RU2693084C2 - Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) - Google Patents
Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) Download PDFInfo
- Publication number
- RU2693084C2 RU2693084C2 RU2016132757A RU2016132757A RU2693084C2 RU 2693084 C2 RU2693084 C2 RU 2693084C2 RU 2016132757 A RU2016132757 A RU 2016132757A RU 2016132757 A RU2016132757 A RU 2016132757A RU 2693084 C2 RU2693084 C2 RU 2693084C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- violation
- cells
- isolated
- Prior art date
Links
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 title claims abstract description 210
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 title claims abstract description 210
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 56
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 39
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 35
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 33
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims abstract description 15
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 100
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 97
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 97
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 87
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 35
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 28
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 claims description 14
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 claims description 14
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 14
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 claims description 8
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 claims description 7
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 claims description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 7
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 claims description 6
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 claims description 4
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 claims description 4
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims description 4
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 claims description 4
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 claims description 4
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 claims description 3
- 201000009961 allergic asthma Diseases 0.000 claims description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 claims 2
- 101000998953 Homo sapiens Immunoglobulin heavy variable 1-2 Proteins 0.000 claims 2
- 101001008255 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1D-8 Proteins 0.000 claims 2
- 101001047628 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2-29 Proteins 0.000 claims 2
- 101001008321 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 2D-26 Proteins 0.000 claims 2
- 101001047619 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3-20 Proteins 0.000 claims 2
- 101001008263 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 3D-15 Proteins 0.000 claims 2
- 102100036887 Immunoglobulin heavy variable 1-2 Human genes 0.000 claims 2
- 102100022949 Immunoglobulin kappa variable 2-29 Human genes 0.000 claims 2
- 208000008267 Peanut Hypersensitivity Diseases 0.000 claims 2
- 201000010853 peanut allergy Diseases 0.000 claims 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 18
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 abstract 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 69
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 41
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 39
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 36
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 35
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 35
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 33
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 26
- 102000013463 Immunoglobulin Light Chains Human genes 0.000 description 23
- 108010065825 Immunoglobulin Light Chains Proteins 0.000 description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 22
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 18
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 18
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 16
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 14
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 101000998137 Homo sapiens Interleukin-33 Proteins 0.000 description 13
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 13
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 13
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 13
- 102000045906 human IL33 Human genes 0.000 description 13
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 12
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 11
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 11
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 11
- 210000003651 basophil Anatomy 0.000 description 11
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 11
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 10
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 10
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 10
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 8
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 8
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 8
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 8
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 8
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 7
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 6
- 101000852968 Homo sapiens Interleukin-1 receptor-like 1 Proteins 0.000 description 6
- 102100039880 Interleukin-1 receptor accessory protein Human genes 0.000 description 6
- 101710180389 Interleukin-1 receptor accessory protein Proteins 0.000 description 6
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 6
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 6
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 6
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 6
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 6
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 6
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 6
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 6
- 210000003979 eosinophil Anatomy 0.000 description 6
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 102000055002 human IL1RL1 Human genes 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 6
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 5
- 108010002335 Interleukin-9 Proteins 0.000 description 5
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 5
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 5
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 5
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 5
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 5
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 5
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 5
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 4
- -1 Aromatic amino acid Chemical class 0.000 description 4
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 4
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 4
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000009697 arginine Nutrition 0.000 description 4
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 4
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 4
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 4
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000004554 glutamine Nutrition 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108091054455 MAP kinase family Proteins 0.000 description 3
- 102000043136 MAP kinase family Human genes 0.000 description 3
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 125000003118 aryl group Chemical group 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 3
- 230000002327 eosinophilic effect Effects 0.000 description 3
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 3
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 3
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 3
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000012099 Alexa Fluor family Substances 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical group N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000012657 Atopic disease Diseases 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 2
- 206010010356 Congenital anomaly Diseases 0.000 description 2
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 2
- 201000004624 Dermatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 241000283074 Equus asinus Species 0.000 description 2
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 241000701044 Human gammaherpesvirus 4 Species 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 102000045959 Interleukin-1 Receptor-Like 1 Human genes 0.000 description 2
- 108700003107 Interleukin-1 Receptor-Like 1 Proteins 0.000 description 2
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091007491 NSP3 Papain-like protease domains Proteins 0.000 description 2
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 2
- 241000235070 Saccharomyces Species 0.000 description 2
- 206010039710 Scleroderma Diseases 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N Tamoxifen Chemical compound C=1C=CC=CC=1C(/CC)=C(C=1C=CC(OCCN(C)C)=CC=1)/C1=CC=CC=C1 NKANXQFJJICGDU-QPLCGJKRSA-N 0.000 description 2
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 2
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 2
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000000975 co-precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002354 daily effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 2
- 230000003511 endothelial effect Effects 0.000 description 2
- 230000005714 functional activity Effects 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 2
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 2
- 230000013011 mating Effects 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 229940021182 non-steroidal anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 2
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 2
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001766 physiological effect Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 2
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 2
- 230000019491 signal transduction Effects 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 2
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 2
- 210000000264 venule Anatomy 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- IEJPPSMHUUQABK-UHFFFAOYSA-N 2,4-diphenyl-4h-1,3-oxazol-5-one Chemical compound O=C1OC(C=2C=CC=CC=2)=NC1C1=CC=CC=C1 IEJPPSMHUUQABK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035285 Allergic Seasonal Rhinitis Diseases 0.000 description 1
- 206010002556 Ankylosing Spondylitis Diseases 0.000 description 1
- 244000105624 Arachis hypogaea Species 0.000 description 1
- BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N Aspirin Chemical compound CC(=O)OC1=CC=CC=C1C(O)=O BSYNRYMUTXBXSQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010003645 Atopy Diseases 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 description 1
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000193764 Brevibacillus brevis Species 0.000 description 1
- 102100024167 C-C chemokine receptor type 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710149862 C-C chemokine receptor type 3 Proteins 0.000 description 1
- 101100395863 Caenorhabditis elegans hst-2 gene Proteins 0.000 description 1
- 101100352418 Caenorhabditis elegans plp-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100035904 Caspase-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000426 Caspase-1 Proteins 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 208000006545 Chronic Obstructive Pulmonary Disease Diseases 0.000 description 1
- 101100007328 Cocos nucifera COS-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000723382 Corylus Species 0.000 description 1
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 description 1
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N D-Luciferin Chemical compound OC(=O)[C@H]1CSC(C=2SC3=CC=C(O)C=C3N=2)=N1 IGXWBGJHJZYPQS-SSDOTTSWSA-N 0.000 description 1
- 230000007067 DNA methylation Effects 0.000 description 1
- CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N Dehydro-luciferin Natural products OC(=O)C1=CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 CYCGRDQQIOGCKX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 102100024746 Dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N Epihygromycin Natural products OC1C(O)C(C(=O)C)OC1OC(C(=C1)O)=CC=C1C=C(C)C(=O)NC1C(O)C(O)C2OCOC2C1O YQYJSBFKSSDGFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000588698 Erwinia Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 108091092566 Extrachromosomal DNA Proteins 0.000 description 1
- 229920001917 Ficoll Polymers 0.000 description 1
- BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N Fivefly Luciferin Natural products OC(=O)C1CSC(C=2SC3=CC(O)=CC=C3N=2)=N1 BJGNCJDXODQBOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 206010018364 Glomerulonephritis Diseases 0.000 description 1
- 239000007995 HEPES buffer Substances 0.000 description 1
- 206010019668 Hepatic fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 101000690301 Homo sapiens Aldo-keto reductase family 1 member C4 Proteins 0.000 description 1
- 101001033279 Homo sapiens Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 101001055222 Homo sapiens Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 1
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 1
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 1
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 1
- 101001116548 Homo sapiens Protein CBFA2T1 Proteins 0.000 description 1
- 101000845170 Homo sapiens Thymic stromal lymphopoietin Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 102000039996 IL-1 family Human genes 0.000 description 1
- 108091069196 IL-1 family Proteins 0.000 description 1
- HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N Ibuprofen Chemical compound CC(C)CC1=CC=C(C(C)C(O)=O)C=C1 HEFNNWSXXWATRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000009794 Idiopathic Pulmonary Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 208000005016 Intestinal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 206010023421 Kidney fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000235649 Kluyveromyces Species 0.000 description 1
- 241000235058 Komagataella pastoris Species 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 1
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 1
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 1
- DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N Luciferin Natural products CCc1c(C)c(CC2NC(=O)C(=C2C=C)C)[nH]c1Cc3[nH]c4C(=C5/NC(CC(=O)O)C(C)C5CC(=O)O)CC(=O)c4c3C DDWFXDSYGUXRAY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282553 Macaca Species 0.000 description 1
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 1
- 101000863881 Mus musculus Sialic acid-binding Ig-like lectin 5 Proteins 0.000 description 1
- 102000003945 NF-kappa B Human genes 0.000 description 1
- 108010014632 NF-kappa B kinase Proteins 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N Naproxen Natural products C1=C(C(C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- XDMCWZFLLGVIID-SXPRBRBTSA-N O-(3-O-D-galactosyl-N-acetyl-beta-D-galactosaminyl)-L-serine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](OC[C@H]([NH3+])C([O-])=O)O[C@H](CO)[C@H](O)[C@@H]1OC1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 XDMCWZFLLGVIID-SXPRBRBTSA-N 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010026552 Proteome Proteins 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 201000004681 Psoriasis Diseases 0.000 description 1
- 101150085390 RPM1 gene Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000018120 Recombinases Human genes 0.000 description 1
- 108010091086 Recombinases Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000293825 Rhinosporidium Species 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000235346 Schizosaccharomyces Species 0.000 description 1
- 206010048908 Seasonal allergy Diseases 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010050207 Skin fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 238000003120 Steady-Glo Luciferase Assay System Methods 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 241000187747 Streptomyces Species 0.000 description 1
- 201000009594 Systemic Scleroderma Diseases 0.000 description 1
- 206010042953 Systemic sclerosis Diseases 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M Thiocyanate anion Chemical compound [S-]C#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102100031294 Thymic stromal lymphopoietin Human genes 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N Vidarabine Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OIRDTQYFTABQOQ-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- 108010076089 accutase Proteins 0.000 description 1
- 229960001138 acetylsalicylic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000009285 allergic inflammation Effects 0.000 description 1
- 230000003281 allosteric effect Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 229940121363 anti-inflammatory agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002260 anti-inflammatory agent Substances 0.000 description 1
- 230000002141 anti-parasite Effects 0.000 description 1
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000003096 antiparasitic agent Substances 0.000 description 1
- OIRDTQYFTABQOQ-UHFFFAOYSA-N ara-adenosine Natural products Nc1ncnc2n(cnc12)C1OC(CO)C(O)C1O OIRDTQYFTABQOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101150035354 araA gene Proteins 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002457 bidirectional effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 150000001615 biotins Chemical class 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 239000003246 corticosteroid Substances 0.000 description 1
- 229960001334 corticosteroids Drugs 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 238000013211 curve analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 229940127089 cytotoxic agent Drugs 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 108020001096 dihydrofolate reductase Proteins 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 210000001840 diploid cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000009716 hepatic expression Effects 0.000 description 1
- 102000055276 human IL3 Human genes 0.000 description 1
- 102000054751 human RUNX1T1 Human genes 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 1
- ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N hydrogen thiocyanate Natural products SC#N ZMZDMBWJUHKJPS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001680 ibuprofen Drugs 0.000 description 1
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000007688 immunotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000386 immunotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 210000004964 innate lymphoid cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000022023 interleukin-5 production Effects 0.000 description 1
- 208000036971 interstitial lung disease 2 Diseases 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000003468 luciferase reporter gene assay Methods 0.000 description 1
- 206010025135 lupus erythematosus Diseases 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N methamphetamine Chemical compound CN[C@@H](C)CC1=CC=CC=C1 MYWUZJCMWCOHBA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229960002009 naproxen Drugs 0.000 description 1
- CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N naproxen Chemical compound C1=C([C@H](C)C(O)=O)C=CC2=CC(OC)=CC=C21 CMWTZPSULFXXJA-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 238000004091 panning Methods 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 235000020232 peanut Nutrition 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 125000005642 phosphothioate group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 210000001586 pre-b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 1
- XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N prednisone Chemical compound O=C1C=C[C@]2(C)[C@H]3C(=O)C[C@](C)([C@@](CC4)(O)C(=O)CO)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 XOFYZVNMUHMLCC-ZPOLXVRWSA-N 0.000 description 1
- 229960004618 prednisone Drugs 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 210000001948 pro-b lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 235000004252 protein component Nutrition 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 208000005069 pulmonary fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008025 regulatory factors Proteins 0.000 description 1
- 102000037983 regulatory factors Human genes 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 206010039083 rhinitis Diseases 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000037390 scarring Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000002864 sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 1
- 238000003567 signal transduction assay Methods 0.000 description 1
- 230000008054 signal transmission Effects 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 239000012899 standard injection Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229960001603 tamoxifen Drugs 0.000 description 1
- 229940126622 therapeutic monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 1
- JOPDZQBPOWAEHC-UHFFFAOYSA-H tristrontium;diphosphate Chemical compound [Sr+2].[Sr+2].[Sr+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O JOPDZQBPOWAEHC-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N tungsten Chemical compound [W] WFKWXMTUELFFGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052721 tungsten Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010937 tungsten Substances 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/244—Interleukins [IL]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
- A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
- A61P11/06—Antiasthmatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/06—Antipsoriatics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/08—Antiallergic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Oncology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области иммунологии. Предложены выделенные антитела, способные специфически связывать IL-33. Также рассмотрены молекула нуклеиновой кислоты, композиция и клетка. Кроме того, описан способ лечения нарушения, которое является восприимчивым к ингибированию IL-33. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии различных состояний, в частности аутоиммунных заболеваний и рака. 6 н. и 19 з.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл., 5 пр.
Description
Включение посредством ссылки материала, представленного на рассмотрение в электронном виде
[0001] Полностью включен в данное описание посредством ссылки пригодный для считывания компьютером список последовательностей нуклеотидов/аминокислот, представленный на рассмотрение параллельно с данным документом и идентифицируемый следующим образом: файл из 283358 бит ASCII (Text), названный ʺ719408_ST25.txt", созданный 8 января, 2015.
Уровень техники
[0002] Интерлейкин 33 (IL-33), также известный как ядерный фактор (NF) в наружных эндотелиальных венулах (NF-HEV), представляет собой цитокин принадлежащий к суперсемейству IL-1. IL-33 индуцирует хелперные T клетки, тучные клетки, эозинофилы и базофилы для продуцирования цитокинов типа 2. IL-33 опосредует его биологические эффекты посредством взаимодействия с рецепторами ST2 (также известные как IL1RL1) и акцессорным белком рецептора IL-1 (IL1RAP) для активации внутриклеточных молекул в сигнальных путях NF-κB и MAP киназы, которые направляют выработку цитокинов типа 2 (напр., IL-4, IL-5, и IL-13) из поляризованных T-хелперных клеток (Th2) и врожденных лимфоидных клеток группы 2 (ILC2) в коже, легких и желудочно-кишечном тракте. IL-33 действует напрямую на тучные клетки для запуска их активации и стимулирует эозинофилы и базофилы к дегранулированию, вызывающему разрушение ткани. Считается, что индукция цитокинов типа 2 посредством IL-33 in vivo индуцирует тяжелые патологические изменения, наблюдаемые в органах со слизистой после введения IL-33 (см., напр., Schmitz et al., Immunity, 23(5): 479-490 (2005); и Chackerian et al., J. Immunol., 179 (4): 2551-2555 (2007))
[0003] Как профиль in vivo экспрессии IL-33, так и его клеточные мишени предполагают роль для IL-33 в направляемых Th2 патологиях. Например, экспрессия IL-33 была детектирована в воспаленной ткани пациентов с астмой от умеренной до тяжелой, атопическим дерматитом, аллергическим ринитом, пищевыми аллергиями, ревматоидным артритом, множественным склерозом и болезнью Крона. В добавление, функциональные однонуклеотидные полиморфизмы (SNP) в дистальной промоторной области ST2 (IL-33R) продемонстрировали значимую связь с атопическим дерматитом (см., напр., Shimizu et al., Hum. Mol. Genet., 14(19): 2919-2927 (2005)). Исследования связей по всему геному (GWAS) также продемонстрировали сильную связь с SNP в генах IL-33 и ST2 (IL-33R) для астмы во множестве исследований этнически различных групп (см., напр., Gudbjartsson et al., Nat. Genet., 41(3): 342-347 (2009); Melén et al., J Allergy Clin. Immunol., 126(3): 631-637 (2010); Moffatt et al., New Engl J. Med., 363(13):1211-1221 (2010); и Torgerson et al., Nat. Genet., 43(9): 887-92 (2011)). IL-33 (возможно в комбинации с IL-25 и TSLP) также активирует врожденные лимфоидные клетки (ILC2 клетки), приводя к Th2 цитокиновой секреции, противопаразитарным ответам и тканевой иммунопатологии.
