RU2728861C1 - Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения - Google Patents

Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
RU2728861C1
RU2728861C1 RU2019121798A RU2019121798A RU2728861C1 RU 2728861 C1 RU2728861 C1 RU 2728861C1 RU 2019121798 A RU2019121798 A RU 2019121798A RU 2019121798 A RU2019121798 A RU 2019121798A RU 2728861 C1 RU2728861 C1 RU 2728861C1
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
leu
lys
val
thr
glu
Prior art date
Application number
RU2019121798A
Other languages
English (en)
Inventor
Брендан П. ЭККЕЛЬМАН
Джон С. ТИММЕР
Питер Л. НГУИ
Грант Б. ГЮНТЕР
Куинн Деверо
Original Assignee
Инхибркс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Инхибркс, Инк. filed Critical Инхибркс, Инк.
Application granted granted Critical
Publication of RU2728861C1 publication Critical patent/RU2728861C1/ru

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8121—Serpins
    • C07K14/8125—Alpha-1-antitrypsin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/06—Antipsoriatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/10—Antimycotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14—Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/16—Extraction; Separation; Purification by chromatography
    • C07K1/22—Affinity chromatography or related techniques based upon selective absorption processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/76—Albumins
    • C07K14/765—Serum albumin, e.g. HSA
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
    • C07K14/811—Serine protease (E.C. 3.4.21) inhibitors
    • C07K14/8121—Serpins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/12—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria
    • C07K16/1267—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria
    • C07K16/1275—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from bacteria from Gram-positive bacteria from Streptococcus (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7151—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for tumor necrosis factor [TNF], for lymphotoxin [LT]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C07K14/715—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons
    • C07K14/7155—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants for cytokines; for lymphokines; for interferons for interleukins [IL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/522—CH1 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/524—CH2 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/526—CH3 domain
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/30—Non-immunoglobulin-derived peptide or protein having an immunoglobulin constant or Fc region, or a fragment thereof, attached thereto
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/31—Fusion polypeptide fusions, other than Fc, for prolonged plasma life, e.g. albumin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)

Abstract

Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены выделенные слитые белки для ингибирования сериновых протеаз, а также их применения. Настоящее изобретение может найти дальнейшее применение в терапии различных заболеваний, в частности эмфиземы, псориаза и других. 6 н. и 12 з.п. ф-лы, 17 ил., 4 пр.

