acgagacttc atcacttgca ggtacagaga ttacagatat cctcctgatg 2760
acgagaataa atattttcat aatatgcaat tctggcatgt ccttgctgcc aagatgacct 2820
tcatcattgt tatggaacat gttgtgtttt tagttaaatt tttgctggcc tggatgatac 2880
ctgatgttcc aaaagatgtt gtggagagaa tcaagagaga aaagttaatg actatcaaga 2940
ttctccatga ttttgagctc aacaaattaa aagagaactt gggaattaat tctaatgaat 3000
ttgccaagca tgtcatgatt gaggaaaaca aagcacagct ggctaaatca acactctaat 3060
cagtatagtg aggaagcagc aggtgatctg ccttacttca ctttatcctc tggttttagg 3120
gccagacgcc agaagccatg tgtcaatttt accctttctt tttttttttt ttcttttttt 3180
ttttaaactc aaagttttta tacactttta tagaggccaa ctttgtgatg ttggaaatgt 3240
actacttctc tgcttcattg actgggccct ctccagatgt tgttttctga ggtgctgtaa 3300
atgactgttg aaagtgcagg tagaatcaga atactgggaa attatggagt cttgcagttt 3360
agtaagaaac actggccttg ggctgtccca tcactttcca gtgcatctat ttatttttgt 3420
ggtcttctct tgggttattt gatacctcct tccccattaa gaaaaatgtt ggggcaaaaa 3480
gaaatggatc aaagagactg actgagccct atatatccta tcattttaaa atatgcaaat 3540
gaattgccaa gatcagatga cataagaaaa ctcacacatt aaggtgttaa tgtatcatag 3600
cagaggttta ttcctaacac attcaactac catcagaatc ccagatagtt cttcctggta 3660
aaggcagaat tccttttctc gagactgaaa ttttgggttt caacataaaa caacttggtt 3720
cttagagata ataatttggt tataatagtt tcaagactga tcttatctgg aaagcaacat 3780
tatgaagctg ttagattgct tcaggttctc aagcaaagac acaatacaga agtaaatgtg 3840
ttttcttagt agttaatgga tgcaggacaa tgtatattga ttaatttgtt gattttaatt 3900
tagaaaattg ttaaattatt tcttaaaaat cacttttctt ctggaatgcc aatttcacat 3960
catgaagcct ttttgtataa gttagatacg agttgtttat gataaacatt tctttgcttt 4020
aaaataattg caaatatttt aataagttta caaccttttc tattgatgta tcatcttata 4080
caatgctcag tgccttgttc caatacctct gacacacaag aagtcatgtt gttagctagt 4140
gatttgatgt gatgtaacat cttaaatgta agcttgtctt aatgaaattg tcagtgtaat 4200
aacaactaca gtcttgaaaa ccaaaagtga atcaaccaac taagaatgag ttcatggact 4260
taataatcta agggggaaaa aatgtttgtt gaattattcc tctcaaattt aggcttgtgt 4320
tacatgcaca aaaatccttg ttctgttttc acttaaaaaa actaaatatg tataactttg 4380
tgtatacaca cacacacatc tatatatata attattagca ctagagggat atagtccagt 4440
tatgtagtat ttaaatctcc agtttcaaat tataattcac ctccaaaaga atagtttttt 4500
aatcacacac ataagaaatt ttatcacaat atttaaaact aatatttcat tatctaatgc 4560
taataaatta ttgtggtact gccagtatta aatatatggc agatggtatt aactactgat 4620
caatagtaag catacagaac tggggattat ggattttata aactatgaga cagtcacccc 4680
agtttggact gggactaatc cccagtactg atttgtcatc cactgagtag actttatgaa 4740
tattttgggt aatttgaaat gatctcatta ttgaaagatg atttcatatg tagagaagat 4800
aatatttctt tcttgaaaaa acaagtcagg cttaccatga tgtgtgcaac caatgtagga 4860
tctttggctt gtcaaatcag attctccatt gctatagtgt acagtgcaca cagctcatat 4920
tgcttccttc ctgggtgctg ataaaaataa gaaagagcat ggaaattggt ttcttgaata 4980
taagctttaa tttttaaggc ttaaaagtat tcatagaggt agactgtatg ataaataaaa 5040
