RU2726555C1 - Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах - Google Patents
Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах Download PDFInfo
- Publication number
- RU2726555C1 RU2726555C1 RU2019133084A RU2019133084A RU2726555C1 RU 2726555 C1 RU2726555 C1 RU 2726555C1 RU 2019133084 A RU2019133084 A RU 2019133084A RU 2019133084 A RU2019133084 A RU 2019133084A RU 2726555 C1 RU2726555 C1 RU 2726555C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- control sample
- bacteriophage
- donkey
- donk
- dna
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой тест-систему для идентификации ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающую буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов, специфичных для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×10фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:T4F TACATATAAATCACGCAAAGC - прямой праймерT4R TAGTATGGCTAATCTTATTGG - обратный праймерТ4Р FAM ACATTGGCACTGACCGAGTTC BHQ1 - зонд,взятых в объемном соотношении 1:1, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца используют фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и домашнего осла (Equus asinus) со следующей нуклеотидной последовательностью:Donk F: 5'-CATATCTTAATCCCAATAATAGAC-3' - прямой праймерDonk R: 5'-AGTATTCGTTCTGATATAGGC-3' - обратный праймерDonk P: FAM-5'-ATCTTATACTGGACTATTCTATCGAC-3 - BHQ1 - зонд. Изобретение используется для расширения функциональных возможностей и повышения точности идентификации видовой принадлежности, упрощения процесса подготовки образцов. 5 табл.
Description
Изобретение относится к ветеринарной микробиологии, в частности к методам определения видовой принадлежности мяса с помощью полимеразной цепной реакции.
Известно использование набора, состоящего из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, контрольных образцов для ПЦР в реальном времени для определения ДНК животных - лошади, коровы, свиньи, осла, курицы, индейки, кошки, собаки и кролика (https://stylab.ru/netcat_files/userfiles/Files/Articles/Meat/Meat_1_04_2013.pdf.).
Наиболее близким по технической сущности является техническое решение (патент РФ №2680094, кл. C12Q 1/68, G01N 33/569, 2019 г.), включающий буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащих фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:
T4F TACATATAAATCACGCAAAGC - прямой праймер
T4R TAGTATGGCTAATCTTATTGG - обратный праймер
Т4Р FAM ACATTGGCACTGACCGAGTTC BHQ1 - зонд, взятых в объемном соотношении 1:1.
Недостатком известного технического решения является отсутствие возможности выявления ДНК ткани домашнего осла в кормах и пищевых продуктах, недостаточная точность из-за использования суспензии бактериофага, которая требует предварительную обработку, включая центрифугирование, концентрирование и перевод в определенный буферный раствор, что влечет за собой значительную трудоемкость и финансовые затраты, а также использование генома бактериофага Т4 с возможными повреждениями, после исследования, что также влияет на точность выявления объекта.
Техническим результатом является расширение функциональных возможностей и повышение точности идентификации видовой принадлежности, упрощение процесса подготовки и уменьшение стоимости этого процесса.
Техническим результатом является повышение точности идентификации видовой принадлежности ткани домашнего осла, упрощение процесса подготовки и уменьшение его стоимости.
Технический результат достигается тем, что в тест-системе выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающей буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящая из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонук-леотидных праймеров и флуоресцентных зондов специфичные для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагмент генома животного и фрагмент генома бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:
T4F TACATATAAATCACGCAAAGC - прямой праймер
T4R TAGTATGGCTAATCTTATTGG - обратный праймер
Т4Р FAM ACATTGGCACTGACCGAGTTC BHQ1 - зонд, взятых в объемном соотношении 1:1, согласно изобретению для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца - фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и ткани домашнего осла (Equus asinus) со следующей нуклеотидной последовательностью:
Donk F: 5'-CATATCTTAATCCCAATAATAGAC-3' - прямой праймер
Donk R: 5'-AGTATTCGTTCTGATATAGGC-3' - обратный праймер
Donk P: FAM-5'-ATCTTATACTGGACTATTCTATCGAC-3 - BHQ1 - зонд.