Description

В настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США №61/502055, поданной 28 июля 2011 г.; предварительной заявки на патент США №61/570394, поданной 14 декабря 2011 г.; предварительной заявки на патент США №61/577204, поданной 19 декабря 2011 г.; и предварительной заявки на патент США №61/638168, поданной 25 апреля 2012 г. Содержание каждой из этих заявок во всей своей полноте вводится в настоящее описание посредством ссылки.
Область, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к молекулам, в частности, к полипептидам, а более конкретно, к слитым белкам, которые включают серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпиновых полипептидов, и второй полипептид. Кроме того, настоящее изобретение относится к слитым белкам, которые включают серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпиновых полипептидов, второй полипептид и третий полипептид. Более конкретно, настоящее изобретение относится к слитым белкам, которые включают по меньшей мере один серпиновый полипептид и второй полипептид, или к слитым белкам, которые включают по меньшей мере серпиновый полипептид, второй полипептид и третий полипептид, где указанные второй и третий полипептиды слитых белков согласно изобретению могут представлять собой по меньшей мере один из нижеследующих полипептидов, таких как: Fc-полипептид или аминокислотная последовательность, полученная из Fc-полипептида; направленный на цитокин полипептид или последовательность, полученная из направленного на цитокин полипептида; полипептид, включающий домен WAP, или последовательность, полученная из WAP-содержащего полипептида; или альбуминовый полипептид или аминокислотная последовательность, полученная из полипептида сывороточного альбумина. Настоящее изобретение также относится к способам применения указанных молекул для ряда терапевтических или диагностических показаний, а также к способам продуцирования указанных молекул.
Предшествующий уровень техники
Нарушение активности сериновой протеазы или дисбаланс между протеазами и ингибиторами протеаз могут приводить к опосредованной протеазой деструкции ткани и к воспалительным ответам. В соответствии с этим, необходимо разработать терапевтические средства и способы лечения, которые были бы направлены на устранение аберрантной активности сериновой протеазы и/или дисбаланса между протеазами и ингибиторами протеаз. Кроме того, усиление терапевтических эффектов может быть достигнуто посредством ослабления передачи аберрантного цитокинового сигнала и активности сериновой протеазы. Кроме того, было продемонстрировано, что серпиновые белки обладают противоинфекционной активностью, тогда как направленное действие воспалительных цитокинов, как было показано, повышает риск развития инфекции. Слитые белки согласно изобретению могут подавлять воспалительную активность цитокинов и снижать риск развития инфекции.
Сущность изобретения
Описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпинового полипептида (Полипептид 1), и второй полипептид (Полипептид 2). Кроме того, описанные здесь слитые белки включают серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпинового полипептида (Полипептид 1), второй полипептид (Полипептид 2) и третий полипептид (Полипептид 3). Используемые здесь термины «слитый белок» и «слитый полипептид» являются синонимами и означают серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпинового полипептида, которые функционально присоединены по меньшей мере ко второму полипептиду или к аминокислотной последовательности, полученной по меньшей мере из второго полипептида. Отдельные элементы слитого белка могут быть связаны друг с другом различными способами, включая, например, прямое связывание, связывание посредством промежуточного соединения или спейсерного пептида, связывание посредством линкерной области, связывание посредством шарнирной области или связывание посредством линкерной и шарнирной области. В некоторых вариантах изобретения, линкерная область может находиться в последовательности шарнирной области или, альтернативно, шарнирная область может находиться в последовательности линкерной области. Предпочтительно, чтобы линкерная область имела пептидную последовательность. Так, например, линкерный пептид включает последовательность, содержащую приблизительно от 0 до 40 аминокислот, например, от 0 до 35 аминокислот, от 0 до 30 аминокислот, от 0 до 25 аминокислот или от 0 до 20 аминокислот. Предпочтительно, чтобы шарнирная область имела пептидную последовательность. Так, например, шарнирный пептид включает последовательность, содержащую приблизительно от 0 до 75 аминокислот, например, от 0 до 70 аминокислот, от 0 до 65 аминокислот или от 0 до 62 аминокислот. В тех вариантах, в которых слитый белок включает линкерную область и шарнирную область, предпочтительно, чтобы и линкерная область и шарнирная область представляли собой пептидную последовательность. В этих вариантах, шарнирный пептид и линкерный пептид, взятые вместе, включают последовательность, содержащую приблизительно от 0 до 90 аминокислот, например, от 0 до 85 аминокислот или от 0 до 82 аминокислот.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид и второй полипептид могут быть связаны посредством промежуточного связывающего белка. В некоторых вариантах изобретения, серпиновая часть и вторая полипептидная часть слитого белка могут быть связаны нековалентной связью.
В некоторых вариантах изобретения, слитые белки согласно изобретению могут быть представлены одной из нижеследующих формул, в направлении от N-конца к C-концу или от C-конца к N-концу:
Полипептид 1(a) - шарнирная областьm - Полипептид 2(b);
Полипептид 1(a) - линкерn - Полипептид 2(b);
Полипептид 1(a) - линкерn - шарнирная областьm - Полипептид 2(b);
Полипептид 1(a) - шарнирная областьm - линкерn - Полипептид 2(b);
Полипептид 1(a) - Полипептид 2(b) - Полипептид 3(c);
Полипептид 1(a) - шарнирная областьm - Полипептид 2(b) - шарнирная областьm - Полипептид 3(c);
Полипептид 1(a) - линкерn - Полипептид 2(b) - линкерn - Полипептид 3(c);
Полипептид 1(a) - шарнирная областьm - линкерn - Полипептид 2(b) - шарнирная областьm - линкерn - Полипептид 3(c) - Полипептид 1(a) - линкерn - шарнирная областьm - Полипептид 2(b) - линкерn - шарнирная областьm - Полипептид 3(c),
где n равно целому числу от 0 до 20, m равно целому числу от 1 до 62 и a, b и c равны целому числу по меньшей мере 1. Эти варианты изобретения включают вышеуказанные конструкции и любые их варианты или комбинации. Так, например, в этих формулах полипептиды могут также располагаться в следующем порядке: Полипептид 3(с) - Полипептид 1(a) - Полипептид 2(b), Полипептид 2(b) - Полипептид 3(с) - Полипептид 1(a) или в любом другом порядке или в том и другом порядке.
В некоторых вариантах изобретения, последовательность Полипептида 1 включает серпиновый полипептид. Серпины представляют собой группу белков с аналогичными структурами, и эти белки были впервые идентифицированы как серия белков, способных ингибировать протеазы. Серпиновыми белками, подходящими для их применения в описанных здесь слитых белках, являются, например, но не ограничиваются ими, альфа-1-антитрипсин (AAT), белок, родственный антитрипсину (SERPINA2), альфа 1-антихимотрипсин (SERPINA3), каллистатин (SERPINA4), ингибитор эластазы моноцитов-нейтрофилов (SERPINB1), PI-6 (SERPINB6), антитромбин (SERPINC1), ингибитор активатора плазминогена 1 (SERPINE1), альфа-2-антиплазмин (SERPINF2), ингибитор комплемента 1 (SERPING1) и нейросерпин (SERPINI1).
В некоторых вариантах изобретения, последовательность Полипептида 1 включает полипептидную последовательность альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ. В некоторых вариантах изобретения, последовательность Полипептида 1 включает часть белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, последовательность Полипептида 1 включает по меньшей мере часть петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, часть петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность:
GTEAAGAMFLEAIPMSIPPEVKFNK (SEQ ID NO: 1).
В предпочтительном варианте изобретения, последовательность полипептида AAT или аминокислотная последовательность, полученная из AAT, представляет собой последовательность человеческого полипептида AAT или последовательность, полученную из указанной последовательности.
В некоторых вариантах изобретения, слитый белок включает полноразмерную человеческую полипептидную последовательность AAT, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000001
Figure 00000002
В некоторых вариантах изобретения, слитый белок включает человеческую полипептидную последовательность AAT, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах изобретения, полипептидная последовательность ААТ представляет собой аминокислотную последовательность полипептида AAT или получен из одной или более человеческих полипептидных последовательностей AAT, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ AAB59495.1, CAJ15161.1, P01009.3, AAB59375.1, AAA51546.1, CAA25838.1, NP_001002235.1, CAA34982.1, NP_001002236.1, NP_000286.3, NP_001121179.1, NP_001121178.1, NP_001121177.1, NP_001121176.16, NP_001121175.1, NP_001121174.1, NP_001121172.1 и/или AAA51547.1.
В некоторых вариантах изобретения слитые белки имеют одну или более мутаций. Так, например, слитый белок имеет по меньшей мере одну мутацию в положении метионинового (Met) остатка в серпиновой части слитого белка. При таких Met-мутациях, остаток Met может быть заменен любой аминокислотой. Так, например, остаток Met может быть заменен аминокислотой, имеющей гидрофобную боковую цепь, такой как, например, лейцин (Leu, L). Не ограничаваясь какой-либо теорией, авторы лишь отмечают, что мутация(и) в Met предотвращает(ют) окисление и последующую инактивацию ингибирующей активности слитых белков согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения, остаток Met может быть заменен заряженным остатком, таким как, например, глутамат (Glu, E). В некоторых вариантах изобретения, мутация Met находится в положении 358 AAT-полипептида. Так, например, мутация Met представляет собой Met358Leu (M358L). В некоторых вариантах изобретения, мутация Met находится в положении 351 AAT-полипептида. Так, например, мутация Met представляет собой Met351Glu (M351E). В некоторых вариантах изобретения, мутация Met находится в положении 351 и в положении 358 AAT-полипептида, например, мутация Met представляет собой Met351Glu (M351E) и Met358Leu (M358L). Так, например, петля реакционного сайта этого варианта слитого AAT-полипептида имеет следующую последовательность: GTEAAGAEFLEAIPLSIPPEVKFNK (SEQ ID NO: 32). В некоторых вариантах изобретения, мутация Met находится в положении 351 и в положении 358 AAT-полипептида, например, мутация Met представляет собой Met351Leu (M351L) и Met358Leu (M358L). Так, например, петля реакционного сайта этого варианта слитого AAT-полипептида имеет следующую последовательность: GTEAAGALFLEAIPLSIPPEVKFNK (SEQ ID NO: 33).
В некоторых вариантах изобретения, второй полипептид (Полипептид 2) серпинового слитого белка представляет собой Fc-полипептид или полипептид, полученный из Fc-полипептида. Эти варианты имеют здесь общее название «слитые белки «серпин-Fc»». Описанные здесь слитые белки «серпин-Fc» включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина, и Fc-полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из Fc-полипептида. В некоторых вариантах изобретения слитый белок «серпин-Fc» включает один серпиновый полипептид. В других вариантах изобретения слитые белки «серпин-Fc» включают более, чем один серпиновый полипептид, и эти варианты имеют здесь общее название «слитый белок «серпин(a')-Fc»», где (a') равно целому числу по меньшей мере 2. В некоторых вариантах изобретения, каждый серпиновый полипептид в слитом белке «серпин(a')-Fc» включает одну и ту же аминокислотную последовательность. В других вариантах изобретения, каждый серпиновый полипептид в слитом белке «серпин(a')-Fc» включает серпиновые полипептиды с отличающимися аминокислотными последовательностями. Серпиновые полипептиды слитых белков «серпин(a')-Fc» могут находиться в любом положении указанного слитого белка.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка «серпин-Fc» включает по меньшей мере аминокислотную последовательность части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, часть петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка «серпин-Fc» включает по меньшей мере аминокислотную последовательность варианта части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, вариант части петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка «серпин-Fc» включает по меньшей мере полноразмерную полипептидную последовательность человеческого ААТ, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка «серпин-Fc» включает полипептидную последовательность человеческого AAT, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или 32 или 33.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка «серпин-Fc» включает полипептидную последовательность AAT, которая представляет собой одну или более человеческих последовательностей ААТ или аминокислотную последовательность, полученную из указанных последовательностей AAT, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ AAB59495.1, CAJ15161.1, P01009.3, AAB59375.1, AAA51546.1, CAA25838.1, NP_001002235.1, CAA34982.1, NP_001002236.1, NP_000286.3, NP_001121179.1, NP_001121178.1, NP_001121177.1, NP_001121176.16, NP_001121175.1, NP_001121174.1, NP_001121172.1 и/или AAA51547.1.
В некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид слитого белка представляет собой человеческий Fc-полипептид, например, последовательность Fc-полипептида человеческого IgG или аминокислотную последовательность, полученную из последовательности Fc-полипептида человеческого IgG. Так, например, в некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид представляет собой Fc-полипептид человеческого IgG1 или аминокислотную последовательность, полученную из последовательности Fc-полипептида человеческого IgG1. В некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид представляет собой Fc-полипептид человеческого IgG2 или аминокислотную последовательность, полученную из последовательности Fc-полипептида человеческого IgG2. В некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид представляет собой Fc-полипептид человеческого IgG3 или аминокислотную последовательность, полученную из последовательности Fc-полипептида человеческого IgG3. В некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид представляет собой Fc-полипептид человеческого IgG4 или аминокислотную последовательность, полученную из последовательности Fc-полипептида человеческого IgG4. В некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид представляет собой Fc-полипептид человеческого IgM или аминокислотную последовательность, полученную из последовательности Fc-полипептида человеческого IgM.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка, включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG1, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000003
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка, включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG1, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, этот Fc-полипептид был мутирован или модифицирован так, чтобы он повышал уровень связывания с FcRn. В этих вариантах изобретения, мутированный или модифицированный Fc-полипептид имеет следующие мутации: Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu (M252Y, S256T, T256E) или Met428Leu и Asn434Ser (M428L, N434S), пронумерованные по системе нумерации Кэбата. В некоторых вариантах изобретения, часть Fc-полипептида была мутирована или как-либо иначе модифицирована в целях нарушения Fc-опосредуемой димеризации. В этих вариантах изобретения, слитый белок является мономерным по своей природе.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG2, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000004
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG2, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG3, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000005
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG3, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID №: 5.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG4, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000006
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgG4, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID №: 6.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgM, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000007
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает Fc-полипептид, такой Fc-полипептид слитого белка включает последовательность Fc-полипептида человеческого IgM, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7.
В некоторых вариантах описанных здесь слитых белков, второй полипептид (Полипептид 2) серпинового слитого белка представляет собой направленный на цитокин полипептид или получен из направленного на цитокин полипептида. Эти варианты имеют здесь общее название «слитые белки серпин - направленный на цитокин полипептид». Описанные здесь «слитые белки серпин - направленный на цитокин полипептид» включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпинового полипептида, и направленный на цитокин полипептид, или их производные. В некоторых вариантах изобретения, слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид включает один серпиновый полипептид. В других вариантах изобретения, слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид включает более, чем один серпиновый полипептид, и эти варианты имеют здесь общее название «слитые белки серпин(a')-направленный на цитокин полипептид», где (a') представляет целое число по меньшей мере 2. В некоторых вариантах изобретения, каждый серпиновый полипептид в слитом белке серпин(a')-направленный на цитокин полипептид включает одну и ту же аминокислотную последовательность. В других вариантах изобретения, каждый серпиновый полипептид в слитом белке серпин(a')-направленный на цитокин полипептид включает серпиновые полипептиды с отличающимися аминокислотными последовательностями.
В некоторых вариантах изобретения направленный на цитокин полипептид слитого белка серпин - направленный на цитокин полипептид представляет собой цитокиновый рецептор или получен из цитокинового рецептора. В предпочтительном варианте изобретения, направленный на цитокин полипептид или аминокислотная последовательность, полученная из цитокинового рецептора, представляют собой человеческую последовательность цитокинового рецептора или последовательность, полученную из указанной последовательности. В других вариантах изобретения направленным на цитокин полипептидом является антитело или его фрагмент, например, антитело против цитокина или фрагмент антитела против цитокина. В предпочтительном варианте изобретения, направленный на цитокин полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из указанного антитела или его фрагмента, получают из последовательности химерного, гуманизованного или полностью человеческого антитела. Термин «фрагмент антитела» включает одну цепь, Fab-фрагмент, F(ab')2-фрагмент, scFv, scAb, dAb, однодоменное антитело с тяжелой цепью и однодоменное антитело с легкой цепью.
В других вариантах изобретения, направленный на цитокин полипептид связывается с цитокиновым рецептором и предотвращает связывание цитокина с рецептором. В других вариантах изобретения, направленным на цитокин полипептидом является антитело или его фрагмент, например, антитело против цитокинового рецептора или фрагмент антитела против цитокинового рецептора.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитых белков серпин - направленный на цитокин полипептид включает по меньшей мере аминокислотную последовательность части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, часть петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитых белков серпин - направленный на цитокин полипептид включает по меньшей мере аминокислотную последовательность варианта части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, вариант части петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - направленный на цитокин полипептид включает по меньшей мере полноразмерную человеческую полипептидную последовательность ААТ, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, или последовательность, полученную из этой последовательности. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - направленный на цитокин полипептид включает человеческую полипептидную последовательность AAT, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или 32 или 33.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - направленный на цитокин полипептид включает полипептидную последовательность AAT, которая представляет собой одну или более человеческих полипептидных последовательностей ААТ или аминокислотную последовательность, полученную из указанных последовательностей AAT, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ AAB59495.1, CAJ15161.1, P01009.3, AAB59375.1, AAA51546.1, CAA25838.1, NP_001002235.1, CAA34982.1, NP_001002236.1, NP_000286.3, NP_001121179.1, NP_001121178.1, NP_001121177.1, NP_001121176.16, NP_001121175.1, NP_001121174.1, NP_001121172.1 и/или AAA51547.1.
Слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид может включать часть слитого белка серпин - Fc. Так, например, антитело содержит Fc-полипептид. Поэтому, в некоторых вариантах изобретения, в которых направленным на цитокин полипептидом является цитокин-связывающее антитело, слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид содержит часть слитого белка серпин - Fc. Кроме того, большинство рецепторных слитых белков, обладающих терапевтической активностью, представляет собой слитые Fc-белки. Таким образом, в некоторых вариантах изобретения, в которых слитым белком серпин - направленный на цитокин полипептид является слитый белок серпин - цитокиновый рецептор, слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид может, помимо серпиновой части и части цитокинового рецептора, включать Fc-полипептид.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид включает последовательность Fc-полипептида, указанная последовательность Fc-полипептида включает аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 или 7 или последовательность, полученную из указанной последовательности. В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок серпин - направленный на цитокин полипептид включает последовательность Fc-полипептида, указанная последовательность Fc-полипептида по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO: 3, 4, 5, 6 или 7. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид и направленный на цитокин полипептид функционально присоединены друг к другу посредством линкерной области, например, посредством линкера глицин - серин или линкера на основе глицина - серина. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид и направленный на цитокин полипептид функционально присоединены друг к другу посредством шарнирной области. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид и направленный на цитокин полипептид функционально присоединены друг к другу посредством линкерной области и шарнирной области. В других вариантах изобретения, серпиновый полипептид и направленный на цитокин полипептид непосредственно связаны друг с другом.
В некоторых вариантах изобретения описанных здесь слитых белков, второй полипептид (Полипептид 2) серпинового слитого белка представляет собой полипептид, содержащий домен кислотного белка молочной сыворотки (WAP), или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP. Эти варианты имеют здесь общее название «слитые белки серпин - домен WAP». Слитые белки серпин - домен WAP включают по меньшей мере серпиновый полипептид или по меньшей мере аминокислотную последовательность, полученную из этого серпина; и полипептид, содержащий домен WAP или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP. В некоторых вариантах изобретения, слитый белок серпин - домен WAP включает один серпиновый полипептид. В других вариантах изобретения, слитый белок серпин - направленный на WAP полипептид включает более, чем один серпиновый полипептид. Эти варианты имеют здесь общее название «слитые белки серпин(a')-домен WAP», где (a') равно целому числу по меньшей мере 2. В некоторых вариантах изобретения, серпиновые полипептиды в слитом белке серпин(a')-домен WAP включают одну и ту же аминокислотную последовательность. В других вариантах изобретения, серпиновые полипептиды в слитом белке серпин(a') - направленный на цитокин полипептид включают серпиновые полипептиды с отличающимися аминокислотными последовательностями.
Эти слитые белки серпин - домен WAP включают полипептидную последовательность, содержащую домен WAP или полипептидную последовательность, которая представляет собой полипептид, содержащий домен WAP, или последовательность, полученную из указанной последовательности. Домен WAP представляет собой эволюционно консервативный мотив последовательности из 50 аминокислот, содержащей восемь цистеинов, расположенных в сердцевине с характерной структурой из 4 дисульфидов (также называемой коровым мотивом из четырех дисульфидов). Мотив последовательности домена WAP представляет собой функциональный мотив, отличающийся тем, что в ряде белков он обладает активностью, направленной на ингибирование сериновой протеазы.
Полипептидами, содержащими домен WAP и подходящими для их использования в описанных здесь слитых белках, являются, например, но не ограничиваются ими, ингибитор секреторной протеазы лейкоцитов (SLPI), элафин и эппин.
В некоторых вариантах изобретения, последовательность полипептида, содержащего домен WAP в слитом белке, включает последовательность полипептида-ингибитора секреторной протеазы лейкоцитов (SLPI) или аминокислотную последовательность, полученную из SLPI. Эти варианты называются здесь «слитыми белками серпин - последовательность, полученная из SLPI». В некоторых вариантах изобретения, полипептидная последовательность SLPI содержит часть белка SLPI, такую как, например, домен WAP2 или его субчасть. В предпочтительном варианте изобретения, последовательность полипептида SLPI или аминокислотная последовательность, полученная из SLPI, представляет собой последовательность человеческого полипептида SLPI или последовательность, полученную из этой последовательности.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает полноразмерную последовательность человеческого полипептида SLPI, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000008
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает последовательность человеческого полипептида SLPI, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает часть полноразмерной последовательности человеческого полипептида SLPI, где указанная часть имеет нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000009
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает последовательность человеческого полипептида SLPI, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает домен WAP2 полноразмерной последовательности человеческого полипептида SLPI, где указанный домен WAP2 имеет нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000010
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает последовательность человеческого полипептида SLPI, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность полипептида SLPI или аминокислотная последовательность, полученная из SLPI, представляет собой одну или более человеческих последовательностей полипептида SLPI или полученная из указанных последовательностей SLPI, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ CAA28187.1, NP_003055.1, EAW75869.1, P03973.2, AAH20708.1, CAB64235.1, CAA28188.1, AAD19661.1 и/или BAG35125.1.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - SLPI согласно изобретению, последовательность полипептида SLPI или последовательность слитого белка, полученная из SLPI, включает последовательность человеческого полипептида SLPI, которая имеет модификацию в положении метионинового (Met) остатка. При таких Met-мутациях, остаток Met может быть заменен любой аминокислотой. Так, например, остаток Met может быть заменен аминокислотой, имеющей гидрофобную боковую цепь, такой как, например, лейцин (Leu, L) или валин (Val, V). Не ограничаваясь какой-либо теорией, авторы лишь отмечают, что мутация(и) в Met предотвращает(ют) окисление и последующую инактивацию ингибирующей активности слитых белков согласно изобретению. В некоторых вариантах изобретения, мутация Met находится в положении 98 полипептида SLPI. Так, например, модифицированная последовательность полипептида SLPI слитого белка серпин - SLPI имеет мутации M98L или M98V в SEQ ID NO: 8.
В других вариантах изобретения, полипептидная последовательность слитого белка, содержащая домен WAP, включает полипептидную последовательность элафина или аминокислотную последовательность, полученную из элафина. Эти варианты называются здесь «слитыми белками серпин - элафин». В некоторых вариантах изобретения, полипептидная последовательность элафина включает часть белка элафина, такую как, например, домен WAP или его субчасть. В предпочтительном варианте изобретения, полипептидная последовательность элафина или аминокислотная последовательность, полученная из элафина, представляет собой полипептидную последовательность человеческого элафина или последовательность, полученную из указанной последовательности.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, указанный слитый белок включает полноразмерную полипептидную последовательность человеческого элафина, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000011
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, указанный слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого элафина, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, указанный слитый белок включает часть полноразмерной полипептидной последовательности человеческого элафина, где указанная часть имеет нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000012
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, указанный слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого элафина, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 12.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, указанный слитый белок включает домен WAP полноразмерной полипептидной последовательности человеческого элафина, где указанный домен WAP имеет нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000013
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, указанный слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого элафина, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - элафин, полипептидную последовательность элафина или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида элафина, получают из одной или более человеческих полипептидных последовательностей элафина, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ P19957.3, NP_002629.1, BAA02441.1, EAW75814.1, EAW75813.1, Q8IUB2.1 и/или NP_542181.1.
В других вариантах изобретения, полипептидная последовательность слитого белка, содержащая домен WAP, включает полипептидную последовательность эппина или аминокислотную последовательность, полученную из эппина. Эти варианты называются здесь «слитыми белками серпин(a') - эппин». В некоторых вариантах изобретения, полипептидная последовательность эппина слитого белка серпин - эппин включает часть белка эппина, такую как, например, домен WAP или его субчасть. В предпочтительном варианте изобретения, полипептидная последовательность эппина или аминокислотная последовательность, полученная из эппина, представляют собой человеческую полипептидную последовательность эппина или последовательность, полученную из указанной последовательности.
В некоторых вариантах слитых белков серпин - эппин, полипептидная последовательность эппина или аминокислотная последовательность, полученная из полипептида эппина, представляют собой одну или более человеческих полипептидных последовательностей эппина, или получают из указанных последовательностей, имеющихся в GenBank под регистрационными №№095925.1, NP_065131.1, AAH44829.2, AAH53369.1, AAG00548.1, AAG00547.1 и/или AAG00546.1.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - домен WAP включает по меньшей мере аминокислотную последовательность части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, часть петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - WAP включает по меньшей мере аминокислотную последовательность варианта части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, вариант части петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - домен WAP включает по меньшей мере полноразмерную человеческую полипептидную последовательность ААТ, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - домен WAP включает человеческую полипептидную последовательность AAT, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или 32 или 33.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - домен WAP включает полипептидную последовательность AAT, которая представляет собой одну или более человеческих последовательностей ААТ или аминокислотную последовательность, полученную из указанных последовательностей AAT, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ AAB59495.1, CAJ15161.1, P01009.3, AAB59375.1, AAA51546.1, CAA25838.1, NP_001002235.1, CAA34982.1, NP_001002236.1, NP_000286.3, NP_001121179.1, NP 001121178.1, ΝΡ_0011121177.1, NP_001121176.16, NP_001121175.1, NP_001121174.1, NP_001121172.1 и/или AAA51547.1.
В некоторых вариантах изобретения, слитый белок серпин - домен WAP может также включать Fc-полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из Fc-полипептида. Эти варианты называются здесь общим термином «слитые белки серпин - Fc - домен WAP». В этих вариантах, указанный термин не определяет какой-либо конкретный порядок расположения элементов. Так, например, компоненты слитого белка могут располагаться в следующем порядке: серпин - Fc - домен WAP, серпин - домен WAP - Fc или в любом другом порядке. Описанные здесь слитые белки серпин - Fc - домен WAP включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина; полипептид, содержащий домен WAP или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP, и Fc-полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из Fc-полипептида.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок серпин - домен WAP включает последовательность Fc-полипептида, указанная последовательность Fc-полипептида может иметь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 3-7. В других вариантах изобретения, в которых слитый белок серпин - домен WAP включает последовательность Fc-полипептида, указанная последовательность Fc-полипептида может иметь последовательность, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91 %, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3-7. В некоторых вариантах изобретения, слитый белок серпин - домен WAP может также включать полипептид альбумина или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида альбумина. Эти варианты называются здесь общим термином «слитые белки серпин - альбумин - домен WAP». В этих вариантах, указанный термин не определяет какой-либо конкретный порядок расположения элементов. Так, например, компоненты слитого белка могут располагаться в следующем порядке: серпин - альбумин - домен WAP, серпин - домен WAP - альбумин или в любом другом порядке. Описанные здесь слитые белки серпин - альбумин - домен WAP включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина; полипептид, содержащий домен WAP, или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP, и полипептид альбумина или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида альбумина.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок серпин - домен WAP включает полипептидную последовательность альбумина, указанная полипептидная последовательность альбумина включает описанную здесь аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 14-15. В других вариантах изобретения, в которых слитый белок серпин - домен WAP включает полипептидную последовательность альбумина, указанная полипептидная последовательность альбумина по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична любой из аминокислотных последовательностей, представленных SEQ ID NO: 14 или 15.
В некоторых вариантах изобретения, второй полипептид (Полипептид 2) слитого серпинового белка представляет собой полипептид альбумина или получен из полипептида альбумина. Эти варианты называются здесь общим термином «слитые белки серпин(a') - альбумин». Описанные здесь слитые белки серпин - альбумин включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина, и полипептид альбумина или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида альбумина. Кроме того, настоящее изобретение относится к слитым белкам серпин - альбумин-связывающий полипептид, где указанный альбумин функционально присоединен к серпину посредством молекулы, связывающейся с промежуточным соединением. В описании настоящей заявки, серпин нековалентно или ковалентно связан с альбумином человеческой сыворотки.
В тех вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает полипептидную последовательность альбумина, полипептидная последовательность альбумина слитого белка представляет собой полипептид альбумина человеческой сыворотки (HSA) или аминокислотную последовательность, полученную из HSA. В некоторых вариантах изобретения, слитый белок включает полипептидную последовательность HSA, имеющую нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000014
В тех вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает полипептидную последовательность альбумина, полипептидная последовательность альбумина слитого белка включает полипептидную последовательность альбумина человеческой сыворотки, где указанная последовательность по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 14.
В тех вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает полипептидную последовательность альбумина, полипептидная последовательность альбумина слитого белка включает домен 3 полипептидной последовательности альбумина человеческой сыворотки, где указанная последовательность имеет нижеследующую аминокислотную последовательность:
Figure 00000015
В тех вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает полипептидную последовательность альбумина, полипептидная последовательность альбумина слитого белка включает полипептидную последовательность альбумина человеческой сыворотки, где указанная последовательность по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 15.
В некоторых вариантах изобретения, в которых слитый белок согласно изобретению включает полипептидную последовательность альбумина, указанный слитый белок присоединен к альбумину человеческой сыворотки посредством промежуточного альбумин-связывающего полипептида. Альбумин-связывающим полипептидом может быть антитело или его фрагмент, либо такой полипептид получен из антитела или его фрагмента. В предпочтительном варианте изобретения, альбумин-связывающий полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из антитела или его фрагмента, получают из последовательности химерного, гуманизованного или полностью человеческого антитела. Термин «фрагмент антитела» включает одну цепь, Fab-фрагмент, F(ab')2-фрагмент, scFv, scAb, dAb, однодоменное антитело с тяжелой цепью и однодоменное антитело с легкой цепью. Кроме того, альбумин-связывающим полипептидом может быть альбумин-связывающий пептид. Другим вариантом настоящего изобретения является гибрид серпин - альбумин-связывающий полипептид, где указанным альбумин-связывающим полипептидом является домен 3 стрептококкового G-белка или последовательность, полученная из домена 3 стрептококкового G-белка.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитых белков серпин(a') - альбумин включает по меньшей мере аминокислотную последовательность части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, часть петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитого белка серпин - альбумин включает по меньшей мере аминокислотную последовательность варианта части петли реакционного сайта белка AAT. В некоторых вариантах изобретения, вариант части петли реакционного сайта белка AAT включает по меньшей мере аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32 или SEQ ID NO: 33. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитых белков серпин - альбумин включает по меньшей мере полноразмерную человеческую полипептидную последовательность ААТ, имеющую аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитых белков серпин - альбумин включает человеческую полипептидную последовательность AAT, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2 или 32 или 33.
