CN106103480B - 针对白介素-33(il-33)的抗体 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及结合白介素‑33(IL‑33)的分离的免疫球蛋白重链多肽以及分离的免疫球蛋白轻链多肽。本发明提供了包括上述免疫球蛋白重链多肽和免疫球蛋白轻链多肽的IL‑33‑结合剂。本发明还提供了相关的载体、组合物以及使用所述IL‑33‑结合剂在哺乳动物中治疗响应IL‑33抑制的病症的方法。
Description
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发明背景
白介素33(IL-33)，又称高内皮微静脉中核因子(NF)(NF-HEV)，是一种属于IL-1超家族的细胞因子。IL-33诱导辅助T细胞、肥大细胞、嗜酸性细胞和嗜碱性细胞产生2型细胞因子。IL-33通过与ST2受体(又称IL1RL1)和IL-1受体辅助蛋白 (IL1RAP)相互作用介导其生物效应以活化NF-κB和MAP激酶信号通路中的胞内分子，所述胞内分子驱动由皮肤、肺和胃肠道中的极化辅助T细胞(Th2)和2型天然淋巴细胞(ILC2)产生2型细胞因子(例如，IL-4、IL-5和IL-13)。IL-33直接作用于肥大细胞以触发其活化，并刺激嗜酸性细胞和嗜碱性细胞脱粒，引起组织损伤。据信通过 IL-33体内诱导2型细胞因子诱发给予IL-33后在粘膜器官中观测到的严重的病理变化(参见，例如，Schmitz等人，Immunity，23(5)：479-490(2005)；以及Chackerian等人，J.Immunol.，179(4)：2551-2555(2007))。
IL-33的体内表达模式以及其细胞靶标均提示IL-33在Th2驱动病理学中的作用。例如，在中度至重度哮喘、异位性皮炎、过敏性鼻炎、食物过敏、类风湿性关节炎、多发性硬化和克罗恩病患者的炎症组织中已检测到IL-33表达。此外，ST2(IL- 33R)远端启动子区域中的功能性单核苷酸多态性(SNP)已显示出与异位性皮炎显著相关(参见，例如，Shimizu等人，Hum.Mol.Genet.，14(19)：2919-2927(2005))。全基因组关联研究(GWAS)也已显示出在多种族组多项研究中哮喘与IL-33和ST2(IL-33R) 基因SNP的强相关性(参见，例如，Gudbjartsson等人，Nat.Genet.，41(3)：342-347 (2009)；Melén等人，J AllergyClin.Immunol.，126(3)：631-637(2010)；Moffatt等人，New Engl J.Med.，363(13)：1211-1221(2010)；以及Torgerson等人，Nat. Genet.，43(9)：887-92(2011))。IL-33(可能与IL-25和TSLP联合)还活化天然淋巴细胞 (ILC2细胞)，其导致Th2细胞因子分泌、抗寄生响应和组织免疫病理。
研究还提示IL-33通过充当癌细胞存活或生长因子而在表达IL-33受体的一些癌症如上皮癌(即，肿瘤)中发挥直接作用。这种IL-33响应性可能有助于某些癌细胞类型逃脱当前标准治疗(例如，慢性髓性白血病(CML)、乳腺癌和胃肠癌)。此外，IL-33 可通过减少免疫系统在控制肿瘤细胞中的防护活性而在癌症进展中发挥间接作用。其它近期研究提示IL-33在纤维化的病理学中发挥作用，所述纤维化例如皮肤纤维化、肝纤维化、系统性硬化和肺纤维化。此外，Mchedlidze等人，Immunity，39：357-371 (2013)证实白介素-33(IL-33)的肝表达是体内严重肝纤维化的充分必要条件。
因此，需要以高亲和力结合IL-33并有效中和IL-33活性的IL-33抑制剂(例如，抗体)。本发明提供了结合并抑制IL-33的IL-33结合剂。
发明概述
本发明提供了一种分离的免疫球蛋白重链多肽，其包括(a)SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2和SEQ ID NO：5-50中任一氨基酸序列，或者(b)与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ IDNO：5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、 SEQ ID NO：178-188和SEQID NO：206-217中的任一具有至少90％同一性的氨基酸序列。
本发明提供了一种分离的免疫球蛋白轻链多肽，其包括(a)SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：4和SEQ ID NO：51-66中任一氨基酸序列，或者(b)与SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ IDNO：51-66、SEQ ID NO：141-175、SEQ ID NO：189-205和SEQ ID NO：218-231中的任一具有至少90％同一性的氨基酸序列。
此外，本发明提供了编码前述免疫球蛋白多肽的分离或纯化的核酸序列、包含此类核酸序列的载体、包含前述免疫球蛋白多肽的分离的IL-33-结合剂、编码此类IL- 33-结合剂的核酸序列、包含此类核酸序列的载体、包含此类载体的分离的细胞、包含此类IL-33-结合剂或此类载体与药学上可接受的运载体的组合物、以及通过向哺乳动物给予有效量的此类组合物在哺乳动物中治疗响应IL-33抑制或中和的疾病或病症的方法。
附图简述
图1A是描述了用以说明IL-33刺激IL-5自KU812细胞分泌的测定EC50的实验数据的曲线图。图1B是描述了用以说明本发明IL-33结合剂抑制IL-33介导的IL-5 自KU812细胞释放的实验数据的曲线图。
图2A是描述了用以说明IL-33诱导的HEK293-ST2细胞中荧光素酶自IL-8启动子表达的实验数据的曲线图。图2B是描述了用以说明本发明IL-33结合剂抑制IL-33 诱导的HEK293-ST2细胞中荧光素酶自IL-8启动子表达的实验数据的曲线图。
图3是描述了用以说明本发明IL-33结合剂抑制IL-33介导的原发性人嗜碱性细胞中IL-5释放的实验数据的曲线图。对于APE4909，IC50＝2.2±1.1nM(N＝3)；对于ST2单体，IC50＝20nM(N＝1)。标注“IL-33”和“媒介物”的虚线分别代表在不存在抗体和不存在IL-33下的IL-5分泌浓度。附加于APE4909的.02后缀是指在这些实验中测试的蛋白批次。
图4是描述了用以说明本发明IL-33结合剂抑制IL-33介导的IL-9自原发性人嗜碱性细胞释放的实验数据的曲线图。在3nM下测量APE4909的IC50。标注“IL-33”和“媒介物”的虚线分别代表在不存在抗体和不存在IL-33下的IL-9分泌浓度。抗体 APE0422代表同种型对照抗体。
图5是描述了用以说明通过KINEXATM测量的本发明APE4909抗体对人IL-33 亲和力的实验数据的曲线图。结果表明KD＝1.0pM(N＝2)，95％置信区间(CI)为 1.9pM-420fM。
图6是描述了用以说明通过KINEXATM测量的本发明APE4909抗体对猕猴IL-33 亲和力的实验数据的曲线图。
图7是描述了用以说明本发明APE4909抗体抑制人IL-33驱动的外周血室中嗜酸性细胞扩张的能力的实验数据的曲线图。
发明详述
本发明提供了分离的免疫球蛋白重链多肽和/或分离的免疫球蛋白轻链多肽，或其片段(例如，抗原结合片段)。如本文所使用的术语“免疫球蛋白”或“抗体”是指在脊椎动物血液或其他体液中发现的蛋白，其被免疫系统用于识别和中和外源性物质，例如细菌和病毒。因为从其天然环境中移除，所述多肽是“分离的”。在一个优选实施方式中，免疫球蛋白或抗体是包含至少一个互补决定区(CDR)的蛋白。CDR形成抗体的“高变区”，其负责与抗原结合(下面进一步讨论)。完整的免疫球蛋白通常由四个多肽组成：两个相同拷贝的重链(H)多肽和两个相同拷贝的轻链(L)多肽。各重链均含有一个N端可变(VH)区和三个C端恒定(CH1、CH2和CH3)区，并且各轻链均含有一个N 端可变(VL)区和一个C端恒定(CL)区。基于其恒定结构域的氨基酸序列，可以将抗体的轻链分成两种不同类型，即kappa(κ)或lambda(λ)。在典型的免疫球蛋白中，各轻链与重链通过二硫键连接，并且两条重链之间彼此通过二硫键相互连接。轻链可变区与重链可变区对齐，轻链恒定区与重链第一恒定区对齐。重链其余的恒定区彼此相互对齐。
各对轻链和重链的可变区形成抗体的抗原结合位点。VH和VL区具有相同的基本结构，各区域均包含四个框架(FW或FR)区。如本文所使用的术语“框架区”是指在可变区内位于高变或互补决定区(CDR)之间的相对保守的氨基酸序列。每个可变区中具有四个框架区，其指定为FR1、FR2、FR3和FR4。框架区形成提供可变区结构框架的β片层(参见例如，C.A.Janeway等人(编)，Immunobiology，第5版，Garland Publishing，New York，NY(2001))。
框架区通过三个互补决定区(CDR)相连。如上所述，三个CDR，称为CDR1、 CDR2、和CDR3，形成抗体的“高变区”，其负责与抗原结合。CDR形成环状连接，并在某些情况下包括部分由框架区形成的β片层结构。虽然轻链和重链的恒定区并不直接涉及抗体与抗原的结合，但是恒定区可影响可变区的定向。恒定区还表现出不同的效应器功能，如通过效应器分子和细胞之间的相互作用来参与抗体依赖性补体介导溶解或抗体依赖性细胞毒作用。
本发明的分离的免疫球蛋白重链多肽和分离的免疫球蛋白轻链多肽期望结合IL-33。如上所讨论的，白介素-33(IL-33)(又称高内皮微静脉内核因子(NF)(NF-HEV))是一种IL-1家族细胞因子，所述家族还包括炎性细胞因子IL-1α、IL-1β和IL-18。IL- 33已显示出通过ST2受体和IL1RAP受体传递信号。IL-33在各种组织和细胞中广泛表达，所述组织包括胃、肺、脊髓、脑和皮肤，所述细胞包括支气管和小气道内层平滑肌细胞和上皮细胞。IL-33表达是由肺和真皮成纤维细胞内IL-1β和肿瘤坏死因子- α(TNF-α)以及由巨噬细胞活化(在较小程度上)所诱导的。IL-33处理已显示出诱导小鼠中的T辅助细胞(Th)2型响应，如Th2细胞因子产生的增加和血清免疫球蛋白的增加所指示的。用IL-33系统性地处理小鼠导致肺和消化道中的病理变化(参见例如， Choi等人，Blood，114(14)：3117-3126(2009)；以及Yagami等人，J.Immunology， 185(10)：5743-5750(2010))。
IL-33以30-kDa前体蛋白形式产生，该蛋白在体外被半胱天冬酶-1裂解，释放成熟的18-kDa形式(参见例如，Schmitz等人，Immunity，23(5)：479-490(2005))。一旦结合至ST2受体，IL-33促进核因子(NF)-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的活化，导致Th2细胞因子转录增加(Schmitz等人，见上)。
结合IL-33的抗体及其组件是本领域已知的(参见例如，美国专利申请公开号2009/0041718A1和2012/0263709A1)。抗IL-33抗体还可市售购得，例如购自 Abcam(Cambridge，MA)。
本发明提供了一种免疫球蛋白重链多肽，其包括SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、 SEQID NO：5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178-188和SEQ ID NO：206-217中任一氨基酸序列，或者与SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO： 177、SEQ ID NO：178-188和SEQ IDNO：206-217中的任一具有至少90％同一性的氨基酸序列。在本发明的一个实施方式中，分离的免疫球蛋白重链多肽包含、由如下组成或基本由如下组成：SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178-188和SEQ ID NO： 206-217中任一氨基酸序列。当本发明免疫球蛋白重链多肽基本由SEQID NO：1、 SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178-188和SEQ ID NO：206-217中任一氨基酸序列组成时，多肽中可包含不会实质影响多肽的附加组分(例如，蛋白部分，如促进纯化或分离的生物素)。当本发明免疫球蛋白重链多肽由SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO： 5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQID NO：176、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：178-188 和SEQ ID NO：206-217中任一氨基酸序列组成时，多肽不再包含任何附加组分(即，与本发明免疫球蛋白重链多肽非内源性的组分)。
本发明提供了一种分离的免疫球蛋白重链多肽，其包括与SEQ ID NO：1、SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：5-50、SEQ ID NO：67-140、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO： 177、SEQ ID NO：178-188或SEQ ID NO：206-217中的任一具有至少90％同一性(例如，至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少 97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。如本文所述的核酸或氨基酸序列“同一性”可通过将目标核酸或氨基酸序列与参考核酸或氨基酸序列进行比对来测定。同一性百分数是目标序列和参考序列间相同(即，具有同一性)的核苷酸或氨基酸残基数目除以最长序列长度(即，目标序列或参考序列中长度更长的那个)。用于获得优化比对以及计算两个或多个序列间同一性的多种数学算法是已知的，并被引入多种可用软件程序。此类程序的实例包括CLUSTAL-W、T-Coffee和ALIGN(用于比对核酸和氨基酸序列)、BLAST程序(例如BLAST 2.1、BL2SEQ及其后来版本)和FASTA程序(例如FASTA3x、FASTM和SSEARCH)(用于序列比对和序列相似性搜索)。序列比对算法还公开在例如Altschul等人，J.Molecular Biol.，215(3)：403-410 (1990)、Beigert等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，106(10)：3770-3775(2009)、Durbin 等人编，BiologicalSequence Analysis：Probabilistic Models of Proteins and Nucleic Acids，Cambridge University Press，Cambridge，UK(2009)、Soding， Bioinformatics，21(7)：951-960(2005)、Altschul等人，Nucleic Acids Res.，25(17)： 3389-3402(1997)和Gusfield，Algorithms on Strings，Trees and Sequences，Cambridge UniversityPress，Cambridge UK(1997))中。
本发明提供了一种免疫球蛋白轻链多肽，其包括SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、 SEQID NO：51-66、SEQ ID NO：141-175、SEQ ID NO：189-205和SEQ ID NO：218- 231中任一氨基酸序列，或者与SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：51-66、 SEQ ID NO：141-175、SEQID NO：189-205和SEQ ID NO：218-231中的任一具有至少 90％同一性的氨基酸序列。在本发明的一个实施方式中，分离的免疫球蛋白轻链多肽包含、由如下组成或基本由如下组成：SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO： 51-66、SEQ ID NO：141-175、SEQ ID NO：189-205和SEQ ID NO：218-231中任一氨基酸序列。当本发明免疫球蛋白轻链多肽基本由SEQ IDNO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：51-66、SEQ ID NO：141-175、SEQ ID NO：189-205和SEQ IDNO：218-231中任一氨基酸序列组成时，多肽中可包含不会实质影响多肽的附加组分(例如，蛋白部分，如促进纯化或分离的生物素)。当本发明免疫球蛋白轻链多肽由SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：51-66、SEQ ID NO：141-175、SEQ ID NO：189-205和 SEQ ID NO：218-231中任一氨基酸序列组成时，多肽不再包含任何附加组分(即，与本发明免疫球蛋白轻链多肽非同源性的组分)。
本发明提供了一种分离的免疫球蛋白轻链多肽，其包括与SEQ ID NO：3、SEQ IDNO：4、SEQ ID NO：51-66、SEQ ID NO：141-175、SEQ ID NO：189-205或SEQ ID NO：218-231中的任一具有至少90％同一性(例如，至少91％、至少92％、至少 93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％同一性)的氨基酸序列。如本文所述的核酸或氨基酸序列“同一性”可使用本文所述方法来测定。
前述免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽的一个或多个氨基酸可被不同氨基酸替换或取代。氨基酸“替换”或“取代”是指在多肽序列内给定位置或残基的一个氨基酸被在相同位置或残基的另一氨基酸取代。
氨基酸可被大致归类为“芳香族”或“脂肪族”。芳香族氨基酸包含芳环。“芳香族”氨基酸的实例包括组氨酸(H或His)、苯丙氨酸(F或Phe)、酪氨酸(Y或Tyr)和色氨酸 (W或Trp)。非芳香族氨基酸可被大致归类为“脂肪族”。“脂肪族”氨基酸的实例包括甘氨酸(G或Gly)、丙氨酸(A或Ala)、缬氨酸(V或Val)、亮氨酸(L或Leu)、异亮氨酸(I或Ile)、甲硫氨酸(M或Met)、丝氨酸(S或Ser)、苏氨酸(T或Thr)、半胱氨酸(C 或Cys)、脯氨酸(P或pro)、谷氨酸(E或Glu)、天冬氨酸(A或Asp)、天冬酰胺(N或 Asn)、谷氨酰胺(Q或Gln)、赖氨酸(K或Lys)和精氨酸(R或Arg)。
可以将脂肪族氨基酸再分成四个亚组。“大脂肪族非极性亚组”由缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸组成。“脂肪族微极性亚组”由甲硫氨酸、丝氨酸、苏氨酸和半胱氨酸组成。“脂肪族极性/带电荷亚组”由谷氨酸、天冬氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、赖氨酸和精氨酸组成。“小残基亚组”由甘氨酸和丙氨酸组成。可以将带电荷/极性氨基酸组再细分成三个亚组：“正电荷亚组”由赖氨酸和精氨酸组成，“负电荷亚组”由谷氨酸和天冬氨酸组成，以及“极性亚组”由天冬酰胺和谷氨酰胺组成。
可以将芳香族氨基酸再分成两亚组：“氮环亚组”由组氨酸和色氨酸组成以及“苯基亚组”由苯丙氨酸和酪氨酸组成。
氨基酸替换或取代可以是保守性的、半保守性的或非保守性的。短语“保守性氨基酸取代”或“保守性突变”指一个氨基酸被与其具有共同性质的另一个氨基酸取代。确定各氨基酸之间共同性质的有效方法是分析同源有机体相应蛋白间氨基酸变化的归一化频率(Schulz和Schirmer，Principles of Protein Structure，Springer-Verlag，New York(1979))。根据此类分析，可以将氨基酸的组定义为组内的氨基酸可以优选地彼此互换，并且其对总体蛋白结构的影响彼此最为类似(Schulz和Schirmer，同上)。
保守性氨基酸取代的实例包括上述亚组内部的氨基酸取代，例如赖氨酸可换为精氨酸，反之亦然，这样可以保持其带有正电荷；谷氨酸可换为天冬氨酸，反之亦然，这样可以保持其带有负电荷；丝氨酸可换为苏氨酸，这样能够保持其具有游离的- OH；以及谷氨酰胺可换为天冬酰胺，这样能够保持其具有游离的-NH2。
“半保守性突变”包括用属于上文所列同一组但不属于同一亚组的氨基酸进行的氨基酸取代。例如，将天冬氨酸换成天冬酰胺，或将天冬酰胺换成赖氨酸的取代均涉及属于同一组但是不同亚组的氨基酸。“非保守性突变”涉及不同组之间的氨基酸取代，例如将赖氨酸替换成色氨酸，或将苯丙氨酸替换成丝氨酸等。
此外，可将一个或多个氨基酸插入前述免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽。可以将任意数量的任何适当氨基酸插入免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽的氨基酸序列。在此方面，可以将至少一个氨基酸(例如，2个或更多、5个或更多、或者10个或更多的氨基酸)，但不超过20个氨基酸(例如，18个或更少、15个或更少或者12 个或更少的氨基酸)插入免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽的氨基酸序列。优选地，将1-10个氨基酸(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸)插入免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽的氨基酸序列。在此方面，可以在任意适当位置将氨基酸插入任一前述免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽。优选地，将氨基酸插入免疫球蛋白重链多肽和/或轻链多肽的CDR(例如，CDR1、CDR2或CDR3)。
本发明的分离的免疫球蛋白重链多肽和轻链多肽不限于包含本文所述特定氨基酸序列的多肽。事实上，免疫球蛋白重链多肽或轻链多肽可为与本发明免疫球蛋白重链多肽或轻链多肽竞争结合IL-33的任何重链多肽或轻链多肽。在此方面，例如，免疫球蛋白重链多肽或轻链多肽可为结合至被本文所述重链和轻链多肽所识别的相同IL- 33表位的任何重链多肽或轻链多肽。抗体竞争可使用采用ELISA、免疫印迹或免疫组织化学方法的常规肽竞争分析方法(参见例如，美国专利4,828,981和8,568,992；以及Braitbard等人，Proteome Sci.，4：12(2006))来分析。
本发明提供了一种分离的白介素-33(IL-33)-结合剂，其包含、基本由如下组成或由如下组成：一种或多种本文所述的本发明的分离的氨基酸序列。“白介素-33(IL-33)- 结合剂”是指特异性结合IL-33的分子，优选蛋白质分子。优选地，IL-33-结合剂是一种抗体或其片段(例如，免疫原性片段)。本发明的分离的IL-33-结合剂包含、基本由如下组成或由如下组成：本发明的分离的免疫球蛋白重链多肽和/或本发明的分离的免疫球蛋白轻链多肽。在一个实施方式中，分离的IL-33-结合剂包含、基本由如下组成或由如下组成：本发明的免疫球蛋白重链多肽或本发明的免疫球蛋白轻链多肽。在另一实施方式中，分离的IL-33-结合剂包含、基本由日下组成或由如下组成：本发明的免疫球蛋白重链多肽和本发明的免疫球蛋白轻链多肽。
本发明的免疫球蛋白重链多肽和/或本发明的免疫球蛋白轻链多肽的任意氨基酸残基均可以被不同氨基酸残基以任意组合取代，或者可以被删除或插入，只要氨基酸取代、插入和/或删除的结果是使得IL-33结合剂的生物活性增强或改善即可。IL-33 结合剂的“生物活性”是指，例如，与特定IL-33表位的结合亲和性、对IL-33结合其受体的中和或抑制、在体内对IL-33活性的中和或抑制(例如，IC50)、药代动力学性质以及交叉反应性(例如，与IL-33蛋白的非人同源或直系同源之间，或与其他蛋白或组织之间)。本领域已知的抗原结合剂的其他生物学性质或特性包括：例如，亲和力、选择性、溶解性、折叠、免疫毒性、表达和制剂。可以采用标准技术对上述性质或特性进行观察、测量和/或评估，所述标准技术包括但不限于，ELISA、竞争性 ELISA、表面等离子体共振分析(BIACORETM)或KINEXATM、体外或体内中和试验、受体-配体结合试验、细胞因子或生长因子产生和/或分泌检测、以及信号转导和免疫组化检测。
如本文所使用的针对IL-33结合剂活性的术语“抑制”或“中和”是指基本上拮抗、抑制、阻止、限制、延缓、破坏、改变、消除、终止或逆转例如IL-33的生物活性或与IL-33相关的疾病或病症的进程或严重度的能力。本发明的分离的IL-33结合剂优选抑制或中和IL-33的活性达至少约20％、约30％、约40％、约50％、约60％、约 70％、约80％、约90％、约95％、约100％，或前述值中任意两个所定义的范围。
如本文所述的，本发明的分离的IL-33结合剂可以是完整抗体，或者抗体片段。术语“抗体的片段”、“抗体片段”和“抗体的功能性片段”在本文中可以互换使用，其是指抗体中保留与抗原特异性结合能力的一个或多个片段(参见，通常，Holliger等人，Nat.Biotech.，23(9)：1126-1129(2005))。分离的IL-33结合剂可以含有任意IL-33结合抗体片段。抗体片段优选包含例如一个或多个CDR、可变区(或其部分)、恒定区 (或其部分)、或其组合。抗体片段的实例包括但不限于，(i)Fab片段，其是由VL、 VH、CL、和CH1结构域组成的单价片段，(ii)F(ab’)2片段，其是包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段，(iii)Fv片段，其由抗体单臂的VL和VH结构域组成，(iv)Fab’片段，其源自使用温和还原条件破坏F(ab’)2片段的二硫键，(v)二硫化物稳定化的Fv片段(dsFv)，和(vi)域抗体(dAb)，其为特异性结合抗原的抗体单一可变区结构域(VH或VL)多肽。
在分离的IL-33结合剂包含免疫球蛋白重链或轻链多肽的片段的实施方式中，所述片段可以是任意尺寸，只要其能结合至IL-33，并能优选地抑制IL-33的活性。在此方面，免疫球蛋白重链多肽的片段理想地包含约5至18个(例如，约5、6、7、8、 9、10、11、12、13、14、15、16、17、18，或前述值中任意两个所定义的范围)氨基酸。类似地，免疫球蛋白轻链多肽的片段理想地包含约5至18个(例如，约5、6、 7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18，或前述值中任意两个所定义的范围)氨基酸。
当IL-33结合剂是抗体或抗体片段时，抗体或抗体片段理想地包含任意合适类型的重链恒定区(Fc)。优选地，抗体或抗体片段包含基于野生型IgG1、IgG2、或IgG4 抗体，或其变体的重链恒定区。
IL-33结合剂还可以是单链抗体片段。单链抗体片段的例子包括但不限于，(i)单链Fv(scFv)，其是由Fv片段的两个结构域(即，VL和VH)组成的单价分子，其由能够使两个结构域合成一条单一多肽链的合成连接子连接(参见，例如，Bird等人， Science，242：423-426(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：5879- 5883(1988)；和Osbourn等人，Nat.Biotechnol.，16：778(1998))和(ii)双特异抗体，其为多肽链的二聚体，其中各多肽链均包含通过肽连接子连接至VL的VH，所述肽连接子太短从而不允许VH与VL之间在同一多肽链配对，籍此使不同VH-VL多肽链的互补结构域之间配对以产生具有两个功能性抗原结合位点的二聚体分子。抗体片段是本领域所已知的，并更加详细的描述在例如美国专利申请公开号2009/0093024A1中。
分离的IL-33结合剂还可以是胞内抗体或其片段。胞内抗体是一种在细胞内表达和发挥功能的抗体。胞内抗体一般缺少二硫键，其能够通过其特异性结合活性来调节靶基因的表达或活性。胞内抗体包括单结构域片段，例如分离的VH和VL结构域以及scFv。胞内抗体可以包括连接至胞内抗体N端或C端的亚细胞转运信号，以使其在靶蛋白所位于的亚细胞组件中高浓度的表达。通过与靶基因的相互作用，胞内抗体通过，例如加速靶蛋白降解和在非生理性亚细胞组件中隔离靶蛋白的机制，来调节靶蛋白的功能和/或实现表型/功能敲除。胞内抗体介导的基因失活的其他机制可以依赖于胞内抗体导向的表位，如结合至靶蛋白上的催化位点，或结合至参与蛋白-蛋白、蛋白-DNA、或蛋白-RNA相互作用的表位。
分离的IL-33-结合剂还可以是抗体偶联物。在此方面，分离的IL-33-结合剂可以是(1)抗体、替代支架、或其片段，以及(2)包含IL-33结合剂的蛋白或非蛋白部分的偶联物。例如，IL-33结合剂可以作为抗体的全部或部分偶联至肽、荧光分子或化疗剂。
分离的IL-33结合剂可以是，或可以来自人抗体、非人抗体或嵌合抗体。“嵌合”是指包含人和非人区域的抗体或其片段。优选地，分离的IL-33-结合剂是人源化抗体。“人源化”抗体是包含人抗体支架和获自或源自非人抗体的至少一个CDR的单克隆抗体。非人抗体包括分离自任意非人动物，例如啮齿类动物(例如，小鼠或大鼠)的抗体。人源化抗体可包含获自或源自非人抗体的一个、两个或三个CDR。在本发明的一个实施方式中，本发明IL-33-结合剂的CDRH3获自或源自小鼠单克隆抗体，而本发明IL-33-结合剂的其余可变区和恒定区获自或源自人单克隆抗体。
可以通过任意方法获得人抗体、非人抗体、嵌合抗体或人源化抗体，包括通过体外来源(例如，杂交瘤或细胞系重组产生抗体)和体内来源(例如，啮齿类动物)。产生抗体的方法是本领域所已知的，并描述在例如
和Milstein，Eur.J.Immunol.， 5：511-519(1976)；Harlow和Lane(编)，Antibodies：A Laboratory Manual，CSH Press (1988)；和Janeway等人(编)，Immunobiology，第5版，Garland Publishing，New York，NY(2001))中。在某些实施方式中，可以使用转基因动物(例如，小鼠)生产人抗体或嵌合抗体，其中一个或多个内源性的免疫球蛋白基因被一个或多个人免疫球蛋白基因所取代。内源性抗体基因被人抗体基因有效取代的转基因小鼠的实例包括但不限于，Medarex HUMAB-MOUSETM、KirinTC MOUSETM和Kyowa Kirin KM- MOUSETM(参见，例如，Lonberg，Nat.Biotechnol.，23(9)：1117-25(2005)，以及 Lonberg，Handb.Exp.Pharmacol.，181：69-97(2008))。可以使用本领域中已知的任何适当的方法生产人源化抗体(参见，例如，An，Z.(编)，TherapeuticMonoclonal Antibodies：From Bench to Clinic，John Wiley&Sons，Inc.，Hoboken，NewJersey (2009))，其包括例如，将非人CDR接合至人抗体支架(参见，例如，Kashmiri等人，Methods，36(1)：25-34(2005)；以及Hou等人，J.Biochem.，144(1)：115-120 (2008))。在一个实施方式中，可以使用例如美国专利申请公开号2011/0287485 A1中描述的方法产生人源化抗体。
在一个实施方式中，可以使用蛋白质化学或重组DNA技术将本文所述的免疫球蛋白重链多肽和/或免疫球蛋白轻链多肽的CDR(例如，CDR1、CDR2或CDR3)或可变区移植(即，接合)入另一分子，例如抗体或非抗体多肽。就此而言，本发明提供了一种分离的IL-33-结合剂，其包含如本文所述的免疫球蛋白重链和/或轻链多肽的至少一个CDR。所述分离的IL-33-结合剂可包含如本文所述的免疫球蛋白重链和/或轻链可变区的一个、两个或三个CDR。例如，对于包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2 或SEQ ID NO：5-50中任一的免疫球蛋白重链多肽，CDR1位于氨基酸残基26和 35(包含在内)之间；CDR2位于氨基酸残基50和59(包含在内)之间(SEQ ID NO：1和 SEQ ID NO：2)或氨基酸残基50和66(包含在内)之间(SEQ ID NO：5-50)；且CDR3位于氨基酸残基99和102(包含在内)之间(SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2)或氨基酸残基 99和111(包含在内)之间(SEQ ID NO 5-50)。对于包含SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：51-66中任一的免疫球蛋白轻链多肽，例如，CDR1位于氨基酸残基 24和39(包含在内)之间(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)或氨基酸残基24和34(包含在内)之间(SEQ IDNO：51-66)；CDR2位于氨基酸残基55和61(包含在内)之间(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4)或氨基酸残基50和56(包含在内)之间(SEQ ID NO：51- 66)；CDR3位于氨基酸残基94和102(包含在内)之间(SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4) 或氨基酸残基89和97(包含在内)之间(SEQ IDNO：51-66)。
在一个优选实施方式中，IL-33-结合剂结合IL-33表位，其阻断IL-33结合至受体ST2(还称作IL1RL1)和/或IL-1受体辅助蛋白(IL1RAP)并抑制IL-33介导的信号转导。本发明还提供了分离或纯化的IL-33表位，其以间接或变构方式阻断IL-33结合至受体ST2和IL1RAP。
本发明还提供了编码本发明免疫球蛋白重链多肽、本发明免疫球蛋白轻链多肽和本发明IL-33结合剂的一种或多种分离或纯化的核酸序列。
术语“核酸序列”意图包括DNA或RNA聚合物，即多核苷酸，其可以是单链的或双链的并可含有非天然或改变的核苷酸。如本文所使用的术语“核酸”和“多核苷酸”是指任意长度的核糖核苷酸(RNA)或脱氧核糖核苷酸(DNA)的核苷酸聚合形式。这些术语是指分子的一级结构，且因此包括双链和单链DNA、以及双链和单链RNA。该术语包括作为等同物的由核苷酸类似物和经修饰多核苷酸(例如但不限于甲基化和/或加帽多核苷酸)构成的RNA或DNA类似物。核酸一般通过磷酸键连接以形成核酸序列或多核苷酸，虽然还有很多其他连接是本领域中已知的(例如，磷硫酰、硼磷酰等)。
本发明另外提供了包含编码本发明免疫球蛋白重链多肽、本发明免疫球蛋白轻链多肽和/或本发明IL-33结合剂的一个或多个核酸序列的载体。载体可以是例如质粒、游离基因、粘粒、病毒载体(例如，逆转录病毒或腺病毒载体)或噬菌体。适宜的载体和载体制备方法均是本领域所公知的(参见例如，Sambrook等人，Molecular Cloning，a LaboratoryManual，第3版，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，N.Y.(2001)，以及Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology， Greene PublishingAssociates and John Wiley&Sons，New York，N.Y.(1994))。
除了编码本发明免疫球蛋白重链多肽、本发明免疫球蛋白轻链多肽和/或本发明IL-33结合剂的核酸序列以外，载体优选包括表达控制序列，例如启动子、增强子、多腺苷酸化信号、转录终止子、内部核糖体进入位点(IRES)等，其提供编码序列在宿主细胞内的表达。示例性的表达控制序列是本领域中已知的并描述于例如Goeddel， Gene ExpressionTechnology：Methods in Enzymology，Vol.185，Academic Press，San Diego，Calif.(1990)中。
来自多种不同来源的大量启动子，包括组成型、诱导型和可抑制启动子均是本领域所公知的。启动子的代表性来源包括例如病毒、哺乳动物、昆虫、植物、酵母和细菌，并且来自这些来源的适宜启动子易于获得，或者基于可以获得的公开序列通过合成制备，例如来自诸如ATCC以及其他商业或个人来源的保藏机构。启动子可以是单向的(即，在一个方向起始转录)或双向的(即，在3’或5’方向起始转录)。启动子的非限制性实例包括例如T7细菌表达系统、pBAD(araA)细菌表达系统、巨细胞病毒 (CMV)启动子、SV40启动子、RSV启动子。诱导型启动子包括例如Tet系统(美国专利5,464,758和5,814,618)、蜕皮激素可诱导系统(No等人，Proc.Natl.Acad.Sci.，93： 3346-3351(1996))、T-REXTM系统(Invitrogen，Carlsbad，CA)、LACSWITCHTM系统 (Stratagene，San Diego，CA)和Cre-ERT他莫昔芬可诱导重组酶系统(Indra等人， Nuc.Acid.Res.，27：4324-4327(1999)；Nuc.Acid.Res.，28：e99(2000)；美国专利 7,112,715；和Kramer&Fussenegger，Methods Mol.Biol.，308：123-144(2005))。
如本文所使用的术语“增强子”指增加例如与之可操作连接的核酸序列转录的DNA序列。增强子可以位于核酸序列编码区的数千碱基以外，并且可以调节调控因子的结合、DNA甲基化的类型或DNA结构的改变。来自多种不同来源的大量增强子是本领域公知的并可为克隆的多核苷酸或在克隆的多核苷酸内(来自例如，诸如 ATCC以及其他商业或个人来源的保藏机构)。很多包含启动子(例如常用的CMV启动子)的多核苷酸也包含增强子序列。增强子可以位于编码序列的上游、内部或下游。
载体还可以包含“选择标记基因”。如本文所使用的，术语“选择标记基因”是指这样的核酸序列，在存在相应选择剂时其使得表达该核酸序列的细胞被特异性地选择或抑制。适宜的选择标记基因是本领域中已知的并描述于例如国际专利申请公开WO 1992/008796和WO 1994/028143；Wigler等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，77：3567- 3570(1980)；O′Hare等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：1527-1531(1981)； Mulligan&Berg，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，78：2072-2076(1981)；Colberre-Garapin 等人，J.Mol.Biol.，150：1-14(1981)；Santerre等人，Gene，30：147-156(1984)； Kent等人，Science，237：901-903(1987)；Wigler等人，Cell，11：223-232(1977)； Szybalska&Szybalski，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，48：2026-2034(1962)；Lowy等人，Cell，22：817-823(1980)；以及美国专利5,122,464和5,770,359中。
在一些实施方式中，载体是“游离基因表达载体”或“游离基因”，在存在适宜的选择性压力的条件下，其能够在宿主细胞中复制并作为DNA的染色体外片段持续存在于宿主细胞中(参见例如，Conese等人，Gene Therapy，11：1735-1742(2004))。代表性的市售的游离基因表达载体包括但不限于使用爱泼斯坦巴尔核酸抗原1(EBNA1)和爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)复制原点(oriP)的游离基因质粒。来自Invitrogen(Carlsbad， CA)的载体pREP4、pCEP4、pREP7和pcDNA3.1以及来自Stratagene(La Jolla，CA) 的pBK-CMV代表了替代EBNA1和oriP.1而使用T抗原和SV40复制原点的游离基因载体的非限制性实例。
其他适宜的载体包括整合表达载体，其可以随机整合至宿主细胞的DNA、或可包括能够使表达载体与宿主细胞染色体特异性重组的重组位点。此类整合表达载体可以利用宿主细胞染色体的内源性表达控制序列实现所需蛋白的表达。以位点特异性方式整合的载体的实例包括，例如来自Invitrogen(Carlsbad，CA)的flp-in系统的组件 (例如，pcDNATM5/FRT)或cre-lox系统(例如，可见于来自Stratagene(La Jolla，CA) 的pExchange-6核心载体)。随机整合至宿主细胞染色体的载体的实例包括，例如来自Life Technologies(Carlsbad，CA)的pcDNA3.1(当缺乏T-抗原时将其引入)、来自 Millipore(Billerica，MA)的UCOE以及来自Promega(Madison，WI)的pCI or pFN10A (ACT)FLEXITM。
还可以使用病毒载体。代表性的市售的病毒表达载体包括但不限于，获得自Crucell公司(Leiden，The Netherlands)的基于腺病毒的Per.C6系统、来自Invitrogen(Carlsbad，CA)的基于慢病毒的pLP1以及来自Stratagene(La Jolla，CA)的逆转录病毒载体pFB-ERV加pCFB-EGSH。
可以将编码本发明氨基酸序列的核酸序列在相同载体上提供给细胞(即，顺式)。可以使用单向启动子控制各核酸序列的表达。在另一实施方式中，可以使用双向和单向启动子的组合控制多个核酸序列的表达。在另一方面，可以将编码本发明氨基酸序列的核酸序列在分离载体上提供给细胞群(即，反式)。各分离载体中的各核酸序列可包含相同或不同的表达控制序列。可以同时或顺序地将分离载体提供给细胞。
可以将包含编码本发明氨基酸序列的核酸的载体引入能够表达所编码多肽的宿主细胞，包括任意适宜的原核或真核细胞。照此，本发明提供了包含本发明载体的分离细胞。优选的宿主细胞是能够容易并稳定地生长，具有相当迅速的生长速率，具有良好表征的表达系统，并且能够被方便和有效的转化或转染的那些细胞。
适宜的原核细胞的实例包括但不限于来自杆菌属(如，枯草芽孢杆菌和短小芽孢杆菌)、埃希氏杆菌属(如，大肠杆菌)、假单胞菌属、链霉菌属、沙门氏菌属和欧文氏菌属的细胞。特别有用的原核细胞包括不同种属的大肠杆菌(例如，K12、HB101 (ATCC No.33694)、DH5α、DH10、MC1061(ATCC No.53338)和CC102)。
优选地，将载体引入真核细胞。适宜的真核细胞是本领域中已知的，其包括例如酵母细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞。适宜酵母细胞的实例包括来自克鲁维酵母菌属、毕赤酵母属、鼻孢子虫属、酵母菌属和裂殖酵母属的那些。优选的酵母细胞包括例如酿酒酵母和毕赤酵母。
适宜的昆虫细胞描述于例如Kitts等人，Biotechniques，14：810-817(1993)；Lucklow，Curr.Opin.Biotechnol.，4：564-572(1993)；和Lucklow等人，J.Virol.， 67：4566-4579(1993)中。优选的昆虫细胞包括Sf-9和HI5(Invitrogen，Carlsbad， CA)。
优选地，在本发明中利用哺乳动物细胞。多种适宜的哺乳动物宿主细胞是本领域中已知的，并且多种可以从美国典型培养物保藏中心(ATCC，Manassas，VA)获得。适宜的哺乳动物细胞的实例包括但不限于中国仓鼠卵巢细胞(CHO)(ATCC No. CCL61)、CHO DHFR细胞(Urlaub等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，97：4216-4220 (1980))、人胚胎肾(HEK)293或293T细胞(ATCC No.CRL1573)和3T3细胞(ATCC No.CCL92)。其他适宜的哺乳动物细胞系为猴COS-1(ATCC No.CRL1650)和COS-7 细胞系(ATCC No.CRL1651)、以及CV-1细胞系(ATCCNo.CCL70)。进一步的示例性哺乳动物宿主细胞包括灵长类细胞系和啮齿类细胞系，包括转化细胞系。正常的二倍体细胞，来自原代组织体外培养的细胞系，以及原代外植体也是适宜的。其他适宜的哺乳动物细胞系包括但不限于小鼠神经母细胞瘤N2A细胞、HeLa、小鼠L-929细胞、和BHK或HaK仓鼠细胞系，其全部可以从ATCC获得。选择适宜的哺乳动物宿主细胞以及转化、培养、扩增、筛选和纯化细胞的方法均是本领域中已知的。
更优选地，哺乳动物细胞是人类细胞。例如，哺乳动物细胞可以是人类淋巴或淋巴来源细胞系，例如前B淋巴细胞来源细胞系。人类淋巴细胞系的实例包括但不限于RAMOS(CRL-1596)、Daudi(CCL-213)、EB-3(CCL-85)、DT40(CRL-2111)、18- 81(Jack等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，85：1581-1585(1988))、Raji细胞(CCL-86) 及其衍生物。
可以通过“转染”、“转化”或“转导”将编码本发明氨基酸序列的核酸序列引入细胞。如本文所使用的“转染”、“转化”或“转导”是指通过物理或化学方法将一个或多个外源性的多核苷酸引入宿主细胞。多种转染技术均是本领域中已知的，且包括例如磷酸钙DNA共沉淀(参见例如，Murray E.J.(编)，Methods in Molecular Biology，Vol. 7，GeneTransfer and Expression Protocols，Humana Press(1991))；DEAE-葡聚糖；电穿孔；阳离子脂质体介导的转染；钨粒子促化微粒轰击(Johnston，Nature，346：776- 777(1990))；和磷酸锶DNA共沉淀(Brash等人，Mol.Cell Biol.，7：2031-2034 (1987))。当转染粒子在适宜的包装细胞(许多包装细胞是市售的)中生长后，可以将噬菌体或病毒载体引入宿主细胞。
本发明提供了包含有效量的本发明免疫球蛋白重链多肽、本发明免疫球蛋白轻链多肽、本发明IL-33结合剂、编码任意前述的本发明核酸序列、或者包含本发明核酸序列的本发明载体的组合物。优选地，该组合物是药学上可接受的(例如，生理学上可接受的)组合物，其包含运载体，优选药学上可接受的(例如，生理学上可接受的)运载体，和本发明氨基酸序列、抗原结合剂或载体。在本发明的背景中可以使用任何适当的运载体，并且此类运载体是本领域所公知的。部分地，通过可给予组合物的特定部位和给予组合物所使用的特定方法确定运载体的选择。组合物任选地可以是无菌的。组合物可以冷冻或冻干贮存并在使用前使用适当无菌载体进行重构。可以根据常规技术生产组合物，其描述于例如Remington：The Science and Practice of Pharmacy，第21版，Lippincott Williams&Wilkins，Philadelphia，PA(2001)中。
本发明进一步提供了一种在哺乳动物中治疗响应IL-33抑制或中和的疾病或紊乱的方法。该方法包括给予患有响应IL-33抑制或中和的疾病或紊乱的哺乳动物前述组合物，藉此在哺乳动物中治疗该疾病或紊乱。“响应IL-33抑制”或“响应IL-33中和”的疾病或紊乱是指IL-33水平或活性的降低在哺乳动物(优选人)中具有治疗益处，或者IL-33的不适当表达(例如，过表达)或增加的活性导致或有助于疾病或紊乱的病理作用的任何疾病或紊乱。响应IL-33抑制或中和的疾病或紊乱包括：例如，炎性疾病、自身免疫疾病、某些癌症(例如，上皮性肿瘤(癌)、慢性髓性白血病(CML)、乳腺癌和胃肠道肿瘤)以及任何特应性疾病。炎性疾病包括：例如，皮肤、肺和胃肠道的过敏性炎症、过敏性皮肤炎(还称作特应性湿疹)、哮喘(过敏性和非过敏性)、纤维化 (例如，特发性肺纤维化、硬皮病、肾纤维化和瘢痕)、慢性阻塞性肺病(COPD)、过敏性鼻炎，食物过敏(例如，对花生、鸡蛋、乳制品、贝类、坚果等过敏)、季节性过敏和其它过敏。自身免疫疾病包括：例如，克罗恩病、类风湿性关节炎、牛皮癣、强直性脊柱炎、红斑狼疮和硬皮病。如本文所使用的术语“特应性”是指朝向发展某些超敏反应(例如，湿疹(过敏性皮肤炎)、枯草热(过敏性鼻炎)和过敏诱发哮喘(过敏性哮喘)) 的遗传倾向，其典型地由过多IgE产生所介导。
如本文所使用的，术语“疗法”、“治疗”等是指获得所需的药理学和/或生理学效应。优选地，该效应是治疗性的，即该效应部分或完全治愈疾病和/或归因于疾病的不良症状。为了这个目的，本发明方法包括给予“治疗有效量”的IL-33结合剂。“治疗有效量”是指在必要的剂量和时间段内达到所需治疗结果的有效量。治疗有效量可以根据诸如以下的因素而改变：个体的疾病状态、年龄、性别、和体重，以及IL-33 结合剂在个体中激发所需应答的能力。例如，本发明IL-33结合剂的治疗有效量是在人体中降低IL-33生物活性的量。
或者，药理学和/或生理学效应可能是预防性的，即该效应完全或部分预防疾病或其症状。在此方面，本发明方法包括给药“预防有效量”的IL-33结合剂。“预防有效量”指在必要的剂量和时间段内达到所需预防结果(例如，预防疾病发病)的有效量。
典型剂量可以例如在1pg/kg至20mg/kg动物或人体重量的范围内；但是，低于或高于该示例性范围的剂量仍在本发明的范围内。每日肠胃外剂量可以是约0.00001 μg/kg至约20mg/kg总体重(例如，约0.001μg/kg、约0.1μg/kg、约1μg/kg、约 5μg/kg、约10μg/kg、约100μg/kg、约500μg/kg、约1mg/kg、约5mg/kg、约10 mg/kg，或前述值中任意两个所定义的范围)，优选约0.1μg/kg至约10mg/kg总体重 (例如，约0.5μg/kg、约1μg/kg、约50μg/kg、约150μg/kg、约300μg/kg、约750 μg/kg、约1.5mg/kg、约5mg/kg，或前述值中任意两个所定义的范围)，更优选约1 μg/kg至5mg/kg总体重(例如，约3μg/kg、约15μg/kg、约75μg/kg、约300μg/kg、约900μg/kg、约2mg/kg、约4mg/kg，或前述值中任意两个所定义的范围)，且甚至更优选约0.5至15mg/kg体重/天(例如，约1mg/kg、约2.5mg/kg、约3mg/kg、约6 mg/kg、约9mg/kg、约11mg/kg、约13mg/kg，或前述值中任意两个所定义的范围)。可以通过定期对接受治疗的患者进行评估以监测治疗或预防功效。对于持续若干天或更长时间的重复给药而言，依据情况，重复治疗直至疾病症状得到所需的抑制。然而，其他剂量方案可能是有用的且在本发明的范围内。可以通过将组合物单次团注给药、将组合物多次团注给药、或通过将组合物连续输注给药以递送所需的剂量。
可以使用标准给药技术给予哺乳动物包含有效量的本发明免疫球蛋白重链多肽、本发明免疫球蛋白轻链多肽、本发明IL-33结合剂、编码任意前述的本发明核酸序列、或者包含本发明核酸序列的本发明载体的组合物，所述标准给药技术包括口服、静脉、腹腔、皮下、肺部、透皮、肌内、鼻内、口腔、舌下、或栓剂给药。该组合物优选适于肠胃外给药。如本文所使用的，术语“肠胃外”包括静脉、肌内、皮下、直肠、阴道、和腹腔给药。更优选地，通过静脉、腹腔、或皮下注射使用外周系统将组合物给予哺乳动物。
一旦给予哺乳动物(例如，可交叉反应的人)，可以通过本领域已知的任何适当方法测定本发明IL-33结合剂的生物活性。例如，可以通过测定特定IL-33结合剂的稳定性评估生物活性。在本发明的一个实施方式中，IL-33结合剂(例如，抗体)的体内半衰期介于约30分钟至45天之间(例如，约30分钟、约45分钟、约1小时、约2 小时、约4小时、约6小时、约10小时、约12小时、约1天、约5天、约10天、约15天、约25天、约35天、约40天、约45天，或前述值中任意两个所定义的范围)。在另一实施方式中，IL-33结合剂的体内半衰期介于约2小时至20天之间(例如，约5小时、约10小时、约15小时、约20小时、约2天、约3天、约7天、约 12天、约14天、约17天、约19天，或前述值中任意两个所定义的范围)。在另一实施方式中，IL-33结合剂的体内半衰期介于约10天至约40天之间(例如，约10天、约13天、约16天、约18天、约20天、约23天、约26天、约29天、约30天、约 33天、约37天、约38天、约39天、约40天，或前述值中任意两个所定义的范围)。
还可以通过测定特定IL-33结合剂与IL-33或其表位的结合亲和力来评价其生物活性。术语“亲和力”是指两个试剂可逆结合的平衡常数，且其以解离常数(KD)表示。结合剂与配体的亲和力(如抗体与表位的亲和力)可以是例如约1飞摩尔(fM)至约 100微摩尔(μM)(例如，约1fM至约1皮摩尔(pM)、约1pM至约1纳摩尔(nM)、约 1nM至约1微摩尔(μM)，或约1μM至约100μM)。在一个实施方式中，IL-33-结合剂可以以小于或等于1纳摩尔的KD(例如，0.9nM、0.8nM、0.7nM、0.6nM、0.5 nM、0.4nM、0.3nM、0.2nM、0.1nM、0.05nM、0.025nM、0.01nM、0.001nM，或前述值中任意两个所定义的范围)结合IL-33蛋白。在另一实施方式中，IL-33-结合剂可以以小于或等于200pM的KD(例如，190pM、175pM、150pM、125pM、 110pM、100pM、90pM、80pM、75pM、60pM、50pM、40pM、30pM、25 pM、20pM、15pM、10pM、5pM、1pM，或前述值中任意两个所定义的范围)结合IL-33。可使用本领域已知的任意试验测量针对目标抗原或表位的免疫球蛋白亲和力。此类方法包括例如荧光活化细胞分选(FACS)、可分离小珠(例如，磁珠)、表面等离子共振(SPR)、溶液相竞争(KINEXATM)、抗原筛选和/或ELISA(参见例如，Janeway 等人(编)，Immunobiology，第5版，Garland Publishing，New York，NY，2001)。
本发明的IL-33结合剂可以单独或与其他药物(例如，作为佐剂)联合给予。例如，IL-33结合剂可以与用于治疗或预防本文所公开的疾病或紊乱的其它试剂联合给予。在此方面，IL-33-结合剂可以与至少一种其它抗炎剂联合使用，所述抗炎剂包括例如类固醇(例如，强的松和氟替卡松)和非甾体抗炎药(NSAID)(例如，阿司匹林、布洛芬和萘普生)。
除治疗用途以外，本文所述的IL-33结合剂可以用于诊断或研究应用。在此方面，可以将IL-33结合剂用于诊断响应IL-33抑制或中和的疾病或病症的方法中。以类似方式，可以将IL-33-结合剂用于在针对响应IL-33抑制或中和的疾病或病症进行测试的对象中监控IL-33蛋白水平的试验中。研究应用包括，例如利用IL-33结合剂和标记来检测样品中IL-33蛋白的方法，例如在人体液或在细胞或组织提取物中。IL- 33结合剂可经修饰或未经修饰而使用，如使用可检测部分进行共价或非共价标记。例如，可检测部分可以是放射性同位素(例如，3H、14C、32P、35S或125I)、荧光或化学发光化合物(例如，异硫氰酸荧光素、罗丹明或荧光素)、酶(例如，碱性磷酸酶、β- 半乳糖苷酶或辣根过氧化物酶)或辅基。任意用于将抗原结合剂(例如，抗体)与可检测部分分别偶联的本领域已知方法可用于本发明的情况中(参见例如，Hunter等人， Nature，194：495-496(1962)；David等人，Biochemistry，13：1014-1021(1974)；Pain 等人，J.Immunol.Meth.，40：219-230(1981)；和Nygren，J.Histochem.and Cytochem.，30：407-412(1982))。
可以使用本发明的IL-33结合剂通过本领域已知的任何适宜方法检测IL-33蛋白水平。此类方法包括：例如，放射免疫测定法(RIA)和FACS。可以采用任意适宜技术建立IL-33的正常或标准表达值，例如通过在适合形成抗原-抗体复合物的条件下将包含或可能包含IL-33的样品与IL-33特异性抗体结合。用可检测物质对抗体进行直接或间接标记以促进结合或非结合抗体的检测。适宜的可检测物质包括多种酶、辅基、荧光材料、发光材料、和放射性材料(参见，例如Zola，Monoclonal Antibodies：A Manual of Techniques，CRCPress，Inc.(1987))。然后将样品中IL-33多肽的表达量与标准值进行比较。
IL-33结合剂可以在试剂盒中提供，即，将用于进行诊断检测的预定量的试剂与说明书打包组合。如果使用酶标记IL-33结合剂，则试剂盒优选包括酶所需的底物和辅因子(例如，提供可检测发光团或荧光团的底物前体)。此外，在试剂盒中还可以包括其他添加剂，如稳定剂、缓冲剂(例如，封闭缓冲液或裂解缓冲液)等。可以改变多种试剂的相对量以使得试剂在溶液中的浓度基本上达到检测的最佳灵敏度。试剂可以以包括赋形剂的干粉形式(典型为冻干的)提供，将其溶解后会提供具有适宜浓度的试剂溶液。
以下实施例进一步说明本发明，但是当然不应将其解释为以任意方式限制本发明的范围。
实施例1
本实施例描述了用于测定本发明免疫球蛋白重链和轻链多肽功能活性的试验。
IL-33介导的IL5自KU812细胞释放
KU812细胞是一种人嗜碱性细胞样CML细胞系(ATCC No.CRL-2099)(参见，例如，Tare等人，Exp.Cell Res.，316(15)：2527-37(2010)；Lefrancais等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，109(5)：1673-1978(2012))，其通过分泌IL-5而响应IL-33刺激。将 KU812细胞悬浮在RPM1+10％FBS培养基中，并以500,000细胞/孔点板于96孔平底板中。逐级稀释30μg/mL的目标抗体原液以产生半对数间隔的8个浓度。将稀释样本成排加至细胞并在37℃下培养30分钟。将IL-33-his6-bio(C端用6His标记，并以每分子平均1-2个生物素进行生物素化)(3ng)加至各孔，并在37℃下培养板 48小时。然后移出上清液并维持在4℃下直至进行ELISA测试。使用IL-5DuoSet ELISA试剂盒(R&D Systems，Minneapolis，MN)测试上清液并在SPECTRAMAXTM酶标仪(Molecular Devices，LLC，Sunnyvale，CA)上使用SOFTMAX PROTM微板数据采集&分析软件(Molecular Devices，LLC，Sunnyvale，CA)进行评估以测定IL-5的产生。
IL-33介导的HEK293-ST2细胞中荧光素酶表达
通过首先以3x103细胞/T75烧瓶(在DMEM/10％FBS中)点板天然HEK细胞并在 37℃下培养过夜以产生HEK/ST2稳定细胞系。第二天，通过混合500μL Optimem(LifeTechnologies，Carlsbad，CA)+24μL HD FUGENETM(Promega，Madison，WI) 转染细胞并在室温下培养5分钟。将DNA编码ST2-Fc(4μg)加至FUGENETM混合物并在室温下培养25分钟。然后在HEK细胞上分配该DNA/FUGENETM混合物并在37 ℃，5％CO2下培养过夜。在转染后24小时，将细胞分离并置于潮霉素筛选下3-4周时间直至被稳定选择。
IL-8荧光素酶报告试验
将4x106HEK293/ST2-Fc细胞接种于T-75烧瓶中，在37℃、5％CO2下过夜。第二天早晨，通过混合500μL Optimem+24μL HD FUGENETM将编码驱动荧光素酶报告基因表达的人IL-8启动子的DNA构建体AB4111转染入细胞，并在室温下培养 5分钟。该IL-8启动子响应由IL-33占据而刺激ST2-IL-1RAcP受体复合物所启动的信号转导级联。将AB4111(2μg)加至FUGENETM混合物并在室温下培养25分钟。然后在HEK/ST2细胞上分配该DNA/FUGENETM混合物并培养8小时。采用 ACCUTASETM收获细胞并将其以2.0x104细胞/孔(在0.1mL DMEM/10％FBS中)接种于 96孔平底板中。37℃、5％CO2下培养板15-18小时。第二天早晨，将板轻轻反转并在纸巾上轻拍以除去培养液。以50μL/孔将新鲜DMEM/10％FBS加至各孔。在室温下采用预复合IL-33/ST2-Fc或IL-33/Ab刺激细胞20分钟并接着加至细胞并在37℃下另外培养5小时。5小时后，通过将荧光素酶试剂以1∶1体积/体积加至各孔，使用 Steady Glo-荧光素酶检测系统(Promega，Madison，WI)测定荧光素酶活性。混合各孔并将150μL/孔转移至黑壁清底板，使用发光程序(60秒延迟)在ENVISTIONTM酶标仪 (PerkinElmer，Waltham，MA)上读板。采用GraphPad Prism 5软件(GraphPad，San Diego，CA)使用4参数曲线拟合分析数据。
表面等离子共振(SPR)法
在BIACORETM T200仪(GE Healthcare)上通过SPR测定抗IL33抗体的结合动力学和亲和力。采用～10,000RU抗人IgG(Fc)固定系列S CM5芯片上4个流动池的每一个。以10μL/min的流速捕获抗体(～1μg/mL)60秒。以高于各抗体KD约100倍的浓度起始，在运行缓冲液(HBS-EP+，pH 7.6)中稀释单体IL-33。各IL-33浓度以30 μL/min在所有流动池上通过180秒，然后解离1800秒。用3M MgCl2再生表面60 秒。使用BIACORE T200评估软件1.0版从所得传感图推导结合和解离动力学常数 (kon和koff)以及稳态亲和力(KD)。
有关若干本文所述IL-33结合剂的以上试验结果在图1A、1B、2A和2B中示出。
实施例2
本实施例描述了证明本发明IL-33结合剂功能活性的实验。
包含氨基酸序列SEQ ID NO：136的免疫球蛋白重链多肽与包含氨基酸序列SEQ IDNO：171的免疫球蛋白轻链多肽配对。所得抗体被称作APE4909。如下所述在原发性人嗜碱性细胞中评估APE4909抑制IL-33介导的IL-5和IL-9释放的能力。
从San Diego血库获得处理自供体全血的白细胞减少系统(LRS)单元。通过标准方法使用Ficoll密度离心分离制备外周血单核细胞(PBMC)。从LRS单元典型地获得约109PBMC。使用人类嗜碱性细胞分离试剂盒II(Miltenyi Biotec批号#130-092- 662，SanDiego，CA)从PBMC分离嗜碱性细胞。嗜碱性细胞的总产率约为106。
将嗜碱性细胞在RPMI 1640培养基中稀释至2x106/mL的密度，所述培养基包含10％胎牛血清，青霉素/链霉素(P/S)和25ng/mL重组人IL-3(R&D Systems， Minneapolis，MN)。以100μL稀释细胞/孔点板于标准平底96孔组织培养板，最终细胞密度为2x105/孔。以200μL PBS/孔填充外部孔以将非均匀蒸发的影响降到最低。在5％CO2、37℃培养器中将细胞培养过夜。
转天，以30至0μg/mL浓度范围加入APE4909和单体人ST2蛋白(hST2-称作APE3906)，所述浓度是在包含50ng/mL IL-33的RPMI+10％FBS+P/S中以半对数间隔逐级稀释获得。约18小时后，在300x g下将板离心3分钟。移出上清液，转移至洁净板，并在-80℃下贮存以待分析。
遵循制造商的建议方案使用DUOSETTM ELISA试剂盒(R&D Systems， Minneapolis，MN)通过ELISA评估细胞上清液中的IL-5和/或IL-9水平。如图3和 4中所示，APE4909抗体在原发性人嗜碱性细胞中抑制IL-33介导的IL-5和IL-9释放。
本实施例结果证实本发明IL-33结合剂可抑制IL-33活性。
实施例3
本实施例证实本发明IL-33结合剂对于IL-33的亲和力。
使用来自Sapidyne Instruments(Boise，ID)的KINEXATM 3200生物传感器平台对实施例2中所述APE4909抗体与IL-33相互作用的能力进行生物物理学分析。如下所述，进行针对人和猕猴IL-33(cynoIL-33)的结合实验，且所述实验独立运行两次。第一次实验的条件在括号外显示，而第二次实验的条件在括号内提供。
APE4909/人IL-33
使用以50μg/mL组氨酸标记的人IL-33溶液涂覆的吖内酯涂覆珠制备固相。在 1XPBS pH7.4，0.1％BSA中进行结合实验。4℃下采用200pM至3.4fM(或400 pM至6.7fM)最终浓度的IL-33培养10pM(或20pM)最终浓度的APE4909抗体3 (或4)天。在0.25mL/min速率下将5mL(或10mL)各混合物施用至IL-33涂覆珠 1200秒(或2400秒)。采用ALEXAFLUORTM 647-(Life Technologies，Carlsbad，CA) 标记的驴抗人抗体检测游离抗体。使用标准KINEXATM软件拟合全部数据。
APE4909/猕猴IL-33(cIL-33)
如同以上针对人IL-33所述的进行实验，只是在4℃下采用3nM至315fM最终浓度的cIL-33培养20pM和100pM最终浓度的APE4909抗体24小时。在0.25 mL/min速率下将各混合物施用至cIL-33涂覆珠500秒(对于20pM)或2120秒(对于 100pM)。采用ALEXAFLUORTM 647-(Life Technologies，Carlsbad，CA)标记的驴抗人抗体检测游离抗体。使用N-曲线分析合并两条曲线，并使用KINEXATM软件拟合全部数据。为进行核实，使用相似制备的固相、缓冲液和检测试剂在200pM APE4909抗体浓度下重复实验。4℃下采用15nM至250fM最终浓度的cIL-33培养 APE4909抗体24小时，并在0.25mL/min速率下将其施用至cIL-33涂覆珠180秒。使用标准KINEXATM软件拟合此数据。
APE4909对人IL-33和猕猴IL-33的亲和力分别在图5和图6示出。本实施例结果证实本发明IL-33-结合剂以高亲和力与人IL-33和非人灵长类IL-33二者均结合。
实施例4
本实施例证实某些本发明IL-33结合剂与ST2受体竞争结合人IL-33。
使用BIACORETM T200系统(GE Healthcare，Little Chalfont，Buckinghamshire，UK)监控IL-33结合。通过捕获抗体并考察随着ST2的量增加固定浓度的IL-33结合响应，来处理IL-33与本文公开的各种IL-33抗体或人ST2受体的结合。使用EDC 活化胺偶联化学在BIACORETM CM5芯片上固定抗人IgG (Fc-特异性，～10,000RU)。然后在25℃(～300RU)下将本发明IL-33抗体或融合至人IgG1 Fc域的人ST2(2.0 μg/mL，10μL/min流速下1分钟接触时间)捕获在此表面上。之后，在30μL/min速率下将包含单体可溶性人未标记IL-33(1nM)和未标记人ST2(10、3.3、1.1或0.37 nM)的分析物溶液(预培养大于30分钟)流经捕获配体2分钟，并另外监控解离2分钟。在各次循环间使用3M MgCl2(30μL/min下60秒)再生传感器芯片表面。
如上所述进行第二组实验，但具有以下改变：(1)使用抗小鼠IgG(Fc-特异性，～7500RU)固定传感器芯片；(2)采用4分钟接触时间在芯片上捕获融合至小鼠 IgG2aFc的人ST2(1.0μg/mL)；以及(3)预培养的分析物溶液包含单体可溶性人未标记 IL-33(10nM)和本发明IL-33抗体或单体未标记人ST2(100nM、25nM、6.3nM或 1.6nM)。继续培养分析物溶液约30分钟，同时机器进行启动循环。在HBS-EP+运行缓冲液(10mM HEPES，pH 7.6，150mM NaCl，3mM EDTA，0.05％表面活性剂P- 20；Teknova)中进行捕获和分析物结合。
ST2与本发明抗体结合至相同的IL-33表位与结合响应的损失相关，因为ST2 与IL-33的预培养将会阻止抗体进入表位。ST2结合至不同IL-33表位则允许IL-33 结合捕获的本发明抗体，其被观测为结合响应的增加，因为结合响应与分析物/复合物的质量直接成比例。这些实验结果在表1中列出。
表1
| 本发明抗体 | 响应 | 结论 |
| APE00986 | 不存在ST2时无响应 | 未结合IL-33 |
| APE02718 | 响应随着[ST2]增加而减少 | ST2结合相同/重叠表位 |
| APE03833 | 响应随着[ST2]增加而减少 | ST2结合相同/重叠表位 |
| APE04269 | 响应随着[ST2]增加而减少 | ST2结合相同/重叠表位 |
| APE05492 | 响应随着[ST2]增加而增加 | ST2结合不同表位 |
本实施例结果证实某些本发明IL-33结合剂结合至与ST2受体结合表位相似或相同的IL-33表位。
实施例5
本实施例证实本发明IL-33-结合剂抑制人IL-33驱动的外周嗜酸性细胞扩张。
IL-33诱导自CD4+TH2细胞群、天然淋巴2型细胞(ILC2细胞)和嗜碱性细胞的IL-5表达和释放增加。IL-5是在嗜酸性细胞分化、扩张和存活中发挥关键作用的一种细胞因子，所述嗜酸性细胞是已知介导特应性疾病适应症(例如，哮喘和鼻炎) 的某些方面的细胞群体。在一项初步研究中，以每只动物5μg的剂量将人IL-33腹腔内注射入野生型Balb/c小鼠连续六天。在此初始6天研究终了时的随后FACS分析表明：人IL-33处理的小鼠相比于媒介物(PBS)处理的小鼠在其外周血液中具有增加的嗜酸性细胞数目(如，通过高侧散射分析和CCR3 Siglec-F和CD16/CD32表达所定义的)。
作为以上研究的后续，野生型Balb/c小鼠再次每日注射5μg人IL-33共6天(1-6日)，并在该研究的-2和+2日以每天10mg/kg的剂量给予抗人IL-33 APE04909抗体 (上述)。将采用人IL-33以每日5μg剂量进行处理的小鼠的相似组给予对照人IgG1 同种型mAb(标为APE00987)或人ST2-hFc融合蛋白(标为APE027180)，其代表可溶性IL-33受体(ST2)的人IgG1 Fc-融合二聚版本。如针对APE04909抗体所述，这两种对照蛋白也仅在该研究的-2和+2日以10mg/kg剂量给予。
如图7中所示，抗IL-33 APE04909抗体大幅抑制人IL-33驱动的外周血室中嗜酸性细胞扩张。相比之下，人ST2-hFc蛋白未能显著减少人IL-33处理的小鼠中的血液嗜酸性细胞数目且未显示出高于在采用对照IgG mAb(APE00987)处理的小鼠中所检测到的嗜酸性细胞数目的减少水平。
在本文中引用的所有参考文献，包括出版物、专利申请、和专利，都通过引用并入本文，对每篇参考文献的引用都如同单独地和具体地指出其为通过引用的方式并入，并且在本文中将其完整地列出的相同程度。
在本发明描述的上下文中(特别是在随后的权利要求书的上下文中)，术语“一(a)”和“一个(an)”和“所述(the)”和“至少一种”以及相似指示词的使用应理解为包括单数和复数，除非在本文中另有说明或者与上下文明显矛盾。后接一项或多项列表的术语“至少一种”的使用(例如，“至少一种A和B”)应理解为表示选自所列项的一项(A或 B)或者所列项中两项或多项的任意组合(A和B)，除非在本文中另有说明或者与上下文明显矛盾。术语“包含”“具有”“包括”以及“含有”都应理解为开放性术语(即，意思是“包括，但不限于”)，除非另有注明。本文中对数值范围的描述仅仅旨在作为对每个落在该范围内的单个数值的单独引用的简略写法，除非在本文中另有说明，且每个单个数值以如同在本文中单独引用的方式并入本说明书。所有在本文中描述的方法都可以按照任何适当的顺序进行，除非在本文中另有说明或者与上下文明显矛盾。在本文中任何和所有的实施例或示例性语言(如，“例如”)的使用，都仅旨在更好地阐明本发明，而不是在本发明的范围上加以限制，除非权利要求另有要求。说明书中的任何语言都不应被理解为用于表明任何未要求的元素为实施本发明所必需。
本文描述了本发明的优选实施方式，包括发明人所知晓的实施本发明的最佳方式。在对上述说明书阅读的基础上，那些优选实施方式的变体对本领域普通技术人员而言是显而易见的。发明人预期熟练技术人员可以根据需要应用这样的变体，且发明人有意以本文中具体描述的方式以外的方式实施本发明。因此，本发明包括由适用法律所准许的本发明所附权利要求中所述主题的所有修饰和等同。而且，本发明包括以上所述元素的所有可能的变体的任意组合，除非在本文中另有说明或者与上下文明显矛盾。
Claims (20)
1.一种分离的白介素-33(IL-33)-结合剂，其包含免疫球蛋白重链，所述免疫球蛋白重链含有CDR1、CDR2和CDR3，所述重链的CDR1、CDR2和CDR3为SEQ ID NO:136中的CDR1、CDR2和CDR3，和免疫球蛋白轻链，所述免疫球蛋白轻链含有CDR1、CDR2和CDR3，所述轻链的CDR1、CDR2和CDR3为SEQ ID NO:171中的CDR1、CDR2和CDR3，其中所述IL-33-结合剂是抗体或抗体片段。
2.权利要求1所述的分离的IL-33-结合剂，其包含与SEQ ID NO:136所示的免疫球蛋白重链可变区具有至少90％序列同一性的免疫球蛋白重链可变区，和与SEQ ID NO:171所示的免疫球蛋白轻链可变区具有至少90％序列同一性的免疫球蛋白轻链可变区，所述分离的IL-33-结合剂保留抗体或抗体片段的生物活性，所述抗体或抗体片段包含如SEQ ID NO:136所示的免疫球蛋白重链可变区和如SEQ ID NO:171所示的免疫球蛋白轻链可变区。
3.权利要求1所述的分离的IL-33-结合剂，其包含与SEQ ID NO:136所示的免疫球蛋白重链可变区具有至少95％序列同一性的免疫球蛋白重链可变区，和与SEQ ID NO:171所示的免疫球蛋白轻链可变区具有至少95％序列同一性的免疫球蛋白轻链可变区，其中所述IL-33-结合剂保留抗体或抗体片段的生物活性，所述抗体或抗体片段包含如SEQ ID NO:136所示的免疫球蛋白重链可变区和如SEQ ID NO:171所示的免疫球蛋白轻链可变区。
4.权利要求1-3中任一项所述的分离的IL-33-结合剂，其包含SEQ ID NO:136所示的免疫球蛋白重链可变区，和SEQ ID NO:171所示的免疫球蛋白轻链可变区。
5.权利要求1-4中任一项所述的分离的IL-33-结合剂，其中所述抗体或抗体片段是偶联物的一部分。
6.权利要求1-5中任一项所述的分离的IL-33-结合剂，其中所述抗体片段选自F(ab’)2、Fab’、Fab、Fv、scFv、dsFv、dAb和单链结合多肽。
7.权利要求1-5中任一项所述的分离的IL-33-结合剂，其中所述结合剂为IgG1抗体。
8.一种分离或纯化的核酸，其编码权利要求1-4任一项所述的免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链，所述分离或纯化的核酸序列可选的在载体中。
9.一种分离的细胞，其包含编码权利要求1-4任一项所述的免疫球蛋白重链和免疫球蛋白轻链的核酸序列。
10.一种组合物，其包含(a)权利要求1-7任一项所述的分离的IL-33-结合剂或权利要求8所述的核酸以及(b)药学上可接受的运载体。
11.权利要求1-7任一项所述的分离的IL-33-结合剂、权利要求8所述的核酸或权利要求10所述的组合物在制备用于在哺乳动物中治疗响应IL-33抑制的病症的药物中的用途。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述病症是炎性病症。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述炎性病症是过敏性皮肤炎、过敏性哮喘、食物过敏或纤维化。
14.根据权利要求13所述的用途，其中所述食物过敏是花生过敏。
15.根据权利要求11所述的用途，其中所述病症是自身免疫性疾病。
16.根据权利要求15所述的用途，其中所述自身免疫性疾病是克罗恩病或类风湿性关节炎。
17.根据权利要求11所述的用途，其中所述病症是癌症。
18.根据权利要求17所述的用途，其中所述癌症是上皮癌、慢性髓性白血病(CML)、乳腺癌或胃肠癌。
19.根据权利要求11-18任一项所述的用途，其中所述IL-33-结合剂在所述哺乳动物中的半衰期介于30分钟至45天之间。
20.根据权利要求11-19任一项所述的用途，其中所述IL-33-结合剂以介于约1飞摩尔(fM)至约1纳摩尔(nM)之间的KD结合IL-33。
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|---|---|---|---|---|
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| JO3532B1 (ar) | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
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| EP3218515B1 (en) | 2014-11-10 | 2023-04-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic and diagnostic methods for il-33-mediated disorders |
| CA3011547A1 (en) * | 2016-01-14 | 2017-07-20 | Anaptysbio, Inc. | Inhibition of allergic reaction using an il-33 inhibitor |
| EP3448888A1 (en) * | 2016-04-27 | 2019-03-06 | Pfizer Inc | Anti-il-33 antibodies, compositions, methods and uses thereof |
| EP3487518A4 (en) | 2016-07-20 | 2020-08-12 | Aerpio Therapeutics LLC | HUMANIZED MONOCLONAL ANTIBODIES TARGETING VE-PTP (HPTP-SS) |
| JOP20190093A1 (ar) * | 2016-10-28 | 2019-04-25 | Lilly Co Eli | أجسام مضادة لـ il-33 واستخداماتها |
| TW202332696A (zh) | 2016-12-01 | 2023-08-16 | 美商再生元醫藥公司 | 治療發炎症狀的方法 |
| HRP20240195T8 (hr) | 2016-12-19 | 2024-05-24 | Medimmune Limited | Antitijela na lif i njihove primjene |
| US10583191B2 (en) | 2016-12-19 | 2020-03-10 | Mosaic Biomedicals Slu | Antibodies against LIF and uses thereof |
| WO2018148585A1 (en) | 2017-02-10 | 2018-08-16 | Genentech, Inc. | Anti-tryptase antibodies, compositions thereof, and uses thereof |
| JP7321939B2 (ja) | 2017-04-13 | 2023-08-07 | リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド | Ｉｌ３３及びｉｌ１ｒｌ１をコードする遺伝子にリスクアレルを有する患者の炎症性肺疾患の処置及び阻害 |
| JP7177446B2 (ja) | 2017-08-31 | 2022-11-24 | 田辺三菱製薬株式会社 | Ｉｌ－３３アンタゴニストを含む子宮内膜症治療剤 |
| US20200239562A1 (en) | 2017-10-09 | 2020-07-30 | Anaptysbio, Inc. | Anti-il-33 therapy for atopic dermatitis |
| JP7418337B2 (ja) | 2018-02-09 | 2024-01-19 | ジェネンテック， インコーポレイテッド | マスト細胞媒介性炎症性疾患の治療法及び診断法 |
| WO2019183639A1 (en) * | 2018-03-23 | 2019-09-26 | Anaptysbio, Inc. | Inhibition of allergic reaction to peanut allergen using an il-33 inhibitor |
| IL307286A (en) | 2018-04-11 | 2023-11-01 | Regeneron Pharma | Methods and preparations for quantification of IL-33 |
| TW202021983A (zh) | 2018-09-21 | 2020-06-16 | 美商安納普提斯生物公司 | 用於嗜伊紅性氣喘之抗il-33療法 |
| JP2022502367A (ja) | 2018-09-24 | 2022-01-11 | エアーピオ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | ＨＰＴＰ−β（ＶＥ−ＰＴＰ）およびＶＥＧＦを標的にする多特異性抗体 |
| JP2023500492A (ja) | 2019-11-04 | 2023-01-06 | メドイミューン・リミテッド | Ｉｌ－３３アンタゴニストの使用方法 |
| US20220363748A1 (en) | 2019-11-04 | 2022-11-17 | Medimmune Limited | Anti il-33 therapeutic agent for treating renal disorders |
| US20230338387A1 (en) | 2020-02-05 | 2023-10-26 | Nof Corporation | Agent For Treating Or Preventing Pancreatic Fistula |
| JP2023516497A (ja) | 2020-03-13 | 2023-04-19 | メドイミューン・リミテッド | Ｉｌ３３にリスクアレルを有する対象を治療するための治療方法 |
| WO2021183849A1 (en) | 2020-03-13 | 2021-09-16 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
| JP2023521061A (ja) | 2020-04-06 | 2023-05-23 | メドイミューン・リミテッド | Ｉｌ－３３軸結合アンタゴニストによる急性呼吸窮迫症候群の治療 |
| CN115551542A (zh) | 2020-05-11 | 2022-12-30 | 免疫医疗有限公司 | 抗il-33抗体的配制品 |
| US20210380721A1 (en) * | 2020-06-01 | 2021-12-09 | University Of Kentucky Research Foundation | Compounds and methods for use in connection with opioid use disorders |
| WO2022011037A2 (en) * | 2020-07-07 | 2022-01-13 | The General Hospital Corporation | Interleukin 33 (il-33) inhibition for treatment of cancer, fibrosis and inflammation |
| KR20220022226A (ko) * | 2020-08-18 | 2022-02-25 | 성균관대학교산학협력단 | Il-33 항체 또는 이의 항원 결합 단편 |
| CN114249825A (zh) * | 2020-09-25 | 2022-03-29 | 三生国健药业（上海）股份有限公司 | 结合人il-33的抗体、其制备方法和用途 |
| CN113603775B (zh) | 2021-09-03 | 2022-05-20 | 江苏荃信生物医药股份有限公司 | 抗人白介素-33单克隆抗体及其应用 |
| WO2023086807A1 (en) | 2021-11-10 | 2023-05-19 | Genentech, Inc. | Anti-interleukin-33 antibodies and uses thereof |
| TW202402790A (zh) | 2022-03-25 | 2024-01-16 | 英商梅迪繆思有限公司 | 減少呼吸系統感染之方法 |
| WO2024038185A1 (en) | 2022-08-19 | 2024-02-22 | Medimmune Limited | Method of selecting patients for treatment with an il-33 axis antagonist |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006085938A2 (en) * | 2004-06-17 | 2006-08-17 | Wyeth | Il-13 binding agents |
| WO2013063395A1 (en) * | 2011-10-27 | 2013-05-02 | Nkt Therapeutics Inc. | Humanized antibodies to inkt |
Family Cites Families (50)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4828981A (en) | 1983-08-24 | 1989-05-09 | Synbiotics Corporation | Immunoassays for determining Dirofilaria immitis infection using antiidiotype monoclonal antibody reagents |
| GB8601597D0 (en) | 1986-01-23 | 1986-02-26 | Wilson R H | Nucleotide sequences |
| AU650085B2 (en) | 1990-11-13 | 1994-06-09 | Immunex Corporation | Bifunctional selectable fusion genes |
| WO1994028143A1 (en) | 1993-05-21 | 1994-12-08 | Targeted Genetics Corporation | Bifunctional selectable fusion genes based on the cytosine deaminase (cd) gene |
| US5814618A (en) | 1993-06-14 | 1998-09-29 | Basf Aktiengesellschaft | Methods for regulating gene expression |
| US5464758A (en) | 1993-06-14 | 1995-11-07 | Gossen; Manfred | Tight control of gene expression in eucaryotic cells by tetracycline-responsive promoters |
| FR2814642B1 (fr) | 2000-10-03 | 2005-07-01 | Ass Pour Le Dev De La Rech En | Souris transgenique pour la recombinaison ciblee mediee par la cre-er modifiee |