[0004] Исследования также предполагают, что IL-33 играет непосредственную роль в некоторых раках, экспрессирующих IL-33 рецептор, таких как, например, эпителиальные раки (т.е., карциномы), посредством действия в качестве фактора выживаемости или фактора роста для раковых клеток. Такая реактивность к IL-33 должна содействовать исключению некоторых клеточных типов рака из имеющего в настоящее время стандарта ухода (напр., хроническая гранулоцитная лейкемия (CML), раки молочной железы и желудочно-кишечные раки). Кроме того, IL-33 может играть непрямую роль в прогрессировании рака посредством снижения защитной активности иммунной системы в контроле опухолевых клеток. Другие недавние исследования предполагают, что IL-33 играет роль в патологии фиброза, такого как, например, фиброз кожи, фиброз печени, системный склероз и фиброз легких. В добавление, Mchedlidze et al., Immunity, 39: 357-371 (2013), демонстрируют, что печеночная экспрессия интерлейкина-33 (IL-33) является как обязательной, так и достаточной для тяжелого печеночного фиброза in vivo.
[0005] Следовательно, существует потребность в ингибиторах IL-33 (напр., антитела), которые связывают IL-33 с высокой аффиностью и эффективно нейтрализуют активность IL-33. Изобретение относится к связывающему IL-33 агенту, который связывается с и ингибирует IL-33.
Краткая сущность изобретения
[0006] Изобретение относится к выделенному полипептиду тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит (a) аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и SEQ ID NO: 5-50, или (b) аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 и SEQ ID NO: 206-217.
[0007] Изобретение относится к выделенному полипептиду легкой цепи иммуноглобулина, который содержит (a) аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 51-66, или (b) аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 и SEQ ID NO: 218-231.
[0008] В добавление изобретение относится к выделенным или очищенным последовательностям нуклеиновых кислот, кодирующим вышеприведенные иммуноглобулиновые полипептиды, векторам, содержащим такие последовательности нуклеиновых кислот, выделенным связывающим IL-33 агентам, содержащим вышеприведенные иммуноглобулиновые полипептиды, последовательностям нуклеиновой кислоты, кодирующим такие связывающие IL-33 агенты, векторам, содержащим такие последовательности нуклеиновых кислот, выделенным клеткам, содержащим такие векторы, композициям, содержащим такие связывающие IL-33 агенты или такие векторы с фармацевтически приемлемым носителем, и способам лечения заболевания или нарушения у млекопитающих, которые являются восприимчивыми к ингибированию IL-33 или нейтрализации посредством введения эффективных количеств таких композиций млекопитающим.
Краткое описание некоторых видов на чертежах
[0009] Фигура 1A представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие определение EC50 для IL-33 стимулирования секреции IL-5 из U812 клеток. Фигура 1B представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие, что изобретательский связывающий IL-33 агент ингибирует IL-33-опосредованное высвобождение IL-5 из клеток KU812.
[0010] Фигура 2A представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие, что IL-33-индуцирует экспрессию люциферазы из IL-8 промотора в клетках HEK293-ST2. Фигура 2B представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие, что изобретательский связывающий IL-33 агент ингибирует IL-33-индуцируемую экспрессию люциферазы из IL-8 промотора в клетках HEK293-ST2.
[0011] Фигура 3 представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие, что изобретательский связывающий IL-33 агент ингибирует IL-33-опосредованное высвобождение IL-5 в первичных человеческих базофилах. Для APE4909, IC50=2,2 ± 1,1 нМ (N=3); для ST2 мономера, IC50=20 нМ (N=1). Пунктирные линии, обозначенные ʺIL-33ʺ и ʺсредаʺ, представляют концентрацию IL-5, секретированного в отсутствии антитела и в отсутствии IL-33, соответственно. Суффикс.02, прикрепленный к APE4909,относится к партии белка, тестируемого в этих экспериментах.
[0012] Фигура 4 представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие, что изобретательский связывающий IL-33 агент ингибирует IL-33-опосредованное высвобождение IL-9 из первичных человеческих базофилов. IC50 для APE4909 был измерен при 3 нМ. Пунктирные линии, обозначенные ʺIL-33ʺ и ʺсредаʺ, представляют концентрацию IL-9, секретированного в отсутствии антитела и в отсутствии IL-33, соответственно. Антитело APE0422 представляет изотип контрольного антитела.
[0013] Фигура 5 представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие аффинность изобретательского APE4909 антитела для человеческого IL-33, как измерено посредством KINEXA™. Результаты указывают KD=1,0 пМ (N=2) с 95% доверительным интервалом (CI) 1,9 пМ - 420 фМ.
[0014] Фигура 6 представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие аффинность изобретательского антитела APE4909 для IL-33 яванского макака, как измерено посредством KINEXA™.
[0015] Фигура 7 представляет собой график, который отображает экспериментальные данные, иллюстрирующие способность изобретательского антитела APE4909 к ингибированию человеческой IL-33-направляемой эозинофильной экспансии в компартмент периферической крови.
Подробное описание изобретение
[0016] Изобретение относится к выделенному полипептиду тяжелой цепи иммуноглобулина и/или выделенному полипептиду легкой цепи иммуноглобулина, или его фрагменту (напр., антиген-связывающий фрагмент). Термин ʺиммуноглобулинʺ или ʺантителоʺ, как это применено в данном описании, относится к белку, который обнаружен в крови или других физиологических жидких средах позвоночных, который применен иммунной системой для идентифицирования и нейтрализации чужеродных объектов, таких как бактерии и вирусы. Полипептид является ʺвыделеннымʺ таким образом, что он отделен от его натуральной окружающей среды. В предпочтительном варианте осуществления иммуноглобулин или антитело представляет собой белок, который содержит по меньшей мере одну определяющую комплементарность область (CDR). CDR формируют ʺгипервариабельную областьʺ антитела, которая ответственна за связывание антигена (дополнительно обсуждено далее). Целый иммуноглобулин, как правило, состоит из четырех полипептидов: две идентичные копии тяжелой (H) цепи полипептида и две идентичные копии легкой (L) цепи полипептида. Каждая тяжелых цепей содержит одну N-конечную переменную (VH) область и три C-конечных константных (CH1, CH2, и CH3) области, и каждая легкая цепь содержит одну N-концевую вариабильную (VL) область и одну C-концевую константную (CL) область. Легким цепям антител может быть присвоен один из двух различных типов, или каппа (κ) или лямбда (λ), на основании аминокислотных последовательностей их константных доменов. В типичном иммуноглобулине каждая легкая цепь связана с тяжелой цепью дисульфидными связями, и две тяжелые цепи связаны друг с другом дисульфидными связи. Вариабельная область легкой цепи выровнена с вариабельной областью тяжелой цепи, и константная область легкой цепи выровнена с первой константной областью тяжелой цепи. Остальные константные области тяжелых цепей выровнены друг с другом.
[0017] Вариабильные области каждой пары легкой и тяжелой цепей формируют антиген-связывающий сайт антитела. VH и VL области имеют такую же общую структуру как каждая область, содержащая четыре каркасных (FW или FR) области. Термин ʺкаркасная областьʺ, как это применено в данном описании, относится к относительно консервативным аминокислотным последовательностям внутри вариабельной области, которые расположены между гипервариабильной или определяющими комплементарность областями (CDR). Существует четыре каркасные области в каждом вариабильном домене, которые обозначены FR1, FR2, FR3 и FR4. Каркасные области формируют β слои, которые обеспечивают структурный каркас вариабельной области (см., напр., C.A. Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)).
[0018] Каркасные области соединены тремя определяющими комплементарность областями (CDR). Как отмечалось выше, три CDR, известные как CDR1, CDR2 и CDR3, формируют ʺгипервариабельную областьʺ антитела, которая ответственна за связывание антигена. CDR формируют петли, соединяющие, и в некоторых случаях, содержащие часть бета-складчатой структуры, сформированной каркасными областями. Хотя константные области легких и тяжелых цепей не задействованы напрямую в связывании антитела с антигеном, константные области могут влиять на ориентацию вариабильных областей. Константные области также проявляют различные эффекторные функции, такие как участие в антителозависимом комплемент-опосредованном лизисе или антителозависимой клеточной токсичности посредством взаимодействий с эффекторными молекулами и клетками.
[0019] Желательно, чтобы выделенный полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина и выделенный полипептид легкой цепи иммуноглобулина по изобретению связывался с IL-33. Как отмечалось выше, интерлейкин-33 (IL-33) (также известный как ядерный фактор (NF) в наружных эндотелиальных венулах (NF-HEV)) представляет собой цитокин семейства IL-1, который также включает воспалительные цитокины IL-1α, IL-1β, и IL-18. Также было продемонстрировано, что IL-33 передает сигнал посредством ST2 рецептора и IL1RAP рецептора. IL-33 сильно экспрессирован в различных тканях, включая желудок, легкое, спинной мозг, головной мозг и кожу, так же как в клетках, включая клетки гладкой мускулатуры и эпителиальные клетки, выстилающие бронхи и малые дыхательные пути. Экспрессия IL-33 индуцируется IL-1β и фактором некроза опухоли-α (TNF-α) в легком и фибробластах кожи и, в меньшей степени, посредством активации макрофагов. Было продемонстрировано, что IL-33 лечение индуцирует Т-хелперные ответы (Th) типа 2 у мышей, на что указывает увеличение выработки Th2 цитокинов и сывороточного иммуноглобулина. Системное лечение мышей с IL-33 приводит в результате к патологическим изменениям в легких и пищеварительном тракте (см., напр., Choi et al., Blood, 114(14): 3117-3126 (2009); and Yagami et al., J. Immunology, 185(10): 5743-5750 (2010)).
[0020] IL-33 продуцирован в виде 30-кДа белка-предшественника, который бывает расщеплен in vitro каспазой-1, высвобождая зрелые 18-кДа формы (см., напр., Schmitz et al., Immunity, 23(5): 479-490(2005)). При связывании с ST2 рецептором, IL-33 стимулирует активацию ядерного фактора (NF)-κB и митоген-активируемой протеинкиназы (MAPK), приводя к повышенной транскрипции Th2 цитокинов (Schmitz et al., supra).
[0021] Антитела, которые связываются с IL-33, и его компонентами, известны в данной области (см., напр., публикации заявок на патент США 2009/0041718 A1 и 2012/0263709 A1). Анти-IL-33 антитела также коммерчески доступны из источников, таких как, например, Abcam (Cambridge, MA).
[0022] Изобретение относится к полипептиду тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 и SEQ ID NO: 206-217, аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 и SEQ ID NO: 206-217. В одном варианте осуществления изобретения выделенный полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина содержит, состоит из или по существу состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 и SEQ ID NO: 206-217. Когда изобретательский полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина по существу состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 и SEQ ID NO: 206-217, дополнительные компоненты могут содержаться в полипептиде, которые по своей сути не воздействуют на полипептид (напр., белковые группы, такие как биотин, который облегчает очистку или выделение). Когда изобретательский полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 и SEQ ID NO: 206-217, полипептид не содержит какие-либо дополнительные компоненты (т.е., компоненты, которые не являются эндогенными по отношению к изобретательскому полипептиду тяжелой цепи иммуноглобулина).
[0023] Изобретение относится к выделенному полипептиду тяжелой цепи иммуноглобулина, которая содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична (напр., по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична) любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 5-50, SEQ ID NO: 67-140, SEQ ID NO: 176, SEQ ID NO: 177, SEQ ID NO: 178-188 или SEQ ID NO: 206-217. ʺИдентичностьʺ последовательности нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, как описано в данном описании, может быть определена посредством сравнения нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, представляющей интерес, с референсной нуклеиновой кислотой или аминокислотной последовательностью. Процентная идентичность представляет собой количество нуклеотидов или аминокислотных остатков, которые являются одинаковыми (т.е., которые являются идентичными) между последовательностью, представляющей интерес, и референсной последовательностью, разделенное на длину наиболее длинной последовательности (т.е., длина или последовательности, представляющей интерес, или референсной последовательности, в зависимости от того, какая длинней). Существует ряд известных математических алгоритмов для получения оптимального выравнивания и расчета идентичности между двумя или более последовательностей, и они включены в ряд доступных программ из систем программного обеспечения. Примеры таких программ содержат CLUSTAL-W, T-Coffee и ALIGN (для выравнивания последовательностей нуклеиновых кислот и аминокислот), программы BLAST (напр., BLAST 2.1, BL2SEQ и его более поздние версии) и программы FASTA (напр., FASTA3x, FASTM и SSEARCH) (для выравнивания последовательностей и поисков сходства последовательностей). Алгоритмы выравнивания последовательностей также раскрыты, например, в Altschul et al., J. Molecular Biol., 215(3): 403-410 (1990), Beigert et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 106(10): 3770-3775 (2009), Durbin et al., eds., Biological Sequence Analysis: Probabilistic Models of Proteins and Nucleic Acids, Cambridge University Press, Cambridge, UK (2009), Soding, Bioinformatics, 21(7): 951-960 (2005), Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25(17): 3389-3402 (1997), и Gusfield, Algorithms on Strings, Trees and Sequences, Cambridge University Press, Cambridge UK (1997)).
[0024] Изобретение относится к полипептиду легкой цепи иммуноглобулина, который содержит аминокислотную последовательность любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 и SEQ ID NO: 218-231, аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 и SEQ ID NO: 218-231. В одном варианте осуществления изобретения выделенный полипептид легкой цепи иммуноглобулина содержит, состоит из или по существу состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 и SEQ ID NO: 218-231. Когда изобретательский полипептид легкой цепи иммуноглобулина по существу состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 и SEQ ID NO: 218-231, дополнительные компоненты могут содержаться в полипептиде, которые не оказывает существенное влияние на полипептид (напр., белковые компоненты, такие как биотин, который облегчает очистку или выделение). Когда изобретательский полипептид легкой цепи иммуноглобулина состоит из аминокислотной последовательности любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 и SEQ ID NO: 218-231, полипептид не содержит любые дополнительные компоненты (т.е., компоненты, которые не являются эндогенными по отношению к изобретательскому полипептиду легкой цепи иммуноглобулина).
[0025] Изобретение относится к выделенному полипептиду легкой цепи иммуноглобулина, которая содержит аминокислотную последовательность, которая по меньшей мере на 90% идентична (напр., по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична) любой из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 51-66, SEQ ID NO: 141-175, SEQ ID NO: 189-205 или SEQ ID NO: 218-231. ʺИдентичностьʺ нуклеиновой кислоты или аминокислотной последовательности, как описано в данном описании, может быть определена с применением способов, описанных в данном описании.
[0026] Одна или более аминокислот из вышеупомянутых полипептидов тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептидов легкой цепи может быть заменена или замещена другой аминокислотой. Аминокислотная ʺзаменаʺ или ʺзамещениеʺ относится к замене одной аминокислоты в определенном положении или остатке другой аминокислотой в том же положении или остатке в пределах полипептидной последовательности.
