RU2751886C2 - Композиция пептидов коллагена кожи рыбы и её применение в качестве лекарственного средства - Google Patents
Композиция пептидов коллагена кожи рыбы и её применение в качестве лекарственного средства Download PDFInfo
- Publication number
- RU2751886C2 RU2751886C2 RU2019109793A RU2019109793A RU2751886C2 RU 2751886 C2 RU2751886 C2 RU 2751886C2 RU 2019109793 A RU2019109793 A RU 2019109793A RU 2019109793 A RU2019109793 A RU 2019109793A RU 2751886 C2 RU2751886 C2 RU 2751886C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- composition
- peptides
- column
- ratio
- amount
- Prior art date
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 310
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 303
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims abstract description 158
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 title claims description 57
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 title claims description 57
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 title claims description 57
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 title claims description 37
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 15
- 229940079593 drug Drugs 0.000 title 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 67
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 18
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 10
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 claims abstract description 8
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 claims abstract description 7
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 claims abstract description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 121
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 claims description 66
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 claims description 66
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 36
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 36
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 claims description 24
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 21
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 claims description 20
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 18
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 101710150620 Anionic peptide Proteins 0.000 claims description 14
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 13
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 12
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 claims description 10
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 claims description 10
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 9
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 9
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 8
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 8
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 claims description 7
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 claims description 7
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 7
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 7
- 238000001542 size-exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 claims description 6
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 claims description 5
- 241000276616 Cichlidae Species 0.000 claims description 5
- 241000252503 Pangasiidae Species 0.000 claims description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 5
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010643 digestive system disease Diseases 0.000 claims description 5
- 208000018685 gastrointestinal system disease Diseases 0.000 claims description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 claims description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 claims description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 4
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 4
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 claims description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 4
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 claims description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 claims description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 claims description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 claims description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 claims description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 2
- 206010064147 Gastrointestinal inflammation Diseases 0.000 claims description 2
- LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N Hydroxylysine Natural products NCC(O)CC(N)CC(O)=O LCWXJXMHJVIJFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 claims description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 claims description 2
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 125000000484 butyl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 claims description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N delta-DL-hydroxylysine Natural products NCC(O)CCC(N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003925 fat Substances 0.000 claims description 2
- 244000005709 gut microbiome Species 0.000 claims description 2
- QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N hydroxy-L-lysine Natural products NCCCCC(NO)C(O)=O QJHBJHUKURJDLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 claims description 2
- 125000001453 quaternary ammonium group Chemical group 0.000 claims description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 abstract description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 abstract description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 141
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 42
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 20
- 238000000034 method Methods 0.000 description 18
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 18
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 17
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 16
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 16
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 15
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 15
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 14
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 14
- 108010005843 Cysteine Proteases Proteins 0.000 description 13
- 102000005927 Cysteine Proteases Human genes 0.000 description 13
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 102100022900 Actin, cytoplasmic 1 Human genes 0.000 description 9
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 9
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 9
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 9
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 8
- 102100031950 Polyunsaturated fatty acid lipoxygenase ALOX15 Human genes 0.000 description 7
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 7
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 7
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 7
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 7
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 7
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 6
- 102000001381 Arachidonate 5-Lipoxygenase Human genes 0.000 description 6
- 108010093579 Arachidonate 5-lipoxygenase Proteins 0.000 description 6
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 description 6
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 6
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 6
- 101710164073 Polyunsaturated fatty acid lipoxygenase ALOX15 Proteins 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 6
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 6
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 6
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 5
- 241000605980 Faecalibacterium prausnitzii Species 0.000 description 5
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102100029438 Nitric oxide synthase, inducible Human genes 0.000 description 5
- 101710089543 Nitric oxide synthase, inducible Proteins 0.000 description 5
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 5
- 101150009252 Retnla gene Proteins 0.000 description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 5
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 5
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 5
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 4
- 241000605059 Bacteroidetes Species 0.000 description 4
- 241000588921 Enterobacteriaceae Species 0.000 description 4
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000186871 Lactobacillus murinus Species 0.000 description 4
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 4
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 4
- 108020001027 Ribosomal DNA Proteins 0.000 description 4
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 4
- 244000132069 Carica monoica Species 0.000 description 3
- 235000014649 Carica monoica Nutrition 0.000 description 3
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 206010017938 Gastrointestinal candidiasis Diseases 0.000 description 3
- 241000277320 Pangasius Species 0.000 description 3
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 229960002086 dextran Drugs 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 3
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 3
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 3
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 238000009928 pasteurization Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 2
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000736262 Microbiota Species 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000276719 Oreochromis Species 0.000 description 2
- 241000276703 Oreochromis niloticus Species 0.000 description 2
- 241001417873 Pangasianodon Species 0.000 description 2
- 241000277323 Pangasius pangasius Species 0.000 description 2
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 241000276707 Tilapia Species 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 2
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 2
- 229940095731 candida albicans Drugs 0.000 description 2
- 239000000512 collagen gel Substances 0.000 description 2
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 2
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 2
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 210000002429 large intestine Anatomy 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 108091005446 macrophage receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 102100021943 C-C motif chemokine 2 Human genes 0.000 description 1
- 241000777300 Congiopodidae Species 0.000 description 1
- 241000238424 Crustacea Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 206010012741 Diarrhoea haemorrhagic Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241001313700 Gadus chalcogrammus Species 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 239000005909 Kieselgur Substances 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- 210000004322 M2 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 101710091439 Major capsid protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 1
- 108020002230 Pancreatic Ribonuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000005891 Pancreatic ribonuclease Human genes 0.000 description 1
- 241001459760 Pangasius bocourti Species 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 102100029613 Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 Human genes 0.000 description 1
- 108050004388 Transient receptor potential cation channel subfamily V member 1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 229920000392 Zymosan Polymers 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 239000003125 aqueous solvent Substances 0.000 description 1
- 229940114079 arachidonic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000021342 arachidonic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 1
- BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N benzocaine Chemical compound CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1 BLFLLBZGZJTVJG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 241001233037 catfish Species 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000011097 chromatography purification Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 238000005115 demineralization Methods 0.000 description 1
- 230000002328 demineralizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N erythro-5-hydroxy-L-lysine Chemical compound NC[C@H](O)CC[C@H](N)C(O)=O YSMODUONRAFBET-UHNVWZDZSA-N 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000000003 hoof Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001503 joint Anatomy 0.000 description 1
- 208000018937 joint inflammation Diseases 0.000 description 1
- 210000003127 knee Anatomy 0.000 description 1
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 1
- 230000037356 lipid metabolism Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002414 normal-phase solid-phase extraction Methods 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N phorbol 13-acetate 12-myristate Chemical compound C([C@]1(O)C(=O)C(C)=C[C@H]1[C@@]1(O)[C@H](C)[C@H]2OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)C(CO)=C[C@H]1[C@H]1[C@]2(OC(C)=O)C1(C)C PHEDXBVPIONUQT-RGYGYFBISA-N 0.000 description 1
- 239000002644 phorbol ester Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000003642 reactive oxygen metabolite Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000001694 spray drying Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 229910021653 sulphate ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 210000004876 tela submucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000036269 ulceration Effects 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
- A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
- A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J3/00—Working-up of proteins for foodstuffs
- A23J3/30—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis
- A23J3/32—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents
- A23J3/34—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes
- A23J3/341—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins
- A23J3/342—Working-up of proteins for foodstuffs by hydrolysis using chemical agents using enzymes of animal proteins of collagen; of gelatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/56—Materials from animals other than mammals
- A61K35/60—Fish, e.g. seahorses; Fish eggs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
- A61K38/014—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from connective tissue peptides, e.g. gelatin, collagen
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/14—Prodigestives, e.g. acids, enzymes, appetite stimulants, antidyspeptics, tonics, antiflatulents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/02—Nutrients, e.g. vitamins, minerals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/10—Antimycotics
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/34—Size selective separation, e.g. size exclusion chromatography, gel filtration, permeation
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01D—SEPARATION
- B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
- B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
- B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
- B01D15/36—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving ionic interaction
- B01D15/361—Ion-exchange
- B01D15/363—Anion-exchange
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/461—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from fish
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2200/00—Function of food ingredients
- A23V2200/30—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health
- A23V2200/32—Foods, ingredients or supplements having a functional effect on health having an effect on the health of the digestive tract
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2250/00—Food ingredients
- A23V2250/54—Proteins
- A23V2250/542—Animal Protein
- A23V2250/543—Fish protein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2300/00—Processes
- A23V2300/28—Hydrolysis, degree of hydrolysis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Immunology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к композиции пептидов, характеризующейся аминограммой, согласно которой: глицин, гидроксипролин и пролин содержатся в таких мольных количествах, что отношение каждого из количеств к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 20,0% до 24,5%, от 6,0% до 12,0% и от 10,6% до 14,6% соответственно; композиция пептидов содержит количество пептидов с молекулярной массой менее 1400 Да, такое что отношение указанного количества к количеству пептидов в композиции составляет менее 40%; при этом молекулярные массы и количества пептидов в композиции определяют путем эксклюзионной хроматографии. Композиция предназначена для лечения желудочно-кишечных заболеваний и применяется в пищу. 2 н. и 11 з.п. ф-лы, 20 ил., 7 табл.
Description
Настоящее изобретение относится к композиции пептидов коллагена из кожи рыб. Настоящее изобретение относится, в частности, к такой композиции пептидов, полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб. Настоящее изобретение также относится к такой композиции для ее применения в качестве лекарственного средства. Таким образом, настоящее изобретение относится к применению такой композиции для терапевтического или профилактического лечения заболевания, поражающего организм человека или животного. Настоящее изобретение относится, в частности, к такой композиции для ее применения в качестве лекарственного средства для лечения кандидоза желудочно-кишечного тракта у людей или животных и/или для лечения воспаления кишечника у людей или животных. Настоящее изобретение также относится к такой композиции для ее применения в качестве лекарственного средства для стимулирующего микробиоту лечения.
В документе FR 2720067 описан пептидный порошок, полученный путем гидролиза папаином богатого коллагеном исходного материала, происходящего из кожи или скелета рыб, моллюсков или ракообразных. В полученном пептидном порошке 38% пептидов имеют молекулярную массу от 10000 Да до 50000 Да. Композиция пептидов согласно документу FR 2720067 характеризуется широким диапазоном молекулярных масс, в частности, долей пептидов с молекулярной массой более 10000 Да, составляющей более 10%. Композиция пептидов согласно документу FR 2720067 является гетерогенной по размеру пептидов и содержит фракцию водорастворимых пептидов, составляющую всего от 80% до 90%. Такие порошки пептидов с высокой молекулярной массой, составляющей более 10000 Да, являются не полностью растворимыми в воде. Также они не полностью усваиваются желудочно-кишечным трактом и поэтому создают проблемы с точки зрения их биодоступности.
В документе FR 2720067 также описано применение такого пептидного порошка, полученного из рыб, обитающих на большой глубине, для терапевтического лечения воспаления сухожилий суставов нижних конечностей (коленей, путовых суставов и копыт) скаковых лошадей. Получение такой композиции является проблематичным. Оно затруднительно, поскольку требуется добыча глубоководных рыб. Кроме того, такой порошок ограничен в применении для лечения воспаления суставов.