acaaatttaa ttcacaaagt tatctgtaca ctgcagtttt aaaatatacc aactaaatta 5100
ttgggtttct ggaagtgaat ggagaaaaca gcaagggaag aaatcgtttt taagataagt 5160
aaataattcc catggattga taaatatttt ccttttaaaa tgttatggac tgatattttt 5220
tattcacctt taaatttctt atcaagaagt ttatctttgt ttttcagatt taaaaatgaa 5280
atacaggtat tcgtcacttt cctgaaacca tgctaaccaa aatcagtagc caaaccaatt 5340
cagatagatg tgtctcatct aattaaaccc attggttttt atgggagggc tgcattaaga 5400
gcacccaacc accacatgta agttgataat taccagcatg gcaggtgatt ttatctgctg 5460
accaagcgca tagttttgtt ttgttttcag aatgttctag ggaacatttg agattttatg 5520
tgaaataaaa ttttaagtgc caaagccaaa aaaatactta actcttttca aaggccctct 5580
ttcatccttg ccttcgtcaa ctttcctttg cacacaggaa gcaaaatcta cttcaagaca 5640
tttattttag aggaatccat taagaaagga ttgttttact taaatgaaat gctgtcttat 5700
ttttgctgtg tcttttgaca cctcttagct ttaacattct tcttttaacc aagccattat 5760
gcaaagttat caaagaagag gagaaggaaa ggaggacaga tgaaagtgac gggaaatgag 5820
aaagaagagg agtgaggaaa cagttatttc cttatgaatc ctgtgtgttt ctttggaaga 5880
aagagctgtt ccgaggaagt ttggtccagc tgtggttgat aagaggtata tctcttaaaa 5940
aagacaccta atgaaagtga gagaaaagct aaagaaaatt tcaatgtgac cactattatg 6000
tgtcaaaata aaacttagat tccaaagtgg ttttgtagtg ttgggtgcta tgagtaggta 6060
tggatctctg ttgattgact ccagttgaag gtgagaaatc tgtaccaatc attcaaaaag 6120
ggaatctatt gttttgaaag aaactctctc atatttcctt taaattgtta atagttgtta 6180
tgcaactaaa gaatgttatg aagaaaaata gcattgcaaa aagtaccatt ggccagcctt 6240
acaagtcagc cacaatgagt cggtataact actgtgttat tctttttcta gacaaatttt 6300
gactcttcta cttttatgtg taataattcc agtattctat ttatttcagc attatgtgaa 6360
aaatgataag aatgttaaaa agaaaataat agtgtggttt aattggtatg agatacctgc 6420
ttcctcctcc tcaaaggttt gactgggtgt atctctccta tgtgtgacat tatgtctcct 6480
ggtgttaaca caggaaatga gtgctccttt ttaaaatttc tttcttccaa gttttttttt 6540
ccaggaagag aaatatgcag ttatgcagga aaagctctct taaataatgt gtacataaat 6600
ctcaagagaa tcaaattcac agagtgaata aagtaataat attaaactac attttgacat 6660
g 6661
<---
Claims (40)
1. Способ лечения мышечной дистрофии, включающий введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества рекомбинантного вектора на основе аденоассоциированного вируса (AAV-вектора), содержащего 1) последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, 2) нуклеотид, который гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, или 3) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, который по меньшей мере на 85% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, или 4) фрагмент нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, кодирующий белок, который проявляет активность ANO5.
2. Способ по п.1, где последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95% идентична последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1.