[0027] Аминокислоты в широком смысле группируются на ʺароматическиеʺ или ʺалифатическиеʺ. Ароматическая аминокислота включает ароматическое кольцо. Примеры ʺароматическихʺ аминокислот содержат гистидин (H или His), фенилаланин (F или Phe), тирозин (Y или Tyr) и триптофан (W или Trp). Неароматические аминокислоты в широком смысле группируются как ʺалифатическиеʺ. Примеры ʺалифатическихʺ аминокислот содержат глицин (G или Gly), аланин (A или Ala), валин (V или Val), лейцин (L или Leu), изолейцин(I или Ile), метионин (M или Met), серин (S или Ser), треонин (T или Thr), цистеин (C или Cys), пролин (P или Pro), глутаминовую кислоту (E или Glu), аспарагиновую кислоту (A или Asp), аспарагин (N или Asn), глутамин (Q или Gln), лизин (K или Lys) и аргинин (R или Arg).
[0028] Алифатические аминокислоты могут быть подразделены на четыре подгруппы. ʺБольшая алифатическая неполярная подгруппаʺ состоит из валина, лейцина и изолейцина. ʺАлифатическая слегка полярная подгруппаʺ состоит из метионина, серина, треонина и цистеина. ʺАлифатическая полярная/заряженная подгруппаʺ состоит из глутаминовой кислоты, аспарагиновой кислоты, аспарагина, глутамина, лизина и аргинина. ʺПодгруппа с малым остаткомʺ состоит из глицина и аланина. Группа заряженных/полярных аминокислот может быть подразделена на три подгруппы: ʺположительно-заряженная подгруппаʺ, состоящая из лизина и аргинина, ʺотрицательно-заряженная подгруппаʺ, состоящая из глутаминовой кислоты и аспарагиновой кислоты и ʺполярная подгруппаʺ, состоящая из аспарагина и глутамина.
[0029] Ароматические аминокислоты могут быть подразделены на две подгруппы: ʺподгруппа с азотным кольцомʺ, состоящая из гистидина и триптофана, и ʺфенильная подгруппаʺ, состоящая из фенилаланина и тирозина.
[0030] Аминокислотная замена или замещение может быть консервативной, полуконсервативной или неконсервативной. Фраза ʺконсервативное замещение аминокислотыʺ или ʺконсервативная мутацияʺ относится к замене одной аминокислоты другой аминокислотой со схожими свойствами. Функциональный путь для определения общих свойств между индивидуальными аминокислотами для анализа нормализованных частот аминокислотных изменений между соответствующими белками гомологичных организмов (Schulz and Schirmer, Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York (1979)). В соответствии с такими анализами группы аминокислот могут быть определены, когда аминокислоты в пределах группы обмениваются преимущественно друг с другом и, следовательно, имеют сходство друг с другом в основном по их влиянию общую структуру белка (Schulz and Schirmer, supra).
[0031] Примеры консервативных замещений аминокислот содержат замещения аминокислот в пределах подгрупп, описанных выше, например, лизин для аргинина и наоборот, так что позитивный заряд может быть сохранен, глутаминовая кислота для аспарагиновой кислоты и наоборот, так что отрицательный заряд может быть сохранен, серин для треонина, так что свободная -OH может быть сохранена и глутамин для аспарагина, так что свободная -NH2 может быть сохранена.
[0032] ʺПолуконсервативные мутацииʺ содержат замещенные аминокислоты аминокислот в пределах таких же групп, приведенных выше, но не в пределах такой же подгруппы. Например, замещение аспарагиновой кислоты на аспарагин, или аспарагина на лизин, задействует аминокислоты в пределах такой же группы, но различных подгрупп. ʺНеконсервативные мутацииʺ задействуют замещение аминокислот между различными группами, например, лизин для триптофана, или фенилаланин для серина и т.д.
[0033] В добавление, одна или более аминокислот может быть введена в вышеупомянутые полипептиды тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептиды легкой цепи. Любое количество любых пригодных аминокислот может быть введено в аминокислотную последовательность полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептида легкой цепи. С этой точки зрения, по меньшей мере одна аминокислота (напр., 2 или более, 5 или более, или 10 или более аминокислот), но не более чем 20 аминокислот (напр., 18 или менее, 15 или менее или 12 или менее аминокислот), может быть введена в аминокислотную последовательность полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептида легкой цепи. Предпочтительно, 1-10 аминокислот (напр., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, или 10 аминокислот) введены в аминокислотную последовательность полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептида легкой цепи. С этой точки зрения, аминокислота(ы) может быть введена в любой из вышеупомянутых полипептидов тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептидов легкой цепи в любом пригодном положении. Предпочтительно, аминокислота(ы) введены в CDR (напр., CDR1, CDR2, или CDR3) полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептида легкой цепи.
[0034] Изобретательский выделенный полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина и полипептиды легкой цепи не ограничены полипептидами, содержащими специфические аминокислотные последовательности, описанными в данном описании. В действительности, полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина или полипептид легкой цепи может представлять собой любой полипептид тяжелой цепи или полипептид легкой цепи, который конкурирует с изобретательским полипептидом тяжелой цепи иммуноглобулина или полипептидом легкой цепи для связывания с IL-33. С этой точки зрения, например, полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина или полипептид легкой цепи может представлять собой любой полипептид тяжелой цепи или полипептид легкой цепи, который связывается с таким же эпитопом IL-33, распознаваемым полипептидами тяжелой и легкой цепи, описанными в данном описании. Конкурирование между антителами может быть оценено с применением рутинных пептидных конкурентных анализов, которые используют ELISA, Вестерн-блоттинг или иммуногистохимические способы (см., напр., патенты США 4828981 и 8568992; и Braitbard et al., Proteome Sci., 4: 12 (2006)).
[0035] Изобретение относится к выделенному связывающему интерлейкин-33 (IL-33) агенту, содержащему, по существу состоящему из или состоящему из одной или более изобретательских выделенных аминокислотных последовательностей, описанных в данном описании. Под ʺсвязывающим интерлейкин-33 (IL-33) агентомʺ подразумевается молекула, предпочтительно белковая молекула, которая связывается специфически с IL-33. Предпочтительно, связывающий IL-33 агент представляет собой антитело или его фрагмент (напр., иммуногенный фрагмент). Выделенный связывающий IL-33 агент по изобретению содержит, состоит по существу из или состоит из изобретательского выделенного полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или изобретательского выделенного полипептида легкой цепи иммуноглобулина. В одном варианте осуществления выделенный связывающий IL-33 агент содержит, состоит по существу из или состоит из изобретательского полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина или изобретательского полипептида легкой цепи иммуноглобулина. В другом варианте осуществления выделенный связывающий IL-33 агент содержит, состоит по существу из или состоит из изобретательского полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и изобретательского полипептида легкой цепи иммуноглобулина.
[0036] Любой аминокислотный остаток изобретательского полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или изобретательского полипептида легкой цепи иммуноглобулина может быть замещен, в любой комбинации, другим аминокислотным остатком, или может быть удален или введен, при условии, что биологическая активность связывающего IL-33 агента является увеличенной или улучшенной в результате аминокислотных замен, вставок и/или делеций. ʺБиологическая активностьʺ связывающего IL-33 агента относится, например, к связывающей аффинности на конкретный эпитоп IL-33, нейтрализации или ингибированию связывания IL-33 с его рецептором(ами), нейтрализации или ингибированию активности IL-33 in vivo (напр., IC50), фармакокинетике и перекрестной реактивности (напр., с нечеловеческими гомологами или ортологами белка IL-33, или с другими белками или тканями). Другие биологические свойства или характеристики антиген-связывающего агента, принимаемые во внимание в данной области, содержат, например, авидность, селективность, растворимость, укладку, иммунотоксичность, экспрессию и состав. За вышеупомянутыми свойствами или характеристиками можно наблюдать, их можно измерять и/или оценивать с применением стандартных технологий, включая, но без ограничения ими, ELISA, конкурентный ELISA, анализ поверхностного плазмонного резонанса (BIACORE™), или KINEXA™, анализы in vitro или in vivo, анализы связывания рецептор - лиганд, анализы выработки цитокинов или фактора роста и/или анализы секреции и анализы передачи сигнала и иммуногистохимические анализы.
[0037] Термины ʺингибироватьʺ или ʺнейтрализоватьʺ, как это применено в данном описании, применительно к активности связывающего IL-33 агента, относятся к способности существенно противодействовать, препятствовать, предотвращать, ограничивать, замедлять, нарушать, изменять, устранять, останавливать или обращать прогрессирование или тяжесть, например, биологической активности IL-33 или заболевания или состояния, связанного с IL-33. Выделенный связывающий IL-33 агент по изобретению предпочтительно ингибирует или нейтрализует активность IL-33 на по меньшей мере приблизительно 20%, приблизительно 30%, приблизительно 40%, приблизительно 50%, приблизительно 60%, приблизительно 70%, приблизительно 80%, приблизительно 90%, приблизительно 95%, приблизительно 100% или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений.
[0038] Выделенный связывающий IL-33 агент по изобретению может представлять собой полное антитело, как описано в данном описании, или фрагмент антитела. Термины ʺфрагмент антителаʺ, ʺфрагмент антителаʺ и ʺфункциональный фрагмент антителаʺ применяются взаимозаменяемо в данном описании для обозначения одного или более фрагментов антитела, которые сохраняют способность специфически связываться с антигеном (см., обычно, Holliger et al., Nat. Biotech., 23(9): 1126-1129 (2005)). Выделенный связывающий IL-33 агент может содержать любой связывающий IL-33 фрагмент антитела. Желательно, чтобы фрагмент антитела содержал, например, одну или более CDR, вариабельную область (или ее участки), константную область (или ее участки) или их комбинации. Примеры фрагментов антитела содержат, но не ограничены ими, (i) Fab фрагмент, который является моновалентным фрагментом, состоящим из доменов VL, VH, CL и CH1, (ii) F(abʹ)2 фрагмент, который представляет собой бивалентный фрагмент, содержащий два Fab фрагмента, связанных дисульфидным мостиком в шарнирной области, (iii) Fv фрагмент, состоящий из VL и VH доменов одного плеча антитела, (iv) Fabʹ фрагмент, который получен в результате разрыва дисульфидного мостика F(abʹ)2 фрагмента с применением мягких условий восстановления, (v) дисульфид-стабилизированный Fv фрагмент (dsFv) и (vi) домен антитело (dAb), который представляет собой полипептид домена антитела с одиночной вариабельной областью (VH или VL), который специфически связывается с антигеном.
[0039] В вариантах осуществления, где выделенный связывающий IL-33 агент содержит фрагмент полипептида тяжелой цепи или легкой цепи иммуноглобулина, фрагмент может иметь любой размер при условии, что фрагмент связывается с и предпочтительно ингибирует активность IL-33. С этой точки зрения, желательно, чтобы фрагмент полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина содержал между приблизительно 5 и 18 (напр., приблизительно 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений) аминокислот. Подобным образом, желательно, чтобы фрагмент полипептида легкой цепи иммуноглобулина чтобы содержал между приблизительно 5 и 18 (напр., приблизительно 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18 или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений) аминокислот.
[0040] Когда связывающий IL-33 агент представляет собой антитело или фрагмент антитела, желательно, чтобы антитело или фрагмент антитела содержал константную область тяжелой цепи (Fc) любого пригодного класса. Предпочтительно, антитело или фрагмент антитела содержит константную область тяжелой цепи, которая основана на IgG1, IgG2 или IgG4 антителах дикого типа или их вариантах.
[0041] Связывающий IL-33 агент также может представлять собой одноцепочечные фрагменты антитела. Примеры одноцепочечных фрагментов антитела содержат, но не ограничены ими, (i) одноцепочечный Fv (scFv), который является моновалентной молекулой, состоящей из двух доменов фрагмента Fv (т.е., VL и VH), объединенных синтетическим линкером, что позволяет, чтобы два домена были синтезированы в виде одиночной полипептидной цепи (см., напр., Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988); Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988); и Osbourn et al., Nat. Biotechnol., 16: 778 (1998)) и (ii) диатело, которое является димерной полипептидной цепью, при этом каждая полипептидная цепь содержит VH, соединенную с VL, посредством пептидного линкера, который является слишком коротким для позволения спаривания между VH и VL в одной и той же полипептидной цепи, посредством этого направляя спаривание между комплементарными доменами на различных VH-VL полипептидных цепях с генерированием димерной молекулы, имеющей два функциональных антиген-связывающих сайта. Фрагменты антитела известны в данной области и описаны более подробно, напр., в публикации заявки на патент США 2009/0093024 A1.
[0042] Выделенный связывающий IL-33 агент также может быть интраантителом или его фрагментом. Интраантитело представляет собой антитело, которое экспрессировано и которое функционирует внутриклеточно. У интраантител, как правило, отсутствуют дисульфидные связи и они являются способными модулировать экспрессию или активность генов-мишеней, посредством их специфической связывающей активности. Интраантитела содержат однодоменные фрагменты, такие как выделенные VH и VL домены и scFvs. Интраантитело может содержать субклеточные сигналы переноса, присоединенные к N или C концу антраантитела для позволения экспрессии с высокими концентрациями в субклеточных компартментах, где расположен белок-мишень. При взаимодействии с геном-мишенью, интраантитело мудулирует функцию целевого белка и/или достигается фенотипический/функциональный нокаут посредством механизмов, таких как ускорение деградации белка-мишени и секвестирование белка-мишени в нефизиологическом субклеточном компартменте. Другие механизмы интраантитело-опосредованной инактивации гена могут зависеть от эпитопа, к которому направлено интраантитело, как например, связывание с каталитическим сайтом на белке-мишени или с эпитопами, которые задействованы во взаимодействиях белок-белок, белок-ДНК или белок-РНК.
[0043] Выделенный связывающий IL-33 агент также может быть конъюгатом антитела. С этой точки зрения, выделенный связывающий IL-33 агент может быть конъюгатом (1) антитела, альтернативным каркасом или его фрагментом и (2) белковой или небелковой группой, содержащей связывающий IL-33 агент. Например, связывающий IL-33 агент может быть всем или частью антитела, конъюгированного с пептидом, флуоресцентной молекулой или химиотерапевтическим агентом.
[0044] Выделенный связывающий IL-33 агент может представлять собой или может быть получен из человеческого антитела, нечеловеческого антитела или химерного антитела. Под ʺхимернымʺ подразумевается антитело или его фрагмент, содержащие как человеческие, так и нечеловеческие области. Предпочтительно, выделенный связывающий IL-33 агент представляет собой гуманизированное антитело. ʺГуманизированноеʺ антитело представляет собой моноклональное антитело, содержащее каркас человеческого антитела, и по меньшей мере одну CDR, полученную или производную из нечеловеческого антитела. Нечеловеческие антитела содержат антитела, выделенные из любого животного кроме человека, такого как, например, грызун (напр., мышь или крыса). Гуманизированное антитело может содержать, одну, две или три CDR, полученных или производных из нечеловеческого антитела. В одном варианте осуществления изобретения, CDRH3 изобретательского связывающего IL-33 агента представляет собой полученное или производное из мыши моноклональное антитело, тогда как остальные вариабильные области и константные области изобретательского связывающего IL-33 агента являются полученными или производными из человеческого моноклонального антитела.