Новизна заявляемой тест-системы состоит в идентификации видовой принадлежности ткани домашнего осла с помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени с использованием в контрольных образцах разных видов бактериофага Т4, что в свою очередь позволяет с высокой точностью определить наличие их ингредиентов в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах.
Признаки, отличающие заявляемое техническое решение от прототипа, направлены на достижение технического результата и не выявлены при изучении данной и смежной областей науки и техники и, следовательно, соответствуют критерию «изобретательский уровень».
Заявляемую тест-систему рекомендовано использовать в специализированных ветеринарных, санитарно-эпидемиологических, животноводческих, сельскохозяйственных предприятиях, что соответствует критерию «промышленная применимость».
Тест-система для идентификации ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах реализуется следующим образом.
Для исследования сухих кормов и мясных полуфабрикатов на содержание ДНК ткани домашнего осла проводят полимеразную цепную реакцию с флуоресцентной детекцией с применением термоциклера типа Rotor-Gene Q при соответствующих температурно-временных режимах амплификации и измеряют накопление флуоресцентных сигналов по каналам соответствующих флуоресцентных красителей: FAM/Green для специфического сигнала для ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) и Cy5/Red - для внутреннего контрольного образца. Интерпретацию результатов проводят на основании наличия или отсутствия пересечения кривой флуоресценции с пороговой линией, если кривые накопления флуоресцентного сигнала выходят до 35 цикла, то результат реакции считается положительным, а если кривые не пересекают пороговую линию или пересекают ее после 35 цикла, то результат реакции - отрицательный.
Для повышения точности идентификации ткани осла для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 копий нуклеотидных последовательностей на 1 мкл, если концентрация копий нуклеотидных последовательностей отклоняется в большую или меньшую сторону, то наблюдаются повторности сомнительных образцов. Для положительного контрольного образца используют смесь содержащую фрагменты геномов ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) и нативного бактериофага Т4, взятых в соотношении 1:1 со следующими нуклеотидными последовательностями:
Donk F: 5'-CATATCTTAATCCCAATAATAGAC-3' - прямой праймер
Donk R: 5'-AGTATTCGTTCTGATATAGGC-3' - обратный праймер
Donk P: FAM-5'-ATCTTATACTGGACTATTCTATCGAC-3 - BHQ1 - зонд
T4F TACATATAAATCACGCAAAGC - прямой праймер
T4R TAGTATGGCTAATCTTATTGG - обратный праймер
Т4Р FAM ACATTGGCACTGACCGAGTTC BHQ1 - зонд.
Использование для разных видов контроля различные формы материала бактериофага Т4: фаголизата и фрагмента генома нативного бактериофага Т4 со специфическими к нему праймерами и зондом обусловлено тем, что это позволяет контролировать корректное прохождение реакции в каждой пробирки, а также контролируется этап выделения ДНК из образцов. Кроме того, использование фаголизата бактериофага Т4, представляющего собой суспензию бактериофага, полученную после лизиса зараженных фагом клеток ткани, повышает чувствительность и упрощает процесс идентификации ткани домашнего осла в продуктах. Использование нативного бактериофага, т.е. неповрежденного при исследовании, улучшает синтез ДНК, что также улучшает качество процесса идентификации.
При конструировании праймеров и зонда основными требованиями были: степень гомологии (комплементарность) с выбранным участком гена; отсутствие самокоплементарных участков внутри олигонуклеотидов и комплементарности друг другу, чтобы не допускать возникновения устойчивых вторичных структур (димеров); близость значений температуры отжига праймеров.
Конструирование специфических праймеров и зонда осуществляли с помощью компьютерных программ на основании анализа нуклеотидных последовательностей референтных штаммов и изолятов, опубликованных на ресурсе GenBank и подбора условий для проведения ПЦР в реальном времени с применением разработанных праймеров и зонда, несущего флуорофор и тушитель, и комплементарного части амплифицируемого со специфическими праймерами фрагмента.