3. Способ по п. 1 или 2, где последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
4. Способ по любому из пп. 1-3, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный AAV содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор представляет собой AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13 или AAV rh.74.
6. Способ по любому из пп. 1-5, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор содержит полинуклеотид, функционально связанный с регуляторным элементом, специфичным для мышц.
7. Способ по п. 6, отличающийся тем, что указанный регуляторный элемент, специфичный для мышц, представляет собой элемент гена актина скелетных мышц человека, элемент гена актина мышц сердца, элемент, связывающий энхансер, специфичный для миоцитов (MEF), элемент энхансера креатинкиназы мыши (MCK), элемент гена тропонина С быстро сокращающихся скелетных мышц, элемент гена тропонина С медленно сокращающихся мышц сердца, элемент гена тропонина I медленно сокращающихся мышц, элемент, связывающий индуцируемый гипоксией ядерный фактор, индуцируемый стероидом элемент или глюкокортикоид-отвечающий элемент (GRE).
8. Способ по любому из пп. 1-7, отличающийся тем, что указанная мышечная дистрофия представляет собой дисферлин-ассоциированную мышечную дистрофию, тазово-плечевую мышечную дистрофию типа 2L, или миопатию Миоши типа 3, миопатию Бетлема, калпаинопатию, десмин-зависимую миопатию, дисферлинопатию, миофибриллярную миопатию, саркогликанопатию или связанную с ZASP миопатию.
9. Способ по любому из пп. 1-8, отличающийся тем, что указанный субъект имеет рецессивную мутацию в гене ANO5.
10. Способ по любому из пп. 1-9, отличающийся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор вводят путем внутримышечной или внутривенной инъекции.
11. Способ по любому из пп. 1-10, дополнительно включающий этап введения терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов субъекту, нуждающемуся в этом.
12. Способ по п. 11, отличающийся тем, что указанная композиция антиоксиданта содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида.
13. Способ по п. 11 или 12, отличающийся тем, что указанная композиция антиоксиданта содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин Е.
14. Способ по любому из пп. 11-13, отличающийся тем, что указанную композицию антиоксидантов вводят один раз в сутки, один раз в неделю, два раза в неделю, один раз каждые две недели, один раз каждые три недели, один раз в месяц или один раз каждые два месяца.
15. Композиция, содержащая терапевтически эффективное количество рекомбинантного AAV-вектора, содержащего 1) последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, 2) нуклеотид, который гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, или 3) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, который по меньшей мере на 85% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, или 4) фрагмент нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, кодирующий белок, который проявляет активность ANO5, для лечения мышечной дистрофии у субъекта, нуждающегося в этом.
16. Композиция по п.15, где последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95% идентична SEQ ID NO: 1.
17. Композиция по п. 16, где последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
18. Композиция по любому из пп. 15-17, отличающаяся тем, что указанный рекомбинантный AAV содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1.
19. Композиция по любому из пп. 15-18, отличающаяся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор представляет собой AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13 или AAV rh.74.
20. Композиция по любому из пп. 15-19, отличающаяся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор содержит полинуклеотид, функционально связанный с регуляторным элементом, специфичным для мышц.
21. Композиция по п. 20, отличающаяся тем, что указанный регуляторный элемент, специфичный для мышц, представляет собой элемент гена актина скелетных мышц человека, элемент гена актина мышц сердца, элемент, связывающий энхансер, специфичный для миоцитов (MEF), элемент энхансера креатинкиназы мыши (MCK), элемент гена тропонина С быстро сокращающихся скелетных мышц, элемент гена тропонина С медленно сокращающихся мышц сердца, элемент гена тропонина I медленно сокращающихся мышц, элемент, связывающий индуцируемый гипоксией ядерный фактор, индуцируемый стероидом элемент или глюкокортикоид-отвечающий элемент (GRE).