[0045] Человеческое антитело, нечеловеческое антитело, химерное антитело или гуманизированное антитело может быть получено посредством любого средства, включая посредством in vitro источников (напр., гибридома или клеточная линия, продуцирующая антитело рекомбинантно) и in vivo источников (напр., грызуны). Способы для генерирования антител известны в данной области и описаны, например, в Köhler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976); Harlow and Lane (eds.), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988); и Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th Ed., Garland Publishing, New York, NY (2001)). В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело или химерное антитело может быть генерировано с применением трансгенного животного (напр., мыши), при этом один или более эндогенных иммуноглобулиновых генов заменены с одним или более человеческих иммуноглобулиновых генов. Примеры трансгенных мышей, в которых гены эндогенного антитела эффективно заменены с генами человеческого антитела, содержат, но не ограничены ими, Medarex HUMAB-MOUSE™, the Kirin TC MOUSE™ и Kyowa Kirin KM-MOUSE™ (см., напр., Lonberg, Nat. Biotechnol., 23(9): 1117-25 (2005), и Lonberg, Handb. Exp. Pharmacol., 181: 69-97 (2008)). Гуманизированное антитело может быть генерировано с применением любого пригодного способа, известного в данной области (см., напр., An, Z. (ed.), Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, John Wiley & Sons, Inc., Hoboken, New Jersey (2009)), включая, напр., трансплантацию нечеловеческих CDR в каркас человеческого антитела (см., напр., Kashmiri et al., Methods, 36(1): 25-34 (2005); и Hou et al., J. Biochem., 144(1): 115-120 (2008)). В одном варианте осуществления гуманизированное антитело может быть продуцировано с применением способов, описанных, напр., в публикации заявки на патент США 2011/0287485 A1.
[0046] В одном варианте осуществления CDR (напр., CDR1, CDR2, или CDR3) или вариабельная область полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептида легкой цепи иммуноглобулина, описанных в данном описании, может быть трансплантирована (т.е., привито) в другую молекулу, такую как полипептид антитела или не из антитела, с применением или химии белков, или технологии рекомбинантных ДНК. В связи с этим, изобретение относится к выделенному связывающему IL-33 агенту, содержащему по меньшей мере одну CDR тяжелой цепи иммуноглобулина и/или полипептида легкой цепи, как описано в данном описании. Выделенный связывающий IL-33 агент может содержать одну, две или три CDR тяжелой цепи иммуноглобулина и/или вариабельной области легкой цепи, как описано в данном описании. Например, для полипептидов тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащих любой из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 или SEQ ID NO: 5-50, CDR1 расположен между аминокислотными остатками 26 и 35, включительно; CDR2 расположен между аминокислотными остатками 50 и 59, включительно (SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2) или между аминокислотными остатками 50 и 66, включительно (SEQ ID NO: 5-50); и CDR3 расположен между аминокислотными остатками 99 и 102, включительно (SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2) или между аминокислотными остатками 99 и 111, включительно (SEQ ID NO 5-50). Применительно к полипептидам легкой цепи иммуноглобулина, содержащим любую из SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 51-66, например, CDR1 расположена между аминокислотными остатками 24 и 39, включительно (SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4) или между аминокислотными остатками 24 и 34, включительно (SEQ ID NO: 51-66); CDR2 расположен между аминокислотными остатками 55 и 61, включительно (SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4) или между аминокислотными остатками 50 и 56, включительно (SEQ ID NO: 51-66); CDR3 расположен между аминокислотными остатками 94 и 102, включительно (SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 4) или между аминокислотными остатками 89 и 97, включительно (SEQ ID NO: 51-66).
[0047] В предпочтительном варианте осуществления связывающий IL-33 агент связывается с эпитопом IL-33, который блокирует связывание IL-33 с рецепторами ST2 (также известными как IL1RL1) и/или IL-1 рецептор акцессорный белок (IL1RAP) и ингибирует IL-33 опосредованную передачу сигнала. Изобретение также относится к выделенному или очищенному эпитопу IL-33, который блокирует связывание IL-33 с рецепторами ST2 и IL1RAP непрямым или аллостерическим образом.
[0048] Изобретение также относится к одной или более выделенных или очищенных последовательностей нуклеиновой кислоты, которые кодируют изобретательский полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина, изобретательский полипептид легкой цепи иммуноглобулина и изобретательский связывающий IL-33 агент.
[0049] Подразумевается, что термин ʺпоследовательность нуклеиновой кислотыʺ охватывает полимер ДНК или РНК, т.е., полинуклеотид, который может быть однонитевым или двухнитевым и, который может содержать неприродные или измененные нуклеотиды. Термины ʺнуклеиновая кислотаʺ и ʺполинуклеотидʺ, как это применено в данном описании, относятся к полимерным формам нуклеотидов любой длины, или рибонуклеотидам (РНК), или дезоксирибонуклеотидам (ДНК). Эти термины относятся к первичной структуре молекулы и таким образом содержат двух- и однонитевые ДНК и двух- и однонитевые РНК. Термины содержат, в качестве эквивалентов, аналоги их РНК или ДНК, изготовленные из нуклеотидных аналогов и модифицированных полинуклеотидов, таких как, но без ограничения ими, метилированные и/или кэпированные полинуклеотиды. Нуклеиновые кислоты, как правило, связаны посредством фосфатных связей для формирования последовательностей нуклеиновой кислоты или полинуклеотидов, хотя многие другие связи известны в данной области (напр., фосфотиоаты, боранофосфаты и тому подобное).
[0050] Изобретение дополнительно относится к вектору, содержащему одну или более последовательностей нуклеиновой кислоты, кодирующих изобретательский полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина, изобретательский полипептид легкой цепи иммуноглобулина и/или изобретательский связывающий IL-33 агент. Вектор может представлять собой, например, плазмиду, эписому, космиду, вирусный вектор (напр., ретровирусный или аденовирусный) или фаг. Пригодные векторы и способы приготовления вектора хорошо известны в данной области (см., напр., Sambrook et al., Molecular Cloning, a Laboratory Manual, 3rd edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001), и Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and John Wiley & Sons, New York, N.Y. (1994)).
[0051] В добавление к последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей изобретательский полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина, изобретательский полипептид легкой цепи иммуноглобулина и/или изобретательский связывающий IL-33 агент, вектор предпочтительно содержит контролирующие экспрессию последовательности, такие как промоторы, энхансеры, сигналы полиаденилирования, терминаторы транскрипции, участки внутренней посадки рибосомы (IRES) и тому подобное, которые обеспечивают экспрессию кодирующей последовательности в клетке-хозяина. Иллюстративные контролирующие экспрессию последовательности известны в данной области и описаны, например, в Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology, Vol. 185, Academic Press, San Diego, Calif. (1990).
[0052] Большое количество промоторов, включая конститутивные, индуцируемые и репрессируемые промоторы, из множества различных источников хорошо известны в данной области. Репрезентативные источники промоторов содержат например, промоторы вирусов, млекопитающих, насекомых, растений, дрожжей и бактерий и пригодные промоторы из этих источников являются легко доступными, или могут быть изготовлены синтетически, на основании последовательностей, общедоступных, например, из депозиториев, таких как ATCC, а также из других коммерческих или индивидуальных источников. Промоторы могут быть однонаправленными (т.е., инициировать транскрипцию в одном направлении) или двухнаправленными (т.е., инициировать транскрипцию как в 3ʹ, так и в 5ʹ направлении). Неограничивающие примеры промоторов содержат, например, бактериальную T7-экспрессирующую систему, бактериальную экспрессирующую систему pBAD (araA), промотор цитомегаловируса (CMV), промотор SV40, промотор RSV. Индуцируемые промоторы содержат, например, систему Tet (патенты США 5464758 и 5814618), Экдизон-индуцируемую систему (No et al., Proc. Natl. Acad. Sci., 93: 3346-3351 (1996)), систему T-REX™ (Invitrogen, Carlsbad, CA), систему LACSWITCH™ (Stratagene, San Diego, CA) и Cre-ERT тамоксифен-индуцируемую рекомбиназную систему (Indra et al., Nuc. Acid. Res., 27: 4324-4327 (1999); Nuc. Acid. Res., 28: e99 (2000); патент США 7112715; и Kramer & Fussenegger, Methods Mol. Biol., 308: 123-144 (2005)).
[0053] Термин ʺэнхансерʺ, как это применено в данном описании, относится к последовательности ДНК, которая увеличивает транскрипцию, например, последовательность нуклеиновой кислоты, с которой она функционально связана. Энхансеры могут быть расположены на много тысяч пар оснований от кодирующей области последовательности нуклеиновой кислоты и могут опосредовать связывание регуляторных факторов, модели метилирования ДНК или изменения в структуре ДНК. Большое количество энхансеров из множества различных источников хорошо известно в данной области и не доступно в виде или внутри клонированных полинуклеотидов (напр., из депозиториев, таких как ATCC, а также других коммерческих или индивидуальных источников). Ряд полинуклеотидов, содержащих промоторы (такие как широко применяемый CMV промотор), также содержит энхансерные последовательности. Энхансеры могут быть расположены раньше, в или после кодирующих последовательностей.
[0054] Вектор также может содержать ʺселектируемый маркерный генʺ. Термин ʺселектируемый маркерный генʺ, как это применено в данном описании, относится к последовательности нуклеиновой кислоты, которая позволяет, чтобы клетки, экспрессирующие последовательность нуклеиновой кислоты, были селективно выбраны на или против, при наличии соответствующего селективного агента. Пригодные селектируемые маркерные гены известны в данной области и описаны, напр., в публикации международной заявки на патент WO 1992/008796 и WO 1994/028143; Wigler et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 77: 3567-3570 (1980); O'Hare et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 1527-1531 (1981); Mulligan & Berg, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 78: 2072-2076 (1981); Colberre-Garapin et al., J. Mol. Biol., 150: 1-14 (1981); Santerre et al., Gene, 30: 147-156 (1984); Kent et al., Science, 237: 901-903 (1987); Wigler et al., Cell, 11: 223-232 (1977); Szybalska & Szybalski, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 48: 2026-2034 (1962); Lowy et al., Cell, 22: 817-823 (1980); и патентах США 5122464 и 5770359.
[0055] В некоторых вариантах осуществления вектор представляет собой ʺэписомальный экспрессионный векторʺ или ʺэписомуʺ, которая способна реплицироваться в клетке-хозяина и продолжает существовать в виде экстрахромосомного сегмента ДНК в клетке-хозяина при наличии соответствующего селективного давления (см., напр., Conese et al., Gene Therapy, 11: 1735-1742 (2004)). Репрезентативные коммерчески доступные эписомальные экспрессионные векторы содержат, но не ограничены ими, эписомальные плазмиды, которые используют ядерный антиген вируса Эпштейна-Барра 1 (EBNA1) и точку начала репликации (oriP) вируса Эпштейна-Барра (EBV). Векторы pREP4, pCEP4, pREP7 и pcDNA3.1 от Invitrogen (Carlsbad, CA) и pBK-CMV от Stratagene (La Jolla, CA) представляют неограничивающие примеры эписомального вектора, который применяет T-антиген и точку начала репликации SV40 вместо EBNA1 и oriP.
[0056] Другие пригодные векторы содержат интегрирующие экспрессионные векторы, который могут рандомно интегрироваться в ДНК клетки-хозяина, или могут содержать рекомбинациинный сайт для позволения специфической рекомбинации между экспрессионным вектором и хромосомой клетки-хозяина. Такие интегрирующие экспрессионные векторы могут использовать контролирующие эндогенную экспрессию последовательности хромосом клетки-хозяина для оказания эффекта на экспрессию заданного белка. Примеры векторов, которые интегрируются сайт специфическим образом содержат, например, компоненты системы flp-in от Invitrogen (Carlsbad, CA) (напр., pcDNA™5/FRT), или системы cre-lox, такие как обнаруживаемые в векторах pExchange-6 Core от Stratagene (La Jolla, CA). Примеры векторов, которые рандомно интегрируют в клеточные хромосомы хозяина содержат, например, pcDNA3.1 (когда введен в отсутствии T-антигена) от Life Technologies (Carlsbad, CA), UCOE от Millipore (Billerica, MA) и pCI или pFN10A (ACT) FLEXI™ от Promega (Madison, WI).
[0057] Также могут быть применены вирусные векторы. Репрезентативные коммерчески доступные вирусные экспрессионные векторы содержат, но не ограничены ими, систему на основе аденовируса Per.C6, доступная у Crucell, Inc. (Leiden, The Netherlands), на основе лентивируса pLP1 от Invitrogen (Carlsbad, CA) и ретровирусные векторы pFB-ERV плюс pCFB-EGSH от Stratagene (La Jolla, CA).
[0058] Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие изобретательские аминокислотные последовательности, могут быть доставлены в клетку в одном и том же векторе (т.е., в cis). Однонаправленный промотор может быть применен для контроля экспрессии каждой последовательности нуклеиновой кислоты. В другом варианте осуществления комбинация двунаправленных и однонаправленных промоторов может быть применена для контроля экспрессии множественных последовательностей нуклеиновых кислот. Последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующие изобретательские аминокислотные последовательности альтернативно могут быть доставлены в популяцию клеток на отдельных векторах (т.е., в trans). Каждая из последовательностей нуклеиновой кислоты в каждом из отдельных векторов может содержать одинаковые или различные контролирующие экспрессию последовательности. Отдельные векторы может быть доставлены в клетки одновременно или последовательно.
[0059] Вектор(ы), содержащие нуклеиновую кислоту(ы), кодирующую изобретательские аминокислотные последовательности могут быть введены в клетки-хозяина, которые способны к экспрессированию полипептидов, кодируемых посредством этого, включая любую пригодную прокариотическую или эукариотическую клетку. Как таковое, изобретение относится к выделенной клетке, содержащей изобретательский вектор. Предпочтительные клетки-хозяина, являются такими, что они могут быть легко и надежно выращены, имеют обоснованно быстрые скорости роста, имеют хорошо охарактеризованные экспрессионные системы и могут быть трансформированы или трансфицированы легко и эффективно.
[0060] Примеры пригодных прокариотических клеток содержат, но не ограничены ими, клетки из рода Bacillus (такие как Bacillus subtilis и Bacillus brevis), Escherichia (такие как E. coli), Pseudomonas, Streptomyces, Salmonella и Erwinia. Особенно пригодные прокариотические клетки содержат различные штаммы Escherichia coli (напр., K12, HB101 (ATCC No. 33694), DH5α, DH10, MC1061 (ATCC No. 53338) и CC102).
[0061] Предпочтительно, вектор введен в эукариотическую клетку. Пригодные эукариотические клетки известны в данной области и содержат, например, клетки дрожжей, клетки насекомых и клетки млекопитающих. Примеры пригодных клеток дрожжей содержат клетки рода Kluyveromyces, Pichia, Rhino-sporidium, Saccharomyces и Schizosaccharomyces. Предпочтительные клетки дрожжей содержат, например, Saccharomyces cerivisae и Pichia pastoris.
[0062] Пригодные клетки насекомого описаны, например, в Kitts et al., Biotechniques, 14: 810-817 (1993); Lucklow, Curr. Opin. Biotechnol., 4: 564-572 (1993); и Lucklow et al., J. Virol., 67: 4566-4579 (1993). Предпочтительные клетки насекомого содержат Sf-9 и HI5 (Invitrogen, Carlsbad, CA).
[0063] Предпочтительно, в изобретении использованы клетки млекопитающих. Количество пригодных млекопитающих клеток-хозяина известны в данной области и многие доступны из Американской коллекции типовых культур (ATCC, Manassas, VA). Примеры пригодных клеток млекопитающих содержат, но не ограничены ими, клетки Яичника китайского хомячка (CHO) (ATCC No. CCL61), CHO DHFR-клетки (Urlaub et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97: 4216-4220 (1980)), человеческие эмбриональные клетки почек (HEK) 293 или клетки 293T (ATCC No. CRL1573) и клетки 3T3 (ATCC No. CCL92). Другими пригодными млекопитающими клеточными линиями являются обезьяньи COS-1 (ATCC No. CRL1650) и клеточные линии COS-7 (ATCC No. CRL1651), а также клеточная линия CV-1 (ATCC No. CCL70). Дополнительно иллюстративные млекопитающие клетки-хозяина содержат клеточные линии приматов и клеточные линии грызунов, включая трансформированные клеточные линии. Нормальные диплоидные клетки, клеточные штаммы производные из in vitro культуры первичной ткани, а так же из первичных эксплантатов, также пригодны. Другие пригодные клеточные линии млекопитающих содержат, но не ограничены ими, N2A клетки нейробластомы мыши, HeLa, мышиные клетки L-929 и BHK или хомячьи клеточные линии HaK, все из которых доступны у ATCC. Способы отбора пригодных млекопитающих клеток-хозяина и способы для трансформации, культивирования, амплификации, скринирования и очистки клеток известны в данной области.