Праймеры, специфичные для ДНК домашнего осла (Equus asinus) были отобраны на основе нуклеотидной последовательности митохондриального гена (Equus asinus mitochondrion, complete genome Sequence ID: Length: 16813) на участке между 8500 и 8800 нуклеотидами. Код доступа нуклеотидной последовательности в GeneBank NCBI: KT182635.1.
Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы на специфичность с использованием программы BLAST на сервере NCBI. Для детекции продуктов амплификации был подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд Pic Р (комплементарный участку нуклеотидной последовательности, фланкированной позициями для праймеров Donk F и Donk R). На 5'-конец зонда Donk Р добавлен флуоресцентный краситель карбоксифлуоресцеин (FAM). Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР. Выбранные нуклеотидные последовательности:
Donk F: 5'-CATATCTTAATCCCAATAATAGAC-3' - прямой праймер
Donk R: 5'-AGTATTCGTTCTGATATAGGC-3' - обратный праймер
Donk P: FAM-5'-ATCTTATACTGGACTATTCTATCGAC-3 - BHQ1 - зонд.
Ни одна из выбранных последовательностей не обнаружена в геномах каких либо животных и птиц (исключая Equus asinus) и любых видов растений, которые потенциально могут быть использованы при производстве кормов и пищевых продуктов.
В качестве внутреннего контроля использовался бактериофаг Т4, имеющий геномную ДНК порядка 170 тысяч пар нуклеотидов (Enterobacteria phage Т4Т, complete genome GenBank: HM137666.1). В результате анализа был выбран участок между 400 и 600 нуклеотидами, содержащий уникальные нуклеотидные последовательности, рассчитаны первичные структуры олигонуклеотидных праймеров, фланкирующих выбранный участок генома. Праймеры были спроектированы с использованием Primer Express Software v3.0 (Applied Biosystems) и исследованы на специфичность с использованием программы BLAST на сервере NCBI.
T4F: 5'-TACATATAAATCACGCAAAGC-3' - прямой праймер
T4R: 5'-TAGTATGGCTAATCTTATTGG-3' - обратный праймер
Т4Р: HEX-5'-ACATTGGCACTGACCGAGTTC-3'-BHQ1 - зонд.
Для детекции продуктов амплификации подобран олигонуклеотидный флуоресцентно-меченный зонд Т4Р, комплементарный участку нуклеотидной последовательности, ограниченной позициями отжига праймеров T4F и T4R. Зонд был помечен красителем HEX. Используя программу "Oligo 6.0" описаны основные свойства рассчитанных олигонуклеотидов, определившие возможность их использования в ПЦР.
Пример конкретного использования тест системы выявления ткани домашнего осла.
Для подтверждения эффективности тест системы были использованы сухие корма в виде рыбной и мясной муки; сырые и термически обработанные мясные продукты, т.е. мясные полуфабрикаты.
От пробы плотной консистенции отбирают на исследование общую пробу весом 10-50 г. Гранулированную или консервированную продукцию перед исследованием (10-20 г) растирают в ступке до гомогенного состояния.
Лабораторные пробы (20-40 мг) отбирают на исследование в одноразовые микропробирки вместимостью 1,5 мл в двух повторах. Отобранные лабораторные пробы направляют на выделения ДНК.
Исследование проводят с помощью набора реагентов «ПЦР-ОСЕЛ-ФАКТОР». Набор состоит из комплекта реагентов для проведения мультиплексной ПЦР (комплект №1) и комплекта контрольных образцов (комплект №2). Набор выпускается в двух вариантах: 1) Для анализа 55 образцов (включая контрольные образцы)
2) Для анализа 110 образцов (включая контрольные образцы). Наборы используют в соответствии с инструкцией по применению набора реагентов «ПЦР-ОСЕЛ-ФАКТОР» для определения ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с флуоресцентной детекцией в РВ ТУ 21.10.60-163-51062356-2018, для диагностики in vitro, http://www.vetfaktor.ru/.