| WO2003048731A2 (en) | 2001-12-03 | 2003-06-12 | Abgenix, Inc. | Antibody categorization based on binding characteristics |
| NZ549040A (en) | 2004-02-17 | 2009-07-31 | Schering Corp | Use for interleukin-33 (IL33) and the IL-33 receptor complex |
| EP2397498A3 (en) * | 2005-07-18 | 2013-11-27 | Amgen, Inc | Human anti-B7RP1 neutralizing antibodies |
| WO2007130627A2 (en) | 2006-05-04 | 2007-11-15 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Il-33 in the treatment and diagnosis of diseases and disorders |
| US7560530B1 (en) | 2006-07-20 | 2009-07-14 | Schering Corporation | IL-33 receptor |
| CN101512008B (zh) * | 2006-09-08 | 2015-04-01 | 艾伯维巴哈马有限公司 | 白介素-13结合蛋白 |
| WO2008103475A1 (en) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Anaptysbio, Inc. | Somatic hypermutation systems |
| WO2008132709A1 (en) | 2007-04-26 | 2008-11-06 | Provost, Fellows And Scholars Of The College Of The Holy And Undivided Trinity Of Queen Elizabeth, Near Dublin | Products for altering il-33 activity and methods therefor |
| WO2008144610A1 (en) | 2007-05-18 | 2008-11-27 | Medimmune, Llc | Il-33 in inflammatory disease |
| CN102164962B (zh) * | 2008-06-30 | 2014-05-28 | 诺福泰克公司 | 抗gd2抗体和方法及其相关应用 |
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| US20120263709A1 (en) | 2009-09-10 | 2012-10-18 | Schering Corporation | Use of il-33 antagonists to treat fibrotic diseases |
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| SG187867A1 (en) * | 2010-08-16 | 2013-03-28 | Amgen Inc | Antibodies that bind myostatin, compositions and methods |
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| CN105175542B (zh) | 2010-12-16 | 2018-12-18 | 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 | 与th2抑制相关的诊断和治疗 |
| WO2012103240A2 (en) | 2011-01-25 | 2012-08-02 | Eleven Biotherapeutics, Inc. | Receptor binding agents |
| FR2972006B1 (fr) | 2011-02-24 | 2016-03-25 | Centre Nat Rech Scient | Nouveaux fragments d'il-33 superactifs et leurs utilisations |
| SG11201401791WA (en) | 2011-10-24 | 2014-08-28 | Abbvie Inc | Immunobinders directed against sclerostin |
| US9260756B2 (en) | 2012-02-24 | 2016-02-16 | Children's Hospital Medical Center | Esophageal microRNA expression profiles in eosinophilic esophagitis |
| US9212227B2 (en) | 2012-04-30 | 2015-12-15 | Janssen Biotech, Inc. | ST2L antibody antagonists for the treatment of ST2L-mediated inflammatory pulmonary conditions |
| UY34813A (es) | 2012-05-18 | 2013-11-29 | Amgen Inc | Proteínas de unión a antígeno dirigidas contra el receptor st2 |
| JP2015528019A (ja) | 2012-07-31 | 2015-09-24 | ノバルティス アーゲー | セレラキシンを使用する炎症の処置 |
| US20150250808A1 (en) | 2012-10-15 | 2015-09-10 | Vojo P. Deretic | Treatment of autophagy-based disorders and related pharmaceutical compositions, diagnostic and screening assays and kits |
| WO2014090800A1 (en) | 2012-12-10 | 2014-06-19 | Vib Vzw | Novel interleukin-33 inhibitors |
| KR101780575B1 (ko) | 2013-02-14 | 2017-09-21 | 건국대학교 산학협력단 | 신규한 인터루킨-33 수용체와 결합 단백질 조성물 및 그 용도 |
| JO3532B1 (ar) * | 2013-03-13 | 2020-07-05 | Regeneron Pharma | الأجسام المضادة لمضاد انترلوكين-33 واستعمالاتها |
| WO2014152195A1 (en) | 2013-03-15 | 2014-09-25 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Il-33 antagonists and uses thereof |
| LT3033101T (lt) | 2013-08-12 | 2019-03-25 | Astrazeneca Ab | Astmos paūmejimo dažnio sumažinimo būdai naudojant benralizumabą |
| KR101567758B1 (ko) | 2013-10-17 | 2015-11-11 | 인하대학교 산학협력단 | 항-Siglec-8 항체 또는 항-Siglec-F 항체, 및 항-IL-33 항체를 포함하는 알러지 질환의 예방 또는 치료용 조성물 |
| CA2924873A1 (en) | 2013-10-23 | 2015-04-30 | Genentech, Inc. | Methods of diagnosing and treating eosinophilic disorders |
| MX2016008472A (es) | 2013-12-26 | 2016-10-28 | Mitsubishi Tanabe Pharma Corp | Anticuero monoclonal neutralizador de anti-il-33-humana. |
| EP3092253B1 (en) | 2014-01-10 | 2021-03-17 | AnaptysBio, Inc. | Antibodies directed against interleukin-33 (il-33) |
| WO2015143343A2 (en) | 2014-03-21 | 2015-09-24 | The Brigham And Women's Hospital, Inc. | Methods and compositions for treatment of immune-related diseases or disorders and/or therapy monitoring |
| GB201406608D0 (en) | 2014-04-12 | 2014-05-28 | Psioxus Therapeutics Ltd | Virus |
| WO2015164354A1 (en) | 2014-04-21 | 2015-10-29 | The Childen's Hospital Of Philadelphia | Compositions and methods for treating cytokine-related disorders |
| CR20170240A (es) | 2014-11-10 | 2018-04-03 | Genentech Inc | Anticuerpos anti-interleucina-33 y sus usos |
| EP3218515B1 (en) | 2014-11-10 | 2023-04-26 | F. Hoffmann-La Roche AG | Therapeutic and diagnostic methods for il-33-mediated disorders |
| AU2016226414B2 (en) | 2015-03-02 | 2021-09-09 | 180 Therapeutics Lp | Method of treating a localized fibrotic disorder using an IL-33 antagonist |
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| CA3000725A1 (en) | 2015-10-06 | 2017-04-13 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Biomarkers related to interleukin-33 (il-33)-mediated diseases and uses thereof |
| CA3011547A1 (en) | 2016-01-14 | 2017-07-20 | Anaptysbio, Inc. | Inhibition of allergic reaction using an il-33 inhibitor |
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Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2006085938A2 (en) * | 2004-06-17 | 2006-08-17 | Wyeth | Il-13 binding agents |
| WO2013063395A1 (en) * | 2011-10-27 | 2013-05-02 | Nkt Therapeutics Inc. | Humanized antibodies to inkt |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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