Следовательно, задача настоящего изобретения заключается в преодолении указанных недостатков.
Настоящее изобретение направлено на обеспечение новой композиции пептидов, получаемой путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса, при этом указанные пептиды являются водорастворимыми - т.е. на 100% водорастворимыми - и полностью усваиваются желудочно-кишечным трактом.
Настоящее изобретение также направлено на обеспечение новой, получаемой путем ферментативного гидролиза композиции пептидов коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса.
Настоящее изобретение также направлено на обеспечение такой композиции пептидов, которую можно применять в качестве лекарственного средства.
В частности, настоящее изобретение также направлено на обеспечение такой композиции пептидов, получаемой путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса, которую можно применять в качестве лекарственного средства.
Настоящее изобретение также направлено на обеспечение такой композиции пептидов, характеризующейся распределением кажущихся молекулярных масс указанных пептидов, охватывающим узкий диапазон от примерно одной тысячи до нескольких тысяч дальтонов, т.е. не содержащей пептиды с высокой кажущейся молекулярной массой, и также содержащей низкую долю пептидов с низкой кажущейся молекулярной массой.
Настоящее изобретение направлено на обеспечение такой композиции пептидов, которую можно применять в качестве лекарственного средства для лечения кандидоза кишечного тракта.
Настоящее изобретение также направлено на обеспечение такой композиции пептидов, которую можно применять в качестве лекарственного средства для лечения воспалительных заболеваний желудочно-кишечного тракта, в частности, воспалительных заболеваний кишечника (ВЗК).
Настоящее изобретение также направлено на обеспечение такой композиции пептидов, которую можно применять для обеспечения равновесия и поддержания кишечной флоры (или микробиоты).
Настоящее изобретение также направлено на обеспечение применения такой композиции пептидов, получаемой путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса, в качестве пищевой добавки.
Таким образом, настоящее изобретение относится к композиции пептидов, характеризующейся аминограммой, согласно которой:
- глицин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 20,0% до 24,5%;
- гидроксипролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 6,0% до 12,0%, в частности, от 7,0% до 11,0%;
- пролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 10,6% до 14,6%, в частности, от 11,6% до 13,6%, в частности, от 12,1% до 13,1%, предпочтительно примерно 12,6%;
при этом композиция пептидов, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, характеризуется кривой элюирования (т.е. кривой элюирования на хроматограмме) пептидов, имеющих значение площади под кривой (т.е. значение, представляющее собой массовое количество пептидов), соответствующее кажущейся молекулярной массе пептидов менее 1400 Да, такое что отношение указанной площади к общей площади под кривой (соответствующей всем пептидам в композиции) составляет менее 40%, в частности, менее 38%, предпочтительно от 30% до 38%, в частности, от 30% до 35%;
при этом указанный анализ проводят, как описано ниже:
Во всем объеме текста "аминограмма" обозначает список свободных аминокислот, образующих посредством пептидной цепи (или связывания) последовательность пептида или последовательность пептидов из смеси пептидов. Такую аминограмму получают путем анализа - в частности, путем общего анализа или анализа последовательности - аминокислот, составляющих пептид или смесь пептидов.
В частности, природу и количество аминокислот, составляющих пептиды композиции согласно настоящему изобретению, определяют при помощи любого из способов общего анализа, известных сами по себе специалистам в данной области техники. В частности, указанный анализ проводят в соответствии со стандартом ISO 13903:2005 путем анализа содержания свободных аминокислот и общего содержания аминокислот с применением анализатора аминокислот или с применением оборудования для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Гидроксипролин анализируют путем непрерывного анализа и колориметрического детектирования.
Аминограмма, полученная путем общего анализа композиции согласно настоящему изобретению, демонстрирует аминокислотный состав коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса. Таким образом, настоящее изобретение относится к такой композиции пептидов, получаемой путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса под воздействием цистеиновой протеазы растительного происхождения - в частности, протеазы класса ЕС 3.4.22.2-. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что применение такой цистеиновой протеазы позволяет получать композицию пептидов, которые являются водорастворимыми, т.е. 100% водорастворимыми, и которые полностью усваиваются желудочно-кишечным трактом, которая характеризуется распределением кажущихся молекулярных масс, охватывающим узкий диапазон от примерно одной тысячи до нескольких тысяч дальтонов, т.е. не содержащей пептиды с высокой кажущейся молекулярной массой, и также содержащей низкую долю пептидов с низкой кажущейся молекулярной массой.
Кроме того, разделение пептидов композиции пептидов согласно настоящему изобретению осуществляют, в зависимости от их кажущейся молекулярной массы, подвергая композицию пептидов стадии аналитического разделения путем жидкостной хроматографии на колонке для фильтрации с пористым силикагелем (BioSep-SEC-S2000, Phenomenex, Le Peck, France) с высокой поверхностной плотностью силанольных групп.
В качестве подвижной фазы применяют раствор, содержащий (A) сверхчистую воду с добавленной к ней трифторуксусной кислотой (0,1 об. %) и (B) ацетонитрил (А/В; 75/25; об./об.). Во время анализа температуру колонки для фильтрации поддерживают на уровне 40°С. скорость потока подвижной фазы в неподвижной фазе составляет 0,6 мл/мин. Объем подлежащей анализу композиции пептидов, вводимой в верхнюю часть колонки для гель-фильтрации, составляет 25 мкл, и детектирование проводят непрерывно по поглощению при длине волны 214 нм. Получают хроматограмму, на которой каждый пик характеризуется значением продолжительности или времени удерживания (выраженным в минутах после введения смеси, подлежащей анализу, в верхнюю часть колонки), определенным при максимальном значении поглощения пика. Кажущуюся молекулярную массу каждого из пептидов, соответствующую указанному значению времени удерживания при максимальном значении поглощения каждого пика, определяют при помощи предварительно построенной калибровочной кривой, полученной путем анализа - в тех же условиях проведения хроматографии, как описаны выше - пептидов с определенными кажущимися молекулярными массами. Например, такую калибровочную кривую получают путем анализа, в тех же условиях проведения хроматографии, смеси пептидов/белков сравнения с известными кажущимися молекулярными массами от 100 Да до 30 кДа.
С помощью хроматограммы, представляющей изменение поглощения при 214 нм в течение хроматографического анализа композиции пептидов согласно настоящему изобретению, долю пептидов с кажущейся молекулярной массой менее 1400 Да определяют путем оценки отношения значения площади под кривой - т.е. значения суммы площадей под пиками кривой - соответствующей пептидам с кажущейся молекулярной массой менее 1400 Да к значению общей площади под всей кривой - т.е. значение суммы площадей под каждым пиком кривой - соответствующему всем пептидам композиции пептидов.
Таким образом, настоящее изобретение относится к композиции пептидов, получаемой путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса под воздействием цистеиновой протеазы растительного происхождения, при этом каждый из пептидов композиции содержит от 2 до нескольких десятков аминокислот, предпочтительно от 2 аминокислот до 100 аминокислот.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой глицин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 20,0% до 22,4%, в частности, от 20,0% до 21.9%, в частности, от 20,4% до 21,4%.
В некоторых других вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой глицин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 22,4% до 24,9%, в частности, от 22,9% до 24,4%, в частности, от 23,0% до 24,0%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой гидроксипролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 7,0% до 9,0%, в частности, от 7,5% до 8,5%, предпочтительно от 7,7% до 8,5%.
В некоторых других вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой гидроксипролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 9,5% до 11,5%, в частности, от 10,0% до 11,0%, предпочтительно примерно 10,5%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой глутаминовая кислота содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 8,0% до 13,0%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой глутаминовая кислота содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 8,0% до 10,0%, в частности, от 8,5% до 9,5%, предпочтительно от 9,0% до 9,5%.
В некоторых других вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой глутаминовая кислота содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 10,5% до 12,5%, в частности, от 11,0% до 12,0%, предпочтительно примерно 11,6%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой аргинин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 6,9% до 10,9%, в частности, от 7,9% до 9,9%, в частности, от 8,0% до 9,0%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой аланин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 7,3% до 11,5%, в частности, от 8,0% до 10,0%, в частности, от 8,1% до 9,6%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой аспарагиновая кислота содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 3,1% до 7,1%, в частности, от 4,1% до 6,1%, в частности, от 4,6% до 5,6%, предпочтительно от 5,0% до 5,5%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой лизин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 1,5% до 5,5%, в частности, от 2,5% до 4,5%, в частности, от 3,0% до 4,0%, предпочтительно от 3,1% до 3,6%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой серии содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 1,5% до 5,5%, в частности, от 2,5% до 4,5%, в частности, от 3,0% до 4,0%, предпочтительно от 3,2% до 3,6%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой треонин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0,7% до 4,7%, в частности, от 1,7% до 3,7%, в частности, от 2,2% до 3,2%, предпочтительно от 2,4% до 2,8%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой лейцин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0,6% до 4,6%, в частности, от 1,6% до 3,6%, в частности, от 2,1% до 3,1%, предпочтительно от 2,4% до 2,9%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой фенилаланин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0,3% до 4,3%, в частности, от 1,3% до 3,3%, в частности, от 1,8% до 2,8%, предпочтительно от 1,8% до 2,4%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой валин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 4,0%, в частности, от 1,0% до 3,0%, в частности, от 1,5% до 2,5%, предпочтительно от 1,8% до 2,5%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой изолейцин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 3,5%, в частности, от 0,5% до 2,5%, в частности, от 0,9% до 2,0%, предпочтительно от 0,9% до 1,6%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой гидроксилизин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 3,5%, в частности, от 0,5% до 2,5%, в частности, от 1,0% до 2,0%, предпочтительно примерно 1,5%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой гистидин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 3,3%, в частности, от 0 до 2,3%, в частности, от 0,5% до 1,5%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой метионин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 2,5%, в частности, от 0 до 2,0%, в частности, от 0,5% до 1,8%, предпочтительно от 0,7% до 1,6%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой тирозин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 1,5%, в частности, от 0 до 1,0%, в частности, от 0 до 0,9%, предпочтительно от 0,2% до 0,8%.
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой цистеин и цистин содержатся в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 2%, в частности, от 0 до 1,0%, в частности, от 0 до 0,5%, предпочтительно примерно 0,03%.
Композиция согласно настоящему изобретению имеет аминограмму, согласно которой незаменимые аминокислоты (лизин, метионин, фенилаланин, треонин, валин, лейцин, изолейцин и гистидин) совместно составляют от 15% до 20%.
Предпочтительно в некоторых вариантах реализации в соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере 90% - в частности, по меньшей мере 95% - пептидов композиции пептидов имеют кажущуюся молекулярную массу менее 15000 Да (дальтонов), в частности, от 200 Да до 15000 Да, предпочтительно от 200 Да до 14000 Да, в частности, от 200 Да до 13000 Да. Предпочтительно в некоторых вариантах реализации в соответствии с настоящим изобретением по меньшей мере 90% пептидов композиции пептидов имеют кажущуюся молекулярную массу от 200 Да до 12000 Да.