Состав набора приведен в Таблицах 1 и 2.
Исследования состоит из трех этапов:
• экстракция нуклеиновая кислота (НК);
• проведение реакции ПЦР РВ;
• учет результатов анализа.
Для экстракции (выделение) НК из исследуемых проб отбирают необходимое количество одноразовых пробирок объемом 1,5 мл, включая отрицательный контроль выделения. Во все пробирки с исследуемыми образцами, включая пробирку для отрицательного контрольного образца (ОКО), вносят по 10 мкл внутреннего контрольного образца (ВКО) для ткани домашнего осла в качестве которого, используют фаголизат бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл.
Следующий этап это подготовка образцов к проведению ПЦР.
Общий объем реакционной смеси - 25 мкл, объем ДНК-пробы - 10 мкл.
Успешное прохождение реакции контролируют использованием положительного контрольного образца (ПКО) ОСЕЛ, ВКО ОСЕЛ и ДНК буфера. В качестве ПКО используют смесь содержащую фрагменты геномов ткани домашнего осла и нативного бактериофага Т4 взятых в соотношении 1:1.
В отдельной пробирке смешать компоненты набора из расчета на каждую реакцию:
5 мкл ПЦР СМЕСЬ ОСЕЛ;
10 мкл ПЦР БУФЕР ОСЕЛ;
0,5 мкл TAQ POLYMERASE
Перемешивают смесь на вортексе и сбросывают капли кратковременным центрифугированием.
Отбирают необходимое количество пробирок для амплификации ДНК исследуемых и контрольных проб. Вносят по 15 мкл приготовленной реакционной смеси.
Помещают подготовленные для проведения ПНР пробирки в ячейки амплификатора и используют программное обеспечение прибора. Далее проводят ПЦР РВ с флуоресцентной детекцией.
Параметры температурно-временного режима амплификации на приборе «Rotor-Gene Q» представлены в таблице 3.
Интерпретация результатов анализа.
Полученные данные - кривые накопления флуоресцентного сигнала анализируются с помощью программного обеспечения используемого прибора для проведения ПЦР в соответствии с инструкцией производителя к прибору.
Учет результатов ПЦР РВ проводится по наличию или отсутствию пересечения кривой флуоресценции с установленной на соответствующем уровне пороговой линией (что соответствует наличию или отсутствию значения порогового цикла «Ct» для исследуемого образца).
Результат считается достоверным в случае корректного прохождения положительных и отрицательных контролей амплификации и экстракции ДНК в соответствии с таблицей 4.
Появление любого значения Ct в таблице 4 результатов для отрицательного контроля этапа экстракции ВК- на канале FAM/Green и для отрицательного контроля этапа ПЦР К- на любом из каналов свидетельствует о наличии контаминации реактивов или образцов. В этом случае результаты анализа для всех проб считаются недействительными. Требуется повторить анализ всех проб, а также предпринять меры по выявлению и ликвидации источника контаминации. Образцы, для которых значение Ct по каналу Cy5/Red отсутствует или превышает 35 цикл (и при этом не получен положительный результат на канале FAM/Green) требуют повторного проведения исследования с этапа экстракции ДНК. Задержка в значениях пороговых циклов для исследуемых образцов указывает на присутствие ингибиторов в пробе(ах) или на ошибки при экстракции ДНК или при постановке реакции ПЦР РВ. В образце обнаружена ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus), если наблюдается экспоненциальный рост сигнала на канале FAM/Green, при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 4).