В некоторых вариантах изобретения, серпиновый полипептид слитых белков серпин - альбумин включает полипептидную последовательность AAT, которая представляет собой одну или более человеческих последовательностей ААТ или аминокислотную последовательность, полученную из указанных последовательностей AAT, имеющихся в GenBank под регистрационными №№ AAB59495.1, CAJ15161.1, P01009.3, AAB59375.1, AAA51546.1, CAA25838.1, NP_001002235.1, CAA34982.1, NP_001002236.1, NP_000286.3, NP_001121179.1, NP_001121178.1, ΝΡ_001121177.1, NP_001121176.16, NP_001121175.1, NP_001121174.1, NP_001121172.1 и/или AAA51547.1.
В некоторых вариантах изобретения, слитые белки были модифицированы так, чтобы они повышали уровень протеолитического расщепления или как-либо иначе ингибировали протеолитическое расщепление, например, путем введения мутаций в один или более сайтов протеолитического расщепления. В некоторых вариантах изобретения, слитые белки были модифицированы так, чтобы они изменяли или как-либо иначе модулировали эффекторную функцию Fc слитого белка, но при этом, сохраняли способность связывания и ингибирующую функцию, которыми обладает немодифицированный слитый белок. Примерами эффекторных функций Fc являются, но не ограничиваются ими, связывание с Fc-рецептором, предупреждение высвобождения провоспалительных медиаторов после связывания с Fc-рецептором, фагоцитоз, модифицированная антитело-зависимая клеточно-опосредуемая цитотоксичность (ADCC), модифицированная комплемент-зависимая цитотоксичность (CDC), модифицированное гликозилирование в положении остатка Asn297 (пронумерованного в соответствии с Европейской нумерацией Кэбата, Kabat et al. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest) Fc-полипептида. В некоторых вариантах изобретения, слитые белки были мутированы или как-либо иначе модифицированы так, чтобы такие мутации или модификации влияли на связывание с Fc-рецептором. В некоторых вариантах изобретения, Fc-полипептид был модифицирован так, чтобы такая модификация повышала уровень связывания с FcRn. Примерами мутаций Fc-полипептидов, повышающих уровень связывания с FcRn, являются Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu (M252Y, S256T, T256E) (нумерация по Кэбату, Dall'Acqua et al. 2006, J. Biol Chem. Vol 281(33) 23514-23524) или Met428Leu и Asn434Ser (M428L, N434S) (Zalevsky et al. 2010 Nature Biotech, Vol. 28(2) 157-159). (Европейская нумерация Кэбата, Kabat et al. 1991 Sequences of Proteins of Immunological Interest). В некоторых вариантах изобретения, часть Fc-полипептида была мутирована или как-либо иначе модифицирована так, чтобы такая мутация или модификация приводила к нарушению Fc-опосредованной димеризации (Ying et al 2012 J. Biol Chem. 287(23): 19399-19408). В этих вариантах изобретения, слитый белок является мономерным по своей природе.
Описанные здесь слитые белки и их варианты обладают ингибирующей активностью, например, активностью, направленной на ингибирование сериновой протеазы, такой как эластаза человеческих нейтрофилов (NE), то есть, хемотрипсин, принадлежащий к сериновой протеазе, которая секретируется нейтрофилами в процессе вырабатывания воспалительного ответа. Описанные здесь слитые белки полностью или частично ослабляют или как-либо иначе модулируют экспрессию или активность сериновой протеазы после связывания с сериновой протеазой или после какого-либо другого взаимодействия с сериновой протеазой, например, с человеческой сериновой протеазой. Снижение или модуляция биологической функции сериновой протеазы являются полными или частичными после взаимодействия слитых белков с белком, полипептидом и/или пептидом человеческой сериновой протеазы. Считается, что слитые белки полностью ингибируют экспрессию или активность сериновой протеазы в том случае, когда уровень экспрессии или активности сериновой протеазы в присутствии слитого белка снижается по меньшей мере на 95%, например, на 96%, 97%, 98%, 99% или 100% по сравнению с уровнем экспрессии или активности сериновой протеазы в отсутствии взаимодействия, например, в отсутствии связывания с описанным здесь слитым белком. Считается, что слитые белки частично ингибируют экспрессию или активность сериновой протеазы в том случае, когда уровень экспрессии или активности сериновой протеазы в присутствии слитого белка снижается менее, чем на 95%, например, на 10%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 75%, 80%, 85% или 90% по сравнению с уровнем экспрессии или активности сериновой протеазы в отсутствии взаимодействия, например, в отсутствии связывания с описанным здесь слитым белком.
Описанные здесь слитые белки могут быть использованы в различных терапевтических, диагностических и профилактических целях. Так, например, слитые белки могут быть использованы для лечения ряда заболеваний и расстройств у индивидуума. В некоторых вариантах изобретения, серпиновые слитые белки, включая описанные здесь слитые белки, могут быть использованы для лечения, ослабления симптомов, уменьшения тяжести заболевания или расстройства и/или замедления их прогрессирования у индивидуума, страдающего таким заболеванием или расстройством, или у индивидуума с риском развития такого заболевания или расстройства, выбранного из заболевания, ассоциированного с дефицитом альфа-1-антитрипсина (AAT), эмфиземы, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), аллергической астмы, кистозного фиброза, рака легких, ишемического реперфузионного повреждения, включая, например, ишемическое/реперфузионное повреждение после трансплантации сердца; инфаркта миокарда, ревматоидного артрита, септического артрита, псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, болезни Крона, псориаза, диабета типа I и/или типа II, бактериальных инфекций, грибковых инфекций, вирусных инфекций, пневмонии, сепсиса, реакции трансплантат против хозяина (GVHD), заболевания, связанного с заживлением ран, системной красной волчанки и рассеянного склероза.
Фармацевтические композиции согласно изобретению содержат слитый белок согласно изобретению, включая модифицированные слитые белки и другие варианты, а также подходящий носитель. Указанные фармацевтические композиции могут быть включены в наборы, такие как, например, диагностические наборы.
Краткое описание графического материала
На фиг. 1A схематически представлены некоторые варианты слитых белков серпин - Fc согласно изобретению. Серпин может присутствовать в любом положении слитого белка. Также представлен слитый белок серпин - Fc, включающий более, чем один серпиновый полипептид. На фиг. 1B представлена фотография геля ПААГ с ДСН, на которой указаны сывороточный AAT (дорожка 1), AAT-Fc1 (дорожка 2, Fc человеческого IgG1) и AAT-EL-Fc1 (дорожка 3, мутации Met351Glu, Met358Leu в AAT, Fc человеческого IgG1). На фиг. 1C представлен график, иллюстрирующий ингибирование эластазной активности нейтрофилов слитыми белками AAT-Fc. На фиг. 1D представлена фотография геля ПААГ с ДСН, на которой указан четырехвалентный AAT-Fc-AAT, имеющий два полипептида AAT на Fc-полипептид. На фиг. 1E представлен график, иллюстрирующий ингибирование эластазной активности нейтрофилов четырехвалентным слитым белком AAT-Fc-AAT. На фиг. 1F представлен график, иллюстрирующий эффект элюирования со смолы, содержащей белок А, при низком pH, где NE-ингибирующая способность слитого белка AAT-Fc, элюирующегося при низком рН, резко снижалась. На фиг. 1G представлен график, указывающий на то, что двойной мутант AAT-EL-Fc (с мутациями Met351Glu, Met358Leu) является резистентным к Η2О2-инактивации (конц.) по сравнению с ААТ дикого типа и с AAT-EM-Fc, имеющим одну мутацию (Met351Glu). На фиг. 1H представлен график, иллюстрирующий скорость выведения сывороточного AAT (sdAAT) из сыворотки по сравнению со скоростью выведения AAT-Fc у крыс, которым была введена доза 10 мг/кг белка (3 крысы/тестируемый белок). Время полужизни AAT-Fc значительно превышало время полужизни sdAAT.
На фиг. 2A схематически представлены некоторые варианты слитых белков серпин - направленный на цитокин полипептид согласно изобретению. Серпин может быть присоединен к тяжелой цепи антитела, к легкой цепи антитела или к обеим цепям антитела. Также представлены слитые белки серпин - цитокиновый рецептор. На фиг. 2B представлена фотография геля ПААГ с ДСН, на которой указано антитело D2E7 (дорожка 1) и антитело D2E7 с AAT, присоединенным к тяжелой цепи (дорожка 2). На фиг. 2C представлен график, иллюстрирующий ингибирование элестазной активности нейтрофилов антителом D2E7, связанным с AAT. Сывороточный AAT представлен как позитивный контроль, а антитело D2E7, взятое отдельно, представлено как негативный контроль для ингибирования NE.
На фиг. 3A схематически представлены некоторые варианты слитых белков серпин-Fc-WAP. На фиг. 3B представлена фотография геля ПААГ с ДСН, на которой указаны AAT-Fc-элафин (дорожка 1) и AAT-Fc-SLPI (дорожка 2). На фиг. 3C представлен график, иллюстрирующий ингибирование элестазной активности нейтрофилов слитым белком AAT-Fc-элафин и слитым белком AAT-Fc-SLPI. Слитый белок AAT-Fc и сывороточный AAT включены для сравнения.
На фиг. 4A схематически представлены некоторые варианты слитых белков AAT-HSA. На фиг. 4B представлена фотография геля ПААГ с ДСН, на которой указан гибрид AAT-HSA. На фиг. 4C представлен график, иллюстрирующий ингибирование элестазной активности нейтрофилов гибридом AAT-HSA по сравнению с ингибированием эластазной активности сывороточным AAT.
Подробное описание изобретения
Эластаза человеческих нейтрофилов (NE) представляет собой сериновую протеазу химотрипсин, секретируемую нейтрофилами в процессе воспаления. Нарушение NE-активности приводит к прогрессируемому разрушению эластиновых тканей и к медленной деструкции альвеолярных структур легких и, тем самым, приводит к развитию эмфиземы и фиброза легких (Lungarella et al. 2008 Int. J. Biochem. Cell Biol. 40: 1287). В большинстве случаев, нарушение активности NE вызывается дисбалансом между протеазой и ее природным ингибитором, альфа-1-антитрипсином (AAT). Такой дисбаланс может быть вызван усилением инфильтрации нейтрофилов в легкие, как это наблюдается в легких курильщиков и пациентов с кистозным фиброзом (КФ) или с острым респираторным дистресс-синдромом (ОРДС). И наоборот, дефицит AAT, который обычно является результатом точковой мутации, стимулирующей агрегацию и аккумуляцию ATT в печени, приводит к тому, что легкие становятся объектом неконтролируемой NE-активности. У индивидуумов с дефицитом AAT повышается риск развития эмфиземы, ХОБЛ, болезни печени и множества других состояний.
Дефицит AAT наблюдается приблизительно у 100000 американцев (по данным Фонда Альфа-1), и многие из них умирают в возрасте от 30 до 40 лет. В настоящее время существует очень немного лекарственных средств для лечения дефицита ATT, разрешенных FDA (Prolastin®, Aralast™, Zemaira®, Glassia™). Каждое лекарственное средство представляет собой природный AAT, выделенный из собранной человеческой плазмы, однако, очевидно, что этих средств будет явно недостаточно для удовлетворения клинических потребностей в будущем. Кроме того, эти продукты имеют короткое время полужизни в сыворотке (T1/2 составляет приблизительно 5 дней), и для их еженедельного вливания требуются высокие дозы (60 мг/кг массы тела). По оценкам специалистов, современные материальные затраты на эти лекарственные средства составляют приблизительно 400 миллионов долларов. Рынок AAT-подобных лекарственных средств, вероятно, будет значительно расширяться, если учесть, что, по оценкам специалистов, почти у 95% индивидуумов с дефицитом AAT этот диагноз пока не поставлен, и если учесть, что эти лекарственные средства могут быть эффективными для лечения патологий, характеризующихся повышенной NE-активностью у индивидуумов, у которых не наблюдается дефицита AAT (например, у индивидуумов с кистозным фиброзом (КФ), острым респираторным дистресс-синдромом (ОРДС), с энфиземой, вызванной курением, и/или ХОБЛ).
Было высказано предположение, что AAT обладает широким спектром противовоспалительной активности (Tilg et al 1993, J. Exp. Med. 178: 1629-1636, Libert et al 1996 Immunol. 157: 5126-5129, Pott et al., Journal of Leukocyte Biology 85 2009, Janciauskiene et al. 2007, J. Biol Chem. 282(12): 8573-8582, Nita et al 2007, Int. J. Biochem. Cell Biol. 39: 1165-1176). Недавно было обнаружено, что AAT может быть использован для лечения различных патологий у человека, не относящихся к наиболее распространенным воспалительным заболеваниям легких. Было обнаружено, что человеческий AAT не вызывает у мышей клинических и гистопатологических признаков экспериментального аутоиммунного энцефаломиелита (ЭАЭ), что позволяет предположить, что такое лекарственное средство может быть использовано для лечения аутоиммунных заболеваний, таких как рассеянный склероз или системная красная волчанка (СКВ) (Subramanian et al. 2011 Metab. Brain. Dis. 26: 107-113). Было показано, что сывороточный AAT обладает активностью у грызунов с моделью реакции трансплантат против хозяина (GVHD) (Tawara et al. 2011, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 109: 564-569, Marcondes et al. 2011, Blood Nov 3; 118(18):5031-9), и исходя из этого было проведено клиническое испытание с участием человека, в котором использовали AAT для лечения индивидуумов, страдающих острой GVHD, не поддающейся лечению стероидами (NCT01523821). Кроме того, AAT является эффективным у животных с моделями диабета типа I и типа II, а именно, способствует снижению воспаления, защищает островковые клетки от апопотоза и обеспечивает надежную адаптацию аллотрансплантата островковых клеток (Zhang et al. 2007 Diabetes 56: 1316-1323, Lewis et al. 2005 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102: 12153-12158, Lewis et al. 2008 Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 105: 16236-16241, Kalis et al. 2010, Islets 2:185-189). В настоящее время был проведен ряд клинических испытаний по лечению диабета типа I у человека на ранней стадии с использованием сывороточных продуктов AAT (NCT01183468, NCT01319331, NCT01304537).
Современные сывороточные продукты AAT подвергают тщательной очистке и тестированию на отсутствие патогенных вирусов, однако, риск передачи инфекционных агентов все же не может быть полностью исключен. Кроме того, недостаточное количество сыворотки ограничивает возможность продуцирования сывороточного AAT. Для решения проблем, связанных с сывороточными продуктами и их получением, были предприняты попытки экспрессировать рекомбинантный AAT. Впрочем, после работы над этим в течение 20 лет, специалистам удалось создать ряд терапевтически ценных рекомбинантных AAT, которые уже должны поступить в продажу (Kamaukhova et al. 2006, Amino Acids 30:317). Подобно продуктам, выделенным из плазмы, рекомбинантные варианты AAT страдают теми недостатками, что они имеют короткое время полужизни в сыворотке, низкий выход продукта и плохое распределение в легких.
Слитые белки согласно изобретению обладают улучшенными функциональными свойствами по сравнению с немодифицированной молекулой AAT. Присоединение полипептида AAT ко второму полипептиду, который взаимодействует с Fc-рецептором новорожденных (FcRn), приводит к увеличению времени полужизни в сыворотке, что обеспечивает потребность пациентов во введении высоких доз. Такими взаимодействующими с FcRn полипептидами слитого белка являются Fc-полипептиды иммуноглобулина (Ig), полученные из человеческих IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или IgM, и производные человеческого альбумина. В некоторых вариантах изобретения, в AAT-часть слитого белка вводят мутации, которые делают эту молекулу более резистентной к инактивации окислением. Так, например мутации Met351Glu, Met358Leu (AAT-EL-Fc) продемонстрировали резистентность к инактивации под действием Η2О2-окисления (фиг. 1G). Хотя AAT представляет собой природный противовоспалительный белок, однако, в некоторых своих вариантах настоящее изобретение относится к повышению способности ослаблять воспаление посредством присоединения полипептида AAT к направленному на цитокин полипептиду. Присоединение двух противовоспалительных функциональных групп, полученных из AAT и второго полипептида, дает возможность получить более эффективный терапевтический белок, чем любой полипептид, взятый отдельно. Кроме того, присоединение AAT, обладающего противоинфекционной активностью, будет снижать риск возникновения инфекции после введения большинства цитокин-содержащих биологических средств. В некоторых своих вариантах, настоящее изобретение относится к более активным противовоспалительным и противоинфекционным белкам, полученным путем присоединения полипептида AAT к полипептиду, содержащему домен WAP. Как и ожидалось, слитые белки согласно изобретению обладают высокой терапевтической ценностью и являются гораздо более эффективными, чем современные сывороточные продукты AAT.
Для увеличения времени полужизни рекомбинантного ААТ была применена техника рекомбинантных ДНК в целях создания гибрида гена AAT с Fc-доменом человеческого IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, или HSA, так, чтобы предполагаемый белковый продукт представлял собой AAT, за которым расположен Fc-домен ((AAT-Fc (IgG1), AAT-Fc (IgG2), AAT-Fc (IgG3), AAT-Fc (IgG4), AAT-Fc (IgM)), или AAT, за которым расположен HSA. Хотя известно, что присоединение Fc-доменов или HSA к некоторым белкам, белковым доменам или пептидам может приводить к увеличению их времени полужизни (см., например, Jazayeri et al., BioDrugs 22, 11-26, Huang et al. (2009) Curr. Opin. Biotechnol. 20, 692-699, Kontermann et al. (2009) BioDrugs 23, 93-109, Schmidt et al. (2009) Curr. Opin. Drug Discov. Devel. 12, 284-295), однако, неизвестно, может ли присоединение Fc-домена или HSA к AAT способствовать «правильной» укладке и сохранению активности, направленной на ингибирование NE, или увеличению времени полужизни рекомбинантного AAT. Было показано, что слитые белки согласно изобретению являются сильными ингибиторами NE и имеют увеличенное время полужизни в сыворотке, а в некоторых вариантах изобретения, они обладают резистентностью к окислению. В других вариантах изобретения описанные здесь слитые белки приобретают уникальные свойства при введении других функциональных полипептидов, включая направленные на цитокин полипептиды и полипептиды, содержащие домен WAP.
Описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина, и второй полипептид. В некоторых своих вариантах настоящее изобретение относится, например, к серпиновому полипептиду, присоединенному к человеческим IgG1-Fc, IgG2-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc, IgM-Fc или к производным HSA. Было высказано предположение, что описанный здесь серпиновый гибрид может быть использован для лечения различных заболеваний, включая, например, но не ограничиваясь ими, заболевание, ассоциированное с дефицитом альфа-1-антитрипсина (AAT), эмфизему, хроническую обструктивную болезнь легких (ХОБЛ), острый респираторный дистресс-синдром (ОРДС), аллергическую астму, кистозный фиброз, рак легких, ишемическое реперфузионное повреждение, включая, например, ишемическое/реперфузионное повреждение после трансплантации сердца; инфаркт миокарда, ревматоидный артрит, септический артрит, псориатический артрит, анкилозирующий спондилит, болезнь Крона, псориаз, диабет типа I и/или типа II, бактериальные инфекции, грибковые инфекции, вирусные инфекции, пневмонию, сепсис, реакцию «трансплантат против хозяина» (GVHD), заболевание, связанное с заживлением ран, системную красную волчанку и рассеянный склероз.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ, и второй полипептид. Так, например, настоящее изобретение относится к альфа-1-антитрипсину (AAT), присоединенному к человеческим IgG1-Fc, IgG2-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc, IgM-Fc или к производным HSA.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпинового полипептида, и направленный на цитокин полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из направленного на цитокин полипептида. Так, например, настоящее изобретение относится к серпиновому полипептиду или к последовательности, полученной из серпинового полипептида, присоединенного к человеческому цитокиновому рецептору или к его производному. В другом своем варианте, настоящее изобретение относится к серпиновому полипептиду или к последовательности, полученной из серпинового полипептида, присоединенного к цитокин-связывающему антителу, например, к антителу против цитокинов, или к последовательности, полученной из цитокин-специфического антитела, например, антитела против цитокинов, или к последовательности, полученной из фрагмента цитокин-специфического антитела, например, фрагмента антитела против цитокинов. Так, например, настоящее изобретение относится к серпиновому полипептиду или к последовательности, полученной из серпинового полипептида, присоединенного к направленному на цитокин полипептиду, где указанный направленный на цитокин полипептид связывается с любым из нижеследующих человеческих цитокинов, таких как TNFα, IgE, IL-12, IL-23, IL-6, IL-1α, IL-1β, IL-17, IL-13, IL-4, IL-10, IL-2, IL-18, IL-27 или IL-32.
Так, например, в некоторых вариантах изобретения, направленный на цитокин полипептид связывается с TNFα и представляет собой любой из нижеследующих направленных на TNFα полипептидов или последовательностей, полученных из нижеследующих направленных на TNFα полипептидов: Remicade®, Humira®, Simponi®, Cimiza®, Enbrel® или ATN-103 и ATN-192.
Так, например, в некоторых вариантах изобретения, направленный на цитокин полипептид связывается с IgE и представляет собой любой из нижеследующих направленных на IgE полипептидов или последовательностей, полученных из нижеследующих направленных на IgE полипептидов: Xolair или FcεRI.
Так, например, в некоторых вариантах изобретения, направленный на цитокин полипептид связывается с общей субъединицей p40 IL-12 и IL-23 и представляет собой полипептид Stelara® или последовательности, полученные из полипептида Stelara®.
Так, например, Stelara®, то есть, направленный на цитокин полипептид связывается с IL-13 и включает полипептид CDP7766 или последовательности, полученные из полипептида CDP7766.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ, и направленный на цитокин полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из направленного на цитокин полипептида. Так, например, настоящее изобретение относится к ингибитору альфа-1-антитрипсина (AAT), присоединенному к направленному на цитокин полипептиду, где указанный направленный на цитокин полипептид связывается с любым из нижеследующих человеческих цитокинов: TNFα, IgE, IL-6, IL-1α, IL-1β, IL-12, IL-17, IL-13, IL-23, IL-4, IL-10, IL-2, IL-18, IL-27 или IL-32.
В некоторых вариантах изобретения, направленный на цитокин полипептид связывается с цитокиновым рецептором и предупреждает связывание цитокина. Так, например, настоящее изобретение включает серпин, присоединенный к антителу против цитокинового рецептора. Так, например, настоящее изобретение относится к ингибитору альфа-1-антитрипсина (AAT), присоединенному к направленному на цитокин полипептиду, где указанный направленный на цитокин полипептид связывается с рецептором любого из нижеследующих человеческих цитокинов, таких как: TNFα, IgE, IL-6, IL-1α, IL-1β, IL-12, IL-17, IL-13, IL-23, субъединица p40 IL-12 и IL-23, IL-4, IL-10, IL-2, IL-18, IL-27 или IL-32.
Так, например, в некоторых вариантах изобретения, направленный на цитокин полипептид связывается с рецептором IL-6 и включает полипептид Actemra® (описанный в публикации патента EP0628639) или полипептид ALX-0061 (описанный в WO 2010/115998), или последовательности, полученные из полипептида Actemra® или полипептида ALX-0061.
Так, например, Actemra®, то есть, направленный на цитокин полипептид связывается с рецептором IL-6 и включает полипептид тоцилизумаб или последовательности, полученные из полипептида тоцилизумаба.
Конъюгирование воспалительных цитокинов и иммуностимулирующих агентов, опосредуемое терапевтическими белками, продемонстрировало клиническую эффективность этих белков в лечении множества воспалительных состояний. Наиболее распространенными белками, используемыми в качестве направленных на цитокин агентов, являются растворимые цитокиновые рецепторы и моноклональные антитела и их фрагменты. Существенным недостатком технологии конъюгирования с цитокинами является повышенный риск инфицирования пациентов, как было продемонстрировано в случае использования TNFα-содержащих биологических средств, таких как Remicade®, Humira®, Simponi®, Cimiza® и Enbrel®, и p40 IL-12/23-связывающего антитела, Stelara®. Такой недостаток, очевидно, является общей проблемой, возникающей при конъюгировании лекарственных средств с воспалительными цитокинами, которое приводит к подавлению иммунной системы пациентов. AAT и другие серпиновые белки представляют определенный интерес, поскольку они обладают проивоинфекционной и противовоспалительной активностью. Таким образом, слитые белки серпин - направленный на цитокин полипептид согласно изобретению могут устранять нарушение цитокиновой активности и снижать риск возникновения инфекции.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина; полипептид, содержащий домен WAP или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP; и Fc-полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из Fc-полипептида. Так, например, настоящее изобретение относится к серпиновому полипептиду, к полипептиду, содержащему домен WAP и к производным человеческих IgG1-Fc, IgG2-Fc, IgG3-Fc, IgG4-Fc или IgM-Fc, функционально присоединенных друг к другу в любой функциональной комбинации. В некоторых вариантах изобретения, белок, содержащий домен WAP, представляет собой человеческий SLPI или получен из человеческого SLPI. В других вариантах изобретения, белок, содержащий домен WAP, представляет собой человеческий элафин или получен из человеческого элафина. В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ, и полипептид SLPI или аминокислотную последовательность, полученную из SLPI. В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид AAT или аминокислотную последовательность, полученную из AAT, и полипептид элафина или аминокислотную последовательность, полученную из элафина.
SPLI и элафин представляют собой белки, содержащие домен WAP, которые обладают активностью, направленной на ингибирование сериновой протеазы. Оба этих белка обладают противовоспалительной функцией. Кроме того, эти белки обладают противоинфекционной активностью широкого ряда, направленной против множества штаммов бактерий, вирусов и грибов.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина, и полипептид альбумина человеческой сыворотки (HSA) или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида HSA. Другие варианты изобретения включают слитые белки серпин - альбумин-связывающий полипептид, где указанный альбумин-связывающий полипептид ответственен за ассоциацию серпина и HSA. Таким образом, настоящее изобретение относится к ковалентному и нековалентному связыванию серпинового полипептида и полипептида HSA, или последовательностей, полученных из серпинового полипептида или полипептида HSA. Так, например, настоящее изобретение относится к серпиновому полипептиду, связанному с человеческим HSA или с производными HSA, или к пептидам или полипептидам, связывающимся с HSA.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ, и полипептид HSA или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида HSA. Так, например, настоящее изобретение относится к альфа-1-антитрипсину (AAT), связанному с HSA или с фрагментом, полученным из HSA, или с альбумин-связывающим полипептидом.
В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, полученную из серпина; полипептид HSA или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида HSA и полипептид, содержащий домен WAP, или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида, содержащего домен WAP. В некоторых вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ, полипептид HSA или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида HSA, и полипептид SLPI или аминокислотную последовательность, полученную из SLPI. В других вариантах изобретения, описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, полученную из ААТ, полипептид HSA или аминокислотную последовательность, полученную из полипептида HSA, и полипептид элафина или аминокислотную последовательность, полученную из элафина.
Слитые белки согласно изобретению могут быть легко продуцированы в клеточных экспрессионных системах млекопитающих. Так, например, для экспрессии описанных здесь серпиновых слитых белков могут быть с успехом использованы клетки яичника китайского хомячка (CHO), клетки почек человеческого эмбриона (HEK) 293, клетки COS, PER.C6®, клетки NS0, SP2/0, YB2/0. Важно отметить, что клеточные экспрессионные системы млекопитающих продуцируют белки, которые, в основном, являются более оптимальными для их применения в терапии. В отличие от экспрессионных систем бактерий, насекомых или дрожжей, клеточные экспрессионные системы млекопитающих продуцируют белки, которые имеют характер гликозилирования, аналогичный характеру гликозилирования природных человеческих белков или такой же характер гликозилирования. Характер гликозилирования белка может существенно влиять на стабильность в сыворотке, фармакокинетику, биологическое распределение, укладку белка и функциональные свойства. Поэтому, важным преимуществом в этих экспрессионных системах млекопитающих, в отличие от других систем, является их способность продуцировать терапевтические белки. Кроме того, большинство клеточных экспрессионных систем млекопитающих (например, клеток CHO, NS0, PER.C6®) могут быть легко получены промышленным способом в целях продуцирования терапевтических белков, удовлетворяющих клиническим требованиям. Описанные здесь слитые белки обладают улучшенными функциональными свойствами по сравнению с природной формой AAT, и могут быть продуцированы в экспрессионных системах млекопитающих в клинических и коммерческих целях. Некоторые варианты изобретения включают систему очистки, позволяющую выделять серпиновые слитые белки, сохраняющие свою способность ингибировать NE. Важно отметить, что способ очистки согласно изобретению может быть с успехом включен в современные производственные процессы, проводимые на основе коммерчески доступных клеток млекопитающих.
Если это не оговорено особо, научные и технические термины, используемые в настоящем изобретении, имеют общепринятые значения, понятные среднему специалисту в данной области. Кроме того, если это не следует из контекста описания изобретения, то при употреблении терминов в единственном числе подразумевается, что эти термины также относятся к указанным объектам во множественном числе, и наоборот. Вообще говоря, номенклатура, используемая здесь в описании методов культивирования клеток и тканей, методов молекулярной биологии и химии белков и олиго- или полинуклеотидов, а также методов гибридизации, хорошо известна и широко применяется специалистами. В технологии рекомбинантных ДНК, в синтезе олигонуклеотидов, в культивировании тканей и в трансформации (например, электропорации и липофекции) применяются стандартные методы. Ферментативные реакции и методы очистки осуществляют в соответствии с рекомендациями производителей или известными методами, а также методами, описанными в настоящей заявке. Вышеупомянутые методы и процедуры обычно осуществляют стандартными способами, хорошо известными специалистам и описанными в различных общих и специальных руководствах, цитируемых и обсуждаемых в описании настоящей заявки. См., например, Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)). Номенклатура, используемая здесь в описании лабораторных методов и методов, применяемых в аналитической химии, химии органического синтеза и в медицинской и фармацевтической химии, хорошо известна и широко применяется специалистами. Химический синтез, химические анализы, приготовление фармацевтических препаратов, составление рецептур, а также введение препаратов пациентам и лечение пациентов осуществляют стандартными методами. Термин «пациент» включает человека и животных.
Следует отметить, что введение терапевтических молекул в соответствии с настоящим изобретением может быть осуществлено в комбинации с подходящими носителями, буферами, наполнителями и другими агентами, которые вводят в препараты в целях улучшения транспорта, доставки, переносимости препаратов и т.п. Многие способы приготовления фармацевтических препаратов можно найти в соответствующих руководствах, известных всем химикам-фармацевтам, таких как руководство Remington's Pharmaceutical Sciences (15th ed, Mack Publishing Company, Easton, PA (1975)), в частности, см. главу 87, Blaug, Seymour. Такими препаратами являются, например, порошки, пасты, мази, гели, воски, масла, липиды, везикулы, содержащие липиды (катионные или анионные) (такие как Липофектин™), ДНК-конъюгаты, безводные абсорбирующие пасты, эмульсии типа «масло в воде» и «вода в масле», эмульсии, содержащие карбовакс (полиэтиленгликоли с различными молекулярными массами), полутвердые гели и полутвердые смеси, содержащие карбовакс. Любые из вышеперечисленных смесей могут быть использованы для лечения и терапии в соответствии с настоящим изобретением, при условии, что активный ингредиент, присутствующий в таком препарате, не был инактивирован, и что такой препарат является физиологически совместимым и хорошо переносится при соответствующем способе введения. См., также Baldrick P. «Pharmaceutical excipient development: the need for preclinical guidance» Regul. Toxicol Pharmacol. 32(2):210-8 (2000), Wang W. «Lyophilization and development of solid protein pharmaceuticals». Int. J. Pharm. 203(1-2): 1-60 (2000), Charman WN «Lipids, lipophilic drugs, and oral drug delivery-some emerging concepts» J. Pharm. Sci. 89(8):967-78 (2000), Powell et al. «Compendium of excipients for parenteral formulations» PDA J. Pharm. Sci. Technol. 52:238-311 (1998) и цитируемые там работы, включенные для получения дополнительной информации, относящейся к препаратам, наполнителям и носителям, хорошо известным химикам-фармацевтам.
Терапевтические препараты согласно изобретению, включающие слитый белок согласно изобретению, могут быть использованы для устранения или ослабления симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с нарушением активности сериновой протеазы у индивидуума. Настоящее изобретение также относится к способам устранения или ослабления симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с нарушением активности сериновой протеазы у индивидуума. Схема терапии включает выявление индивидуума, например, человека, страдающего заболеванием или расстройством (или подверженного риску развития заболевания или расстройства), ассоциированным с нарушением активности сериновой протеазы, где такое выявление осуществляют стандартными методами, включая проведение любых различных клинических и/или лабораторных процедур. Термин «пациент» включает человека и животных. Термин «индивидуум» включает человека и других млекопитающих.
Эффективность лечения определяют любым известным методом диагностики или терапии конкретного заболевания или расстройства, ассоциированного с нарушением активности сериновой протеазы. Ослабление одного или более симптомов заболевания или расстройства, ассоциированного с нарушением активности сериновой протеазы, означает, что указанный слитый белок дает нужный клинический эффект.
Методами скрининга слитых белков, обладающих нужной специфичностью, являются, но не ограничиваются ими, твердофазный иммуноферментный анализ (ELISA), ферментативные анализы, проточная цитометрия и другие иммунологически опосредуемые методы, известные специалистам.
Описанные здесь слитые белки могут быть использованы в известных методах, относящихся к определению локализации и/или количества мишени, такой как сериновая протеаза, например, в целях измерения уровней этих мишеней в соответствующих физиологических образцах; в целях диагностики, визуализации белка и т.п. Используемые здесь термины «физиологический образец» и «биологический образец» являются синонимами и включают ткани, клетки и биологические жидкости, выделенные у индивидуума, а также ткани, клетки и жидкости, присутствующие у индивидуума. Поэтому, в определении терминов «физиологический образец» и «биологический образец» входят кровь и фракция или компонент крови, включая сыворотку крови, плазму крови или лимфу.
В данном варианте изобретения, слитые белки, специфичные к данной мишени, или производные, фрагменты, аналоги или гомологи таких белков, содержащие мишень-связывающий домен, используются в качестве фармакологически активных соединений (далее называемых «терапевтическими средствами»).
Слитый белок согласно изобретению может быть использован для выделения конкретной мишени стандартными методами, такими как иммуноафинный метод, хроматография или иммунопреципитация. Детектирование может быть облегчено путем связывания (то есть, физического присоединения) слитого белка с детектируемым веществом. Примерами детектируемых веществ являются различные ферменты, простетические группы, флуоресцентные вещества, люминесцентные вещества, биолюминесцентные вещества и радиоактивные вещества. Примерами подходящих ферментов являются пероксидаза хрена, щелочная фосфатаза, β-галактозидаза или ацетилхолинэстераза; примерами подходящих комплексов простетических групп являются стрепатавидин/биотин и авидин/биотин; примерами подходящих флуоресцентных веществ являются умбеллиферон, флуоресцеин, флуоресцеинизотиоцианат, родамин, дихлортриазиниламин-флуоресцеин, данзилхлорид или фикоэритрин; примером люминесцентного вещества является люминол; примерами биолюминесцентных веществ являются люцифераза, люциферин и экворин, а примерами подходящих радиоактивных веществ являются 125I, 131I, 35S или 3Н.
Терапевтически эффективное количество слитого белка согласно изобретению обычно означает количество, необходимое для достижения терапевтического эффекта. Как указывалось выше, такой целью может быть связывание слитого белка с его мишенью, которое, в некоторых случаях, влияет на функционирование этой мишени. Количество, необходимое для введения, также зависит от аффинности специфического связывания слитого белка с его мишенью, а также от скорости, с которой вводимый слитый белок свободно переходит из одного участка в другой участок организма индивидуума, которому он был введен. Общие интервалы терапевтически эффективных доз слитого белка или его фрагмента могут составлять, но не ограничиваются ими, например, приблизительно от 0,1 мг/кг массы тела до 250 мг/кг массы тела. Общая частота введения доз может составлять, например, в пределах от двух раз в день до одного раза в месяц.
При использовании фрагментов слитого белка предпочтительным является наименьший ингибирующий фрагмент, который специфически связывается с мишенью. Так, например, пептидные молекулы могут быть сконструированы так, чтобы они сохраняли способность связываться с мишенью. Такие пептиды могут быть получены методом химического синтеза и/или методами рекомбинантных ДНК (см., например, Marasco et al, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90: 7889-7893 (1993)). Препарат может также содержать более, чем одно активное соединение, необходимое для лечения конкретного заболевания, предпочтительно, соединения со взаимодополняющими активностями, которые не оказывают негативного воздействия друг на друга. Альтернативно или дополнительно, композиция может содержать агент, который усиливает ее функцию, такой как, например, цитотоксический агент, цитокин, химиотерапевтический агент, рост-ингибирующий агент, противовоспалительный агент или противоинфекционный агент. Такие молекулы могут присутствовать в комбинации в количествах, которые являются эффективными для достижения нужной цели.
Активные ингредиенты могут быть также заключены в микрокапсулы, полученные, например, методами коацервации или межфазной полимеризации, например, в гидроксиметилцеллюлозные или желатиновые микрокапсулы и в полиметилметакрилатные микрокапсулы, соответственно, в коллоидные системы доставки лекарственных средств (например, в липосомы, альбуминовые микросферы, микроэмульсии, наночастицы и нанокапсулы) или в макроэмульсии.
Препараты, используемые для введения in vivo, должны быть стерильными. Это может быть легко достигнуто путем фильтрации через стерильные фильтрующие мембраны.