[0064] Наиболее предпочтительно млекопитающая клетка представляет собой человеческую клетку. Например, млекопитающая клетка может быть человеческой лимфоидной или полученной из лимфоидной клеточной линией, такой как клеточная линия пре-В-лимфоцитного происхождения. Примеры человеческих линий лимфоидных клеток содержат, без ограничения, RAMOS (CRL-1596), Daudi (CCL-213), EB-3 (CCL-85), DT40 (CRL-2111), 18-81 (Jack et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 1581-1585 (1988)), клетки Raji (CCL-86) и их производные.
[0065] Последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующей изобретательскую аминокислотную последовательность, может быть введена в клетку посредством ʺтрансфекцииʺ, ʺтрансформацииʺ или ʺтрансдукцииʺ. ʺТрансфекцияʺ, ʺтрансформацияʺ или ʺтрансдукцияʺ, как это применено в данном описании, относятся к введению одного или более экзогенных полинуклеотидов в клетки-хозяина с применением физических или химических способов. Многие технологии трансфекции известны в данной области и содержат, например, совместное осаждение ДНК с фосфатом кальция (см., напр., Murray E.J. (ed.), Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Gene Transfer and Protocols, Humana Pres (1991)); DEAE-декстран; электропорацию; опосредованную катионной липосомой трансфекцию; микрочастичную бомбардировку с частицами вольфрама (Johnston, Nature, 346: 776-777 (1990)); и совместное осаждение ДНК с фосфатом стронция (Brash et al., Mol. Cell Biol., 7: 2031-2034 (1987)). Фаг или вирусные векторы могут быть введены в клетки-хозяина, после роста инфекционных частиц в пригодных упаковывающих клетках, многие из которых коммерчески доступны.
[0066] Изобретение относится к композиции, содержащей эффективное количество изобретательского полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина, изобретательского полипептида легкой цепи иммуноглобулина, изобретательского связывающего IL-33 агента, изобретательской последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей любое из вышеприведенного, или изобретательского вектора, содержащего изобретательскую последовательность нуклеиновой кислоты. Предпочтительно, композиция является фармацевтически приемлемой (напр., физиологически приемлемой) композицией, которая содержит носитель, предпочтительно фармацевтически приемлемый (напр., физиологически приемлемый) носитель и изобретательские аминокислотные последовательности, антиген-связывающий агент или вектор. Любой пригодный носитель может быть применен в контексте изобретения и такие носители хорошо известны в данной области. Выбор носителя будет определен, отчасти, конкретным сайтом, к которому может быть введена композиция, и конкретным способом, примененным для введения композиции. Композиция необязательно может быть стерильной. Композиция может быть заморожена или лиофилизирована для хранения и ресуспендирована в пригодном стерильном носителе перед применением. Композиции могут быть генерированы в соответствии с общепринятыми технологиями, описанными, напр., в Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Edition, Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, PA (2001).
[0067] Изобретение дополнительно относится к способу лечения заболевания или нарушения у млекопитающего, которое восприимчиво к ингибированию IL-33 или нейтрализации. Способ содержит введение вышеупомянутой композиции млекопитающему, имеющему заболевание или нарушение, которое является восприимчивым к ингибированию или нейтрализации IL-33, вследствие чего заболевание или нарушение у млекопитающего подвергается лечению. Заболевание или нарушение, которое является ʺвосприимчивым к IL-33 ингибированиюʺ или ʺвосприимчивым к IL-33 нейтрализацииʺ, относится к любому заболеванию или нарушению, в котором понижение уровней или активности IL-33 обладает терапевтической выгодой для млекопитающего, предпочтительно людей, или неправильная экспрессия (напр., сверхэкспрессия) или повышенная активность IL-33 вызывает или вносит вклад в патологические эффекты заболевания или нарушения. Заболевания или нарушения, которые являются восприимчивыми к ингибированию или нейтрализации IL-33, содержат, например, воспалительные нарушения, аутоиммунные заболевания, некоторые раки (напр., эпителиальные раки (карциномы), хроническую гранулоцитную лейкемию (CML), раки молочной железы и желудочно-кишечные раки) и любое атопическое нарушение. Воспалительные нарушения содержат, например, аллергическое воспаление кожы, легких и желудочно-кишечного тракта, атопический дерматит (также известный как атопическая экзема), астму (аллергическую и неаллергическую), фиброз (напр., идиопатический легочный фиброз, склеродермию, фиброз почки и рубцевание), хроническое обструктивное заболевание легких (COPD), аллергический ринит, пищевые аллергии (напр., аллергии на арахис, яйца, молочные продукты, моллюски, лесные орехи и т.д.), сезонные аллергии и другие аллергии. Аутоиммунные заболевания содержат, например, Болезнь Крона, ревматоидный артрит, псориаз, анкилозирующий спондилоартрит, красную волчанку и склеродермию. Термин ʺатопическийʺ, как это применено в данном описании, относится к наследственной предрасположенности к развитию некоторых реакций гиперчувствительности (напр., экзема (атопический дерматит), сенная лихорадка (аллергический ринит) и индуцируемая аллергией астма (аллергическая астма)), которая, как правило, опосредована чрезмерной выработкой IgE.
[0068] Как это применено в данном описании, термины ʺлечениеʺ ʺподвергание лечениюʺ и тому подобное относятся к получению требуемого фармакологического и/или физиологического эффекта. Предпочтительно, эффект является терапевтическим, т.е., эффект частично или полностью исцеляет заболевание и/или неблагоприятный симптом, присущий заболеванию. В связи с этим, изобретательский способ содержит введение ʺтерапевтически эффективного количестваʺ связывающего IL-33 агента. ʺТерапевтически эффективное количествоʺ относится к количеству, эффективному с дозировками и в течение периодов времени, необходимых для достижения требуемого терапевтического результата. Терапевтически эффективное количество может варьироваться в соответствии с факторами, такими как состояние заболевания, возраст, пол и вес индивидуума и способность связывающего IL-33 агента вызывать требуемый ответ у индивидуума. Например, терапевтически эффективное количество связывающего IL-33 агента по изобретению представляет собой количество, которое понижает IL-33 биоактивность у человека.
[0069] Альтернативно фармакологический и/или физиологический эффект может являться профилактическим, т.е., эффект полностью или частично предотвращает заболевание или его симптом. С этой точки зрения, изобретательский способ содержит введение ʺпрофилактически эффективного количестваʺ связывающего IL-33 агента. ʺПрофилактически эффективное количествоʺ относится к количеству, эффективному с дозировками и в течение периодов времени, необходимых, для достижения требуемого профилактического результата (напр., предотвращение начала заболевания).
[0070] Типичная доза может лежать, например, в диапазоне от 1 пг/кг до 20 мг/кг массы тела животного или человека; однако, дозы ниже или выше этого иллюстративного диапазона находятся в пределах объема изобретения. Ежесуточная парентеральная доза может составлять приблизительно от 0,00001 мкг/кг до приблизительно 20 мг/кг общей массы тела (напр., приблизительно 0,001 мкг/кг, приблизительно 0,1 мкг/кг, приблизительно 1 мкг/кг, приблизительно 5 мкг/кг, приблизительно 10 мкг/кг, приблизительно 100 мкг/кг, приблизительно 500 мкг/кг, приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, приблизительно 10 мг/кг или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений), предпочтительно от приблизительно 0,1 мкг/кг до приблизительно 10 мг/кг общей массы тела (напр., приблизительно 0,5 мкг/кг, приблизительно 1 мкг/кг, приблизительно 50 мкг/кг, приблизительно 150 мкг/кг, приблизительно 300 мкг/кг, приблизительно 750 мкг/кг, приблизительно 1,5 мг/кг, приблизительно 5 мг/кг, или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений), более предпочтительно от приблизительно 1 мкг/кг до 5 мг/кг общей массы тела (напр., приблизительно 3 мкг/кг, приблизительно 15 мкг/кг, приблизительно 75 мкг/кг, приблизительно 300 мкг/кг, приблизительно 900 мкг/кг, приблизительно 2 мг/кг, приблизительно 4 мг/кг, или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений) и даже более предпочтительно от приблизительно 0,5 до 15 мг/кг массы тела в сутки (напр., приблизительно 1 мг/кг, приблизительно 2,5 мг/кг, приблизительно 3 мг/кг, приблизительно 6 мг/кг, приблизительно 9 мг/кг, приблизительно 11 мг/кг, приблизительно 13 мг/кг, или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений). За терапевтической или профилактической эффективностью можно наблюдать посредством периодической оценки подвергнутых лечению пациентов. Для повторяющихся введений в течение нескольких дней или дольше, в зависимости от состояния, лечение может быть повторено до тех пор, пока происходит требуемая супрессия симптомов заболевания. Однако другие режимы дозирования могут быть пригодны и охватываются объемом изобретения. Требуемая дозировка может быть доставленной одиночным болюсным введением композиции, множественными болюсными введениями композиции, или непрерывным введением композиции вливанием.
[0071] Композиция, содержащая эффективное количество изобретательского полипептида тяжелой цепи иммуноглобулина, изобретательского полипептида легкой цепи иммуноглобулина, изобретательского связывающего IL-33 агента, изобретательской последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей любое из вышеприведенного, или изобретательского вектора, содержащего изобретательскую последовательность нуклеиновой кислоты, может быть введена млекопитающему с применением стандартных технологий введения, включая оральное, внутривенное, внутрибрюшинное, подкожное, легочное, трансдермальное, внутримышечное, внутриносовое, букальное, подъязычное или суппозиторное введение. Композиция предпочтительно пригодна для парентерального введения. Термин ʺпарентеральноеʺ, как это применено в данном описании, включает внутривенное, внутримышечное, подкожное, ректальное, вагинальное и внутрибрюшинное введение. Более предпочтительно композиция введена млекопитающему с применением периферической системной доставки посредством внутривенной, внутрибрюшинной или подкожной инъекции.
[0072] После введения млекопитающему (напр., перекрестно реактивный человек) биологическая активность изобретательского IL-33-связывающиего агента может быть измерена любым пригодным способом, известным в данной области. Например, биологическая активность может быть оценена определением стабильности конкретного связывающего IL-33 агента. В одном варианте осуществления изобретения, связывающий IL-33 агент (напр., антитело) имеет in vivo время полужизни между приблизительно 30 минутами и 45 днями (напр., приблизительно 30 минут, приблизительно 45 минут, приблизительно 1 час, приблизительно 2 часа, приблизительно 4 часа, приблизительно 6 часов, приблизительно 10 часов, приблизительно 12 часов, приблизительно 1 день, приблизительно 5 дней, приблизительно 10 дней, приблизительно 15 дней, приблизительно 25 дней, приблизительно 35 дней, приблизительно 40 дней, приблизительно 45 дней или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений). В другом варианте осуществления связывающий IL-33 агент имеет in vivo время полужизни между приблизительно 2 часами и 20 днями (напр., приблизительно 5 часов, приблизительно 10 часов, приблизительно 15 часов, приблизительно 20 часов, приблизительно 2 дня, приблизительно 3 дня, приблизительно 7 дней, приблизительно 12 дней, приблизительно 14 дней, приблизительно 17 дней, приблизительно 19 дней, или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений). В другом варианте осуществления связывающий IL-33 агент имеет in vivo время полужизни между приблизительно 10 днями и приблизительно 40 днями (напр., приблизительно 10 дней, приблизительно 13 дней, приблизительно 16 дней, приблизительно 18 дней, приблизительно 20 дней, приблизительно 23 дня, приблизительно 26 дней, приблизительно 29 дней, приблизительно 30 дней, приблизительно 33 дня, приблизительно 37 дней, приблизительно 38 дней, приблизительно 39 дней, приблизительно 40 дней или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений).
[0073] Биологическая активность конкретного связывающего IL-33 агента также может быть оценена определением его связывающей аффинности с IL-33 или его эпитопом. Термин ʺаффинностьʺ относится к константе равновесия для обратимого связывания двух агентов и выражен в виде константы диссоциации (KD). Аффинность связывающего агента с лигандом, такая как аффинность антитела к эпитопу, может составлять, например, от приблизительно 1 фемтомолярной (фМ) до приблизительно 100 микромолярной (мкМ) (напр., от приблизительно 1 фМ до приблизительно 1 пикомолярной (пМ), от приблизительно 1 пМ до приблизительно 1 наномолярной (нМ), от приблизительно 1 нМ до приблизительно 1 микромолярной (мкМ) или от приблизительно 1 мкМ до приблизительно 100 мкМ). В одном варианте осуществления связывающий IL-33 агент может связываться с IL-33 белком с KD, меньшей чем или равной 1 наномолярной (напр., 0,9 пМ, 0,8 пМ, 0,7 пМ, 0,6 пМ, 0,5 пМ, 0,4 пМ, 0,3 пМ, 0,2 пМ, 0,1 пМ, 0,05 пМ, 0,025 пМ, 0,01 пМ, 0,001 пМ или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений). В другом варианте осуществления связывающий IL-33 агент может связываться с IL-33 с KD, меньшей чем или равной 200 пМ (напр., 190 пМ, 175 пМ, 150 пМ, 125 пМ, 110 пМ, 100 пМ, 90 пМ, 80 пМ, 75 пМ, 60 пМ, 50 пМ, 40 пМ, 30 пМ, 25 пМ, 20 пМ, 15 пМ, 10 пМ, 5 пМ, 1 пМ или в диапазоне, определяемом любыми двумя из вышеприведенных значений). Аффинность иммуноглобулина к антигену или эпитопу, представляющему интерес, может быть измерена с применением любого признаваемого в данной области анализа. Такие способы содержат, например, сортировку флуоресцентно-активированных клеток (FACS), разделяемые шарики (напр., магнитные шарики), поверхностный плазмонный резонанс (SPR), конкурирование в фазе раствора (KINEXA™), антигенный пэннинг и/или ELISA (см., напр., Janeway et al. (eds.), Immunobiology, 5th ed., Garland Publishing, New York, NY, 2001).
[0074] Связывающий IL-33 агент по изобретению может быть введен одиночно или в комбинации с другими лекарственными средствами (напр., в виде адъюванта). Например, связывающий IL-33 агент может быть введен в комбинации с другими агентами для лечения или предотвращения заболеваний или нарушений, раскрытых в данном описании. С этой точки зрения связывающий IL-33 агент может быть применен в комбинации с по меньшей мере одним другим противоспалительным агентом, включая, например, кортикостероиды (напр., преднизон и флутиказон) и нестероидные противоспалительные лекарственные средства (NSAID) (напр., аспирин, ибупрофен и напроксен).
[0075] В добавление к терапевтическим применениям связывающий IL-33 агент, описанный в данном описании, может быть применен в диагностических или исследовательских приложениях. С этой точки зрения, связывающий IL-33 агент может быть применен в способе для диагноза заболевания или нарушения, которое восприимчиво к ингибированию или нейтрализации IL-33. Подобным образом, связывающий IL-33 агент может быть применен в анализе для наблюдения за уровнями IL-33 белка у объекта, тестируемого на заболевание или нарушение, которое восприимчиво к ингибированию IL-33 или нейтрализации. Исследовательские приложения содержат, например, способы, которые используют связывающий IL-33 агент и метку для детектирования белка IL-33 в образце, напр., в человеческих жидких средах организма или в клеточном или тканевом экстракте. Связывающий IL-33 агент может быть применен с или без модификации, такой как ковалентное или нековалентное мечение с детектируемой группой. Например, детектируемая группа может представлять собой радиоизотоп (напр., 3H, 14C, 32P, 35S или 125I), флуоресцентное или хемилюминесцентное соединение (напр., флуоресцинизотиоцианат, родамин или луциферин), фермент (напр., щелочная фосфатаза, бета-галактозидаза или пероксидаза хрена) или протетические группы. Любой способ, известный в данной области, может быть задействован для отдельного конъюгирования антиген-связывающего агента (напр., антитело) с детектируемой группой в контексте изобретения (см., напр., Hunter et al., Nature, 194: 495-496 (1962); David et al., Biochemistry, 13: 1014-1021 (1974); Pain et al., J. Immunol. Meth., 40: 219-230 (1981); и Nygren, J. Histochem. and Cytochem., 30: 407-412 (1982)).
[0076] Уровни белка IL-33 могут быть измерены с применением изобретательского связывающего IL-33 агента любым пригодным способом, известным в данной области. Такие способы содержат, например, радиоиммуноанализ (RIA) и FACS. Нормальные или стандартные значения экспрессии IL-33 могут быть установлены с применением любой пригодной технологии, напр., посредством комбинирования образца, содержащего или возможно содержащего, IL-33 с IL-33-специфическим антителом при условиях, пригодных для формирования комплекса антиген-антитело. Антитело непосредственно или опосредованно мечено с детектируемым веществом для облегчения детекции связанного или несвязанного антитела. Пригодные детектируемые вещества содержат различные ферменты, протетические группы, флуоресцентные материалы, люминесцентные материалы и радиоактивные материалы (см., напр., Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, CRC Press, Inc. (1987)). Количество полипептида IL-33, экспрессированного в образце, затем сравнивают со стандартной величиной.
[0077] Связывающий IL-33 агент может быть представлен в наборе, т.е., упакованная комбинация реагентов в заранее определенных количествах с инструкциями для выполнения диагностического анализа. Если связывающий IL-33 агент является меченным с ферментом, набор по желанию включает субстраты и кофакторы, требуемые для фермента (напр., предшественник субстрата, который относится к детектируемому хромофору или флуорофору). В добавление, в наборе могут содержаться другие добавки, такие как стабилизаторы, буферы (напр., блокирующий буфер или лизирующий буфер) и тому подобное. Относительные количества различных реагентов могут варьироваться для предоставления концентраций в растворе реагентов, которые существенно оптимизируют чувствительность анализа. Реагенты могут быть представлены в виде сухих порошков (как правило, лиофилизированных), включая наполнители, которые при растворении будут обеспечивать раствор реагента, имеющий соответствующую концентрацию.
[0078] Следующие примеры дополнительно иллюстрируют изобретение но, без сомнения, не должны истолковываться, как каким-либо образом ограничивающие его объем.
Пример 1
[0079] Этот пример описывает анализы, примененные для определения функциональной активности изобретательских полипептидов тяжелой и легкой цепи иммуноглобулина.
IL-33-опосредованное высвобождение IL5 из клеток KU812.
[0080] Клетки KU812, человеческая подобная базофилу клеточная линия CML (ATCC No. CRL-2099) (см., напр., Tare et al., Exp. Cell Res., 316(15): 2527-37 (2010); Lefrancais et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 109(5): 1673-1978 (2012)), отвечают на IL-33 стимулирование посредством секретирования IL-5. Клетки KU812 суспендировали в культуральной среде RPM1+10% FBS и 500000 клеток в расчете на лунку высеивали слоем на 96-луночные планшеты с плоским дном. Стоковый раствор 30 мкг/мл для антитела, представляющего интерес, последовательно разводили для генерирования 8 концентраций с интервалами с логарифмом отношения соседних значений 0,5. Разбавленные образцы добавляли рядами в клетки и инкубировали при 37°C в течение 30 минут. Затем в каждую лунку добавляли IL-33-his6-bio (C-терминально меченный с 6 His и биотинилированный со средним от 1 до 2 биотинов на молекулу) (3 нг), и планшеты инкубировали при 37°C в течение 48 часов. Супернатанты затем удаляли и выдерживали при 4°C до тестирования посредством ELISA. Супернатанты тестировали с применением набора IL-5 DuoSet ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN) и оценивали на считывателе для микрпланшетов SPECTRAMAX™ (Molecular Devices, LLC, Sunnyvale, CA) с применением программного обеспечения для получения и анализа данных с микропланшета SOFTMAX PRO ™ (Molecular Devices, LLC, Sunnyvale, CA) для определения выработки IL-5.
IL-33-опосредованная экспрессия люциферазы в клетках HEK293-ST2
[0081] HEK/ST2-стабильную клеточную линию генерировали первым высеиванием слоем интактных клеток HEK при 3×103 клеток/колба T75 колба в DMEM/10%FBS и инкубировали в течение ночи при 37 °C. На следующий день клетки трансфицировали смешиванием 500 мкл Optimem (Life Technologies, Carlsbad, CA)+24 мкл БХ FUGENE™ (Promega, Madison, WI) и оставляли инкубироваться при комнатной температуре в течение пяти минут. ДНК, кодирующую ST2-Fc (4 мкг), добавляли в смесь FUGENE™ и оставляли инкубироваться при комнатной температуре в течение 25 минут. Смесь ДНК/FUGENE™ затем распределяли по клеткам HEK и оставляли инкубироваться в течение ночи при 37 °C, 5% CO2. Через 24 часа после трансфекции клетки расщепляли и проводили гигромициновый отбор в течение периода 3-4 недели до стабильной селекции.
IL-8 Репортерный люциферазный анализ
[0082] Клетки 4×106 HEK293/ST2-Fc высеивали в колбу T-75 в течение ночи при 37 °C, 5% CO2. На следующее утро конструкт ДНК AB4111, который кодирует человеческий IL-8 промотор, направляющий экспрессию репортерного гена люциферазы, трансфицировали в клетки посредством смешивания 500 мкл Optimem+24 мкл БХ FUGENE™ и оставляли инкубироваться при комнатной температуре в течение пяти минут. IL-8 промотор реагирует на каскад передачи сигнала, инициируемый стимулированием комплекса ST2-IL-1RAcP рецептор посредством задействования IL-33. AB4111 (2 мкг) добавляли к смеси FUGENE™ и оставляли инкубироваться при комнатной температуре в течение 25 минут. Смесь ДНК/FUGENE™ распределяли по клеткам HEK/ST2 и оставляли инкубироваться в течение 8 часов. Клетки собирали с ACCUTASE™ и высеивали в 96-луночный, планшет с плоским дном, с 2,0×104 клеток в расчете на лунку в 0,1 мл DMEM/10%FBS. Планшеты инкубировали в течение 15-18 часов при 37 °C, 5% CO2. На следующее утро планшеты осторожно переворачивали на бумажные полотенца для удаления сред. 50 мкл/лунку свежей DMEM/10%FBS добавляли в каждую лунку. Клетки стимулировали с предварительно образованным комплексом IL-33/ST2-Fc или IL-33/Ат в течение 20 минут при комнатной температуре и затем добавляли к клеткам и оставляли инкубироваться в течение дополнительных 5 часов при 37 °C. После 5 часов определяли люциферазную активность с применением системы для анализа Steady Glo-Luciferase (Promega, Madison, WI) посредством добавления люциферазного реагента с 1:1 об./об. в каждую лунку. Лунки перемешивали и 150 мкл/лунку переносили планшеты с черными стенками и прозрачным дном и считывали на считывателе для планшетов ENVISTION™ (PerkinElmer, Waltham, MA) с применением программы Люминесценция (60-с задержка). Данные анализировали с применением 4 параметрической кривой, подобранной с программным обеспечением GraphPad Prism 5 (GraphPad, San Diego, CA).
Способы поверхностного плазмонного резонанса (SPR)
[0083] Кинетику связывания и аффинности анти-IL33 антитела определяли посредством SPR на инструменте BIACORE™ T200 (GE Healthcare). Каждый из четырех потоков клеток на чипе Series S CM5 иммобилизовывали с ~10000 RU анти-человеческого IgG (Fc). Антитела (~1 мкг/мл) улавливали в течение 60 секунд при скорости потока 10 мкл/мин. Мономерный IL-33 разбавляли в подвижном буфере (HBS-EP+, pH 7,6), начиная с приблизительно 100-кратно более высокой концентрации, чем KD каждого антитела. Каждую концентрацию IL-33 пропускали через все протекающие клетки в течение 180 секунд при 30 мкл/мин, затем оставляли диссоциироваться в течение 1800 секунд. Поверхности регенерировали с 3 M MgCl2 в течение 60 секунд. Кинетические константы асссоциации и диссоциации (kon и koff) и аффинность в стационарном состоянии (KD) получали по результатам сенсограмм с применением программного обеспечения для оценки BIACORE T200 версия 1.0.
[0084] Результаты вышеприведенных анализов по отношению к нескольким из IL-33-связывающих агентов, описанных в данном описании, показаны на фигурах 1A, 1B, 2A и 2B.
Пример 2
[0085] Этот пример описывает эксперименты, демонстрирующие функциональную активность изобретательского связывающего IL-33 агента.
[0086] Полипептид тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 136 спаривали с полипептидом легкой цепи иммуноглобулина, содержащим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 171. Полученное в результате антитело обозначали APE4909. Способность APE4909 к ингибированию IL-33-опосредованного высвобождения IL-5 и IL-9 в первичных человеческих базофилах оценивали, как описано ниже.
[0087] Единицы редукционной лейкоцитарной системы (LRS), полученные из донорной цельной крови, получали из банка крови San Diego. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) обрабатывали стандартными способами с применением разделения центрифугированием с фиколлом. Как правило, получали приблизительно 109 PBMC из единицы LRS. Базофилы выделяли из PBMC с применением набора для выделения человеческих базофилов II (Miltenyi Biotec cat#130-092-662, San Diego, CA). Общий выход базофилов составлял приблизительно 106.
[0088] Базофилы разбавляли до плотности 2 x106/мл в среде RPMI 1640, содержащей 10% фетальной бычьей сыворотки, пенициллин/стрептомицин (P/S) и 25 нг/мл рекомбинантного человеческого IL-3 (R&D Systems, Minneapolis, MN). 100 мкл разбавленных клеток в расчете на лунку высеивали слоем на стандартные плоскодонные 96-луночные тканевые культуральные планшеты с конечной клеточной плотностью 2×105 в расчете на лунку. Наружные лунки наполняли с 200 мкл PBS/лунку для мимнимизации эффектов неравномерного испарения. Клетки культивировали в течение ночи в 5% CO2 в инкубаторе 37 °C.
[0089] На следующий день APE4909 и мономерный человеческий белок ST2 (hST2 - обозначаемый как APE3906) добавляли в концентрации, варьирующейся от 30 до 0 мкг/мл, последовательно разбавляли с интервалами с логарифмом отношения соседних значений 0,5 в RPMI+10% FBS+P/S, содержащем 50 нг/мл IL-33. Приблизительно через 18 часов планшеты центрифугировали при 300 x g в течение 3 минут. Супернатанты удаляли, переносили в чистый планшет и хранили при -80°C в ожидании анализа.
[0090] Уровни IL-5 и/или IL-9 в клеточных супернатантах оценивали посредством ELISA с применением набора DUOSET™ ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN) в соответствии с предполагаемым производителем протоколом. Антитело APE4909 ингибировало опосредованное IL-33 высвобождение IL-5 и IL-9 в первичных человеческих базофилах, как показано на фигурах 3 и 4.
[0091] Результаты этого примера демонстрируют, что изобретательский связывающий IL-33 агент может ингибировать активность IL-33.
Пример 3
[0092] Этот пример демонстрирует аффинность изобретательского связывающего IL-33 агента в отношении IL-33.
[0093] Способность антитела APE4909, описанного в примере 2, взаимодействовать с IL-33, анализировали биофизически с применением биосенсорной платформы KINEXA™ 3200 от Sapidyne Instruments (Boise, ID). Эксперименты связывания для человеческого IL-33 и IL-33 яванского макака (cynoIL-33) проводили, как описано ниже и их осуществляли два раза независимо. Условия для первого эксперимента показаны не в скобках, тогда как условия для второго эксперимента представлены в скобках.
APE4909/человеческий IL-33
[0094] Твердую фазу готовили с применением покрытых азлактоном шариков, покрытых с применением раствора 50 мкг/мл гистидин-меченного человеческого IL-33. Эксперименты связывания выполняли в 1X PBS pH 7,4, 0,1% BSA. Антитело APE4909 с конечной концентрацией 10 пМ (или 20 пМ) инкубировали с конечными концентрациями IL-33 от 200 пМ до 3,4 фМ (или 400 пМ до 6,7 фМ) в течение 3 (или 4) дней при 4 °C. 5 мл (или 10 мл) каждой смеси наносили на шарики, покрытые с IL-33 со степенью 0,25 мл/мин в течение 1200 секунд (или 2400 секунд). Свободное антитело детектировали с ALEXAFLUOR™ 647-(Life Technologies, Carlsbad, CA), меченное ослиное анти-человеческое антитело. Все данные адаптировали с применением стандартного программного обеспечения KINEXA™.
APE4909/Cyno IL-33 (cIL-33)
[0095] Эксперименты выполняли, как описано выше для человеческого IL-33, за исключением того, что APE4909 антитело c конечной концентрацией 20 пМ и 100 пМ инкубировали с cIL-33 при конечной концентрации от 3нМ до 315 фМ в течение 24 часов при 4 °C. Каждую смесь наносили на шарики, покрытые с cIL-33 со скоростью 0,25 мл/мин в течение 500 секунд (для 20 пМ) или 2120 секунд (для 100 пМ). Свободное антитело детектировали с меченным ослиным анти-человеческим антителом ALEXAFLUOR™ 647-(Life Technologies, Carlsbad, CA). Две кривые комбинировали с применением анализа N-кривой и все данные адаптировали с применением программного обеспечения KINEXA™. Для подтверждения эксперимент повторяли при концентрации антитела APE4909 200пМ с применением подобным образом приготовленной твердой фазы, буферов и детекционных реагентов. Антитело APE4909 инкубировали с cIL-33 при конечной концентрации от 15нМ до 250 фМ в течение 24 часов при 4°C и наносили на шарики, покрытые с cIL-33 со скоростью 0,25 мл/мин в течение 180 секунд. Эти данные адаптировали с применением стандартного программного обеспечения KINEXA™.
[0096] Аффинности APE4909 в отношении человеческого IL-33 и cynoIL-33 показаны на фигуре 5 и фигуре 6, соответственно. Результаты этого примера демонстрируют, что изобретательский связывающий IL-33 агент связывается как с человеческим IL-33, так и с IL-33 примата кроме человека с высокой аффинностью.
Пример 4
[0097] Этот пример демонстрирует, что некоторые изобретательские связывающие IL-33 агенты конкурируют с ST2 рецептором за связывание с человеческим IL-33.
[0098] За IL-33 связыванием наблюдали с применением системы BIACORE™ T200 (GE Healthcare, Little Chalfont, Buckinghamshire, UK). Связывание IL-33 с различными IL-33 антителами, раскрытыми в данном описании, или человеческим ST2 рецептором рассматривали посредством улавливания антитела и обозревания связывающего ответа фиксированных концентраций IL-33 в комбинации с увеличивающимися количествами ST2. Анти-человеческий IgG (Fc-специфический, ~10000 RU) иммобилизовывали на чипе BIACORE™ CM5 с применением химии EDC-активированного сопряжения аминов. Затем изобретательские IL-33 антитела или человеческие ST2, слитые с Fc областью человеческого IgG1 (2,0 мкг/мл, время контакта 1 минута при скорости потока 10 мкл/мин), улавливали при 25°C (~300 RU) на этой поверхности. Затем раствор аналита (предварительно инкубированного в течение больше чем 30 минут), содержащий мономерный растворимый человеческий немеченый IL-33 (1 пМ) и немеченый человеческий ST2 (10, 3,3, 1,1 или 0,37 пМ), пропускали над захваченными лигандами в течение 2 минут со скоростью 30 мкл/мин и за диссоциацией наблюдали в течение дополнительных 2 минут. Поверхность сенсорного чипа регенерировали после каждого цикла с применением 3M MgCl2 (60 секунд при 30 мкл/мин).
[0099] Второй набор экспериментов выполняли, как описано выше, но со следующими изменениями: (1) сенсорный чип иммобилизовывали с анти-мышиным IgG (Fc-специфический, ~7500 RU); (2) человеческие ST2, слитые с мышиным IgG2aFc (1,0 мкг/мл), улавливали на чипе со временем контакта 4 минуты; и (3) предварительно инкубированный раствор аналита содержал мономерный растворимый человеческий немеченый IL-33 (10 пМ) и или изобретательское IL-33 антитело, или мономерный немеченный человеческий ST2 (100 пМ, 25 пМ, 6,3 нМ или 1,6 пМ). Раствор аналита продолжали инкубировать в течение приблизительно 30 минут, тогда как устройство выполняло стартовые циклы. Улавливание и связывание аналита выполняли в подвижном буфере HBS-EP+ (10 мМ HEPES, pH 7,6, 150 мМ NaCl, 3 мМ EDTA, 0,05% Surfactant P-20; Teknova).
[0100] ST2 связывание с таким же эпитопом IL-33, как у изобретательского антитела, было связано с потерей связывающего ответа, так как предварительно инкубирование ST2 с IL-33 может препятствовать доступу антитела к эпитопу. ST2 связывание с другим эпитопом IL-33 позволяет IL-33 связываться с уловленным изобретательским антителом, что наблюдали в виде увеличения в связывающем ответе, так как связывающий ответ непосредственно прямопропорционален массе аналита/комплекса. Результаты этих экспериментов представлены далее в таблице 1.
Таблица 1
Изобретательское антитело | Ответ | Вывод |
APE00986 | нет ответа в отсутствии ST2 | Не связывается с IL-33 |
APE02718 | ответ понижается по мере того как [ST2] возрастает | ST2 связывается с таким же/перекрывающимся эпитопом |
APE03833 | ответ понижается по мере того как [ST2] возрастает | ST2 связывается с таким же/перекрывающимся эпитопом |
APE04269 | ответ понижается по мере того как [ST2] возрастает | ST2 связывается с таким же/перекрывающимся эпитопом |
APE05492 | ответ возрастает по мере того как [ST2] возрастает | ST2 связывается с другим эпитопом |
[0101] Результаты этого примера демонстрируют, что некоторые изобретательские связывающие IL-33 агенты связываются с IL-33 эпитопом, который является подобным или идентичным эпитопу, связанному ST2 рецептором.
Пример 5
[0102] Этот пример демонстрирует, что изобретательский связывающий IL-33 агент ингибирует человеческую IL-33-направляемую экспансию периферических эозинофилов.
[0103] IL-33 индуцирует повышенную экспрессию и высвобождение IL-5 из CD4+ TH2 клеточных популяций, врожденных лимфоидных клеток типа-2 (ILC2 клетки) и базофилов. IL-5 представляет собой цитокин, который играет ключевую роль в дифференциации, экспансии и выживании эозинофилов, популяции клеток, которая, как известно, опосредует некоторые аспекты признаков атопического заболевания, такие как астма и ринит. В предварительном исследовании человеческий IL-33 был инъецирован внутрибрюшино мышам дикого типа Balb/c в течение шести последовательных дней с дозой 5 мкг в расчете на животное. Последующий анализ FACS по завершению этого первоначального 6-дневного исследования указывал на то, что подвергшиеся лечению с человеческим IL-33 мыши имели повышенные количества эозинофилов в периферической крови (как определено посредством анализа с высоким боковым светорассеянием и CCR3 Siglec-F и экспрессии CD16/CD32) по сравнению с подвергшимися лечению с носителем (PBS) мышами.
[0104] В качестве продолжения вышеприведенного исследования мыши дикого типа Balb/c были снова инъецированы с 5 мкг человеческого IL-33 раза в сутки в течение 6-дней в общем (дней 1-6) и анти-человеческое антитело IL-33 APE04909 (описанное выше) вводили в дни -2 и +2 исследования с дозой 10 мг/кг каждые сутки. Схожим группам мышей, подвергаемым лечению с человеческим IL-33 с дозой 5 мкг раз в сутки, вводили или контрольное человеческое мАт изотипа IgG (обозначенное APE00987), или человеческий ST2-hFc слитый белок (обозначенный APE027180), который представляет человеческую IgG1 Fc-слитую димерную версию растворимого IL-33 рецептора (ST2). Оба из этих контрольных белков также вводили с дозами 10 мг/кг только в дни -2 и +2 исследования, как описано для антитела APE04909.
[0105] Как показано на фигуре 7, анти-IL-33 APE04909 антитело существенно ингибировало человеческую IL-33-направляемую эозинофильную экспансию в компартмент периферической крови. При сравнении, человеческий ST2-hFc белок не мог значительно снижать количества эозинофилов крови у мыши, подверженной обработке с человеческим IL-33, и не демонстрировал сниженный уровень эозинофильных количеств выше, чем детектируемый у мышей, подвергаемых лечению с контрольными мАт IgG (APE00987).
[0106] Все ссылки, включая публикации, заявки на патенты и патенты, цитированные в данном описании, посредством настоящего включены путем ссылки в той же степени, как если бы для каждой ссылки было бы индивидуально и конкретно указано, что она включена путем ссылки, и они были бы полностью приведены в данном описании.
[0107] Применение терминов в единственном числе и формулировки ʺпо меньшей мере одинʺ и подобные обозначения в контексте описания изобретения (особенно в контексте последующей формулы изобретения) должны рассматриваться, как охватывающие как единственное и множественное число, если в данном описании не указано иное или контекст не противоречит однозначно этому. Применение термина ʺпо меньшей мере одинʺ с последующим списком одного или более элементов (например, ʺпо меньшей мере один из A и Bʺ) должно быть истолковано для обозначения одного элемента, выбранного из перечисленных элементов (A или B), или любой комбинации двух или более из перечисленных элементов (A и B), если не указано иное в данном описании или этому не противоречит однозначно контекст. Термины ʺсодержащийʺ, ʺимеющийʺ и ʺвключающийʺ должны быть истолкованы как неограничивающие термины (т.е., обозначающие ʺвключая, но без ограничения имиʺ), если не обозначено иное. Подразумевается, что перечисление диапазонов значений в данном описании служит просто в качестве сокращенного способа ссылки индивидуально на каждое отдельное значение, попадающее в диапазон, если не указано иное в данном описании и каждое отдельное значение включено в описание, как если бы оно было индивидуально приведено в данном описании. Все способы, описанные в данном описании, могут быть выполнены в любом пригодном порядке, если не указано иное в данном описании или это не противоречит однозначно иным образом контексту. Подразумевается, что применение любого и всех примеров, или иллюстративного языка (напр., ʺтакой какʺ), представленное в данном описании, предназначено просто для лучшего разъяснения изобретения и не накладывает ограничение на объем по изобретению, если иное не представлено в формуле изобретения. Никакие формулировки в описании не должны рассматриваться как указывающие, что какой-либо не заявленный элемент является необходимым для воплощения изобретения на практике.
[0108] Предпочтительные варианты осуществления этого изобретения описаны в данном описании, включая наилучший известный изобретателям для осуществления изобретения. Вариации этих предпочтительных вариантов осуществления могут стать очевидными специалисту в данной области при прочтении вышеприведенного описания. Изобретатели предполагают, что опытные специалисты задействуют такие вариации соответствующим образом, и изобретатели подразумевают, что изобретение может быть воплощено на практике отлично от того, как конкретно описано в данном описании. Соответственно, это изобретение включает все модификации и эквиваленты объекта патентования, приведенного в формуле изобретения, прилагаемой к описанию, как это допускается применяемым законодательством. Кроме того, любая комбинация вышеописанных элементов во всех возможных их вариациях охвачена изобретением, если не указано иное в данном описании или это иным образом не противоречит однозначно контексту.
Claims (25)
1. Выделенное антитело IL-33, содержащее (a) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина SEQ ID NO: 136 и (b) CDR1, CDR2 и CDR3 вариабельной области легкой цепи иммуноглобулина SEQ ID NO: 171.
2. Выделенное антитело IL-33, содержащее (a) вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина SEQ ID NO: 136 и (b) вариабельную область легкой цепи иммуноглобулина SEQ ID NO: 171.
3. Выделенное антитело IL-33 по п. 1 или 2, которое представляет собой фрагмент антитела, выбранный из F(ab')2, Fab', Fab, Fv, scFv, dsFv и одноцепочечного связывающего полипептида.
4. Выделенное антитело IL-33 по п. 1 или 2, которое представляет собой IgG1 антитело.
5. Выделенная или очищенная молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело IL-33 по любому из пп. 1-4.
6. Выделенная или очищенная молекула нуклеиновой кислоты по п. 5, где молекула представлена в векторе.
7. Композиция, содержащая (a) эффективное количество антитела IL-33 по любому из пп. 1-4 и (b) фармацевтически приемлемый носитель, для использования в качестве лекарственного средства для лечения расстройства у млекопитающего, которое реагирует на ингибирование IL-33.
8. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что нарушение представляет собой воспалительное нарушение, аутоиммунное заболевание или рак.
9. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что нарушение представляет собой аллергическую астму, пищевую аллергию или фиброз.
10. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что нарушение представляет собой аллергию на арахис.
11. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что нарушение представляет собой атопический дерматит.
12. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что нарушение представляет собой болезнь Крона или ревматоидный артрит.
13. Композиция по п. 7, отличающаяся тем, что нарушение представляет собой эпителиальный рак, хроническую гранулоцитную лейкемию (CML), рак молочной железы или желудочно-кишечный рак.
14. Композиция по любому из пп. 7-13, отличающаяся тем, что время полужизни антитела IL-33 в млекопитающем составляет от 30 минут до 45 дней.
15. Композиция по любому из пп. 7-14, отличающаяся тем, что антитело IL-33 связывается с IL-33 с KD между приблизительно 1 фемтомолярной (фМ) и приблизительно 100 микромолярной (мкМ).
16. Выделенная клетка, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 5 или 6, где выделенная клетка экспрессирует антитело IL-33, кодируемое молекулой нуклеиновой кислоты.
17. Способ лечения нарушения, которое является восприимчивым к ингибированию IL-33, включающий введение эффективного количества антитела IL-33 по п. 1 или 2 или композиции по п. 7 млекопитающему.
18. Способ по п. 17, отличающийся тем, что нарушение представляет собой воспалительное нарушение, аутоиммунное заболевание или рак.
19. Способ по п. 17, отличающийся тем, что нарушение представляет собой аллергическую астму, пищевую аллергию или фиброз.
20. Способ по п. 17, отличающийся тем, что нарушение представляет собой аллергию на арахис.
21. Способ по п. 17, отличающийся тем, что нарушение представляет собой атопический дерматит.
22. Способ по п. 17, отличающийся тем, что нарушение представляет собой болезнь Крона или ревматоидный артрит.
23. Способ по п. 17, отличающийся тем, что нарушение представляет собой эпителиальный рак, хроническую гранулоцитную лейкемию (CML), рак молочной железы или желудочно-кишечный рак.
24. Способ по любому из пп. 17-23, отличающийся тем, что время полужизни антитела IL-33 в млекопитающем составляет от 30 минут до 45 дней.
25. Способ по любому из пп. 17-23, отличающийся тем, что антитело IL-33 связывается с IL-33 с KD между приблизительно 1 фемтомолярной (фМ) и приблизительно 100 микромолярной (мкМ).
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201461925946P | 2014-01-10 | 2014-01-10 | |
US61/925,946 | 2014-01-10 | ||
PCT/US2015/010785 WO2015106080A2 (en) | 2014-01-10 | 2015-01-09 | Antibodies directed against interleukin-33 (il-33) |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019118984A Division RU2019118984A (ru) | 2014-01-10 | 2015-01-09 | Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) |
Publications (3)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2016132757A RU2016132757A (ru) | 2018-02-16 |
RU2016132757A3 RU2016132757A3 (ru) | 2018-07-16 |
RU2693084C2 true RU2693084C2 (ru) | 2019-07-01 |
Family
ID=53524474
Family Applications (2)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2016132757A RU2693084C2 (ru) | 2014-01-10 | 2015-01-09 | Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) |
RU2019118984A RU2019118984A (ru) | 2014-01-10 | 2015-01-09 | Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) |
Family Applications After (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2019118984A RU2019118984A (ru) | 2014-01-10 | 2015-01-09 | Антитела, направленные против интерлейкина-33 (il-33) |
Country Status (14)
Country | Link |
---|---|
US (3) | US10059764B2 (ru) |
EP (1) | EP3092253B1 (ru) |
JP (2) | JP2017503506A (ru) |
KR (1) | KR102446386B1 (ru) |
CN (1) | CN106103480B (ru) |
AU (1) | AU2015204674B2 (ru) |
BR (1) | BR112016016020B1 (ru) |
CA (1) | CA2936366A1 (ru) |
ES (1) | ES2866935T3 (ru) |
MX (2) | MX2016009047A (ru) |
NZ (1) | NZ722445A (ru) |
RU (2) | RU2693084C2 (ru) |
SG (2) | SG11201605580RA (ru) |
WO (1) | WO2015106080A2 (ru) |
Families Citing this family (38)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2007116360A2 (en) | 2006-04-07 | 2007-10-18 | The Procter & Gamble Company | Antibodies that bind human protein tyrosine phosphatase beta (hptpbeta) and uses thereof |
JO3532B1 (ar) | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
WO2014152195A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il-33 antagonists and uses thereof |
MX2016008472A (es) | 2013-12-26 | 2016-10-28 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Anticuero monoclonal neutralizador de anti-il-33-humana. |
EP3092253B1 (en) | 2014-01-10 | 2021-03-17 | AnaptysBio, Inc. | Antibodies directed against interleukin-33 (il-33) |
CR20170240A (es) | 2014-11-10 | 2018-04-03 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos |
EP3218515B1 (en) | 2014-11-10 | 2023-04-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic and diagnostic methods for il-33-mediated disorders |
CA3011547A1 (en) * | 2016-01-14 | 2017-07-20 | Anaptysbio, Inc. | Inhibition of allergic reaction using an il-33 inhibitor |
EP3448888A1 (en) * | 2016-04-27 | 2019-03-06 | Pfizer Inc | Anti-il-33 antibodies, compositions, methods and uses thereof |
EP3487518A4 (en) | 2016-07-20 | 2020-08-12 | Aerpio Therapeutics LLC | HUMANIZED MONOCLONAL ANTIBODIES TARGETING VE-PTP (HPTP-SS) |
JOP20190093A1 (ar) * | 2016-10-28 | 2019-04-25 | Lilly Co Eli | أجسام مضادة لـ il-33 واستخداماتها |
TW202332696A (zh) | 2016-12-01 | 2023-08-16 | 美商再生元醫藥公司 | 治療發炎症狀的方法 |
HRP20240195T8 (hr) | 2016-12-19 | 2024-05-24 | Medimmune Limited | Antitijela na lif i njihove primjene |
US10583191B2 (en) | 2016-12-19 | 2020-03-10 | Mosaic Biomedicals Slu | Antibodies against LIF and uses thereof |
WO2018148585A1 (en) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | Genentech, Inc. | Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof |
JP7321939B2 (ja) | 2017-04-13 | 2023-08-07 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Il33及びil1rl1をコードする遺伝子にリスクアレルを有する患者の炎症性肺疾患の処置及び阻害 |
JP7177446B2 (ja) | 2017-08-31 | 2022-11-24 | 田辺三菱製薬株式会社 | Il-33アンタゴニストを含む子宮内膜症治療剤 |
US20200239562A1 (en) | 2017-10-09 | 2020-07-30 | Anaptysbio, Inc. | Anti-il-33 therapy for atopic dermatitis |
JP7418337B2 (ja) | 2018-02-09 | 2024-01-19 | ジェネンテック, インコーポレイテッド | マスト細胞媒介性炎症性疾患の治療法及び診断法 |
WO2019183639A1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Anaptysbio, Inc. | Inhibition of allergic reaction to peanut allergen using an il-33 inhibitor |
IL307286A (en) | 2018-04-11 | 2023-11-01 | Regeneron Pharma | Methods and preparations for quantification of IL-33 |
TW202021983A (zh) | 2018-09-21 | 2020-06-16 | 美商安納普提斯生物公司 | 用於嗜伊紅性氣喘之抗il-33療法 |
JP2022502367A (ja) | 2018-09-24 | 2022-01-11 | エアーピオ ファーマシューティカルズ, インコーポレイテッド | HPTP−β(VE−PTP)およびVEGFを標的にする多特異性抗体 |
JP2023500492A (ja) | 2019-11-04 | 2023-01-06 | メドイミューン・リミテッド | Il-33アンタゴニストの使用方法 |
US20220363748A1 (en) | 2019-11-04 | 2022-11-17 | Medimmune Limited | Anti il-33 therapeutic agent for treating renal disorders |
US20230338387A1 (en) | 2020-02-05 | 2023-10-26 | Nof Corporation | Agent For Treating Or Preventing Pancreatic Fistula |
JP2023516497A (ja) | 2020-03-13 | 2023-04-19 | メドイミューン・リミテッド | Il33にリスクアレルを有する対象を治療するための治療方法 |
WO2021183849A1 (en) | 2020-03-13 | 2021-09-16 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
JP2023521061A (ja) | 2020-04-06 | 2023-05-23 | メドイミューン・リミテッド | Il-33軸結合アンタゴニストによる急性呼吸窮迫症候群の治療 |
CN115551542A (zh) | 2020-05-11 | 2022-12-30 | 免疫医疗有限公司 | 抗il-33抗体的配制品 |
US20210380721A1 (en) * | 2020-06-01 | 2021-12-09 | University Of Kentucky Research Foundation | Compounds and methods for use in connection with opioid use disorders |
WO2022011037A2 (en) * | 2020-07-07 | 2022-01-13 | The General Hospital Corporation | Interleukin 33 (il-33) inhibition for treatment of cancer, fibrosis and inflammation |
KR20220022226A (ko) * | 2020-08-18 | 2022-02-25 | 성균관대학교산학협력단 | Il-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편 |
CN114249825A (zh) * | 2020-09-25 | 2022-03-29 | 三生国健药业(上海)股份有限公司 | 结合人il-33的抗体、其制备方法和用途 |
CN113603775B (zh) | 2021-09-03 | 2022-05-20 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用 |
WO2023086807A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
TW202402790A (zh) | 2022-03-25 | 2024-01-16 | 英商梅迪繆思有限公司 | 減少呼吸系統感染之方法 |
WO2024038185A1 (en) | 2022-08-19 | 2024-02-22 | Medimmune Limited | Method of selecting patients for treatment with an il-33 axis antagonist |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20100260770A1 (en) * | 2007-05-18 | 2010-10-14 | Medimmune, Llc | Il-33 in inflammatory disease |
US20120207752A1 (en) * | 2006-07-20 | 2012-08-16 | Schering Corporation | Methods for modulating il-33 activity |
RU2472807C2 (ru) * | 2006-09-08 | 2013-01-20 | Эбботт Лэборетриз | Интерлейкин-13-связывающие белки |
Family Cites Families (49)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4828981A (en) | 1983-08-24 | 1989-05-09 | Synbiotics Corporation | Immunoassays for determining Dirofilaria immitis infection using antiidiotype monoclonal antibody reagents |
GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
AU650085B2 (en) | 1990-11-13 | 1994-06-09 | Immunex Corporation | Bifunctional selectable fusion genes |
WO1994028143A1 (en) | 1993-05-21 | 1994-12-08 | Targeted Genetics Corporation | Bifunctional selectable fusion genes based on the cytosine deaminase (cd) gene |
US5814618A (en) | 1993-06-14 | 1998-09-29 | Basf Aktiengesellschaft | Methods for regulating gene expression |
US5464758A (en) | 1993-06-14 | 1995-11-07 | Gossen; Manfred | Tight control of gene expression in eucaryotic cells by tetracycline-responsive promoters |
FR2814642B1 (fr) | 2000-10-03 | 2005-07-01 | Ass Pour Le Dev De La Rech En | Souris transgenique pour la recombinaison ciblee mediee par la cre-er modifiee |
WO2003048731A2 (en) | 2001-12-03 | 2003-06-12 | Abgenix, Inc. | Antibody categorization based on binding characteristics |
NZ549040A (en) | 2004-02-17 | 2009-07-31 | Schering Corp | Use for interleukin-33 (IL33) and the IL-33 receptor complex |
US20070048785A1 (en) * | 2004-06-09 | 2007-03-01 | Lin Laura L | Anti-IL-13 antibodies and complexes |
EP2397498A3 (en) * | 2005-07-18 | 2013-11-27 | Amgen, Inc | Human anti-B7RP1 neutralizing antibodies |
WO2007130627A2 (en) | 2006-05-04 | 2007-11-15 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Il-33 in the treatment and diagnosis of diseases and disorders |
WO2008103475A1 (en) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Anaptysbio, Inc. | Somatic hypermutation systems |
WO2008132709A1 (en) | 2007-04-26 | 2008-11-06 | Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin | Products for altering il-33 activity and methods therefor |
CN102164962B (zh) * | 2008-06-30 | 2014-05-28 | 诺福泰克公司 | 抗gd2抗体和方法及其相关应用 |
TW201031421A (en) | 2009-01-29 | 2010-09-01 | Abbott Lab | IL-1 binding proteins |
US20120263709A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-10-18 | Schering Corporation | Use of il-33 antagonists to treat fibrotic diseases |
ES2547872T3 (es) | 2009-10-15 | 2015-10-09 | Avaxia Biologics, Inc. | Agentes terapéuticos de anticuerpos con actividad local en el tracto digestivo |
KR101539683B1 (ko) | 2010-05-14 | 2015-07-30 | 애브비 인코포레이티드 | Il-1 결합 단백질 |
SG187867A1 (en) * | 2010-08-16 | 2013-03-28 | Amgen Inc | Antibodies that bind myostatin, compositions and methods |
WO2012061360A2 (en) | 2010-11-01 | 2012-05-10 | Rib-X Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions |
CN105175542B (zh) | 2010-12-16 | 2018-12-18 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 与th2抑制相关的诊断和治疗 |
WO2012103240A2 (en) | 2011-01-25 | 2012-08-02 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Receptor binding agents |
FR2972006B1 (fr) | 2011-02-24 | 2016-03-25 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux fragments d'il-33 superactifs et leurs utilisations |
SG11201401791WA (en) | 2011-10-24 | 2014-08-28 | Abbvie Inc | Immunobinders directed against sclerostin |
JP2015502340A (ja) * | 2011-10-27 | 2015-01-22 | エヌケーティー セラピューティクス インコーポレーテッドNkt Therapeutics Inc. | iNKTに対するヒト化抗体 |
US9260756B2 (en) | 2012-02-24 | 2016-02-16 | Children's Hospital Medical Center | Esophageal microRNA expression profiles in eosinophilic esophagitis |
US9212227B2 (en) | 2012-04-30 | 2015-12-15 | Janssen Biotech, Inc. | ST2L antibody antagonists for the treatment of ST2L-mediated inflammatory pulmonary conditions |
UY34813A (es) | 2012-05-18 | 2013-11-29 | Amgen Inc | Proteínas de unión a antígeno dirigidas contra el receptor st2 |
JP2015528019A (ja) | 2012-07-31 | 2015-09-24 | ノバルティス アーゲー | セレラキシンを使用する炎症の処置 |
US20150250808A1 (en) | 2012-10-15 | 2015-09-10 | Vojo P. Deretic | Treatment of autophagy-based disorders and related pharmaceutical compositions, diagnostic and screening assays and kits |
WO2014090800A1 (en) | 2012-12-10 | 2014-06-19 | Vib Vzw | Novel interleukin-33 inhibitors |
KR101780575B1 (ko) | 2013-02-14 | 2017-09-21 | 건국대학교 산학협력단 | 신규한 인터루킨-33 수용체와 결합 단백질 조성물 및 그 용도 |
JO3532B1 (ar) * | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
WO2014152195A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il-33 antagonists and uses thereof |
LT3033101T (lt) | 2013-08-12 | 2019-03-25 | Astrazeneca Ab | Astmos paūmejimo dažnio sumažinimo būdai naudojant benralizumabą |
KR101567758B1 (ko) | 2013-10-17 | 2015-11-11 | 인하대학교 산학협력단 | 항-Siglec-8 항체 또는 항-Siglec-F 항체, 및 항-IL-33 항체를 포함하는 알러지 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
CA2924873A1 (en) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | Genentech, Inc. | Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders |
MX2016008472A (es) | 2013-12-26 | 2016-10-28 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Anticuero monoclonal neutralizador de anti-il-33-humana. |
EP3092253B1 (en) | 2014-01-10 | 2021-03-17 | AnaptysBio, Inc. | Antibodies directed against interleukin-33 (il-33) |
WO2015143343A2 (en) | 2014-03-21 | 2015-09-24 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods and compositions for treatment of immune-related diseases or disorders and/or therapy monitoring |
GB201406608D0 (en) | 2014-04-12 | 2014-05-28 | Psioxus Therapeutics Ltd | Virus |
WO2015164354A1 (en) | 2014-04-21 | 2015-10-29 | The Childen's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods for treating cytokine-related disorders |
CR20170240A (es) | 2014-11-10 | 2018-04-03 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos |
EP3218515B1 (en) | 2014-11-10 | 2023-04-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic and diagnostic methods for il-33-mediated disorders |
AU2016226414B2 (en) | 2015-03-02 | 2021-09-09 | 180 Therapeutics Lp | Method of treating a localized fibrotic disorder using an IL-33 antagonist |
EP3095440B1 (en) | 2015-05-19 | 2020-01-15 | PLS-Design GmbH | Antigen-specific immunotherapy using tolerizing liposomes |
CA3000725A1 (en) | 2015-10-06 | 2017-04-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Biomarkers related to interleukin-33 (il-33)-mediated diseases and uses thereof |
CA3011547A1 (en) | 2016-01-14 | 2017-07-20 | Anaptysbio, Inc. | Inhibition of allergic reaction using an il-33 inhibitor |
-
2015
- 2015-01-09 EP EP15735107.3A patent/EP3092253B1/en active Active
- 2015-01-09 BR BR112016016020-7A patent/BR112016016020B1/pt active IP Right Grant
- 2015-01-09 RU RU2016132757A patent/RU2693084C2/ru active
- 2015-01-09 RU RU2019118984A patent/RU2019118984A/ru unknown
- 2015-01-09 CA CA2936366A patent/CA2936366A1/en active Pending
- 2015-01-09 SG SG11201605580RA patent/SG11201605580RA/en unknown
- 2015-01-09 KR KR1020167021814A patent/KR102446386B1/ko active IP Right Grant
- 2015-01-09 WO PCT/US2015/010785 patent/WO2015106080A2/en active Application Filing
- 2015-01-09 MX MX2016009047A patent/MX2016009047A/es active IP Right Grant
- 2015-01-09 SG SG10201805934RA patent/SG10201805934RA/en unknown
- 2015-01-09 US US15/110,724 patent/US10059764B2/en active Active
- 2015-01-09 CN CN201580012838.5A patent/CN106103480B/zh active Active
- 2015-01-09 ES ES15735107T patent/ES2866935T3/es active Active
- 2015-01-09 AU AU2015204674A patent/AU2015204674B2/en active Active
- 2015-01-09 NZ NZ722445A patent/NZ722445A/en unknown
- 2015-01-09 JP JP2016545842A patent/JP2017503506A/ja active Pending
-
2016
- 2016-07-08 MX MX2020001272A patent/MX2020001272A/es unknown
-
2018
- 2018-07-23 US US16/042,476 patent/US10836820B2/en active Active
-
2019
- 2019-09-24 JP JP2019173328A patent/JP6882702B2/ja active Active
-
2020
- 2020-10-15 US US17/071,046 patent/US11999783B2/en active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20120207752A1 (en) * | 2006-07-20 | 2012-08-16 | Schering Corporation | Methods for modulating il-33 activity |
RU2472807C2 (ru) * | 2006-09-08 | 2013-01-20 | Эбботт Лэборетриз | Интерлейкин-13-связывающие белки |
US20100260770A1 (en) * | 2007-05-18 | 2010-10-14 | Medimmune, Llc | Il-33 in inflammatory disease |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
LIU et. al. "Anti-IL-33 antibody treatment inhibits airway inflammation in a murine model of allergic asthma", Biochemical and Biophysical Research communications, Vol. 386, pp. 181-185, 07.06.2009. .2012. * |
LIU et. al. "Anti-IL-33 antibody treatment inhibits airway inflammation in a murine model of allergic asthma", Biochemical and Biophysical Research communications, Vol. 386, pp. 181-185, 07.06.2009. YUAN et. al. "Construction of Human Nonimmune Library and Selection of scFvs Against IL-33", Applied Biochemistry and Biotechnology, Vol. 167, Iss. 3, pp. 498-509, 06.05.2012. * |
YUAN et. al. "Construction of Human Nonimmune Library and Selection of scFvs Against IL-33", Applied Biochemistry and Biotechnology, Vol. 167, Iss. 3, pp. 498-509, 06.05 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
US20160333090A1 (en) | 2016-11-17 |
SG11201605580RA (en) | 2016-10-28 |
EP3092253A4 (en) | 2017-11-29 |
US11999783B2 (en) | 2024-06-04 |
AU2015204674A1 (en) | 2016-08-25 |
BR112016016020B1 (pt) | 2024-02-27 |
MX2016009047A (es) | 2017-04-13 |
BR112016016020A2 (pt) | 2018-05-22 |
KR20160132006A (ko) | 2016-11-16 |
US20180346562A1 (en) | 2018-12-06 |
RU2019118984A (ru) | 2019-08-06 |
CA2936366A1 (en) | 2015-07-16 |
NZ722445A (en) | 2022-07-01 |
CN106103480B (zh) | 2021-10-22 |
JP2020018309A (ja) | 2020-02-06 |
KR102446386B1 (ko) | 2022-09-22 |
SG10201805934RA (en) | 2018-08-30 |
AU2015204674B2 (en) | 2020-09-03 |
RU2016132757A (ru) | 2018-02-16 |
WO2015106080A3 (en) | 2015-09-11 |
WO2015106080A2 (en) | 2015-07-16 |
ES2866935T3 (es) | 2021-10-20 |
RU2016132757A3 (ru) | 2018-07-16 |
US20210040198A1 (en) | 2021-02-11 |
JP2017503506A (ja) | 2017-02-02 |
EP3092253A2 (en) | 2016-11-16 |
JP6882702B2 (ja) | 2021-06-02 |
US10059764B2 (en) | 2018-08-28 |
EP3092253B1 (en) | 2021-03-17 |
US10836820B2 (en) | 2020-11-17 |
MX2020001272A (es) | 2020-07-20 |
CN106103480A (zh) | 2016-11-09 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11999783B2 (en) | Method of treating autoimmune disease with antibodies against IL-33 | |
US11130814B2 (en) | Method of treating pustular psoriasis with antibodies directed against interleukin 36 receptor (IL-36R) | |
US20190256596A1 (en) | Antibodies directed against lymphocyte activation gene 3 (lag-3) | |
KR20180101533A (ko) | Il-33 저해제를 사용한 알레르기 반응의 저해 | |
US9951126B2 (en) | Antibodies directed against nerve growth factor (NGF) | |
JP7490679B2 (ja) | Pd-1アゴニストおよびそれを使用する方法 |