Пептиды композиции согласно настоящему изобретению имеют узкое распределение кажущихся молекулярных масс, охватывающее узкий диапазон от примерно одной сотни до нескольких тысяч дальтонов, т.е. не содержащий пептиды с высокой кажущейся молекулярной массой, содержащие более 100 аминокислот, и также имеющий низкую долю пептидов с низкой кажущейся молекулярной массой.
Предпочтительно в некоторых вариантах реализации в соответствии с настоящим изобретением пептиды композиции имеют среднее значение кажущейся молекулярной массы от 2500 Да до 3600 Да, в частности, от 2700 Да до 3600 Да. Поскольку каждый пептид в композиции пептидов согласно настоящему изобретению вносит массовый вклад в композицию, среднее значение кажущейся молекулярной массы пептидов композиции соответствует среднему каждого значения, называемому взвешенным значением, кажущейся молекулярной массы каждого взвешенного пептида в виде значения, представляющего массовый вклад каждого пептида в композиции. Значение, представляющее массовый вклад каждого пептида или группы пептидов в композиции, выражается в процентах от значения площади под кривой, соответствующей указанному пептиду или указанной группе пептидов, по сравнению со значением общей площади под кривой, соответствующей всем пептидам композиции.
На практике взвешенное значение кажущейся молекулярной массы группы пептидов, соответствующих одному и тому же пику хроматограммы, соответствует значению кажущейся молекулярной массы, считанному в верхней точке (максимум) указанного пика хроматограммы, умноженному на отношение значения площади под кривой указанного пика к (общей) площади под кривой хроматограммы. "Площадь под кривой" или "площадь под пиком" обозначает площадь пространства между кривой, формирующей пик хроматограммы, и базовой линией хроматограммы. В частности, площадь под одним из пиков хроматограммы находится между двумя минимумами кривой хроматограммы, заключающими между собой верхнюю точку (или максимум) кривой хроматограммы.
В соответствии с некоторыми вариантами реализации композиция пептидов согласно настоящему изобретению, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, имеет кривую, представляющую элюирование (т.е. хроматограмму) пептидов, имеющих значение площади под указанной кривой (т.е. значение площади, представляющее массовое количество пептидов), соответствующее пептидам с кажущейся молекулярной массой более 10000 Да - в частности, от 10000 Да до 50000 Да, such такое что отношение указанной площади к общей площади под кривой (соответствующей всем пептидам в композиции) составляет менее 15%, в частности, менее 10%. В соответствии с некоторыми конкретными вариантами реализации указанное отношение составляет от 2,5% до 8,5%.
В соответствии с другими конкретными вариантами реализации композиция пептидов согласно настоящему изобретению может не содержать пептидов с высокой молекулярной массой. В соответствии с указанными другими конкретными вариантами реализации композиция пептидов согласно настоящему изобретению получена из водорастворимых пептидов.
В соответствии с некоторыми вариантами реализации композиция пептидов согласно настоящему изобретению, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, имеет кривую, представляющую элюирование (т.е. хроматограмму) пептидов, имеющих значение площади под указанной кривой (т.е. значение площади, представляющее массовое количество пептидов), соответствующее пептидам с кажущейся молекулярной массой от 1800 Да до 10000 Да, такое что отношение указанной площади к общей площади под кривой (соответствующей всем пептидам в композиции) составляет более 35% - в частности, от 35% до 70%, в частности, от 45% до 65%. В соответствии с некоторыми конкретными вариантами реализации указанное отношение составляет от 49% до 55%.
В соответствии с некоторыми вариантами реализации композиция пептидов согласно настоящему изобретению, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, имеет кривую, представляющую элюирование (т.е. хроматограмму) пептидов, имеющих значение площади под указанной кривой (т.е. значение площади, представляющее массовое количество пептидов), соответствующее пептидам с кажущейся молекулярной массой от 600 Да до 1800 Да, такое что отношение указанной площади к общей площади под кривой (соответствующей всем пептидам в композиции) составляет от 15% до 45% - в частности, от 20% до 40%, в частности, от 25% до 35%. В соответствии с некоторыми конкретными вариантами реализации указанное отношение составляет от 27% до 32%.
В соответствии с некоторыми вариантами реализации композиция пептидов согласно настоящему изобретению, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, имеет кривую, представляющую элюирование (т.е. хроматограмму) пептидов, имеющих значение площади под указанной кривой (т.е. значение площади, представляющее массовое количество пептидов), соответствующее пептидам с кажущейся молекулярной массой менее 600 Да, такое что отношение указанной площади к общей площади под кривой (соответствующей всем пептидам в композиции) составляет менее 10%. В соответствии с некоторыми конкретными вариантами реализации указанное отношение составляет от 8,5% до 14,5%.
Предпочтительно композиция согласно настоящему изобретению, по результатам хроматографического анализа на анионообменной колонке, в процессе которого каждый из пептидов композиции пептидов элюируется из колонки со временем удерживания, которое характеризует его заряд, имеет:
- значение площади под пиком, соответствующим анионным пептидам;
- значение площади под пиком, соответствующим нейтральным пептидам, и;
- значение площади под пиком, соответствующим катионным пептидам;
такие, что отношение указанного значения площади под пиком, соответствующим анионным пептидам, к сумме значений площадей под пиками, соответствующими анионным пептидам, нейтральным пептидам и катионным пептидам композиции, составляет от 27,0% до 45%, в частности, от 30% до 45%, в частности, от 35% до 43%, предпочтительно от 35% до 40%;
при этом значение площади под пиком, соответствующим анионным пептидам, значение площади под пиком, соответствующим катионным пептидам, и значение площади под пиком, соответствующим нейтральным пептидам, определены путем хроматографического анализа в условиях, описанных ниже:
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением пептиды композиции согласно настоящему изобретению, по результатам анализа гидрофобности путем обращенно-фазовой жидкостной хроматографии, имеют время удерживания от 16 мин до 36 мин;
указанный анализ гидрофобности проводят в следующих условиях:
В некоторых вариантах реализации композиция согласно настоящему изобретению содержит пептиды, которые являются гидрофобными по природе, которые элюируются из колонки, указанной выше, и в условиях, указанных выше, со временем удерживания, соответствующим процентному содержанию ацетонитрила от 12% до 38%. Среднее время удерживания пептидов композиции согласно настоящему изобретению составляет 26 мин, что соответствует процентному содержанию ацетонитрила в элюенте 25%.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением композиция пептидов находится в жидком состоянии. Это может быть раствор композиции пептидов согласно настоящему изобретению в жидком растворителе, в частности, в водном растворителе.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением композиция пептидов находится в твердом состоянии. Композиция пептидов может находиться в форме твердого вещества в разделенном виде. В частности, это может быть твердое вещество в по меньшей мере частично дегидратированном состоянии. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению может находиться в форме порошка.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением композиция пептидов не содержит углеводов.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением композиция пептидов не содержит жиров.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением твердые вещества композиции пептидов содержат массовую долю пептидов коллагена более 95%, в частности, более 99%. Таким образом, композиция пептидов содержит количество пептидов коллагена такое, что массовое отношение пептидов коллагена в твердых веществах композиции пептидов к твердым веществам композиции пептидов составляет более 95%, в частности, более 99%.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением пептиды композиции являются водорастворимыми. Предпочтительно пептиды композиции являются водорастворимыми пептиды композиции пептидов являются 100% водорастворимыми. Предпочтительно композиция пептидов является гидросовместимой.
Предпочтительно в соответствии с настоящим изобретением пептиды композиции пептидов образуются в результате контролируемого ферментативного гидролиза коллагена из кожи по меньшей мере одной рыбы, выбранной из группы, состоящей из рыб семейства Pangasiidae - в частности, Pangasius hypophtalmus (или Pangasianodon hypophtalmus), Pangasius pangasius, Pangasius bocourti - и из семейства Cichlidae - в частности, из рода Oreochromis, в частности, Oreochromis niloticus, или из рода Tilapia. Предпочтительно пептиды композиции пептидов образуются в результате контролируемого ферментативного гидролиза коллагена из кожи по меньшей мере одной рыбы, обитающей в водах умеренного пояса.
Настоящее изобретение также распространяется на применение такой композиции пептидов для терапевтического лечения организма человека или животного. Таким образом, настоящее изобретение также распространяется на такую композицию пептидов для ее применения в качестве лекарственного средства. Таким образом, настоящее изобретение распространяется на такую композицию пептидов для ее применения в качестве лекарственного средства для профилактического или терапевтического лечения по меньшей мере одного заболевания организма человека или животного.
В частности, настоящее изобретение также распространяется на композицию пептидов для ее применения в качестве лекарственного средства для по меньшей мере одного из следующих лечений:
- лечение желудочно-кишечного заболевания;
- лечение кандидоза кишечного тракта;
- лечение желудочно-кишечного воспаления, и;
- поддержание кишечной микробиоты.
Настоящее изобретение также распространяется на любое применение композиции пептидов согласно настоящему изобретению в пище человека. В соответствии с некоторыми вариантами реализации настоящее изобретение также распространяется на любое применение композиции пептидов согласно настоящему изобретению в пище человека, исключая любое применение в качестве лекарственного средства. В частности, композицию согласно настоящему изобретению преимущественно применяют в качестве пищевой добавки.
Настоящее изобретение также распространяется на композицию пептидов, полученную способом, в котором:
- собирают кожу рыб из вод умеренного пояса - в частности, из семейства Pangasiidae и/или из семейства Cichlidae, а затем;
- последовательно проводят следующие стадии:
Предпочтительно в способе согласно настоящему изобретению после стадии обработки кожи кислотой или щелочью проводят по меньшей мере одну жидкостную/твердофазную экстракцию коллагена в воде, нагретой до температуры от 60°С до 98°С. Предпочтительно в способе согласно настоящему изобретению затем проводят стадию разделения - в частности, стадию разделения путем осаждения - фракции, содержащей твердые вещества (или жиры) и раствора, содержащего экстрагированный коллаген, а затем раствор, содержащий экстрагированный коллаген, подвергают стадии очистки, например, путем фильтрования при помощи диатомовой земли и/или деминерализации на ионообменной смоле, подходящей для получения очищенного раствора, содержащего коллаген, при этом твердые вещества в очищенном растворе содержат массовую долю коллагена по меньшей мере 99%, в частности, по меньшей мере 99,5%, в частности, по меньшей мере 99,8%. Получают очищенный раствор коллагена, содержащий по существу чистый коллаген. В частности, получают такой очищенный раствор коллагена, который является по существу бесцветным. В частности, получают такой очищенный раствор коллагена, который по существу - в частности, полностью - не содержит эластина. Очищенный раствор концентрируют с получением очищенного коллагенового геля, а затем очищенный коллагеновый гель подвергают стадии гидролиза коллагена.