Могут быть получены препараты пролонгированного высвобождения. Подходящими примерами препаратов прологнированного высвобождения являются полупроницаемые матрицы, состоящие из твердых гидрофобных полимеров, содержащих слитый белок, где указанные матрицы получают в виде сформованных изделий, например, пленок или микрокапсул. Примерами матриц прологнированного высвобождения являются сложные полиэфиры, гидрогели (например, поли(2-гидроксиэтил-метакрилат) или поливиниловый спирт, полилактиды (патент США №3773919), сополимеры L-глутаминовой кислоты и γ-этил-L-глутамат, неразлагаемый этиленвинилацетат, разлагаемые сополимеры молочной кислоты и гликолевой кислоты, такие как LUPRON DEPOT™ (инъецируемые микросферы, состоящие из сополимера молочной кислоты и гликолевой кислоты, и ацетата лейпролида) и поли-D-(-)-3-гидроксимасляная кислота. Полимеры, такие как этиленвинилацетат и сополимер молочной кислоты и гликолевой кислоты высвобождают молекулы более, чем за 100 дней, а некоторые гидрогели высвобождают белки за более короткие промежутки времени.
Фармацевтические композиции
Слитые белки согласно изобретению (также называемые здесь «активными соединениями») и их производные, фрагменты, аналоги и гомологи могут быть включены в фармацевтические композиции, подходящие для введения. Такие композиции обычно содержат слитый белок и фармацевтически приемлемый носитель. Используемый здесь термин «фармацевтически приемлемый носитель» включает любые и все растворители, дисперсионные среды, материалы для покрытий, антибактериальные и противогрибковые агенты; агенты, придающие изотоничность, агенты, замедляющие абсорбцию и т.п., совместимые со способом введения фармацевтической композиции. Подходящие носители описаны в самом последнем издании классического руководства Remington's Pharmaceutical Sciences, в соответствующем разделе, который вводится в настоящее описание посредством ссылки. Предпочтительными примерами таких носителей или разбавителей являются, но не ограничиваются ими, вода, физиологический раствор, растворы Рингера, раствор декстрозы и 5% альбумин человеческой сыворотки. При этом, могут быть также использованы липосомы и безводные носители, такие как жирные масла. Применение таких сред и агентов для введения фармацевтически активных веществ хорошо известно специалистам. В описанных здесь композициях могут быть использованы любые стандартные среды или агенты, при условии, что они будут совместимыми с активным соединением. В эти композиции могут быть также включены дополнительные активные соединения.
Фармацевтическую композицию согласно изобретению приготавливают так, чтобы она была совместима с нужным способом введения. Примерами таких способов введения являются парентеральное введение, например, внутривенное введение, интрадермальное введение, подкожное введение, пероральное введение (например, введение путем ингаляции), чрезкожное введение (то есть, местное введение), введение через слизистую и ректальное введение. Растворы или суспензии для парентерального, интрадермального или подкожного введения могут включать следующие компоненты: стерильный разбавитель, такой как вода для инъекций, физиологический раствор, жирные масла, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие синтетические растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабены; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатообразующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA); буферы, такие как ацетаты, цитраты или фосфаты; и агенты, придающие тоничность, такие как хлорид натрия или декстроза. pH может быть скорректирован путем добавления кислот или оснований, таких как соляная кислота или гидроксид натрия. Препарат для парентерального введения может быть заключен в ампулы, одноразовые шприцы или сосуды для введения дробных доз, изготовленные из стекла или пластика.
Фармацевтическими композициями, подходящими для инъекций, являются стерильные водные растворы (то есть, водорастворимые композиции) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления препаратов в виде стерильных инъецируемых растворов или дисперсий. Для внутривенного введения, подходящими носителями являются физиологический раствор, бактериостатическая вода, Cremophor EL™ (BASF, Parsippany, N.J.) или забуференный фосфатом физиологический раствор (PBS). Во всех случаях, такая композиция должна быть стерильной и должна обладать текучестью, достаточной для легкого наполнения шприца. Эта композиция должна быть стабильной в условиях ее изготовления и хранения, а также должна быть защищена от контаминирующего действия микроорганизмов, таких как бактерии и грибы. Таким носителем может быть растворитель или дисперсионная среда, содержащая, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль, жидкий полиэтиленгликоль и т.п.) и их подходящие смеси. Нужная текучесть может поддерживаться, например, с использованием вещества для покрытия, такого как лецитин, благодаря сохранению нужного размера частиц, в случае дисперсии, и с использованием поверхностно-активных веществ. Предупреждение воздействия микроорганизмов может быть достигнуто с использованием различных антибактериальных и противогрибковых агентов, таких как, например, парабены, хлорбутанол, фенол, аскорбиновая кислота, тимерозал и т.п. Во многих случаях может оказаться предпочтительным включение в композицию агентов, придающих изотоничность, таких как, например, сахара, многоатомные спирты, такие как маннит и сорбит, и хлорид натрия. Пролонгированное всасывание инъецируемых композиций может быть достигнуто путем включения в композицию агента, замедляющего всасывание, например, моностеарата алюминия и желатина.
Стерильные растворы для инъекций могут быть приготовлены путем включения активного соединения в необходимом количестве в соответствующем растворителе или в комбинации, если это необходимо, с ингредиентами, перечисленными выше, и последующей стерилизации на фильтре. Дисперсии обычно приготавливают путем включения активного соединения в стерильный наполнитель, который содержит основную дисперсионную среду и необходимые другие ингредиенты, перечисленные выше. Методы получения стерильных порошков в целях приготовления стерильных растворов для инъекций включают вакуумную сушку и лиофилизацию с получением порошка, содержащего активный ингредиент и любой дополнительный нужный ингредиент, полученный из предварительно отфильтрованного стерильного раствора.
Композиции для перорального введения обычно включают инертный разбавитель или пищевой носитель. Эти композиции могут быть заключены в желатиновые капсулы или спрессованы в таблетки. Активное соединение, предназначенное для терапевтического перорального введения, может быть введено вместе с наполнителем и приготовлено в форме таблеток, пастилок или капсул. Композиции для перорального введения могут быть также приготовлены с использованием жидкого носителя, применяемого как жидкость для полоскания рта, где указанное соединение в жидком носителе приготавливают в виде препарата для перорального введения, в виде препарата для полоскания, в виде отхаркивающего средства или в виде препарата для проглатывания. Фармацевтически совместимые связывающие агенты и/или адъюванты могут быть включены как часть композиции. Таблетки, драже, капсулы, пастилки и т.п. могут содержать любой из нижеследующих ингредиентов или любые соединения аналогичной природы, а именно: связывающее вещество, такое как микрокристаллическая целлюлоза; трагакантовая камедь или желатин; наполнитель, такой как крахмал или лактоза; дезинтегрирующий агент, такой как альгиновая кислота, примогель или кукурузный крахмал; замасливатель, такой как стеарат магния или Sterotes; вещество, повышающее скольжение, такое как коллоидная двуокись кремния; подсластитель, такой как сахароза или сахарин; или ароматизатор, такой как перечная мята, метилсалицилат или апельсиновая отдушка.
Соединения, вводимые путем ингаляции, доставляют в форме аэрозольного спрея из контейнера под давлением или дозирующего устройства, содержащего подходящий пропеллент, например, газ, такой как диоксид углерода, или из аэрозольного распылителя.
Системное введение может также представлять собой введение через слизистую или чрезкожное введение. В препаратах для введения через слизистую или чрезкожного введения используются подходящие пенетранты, проникающие через барьер. Пенетранты, применяемые для введения через слизистую, по существу известны специалистам, и ими являются, например, детергенты, соли желчных кислот и производные фузидиновой кислоты. Введение через слизистую может быть осуществлено с помощью интраназальных спреев или суппозиториев. Для трансдермального введения, активные соединения приготавливают в виде твердых мазей, жидких мазей, гелей или кремов, по существу, известных специалистам.
Соединения могут быть также получены в форме суппозиториев (например, содержащих стандартные основы для суппозиториев, такие как масло какао и другие глицериды) или удерживающих клизм для ректального введения.
В одном из вариантов изобретения, активные соединения приготавливают вместе с носителями, которые защищают соединение от его быстрого выведения из организма, в результате чего получают препараты пролонгированного высвобождения, включая имплантаты и микроинкапсулированные системы доставки. При этом, могут быть использованы биологически разлагаемые и биологически совместимые полимеры, такие как этиленвинилацетат, полиангидриды, полигликолевая кислота, коллаген, полиортоэфиры и полимолочная кислота. Методы получения таких препаратов известны специалистам. Материалы могут быть также получены у таких компаний, как Alza Corporation и Nova Pharmaceuticals, Inc. Липосомные суспензии могут быть также использованы в виде фармацевтически приемлемых носителей. Эти суспензии могут быть получены методами, известными специалистам, например, методами, описанными в патенте США №4522811.
Для простоты введения и равномерного распределения доз, особенно предпочтительно, чтобы композиции для перорального или парентерального введения были приготовлены в виде унифицированной лекарственной формы. Используемый здесь термин «унифицированная лекарственная форма» означает физически дискретные формы, подходящие для их введения индивидууму в виде унифицированных доз, где каждую унифицированную дозу, содержащую предварительно определенное количество активного соединения в комбинации с необходимым фармацевтическим носителем вычисляют так, чтобы такая доза давала нужный терапевтический эффект. Спецификация для унифицированных лекарственных форм согласно изобретению может быть составлена исходя из нижеследующих факторов, и непосредственно зависит от этих факторов, а именно: уникальных свойств активного соединения и конкретного терапевтического эффекта, а также ограничений, известных специалистам в области составления рецептуры лекарственных средств, таких как активное соединение для лечения индивидуума.
Фармацевтические композиции могут быть включены в контейнер, упаковку или дозирующее устройство, содержащие инструкции по введению таких фармацевтических композиций.
Настоящее изобретение подробно описано в нижеследующих примерах, которые не должны рассматриваться как ограничение объема изобретения, сформулированного в формуле изобретения.
Примеры
Пример 1: Слитые белки AAT-Fc и их варианты
Неограничивающими репрезентативными примерами слитых белков AAT-Fc согласно изобретению являются нижеследующие последовательности. Хотя эти примеры включают конкретную шарнирную последовательность и/или линкерную последовательность, однако, слитые белки согласно изобретению могут быть получены с использованием любой шарнирной последовательности и/или линкерной последовательности, которые имеют подходящую длину и/или гибкость. Альтернативно, слитые белки могут быть получены без использования шарнирной последовательности и/или линкерной последовательности. Так, например, полипептидные компоненты могут быть непосредственно присоединены друг к другу.
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-hFc1 (Fc человеческого IgG1). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), а полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 3).
AAT-hFc1 (Fc человеческого IgG1)
Figure 00000016
Репрезентативным примером слитого белка AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-hFc2 (Fc человеческого IgG2). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), а полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 4).
AAT-hFc2 (Fc человеческого IgG2)
Figure 00000017
Figure 00000018
Figure 00000018
Figure 00000019
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-MM-EL-hFc1 (Fc человеческого IgG1, Met351Glu/Met358Leu). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 34), полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 3), мутация Met351Glu показана в рамке, а мутация Met358Leu показана серым.
AAT-MM-EL-hFcl (Fc человеческого IgG1, Met351Glu/Met358Leu)
Figure 00000020
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-MM-EL-hFc2 (Fc человеческого IgG2, Met351Glu/Met358Leu). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 34), полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 4), мутация Met351Glu показана в рамке, а мутация Met358Leu показана серым.
AAT-MM-EL-hFc2 (Fc человеческого IgG2, Met351Glu/Met358Leu)
Figure 00000021
Figure 00000022
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-MM-LL-hFc1 (Fc человеческого IgG1, Met351Glu/Met358Leu). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 35), полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 3), мутация Met351Leu показана черным, а мутация Met358Leu показана серым.
AAT-MM:LL-hFc1 (Fc человеческого IgG1, Met351Leu/Met358Leu)
Figure 00000023
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-MM:LL-hFc2 (Fc человеческого IgG2, Met351Leu/Met358Leu). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 35), полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 4), мутация Met351Leu показана черным, а мутация Met358Leu показана серым.
AAT-MM-LL-hFc2 (Fc человеческого IgG2, Met351Leu/Met358Leu)
Figure 00000024
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc является описанный здесь слитый белок AAT-hFcl-AAT (человеческий IgG1). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), а полипептидная IgG-Fc-часть слитого белка показана курсивом (SEQ ID NO: 3).
AAT-hFc1-AAT (человеческий IgG1)
Figure 00000025
Figure 00000026
Figure 00000027
Эти репрезентативныые слитые белки AAT-Fc были получены нижеследующими методами.
Ген, кодирующий человеческий AAT, был подвергнут ПЦР-амплификации из кДНК печени человека (Zyagen). Специфические точковые мутации в гене, кодирующем AAT или Fc-область, были введены с помощью ПЦР с перекрыванием. AAT-кодирующий ген клонировали в одной рамке считывания с геном, кодирующим шарнирную область, за которым следуют CH2-домен и CH3-домен человеческого IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 или IgM, в экспрессионный вектор млекопитающего, содержащий секреторную сигнальную последовательность млекопитающего, расположенную выше сайта инсерции гена AAT. Эти экспрессионные векторы переносили в клетки млекопитающих (а в частности, в клетки HEK293 или CHO) и культивировали в течение нескольких дней в 8% CO2 при 37°C. Рекомбинантные слитые белки AAT-Fc выделяли из супернатанта экспрессирующих клеток с помощью хроматографии на белке А. Важно отметить, что для элюирования слитого белка AAT-Fc со смолы, содержащей белок А, использовали буфер, имеющий почти нейтральный pH (элюирующий буфер Gentle Ag/Ab, Thermo Scientific). Слитый белок AAT-Fc не мог быть элюирован со смолы, содержащей белок А, стандартным методом элюирования при низком pH, поскольку, после обработки буфером с низким рН, способность AAT ингибировать NE снижается, что, вероятно, обусловлено олигомеризацией AAT, опосредуемой низким рН. На фиг. 1F проиллюстрировано влияние элюирования при низком pH на способность AAT ингибировать эластазу нейтрофилов. Слитый белок AAT-Fc может быть очищен либо на белке А, либо с использованием элюирующего буфера почти с нейтральным рН на матрице с аффинностью к альфа-1-антитрипсину CaptureSelect® (BAC BV).
Очищенные слитые белки AAT-Fc тестировали на активность путем определения их способности ингибировать эластазу нейтрофилов (NE). На фиг. 1B и 1D проиллюстрирован восстанавливающий ПААГ с ДСН, содержащий очищенные сывороточные AAT (sdAAT) и слитые белки AAT-Fc (фиг. 1В - дорожка 1: sdAAT, дорожка 2: AAT-Fc (SEQ ID NO: 16), дорожка 3: AAT-EL-Fc (SEQ ID NO: 18), фиг. 1D - AAT-Fc-AAT (SEQ ID NO: 20). Эти белки визуализировали путем окрашивания кумасси синим.
Для мониторинга эластазной активности человеческих нейтрофилов (NE) проводили анализ на флуоресцентном микропланшете. Ингибирующую активность определяли по последующему снижению остаточной активности NE с помощью нижеследующего анализа. Аналитический буфер состоял из 100 мМ триса, pH 7,4, 500 мМ NaCl и 0,0005% тритона X-100. Человеческую NE использовали в конечной концентрации 5 нМ (но может быть также использована концентрация 1-20 нМ). В данном анализе, флуоресцентный пептидный субстрат AAVP-AMC использовали в конечной концентрации 100 мкΜ. Считывание результатов анализа проводили на планшет-ридере Gemini EM компании Molecular Devices с такими кинетическими параметрами, как длины волн возбуждения и излучения 370 нм и 440 нм, соответственно, и отсечка на 420 нм. Результаты анализа считывали в течение 10 минут при комнатной температуре со сканированием каждые 5-10 секунд. Vmax в секунду соответствует остаточной NE-активности, по которой строили кривую зависимости для каждой концентрации ингибитора. Отрезок, отсекаемый на оси х, означает концентрацию ингибитора, необходимую для полной инактивации NE в исходной концентрации в данном анализе. В этих анализах, AAT человеческой сыворотки (sdAAT) использовали в качестве позитивного контроля. Слитые белки AAT-Fc обладали сильной активностью, направленной на ингибирование NE, как показано на фиг. 1C. Гибрид, в котором два полипептида AAT присоединены к одному Fc-полипептиду (AAT-Fc-AAT), обладает более высокой активностью по сравнению с sdAAT и слитым белком AAT-Fc, содержащим только один полипептид AAT (фиг. 1E). Представленные здесь и впервые полученные данные продемонстрировали, что AAT может быть присоединен к Fc-области и сохраняет способность ингибировать NE. Интересно отметить, что слитый белок AAT-Fc-AAT, как было обнаружено, является более сильным ингибитором NE.
На фиг. 1F продемонстрировано, что слитый белок AAT-EL-Fc (M35IE, M358L) обладает резистентностью к инактивации окислением. Слитые белки AAT, AAT-Fc (дикого типа), AAT-EL-Fc (M351E, M358L) и AAT-EM-Fc (M351E) обрабатывали 33 мМ H2O2 и сравнивали с необработанными слитыми белками в анализах на ингибирование NE. Уровень ингибирования NE слитым белком AAT-EL-Fc не снижался под действием окисления, в отличие от других тестируемых белков.
Кроме того, слитый белок AAT-Fc имел более длительное время полужизни в сыворотке крыс по сравнению с временем полужизни AAT в сыворотке (фиг. 1H). В этих исследованиях, 3 крысам на каждый тестируемый белок i.v. инъецировали 10 мг/кг sdAAT или AAT-Fc. Пробу сыворотки брали через различные промежутки времени в течение 48 часов. Концентрацию ATT в сыворотке определяли с помощью анализа ELISA. Полученные данные продемонстрировали, что слитые белки согласно изобретению, в отличие от сывороточного AAT, обладают улучшенными фармакокинетическими свойствами и превосходным форматом лечения многих воспалительных состояний и инфекционных заболеваний у человека.
Пример 2: направленные на AAT-TNFα молекулы слитых белков
В представленных здесь исследованиях описано несколько неограничивающих примеров рекомбинантных производных AAT, содержащих человеческий AAT, присоединенный к анти-TNFα антителу или к производному рецептора TNFα. Эти примеры приводятся ниже для дополнительной иллюстрации отличительных признаков настоящего изобретения. В этих примерах также проиллюстрирована методика осуществления настоящего изобретения. Эти примеры не должны рассматриваться как ограничение заявленного изобретения.
Описанные ниже слитые белки включают направленные на цитокин полипептидные последовательности, которые были получены или получают из (i) анти-TNFα антитела D2E7 (также известного как адалимумаб или Humira®) или (ii) внеклеточного домена рецептора TNFα типа 2 (TNFR2-ECD). Полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута, константные области антитела (CH1-шарнирная область-CH2-CH3 или CL) даны курсивом, а D2E7-VH, D2E7-VK и TNFR2-ECD даны жирным шрифтом. Хотя эти примеры включают конкретную шарнирную последовательность и/или линкерную последовательность, однако, слитые белки согласно изобретению могут быть получены с использованием любой шарнирной последовательности и/или линкерной последовательности, которые имеют подходящую длину и/или гибкость. Альтернативно, слитые белки могут быть получены без использования шарнирной последовательности и/или линкерной последовательности.
Репрезентативным слитым белком AAT-TNFα является описанный здесь слитый белок «D2E7-легкая цепь-AAT-(G3S)2-линкер». Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), D2E7-VK показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 37), а константные области антитела показаны курсивом (SEQ ID NO: 38).
D2E7-легкая цепь-AAT-(G 3 S) 2 -линкер
Figure 00000028
Figure 00000029
Репрезентативным слитым белком AAT-TNFα является описанный здесь слитый белок «D2E7-легкая цепь-AAT-ASTGS-линкер». Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), D2E7-VK показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 37), а константные области антитела показаны курсивом (SEQ ID NO: 38).
D2E7-легкая цепь-AAT-ASTGS-линкер
Figure 00000030
Репрезентативным слитым белком AAT-TNFα является описанный здесь слитый белок «D2E7-тяжелая цепь-AAT-(G3S)2-линкер». Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), D2E7-VH показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 39), а константные области антитела показаны курсивом (SEQ ID NO: 40).
D2E7-тяжелая цепь-AAT-(G 3 S) 2 -линкер
Figure 00000031
Figure 00000032
Figure 00000033
Репрезентативным слитым белком AAT-TNFα является описанный здесь слитый белок «D2E7-тяжелая цепь-AAT-ASTGS-линкер». Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), D2E7-VH показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 39), а константные области антитела показаны курсивом (SEQ ID NO: 40).
D2E7-тяжелая цепь-AAT-ASTGS-линкер
Figure 00000034
Репрезентативным слитым белком AAT-TNFα является описанный здесь слитый белок «TNFR2-ECD-Fc1-AAT-(G3S)2-линкер». Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), TNFR2-ECD показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 41), а константные области антитела показаны курсивом (SEQ ID NO: 42).
TNFR2-ECD-Fcl-AAT-(G 3 S) 2 -линкер
Figure 00000035
Репрезентативным слитым белком AAT-TNFα является описанный здесь слитый белок «TNFR2-ECD-Fc1-AAT-ASTGS-линкер». Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), TNFR2-ECD показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 41), а константные области антитела показаны курсивом (SEQ ID NO: 42).
TNFR2-ECD-Fcl-AAT-ASTGS-линкер
Figure 00000036
Figure 00000037
Эти репрезентативные AAT-TNFα-конъюгирующие молекулы слитого белка были получены нижеследующими методами.
Гены, кодирующие вариабельные области тяжелой цепи (VH) и вариабельные области каппа (VK) анти-TNFα антитела D2E7, получали методом генного синтеза. Ген D2E7-VH клонировали в одной рамке считывания с геном, кодирующим константную область тяжелой цепи человеческого антитела IgG1, состоящей из CH1-домена, шарнирного домена, CH2-домена и СН3-домена, в экспрессионный вектор млекопитающих, содержащий секреторную сигнальную последовательность млекопитающего, расположенную выше сайта инсерции VH-домена (D2E7-HC). Ген D2E7-VK клонировали в одной рамке считывания с геном константного домена (CL) легкой цепи каппа человеческого антитела в экспрессионный вектор млекопитающих, содержащий секреторную сигнальную последовательность млекопитающего, расположенную выше сайта инсерции VK-домена (D2E7-LC). AAT-кодирующий ген и соседнюю 5'-линкерную последовательность клонировали в одной рамке считывания с 3'-концом кодирующих последовательностей либо гена CH3-домена тяжелой цепи D2E7 (D2E7-HC-AAT), либо гена CL-домена легкой цепи D2E7 (D2E7-LC-AAT) в вышеописанные экспрессионные векторы млекопитающих. Внеклеточный домен рецептора 2 TNFα (TNFR2-ECD) генерировали посредством генного синтеза и клонировали в одной рамке считывания с геном, кодирующим шарнирную область, за которой следует CH2-домен и CH3-домен человеческого IgG1 (hFc1), в экспрессионный вектор млекопитающих, содержащий секреторную сигнальную последовательность млекопитающего, расположенную выше сайта инсерции TNFR2-ECD. AAT-кодирующий ген и соседнюю 5'-линкерную последовательность клонировали в одной рамке считывания с 3'-концом гена, кодирующего TNFR2-ECD-hFc1, в экспрессионный вектор млекопитающих (TNFR2-ECD-hFc1-AAT).
Экспрессионный вектор D2E7-HC-AAT переносили вместе с экспрессионным вектором D2E7-LC или D2E7-LC-AAT в клетки млекопитающих (а в частности, в клетки HEK293 или CHO) для продуцирования антитела D2E7 с AAT, присоединенным к C-концу тяжелой цепи или к C-концу тяжелой цепи и легкой цепи, соответственно. D2E7-LC-AAT переносили вместе с экспрессионным вектором D2E7-HC в клетки млекопитающих для продуцирования антитела D2E7 с AAT, присоединенным к C-концу легкой цепи. Экспрессионный вектор TNFR2-hFcl-AAT переносили в клетки млекопитающих. Трансфицированные клетки культивировали в течение нескольких дней в 8% CO2 при 37°C.
Рекомбинантные слитые белки-конъюгаты AAT-TNFα, выделяли из супернатанта экспрессирующих клеток с помощью хроматографии на белке A. Для элюирования слитых белков-конъюгатов ААТ-TNFα из смолы, содержащей белок А, использовали буфер, имеющий почти нейтральный pH (элюирующий буфер Gentle Ag/Ab, Thermo Scientific).
На фиг. 2B показан ПААГ-ДСН-гель, содержащий одно антитело D2E7 (дорожка 1) и вариант, где AAT присоединен к тяжелой цепи D2E7 (дорожка 2). Белки визуализировали путем окрашивания кумасси синим.
Очищенные молекулы слитых белков-конъюгатов AAT-TNFα тестировали на активность путем определения их способности ингибировать эластазу нейтрофилов. В этих анализах, AAT человеческой сыворотки (sdAAT) использовали в качестве позитивного контроля. Анализы на ингибирование NE проводили, как описано выше. На фиг. 2C продемонстрировано, что слитые белки-конъюгаты AAT-TNFα, имели такую же активность, направленную на ингибирование эластазы нейтрофилов, как и sdAAT, что указывает на то, что присоединение AAT к антителу не влияло на ингибирующую активность этого AAT.
Пример 3. AAT-Fc-SLPI и AAT-Fc-элафин
В представленных здесь исследованиях описано несколько неограничивающих примеров рекомбинантных производных AAT, содержащих человеческий AAT, присоединенный к белку, содержащему домен WAP. Эти примеры приводятся ниже для дополнительной иллюстрации отличительных признаков настоящего изобретения. В этих примерах также проиллюстрирована методика осуществления настоящего изобретения. Полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута, Fc-часть показана курсивом, а полипептид, содержащий домен WAP, показан жирным шрифтом. Хотя эти примеры включают конкретную шарнирную последовательность и/или линкерную последовательность, однако, слитые белки согласно изобретению могут быть получены с использованием любой шарнирной последовательности и/или линкерной последовательности, которые имеют подходящую длину и/или гибкость. Альтернативно, слитые белки могут быть получены без использования шарнирной последовательности и/или линкерной последовательности. Так, например, полипептидные компоненты могут быть непосредственно присоединены друг к другу.
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc-SLPI является описанный здесь слитый белок AAT-hFc1-SLPI (Fc человеческого IgG1). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), Fc-часть показана курсивом (SEQ ID NO: 3), а полипептид, содержащий домен WAP, показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 9).
AAT-hFc1-SLPI (Fc человеческого IgG1)
Figure 00000038
Figure 00000039
Репрезентативным слитым белком AAT-Fc-SLPI является описанный здесь слитый белок AAT-hFc1-SLPI (Fc человеческого IgG1). Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), Fc-часть показана курсивом (SEQ ID NO: 3), а полипептид, содержащий домен WAP, показан жирным шрифтом (SEQ ID NO: 12).
AAT-hFc1-элафин (Fc человеческого IgG1)
Figure 00000040
Figure 00000041
Гены, кодирующие SLPI и элафин, подвергали ПЦР-амплификации из кДНК селезенки человека (Zyagen). Эти гены клонировали в экспрессионные векторы млекопитающих, описанные в примере 1, где ген SLPI или элафина встраивали в одной рамке считывания с геном AAT-Fc. Эти экспрессионные векторы переносили в клетки млекопитающих (а в частности, в клетки HEK293 или CHO) и культивировали в течение нескольких дней в 8% CO2 при 37°C. Рекомбинантные слитые AAT - Fc - домен WAP выделяли из супернатанта экспрессирующих клеток с помощью хроматографии на белке А. Для элюирования слитого белка AAT - Fc - домен WAP со смолы, содержащей белок А, использовали буфер, имеющий почти нейтральный pH (элюирующий буфер Gentle Ag/Ab, Thermo Scientific).
На фиг. 3В показан ПААГ-ДСН-гель, содержащий слитые белки AAT - Fc - домен WAP (дорожка 1: AAT-Fc-элафин; дорожка 2: AAT-Fc-SLPI). Белки визуализировали путем окрашивания кумасси синим. Очищенные слитые белки AAT - Fc - домен WAP тестировали на активность путем определения их способности ингибировать эластазу нейтрофилов. Анализы на ингибирование NE проводили, как описано выше. В этих анализах, AAT человеческой сыворотки (sdAAT) и слитый белок AAT-Fc использовали в качестве позитивного контроля. Слитые белки-конъюгаты AAT - Fc - домен WAP, по сравнению с sdAAT, обладали более высокой активностью, направленной на ингибирование эластазы нейтрофилов (NE) (фиг. 3С).
Пример 4. AAT-альбумин
В представленных здесь исследованиях описано несколько неограничивающих примеров рекомбинантных производных AAT, содержащих человеческий AAT, присоединенный к полипептиду альбумина. Эти примеры приводятся ниже для дополнительной иллюстрации отличительных признаков настоящего изобретения. В этих примерах также проиллюстрирована методика осуществления настоящего изобретения. Эти примеры не должны рассматриваться как ограничение заявленного изобретения. Полипептидная AAT-часть подчеркнута, а альбуминовая часть показана курсивом. Так, например, полипептидные компоненты могут быть непосредственно присоединены друг к другу.
Репрезентативным слитым белком AAT-альбумин является описанный здесь слитый белок AAT-HSA. Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), а полипептид альбумина показан курсивом (SEQ ID NO: 14).
AAT-HSA
Figure 00000042
Репрезентативным слитым белком AAT - альбумин является описанный здесь ААТ-домен 3. Как показано ниже, полипептидная AAT-часть слитого белка подчеркнута (SEQ ID NO: 2), а полипептид альбумина показан курсивом (SEQ ID NO: 15).
AAT-домен 3-HSA
Figure 00000043
Figure 00000044
Ген, кодирующий альбумин человеческой сыворотки (HSA), подвергали ПЦР-амплификации из кДНК печени человека (Zyagen). Был получен экспрессионный вектор млекопитающего, в котором ген, кодирующий HSA или домен 3 HSA, клонировали в одной рамке считывания с 3’-концом AAT-кодирующего гена, содержащего секреторную сигнальную последовательность млекопитающего, расположенную выше AAT.
Эти экспрессионные векторы переносили в клетки млекопитающих (а в частности, в клетки HEK293 или CHO) и культивировали в течение нескольких дней в 8% CO2 при 37°C. Рекомбинантные слитые белки AAT-HSA выделяли из супернатанта экспрессирующих клеток с помощью хроматографии на матрице с аффинностью к альфа-1-антитрипсину CaptureSelect® (BAC BV), где связывающий буфер состоял из 20 мМ триса, 150 мМ NaCl, pH 7,4, а элюирующий буфер состоял из 20 мМ триса, 2M MgCl2, pH 7,4.
На фиг. 4В показан ПААГ-ДСН-гель, содержащий слитый белок AAT-HSA. Белки визуализировали путем окрашивания кумасси синим. Очищенные слитые белки AAT-HSA тестировали на активность путем определения их способности ингибировать эластазу нейтрофилов. Анализы на ингибирование NE проводили, как описано выше. В этих анализах, AAT человеческой сыворотки (sdAAT) использовали в качестве позитивного контроля. Слитые белки AAT-HSA обладали такой же активностью, направленной на ингибирование NE, как и sdAAT, что указывало на то, что связывание с альбумином не приводило к снижению способности ААТ ингибировать NE (фиг. 4С).
Другие варианты изобретения
Хотя в настоящей заявке дано подробное описание настоящего изобретения, однако, оно приводится лишь в целях иллюстрации и не должно рассматриваться как ограничение объема изобретения, который определен прилагаемой формулой изобретения. Настоящее изобретение может включать другие аспекты, преимущества и модификации, не выходящие за рамки объема нижеследующей формулы изобретения.
--->
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> InhibRx LLC et al.
<120> СЛИТЫЕ СЕРПИНОВЫЕ ПОЛИПЕПТИДЫ И СПОСОБЫ ИХ ПРИМЕНЕНИЯ
<130> 42967-502001WO
<140> PCT/US2012/044730
<141> 2012-06-28
<150> US 61/502,055
<151> 2011-06-28
<150> US 61/570,394
<151> 2011-12-14
<150> US 61/577,204
<151> 2011-12-19
<150> US 61/638,168
<151> 2012-04-25
<160> 42
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 25
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 1
Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser
1 5 10 15
Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
20 25
<210> 2
<211> 394
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 2
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys
385 390
<210> 3
<211> 217
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 3
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 4
<211> 216
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 4
Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
1 5 10 15
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
20 25 30
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val
35 40 45
Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln
50 55 60
Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln
65 70 75 80
Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly
85 90 95
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro
100 105 110
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
115 120 125
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
130 135 140
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
145 150 155 160
Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
165 170 175
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
180 185 190
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 5
<211> 217
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 5
Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Lys Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Tyr Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Ser Gly Gln Pro Glu Asn Asn
145 150 155 160
Tyr Asn Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
165 170 175
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Ile
180 185 190
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn Arg Phe Thr Gln
195 200 205
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
210 215
<210> 6
<211> 216
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 6
Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys
1 5 10 15
Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val
20 25 30
Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr
35 40 45
Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu
50 55 60
Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His
65 70 75 80
Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys
85 90 95
Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln
100 105 110
Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met
115 120 125
Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
130 135 140
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
145 150 155 160
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
165 170 175
Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe
180 185 190
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
195 200 205
Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
210 215
<210> 7
<211> 218
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 7
Ile Ala Glu Leu Pro Pro Lys Val Ser Val Phe Val Pro Pro Arg Asp
1 5 10 15
Gly Phe Phe Gly Asn Pro Arg Lys Ser Lys Leu Ile Cys Gln Ala Thr
20 25 30
Gly Phe Ser Pro Arg Gln Ile Gln Val Ser Trp Leu Arg Glu Gly Lys
35 40 45
Gln Val Gly Ser Gly Val Thr Thr Asp Gln Val Gln Ala Glu Ala Lys
50 55 60
Glu Ser Gly Pro Thr Thr Tyr Lys Val Thr Ser Thr Leu Thr Ile Lys
65 70 75 80
Glu Ser Asp Trp Leu Gly Gln Ser Met Phe Thr Cys Arg Val Asp His
85 90 95
Arg Gly Leu Thr Phe Gln Gln Asn Ala Ser Ser Met Cys Val Pro Asp
100 105 110
Gln Asp Thr Ala Ile Arg Val Phe Ala Ile Pro Pro Ser Phe Ala Ser
115 120 125
Ile Phe Leu Thr Lys Ser Thr Lys Leu Thr Cys Leu Val Thr Asp Leu
130 135 140
Thr Thr Tyr Asp Ser Val Thr Ile Ser Trp Thr Arg Gln Asn Gly Glu
145 150 155 160
Ala Val Lys Thr His Thr Asn Ile Ser Glu Ser His Pro Asn Ala Thr
165 170 175
Phe Ser Ala Val Gly Glu Ala Ser Ile Cys Glu Asp Asp Trp Asn Ser
180 185 190
Gly Glu Arg Phe Thr Cys Thr Val Thr His Thr Asp Leu Pro Ser Pro
195 200 205
Leu Lys Gln Thr Ile Ser Arg Pro Lys Gly
210 215
<210> 8
<211> 132
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 8
Met Lys Ser Ser Gly Leu Phe Pro Phe Leu Val Leu Leu Ala Leu Gly
1 5 10 15
Thr Leu Ala Pro Trp Ala Val Glu Gly Ser Gly Lys Ser Phe Lys Ala
20 25 30
Gly Val Cys Pro Pro Lys Lys Ser Ala Gln Cys Leu Arg Tyr Lys Lys
35 40 45
Pro Glu Cys Gln Ser Asp Trp Gln Cys Pro Gly Lys Lys Arg Cys Cys
50 55 60
Pro Asp Thr Cys Gly Ile Lys Cys Leu Asp Pro Val Asp Thr Pro Asn
65 70 75 80
Pro Thr Arg Arg Lys Pro Gly Lys Cys Pro Val Thr Tyr Gly Gln Cys
85 90 95
Leu Met Leu Asn Pro Pro Asn Phe Cys Glu Met Asp Gly Gln Cys Lys
100 105 110
Arg Asp Leu Lys Cys Cys Met Gly Met Cys Gly Lys Ser Cys Val Ser
115 120 125
Pro Val Lys Ala
130
<210> 9
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 9
Ser Gly Lys Ser Phe Lys Ala Gly Val Cys Pro Pro Lys Lys Ser Ala
1 5 10 15
Gln Cys Leu Arg Tyr Lys Lys Pro Glu Cys Gln Ser Asp Trp Gln Cys
20 25 30
Pro Gly Lys Lys Arg Cys Cys Pro Asp Thr Cys Gly Ile Lys Cys Leu
35 40 45
Asp Pro Val Asp Thr Pro Asn Pro Thr Arg Arg Lys Pro Gly Lys Cys
50 55 60
Pro Val Thr Tyr Gly Gln Cys Leu Met Leu Asn Pro Pro Asn Phe Cys
65 70 75 80
Glu Met Asp Gly Gln Cys Lys Arg Asp Leu Lys Cys Cys Met Gly Met
85 90 95
Cys Gly Lys Ser Cys Val Ser Pro Val Lys Ala
100 105
<210> 10
<211> 51
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 10
Thr Arg Arg Lys Pro Gly Lys Cys Pro Val Thr Tyr Gly Gln Cys Leu
1 5 10 15
Met Leu Asn Pro Pro Asn Phe Cys Glu Met Asp Gly Gln Cys Lys Arg
20 25 30
Asp Leu Lys Cys Cys Met Gly Met Cys Gly Lys Ser Cys Val Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala
50
<210> 11
<211> 117
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 11
Met Arg Ala Ser Ser Phe Leu Ile Val Val Val Phe Leu Ile Ala Gly
1 5 10 15
Thr Leu Val Leu Glu Ala Ala Val Thr Gly Val Pro Val Lys Gly Gln
20 25 30
Asp Thr Val Lys Gly Arg Val Pro Phe Asn Gly Gln Asp Pro Val Lys
35 40 45
Gly Gln Val Ser Val Lys Gly Gln Asp Lys Val Lys Ala Gln Glu Pro
50 55 60
Val Lys Gly Pro Val Ser Thr Lys Pro Gly Ser Cys Pro Ile Ile Leu
65 70 75 80
Ile Arg Cys Ala Met Leu Asn Pro Pro Asn Arg Cys Leu Lys Asp Thr
85 90 95
Asp Cys Pro Gly Ile Lys Lys Cys Cys Glu Gly Ser Cys Gly Met Ala
100 105 110
Cys Phe Val Pro Gln
115
<210> 12
<211> 95
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 12
Ala Val Thr Gly Val Pro Val Lys Gly Gln Asp Thr Val Lys Gly Arg
1 5 10 15
Val Pro Phe Asn Gly Gln Asp Pro Val Lys Gly Gln Val Ser Val Lys
20 25 30
Gly Gln Asp Lys Val Lys Ala Gln Glu Pro Val Lys Gly Pro Val Ser
35 40 45
Thr Lys Pro Gly Ser Cys Pro Ile Ile Leu Ile Arg Cys Ala Met Leu
50 55 60
Asn Pro Pro Asn Arg Cys Leu Lys Asp Thr Asp Cys Pro Gly Ile Lys
65 70 75 80
Lys Cys Cys Glu Gly Ser Cys Gly Met Ala Cys Phe Val Pro Gln
85 90 95
<210> 13
<211> 49
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 13
Val Ser Thr Lys Pro Gly Ser Cys Pro Ile Ile Leu Ile Arg Cys Ala
1 5 10 15
Met Leu Asn Pro Pro Asn Arg Cys Leu Lys Asp Thr Asp Cys Pro Gly
20 25 30
Ile Lys Lys Cys Cys Glu Gly Ser Cys Gly Met Ala Cys Phe Val Pro
35 40 45
Gln
<210> 14
<211> 585
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 14
Asp Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu
1 5 10 15
Glu Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln
20 25 30
Gln Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu
35 40 45
Phe Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys
50 55 60
Ser Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu
65 70 75 80
Arg Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro
85 90 95
Glu Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu
100 105 110
Pro Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His
115 120 125
