RU2649556C1 - Субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида для иммуноферментного анализа - Google Patents
Субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида для иммуноферментного анализа Download PDFInfo
- Publication number
- RU2649556C1 RU2649556C1 RU2017109337A RU2017109337A RU2649556C1 RU 2649556 C1 RU2649556 C1 RU 2649556C1 RU 2017109337 A RU2017109337 A RU 2017109337A RU 2017109337 A RU2017109337 A RU 2017109337A RU 2649556 C1 RU2649556 C1 RU 2649556C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- substrate solution
- tmb
- solution
- enzyme immunoassay
- peroxide
- Prior art date
Links
- 239000000758 substrate Substances 0.000 title claims abstract description 26
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title abstract description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title abstract description 8
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 title abstract description 5
- OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 4-(4-amino-3,5-dimethylphenyl)-2,6-dimethylaniline;hydrochloride Chemical compound Cl.CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 OBWSOTREAMFOCQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 title abstract 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 35
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 claims abstract description 10
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 claims abstract description 10
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 claims abstract description 9
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims abstract description 9
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims abstract description 6
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims abstract description 6
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims abstract description 6
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims abstract description 6
- 229920000858 Cyclodextrin Polymers 0.000 claims abstract description 4
- 239000001116 FEMA 4028 Substances 0.000 claims abstract description 4
- WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N beta-cyclodextrin Chemical compound OC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)CO)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1CO WHGYBXFWUBPSRW-FOUAGVGXSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000011175 beta-cyclodextrine Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 229960004853 betadex Drugs 0.000 claims abstract description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims abstract 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 claims description 8
- QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N Disodium Chemical class [Na][Na] QXNVGIXVLWOKEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- YDONNITUKPKTIG-UHFFFAOYSA-N [Nitrilotris(methylene)]trisphosphonic acid Chemical compound OP(O)(=O)CN(CP(O)(O)=O)CP(O)(O)=O YDONNITUKPKTIG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 claims description 3
- ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N trappsol cyclo Chemical compound CC(O)COC[C@H]([C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]2O[C@@H]([C@@H](O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O[C@H]3O[C@H](COCC(C)O)[C@H]([C@@H]([C@H]3O)O)O3)[C@H](O)[C@H]2O)COCC(O)C)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]3O[C@@H]1COCC(C)O ODLHGICHYURWBS-LKONHMLTSA-N 0.000 claims description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 claims 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 15
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 14
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 abstract description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 abstract description 3
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- QUVWVDCSALSVJM-UHFFFAOYSA-N [Na].[Na].N#CP(OC)(OC)=O Chemical compound [Na].[Na].N#CP(OC)(OC)=O QUVWVDCSALSVJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N urea hydrogen peroxide Chemical compound OO.NC(N)=O AQLJVWUFPCUVLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 2-aminoethanethiol;hydron;chloride Chemical compound Cl.NCCS OGMADIBCHLQMIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IBWLHILCVXHJGA-UHFFFAOYSA-N 2-methylbenzene-1,3-diol hydrate Chemical compound O.Cc1c(O)cccc1O IBWLHILCVXHJGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- ZWVMLYRJXORSEP-UHFFFAOYSA-N 1,2,6-Hexanetriol Chemical compound OCCCCC(O)CO ZWVMLYRJXORSEP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FJSKXQVRKZTKSI-UHFFFAOYSA-N 2,3-dimethylfuran Chemical compound CC=1C=COC=1C FJSKXQVRKZTKSI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- -1 Proclin 150 Chemical compound 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002265 electronic spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 150000005839 radical cations Chemical class 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/483—Physical analysis of biological material
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биохимии, а именно к использованию готового субстратного раствора для иммуноферментного анализа. Для этого используют стабильный водный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида и пероксида. следующего состава: 3,3',5,5'-тетраметилбензидин гидрохлорид - 0,35-0,40 г/л; пероксид водорода либо мочевины - 0,1-0,2 г/л; поливиниловый спирт - 1-2 г/л; гидроксипропилированный β-циклодекстрин - 2-3 г/л; маннитол - 30-60 г/л; динатриевая соль нитрилотриметилфосфоновой кислоты - 0,1-1,0 г/л; проклин 150 - 0,05 г/л в нитратном буфере при pH=3,7-3,8. Изобретение обеспечивает получение субстратного раствора для иммуноферментного анализа, отличающегося высокой активностью и высокой стабильностью при хранении. 2 табл., 7 пр.
Description
Настоящее изобретение относится к биохимии, а именно - к стабильному водному раствору 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида (ТМБ⋅2HCl) и пероксида - пероксида водорода либо пероксида мочевины, готовому к использованию в качестве субстратного раствора в иммуноферментном анализе.
Иммуноферментный анализ (ИФА) применяют для определения наличия антигенов, чаще - антител к антигенам возбудителей различных инфекций. В основе ИФА лежит иммунная реакция антигена с антителом. Присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по скорости ферментативной активности. Наибольшее распространение получил твердофазный гетерогенный иммунный анализ - ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). Анализ обычно проводят с использованием стандартных диагностических иммуноферментных наборов, основными компонентами которых являются полистирольные планшеты с иммобилизованными антителами или антигенами, конъюгаты антител или антигена с ферментом, субстраты ферментной метки. Во всех коммерческих тест-системах в качестве фермента используется пероксидаза хрена, а в качестве субстрата ферментативной реакции предложен в [Bos E.S., van der Doelen A.A., Van Rooy N., Schuurs A.H.W.M. // J. Immunoassay. - 1981. - V. 3-4. - P. 187-204] и наиболее часто применяется ТМБ. Продукт окисления ТМБ пероксидом водорода регистрируется фотометрически. Однако ТМБ в водном растворе пероксида плохо растворим и недостаточно стабилен. В связи с этим готовили свежий субстратный раствор непосредственно перед использованием, а именно смешиванием двух компонентов - раствора ТМБ из одного флакона и раствора пероксида водорода из другого флакона. Тем не менее, предпочтительно использование стабильного субстратного раствора, в состав которого входят и ТМБ, и пероксид. Это позволяет исключить стадию смешивания двух компонентов - ТМБ и пероксида - перед началом измерения ферментативной активности и использовать один и тот же набор в течение длительного времени.
В связи с тем, что ТМБ в воде нерастворим, его растворяют в органических растворителях (диметилсульфоксид, диметилформамид, спирты) или используют поверхностно-активные вещества.
Известен субстратный раствор, содержащий органические растворители [US Patent 5006461, заявлен 3 ноября 1989 г.], способ изготовления которого включает внесение ТМБ, растворенного в небольшом количестве диметилфурана, метанола или диметилсульфоксида, в нитратный буфер с добавкой поливинилпирролидона и пероксида водорода. Недостатком этой композиции является наличие в ее составе токсичного органического растворителя и недостаточная стабильность при хранении.
Известен [US Patent 5792618, заявлен 27 сентября 1996 г.] субстратный раствор для иммуноферментного анализа, который получают растворением ТМБ в диметилсульфоксиде, добавляют HCl, солюбилизируют в водном растворе гидроксипропилированного β-циклодекстрина. Добавки 1,2,6-гексантриола и этилендиаминтетрауксусной кислоты используют для стабилизации раствора к хранению, уксуснокислым натрием доводят рН до 4,28. Затем добавляют перекись водорода и изопропиловый спирт. Такой раствор может храниться до 18 месяцев при комнатной температуре. Недостатком этой композиции также является наличие в ее составе токсичного органического растворителя - диметилсульфоксида, а также недостаточная стабильность при хранении.
В качестве прототипа выбран субстратный раствор на чисто водной основе [Патент РФ №2268253, заявлен 28 сентября 2004 г] - композиция ТМБ гидрохлорида, пероксида мочевины, гидроксипропил-β-циклодекстрина, поливинилового спирта, проклина 150, гидрохлорида 2-меркаптоэтиламина и глицерина в цитратном буфере с рН 3,77, которая может дополнительно содержать моногидрат орцина. Гидрофильные комплексы включения ТМБ с гидроксипропил-β-циклодекстрином в водном растворе поливинилового спирта с добавкой глицерина создают устойчивую дисперсию, не склонную к расслоению. Гидрохлорид 2-меркаптоэтиламина и моногидрат орцина используют в качестве антиоксидантов, которые реагируют со свободными радикалами и таким образом предотвращают окисление ТМБ. Для предотвращения негативного влияния микрофлоры среды на стабильность препарата в качестве антибактериального средства добавляют проклин 150 в количестве 0,05 г/л, не оказывающем ингибирующего действия на пероксидазу. Использование этой композиции позволяет сохранять ТМБ в присутствии пероксида мочевины довольно длительное время и использовать ее в качестве субстратного раствора. Однако устойчивость композиции при хранении недостаточно высока - с течением времени активность субстратного раствора снижается.
Задача изобретения - создание устойчивого к длительному хранению водного раствора ТМБ и пероксида, не содержащего органических растворителей.
Поставленная задача решается композицией: гидрохлорид 3,3'5,5'-тетраметилбензидина (от 0,35 до 0,40 г/л), пероксид водорода либо мочевины (от 0,1 до 0,2 г/л), поливиниловый спирт (ПВС, от 1 до 2 г/л), гидроксипропилированный β-циклодекстрин (ЦД, от 2 до 3 г/л), маннитол (от 30 до 60 г/л), динатриевая соль нитрилотриметилфосфоновой кислоты (АФОН, от 0,1 до 1,0 г/л), проклин 150 (0,05 г/л) в среде цитратного буфера с рН от 3,7 до 3,8.
Согласно механизму окисления ТМБ [Кирейко А.В., Веселова И.А., Шеховцова Т.Н. // Биоорганическая химия. - 2006. - Т. 32. - №1. - С. 80-86] окисляется его основание, а не протонированная форма. Величина рКа перехода между основанием и протонированной формой составляет 3,25. При рН менее 2,5 ТМБ находится в виде хорошо растворимой в воде, но неактивной в процессе окисления протонированной формы. При рН более 4,0 ТМБ находится в форме нерастворимого в водной среде, но окисляющегося основания. В предлагаемой композиции оптимальными с точки зрения активности и растворимости ТМБ приняты согласованные значения концентрации ТМБ в пределах от 0,35 до 0,40 г/л и рН от 3,7 до 3,8.
Известно [Von Н. Gallati, I. Pracht. // J. Clin. Chem. Clin. Biochem. - 1985. - Vol. 23. - P. 453-460], что при концентрации пероксида менее 0,05 и более 0,2 г/л активность раствора снижается, концентрация пероксида в предлагаемой композиции (0,1-0,2 г/л) соответствует максимальной активности субстратного раствора. Концентрации ПВС, ЦЦ, маннитола и АФОН оптимизированы по устойчивости раствора к расслоению и антиоксидантному действию. Проклин 150 - консервант, в концентрации не более 0,05 г/л не оказывает ингибирующего действия на пероксидазу.
Предлагаемое изобретение иллюстрируется нижеприведенными примерами.
Примеры 1-6
Приготовление субстратного раствора.
В водном растворе цитратного буфера с рН 3,75 растворяют с разным соотношением концентраций (примеры №1-6, Таблица 1) следующие компоненты: ПВС, ЦД, маннитол, АФОН, проклин 150, ТМБ⋅2HCl. Композицию выдерживают при комнатной температуре не менее суток для образования комплекса включения ТМБ с ЦД. Вносят пероксид, перемешивают и убирают в холодильник. Через сутки субстратный раствор готов к испытаниям.
Оценка активности субстратного раствора
Продуктом одноэлектронного окисления ТМБ в ферментативной реакции является катион-радикал (Схема 1 [Кирейко А.В., Веселова И.А., Шеховцова Т.Н. // Биоорганическая химия. - 2006. - Т. 32. - №1. - С. 80-86.]), который находится в равновесии с бинарным комплексом, имеющим синюю окраску. Активность субстратного раствора оценивали спектрофотометрически по поглощению этого комплекса на длине волны максимума в электронном спектре при 655 нм.
Схема 1 - Схема окисления ТМБ
К 3 мл субстратного раствора прибавляют 0,2 мл свежеприготовленного и разбавленного до 1 мг в 100 л воды раствора пероксидазы. Через 15 мин инкубации измеряют плотность раствора при 655 нм.
Активность субстратных растворов по примерам №1-6 представлена в таблице 1.
Пример 7
Композиция отличается от приведенной в примере 1 тем, что вместо 0,13 г/л пероксида водорода используется 0,15 г/л пероксида мочевины. Активность субстратного раствора D655 нм составила 2,35.
Пример 8 (прототип)
Субстратный раствор по патенту РФ №2268253 следующего состава: ТМБ⋅2HCl (0,38 г/л), ПВС (1,28 г/л), ЦД (2,56 г/л), глицерин (62,5 г/л), гидрохлорид 2-меркаптоэтаноламина (0,0073 г/л), моногидраторцина (0,007 г/л), пероксид мочевины (0,157 г/л).
Активность субстратного раствора D655 нм составила 2,1.
Из данных примеров 1-7 следует, что субстратные растворы по предлагаемому техническому решению по активности не уступают, а в некоторых случаях превосходят прототип.
Сохраняемость субстратных растворов по примерам 1 и 8 оценивали по остаточной активности при хранении при температуре 37°С. Результаты испытаний на сохраняемость приведены в таблице 2.
Испытания на сохраняемость (таблица 2) демонстрируют существенно более высокую стабильность субстратных растворов по предлагаемому техническому решению по сравнению с прототипом. Снижение активности композиции (1) на 20% в течение 10 недель хранения при температуре 37°С соответствует гарантированному сроку хранения от 3 до 4 лет при температуре от 2°С до 8°С, рекомендованной зарубежными производителями субстратных растворов.
Claims (2)
- Водный субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида и пероксида для иммуноферментного анализа, содержащий поливиниловый спирт, гидроксипропил-β-циклодекстрин, проклин 150 и стабилизаторы для хранения, отличающийся тем, что в качестве стабилизаторов используют маннитол и динатриевую соль нитрилотриметилфосфоновой кислоты при следующем содержании компонентов:
-
3,3',5,5'-тетраметилбензидин гидрохлорид 0,35-0,40 г/л пероксид водорода либо мочевины 0,1-0,2 г/л поливиниловый спирт 1-2 г/л гидроксипропилированный β-циклодекстрин 2-3 г/л маннитол 30-60 г/л; динатриевая соль нитрилотриметилфосфоновой кислоты 0,1-1,0 г/л проклин 150 0,05 г/л в среде цитратного буфера с рН 3,7-3,8
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017109337A RU2649556C1 (ru) | 2017-03-21 | 2017-03-21 | Субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида для иммуноферментного анализа |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017109337A RU2649556C1 (ru) | 2017-03-21 | 2017-03-21 | Субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида для иммуноферментного анализа |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2649556C1 true RU2649556C1 (ru) | 2018-04-03 |
Family
ID=61867225
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017109337A RU2649556C1 (ru) | 2017-03-21 | 2017-03-21 | Субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида для иммуноферментного анализа |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2649556C1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110376376A (zh) * | 2019-07-06 | 2019-10-25 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 一种tmb二合一底物 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5792618A (en) * | 1996-09-27 | 1998-08-11 | Moss, Inc. | Liquid single-component substrates for detection or assay of horseradish peroxidase |
| RU2268253C1 (ru) * | 2004-09-28 | 2006-01-20 | Наталья Александровна Шамарова | Композиция для хранения водного раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида (тмб) и пероксида мочевины |
-
2017
- 2017-03-21 RU RU2017109337A patent/RU2649556C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5792618A (en) * | 1996-09-27 | 1998-08-11 | Moss, Inc. | Liquid single-component substrates for detection or assay of horseradish peroxidase |
| RU2268253C1 (ru) * | 2004-09-28 | 2006-01-20 | Наталья Александровна Шамарова | Композиция для хранения водного раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида (тмб) и пероксида мочевины |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| МЕНДЫБАЕВА А.М., Опыт получения иммунной сыворотки к конъюгату, Байтурсыновские чтения, Кустанайский ГУ, 2016, стр. 197-199, найдено 21.10.2017 в Интернете [on-line] на сайте http://group-global.org/sites/default/files/publications/%D0%91%D0%A73.pdf. Современная лабораторная диагностика, 2016, 3, стр. 43, найдено 21.10.2017 в Интернете [on-line] на сайте http://www.farosplus.ru/labdiag/labdiag_20/ld20.pdf. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110376376A (zh) * | 2019-07-06 | 2019-10-25 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 一种tmb二合一底物 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2928649B2 (ja) | 過酸化活性物質の検定のための組成物、用具及び方法 | |
| WO2016206654A2 (zh) | 一种碱性磷酸酶的酶促化学发光底物 | |
| US11385220B2 (en) | Methods for measuring oxidative stress in human body fluids | |
| RU2649556C1 (ru) | Субстратный раствор 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида для иммуноферментного анализа | |
| WO2005088305A1 (ja) | 被酸化性呈色試薬の安定化方法 | |
| KR20100089845A (ko) | 헴 단백질의 안정화방법 및 보존용액 | |
| JPH0566546B2 (ru) | ||
| US9879250B2 (en) | Protein-stabilizing agent and protein-stabilizing method | |
| WO2015183931A1 (en) | Stabilized chemiluminescent system | |
| US10859504B2 (en) | Degradable cationic surfactants and use thereof in enhancing chemiluminescence | |
| JP4503724B2 (ja) | ホタルルシフェリンの安定化方法 | |
| CN116125063A (zh) | 一种吖啶酯标记物稳定剂及其制备方法 | |
| CN114397460B (zh) | 生物标记物的保存液以及生物标记物试剂 | |
| JP7253219B2 (ja) | 難水溶性物質の可溶化剤 | |
| CN113219169B (zh) | 生物检测用封闭剂及其制备方法、包被板及应用该包被板的试剂盒 | |
| US6852503B1 (en) | Compositions and methods for utilizing mixed substrate solutions of luminols and dioxetanes | |
| RU2268253C1 (ru) | Композиция для хранения водного раствора 3,3',5,5'-тетраметилбензидина гидрохлорида (тмб) и пероксида мочевины | |
| JP3827465B2 (ja) | 改良された化学発光試薬 | |
| JP4379644B2 (ja) | ホタルルシフェリンの安定化方法 | |
| CN109307720A (zh) | 一种组合物和复合校准品及其应用 | |
| JP2016538535A (ja) | ホルムアルデヒド試験試薬 | |
| CN107602695B (zh) | 荧光抗体保存液、试剂盒及其用途和荧光保存抗体方法 | |
| JP2010091398A (ja) | 安定なナトリウム利尿ペプチド組成物 | |
| JPH05209878A (ja) | 過酸化活性物質測定用組成物及びそれを用いた試験片 | |
| JP7232475B2 (ja) | ロイコ型色原体の安定化方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210322 |