Такой процесс позволяет получать композицию пептидов согласно настоящему изобретению, которая является по существу бесцветной. Такой процесс позволяет получать композицию пептидов согласно настоящему изобретению, которая по существу не содержит эластина. В частности, он позволяет получать такую композицию пептидов согласно настоящему изобретению без какой-либо стадии хроматографической очистки композиции пептидов.
В таком процессе преимущественно и в соответствии с настоящим изобретением проводят последующую стадию фильтрования композиции пептидов. Предпочтительно также проводят стадию пастеризации композиции пептидов в течение по меньшей мере 2 минут при температуре пастеризации по меньшей мере от 85°С до 90°С.
В таком процессе преимущественно и в соответствии с настоящим изобретением проводят стадию сушки композиции пептидов. Указанную стадию композиции пептидов проводят путем сушки распылением с получением таким образом композиции согласно настоящему изобретению, которая является по существу дегидратированной и находится в форме порошка.
Таким образом, настоящее изобретение распространяется на композицию пептидов, полученную способом, в котором:
- собирают кожу рыб из вод умеренного пояса в частности, из семейства Pangasiidae и/или из семейства Cichlidae, а затем;
- последовательно проводят следующие стадии:
указанная композиция пептидов по результатам общего анализа имеет аминокислотный состав, при котором:
- глицин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 20,0% до 24,5%;
- гидроксипролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 6,0% до 12,0%;
- пролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 10,6% до 14,6%;
композиция пептидов, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, имеет кривую элюирования (т.е. кривую элюирования на хроматограмме) пептидов, имеющих значение площади под кривой (т.е. значение, представляющее собой массовое количество пептидов), соответствующее кажущейся молекулярной массе пептидов менее 1400 Да, такое что отношение указанного значения площади к общей площади под кривой (соответствующей всем пептидам в композиции) составляет менее 40%;
указанный анализ проводят, как описано ниже:
Настоящее изобретение также относится к композиции пептидов, к такой композиции пептидов для ее применения в качестве лекарственного средства, к способу получения такой композиции пептидов и к такой композиции пептидов, получаемой при помощи такого способа ее получения, характеризующейся комбинацией всех или некоторых характеристик, указанных выше или ниже.
Другие задачи, характеристики и преимущества настоящего изобретения станут очевидны при ознакомлении со следующим описанием, которое является не ограничивающим и относится к прилагаемым чертежам, на которых:
- фигура 1 представляет собой хроматограмму, представляющую анализ композиции пептидов согласно настоящему изобретению путем гель-фильтрации;
- фигура 2 представляет собой хроматограмму, представляющую ВЭЖХ анализ композиции пептидов согласно настоящему изобретению на анионообменной смоле;
- фигура 3 представляет собой хроматограмму, представляющую анализ композиции пептидов согласно настоящему изобретению путем обращенно-фазовой хроматографии;
- фигура 4 представляет собой графическое изображение, представляющее изменение массы тела мышей, у которых воспаление толстой кишки было вызвано натриевой солью сульфата декстрана (DSS);
- фигура 5 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа IL-1β в толстой кишке у мышей методом ELISA;
- фигура 6 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа IL-6 в толстой кишке у мышей методом ELISA;
- фигура 7 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа TNF-α в толстой кишке у мышей методом ELISA;
- фигура 8 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа TGF-β в толстой кишке у мышей методом ELISA;
- фигура 9 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа грибковой флоры методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 10 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа Saccharomyces cerevisiae методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 11 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа Enterobacteriaceae методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 12 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа Firmicutes методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 13 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа Bacteroidetes методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 14 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа Faecalibacterium prausnitzii методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 15 представляет собой графическое изображение гистограммы результата анализа Lactobacillus murinus методом ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 16 представляет собой графическое изображение гистограммы анализа матричной РНК TGF-β методом количественной ОТ-ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 17 представляет собой графическое изображение гистограммы анализа матричной РНК индуцибельной NO-синтазы (iNOS) методом количественной ОТ-ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 18 представляет собой графическое изображение гистограммы анализа матричной РНК Fizz1 методом количественной ОТ-ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 19 представляет собой графическое изображение гистограммы анализа матричной РНК 5-LOX методом количественной ОТ-ПЦР в толстой кишке у мышей;
- фигура 20 представляет собой графическое изображение гистограммы анализа матричной РНК 12/15-LOX методом количественной ОТ-ПЦР в толстой кишке у мышей.
Процесс получения композиции согласно настоящему изобретению
Собирали или приобретали кожу рыб из вод умеренного пояса, в частности, рыб семейства Pangasiidae - в частности, Pangasius hypophtalmus (или Pangasianodon hypophtalmus), Pangasius pangasius, Pangasius bocourti - и/или сомов или рыб семейства Cichlidae - в частности, рода Oreochromis, в частности, Oreochromis niloticus, или рода Tilapia.
Последовательно проводили стадии промывки кожи, кислотной обработки промытой кожи, экстракции и очистки коллагена. Затем проводили стадию ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб, полученного таким образом, с получением композиции согласно настоящему изобретению. Для этого воду нагревали до температуры от 70°С до 75°С. Коллаген из кожи рыбы постепенно выливали в горячую воду при перемешивании, так что массовая доля коллагена в воде составляла 45%, и рН раствора доводили до рН 6,0. Затем в раствор повторно растопленного коллагена добавляли цистеиновую протеазу растительного происхождения. В качестве цистеиновой протеазы выбирали по меньшей мере одну протеазу Carica , в частности, липаин (Lypaine®, LYVEN, Collombelles, France) в сухом состоянии. Массовое отношение цистеиновой протеазы к массе коллагена адаптировали в зависимости от желаемых условий гидролиза. Например, массовое отношение цистеиновой протеазы к массе коллагена составляло 0,2%. Температуру раствора поддерживали на уровне от 65°С до 70°С, адаптированном для стимулирования ферментативной активности цистеиновой протеазы и поддержания оптимальной текучести коллагенового гидролизата, с учетом того факта, что вязкость коллагенового гидролизата снижается со временем гидролиза. Раствор выдерживали при указанной температуре в течение примерно 45 минут.
Реакцию ферментативного гидролиза останавливали нагреванием коллагенового гидролизата до температуры, превышающей температуру денатурации цистеиновой протеазы, например, до температуры от 85°С до 90°С, в течение 20 минут. Гидролизат коллагена из кожи рыб необязательно подвергали стадии фильтрования, а затем стадии пастеризации в течение по меньшей мере 2 минут при температуре пастеризации по меньшей мере от 85°С до 90°С.
Затем гидролизат коллагена или пептиды коллагена подвергали стадии сушки в условиях, подходящих для получения композиции согласно настоящему изобретению в виде порошка с заранее определенным размером частиц.
Структурные характеристики пептидов композиции согласно настоящему изобретению
Аминокислотный состав
Определение характеристик композиции пептидов, образующейся в результате гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса в соответствии с настоящим изобретением, проводили путем анализа содержания свободных аминокислот и общего содержания аминокислот с применением анализатора аминокислот или с применением оборудования для высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) в соответствии со стандартом ISO 13903:2005. Для сравнения определяли аминокислотный состав гидролизата коллагена из кожи холодноводных рыб (минтай Аляски), добытых из глубоководных районов Берингова моря (Аляска). Результаты сравнения представлены в таблице 6 ниже.
Также проводили характеризацию композиции пептидов согласно настоящему изобретению по распределению кажущихся молекулярных масс пептидов, по полярности пептидов и по гидрофобности пептидов.
Анализ кажущихся молекулярных масс пептидов
Распределение кажущихся молекулярных масс пептидов, составляющих композицию согласно настоящему изобретению, анализировали путем гель-проникающей хроматографии на колонке для жидкостной хроматографии с размерами 300×7,8 мм, в которой неподвижная фаза состояла из геля на основе диоксида кремния (BioSep-SEC-S2000, Phenomenex, Le Peck, France) с пористостью 5 мкм. Колонку для фильтрации поддерживали при температуре 40°С. Подвижная фаза состояла из смеси, содержащей (А) сверхчистую воду с добавленной к ней трифторуксусной кислотой (0,1 об. %) и (В) ацетонитрила (А/В; 75/25; об./об.). Скорость потока подвижной фазы поддерживали на уровне 0,6 мл/мин. Объем раствора, содержащего композицию пептидов, подлежащую анализу, составлял 25 мкл. Детектирование проводили на выходе из колонки для гель-проникающей хроматографии путем измерения поглощения при длине волны 214 нм. Параллельно строили калибровочную кривую для определения изменения кажущейся молекулярной массы от времени удерживания. Для построения указанной калибровочной кривой выбирали известные пептиды с молекулярной массой от 100 Да до 30 кДа. Известными стандартами являются пролин, глутатион, рибонуклеаза А и трипсин с кажущимися молекулярными массами 115 Да, 307 Да, 13,7 кДа и 28,2 кДа, соответственно.
Кажущиеся молекулярные массы и времена удерживания, выраженные в минутах, для стандартов приведены в таблице 1 ниже:
Пептиды последовательно элюировались из колонки в зависимости от их уменьшающейся кажущейся молекулярной массы. Значение времени удерживания каждого из семейств пептидов композиции, подлежащей анализу, соответствующие пику на хроматограмме, считывали в верхней точке каждого из пиков хроматограммы и преобразовывали в значение кажущейся молекулярной массы путем сравнения с калибровочной кривой. Относительные значения количеств каждого из семейств пептидов соответствуют значению площади под кривой каждого из пиков хроматограммы. Указанные значения выражали отношением значения площади под кривой, соответствующей семейству пептидов, к сумме значений площади каждого из семейств пептидов.
Значения времен удерживания (мин), соответствующие кажущиеся молекулярные массы (Да) и проценты площади под кривой (выраженные в процентах от общей площади под кривой), соответствующие каждому из семейств пептидов хроматограммы, представленной на фигуре 1, приведены в таблице 2 ниже. Каждая группа пептидов, соответствующая пику на хроматограмме, идентифицируется значением кажущейся молекулярной массы, соответствующим максимуму указанного пика на хроматограмме.
Доля пептидов композиции согласно настоящему изобретению хроматограмма которой представлена на фигуре 1, и значения которой приведены в таблице 2 - для которой кажущаяся молекулярная масса менее 1400 Да, составляла 31,2% (кажущиеся молекулярные массы со значениями от 983 Да до 333 Да) относительно всех пептидов композиции.
Средняя кажущаяся молекулярная масса пептидов композиции согласно настоящему изобретению, значения кажущихся молекулярных масс которых приведены в таблице 2, составляла 3442 Да. Среднюю кажущуюся молекулярную массу пептидов композиции определяли, как среднее значений взвешенных кажущихся молекулярных масс, соответствующих каждой группе пептидов композиции, соответствующих одному и тому же пику на хроматограмме. Взвешенное значение кажущейся молекулярной массы группы пептидов одного и того же пика на хроматограмме соответствует значению кажущейся молекулярной массы в верхней точке (максимуме) пика, взвешенному по отношению значения площади под кривой соответствующего пика к (общей) площади под кривой хроматограммы. "Площадь под кривой" или "площадь под пиком" обозначает площадь пространства между кривой, формирующей пик хроматограммы, и базовой линией хроматограммы. В частности, площадь под одним из пиков хроматограммы находится между двумя минимумами кривой хроматограммы, заключающими между собой верхнюю точку (или максимум) кривой хроматограммы.