Asp Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg
130 135 140
Arg His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg
145 150 155 160
Tyr Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala
165 170 175
Cys Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser
180 185 190
Ser Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu
195 200 205
Arg Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro
210 215 220
Lys Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys
225 230 235 240
Val His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp
245 250 255
Arg Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser
260 265 270
Ser Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His
275 280 285
Cys Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser
290 295 300
Leu Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala
305 310 315 320
Glu Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg
325 330 335
Arg His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr
340 345 350
Tyr Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu
355 360 365
Cys Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro
370 375 380
Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu
385 390 395 400
Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro
405 410 415
Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys
420 425 430
Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys
435 440 445
Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His
450 455 460
Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser
465 470 475 480
Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr
485 490 495
Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp
500 505 510
Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala
515 520 525
Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu
530 535 540
Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys
545 550 555 560
Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val
565 570 575
Ala Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu
580 585
<210> 15
<211> 196
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 15
Glu Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys
20 25 30
Lys Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn
35 40 45
Leu Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg
50 55 60
Met Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys
65 70 75 80
Val Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys
85 90 95
Thr Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val
100 105 110
Asp Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe
115 120 125
His Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys
130 135 140
Gln Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys
145 150 155 160
Glu Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys
165 170 175
Cys Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys
180 185 190
Lys Leu Val Ala
195
<210> 16
<211> 626
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 16
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp
385 390 395 400
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
405 410 415
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
420 425 430
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
435 440 445
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
450 455 460
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
465 470 475 480
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
485 490 495
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
500 505 510
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
515 520 525
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
530 535 540
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
545 550 555 560
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
565 570 575
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
580 585 590
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
595 600 605
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
610 615 620
Gly Lys
625
<210> 17
<211> 622
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 17
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Arg Lys Cys Cys Val
385 390 395 400
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
405 410 415
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
420 425 430
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
435 440 445
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
450 455 460
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
465 470 475 480
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
485 490 495
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
500 505 510
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
515 520 525
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
530 535 540
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
545 550 555 560
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
565 570 575
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
580 585 590
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
595 600 605
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
610 615 620
<210> 18
<211> 626
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 18
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Glu Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp
385 390 395 400
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
405 410 415
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
420 425 430
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
435 440 445
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
450 455 460
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
465 470 475 480
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
485 490 495
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
500 505 510
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
515 520 525
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
530 535 540
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
545 550 555 560
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
565 570 575
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
580 585 590
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
595 600 605
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
610 615 620
Gly Lys
625
<210> 19
<211> 622
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 19
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Glu Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Arg Lys Cys Cys Val
385 390 395 400
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
405 410 415
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
420 425 430
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
435 440 445
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
450 455 460
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
465 470 475 480
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
485 490 495
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
500 505 510
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
515 520 525
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
530 535 540
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
545 550 555 560
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
565 570 575
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
580 585 590
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
595 600 605
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
610 615 620
<210> 20
<211> 622
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 20
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Leu Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Arg Lys Cys Cys Val
385 390 395 400
Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe
405 410 415
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro
420 425 430
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val
435 440 445
Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr
450 455 460
Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val
465 470 475 480
Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys
485 490 495
Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser
500 505 510
Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro
515 520 525
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val
530 535 540
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly
545 550 555 560
Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp
565 570 575
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp
580 585 590
Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His
595 600 605
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
610 615 620
<210> 21
<211> 1025
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 21
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp
385 390 395 400
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
405 410 415
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
420 425 430
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
435 440 445
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
450 455 460
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
465 470 475 480
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
485 490 495
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
500 505 510
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
515 520 525
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
530 535 540
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
545 550 555 560
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
565 570 575
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
580 585 590
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
595 600 605
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
610 615 620
Gly Lys Ala Ser Thr Gly Ser Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln
625 630 635 640
Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys
645 650 655
Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu
660 665 670
Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile
675 680 685
Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His
690 695 700
Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu
705 710 715 720
Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln
725 730 735
Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser
740 745 750
Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu
755 760 765
Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala
770 775 780
Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile
785 790 795 800
Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val
805 810 815
Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys
820 825 830
Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys
835 840 845
Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys
850 855 860
Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr
865 870 875 880
Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn
885 890 895
Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg
900 905 910
Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr
915 920 925
Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser
930 935 940
Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu
945 950 955 960
Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr
965 970 975
Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro
980 985 990
Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln
995 1000 1005
Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr
1010 1015 1020
Gln Lys
1025
<210> 22
<211> 616
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 22
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Asp
210 215 220
Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln
225 230 235 240
Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala
245 250 255
Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile
260 265 270
Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu
275 280 285
Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe
290 295 300
Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu
305 310 315 320
Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr
325 330 335
Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe
340 345 350
Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn
355 360 365
Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu
370 375 380
Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg
385 390 395 400
Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp
405 410 415
Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val
420 425 430
Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met
435 440 445
Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met
450 455 460
Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly
465 470 475 480
Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys
485 490 495
Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys
500 505 510
Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu
515 520 525
Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr
530 535 540
Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu
545 550 555 560
Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu
565 570 575
Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe
580 585 590
Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly
595 600 605
Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys
610 615
<210> 23
<211> 613
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 23
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys Ala Ser Thr Gly Ser Glu Asp Pro Gln Gly
210 215 220
Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro
225 230 235 240
Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu
245 250 255
Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser
260 265 270
Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys
275 280 285
Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr
290 295 300
Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg
305 310 315 320
Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly
325 330 335
Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp
340 345 350
Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp
355 360 365
Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr
370 375 380
Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val
385 390 395 400
Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro
405 410 415
Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val
420 425 430
Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile
435 440 445
Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu
450 455 460
Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln
465 470 475 480
His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu
485 490 495
Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile
500 505 510
Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr
515 520 525
Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala
530 535 540
Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp
545 550 555 560
Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro
565 570 575
Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu
580 585 590
Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val
595 600 605
Asn Pro Thr Gln Lys
610
<210> 24
<211> 853
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 24
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Asp Pro Gln Gly
450 455 460
Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro
465 470 475 480
Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu
485 490 495
Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser
500 505 510
Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys
515 520 525
Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr
530 535 540
Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg
545 550 555 560
Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly
565 570 575
Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp
580 585 590
Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp
595 600 605
Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr
610 615 620
Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val
625 630 635 640
Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro
645 650 655
Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val
660 665 670
Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile
675 680 685
Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu
690 695 700
Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln
705 710 715 720
His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu
725 730 735
Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile
740 745 750
Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr
755 760 765
Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala
770 775 780
Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp
785 790 795 800
Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro
805 810 815
Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu
820 825 830
Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val
835 840 845
Asn Pro Thr Gln Lys
850
<210> 25
<211> 850
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 25
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys
210 215 220
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
225 230 235 240
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
245 250 255
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
260 265 270
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
275 280 285
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
290 295 300
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
305 310 315 320
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
325 330 335
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
340 345 350
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser
355 360 365
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
370 375 380
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
385 390 395 400
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
405 410 415
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
420 425 430
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
435 440 445
Pro Gly Lys Ala Ser Thr Gly Ser Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala
450 455 460
Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn
465 470 475 480
Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln
485 490 495
Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser
500 505 510
Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr
515 520 525
His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro
530 535 540
Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn
545 550 555 560
Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu
565 570 575
Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys
580 585 590
Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu
595 600 605
Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys
610 615 620
Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu
625 630 635 640
Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val
645 650 655
Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val Thr Thr Val
660 665 670
Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys
675 680 685
Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala
690 695 700
Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu
705 710 715 720
Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp
725 730 735
Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr
740 745 750
Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe
755 760 765
Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys
770 775 780
Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly
785 790 795 800
Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile
805 810 815
Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu
820 825 830
Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr
835 840 845
Gln Lys
850
<210> 26
<211> 869
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 26
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Gln Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Gln Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Gln Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asn Trp Leu Asp Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Ser Glu Asp Pro Gln Gly
465 470 475 480
Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro
485 490 495
Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu
500 505 510
Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser
515 520 525
Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys
530 535 540
Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr
545 550 555 560
Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg
565 570 575
Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly
580 585 590
Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp
595 600 605
Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp
610 615 620
Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr
625 630 635 640
Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val
645 650 655
Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro
660 665 670
Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val
675 680 685
Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile
690 695 700
Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu
705 710 715 720
Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln
725 730 735
His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu
740 745 750
Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile
755 760 765
Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr
770 775 780
Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala
785 790 795 800
Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp
805 810 815
Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro
820 825 830
Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu
835 840 845
Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val
850 855 860
Asn Pro Thr Gln Lys
865
<210> 27
<211> 866
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 27
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp Glu Pro Lys Ser Cys
225 230 235 240
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
245 250 255
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
260 265 270
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
275 280 285
Glu Asp Pro Gln Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Gln Val
290 295 300
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Gln Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
305 310 315 320
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asn Trp Leu Asp Gly
325 330 335
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
340 345 350
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
355 360 365
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
370 375 380
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
385 390 395 400
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
405 410 415
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
420 425 430
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
435 440 445
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
450 455 460
Pro Gly Lys Ala Ser Thr Gly Ser Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala
465 470 475 480
Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn
485 490 495
Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln
500 505 510
Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser
515 520 525
Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr
530 535 540
His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro
545 550 555 560
Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn
565 570 575
Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu
580 585 590
Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys
595 600 605
Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu
610 615 620
Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys
625 630 635 640
Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu
645 650 655
Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val
660 665 670
Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe His Val Asp Gln Val Thr Thr Val
675 680 685
Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys
690 695 700
Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala
705 710 715 720
Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu
725 730 735
Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp
740 745 750
Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr
755 760 765
Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe
770 775 780
Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys
785 790 795 800
Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly
805 810 815
Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile
820 825 830
Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu
835 840 845
Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr
850 855 860
Gln Lys
865
<210> 28
<211> 738
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 28
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp
385 390 395 400
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
405 410 415
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
420 425 430
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
435 440 445
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
450 455 460
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
465 470 475 480
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
485 490 495
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
500 505 510
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
515 520 525
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
530 535 540
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
545 550 555 560
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
565 570 575
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
580 585 590
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
595 600 605
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
610 615 620
Gly Lys Ala Ser Thr Gly Ser Ser Gly Lys Ser Phe Lys Ala Gly Val
625 630 635 640
Cys Pro Pro Lys Lys Ser Ala Gln Cys Leu Arg Tyr Lys Lys Pro Glu
645 650 655
Cys Gln Ser Asp Trp Gln Cys Pro Gly Lys Lys Arg Cys Cys Pro Asp
660 665 670
Thr Cys Gly Ile Lys Cys Leu Asp Pro Val Asp Thr Pro Asn Pro Thr
675 680 685
Arg Arg Lys Pro Gly Lys Cys Pro Val Thr Tyr Gly Gln Cys Leu Met
690 695 700
Leu Asn Pro Pro Asn Phe Cys Glu Met Asp Gly Gln Cys Lys Arg Asp
705 710 715 720
Leu Lys Cys Cys Met Gly Met Cys Gly Lys Ser Cys Val Ser Pro Val
725 730 735
Lys Ala
<210> 29
<211> 726
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 29
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp
385 390 395 400
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
405 410 415
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
420 425 430
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
435 440 445
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
450 455 460
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
465 470 475 480
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
485 490 495
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
500 505 510
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
515 520 525
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
530 535 540
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
545 550 555 560
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
565 570 575
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
580 585 590
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
595 600 605
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
610 615 620
Gly Lys Ala Ser Thr Gly Ser Ala Val Thr Gly Val Pro Val Lys Gly
625 630 635 640
Gln Asp Thr Val Lys Gly Arg Val Pro Phe Asn Gly Gln Asp Pro Val
645 650 655
Lys Gly Gln Val Ser Val Lys Gly Gln Asp Lys Val Lys Ala Gln Glu
660 665 670
Pro Val Lys Gly Pro Val Ser Thr Lys Pro Gly Ser Cys Pro Ile Ile
675 680 685
Leu Ile Arg Cys Ala Met Leu Asn Pro Pro Asn Arg Cys Leu Lys Asp
690 695 700
Thr Asp Cys Pro Gly Ile Lys Lys Cys Cys Glu Gly Ser Cys Gly Met
705 710 715 720
Ala Cys Phe Val Pro Gln
725
<210> 30
<211> 984
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 30
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Ala Ser Thr Gly Ser Asp
385 390 395 400
Ala His Lys Ser Glu Val Ala His Arg Phe Lys Asp Leu Gly Glu Glu
405 410 415
Asn Phe Lys Ala Leu Val Leu Ile Ala Phe Ala Gln Tyr Leu Gln Gln
420 425 430
Cys Pro Phe Glu Asp His Val Lys Leu Val Asn Glu Val Thr Glu Phe
435 440 445
Ala Lys Thr Cys Val Ala Asp Glu Ser Ala Glu Asn Cys Asp Lys Ser
450 455 460
Leu His Thr Leu Phe Gly Asp Lys Leu Cys Thr Val Ala Thr Leu Arg
465 470 475 480
Glu Thr Tyr Gly Glu Met Ala Asp Cys Cys Ala Lys Gln Glu Pro Glu
485 490 495
Arg Asn Glu Cys Phe Leu Gln His Lys Asp Asp Asn Pro Asn Leu Pro
500 505 510
Arg Leu Val Arg Pro Glu Val Asp Val Met Cys Thr Ala Phe His Asp
515 520 525
Asn Glu Glu Thr Phe Leu Lys Lys Tyr Leu Tyr Glu Ile Ala Arg Arg
530 535 540
His Pro Tyr Phe Tyr Ala Pro Glu Leu Leu Phe Phe Ala Lys Arg Tyr
545 550 555 560
Lys Ala Ala Phe Thr Glu Cys Cys Gln Ala Ala Asp Lys Ala Ala Cys
565 570 575
Leu Leu Pro Lys Leu Asp Glu Leu Arg Asp Glu Gly Lys Ala Ser Ser
580 585 590
Ala Lys Gln Arg Leu Lys Cys Ala Ser Leu Gln Lys Phe Gly Glu Arg
595 600 605
Ala Phe Lys Ala Trp Ala Val Ala Arg Leu Ser Gln Arg Phe Pro Lys
610 615 620
Ala Glu Phe Ala Glu Val Ser Lys Leu Val Thr Asp Leu Thr Lys Val
625 630 635 640
His Thr Glu Cys Cys His Gly Asp Leu Leu Glu Cys Ala Asp Asp Arg
645 650 655
Ala Asp Leu Ala Lys Tyr Ile Cys Glu Asn Gln Asp Ser Ile Ser Ser
660 665 670
Lys Leu Lys Glu Cys Cys Glu Lys Pro Leu Leu Glu Lys Ser His Cys
675 680 685
Ile Ala Glu Val Glu Asn Asp Glu Met Pro Ala Asp Leu Pro Ser Leu
690 695 700
Ala Ala Asp Phe Val Glu Ser Lys Asp Val Cys Lys Asn Tyr Ala Glu
705 710 715 720
Ala Lys Asp Val Phe Leu Gly Met Phe Leu Tyr Glu Tyr Ala Arg Arg
725 730 735
His Pro Asp Tyr Ser Val Val Leu Leu Leu Arg Leu Ala Lys Thr Tyr
740 745 750
Glu Thr Thr Leu Glu Lys Cys Cys Ala Ala Ala Asp Pro His Glu Cys
755 760 765
Tyr Ala Lys Val Phe Asp Glu Phe Lys Pro Leu Val Glu Glu Pro Gln
770 775 780
Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu Gly Glu Tyr
785 790 795 800
Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys Val Pro Gln
805 810 815
Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val
820 825 830
Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met Pro Cys Ala
835 840 845
Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val Leu His Glu
850 855 860
Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr Glu Ser Leu
865 870 875 880
Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp Glu Thr Tyr
885 890 895
Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His Ala Asp Ile
900 905 910
Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln Thr Ala Leu
915 920 925
Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu Gln Leu Lys
930 935 940
Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys Cys Lys Ala
945 950 955 960
Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys Leu Val Ala
965 970 975
Ala Ser Gln Ala Ala Leu Gly Leu
980
<210> 31
<211> 595
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 31
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Met Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Met Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Ala Ser Thr Gly Ser Glu
385 390 395 400
Glu Pro Gln Asn Leu Ile Lys Gln Asn Cys Glu Leu Phe Glu Gln Leu
405 410 415
Gly Glu Tyr Lys Phe Gln Asn Ala Leu Leu Val Arg Tyr Thr Lys Lys
420 425 430
Val Pro Gln Val Ser Thr Pro Thr Leu Val Glu Val Ser Arg Asn Leu
435 440 445
Gly Lys Val Gly Ser Lys Cys Cys Lys His Pro Glu Ala Lys Arg Met
450 455 460
Pro Cys Ala Glu Asp Tyr Leu Ser Val Val Leu Asn Gln Leu Cys Val
465 470 475 480
Leu His Glu Lys Thr Pro Val Ser Asp Arg Val Thr Lys Cys Cys Thr
485 490 495
Glu Ser Leu Val Asn Arg Arg Pro Cys Phe Ser Ala Leu Glu Val Asp
500 505 510
Glu Thr Tyr Val Pro Lys Glu Phe Asn Ala Glu Thr Phe Thr Phe His
515 520 525
Ala Asp Ile Cys Thr Leu Ser Glu Lys Glu Arg Gln Ile Lys Lys Gln
530 535 540
Thr Ala Leu Val Glu Leu Val Lys His Lys Pro Lys Ala Thr Lys Glu
545 550 555 560
Gln Leu Lys Ala Val Met Asp Asp Phe Ala Ala Phe Val Glu Lys Cys
565 570 575
Cys Lys Ala Asp Asp Lys Glu Thr Cys Phe Ala Glu Glu Gly Lys Lys
580 585 590
Leu Val Ala
595
<210> 32
<211> 25
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 32
Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Glu Phe Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser
1 5 10 15
Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
20 25
<210> 33
<211> 25
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 33
Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Leu Phe Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser
1 5 10 15
Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
20 25
<210> 34
<211> 394
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 34
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Glu Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys
385 390
<210> 35
<211> 394
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 35
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Leu Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys
385 390
<210> 36
<211> 626
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 36
Glu Asp Pro Gln Gly Asp Ala Ala Gln Lys Thr Asp Thr Ser His His
1 5 10 15
Asp Gln Asp His Pro Thr Phe Asn Lys Ile Thr Pro Asn Leu Ala Glu
20 25 30
Phe Ala Phe Ser Leu Tyr Arg Gln Leu Ala His Gln Ser Asn Ser Thr
35 40 45
Asn Ile Phe Phe Ser Pro Val Ser Ile Ala Thr Ala Phe Ala Met Leu
50 55 60
Ser Leu Gly Thr Lys Ala Asp Thr His Asp Glu Ile Leu Glu Gly Leu
65 70 75 80
Asn Phe Asn Leu Thr Glu Ile Pro Glu Ala Gln Ile His Glu Gly Phe
85 90 95
Gln Glu Leu Leu Arg Thr Leu Asn Gln Pro Asp Ser Gln Leu Gln Leu
100 105 110
Thr Thr Gly Asn Gly Leu Phe Leu Ser Glu Gly Leu Lys Leu Val Asp
115 120 125
Lys Phe Leu Glu Asp Val Lys Lys Leu Tyr His Ser Glu Ala Phe Thr
130 135 140
Val Asn Phe Gly Asp Thr Glu Glu Ala Lys Lys Gln Ile Asn Asp Tyr
145 150 155 160
Val Glu Lys Gly Thr Gln Gly Lys Ile Val Asp Leu Val Lys Glu Leu
165 170 175
Asp Arg Asp Thr Val Phe Ala Leu Val Asn Tyr Ile Phe Phe Lys Gly
180 185 190
Lys Trp Glu Arg Pro Phe Glu Val Lys Asp Thr Glu Glu Glu Asp Phe
195 200 205
His Val Asp Gln Val Thr Thr Val Lys Val Pro Met Met Lys Arg Leu
210 215 220
Gly Met Phe Asn Ile Gln His Cys Lys Lys Leu Ser Ser Trp Val Leu
225 230 235 240
Leu Met Lys Tyr Leu Gly Asn Ala Thr Ala Ile Phe Phe Leu Pro Asp
245 250 255
Glu Gly Lys Leu Gln His Leu Glu Asn Glu Leu Thr His Asp Ile Ile
260 265 270
Thr Lys Phe Leu Glu Asn Glu Asp Arg Arg Ser Ala Ser Leu His Leu
275 280 285
Pro Lys Leu Ser Ile Thr Gly Thr Tyr Asp Leu Lys Ser Val Leu Gly
290 295 300
Gln Leu Gly Ile Thr Lys Val Phe Ser Asn Gly Ala Asp Leu Ser Gly
305 310 315 320
Val Thr Glu Glu Ala Pro Leu Lys Leu Ser Lys Ala Val His Lys Ala
325 330 335
Val Leu Thr Ile Asp Glu Lys Gly Thr Glu Ala Ala Gly Ala Leu Phe
340 345 350
Leu Glu Ala Ile Pro Leu Ser Ile Pro Pro Glu Val Lys Phe Asn Lys
355 360 365
Pro Phe Val Phe Leu Met Ile Glu Gln Asn Thr Lys Ser Pro Leu Phe
370 375 380
Met Gly Lys Val Val Asn Pro Thr Gln Lys Glu Pro Lys Ser Cys Asp
385 390 395 400
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
405 410 415
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
420 425 430
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
435 440 445
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
450 455 460
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
465 470 475 480
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
485 490 495
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
500 505 510
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
515 520 525
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
530 535 540
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
545 550 555 560
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
565 570 575
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
580 585 590
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
595 600 605
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
610 615 620
Gly Lys
625
<210> 37
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 37
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Tyr Asn Arg Ala Pro Tyr
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 38
<211> 107
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 38
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 39
<211> 116
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 39
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asp Asp Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Thr Trp Asn Ser Gly His Ile Asp Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Glu Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Lys Val Ser Tyr Leu Ser Thr Ala Ser Ser Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu
115
<210> 40
<211> 335
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 40
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
1 5 10 15
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
20 25 30
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
35 40 45
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
50 55 60
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
65 70 75 80
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
85 90 95
Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
100 105 110
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
130 135 140
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
145 150 155 160
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
165 170 175
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
180 185 190
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
195 200 205
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
210 215 220
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
225 230 235 240
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
245 250 255
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
260 265 270
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
275 280 285
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
290 295 300
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
305 310 315 320
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330 335
<210> 41
<211> 235
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 41
Leu Pro Ala Gln Val Ala Phe Thr Pro Tyr Ala Pro Glu Pro Gly Ser
1 5 10 15
Thr Cys Arg Leu Arg Glu Tyr Tyr Asp Gln Thr Ala Gln Met Cys Cys
20 25 30
Ser Lys Cys Ser Pro Gly Gln His Ala Lys Val Phe Cys Thr Lys Thr
35 40 45
Ser Asp Thr Val Cys Asp Ser Cys Glu Asp Ser Thr Tyr Thr Gln Leu
50 55 60
Trp Asn Trp Val Pro Glu Cys Leu Ser Cys Gly Ser Arg Cys Ser Ser
65 70 75 80
Asp Gln Val Glu Thr Gln Ala Cys Thr Arg Glu Gln Asn Arg Ile Cys
85 90 95
Thr Cys Arg Pro Gly Trp Tyr Cys Ala Leu Ser Lys Gln Glu Gly Cys
100 105 110
Arg Leu Cys Ala Pro Leu Arg Lys Cys Arg Pro Gly Phe Gly Val Ala
115 120 125
Arg Pro Gly Thr Glu Thr Ser Asp Val Val Cys Lys Pro Cys Ala Pro
130 135 140
Gly Thr Phe Ser Asn Thr Thr Ser Ser Thr Asp Ile Cys Arg Pro His
145 150 155 160
Gln Ile Cys Asn Val Val Ala Ile Pro Gly Asn Ala Ser Met Asp Ala
165 170 175
Val Cys Thr Ser Thr Ser Pro Thr Arg Ser Met Ala Pro Gly Ala Val
180 185 190
His Leu Pro Gln Pro Val Ser Thr Arg Ser Gln His Thr Gln Pro Thr
195 200 205
Pro Glu Pro Ser Thr Ala Pro Ser Thr Ser Phe Leu Leu Pro Met Gly
210 215 220
Pro Ser Pro Pro Ala Glu Gly Ser Thr Gly Asp
225 230 235
<210> 42
<211> 232
<212> PRT
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> химически синтезированная
<400> 42
Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala
1 5 10 15
Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro
20 25 30
Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val
35 40 45
Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Gln Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val
50 55 60
Asp Gly Val Gln Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Gln Gln
65 70 75 80
Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln
85 90 95
Asn Trp Leu Asp Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala
100 105 110
Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro
115 120 125
Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr
130 135 140
Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser
145 150 155 160
Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr
165 170 175
Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr
180 185 190
Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe
195 200 205
Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys
210 215 220
Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
225 230
<---

Claims (18)

1. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
2. Выделенный слитый белок по п.1, где полипептид AAT и Fc-полипептид иммуноглобулина функционально связаны друг с другом посредством шарнирной области, линкерной области или шарнирной области и линкерной области.
3. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где пептидная последовательность содержит аминокислотную последовательность EPKSCDKTHTCPPCP, ERKCCVECPPCP, EPKSCDKTHTCPPCP или GGGSGGGS.
4. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
5. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
6. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 32, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
7. Выделенный слитый белок по п. 1, где полипептид ААТ содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 33, функционально связанную с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.
8. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где указанный слитый белок дополнительно включает полипептид, содержащий домен WAP, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO:9-13.
9. Выделенный слитый белок для ингибирования сериновых протеаз, имеющий по меньшей мере один человеческий полипептид альфа-1-антитрипсина (AAT), имеющий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 32 и SEQ ID NO: 33, где полипептид ААТ функционально связан с Fc-полипептидом иммуноглобулина, имеющим аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, но менее чем на 98%, идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6, где указанный слитый белок дополнительно включает полипептид SLPI, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO:9 или аминокислотную последовательность SEQ ID NO:10.
10. Выделенный слитый белок по п.1, где указанный Fc-полипептид иммуноглобулина был модифицирован для усиления связывания с FcRn.
11. Выделенный слитый белок по п.1, где указанный Fc-полипептид иммуноглобулина содержит по меньшей мере одну из нижеследующих мутаций: Met252Tyr, Ser254Thr, Thr256Glu, Met428Leu или Asn434Ser.
12. Выделенный слитый белок по п. 1, где указанный Fc-полипептид иммуноглобулина содержит по меньшей мере одну мутацию в положении, выбранном из группы, состоящей из Met252, Ser254, Thr256, Met428 или Asn434.
13. Применение слитого белка по любому из пп. 1-12 в производстве лекарственного средства для ингибирования или снижения избыточной экспрессии или активности сериновой протеазы у индивидуума, нуждающегося в этом.
14. Применение слитого белка по п. 13, где избыточная экспрессия или активность сериновой протеазы ассоциирована с воспалением или симптомом воспаления, ассоциированного с заболеванием или расстройством.
15. Применение по п. 13, где избыточная экспрессия или активность сериновой протеазы ассоциирована с риском инфицирования.
16. Применение по любому из пп.13-15, где указанным индивидуумом является человек.
17. Применение по п.14, где указанное заболевание или расстройство выбрано из эмфиземы, хронической обструктивной болезни легких (ХОБЛ), острого респираторного дистресс-синдрома (ОРДС), аллергической астмы, кистозного фиброза, рака легких, ишемического реперфузионного повреждения, ишемического/реперфузионного повреждения после трансплантации сердца; инфаркта миокарда, ревматоидного артрита, септического артрита, псориатического артрита, анкилозирующего спондилита, болезни Крона, псориаза, диабета типа I и/или типа II, пневмонии, сепсиса, реакции «трансплантат против хозяина» (GVHD), заболевания, связанного с заживлением ран, системной красной волчанки и рассеянного склероза.
18. Применение по п.15, где указанная инфекция выбрана из бактериальных инфекций, грибковых инфекций или вирусных инфекций.
RU2019121798A 2011-06-28 2019-07-11 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения RU2728861C1 (ru)

Applications Claiming Priority (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201161502055P 2011-06-28 2011-06-28
US61/502,055 2011-06-28
US201161570394P 2011-12-14 2011-12-14
US61/570,394 2011-12-14
US201161577204P 2011-12-19 2011-12-19
US61/577,204 2011-12-19
US201261638168P 2012-04-25 2012-04-25
US61/638,168 2012-04-25

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017145308A Division RU2698655C2 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020124172A Division RU2020124172A (ru) 2011-06-28 2020-07-21 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2728861C1 true RU2728861C1 (ru) 2020-07-31

Family

ID=47424806

Family Applications (5)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017145308A RU2698655C2 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2019121797A RU2727452C1 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2014102583A RU2642310C2 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2019121798A RU2728861C1 (ru) 2011-06-28 2019-07-11 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2020124172A RU2020124172A (ru) 2011-06-28 2020-07-21 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2017145308A RU2698655C2 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2019121797A RU2727452C1 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2014102583A RU2642310C2 (ru) 2011-06-28 2012-06-28 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2020124172A RU2020124172A (ru) 2011-06-28 2020-07-21 Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения

Country Status (27)

Country Link
US (7) US8980266B2 (ru)
EP (2) EP2726092B1 (ru)
JP (4) JP2014523900A (ru)
KR (5) KR20230114318A (ru)
CN (2) CN103917563A (ru)
AU (4) AU2012275287B2 (ru)
BR (1) BR112013033799A2 (ru)
CA (2) CA3132298A1 (ru)
CY (1) CY1122195T1 (ru)
DK (1) DK2726092T3 (ru)
ES (1) ES2746052T3 (ru)
HR (1) HRP20191652T1 (ru)
HU (1) HUE046156T2 (ru)
IL (2) IL230209B (ru)
IN (1) IN2013MN02441A (ru)
LT (1) LT2726092T (ru)
ME (1) ME03473B (ru)
MX (1) MX356517B (ru)
NZ (1) NZ744257A (ru)
PL (1) PL2726092T3 (ru)
PT (1) PT2726092T (ru)
RS (1) RS59368B1 (ru)
RU (5) RU2698655C2 (ru)
SG (2) SG10201811256QA (ru)
SI (1) SI2726092T1 (ru)
UA (1) UA124083C2 (ru)
WO (1) WO2013003641A2 (ru)

Families Citing this family (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2012272636A1 (en) 2011-06-24 2013-05-02 Advent Bio Holdings Llc Compositions, methods and uses for alpha-1 antitrypsin fusion molecules
RS59368B1 (sr) * 2011-06-28 2019-11-29 Inhibrx Lp Fuzioni polipeptidi na bazi serpina i postupci za njihovu upotrebu
US8986688B2 (en) * 2011-06-28 2015-03-24 Inhibrx, Llc WAP domain fusion polypeptides and methods of use thereof
US10400029B2 (en) * 2011-06-28 2019-09-03 Inhibrx, Lp Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
AU2013202648B2 (en) * 2012-01-10 2016-05-19 Konkuk University Compositions, methods and uses for alpha-1 antitrypsin fusion molecules
WO2013156054A1 (en) * 2012-04-16 2013-10-24 Universität Stuttgart The igm and ige heavy chain domain 2 as covalently linked homodimerization modules for the generation of fusion proteins with dual specificity
KR101509020B1 (ko) * 2013-05-22 2015-04-14 (주)입디 알파 1 안티트립신 융합 분자에 대한 조성물, 방법 및 용도
EP3155117A4 (en) * 2014-06-11 2017-11-22 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Alpha1-antitrypsin compositions and methods of treating autoimmune diseases
EP3709019A1 (en) * 2014-07-23 2020-09-16 Inova Diagnostics, Inc. Compositions and methods for the diagnosis of rheumatoid arthritis
JP6737781B2 (ja) * 2014-10-27 2020-08-12 インヒブルクス，インコーポレイティド セルピン融合ポリペプチド及びその使用方法
US20160130324A1 (en) * 2014-10-31 2016-05-12 Shire Human Genetic Therapies, Inc. C1 Inhibitor Fusion Proteins and Uses Thereof
US11422719B2 (en) * 2016-09-15 2022-08-23 Pure Storage, Inc. Distributed file deletion and truncation
US20200102575A1 (en) * 2017-03-29 2020-04-02 Cornel! University Oxidation-resistant aat gene therapy
EP3657946A4 (en) * 2017-07-27 2021-04-07 The Regents of The University of Michigan PLASMINOGEN ACTIVATOR INHIBITOR 1 (PAI-1) INHIBITOR AND METHOD OF APPLICATION
JP2021505545A (ja) 2017-12-01 2021-02-18 シーエスエル・ベーリング・エルエルシー 造血細胞移植後の急性移植片対宿主病の発症のリスクを低減する方法
CN113286816A (zh) * 2018-10-29 2021-08-20 斯宾疗法有限责任公司 用于α-1-抗胰蛋白酶病症的组合物和方法
JP2022542519A (ja) * 2019-08-01 2022-10-04 サープラス テクノロジー エルエルシー 酸化耐性セルピン
CN112341538A (zh) * 2020-10-27 2021-02-09 苏州复融生物技术有限公司 一种Fc单体多肽及其应用
EP4284926A1 (en) * 2021-01-26 2023-12-06 National Research Council of Canada Ace2-receptor ectodomain fusion molecules and uses thereof
GB202102258D0 (en) 2021-02-17 2021-03-31 Arecor Ltd Novel composition
WO2023122120A1 (en) * 2021-12-22 2023-06-29 The Regents Of The University Of California Compositionsand methods for wound healing
TW202409072A (zh) 2022-05-16 2024-03-01 美商英伊布里克斯公司 用於治療個體的α－１抗胰蛋白酶（ＡＡＴ）缺乏症之方法的重組絲胺酸蛋白酶抑制劑（ｓｅｒｐｉｎ）－Ｆｃ融合蛋白之有效劑量

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2002050287A2 (en) * 2000-12-18 2002-06-27 Arriva Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional protease inhibitors and their use in treatment of disease
US20030040097A1 (en) * 1999-03-01 2003-02-27 Human Genome Sciences, Inc. Serpin polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US20030073217A1 (en) * 2000-12-18 2003-04-17 Barr Philip J. Multifunctional protease inhibitors and their use in treatment of disease
WO2004039397A1 (en) * 2002-10-30 2004-05-13 Switch Biotech Ag Use of alpha 1-antichymotrypsin polypeptides, or nucleic acids encoding them, in combination with alpha 1-antitrypsin polypeptides, or nucleic acids encoding them, for treatment and/or prevention of diabetes-associated and/or arterial poorly healing wounds
RU2232760C2 (ru) * 1998-10-23 2004-07-20 Акцо Нобель Н.В. Ингибитор сериновых протеаз и фармацевтическая композиция на его основе
US20060040867A1 (en) * 1999-03-05 2006-02-23 Leland Shapiro Inhibitors of serine protease activity and their use in methods and compositions for treatment of bacterial infections

Family Cites Families (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
US4522811A (en) 1982-07-08 1985-06-11 Syntex (U.S.A.) Inc. Serial injection of muramyldipeptides and liposomes enhances the anti-infective activity of muramyldipeptides
US7253264B1 (en) 1990-06-28 2007-08-07 Sanofi-Arentideutschland GmbH Immunoglobulin fusion proteins, their production and use
DE122009000019I1 (de) 1991-04-25 2009-07-16 Chugai Seiyaku K K 5 1 Rekombinierte humane antikörper gegen den humanen interleukin-6 rezeptor
US5734014A (en) * 1992-08-11 1998-03-31 Tsumura & Co. Elafin derivative
US5595756A (en) 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
GB9526733D0 (en) 1995-12-30 1996-02-28 Delta Biotechnology Ltd Fusion proteins
US6737056B1 (en) * 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
ATE330967T1 (de) 1999-07-02 2006-07-15 Genentech Inc An her2 bindende peptidverbindungen
EP1244685A4 (en) 1999-12-01 2003-05-07 Human Genome Sciences Inc FOUR POLYNUCLEOTIDES CONTAINING A DISULFIDE CORE DOMAIN (FDCD), POLYPEPTIDES, AND ANTIBODIES
CA2405709A1 (en) 2000-04-12 2001-10-25 Human Genome Sciences, Inc. Albumin fusion proteins
FR2814957B1 (fr) 2000-10-06 2002-12-20 Aventis Pasteur Composition vaccinale et procede de stabilisation
US20050101632A1 (en) * 2000-11-08 2005-05-12 Lyne Gagnon Method for the treatment of inflammation
SI1355942T1 (sl) 2000-12-07 2009-02-28 Lilly Co Eli Glp-1 fuzijski proteini
EP1355919B1 (en) * 2000-12-12 2010-11-24 MedImmune, LLC Molecules with extended half-lives, compositions and uses thereof
AU2002335930B2 (en) 2001-03-09 2005-07-28 Morphosys Ag Serum albumin binding moieties
US7270960B2 (en) * 2001-08-29 2007-09-18 Pacific Northwest Research Institute Diagnosis of ovarian carcinomas
US6797493B2 (en) 2001-10-01 2004-09-28 Lee-Hwei K. Sun Fc fusion proteins of human granulocyte colony-stimulating factor with increased biological activities
US20080194481A1 (en) * 2001-12-21 2008-08-14 Human Genome Sciences, Inc. Albumin Fusion Proteins
US7317091B2 (en) 2002-03-01 2008-01-08 Xencor, Inc. Optimized Fc variants
US7365168B2 (en) 2002-10-15 2008-04-29 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7217797B2 (en) 2002-10-15 2007-05-15 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US7427595B1 (en) * 2002-12-12 2008-09-23 Cornell Research Foundation, Inc. Use of proepithelin to promote wound repair and reduce inflammation
DE10303664A1 (de) * 2003-01-23 2004-08-12 Nemod Immuntherapie Ag Erkennungsmoleküle zur Behandlung und Detektion von Tumoren
US20090010920A1 (en) 2003-03-03 2009-01-08 Xencor, Inc. Fc Variants Having Decreased Affinity for FcyRIIb
WO2004110472A2 (en) 2003-06-12 2004-12-23 Eli Lilly And Company Fusion proteins
CA2536918A1 (en) 2003-08-26 2005-03-03 Leland Shapiro Compositions of, and methods for, alpha-1 antitrypsin fc fusion molecules
ATE522548T1 (de) * 2003-11-13 2011-09-15 Hanmi Holdings Co Ltd Verfahren zur massenproduktion der konstanten region von immunglobulin
US8110665B2 (en) 2003-11-13 2012-02-07 Hanmi Holdings Co., Ltd. Pharmaceutical composition comprising an immunoglobulin FC region as a carrier
US7914771B2 (en) * 2004-03-09 2011-03-29 Arriva Pharmaceuticals, Inc. Treatment of chronic obstructive pulmonary disease by low dose inhalation of protease inhibitor
EP2360186B1 (en) 2004-04-13 2017-08-30 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
WO2005113606A2 (en) 2004-05-13 2005-12-01 Eli Lilly And Company Fgf-21 fusion proteins
EP1781700B1 (en) 2004-08-03 2014-03-19 TransTech Pharma, LLC Rage fusion proteins and methods of use
WO2007011363A2 (en) 2004-08-11 2007-01-25 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain fusion proteins
US7399746B2 (en) 2004-10-06 2008-07-15 Mcgill University Agents for wound healing
US8802820B2 (en) 2004-11-12 2014-08-12 Xencor, Inc. Fc variants with altered binding to FcRn
DK2325207T3 (en) 2004-11-12 2017-06-06 Xencor Inc Fc variants with altered binding to FcRn
WO2006113665A2 (en) * 2005-04-15 2006-10-26 Macrogenics, Inc. Covalent diabodies and uses thereof
ES2523666T3 (es) 2005-05-31 2014-11-28 Board Of Regents, The University Of Texas System Anticuerpos IgG1 con la parte Fc mutada para el aumento de unión al receptor FcRn y usos de los mismos
JP4067557B2 (ja) 2005-06-03 2008-03-26 持田製薬株式会社 抗ｃｄ１４抗体融合蛋白質
EP2083081A1 (en) 2005-07-22 2009-07-29 Five Prime Therapeutics, Inc. Compositions and methods of treating disease with FGFR fusion proteins
CA2618951A1 (en) 2005-08-12 2007-02-22 Schering Corporation Mcp1 fusions
KR20190006086A (ko) * 2005-11-23 2019-01-16 악셀레론 파마 인코포레이티드 액티빈-ａｃｔｒⅱａ 길항제 및 골 성장을 촉진하기 위한 이들의 용도
US7625564B2 (en) 2006-01-27 2009-12-01 Novagen Holding Corporation Recombinant human EPO-Fc fusion proteins with prolonged half-life and enhanced erythropoietic activity in vivo
EP2012819A2 (en) 2006-03-30 2009-01-14 The Research Foundation Of the City university of New York Stimulation of neuron regeneration by secretory leukocyte protease inhibitor
GB0614780D0 (en) * 2006-07-25 2006-09-06 Ucb Sa Biological products
US20100267932A1 (en) 2006-08-28 2010-10-21 Alex Eon-Duval Process for the purification of fc-fusion proteins
US20110020269A1 (en) 2007-05-08 2011-01-27 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Methods and compositions for modifying t cell immune responses and inflammation
KR101380732B1 (ko) * 2007-05-30 2014-04-10 포항공과대학교 산학협력단 면역글로불린 융합 단백질
KR20100018040A (ko) * 2007-06-06 2010-02-16 도만티스 리미티드 프로테아제 내성 폴리펩티드를 선택하는 방법
US8598315B2 (en) * 2007-10-02 2013-12-03 Research Foundation Of City University Of New York Protein transduction domains derived from secretory leukocyte protease inhibitor
AR064713A1 (es) 2007-12-28 2009-04-22 Consejo Nac Invest Cient Tec Proteina de fusion que se une a transglutaminasas , composiciones que la comprenden , micro- esferas que la comprenden, usos y metodos
AU2009262199B2 (en) 2008-06-27 2012-08-09 Amgen Inc. Ang-2 inhibition to treat multiple sclerosis
CA2731546C (en) * 2008-07-23 2013-11-19 Hanmi Holdings Co., Ltd. A polypeptide complex comprising non-peptidyl polymer having three functional ends
WO2010017198A2 (en) 2008-08-04 2010-02-11 Five Prime Therapeutics, Inc. Fgfr extracellular domain acidic region muteins
SI2786762T1 (sl) 2008-12-19 2019-07-31 Macrogenics, Inc. Kovalentna diatelesa in njihove uporabe
CN105399828B (zh) 2009-04-10 2021-01-15 埃博灵克斯股份有限公司 用于治疗il-6r相关疾病和病症的改进的针对il-6r的氨基酸序列和包含其的多肽
KR101183262B1 (ko) * 2009-04-22 2012-09-14 (주)알테오젠 체내 지속성을 유지함으로 체내 반감기가 증가된 단백질 또는 펩티드 융합체, 및 이를 이용하여 체내 반감기를 증가시키는 방법
SE533763C2 (sv) 2009-05-04 2010-12-28 Lars Hammar Upphängningsanordning
WO2011005998A1 (en) 2009-07-08 2011-01-13 The Curators Of The University Of Missouri Method to develop high oleic acid soybeans using conventional soybean breeding techniques
PL2498799T3 (pl) 2009-11-13 2017-03-31 Five Prime Therapeutics, Inc. Zastosowanie białek domeny zewnątrzkomórkowej FGFR1 do leczenia nowotworów charakteryzujących się mutacjami aktywującymi zależnymi od ligandów w FGFR2
GB201003559D0 (en) 2010-03-03 2010-04-21 Proteo Biotech Ag Novel use of elafin
EP2588140A4 (en) 2010-06-30 2015-07-15 Univ Maryland DENTAL COMPOUNDS WITH NANOPARTICLES OF AMORPHIC CALCIUM PHOSPHATE
NZ612379A (en) 2010-12-23 2014-10-31 Janssen Biotech Inc Active protease-resistant antibody fc mutants
EP3590965A1 (en) 2011-03-29 2020-01-08 Roche Glycart AG Antibody fc variants
EP2537864B1 (en) 2011-06-24 2019-08-07 Laboratoire Français du Fractionnement et des Biotechnologies Fc variants with reduced effector functions
AU2012272636A1 (en) 2011-06-24 2013-05-02 Advent Bio Holdings Llc Compositions, methods and uses for alpha-1 antitrypsin fusion molecules
US10400029B2 (en) 2011-06-28 2019-09-03 Inhibrx, Lp Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
RS59368B1 (sr) 2011-06-28 2019-11-29 Inhibrx Lp Fuzioni polipeptidi na bazi serpina i postupci za njihovu upotrebu
US8986688B2 (en) 2011-06-28 2015-03-24 Inhibrx, Llc WAP domain fusion polypeptides and methods of use thereof
KR102061355B1 (ko) * 2011-07-01 2019-12-31 바이오젠 엠에이 인코포레이티드 아르기닌-없는 tnfr : fc-융합 폴리펩티드 조성물 및 이용 방법
AU2013202648B2 (en) 2012-01-10 2016-05-19 Konkuk University Compositions, methods and uses for alpha-1 antitrypsin fusion molecules
EP2863954A1 (en) 2012-06-21 2015-04-29 Indiana University Research and Technology Corporation Incretin receptor ligand polypeptide fc-region fusion polypeptides and conjugates with altered fc-effector function
WO2014001325A1 (en) 2012-06-27 2014-01-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Method for making antibody fc-region conjugates comprising at least one binding entity that specifically binds to a target and uses thereof
SI2880170T1 (sl) 2012-08-02 2016-12-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Postopek za proizvodnjo topnega FCR kot FC-fuzije z inertno imunoglobulinsko FC-regijo in uporabe le-tega
WO2014089375A1 (en) 2012-12-05 2014-06-12 Boston Strategics Corporation Protein expression enhancing polypeptides
CN203917563U (zh) 2014-03-27 2014-11-05 陈广煌 一种切角模具
EP3155117A4 (en) * 2014-06-11 2017-11-22 Beth Israel Deaconess Medical Center, Inc. Alpha1-antitrypsin compositions and methods of treating autoimmune diseases

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2232760C2 (ru) * 1998-10-23 2004-07-20 Акцо Нобель Н.В. Ингибитор сериновых протеаз и фармацевтическая композиция на его основе
US20030040097A1 (en) * 1999-03-01 2003-02-27 Human Genome Sciences, Inc. Serpin polynucleotides, polypeptides, and antibodies
US20060040867A1 (en) * 1999-03-05 2006-02-23 Leland Shapiro Inhibitors of serine protease activity and their use in methods and compositions for treatment of bacterial infections
WO2002050287A2 (en) * 2000-12-18 2002-06-27 Arriva Pharmaceuticals, Inc. Multifunctional protease inhibitors and their use in treatment of disease
US20030073217A1 (en) * 2000-12-18 2003-04-17 Barr Philip J. Multifunctional protease inhibitors and their use in treatment of disease
WO2004039397A1 (en) * 2002-10-30 2004-05-13 Switch Biotech Ag Use of alpha 1-antichymotrypsin polypeptides, or nucleic acids encoding them, in combination with alpha 1-antitrypsin polypeptides, or nucleic acids encoding them, for treatment and/or prevention of diabetes-associated and/or arterial poorly healing wounds

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NOCENTINI G et. al. "Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor-related (GITR)-Fc fusion protein inhibits GITR triggering and protects from the inflammatory response after spinal cord injury" Mol Pharmacol 2008, pp. 1610-21. *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2020078325A (ja) 2020-05-28
US20130011398A1 (en) 2013-01-10
HUE046156T2 (hu) 2020-02-28
ME03473B (me) 2020-01-20
US8980266B2 (en) 2015-03-17
PT2726092T (pt) 2019-10-08
AU2012275287A1 (en) 2014-01-16
SG10201811256QA (en) 2019-01-30
US20210002352A1 (en) 2021-01-07
EP2726092B1 (en) 2019-06-19
EP3569243A1 (en) 2019-11-20
AU2021202131A1 (en) 2021-05-06
RU2017145308A3 (ru) 2019-02-18
UA124083C2 (uk) 2021-07-21
US11965017B2 (en) 2024-04-23
IL276534A (en) 2020-09-30
KR20200027041A (ko) 2020-03-11
JP6674604B2 (ja) 2020-04-01
CA3132298A1 (en) 2013-01-03
PL2726092T3 (pl) 2019-11-29
US20150147325A1 (en) 2015-05-28
JP2022109968A (ja) 2022-07-28
RU2698655C2 (ru) 2019-08-28
RU2727452C1 (ru) 2020-07-21
JP2018008956A (ja) 2018-01-18
CY1122195T1 (el) 2020-11-25
AU2012275287B2 (en) 2017-10-05
RU2642310C2 (ru) 2018-01-24
NZ619023A (en) 2015-07-31
DK2726092T3 (da) 2019-09-30
EP2726092A2 (en) 2014-05-07
RU2014102583A (ru) 2015-08-10
RS59368B1 (sr) 2019-11-29
AU2019202904A1 (en) 2019-05-16
CN110551223A (zh) 2019-12-10
EP2726092A4 (en) 2015-08-19
NZ744257A (en) 2022-10-28
KR102084944B1 (ko) 2020-04-17
CA2839619A1 (en) 2013-01-03
KR20210032558A (ko) 2021-03-24
WO2013003641A2 (en) 2013-01-03
AU2017279724B2 (en) 2019-03-14
MX356517B (es) 2018-06-01
SI2726092T1 (sl) 2019-11-29
US20180179264A1 (en) 2018-06-28
SG10201601621PA (en) 2016-04-28
AU2019202904B2 (en) 2021-01-07
CN103917563A (zh) 2014-07-09
RU2017145308A (ru) 2019-02-18
CN110066340A (zh) 2019-07-30
KR20230114318A (ko) 2023-08-01
US20210024613A1 (en) 2021-01-28
AU2017279724A1 (en) 2018-01-25
RU2020124172A (ru) 2022-01-21
US20130330769A1 (en) 2013-12-12
US10730929B2 (en) 2020-08-04
HRP20191652T1 (hr) 2019-12-13
JP2014523900A (ja) 2014-09-18
US10723785B2 (en) 2020-07-28
WO2013003641A3 (en) 2013-03-21
US20200102371A1 (en) 2020-04-02
IL230209B (en) 2020-08-31
CA2839619C (en) 2021-11-16
ES2746052T3 (es) 2020-03-04
AU2021202131B2 (en) 2023-01-12
BR112013033799A2 (pt) 2017-02-14
KR20140054000A (ko) 2014-05-08
MX2013015323A (es) 2014-06-23
KR102231139B1 (ko) 2021-03-24
LT2726092T (lt) 2019-10-10
KR20220003656A (ko) 2022-01-10
US11827691B2 (en) 2023-11-28
IN2013MN02441A (ru) 2015-06-12
US9920109B2 (en) 2018-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2728861C1 (ru) Слитые серпиновые полипептиды и способы их применения
RU2639526C2 (ru) Слитые полипептиды, содержащие домен wap, и способы их применения
JP6737781B2 (ja) セルピン融合ポリペプチド及びその使用方法
CN110066340B (zh) 丝氨酸蛋白酶抑制蛋白融合多肽及其使用方法
NZ619023B2 (en) Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof
NZ727846B2 (en) Serpin fusion polypeptides and methods of use thereof