22. Композиция любому из пп. 15-21, отличающаяся тем, что указанная мышечная дистрофия представляет собой дисферлин-ассоциированную мышечную дистрофию, пояснично-тазовую мышечную дистрофию типа 2L, миопатию Миоши типа 3, миопатию Бетлема, калпаинопатию, десмин-зависимую миопатию, дисферлинопатию, миофибриллярную миопатию, саркогликанопатию или связанную с ZASP миопатию.
23. Композиция по любому из пп. 15-22, отличающаяся тем, что указанный субъект имеет рецессивную мутацию в гене ANO5.
24. Композиция по любому из пп. 15-23, которая приготовлена для внутримышечной или внутривенной инъекции.
25. Композиция по любому из пп. 15-24, дополнительно содержащая терапевтически эффективное количество композиции антиоксидантов.
26. Композиция по п. 25, отличающаяся тем, что указанная композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида.
27. Композиция по п. 25 или 26, отличающаяся тем, что указанная композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин Е.
28. Применение рекомбинантного AAV-вектора, содержащего 1) последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 85% идентична последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, 2) нуклеотид, который гибридизуется в жестких условиях с нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 1, или 3) последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок, который по меньшей мере на 85% идентичен аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, или 4) фрагмент нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1, кодирующий белок, который проявляет активность ANO5, для получения лекарственного средства для лечения мышечной дистрофии у субъекта, нуждающегося в этом.
29. Применение по п.28, где последовательность нуклеиновой кислоты по меньшей мере на 95% идентична последовательности нуклеиновой кислоты SEQ ID NO: 1.
30. Применение по п. 28, где последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
31. Применение по любому из пп. 28-30, отличающееся тем, что указанный рекомбинантный AAV содержит полинуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 1.
32. Применение по любому из пп. 28-31, отличающееся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор представляет собой AAV1, AAV2, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV13 или AAV rh.74.
33. Применение по любому из пп. 28-32, отличающееся тем, что указанный рекомбинантный AAV-вектор содержит полинуклеотид, функционально связанный с регуляторным элементом, специфичным для мышц.
34. Применение по п. 33, отличающееся тем, что указанный специфичный для мышц регуляторный элемент представляет собой элемент гена актина скелетных мышц человека, элемент гена актина мышц сердца, элемент, связывающий энхансер, специфичный для миоцитов (MEF), элемент энхансера креатинкиназы мыши, элемент гена тропонина С быстро сокращающихся скелетных мышц, элемент гена тропонина С медленно сокращающихся мышц сердца, элемент гена тропонина I медленно сокращающихся мышц, элемент, связывающий индуцируемый гипоксией ядерный фактор, индуцируемый стероидом элемент или глюкокортикоид-отвечающий элемент (GRE).
35. Применение по любому из пп. 28-34, отличающееся тем, что указанный субъект страдает дисферлин-ассоциированной мышечной дистрофией, пояснично-тазовой мышечной дистрофией типа 2L, миопатией Миоши типа 3, миопатией Бетлема, калпаинопатией, десмин-зависимой миопатией, дисферлинопатией, миофибриллярной миопатией, саркогликанопатией или связанной с ZASP миопатией.
36. Применение по любому из пп. 28-35, отличающееся тем, что указанный субъект имеет рецессивную мутацию в гене ANO5.
37. Применение по любому из пп. 28-36, отличающееся тем, что указанное лекарственное средство приготовлено для внутримышечной или внутривенной инъекции.
38. Применение по любому из пп. 28-37, дополнительно включающее введение терапевтически эффективного количества композиции антиоксидантов субъекту, нуждающемуся в этом.
39. Применение по п. 38 отличающееся тем, что указанная композиция антиоксидантов содержит по меньшей мере один из кофермента Q10, липоевой кислоты, витамина, каротиноида, кофактора витамина, минерала, полифенола или флавоноида.
40. Применение по п. 38 или 39, отличающееся тем, что указанная композиция антиоксидантов содержит кофермент Q10, липоевую кислоту и витамин Е.
Applications Claiming Priority (5)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201562254539P | 2015-11-12 | 2015-11-12 | |
US62/254,539 | 2015-11-12 | ||
US201662419793P | 2016-11-09 | 2016-11-09 | |
US62/419,793 | 2016-11-09 | ||
PCT/US2016/061703 WO2017083776A1 (en) | 2015-11-12 | 2016-11-11 | Methods of treating muscular dystrophy |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2018121289A RU2018121289A (ru) | 2019-12-16 |
RU2018121289A3 RU2018121289A3 (ru) | 2020-05-13 |
RU2761264C2 true RU2761264C2 (ru) | 2021-12-06 |
Family
ID=58696162
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2018121289A RU2761264C2 (ru) | 2015-11-12 | 2016-11-11 | Способы лечения мышечной дистрофии |
Country Status (17)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11820972B2 (ru) |
EP (1) | EP3373980A4 (ru) |
JP (3) | JP6889717B2 (ru) |
KR (1) | KR20180081566A (ru) |
CN (1) | CN108883200B (ru) |
AU (2) | AU2016354561B2 (ru) |
BR (1) | BR112018009657A2 (ru) |
CA (1) | CA3005240A1 (ru) |
CO (1) | CO2018005928A2 (ru) |
EA (1) | EA201891134A1 (ru) |
IL (1) | IL259178B (ru) |
MX (1) | MX2018005882A (ru) |
RU (1) | RU2761264C2 (ru) |
SG (1) | SG11201803971UA (ru) |
TN (2) | TN2018000163A1 (ru) |
WO (1) | WO2017083776A1 (ru) |
ZA (1) | ZA201803080B (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2805357C1 (ru) * | 2022-12-23 | 2023-10-16 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ коррекции миодистрофии с использованием плазмидной ДНК у дисферлин-дефицитных мышей |
Families Citing this family (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP3697916A4 (en) | 2017-10-20 | 2021-08-11 | Research Institute at Nationwide Children's Hospital | METHODS AND MATERIALS FOR NT-3 GENE THERAPY |
CN116348149A (zh) | 2020-06-15 | 2023-06-27 | 全国儿童医院研究所 | 用于肌营养不良症的腺相关病毒载体递送 |
CN117223686B (zh) * | 2023-11-15 | 2024-01-23 | 四川省农业机械科学研究院 | 一种扩座除砂一体化蚕盘及养蚕方法 |
Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2859896A1 (en) * | 2013-10-08 | 2015-04-15 | Ystem S.r.l. | Pharmaceutical compositions for the treatment of muscular disorders |
Family Cites Families (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP0127839B1 (en) | 1983-05-27 | 1992-07-15 | THE TEXAS A&M UNIVERSITY SYSTEM | Method for producing a recombinant baculovirus expression vector |
ZA848495B (en) | 1984-01-31 | 1985-09-25 | Idaho Res Found | Production of polypeptides in insect cells |
US6204059B1 (en) | 1994-06-30 | 2001-03-20 | University Of Pittsburgh | AAV capsid vehicles for molecular transfer |
WO2002053703A2 (en) | 2001-01-05 | 2002-07-11 | Children's Hospital, Inc. | Aav2 vectors and methods |
AU2003212708A1 (en) | 2002-03-05 | 2003-09-16 | Stichting Voor De Technische Wetenschappen | Baculovirus expression system |
JP2006121961A (ja) * | 2004-10-28 | 2006-05-18 | Univ Of Tokushima | 顎骨骨幹異形成症gddの原因遺伝子gdd1とその用途 |
US20100120627A1 (en) * | 2006-08-02 | 2010-05-13 | Abdelmajid Belouchi | Genemap of the human genes associated with psoriasis |
FR2919305B1 (fr) * | 2007-07-26 | 2009-09-18 | Genethon Ass Loi De 1901 | Vecteurs viraux adeno-associes pour l'expression de la dysferline. |
GB0715087D0 (en) | 2007-08-03 | 2007-09-12 | Summit Corp Plc | Drug combinations for the treatment of duchenne muscular dystrophy |
US20100026655A1 (en) | 2008-07-31 | 2010-02-04 | Avago Technologies Ecbu Ip (Singapore) Pte. Ltd. | Capacitive Touchscreen or Touchpad for Finger or Stylus |
US8946451B2 (en) | 2009-10-05 | 2015-02-03 | Catabasis Pharmaceuticals, Inc. | Lipoic acid acylated salicylate derivatives and their uses |
JP2013510434A (ja) | 2009-11-03 | 2013-03-21 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 低温水溶液中で多重表面上に酸化亜鉛層が被覆された高輝度発光ダイオード |
US9434928B2 (en) * | 2011-11-23 | 2016-09-06 | Nationwide Children's Hospital, Inc. | Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides |
AU2013243948A1 (en) | 2012-04-02 | 2014-10-30 | Moderna Therapeutics, Inc. | Modified polynucleotides for the production of proteins associated with human disease |
WO2014037526A1 (en) * | 2012-09-07 | 2014-03-13 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | In vitro genetic diagnostic of inherited neuromuscular disorders |
US9624282B2 (en) | 2012-11-26 | 2017-04-18 | The Curators Of The University Of Missouri | Microdystrophin peptides and methods for treating muscular dystrophy using the same |
ITTO20130669A1 (it) | 2013-08-05 | 2015-02-06 | Consiglio Nazionale Ricerche | Vettore adeno-associato ricombinante muscolo-specifico e suo impiego nel trattamento di patologie muscolari |
US9850497B2 (en) | 2013-11-04 | 2017-12-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Gene targeting methods and tools |
-
2016
- 2016-11-11 US US15/775,566 patent/US11820972B2/en active Active
- 2016-11-11 MX MX2018005882A patent/MX2018005882A/es unknown
- 2016-11-11 CA CA3005240A patent/CA3005240A1/en active Pending
- 2016-11-11 TN TNP/2018/000163A patent/TN2018000163A1/en unknown
- 2016-11-11 KR KR1020187016152A patent/KR20180081566A/ko not_active Application Discontinuation
- 2016-11-11 WO PCT/US2016/061703 patent/WO2017083776A1/en active Application Filing
- 2016-11-11 RU RU2018121289A patent/RU2761264C2/ru active
- 2016-11-11 TN TNP/2019/000279A patent/TN2019000279A1/en unknown
- 2016-11-11 CN CN201680079597.0A patent/CN108883200B/zh active Active
- 2016-11-11 BR BR112018009657-1A patent/BR112018009657A2/pt active Search and Examination
- 2016-11-11 IL IL259178A patent/IL259178B/en unknown
- 2016-11-11 EA EA201891134A patent/EA201891134A1/ru unknown
- 2016-11-11 JP JP2018524411A patent/JP6889717B2/ja active Active
- 2016-11-11 EP EP16865168.5A patent/EP3373980A4/en active Pending
- 2016-11-11 AU AU2016354561A patent/AU2016354561B2/en active Active
- 2016-11-11 SG SG11201803971UA patent/SG11201803971UA/en unknown
-
2018
- 2018-05-10 ZA ZA2018/03080A patent/ZA201803080B/en unknown
- 2018-06-08 CO CONC2018/0005928A patent/CO2018005928A2/es unknown
-
2021
- 2021-05-21 JP JP2021086103A patent/JP7307121B2/ja active Active
-
2022
- 2022-03-02 AU AU2022201427A patent/AU2022201427A1/en active Pending
-
2023
- 2023-05-08 JP JP2023076538A patent/JP2023099184A/ja active Pending
Patent Citations (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
EP2859896A1 (en) * | 2013-10-08 | 2015-04-15 | Ystem S.r.l. | Pharmaceutical compositions for the treatment of muscular disorders |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
MONJARET F., et al., The phenotype of dysferlin-deficient mice is not rescued by adeno-associated virus-mediated transfer of anoctamin 5.Hum Gene Ther Clin Dev. 2013 Jun;24(2):65-76. doi: 10.1089/humc.2012.217. Epub 2013 May 30. * |
PAYNE ET., et al., Nutritional therapy improves function and complements corticosteroid intervention in mdx mice.Muscle Nerve. 2006 Jan;33(1):66-77. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2805357C1 (ru) * | 2022-12-23 | 2023-10-16 | Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Белгородский государственный национальный исследовательский университет" (НИУ "БелГУ") | Способ коррекции миодистрофии с использованием плазмидной ДНК у дисферлин-дефицитных мышей |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
TN2019000279A1 (en) | 2021-05-07 |
CO2018005928A2 (es) | 2018-08-21 |
RU2018121289A3 (ru) | 2020-05-13 |
KR20180081566A (ko) | 2018-07-16 |
US20180340187A1 (en) | 2018-11-29 |
MX2018005882A (es) | 2019-03-11 |
CN108883200A (zh) | 2018-11-23 |
EP3373980A1 (en) | 2018-09-19 |
EP3373980A4 (en) | 2019-06-12 |
BR112018009657A2 (pt) | 2018-11-13 |
AU2016354561A9 (en) | 2019-07-25 |
SG11201803971UA (en) | 2018-06-28 |
TN2018000163A1 (en) | 2019-10-04 |
US11820972B2 (en) | 2023-11-21 |
IL259178B (en) | 2022-08-01 |
CN108883200B (zh) | 2022-11-29 |
JP6889717B2 (ja) | 2021-06-18 |
JP7307121B2 (ja) | 2023-07-11 |
AU2022201427A1 (en) | 2022-03-24 |
AU2016354561A1 (en) | 2018-05-24 |
JP2023099184A (ja) | 2023-07-11 |
RU2018121289A (ru) | 2019-12-16 |
CA3005240A1 (en) | 2017-05-18 |
WO2017083776A1 (en) | 2017-05-18 |
AU2016354561B2 (en) | 2021-12-02 |
JP2021121620A (ja) | 2021-08-26 |
IL259178A (en) | 2018-06-28 |
ZA201803080B (en) | 2023-12-20 |
EA201891134A1 (ru) | 2018-11-30 |
WO2017083776A9 (en) | 2018-05-31 |
JP2018538261A (ja) | 2018-12-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20230173101A1 (en) | Adeno-associated virus vector delivery of micro-dystrophin to treat muscular dystrophy | |
CN110997923B (zh) | 腺相关病毒载体递送肌肉特异性微肌营养不良蛋白以治疗肌营养不良症 | |
KR101835490B1 (ko) | 신경변성 질환에 대한 유전자 요법 | |
JP7079733B2 (ja) | β-サルコグリカン及びマイクロRNA-29のアデノ随伴ウイルスベクター送達ならびに筋ジストロフィーの治療 | |
JP7307121B2 (ja) | 筋ジストロフィーの治療方法 | |
BR112020015173A2 (pt) | Terapia gênica para distrofia muscular da cintura e membros do tipo 2c | |
CN110325219B (zh) | 编码甲基-CpG结合蛋白2的重组腺相关病毒的鞘内递送 | |
US20230211018A1 (en) | Materials and methods for treatment of disorders associated with the ighmbp2 gene | |
JP2024515623A (ja) | 髄腔内送達によってピット・ホプキンス症候群を治療するためのメチル-cpg結合タンパク質2をコードする組換えアデノ随伴ウイルス | |
EA045951B1 (ru) | Генная терапия против тазово-плечевой мышечной дистрофии типа 2c | |
EA042315B1 (ru) | Доставка микродистрофина вектором на основе аденоассоциированного вируса для лечения мышечной дистрофии |