Для обобщения в таблице 3 ниже представлены средние значения времен удерживания (мин), соответствующих кажущихся молекулярных масс (Да) и процентов площади под кривой каждого из семейств пептидов, соответствующие отдельным анализам трех композиций пептидов в соответствии с настоящим изобретением.
Средняя доля пептидов в композициях в соответствии с настоящим изобретением, значения которых приведены в 3 и молекулярная масса которых составляет менее 1400 Да, составляла 35,2% (по существу соответствует кажущимся молекулярным массам от 983 Да до 340 Да).
Анализ полярности составляющих пептидов
Анализировали долю анионных пептидов в композиции согласно настоящему изобретению, распределение кажущихся молекулярных масс которых приведено в таблице 2, т.е. долю пептидов, имеющих отрицательный заряд при рН 8,35. Также анализировали долю нейтральных и/или катионных пептидов в композиции согласно настоящему изобретению, т.е. долю пептидов, имеющих общий нейтральный заряд при рН 8,35 или имеющих положительный заряд при рН 8,35. Такой анализ проводили путем ионообменной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), в которой неподвижная фаза представляла собой анионообменную смолу (Hydrophase HP-SAX, Interchim, 
France) с размером частиц 10 мкм. Хроматографическая колонка для ионообменной ВЭЖХ имела размеры 100×7,8 мм.
Хроматографическую колонку для ВЭЖХ кондиционировали путем ионного обмена в трис(гидроксиметил)аминометановом (Трис) буфере при концентрации 5 мМ в воде, рН которого доводили до значения 8,35.
Температуру колонки поддерживали на уровне 25°С. Скорость потока подвижной фазы в колонке составляла 1 мл/мин. Образец композиции пептидов, подлежащей анализу, готовили таким образом, чтобы его концентрация составляла 2 г/л, путем разбавления в сверхчистой воде. Объем 90 мкл указанного раствора, подлежащего анализу, вводили в верхнюю часть колонки. Детектирование проводили путем непрерывного измерения поглощения при 214 нм.
С момента введения образца в верхнюю часть колонки подвижная фаза состояла из 5 мМ Трис с рН 8,35 (раствор А) в течение 7 минут, а затем в подвижной фазе линейно увеличивали долю раствора В, образованного 5 мМ Трис, 5 М NaCl, рН 8,35, от 0 до 100% относительно раствора А в течение 30 минут. Затем элюирование проводили раствором В в течение 2 минут.
Полученная хроматограмма представлена на фигуре 2. Анионные пептиды выходили из колонки со временем удерживания от 10 мин до 17,5 мин, что соответствует концентрации NaCl от 0,5 М до 1,7 М. Доля анионных пептидов в композиции пептидов согласно настоящему изобретению, анализ которой представлен на фигуре 2, составляла 36,9%. Нейтральные и катионные пептиды выходили из колонки со временем удерживания от 1 минуты до 8 минут. Доля нейтральных и катионных пептидов в композиции пептидов согласно настоящему изобретению, анализ которой представлен на фигуре 2, составляла 57,5%.
Для обобщения указанный анализ воспроизводили на трех композициях пептидов в соответствии с настоящим изобретением. Средняя доля анионных пептидов в указанных композициях в соответствии с настоящим изобретением составляла от 27,9% до 42,5%, и средняя доля нейтральных и катионных пептидов в указанных композициях в соответствии с настоящим изобретением составляла от 57,5% до 72,1%.
Анализ гидрофобности составляющих пептидов
Гидрофобность составляющих пептидов в композиции согласно настоящему изобретению анализировали путем обращенно-фазовой жидкостной хроматографии на колонке с диоксидом кремния, привитым бутильными группами (Vydac 214ТР™ С4, Grace, Epernon, France), с размерами 250×4,6 мм. Размер частиц составлял 5 мкм, и его пористость составляла 300 Å.
Колонку кондиционировали в сверхчистой воде, подкисленной 0,1% трифторуксусной кислотой. Температуру колонки поддерживали на уровне 40°С. Скорость потока подвижной фазы в колонке составляла 0,6 мл/мин. Образец композиции пептидов, подлежащей анализу, готовили таким образом, чтобы его концентрация составляла 2 г/л, путем разбавления в сверхчистой воде. Объем 100 мкл указанного раствора, подлежащего анализу, вводили в верхнюю часть колонки. Детектирование проводили путем непрерывного измерения поглощения при 214 нм.
С момента введения образца в верхнюю часть колонки подвижная фаза состояла из подкисленной воды (раствор А) в течение 7 минут, а затем в подвижной фазе линейно увеличивали долю раствора В, образованного водой, подкисленной 0,1% (по объему) трифторуксусной кислотой, и содержащего 40% ацетонитрила, от 0 до 100% относительно раствора А в течение 30 минут.
Полученная хроматограмма представлена на фигуре 3. Пептиды композиции согласно настоящему изобретению выходили из колонки со временем удерживания от 16 мин до 36 мин, что соответствует процентному содержанию ацетонитрила в элюенте от 12% до 38%. Среднее время удерживания пептидов композиции согласно настоящему изобретению составляло 26 мин, что соответствует процентному содержанию ацетонитрила в элюенте 25%.
Биологическое действие композиции согласно настоящему изобретению
Действие в отношении колонизации Candida albicans и при кандидозе желудочно-кишечного тракта
Анализировали действие композиции согласно настоящему изобретению при кандидозе желудочно-кишечного тракта, индуцированного у самок мышей C57BL/6 возрастом 8 недель и с массой тела 20-25 г. Указанным мышам в течение 21 дня давали композицию согласно настоящему изобретению в количестве 4 г/кг/день. На 21ый день индуцировали кандидоз желудочно-кишечного тракта путем принудительного введения каждой мыши 5×107 дрожжевых клеток. В период от 2 дня (D2) до 7 дня (D7) после индуцирования собирали экскременты мышей и оценивали уровень дрожжей (КОЕ/мг экскрементов) в хромогенной среде. Результаты приведены в таблице 4 ниже в сравнении со значениями, полученными для мышей, у которых индуцировали кандидоз желудочно-кишечного тракта, но которых не лечили композицией согласно настоящему изобретению.
Композиция согласно настоящему изобретению индуцирует снижение уровня Candida albicans.
Противовоспалительная композиция пептидов согласно настоящему изобретению
Проводили сравнительный анализ стимуляции экспрессии рецепторов воспалительных макрофагов 1 типа (M1) и/или рецепторов противовоспалительных макрофагов 2 типа (М2) при помощи композиции пептидов в соответствии с настоящим изобретением, полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса, и при помощи композиции пептидов, полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи холодноводных рыб (не включена в объем настоящего изобретения).
Макрофаги/моноциты здоровых субъектов-людей культивировали в течение 24 часов в присутствии композиции для предварительной обработки (контроль без пептидов коллагена, не включен в объем настоящего изобретения, таблица 7) в концентрации 100 мкг/мл питательной среды. Оценивали действия указанной предварительной обработки на экспрессию характеристических рецепторов макрофагов 1 типа (M1, воспалительные) и на экспрессию характеристических рецепторов макрофагов 2 типа (М2, противовоспалительные) по уровню продуцирования свободных кислородных радикалов (активные формы кислорода, АФК) рецепторами макрофагов 1 типа, специфически стимулируемых сложным форболовым эфиром ("12-миристат-13-ацетат-форбол, TPA") в концентрации 100 мкМ, или рецепторами макрофагов 2 типа, специфически стимулируемых неопсонизированным зимозаном (NOZ) в концентрации 100 мкг/мл. Уровень продуцирования свободных кислородных радикалов измеряли по хемилюминесценции в присутствии люминола в концентрации 66 мкМ. Результаты, приведенные в таблице 7 ниже, представляют средние значения, полученные по результатам трех анализов.
Наблюдали, что макрофаги/моноциты, не обработанные (не индуцированные) NOZ и ТРА, имеют уровень продуцирования свободных кислородных радикалов, который является по существу постоянным в зависимости от характера предварительной обработки (без коллагена, в соответствии с настоящим изобретением, и не включена в объем настоящего изобретения).
Макрофаги/моноциты, предварительно обработанные композицией пептидов в соответствии с настоящим изобретением, т.е. полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса, демонстрируют повышенную экспрессию рецепторов противовоспалительных макрофагов 2 типа (М2), определяемую интенсивностью хемилюминесценции (5,06×108 AU), индуцированной NOZ, по сравнению с макрофагами/моноцитами, предварительно обработанными композицией пептидов, не включенной в объем настоящего изобретения, т.е. полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи холодно водных рыб (3,91×108 AU).
Макрофаги/моноциты, предварительно обработанные композицией пептидов в соответствии с настоящим изобретением, т.е. полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи рыб из вод умеренного пояса, демонстрируют пониженную экспрессию рецепторов воспалительных макрофагов 1 типа (M1), определяемую интенсивностью хемилюминесценции (6,75×108 AU), индуцированной ТРА, по сравнению с макрофагами/моноцитами, предварительно обработанными композицией пептидов, не включенной в объем настоящего изобретения, т.е. полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи холодноводных рыб (1,49×109 AU).
Композиция пептидов согласно настоящему изобретению имеет противовоспалительный фенотип по сравнению с композицией пептидов, не включенной в объем настоящего изобретения, то есть полученной путем ферментативного гидролиза коллагена из кожи холодноводных рыб, за счет увеличения уровня экспрессии рецепторов противовоспалительных макрофагов 2 типа 2 (М2) и снижения уровня экспрессии рецепторов воспалительных макрофагов 1 типа (M1).
Композиция пептидов в соответствии с настоящим изобретением, получаемая из кожи рыб из вод умеренного пояса и имеющая аминограмму, согласно которой:
- глицин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 20,0% до 24,5%;
- гидроксипролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 6,0% до 12,0%;
- пролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 10,6% до 14,6%;
имеет такой противовоспалительный фенотип, подтверждаемый анализами воспаления толстой кишки на мышиной модели, который не обнаруживается для композиции пептидов, получаемой из кожи холодноводных рыб и имеющей аминограмму, как описано в таблице 6.
Воспаление толстой кишки в мышиной модели
Противовоспалительное действие композиции пептидов согласно настоящему изобретению демонстрировали на мышиной модели фармакологического воспаления, индуцированного натриевой солью сульфата декстрана (DSS, MP Biomedical LLC, Canada), характеризующегося потерей массы и кровавой диареей.
Изучали действие композиции пептидов согласно настоящему изобретению на ограничение потери массы у мышей, получавших DSS. Самкам лабораторных мышей C57BL/6 возрастом от 10 до 11 недель и с массой тела от 20 до 25 грамм в течение 7 дней (D1-D7) давали DSS, растворенный в концентрации 1,5% (мас./об.) в питьевой воде для мышей. Указанным мышам также в течение 12 дней (D1-D12) давали композицию согласно настоящему изобретению в количестве 0,1 г/кг/день; 1 г/кг/день и 4 г/кг/день. Указанное количество композиции согласно настоящему изобретению добавляли в питьевую воду для мышей. В D12 мышей умерщвляли.
Исследовали 5 партий мышей, каждая из которых состояла из 10 мышей, где:
- партии 1 в течение 7 дней давали DSS;
- партии 2 в течение 7 дней давали DSS и в течение 12 дней давали композицию согласно настоящему изобретению в количестве 0,1 г/кг/день;
- партии 3 в течение 7 дней давали DSS и в течение 12 дней давали композицию согласно настоящему изобретению в количестве 1 г/кг/день;
- партии 4 в течение 7 дней давали DSS и в течение 12 дней давали композицию согласно настоящему изобретению в количестве 4 г/кг/день;
- партии 5 в течение 7 дней давали DSS и в течение 12 дней давали гидролизованный казеин, не включенный в настоящее изобретение, в количестве 0,1 г/кг/день.
Параллельно осуществляли контроль на 5 мышах, которым не давали DSS, у которых не индуцировали воспаление и которым не давали композицию пептидов согласно настоящему изобретению.
1. Исследование массы тела
Массу каждой мыши измеряли каждый день и рассчитывали потерю массы для каждой из мышей в каждой партии. Результаты представлены на фигуре 4, на которой контроль представлен пустыми кружками 
партия 1 представлена заполненными кружками 
партия 2 представлена пустыми квадратами 
партия 3 представлена заполненными квадратами 
партия 4 представлена пустыми треугольниками 
и партия 5 представлена заполненными треугольниками 
Наблюдали, что, начиная с дозировки 0,1 г/кг/день (партия 2, 
), композиция согласно настоящему изобретению ограничивала потерю массы мышей. Указанное ограничение также наблюдали для дозировок 1 г/кг/день (партия 3, 
) и 4 г/кг/день (партия 4, 
). Указанное ограничение не наблюдали для лечения гидролизованным казеином (партия 5, 
), при котором потеря массы являлась сравнимой с потерей массы мышей из партии 1 
Композиция согласно настоящему изобретению позволяет ограничить или даже практически полностью устранить потерю массы, вызванную воспалением, вызванным натриевой солью сульфата декстрана (DSS), у мышей. Композицию согласно настоящему изобретению можно применять в качестве лекарственного средства, в частности, для лечения воспаления толстой кишки.
2. Гистология
В поперечных гистологических срезах толстой кишки мышей, которым вводили только DSS, наблюдали после бихроматического окрашивания гематоксилином и эозином значительную инфильтрацию воспалительных клеток в слизистой и подслизистой оболочке. Толщина эпителия уменьшалась. В эпителии наблюдали обширное язвообразование. В поперечных гистологических срезах толстой кишки мышей, которым вводили DSS и композицию согласно настоящему изобретению в количестве 0,1 г/кг/день, 1 г/кг/день и 4 г/кг/день, наблюдали после бихроматического окрашивания гематоксилином и эозином, плотно упакованные прямые трубчатые железы, что характерно для здорового и нормально функционирующего эпителия.
3. Макроскопический индекс
Для каждого условия вычисляли макроскопический индекс на основании системы, созданной согласно шкале Уоллеса (Wallace), в части, касающейся внешнего вида экскрементов, наличия повреждений толстой кишки, массы толстой кишки и длины толстой кишки, согласно шкале Уоллеса (Е.S. Kimball, N.Н. Wallace, С.R. Schneider, М.R. D'Andrea and P.J. Hornby; 2004; Neurogastroenterol Motil; 16, 811-818. Vanilloid receptor 1 antagonists attenuate disease severity in dextran sulfate sodium-induced colitis in mice). Чем сильнее воспаление толстой кишки, тем выше значение макроскопического индекса, и чем здоровее толстая кишка, тем ниже значение макроскопического индекса.
Средние значения и стандартное отклонение макроскопического индекса мышей из партий 1-5 приведены в таблице 5 ниже.
Наблюдали снижение макроскопического индекса, вызванное лечением композицией согласно настоящему изобретению, т.е. улучшение воспалительного состояния толстой кишки, вызванное композицией согласно настоящему изобретению.
4. Ингибирование экспрессии провоспалительных маркеров у мышей
В день D12 мышей умерщвляли и анализировали уровень экспрессии провоспалительных цитокинов в толстой кишке способом ELISA:
- IL-1β: уровень IL-1β анализировали способом ELISA и выражали в пикограммах (пг) IL-1β на миллиграмм (мг) толстой кишки. Результаты показаны на фигуре 5, где первый столбец (белый столбец) соответствует анализу, который проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое (р<0,05) уменьшение экспрессии IL-1β в толстой кишке мышей, которым вводили композицию пептидов согласно настоящему изобретению в дозах 0,1 г/кг/день, 1 г/кг/день и 4 г/кг/день, по сравнению с толстой кишкой мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS, и мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS и которым вводили гидролизованный казеин. Указанный эффект подтверждали путем анализа матричной РНК IL-1β в рамках количественной ОТ-ПЦР, в частности, (р<0,01) для доз 0,1 г/кг/день и 1 г/кг/день;
- IL6: уровень IL6 анализировали способом ELISA и выражали в пикограммах (пг) IL6 на миллиграмм (мг) толстой кишки. Результаты показаны на фигуре 6, где первый столбец (белый столбец) соответствует анализу, который проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое уменьшение экспрессии IL6 в толстой кишке мышей, которым вводили композицию пептидов согласно настоящему изобретению в дозах 0,1 г/кг/день (р<0,01), 1 г/кг/день (р<0,01) и 4 г/кг/день (р<0,05), по сравнению с толстой кишкой мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS, и мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS и которым вводили гидролизованный казеин. Указанный эффект подтверждали путем анализа матричной РНК IL6 в рамках количественной ОТ-ПЦР;
- TNF-α: уровень TNF-α анализировали способом ELISA и выражали в пикограммах (пг) TNF-α на миллиграмм (мг) толстой кишки. Результаты показаны на фигуре 7, где первый столбец (белый столбец) соответствует анализу, который проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое уменьшение экспрессии TNF-α в толстой кишке мышей, которым вводили композицию пептидов согласно настоящему изобретению в дозах 0,1 г/кг/день (р<0,05), 1 г/кг/день (р<0,05) и 4 г/кг/день (р<0,05), по сравнению с толстой кишкой мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS, и мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS и которым вводили гидролизованный казеин.
В анализе путем количественной ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) матричных РНК МСР1 показано статистически значимое снижение уровня указанных мРНК, индуцируемых DSS, в частности, для доз 0,1 г/кг/день (р<0,01) и 1 г/кг/день (р<0,05) композиции пептидов согласно настоящему изобретению.
Анализ путем количественной ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) матричных РНК индуцибельной NO-синтазы (iNOS) показан на фигуре 17, где первый столбец (белый столбец) соответствует анализу, который проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое уменьшение уровня мРНК iNOS, индуцируемых DSS, для доз 0,1 г/кг/день (р<0,05) и 1 г/кг/день (р<0,05) композиции пептидов согласно настоящему изобретению.
5. Стимулирование экспрессии противовоспалительных маркеров у мышей
В день D12 мышей умерщвляли и анализировали уровень экспрессии противовоспалительных маркеров в толстой кишке:
- TGF-β: уровень TGF-β анализировали способом ELISA и выражали в пикограммах (пг) TGF-β на миллиграмм (мг) толстой кишки. Результаты показаны на фигуре 8, где первый столбец (белый столбец) соответствует анализу, который проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали стимулирование экспрессии TGF-β в толстой кишке мышей, которым вводили композицию пептидов согласно настоящему изобретению в дозах 0,1 г/кг/день, по сравнению с толстой кишкой мышей, у которых индуцировали воспаление под действием DSS. Указанный эффект подтверждали путем анализа матричной РНК TGF-β в рамках количественной ОТ-ПЦР, в частности, для доз 0,1 г/кг/день и 1 г/кг/день композиции пептидов согласно настоящему изобретению (фигура 16);
- Fizz1: Fizz1 является маркером противовоспалительных макрофагов М2. Анализ путем количественной ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) матричных РНК Fizz1 показан на фигуре 18, где первый столбец (белый столбец) соответствует анализу, который проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое увеличение уровня матричных мРНК Fizz1, снижаемых DSS, для доз 0,1 г/кг/день (р<0,05), 1 г/кг/день (р<0,01) и 4 г/кг/день (р<0,05) композиции пептидов согласно настоящему изобретению;
- также наблюдали статистически значимое увеличение уровня матричных мРНК Ym1, снижаемых DSS, для доз 0,1 г/кг/день (р<0,05) композиции пептидов согласно настоящему изобретению.
6. Влияние композиции пептидов согласно настоящему изобретению на флору толстой кишки - микробиоту толстой кишки
В день D12 умерщвляли мышей и проводили количественную оценку флоры толстой кишки у указанных мышей путем ПЦР (полимеразная цепная реакция). Значения нормировали на общее количество бактерий или грибков и по уровню β-актина. β-актин представляет собой ген сравнения, который позволяет проводить стандартизацию по количеству анализируемых тканей толстой кишки. В частности, проводили количественную оценку следующих параметров:
- общая грибковая флора, которую определяли путем количественной амплификации рибосомной ДНК грибков ITS1-2. Отношение R количества рибосомной ДНК грибков ITS1-2 к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 9, где первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению восстанавливает грибковую флору, в частности, при дозе 4 г/кг/день;
- дрожжи Saccharomyces cerevisiae, которые определяли путем количественной амплификации рибосомной ДНК 26S. Отношение R количества рибосомной ДНК 26S к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 10. Первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению статистически значимо восстанавливает флору Saccharomyces cerevisiae при дозах 0,1 г/кг/день (р<0,05), 1 г/кг/день (р<0,05) и 4 г/кг/день (р<0,05). В указанном случае S. cerevisiae обладает противовоспалительным потенциалом;
- флора Enterobacteriaceae, которую определяли путем количественной амплификации рибосомной ДНК 16S. Отношение R количества рибосомной ДНК 16S к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 11. Первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Четвертый столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению обеспечивает снижение уровня флоры Enterobacteriaceae, индуцируемой DSS, при концентрации 0,1 г/кг/день. Enterobacteriaceae связаны с провоспалительным потенциалом;
- флора Firmicutes, которую определяли путем количественной амплификации рибосомной ДНК 16S на фрагменте гена, позволяющем проводить анализ разнообразия филума. Отношение R количества такой рибосомной ДНК 16S к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 12. Первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению вызывает статистически значимое снижение уровня флоры Firmicutes, индуцируемой DSS, при концентрациях 0,1 г/кг/день (р<0,05), 1 г/кг/день (р<0,05) и 4 г/кг/день (р<0,05), но также вызывает снижение не индуцированной флоры Firmicutes при тех же концентрациях. Следует отметить, что увеличение уровня флоры Firmicutes обычно наблюдают при воспалительном заболевании желудочно-кишечного тракта (ВЗК, воспалительных заболеваниях кишечника);
- флора Bacteroidetes, которую определяли путем количественной амплификации рибосомной ДНК 16S на фрагменте гена, позволяющем проводить анализ разнообразия филума. Отношение R количества такой рибосомной ДНК 16S к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 13. Первый столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Второй столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Трений столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Четвертый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Пятый столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению вызывает статистически значимое снижение уровня флоры Bacteroidetes, индуцируемой DSS, при концентрациях 0,1 г/кг/день (р<0,05), 1 г/кг/день (р<0,05) и 4 г/кг/день (р<0,05). Увеличение уровня Bacteroidetes обычно наблюдают при воспалительном заболевании желудочно-кишечного тракта (ВЗК);
- флора Faecalibacterium prausnitzii, которую определяли путем количественной амплификации специфической ДНК. Отношение R количества такой специфической ДНК к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 14. Первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению вызывает статистически значимое увеличение уровня флоры Faecalibacterium prausnitzii, разрушаемой DSS, при концентрациях 0,1 г/кг/день (р<0,01), 1 г/кг/день (р<0,01) и 4 г/кг/день (р<0,01). Увеличение уровня Faecalibacterium prausnitzii обычно наблюдают при воспалительном заболевании желудочно-кишечного тракта (ВЗК). Также Faecalibacterium prausnitzii предположительно обладает противовоспалительными свойствами;
- флора Lactobacillus murinus, которую определяли путем количественной амплификации специфической ДНК. Отношение R количества такой специфической ДНК к количеству ДНК β-актина показано на фигуре 15, где первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению вызывает увеличение уровня флоры Lactobacillus murinus при концентрациях 0,1 г/кг/день, 1 г/кг/день и 4 г/кг/день (р<0,05). Также Lactobacillus murinus предположительно обладает противовоспалительными свойствами.
7. Влияние композиции пептидов согласно настоящему изобретению на ферменты липидного обмена арахидоновой кислоты:
- 5-LOX: анализ путем количественной ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) матричных РНК фермента 5-липоксигеназы (5-LOX) показан на фигуре 19, где первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое снижение экспрессии 5-LOX для доз композиции пептидов согласно настоящему изобретению 0,1 г/кг/день (р<0,01) и 1 г/кг/день (р<0,01) по сравнению с контролем, не индуцированным DSS. Композиция пептидов согласно настоящему изобретению оказывает ингибирующее влияние на экспрессию 5-LOX, способствуя продуцированию провоспалительных липидных медиаторов;
- 12/15-LOX: анализ путем количественной ОТ-ПЦР (полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией) матричных РНК фермента 12/15-липоксигеназы (12/15-LOX) показан на фигуре 20, где первый столбец (белый столбец) соответствует исследованию, которое проводили у контрольных мышей. Второй столбец (столбец с диагональной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 1. Третий столбец (столбец с вертикальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 4. Четвертый столбец (столбец с горизонтальной штриховкой) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 3. Пятый столбец (серый столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 2. Шестой столбец (черный столбец) соответствует анализу, который проводили у мышей из партии 5. Наблюдали статистически значимое увеличение экспрессии 12/15-LOX для доз композиции пептидов согласно настоящему изобретению 0,1 г/кг/день (р<0,01) и 1 г/кг/день (р<0,01) по сравнению с контролем, не индуцированным DSS.
Очевидно, что настоящее изобретение охватывает разнообразные варианты реализации и способы применения. В частности, включены различные способы применения в качестве лекарственного средства, не выходящие за рамки объема защиты настоящего изобретения.
Claims (58)
1. Композиция пептидов для лечения желудочно-кишечного заболевания, имеющая аминограмму, согласно которой:
- глицин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 20,0% до 24,5%;
- гидроксипролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 6,0% до 12,0%;
- пролин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 10,6% до 14,6%;
- аланин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 7,3% до 11,3%;
- глутаминовая кислота содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 8,0% до 13,0%;
- серин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 1,5% до 5,5%;
- аргинин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 6,9% до 10,9%;
- аспарагиновая кислота содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 3,1% до 7,1%;
- треонин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0,7% до 4,7%;
- лизин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 1,5% до 5,5%;
- лейцин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0,6% до 4,6%;
- валин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 0,40%;
- гистидин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 3,3%;
- фенилаланин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0,3% до 4,3%;
- метионин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 2,5%;
- изолейцин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 3,5%;
- гидроксилизин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 3,5%;
- тирозин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 1,5%;
- цистеин содержится в таком мольном количестве, что отношение указанного количества к сумме мольных количеств аминокислот в композиции составляет от 0 до 2,0%;
при этом композиция пептидов, по результатам анализа путем эксклюзионной хроматографии, в процессе которой каждый из пептидов композиции пептидов элюируется со временем удерживания, которое характеризует кажущуюся молекулярную массу указанного пептида, характеризуется кривой элюирования пептидов, имеющих значение площади под кривой, соответствующее кажущейся молекулярной массе пептидов менее 1400 Да, такое что отношение указанной площади к общей площади под кривой составляет менее 40%;
при этом пептиды указанной композиции пептидов имеют среднее значение кажущейся молекулярной массы от 2500 Да до 3600 Да;
при этом указанный анализ проводят, как описано ниже:
- на колонке для фильтрации с размерами 300 × 7,8 мм, содержащей неподвижную фазу, образованную из силикагеля с пористостью 5 мкм;
- температуру колонки поддерживают на уровне 40ºC;
- с применением в качестве подвижной фазы раствора, образованного (A) сверхчистой водой, содержащей 0,1 об.% трифторуксусной кислоты, и (B) ацетонитрилом, где объемное отношение A/B составляет 75/25;
- введение в верхнюю часть колонки для гель-фильтрации объема раствора, содержащего композицию пептидов;
- скорость потока подвижной фазы в колонке составляет 0,6 мл/мин; и
- пептиды композиции детектируют по поглощению при длине волны 214 нм,
где пептиды композиции образуются в результате контролируемого ферментативного гидролиза коллагена из кожи по меньшей мере одной рыбы, выбранной из группы, включающей рыб семейства Pangasiidae и семейства Cichlidae.
2. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что каждый пептид композиции имеет кажущуюся молекулярную массу от 200 Да до 12000 Да.
3. Композиция по любому из пп. 1 и 2, характеризующаяся тем, что по результатам хроматографического анализа на анионообменной колонке, в процессе которого каждый из пептидов композиции пептидов элюируется из колонки со временем удерживания, которое характеризует его заряд, она имеет:
- значение площади под пиком, соответствующим анионным пептидам;
- значение площади под пиком, соответствующим нейтральным пептидам; и
- значение площади под пиком, соответствующим катионным пептидам;
такие, что отношение указанного значения площади под пиком, соответствующим анионным пептидам, к сумме значений площадей под пиками, соответствующими анионным пептидам, нейтральным пептидам и катионным пептидам композиции, составляет от 27,0% до 45%;
при этом значение площади под пиком, соответствующим анионным пептидам, значение площади под пиком, соответствующим катионным пептидам, и значение площади под пиком, соответствующим нейтральным пептидам, определены путем хроматографического анализа в условиях, описанных ниже:
- применение хроматографической колонки с размерами 100 × 7,8 мм, содержащей в качестве неподвижной фазы гидрофильную анионообменную смолу, функционализированную группами четвертичного аммония, с размером частиц 10 мкм;
- применение в качестве первой подвижной фазы для элюирования катионных пептидов и нейтральных пептидов 5 мМ водного Трис-буфера (C) при pH 8,35 в течение 7 мин с момента введения композиции, подлежащей анализу, в верхнюю часть колонки, а затем применение второй подвижной фазы для элюирования анионных пептидов, в которой отношение объема буфера (D), полученного из 5 мМ Трис, 5 М NaCl при pH 8,35, к объему буфера (C) линейно увеличивается от 0 до 100% в течение 30 мин;
- со скоростью потока подвижной фазы в колонке 1 мл/мин;
- анализ проводят при температуре 25ºC; и
- с детектированием по поглощению при длине волны 214 нм на выходе из колонки.
4. Композиция по любому из пп. 1-3, характеризующаяся тем, что пептиды, по результатам анализа гидрофобности путем обращенно-фазовой жидкостной хроматографии, имеют время удерживания от 16 мин до 36 мин;
указанный анализ гидрофобности проводят в следующих условиях:
- применение хроматографической колонки с размерами 250 × 4,6 мм, содержащей неподвижную фазу, полученную из диоксида кремния, привитого бутильными группами, с размером частиц 5 мкм и значением пористости 300 Å;
- применение в качестве первой подвижной фазы для элюирования гидрофильных пептидов раствора (E) трифторуксусной кислоты в концентрации 0,1% в сверхчистой воде в течение 7 мин с момента введения композиции, подлежащей анализу, в верхнюю часть колонки, а затем применение второй подвижной фазы для элюирования гидрофобных пептидов, в которой отношение объема раствора (F) трифторуксусной кислоты в концентрации 0,1% в воде, содержащей 40% ацетонитрила, к объему раствора (E) линейно увеличивается от 0 до 40% в течение 30 мин;
- со скоростью потока подвижной фазы в колонке 0,6 мл/мин;
- анализ проводят при температуре 40ºC; и
- с детектированием по поглощению при длине волны 214 нм на выходе из колонки.
5. Композиция по любому из пп. 1-4, характеризующаяся тем, что она находится в жидком состоянии.
6. Композиция по любому из пп. 1-4, характеризующаяся тем, что она представляет собой твердое вещество в разделенном виде.
7. Композиция по любому из пп. 1-6, характеризующаяся тем, что она не содержит углеводов.
8. Композиция по любому из пп. 1-7, характеризующаяся тем, что она не содержит жиров.
9. Композиция по любому из пп. 1-8, характеризующаяся тем, что пептиды композиции являются водорастворимыми.
10. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что желудочно-кишечное заболевание представляет собой кандидоз кишечного тракта.
11. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что желудочно-кишечное заболевание представляет собой желудочно-кишечное воспаление.
12. Композиция по п. 1, характеризующаяся тем, что желудочно-кишечное заболевание представляет собой поддержание кишечной микробиоты.
13. Применение композиции по п. 1 в качестве добавки в пищу человека.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1660521A FR3058142B1 (fr) | 2016-10-28 | 2016-10-28 | Composition de peptides de collagene de peau de poisson et son utilisation a titre de medicament |
| FR16.60521 | 2016-10-28 | ||
| PCT/FR2017/052932 WO2018078276A1 (fr) | 2016-10-28 | 2017-10-24 | Composition de peptides de collagène de peau de poisson et son utilisation à titre de médicament |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2019109793A RU2019109793A (ru) | 2020-11-30 |
| RU2019109793A3 RU2019109793A3 (ru) | 2020-12-22 |
| RU2751886C2 true RU2751886C2 (ru) | 2021-07-19 |
Family
ID=59296872
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019109793A RU2751886C2 (ru) | 2016-10-28 | 2017-10-24 | Композиция пептидов коллагена кожи рыбы и её применение в качестве лекарственного средства |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US11427626B2 (ru) |
| EP (1) | EP3532491A1 (ru) |
| JP (1) | JP7125198B2 (ru) |
| KR (2) | KR20190072617A (ru) |
| CN (1) | CN110072886B (ru) |
| AU (1) | AU2017349311B2 (ru) |
| BR (1) | BR112019008349A2 (ru) |
| CA (1) | CA3039276A1 (ru) |
| FR (1) | FR3058142B1 (ru) |
| MA (1) | MA46622A (ru) |
| MY (1) | MY194925A (ru) |
| RU (1) | RU2751886C2 (ru) |
| TW (1) | TWI790214B (ru) |
| WO (1) | WO2018078276A1 (ru) |
Families Citing this family (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR3058142B1 (fr) * | 2016-10-28 | 2023-11-24 | Gelatines Weishardt | Composition de peptides de collagene de peau de poisson et son utilisation a titre de medicament |
| US11180541B2 (en) | 2017-09-28 | 2021-11-23 | Geltor, Inc. | Recombinant collagen and elastin molecules and uses thereof |
| CN109602896A (zh) * | 2019-01-11 | 2019-04-12 | 无限极（中国）有限公司 | 一种胶原蛋白肽和弹性蛋白肽的组合物及其制备方法和应用 |
| CA3136691A1 (en) | 2019-04-12 | 2020-10-15 | Geltor, Inc. | Recombinant elastin and production thereof |
| CN111220720B (zh) * | 2019-12-05 | 2022-07-22 | 上海上药第一生化药业有限公司 | 胰蛋白酶及其酶原的纯度检测方法 |
| BR112022014586A2 (pt) | 2020-01-24 | 2022-09-13 | Geltor Inc | Colágeno dietário não derivado de animais |
| CN114053165B (zh) * | 2020-08-06 | 2023-10-20 | 大江生医股份有限公司 | 生物活性物质用于制备改善皮肤状态的组合物的用途 |
| CN114073756B (zh) * | 2020-08-21 | 2024-04-16 | 大江生医股份有限公司 | 生物活性物质用于制备抗老化的组合物的用途 |
| TWI788003B (zh) * | 2020-08-21 | 2022-12-21 | 大江生醫股份有限公司 | 生物活性物質用於製備改善毛孔及皺紋的組合物的用途 |
| TWI743960B (zh) * | 2020-08-21 | 2021-10-21 | 大江生醫股份有限公司 | 生物活性物質用於製備提升細胞粒線體活性的組合物的用途 |
| CN114740105B (zh) * | 2022-03-17 | 2023-11-07 | 重庆医药高等专科学校 | 一种脯氨酸和n-甲基脯氨酸的液相色谱分离检测方法及其应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2720067A1 (fr) * | 1994-05-17 | 1995-11-24 | Dielen Lab | Hydrolysat de protéines d'animaux marins, procédé d'obtention et applications. |
| WO2007090504A1 (en) * | 2006-02-10 | 2007-08-16 | Masterfam, S.L. | Hydrolysed collagen and uses therof |
| WO2010074552A1 (en) * | 2008-12-23 | 2010-07-01 | Universiti Putra Malaysia (Upm) | Collagen extraction from aquatic animals |
| RU2455022C1 (ru) * | 2008-05-20 | 2012-07-10 | Хикару ИСИИ | Ингибитор старения сосудов и композиция против старения |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5308619B2 (ja) | 2006-06-05 | 2013-10-09 | 株式会社アドバンス | 健康食品 |
| US20100068342A1 (en) * | 2006-11-15 | 2010-03-18 | Meji Seika Kaisha Ltd | Collagen peptide composition and food or beverage containing the same |
| DE102007002295A1 (de) * | 2007-01-09 | 2008-07-10 | Gelita Ag | Nahrungsmittelprodukt auf Proteinbasis und Verfahren zur Herstellung |
| SG10201401809RA (en) | 2009-04-28 | 2014-06-27 | Meiji Co Ltd | Collagen Peptide Composition Having Good Blood Transfer Properties, And Food And Drink Containing Same |
| US20140296151A1 (en) | 2011-10-14 | 2014-10-02 | Council Of Scientific And Industrial Research | Peptides from fish gelatine |
| FR3058142B1 (fr) * | 2016-10-28 | 2023-11-24 | Gelatines Weishardt | Composition de peptides de collagene de peau de poisson et son utilisation a titre de medicament |
-
2016
- 2016-10-28 FR FR1660521A patent/FR3058142B1/fr active Active
-
2017
- 2017-10-24 US US16/345,901 patent/US11427626B2/en active Active
- 2017-10-24 RU RU2019109793A patent/RU2751886C2/ru active
- 2017-10-24 WO PCT/FR2017/052932 patent/WO2018078276A1/fr unknown
- 2017-10-24 JP JP2019521742A patent/JP7125198B2/ja active Active
- 2017-10-24 KR KR1020197015158A patent/KR20190072617A/ko not_active IP Right Cessation
- 2017-10-24 CN CN201780066941.7A patent/CN110072886B/zh active Active
- 2017-10-24 KR KR1020237021197A patent/KR20230104296A/ko not_active Application Discontinuation
- 2017-10-24 MY MYPI2019001817A patent/MY194925A/en unknown
- 2017-10-24 EP EP17797408.6A patent/EP3532491A1/fr active Pending
- 2017-10-24 AU AU2017349311A patent/AU2017349311B2/en active Active
- 2017-10-24 BR BR112019008349A patent/BR112019008349A2/pt unknown
- 2017-10-24 MA MA046622A patent/MA46622A/fr unknown
- 2017-10-24 CA CA3039276A patent/CA3039276A1/fr active Pending
- 2017-10-27 TW TW106137113A patent/TWI790214B/zh active
-
2022
- 2022-07-14 US US17/864,685 patent/US20230024455A1/en active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2720067A1 (fr) * | 1994-05-17 | 1995-11-24 | Dielen Lab | Hydrolysat de protéines d'animaux marins, procédé d'obtention et applications. |
| WO2007090504A1 (en) * | 2006-02-10 | 2007-08-16 | Masterfam, S.L. | Hydrolysed collagen and uses therof |
| RU2455022C1 (ru) * | 2008-05-20 | 2012-07-10 | Хикару ИСИИ | Ингибитор старения сосудов и композиция против старения |
| WO2010074552A1 (en) * | 2008-12-23 | 2010-07-01 | Universiti Putra Malaysia (Upm) | Collagen extraction from aquatic animals |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JIANG LIANG ET AL., "The Protective Effects of Long-Term Oral Administration of Marine Collagen Hydrolysate from Chum Salmon on Collagen Matrix Homeostasis in the Chronological Aged Skin of Sprague-Dawley Male Rats", JOURNAL OF FOOD SCIENCE, 2010, vol. 75, no. 8, pages H230 - H238, doi:10.1111/j.1750-3841.2010.01782.x. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2019109793A3 (ru) | 2020-12-22 |
| AU2017349311A1 (en) | 2019-06-06 |
| CA3039276A1 (fr) | 2018-05-03 |
| FR3058142A1 (fr) | 2018-05-04 |
| TWI790214B (zh) | 2023-01-21 |
| CN110072886A (zh) | 2019-07-30 |
| FR3058142B1 (fr) | 2023-11-24 |
| MA46622A (fr) | 2019-09-04 |
| AU2017349311B2 (en) | 2022-07-14 |
| US20190276515A1 (en) | 2019-09-12 |
| RU2019109793A (ru) | 2020-11-30 |
| CN110072886B (zh) | 2023-05-12 |
| JP2020511399A (ja) | 2020-04-16 |
| EP3532491A1 (fr) | 2019-09-04 |
| KR20230104296A (ko) | 2023-07-07 |
| JP7125198B2 (ja) | 2022-08-24 |
| US20230024455A1 (en) | 2023-01-26 |
| KR20190072617A (ko) | 2019-06-25 |
| US11427626B2 (en) | 2022-08-30 |
| BR112019008349A2 (pt) | 2019-07-09 |
| MY194925A (en) | 2022-12-23 |
| WO2018078276A1 (fr) | 2018-05-03 |
| TW201827452A (zh) | 2018-08-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2751886C2 (ru) | Композиция пептидов коллагена кожи рыбы и её применение в качестве лекарственного средства | |
| Ishii et al. | Anti-inflammatory effect of buckwheat sprouts in lipopolysaccharide-activated human colon cancer cells and mice | |
| Peng et al. | Purification, structure features and anti-atherosclerosis activity of a Laminaria japonica polysaccharide | |
| CN102925522A (zh) | 一种采用酶解法制取鹿茸多肽干粉的方法 | |
| Alvarez et al. | The yield of peptides and amino acids following acid hydrolysis of haemoglobin from porcine blood | |
| Sipping et al. | Antioxidant and anti-inflammatory activities of Ganoderma resinaceum (Boud) fruiting bodies extracts | |
| Areshidze et al. | Anti-inflammatory effect of NICA-EM in rodent models of acute inflammation | |
| CN107325154B (zh) | 一种具有改善记忆功效的多肽及其分离制备方法和用途 | |
| CN104945501A (zh) | 一种带鱼鱼骨铁螯合胶原肽 | |
| Hirata et al. | A model of left ventricular dysfunction complicated by CAWS arteritis in DBA/2 mice | |
| CN103276039A (zh) | 抗氧化肽及其制备方法 | |
| CN108117589B (zh) | 一种低值鱼抗氧化肽的分离纯化方法 | |
| JP4741471B2 (ja) | 改良された抽出方法 | |
| Stănilă et al. | Effects of extraction solvents on the quantification of free amino acids in lyophilised brewer’s yeast | |
| TWI726184B (zh) | 褐藻多醣及其製造方法暨應用 | |
| CN105198962A (zh) | 脱脂蟹壳抗氧化多肽 | |
| CN105175495A (zh) | 脱脂蟹壳抗氧化肽的用途 | |
| CN105200104A (zh) | 蟹壳下脚料抗氧化肽链的制备方法 | |
| Kubasov et al. | Simultaneous determination of trimethoprim, enrofloxacin, and ciprofloxacin in blood serum of poultry | |
| Bigovic et al. | Organic composition of Igalo bay peloid (Montenegro) | |
| IL42594A (en) | Cancer associated polypeptide antigen,its preparation,its detection and immunizing compositions containing it | |
| Teo | In-vitro investigation of anticoagulant activities in edible and medicinal mushrooms/Teo Chiew Phin | |
| BATSCH | Lviv Medical College of Postgraduate Education Lviv, Ukraine | |
| Phin | In-Vitro Investigation of Anticoagulant Activities in Edible and Medicinal Mushrooms | |
| CN116640821A (zh) | 一种基于端肽脱除的巴沙鱼鳔胶原寡肽及其制备方法和应用 |