Если для исследуемого образца по каналам FAM/Green значение Ct определяется позднее 37 цикла при корректном прохождении положительных и отрицательных контролей, образец исследуется повторно с этапа экстракция ДНК. Если при повторной постановке Ct более 37, результат считается отрицательным. Образец считается отрицательным ДНК (Equus asinus) не обнаружена), если не определяется значение Ct (не наблюдается рост специфического сигнала) на канале FAM/Green при этом значения Ct контрольных образцов находятся в пределах нормы (Табл. 4), а значение Ct по каналу Cy5/Red менее 35.
Для исследуемых образцов (мясные полуфабрикаты) предел точности содержания ткани домашнего осла представлен в таблице 5.
Для доказательства эффективности использования ПЦР с флуоресцентной детекцией в режиме реального времени проводился сравнительный анализ чувствительности заявляемой тест системы с прототипом, в котором использовался метод ПЦР с использованием внутреннего контроля в виде суспензии бактериофага, а в заявляемом - использовался фаголизат бактериофага и геном нативного бактериофага. Оказалось чувствительность ПЦР в заявляемой тест-системе при обнаружении примеси ткани домашнего осла в кормах и в мясных фаршах примерно выше в 1,33 раза. Трудоемкость и стоимость процесса определения ДНК ткани животного в кормах и фаршах снизилась на 3,2-3,8%.
Claims (8)
- Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах, включающая буфер для проведения полимеразной цепной реакции, смесь для ее проведения, состоящую из дезоксинуклеозидтрифосфатов, олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентных зондов, специфичных для участка генома животного и для внутреннего контрольного образца; смесь ферментов из ДНК полимеразы с антителами, ингибирующих активность фермента, TAQ POLYMERASE, внутренний контрольный образец в виде суспензии бактериофага Т4 с концентрацией 5×103 фаговых частиц на 1 мкл, отрицательный контрольный образец, представляющий собой смесь рекомбинантных плазмидных ДНК, содержащую фрагменты геномов животного и бактериофага Т4 с нуклеотидной последовательностью:
- T4F TACATATAAATCACGCAAAGC - прямой образец
- T4R TAGTATGGCTAATCTTATTGG - обратный образец
- Т4Р FAM ACATTGGCACTGACCGAGTTC BHQ1 - зонд,
- взятых в объемном соотношении 1:1, отличающаяся тем, что для внутреннего контрольного образца используют фаголизат бактериофага Т4, а для положительного контрольного образца используют фрагменты геномов нативного бактериофага Т4 и домашнего осла (Equus asinus) со следующей нуклеотидной последовательностью:
- Donk F: 5'-CATATCTTAATCCCAATAATAGAC-3' - прямой праймер
- Donk R: 5'-AGTATTCGTTCTGATATAGGC-3' - обратный праймер
- Donk Р: FAM-5'-ATCTTATACTGGACTATTCTATCGAC-3 - BHQ1 - зонд.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019133084A RU2726555C1 (ru) | 2019-10-16 | 2019-10-16 | Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2019133084A RU2726555C1 (ru) | 2019-10-16 | 2019-10-16 | Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2726555C1 true RU2726555C1 (ru) | 2020-07-14 |
Family
ID=71616439
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019133084A RU2726555C1 (ru) | 2019-10-16 | 2019-10-16 | Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2726555C1 (ru) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109593864A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-04-09 | 北京同仁堂科技发展股份有限公司 | 一种鉴定驴源性成分的特异性引物、试剂盒及鉴别方法 |
| CN111763714A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-13 | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种快速鉴定驴、马源成分及制品中驴、马源成分的试剂盒及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106435008A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-02-22 | 河南科技大学 | 用于检测鹌鹑性别的引物、试剂盒及检测方法 |
| CN108624659A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-10-09 | 武汉轻工大学 | 一种检测肉类制品成分的实时定量pcr方法 |
| RU2680094C1 (ru) * | 2018-10-01 | 2019-02-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Тест-система для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) у сельскохозяйственных животных |
-
2019
- 2019-10-16 RU RU2019133084A patent/RU2726555C1/ru active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106435008A (zh) * | 2016-12-26 | 2017-02-22 | 河南科技大学 | 用于检测鹌鹑性别的引物、试剂盒及检测方法 |
| CN108624659A (zh) * | 2018-06-22 | 2018-10-09 | 武汉轻工大学 | 一种检测肉类制品成分的实时定量pcr方法 |
| RU2680094C1 (ru) * | 2018-10-01 | 2019-02-15 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Кубанский государственный аграрный университет имени И.Т. Трубилина" | Тест-система для выявления ДНК возбудителя лептоспироза (Leptospira spp.) у сельскохозяйственных животных |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109593864A (zh) * | 2019-01-16 | 2019-04-09 | 北京同仁堂科技发展股份有限公司 | 一种鉴定驴源性成分的特异性引物、试剂盒及鉴别方法 |
| CN111763714A (zh) * | 2020-07-21 | 2020-10-13 | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种快速鉴定驴、马源成分及制品中驴、马源成分的试剂盒及其应用 |
| CN111763714B (zh) * | 2020-07-21 | 2023-06-13 | 山东省农业科学院畜牧兽医研究所 | 一种快速鉴定驴、马源成分及制品中驴、马源成分的试剂盒及其应用 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2700480C1 (ru) | Тест-система для определения видовой принадлежности тканей кур и свиней в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах | |
| KR101318311B1 (ko) | 식품 중의 돼지고기 함량을 확인하는 방법 | |
| RU2694713C1 (ru) | Способ идентификации видовой принадлежности баранины и говядины в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах | |
| RU2726555C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| CN113186312A (zh) | 一种区分布鲁氏菌a19疫苗株与野毒株的分子标记 | |
| RU2725539C1 (ru) | Тест-система для идентификации ДНК тканей крыс и мышей в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| CN116814857A (zh) | 猫细小病毒及其试剂盒和荧光重组酶聚合酶扩增的方法 | |
| RU2700479C1 (ru) | Способ определения видовой принадлежности тканей кур и свиней в продовольственном сырье, кормах и пищевых продуктах | |
| RU2734035C1 (ru) | Способ идентификации ДНК ткани перепелки обыкновенной (Coturnix coturnix) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2728382C1 (ru) | Тест-система для идентификации ДНК ткани собаки домашней (Canis lupus familiaris) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2728612C1 (ru) | Способ идентификации ДНК ткани собаки домашней (Canis lupus familiaris) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2726433C1 (ru) | Способ идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2726427C1 (ru) | Способ идентификации ДНК ткани медведя (Ursus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2726429C1 (ru) | Тест-система для идентификации ДНК ткани медведя (Ursus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2728662C1 (ru) | Способ идентификации ДНК ткани кошки домашней (Felis silvestris catus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2726248C1 (ru) | Способ выявления ДНК ткани домашнего осла (Equus asinus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2728639C1 (ru) | Тест-система для идентификации ДНК ткани кошки домашней (Felis silvestris catus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2742952C1 (ru) | Способ идентификации видовой принадлежности тканей крыс и мышей в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2726242C1 (ru) | Тест-система для выявления ДНК вируса нодулярного дерматита (LSDV) в биологическом материале животных с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени | |
| RU2725210C1 (ru) | Тест-система для идентификации ДНК ткани перепелки обыкновенной (Coturnix coturnix) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2714287C1 (ru) | Способ определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2725215C1 (ru) | Тест-система для идентификации ДНК ткани ежа обыкновенного (Erinaceus europaeus) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| RU2725216C1 (ru) | Тест-система для определения ДНК ткани дятла (Picidae) в сухих кормах и мясных полуфабрикатах | |
| CN111719020B (zh) | 一种用于检测牛轮状病毒的试剂盒及引物和探针 | |
| RU2822748C1 (ru) | Тест-система идентификации ДНК ткани сайры тихоокеанской (Cololabis saira) в рыбных продуктах, в мясокостной рыбной муке и кормах с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени |