RU2644254C2 - Вакцина mycoplasma hyopneumoniae - Google Patents
Вакцина mycoplasma hyopneumoniae Download PDFInfo
- Publication number
- RU2644254C2 RU2644254C2 RU2014140107A RU2014140107A RU2644254C2 RU 2644254 C2 RU2644254 C2 RU 2644254C2 RU 2014140107 A RU2014140107 A RU 2014140107A RU 2014140107 A RU2014140107 A RU 2014140107A RU 2644254 C2 RU2644254 C2 RU 2644254C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hyo
- composition
- pcv2
- antigen
- adjuvant
- Prior art date
Links
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 title claims abstract description 30
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title description 116
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 199
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 186
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 186
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 175
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims abstract description 23
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims abstract description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 20
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims abstract description 20
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 92
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 56
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 44
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 40
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 35
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 34
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 claims description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 15
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims description 11
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 9
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 claims description 6
- 230000008774 maternal effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 4
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 4
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 claims description 3
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 3
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 claims description 3
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 145
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 69
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 64
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 64
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 61
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 55
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 42
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 40
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 31
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 29
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 28
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 28
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 27
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 26
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 24
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 22
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 21
- 241001533384 Circovirus Species 0.000 description 20
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 19
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 18
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 18
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 18
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 18
- 101100382437 Porcine circovirus 2 Cap gene Proteins 0.000 description 17
- 230000003253 viricidal effect Effects 0.000 description 16
- 101710159752 Poly(3-hydroxyalkanoate) polymerase subunit PhaE Proteins 0.000 description 15
- 101710130262 Probable Vpr-like protein Proteins 0.000 description 15
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 14
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 14
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 13
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 13
- 230000004044 response Effects 0.000 description 13
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 12
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 12
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 12
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 11
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 11
- 229940001442 combination vaccine Drugs 0.000 description 11
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 11
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 11
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 11
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 11
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 10
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 10
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 101710167800 Capsid assembly scaffolding protein Proteins 0.000 description 9
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 101710113540 ORF2 protein Proteins 0.000 description 9
- 101710090523 Putative movement protein Proteins 0.000 description 9
- 206010058874 Viraemia Diseases 0.000 description 9
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 9
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 9
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 9
- 102100037364 Craniofacial development protein 1 Human genes 0.000 description 8
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 8
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 8
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 8
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 description 8
- 241000202347 Porcine circovirus Species 0.000 description 7
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 7
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 7
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 7
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 7
- 239000012562 protein A resin Substances 0.000 description 7
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 6
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 6
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 6
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 6
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 6
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 6
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 6
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 6
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 6
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 5
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 5
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 5
- 244000144980 herd Species 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 5
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 2-bromoethanamine;hydron;bromide Chemical compound [Br-].[NH3+]CCBr WJAXXWSZNSFVNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 4
- 241000710788 Lelystad virus Species 0.000 description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 4
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 4
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 4
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 4
- 229920001400 block copolymer Polymers 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 4
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 4
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 4
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 4
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 4
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 4
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical group [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N Aziridine Chemical compound C1CN1 NOWKCMXCCJGMRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 3
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 3
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N [(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-3,5-dihydroxy-6-(hy Chemical compound O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]([C@@H]1O)O[C@H]1CC[C@]2(C)[C@H]3CC=C4[C@@]([C@@]3(CC[C@H]2[C@@]1(C=O)C)C)(C)CC(O)[C@]1(CCC(CC14)(C)C)C(=O)O[C@H]1[C@@H]([C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O[C@H]4[C@@H]([C@@H](O[C@H]5[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O5)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O UZQJVUCHXGYFLQ-AYDHOLPZSA-N 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N beta-propiolactone Chemical compound O=C1CCO1 VEZXCJBBBCKRPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 3
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000009295 crossflow filtration Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 231100000516 lung damage Toxicity 0.000 description 3
- 210000003563 lymphoid tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000012516 mab select resin Substances 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 229940031346 monovalent vaccine Drugs 0.000 description 3
- JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N n-Triacontane Natural products CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC JXTPJDDICSTXJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 description 3
- 229920001983 poloxamer Polymers 0.000 description 3
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 3
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 description 3
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 3
- 229960000380 propiolactone Drugs 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 3
- 229940032094 squalane Drugs 0.000 description 3
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 3
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000012134 supernatant fraction Substances 0.000 description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 3
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 3
- QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N (1-carboxy-2-sulfanylethyl)azanium;chloride;hydrate Chemical compound O.Cl.SCC(N)C(O)=O QIJRTFXNRTXDIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 2
- 101000621943 Acholeplasma phage L2 Probable integrase/recombinase Proteins 0.000 description 2
- 101000618348 Allochromatium vinosum (strain ATCC 17899 / DSM 180 / NBRC 103801 / NCIMB 10441 / D) Uncharacterized protein Alvin_0065 Proteins 0.000 description 2
- 101000781117 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 12.4 kDa protein in CTL-LEF2 intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 101000708323 Azospirillum brasilense Uncharacterized 28.8 kDa protein in nifR3-like 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000770311 Azotobacter chroococcum mcd 1 Uncharacterized 19.8 kDa protein in nifW 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000748761 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized MFS-type transporter YcxA Proteins 0.000 description 2
- 101000765620 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxP Proteins 0.000 description 2
- 101000916134 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YqxJ Proteins 0.000 description 2
- 101000754349 Bordetella pertussis (strain Tohama I / ATCC BAA-589 / NCTC 13251) UPF0065 protein BP0148 Proteins 0.000 description 2
- 101000827633 Caldicellulosiruptor sp. (strain Rt8B.4) Uncharacterized 23.9 kDa protein in xynA 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000947628 Claviceps purpurea Uncharacterized 11.8 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101000686796 Clostridium perfringens Replication protein Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 description 2
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 2
- 241000186810 Erysipelothrix rhusiopathiae Species 0.000 description 2
- 101000788129 Escherichia coli Uncharacterized protein in sul1 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000788370 Escherichia phage P2 Uncharacterized 12.9 kDa protein in GpA 3'region Proteins 0.000 description 2
- 208000005577 Gastroenteritis Diseases 0.000 description 2
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 2
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 2
- 101000787096 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in gldA 3'region Proteins 0.000 description 2
- 241000606807 Glaesserella parasuis Species 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000976889 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 19.2 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 2
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 2
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 2
- UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N Iron oxide Chemical compound [Fe]=O UQSXHKLRYXJYBZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000827627 Klebsiella pneumoniae Putative low molecular weight protein-tyrosine-phosphatase Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 241000589902 Leptospira Species 0.000 description 2
- 101001130841 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF5 Proteins 0.000 description 2
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 2
- 241001148549 Mycoplasma hyosynoviae Species 0.000 description 2
- 101710087110 ORF6 protein Proteins 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 description 2
- 101000974028 Rhizobium leguminosarum bv. viciae (strain 3841) Putative cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 description 2
- 101000756519 Rhodobacter capsulatus (strain ATCC BAA-309 / NBRC 16581 / SB1003) Uncharacterized protein RCAP_rcc00048 Proteins 0.000 description 2
- 101000948219 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 11.5 kDa protein in thcD 3'region Proteins 0.000 description 2
- 241001138501 Salmonella enterica Species 0.000 description 2
- 241001354013 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis Species 0.000 description 2
- 241000191982 Staphylococcus hyicus Species 0.000 description 2
- 229930182558 Sterol Natural products 0.000 description 2
- 101000936711 Streptococcus gordonii Accessory secretory protein Asp4 Proteins 0.000 description 2
- 101000929863 Streptomyces cinnamonensis Monensin polyketide synthase putative ketoacyl reductase Proteins 0.000 description 2
- 101000788468 Streptomyces coelicolor Uncharacterized protein in mprR 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000845085 Streptomyces violaceoruber Granaticin polyketide synthase putative ketoacyl reductase 1 Proteins 0.000 description 2
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000711771 Thiocystis violacea Uncharacterized 76.5 kDa protein in phbC 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101710110895 Uncharacterized 7.3 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 101710095001 Uncharacterized protein in nifU 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000711318 Vibrio alginolyticus Uncharacterized 11.6 kDa protein in scrR 3'region Proteins 0.000 description 2
- 229940024545 aluminum hydroxide Drugs 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000012863 analytical testing Methods 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 description 2
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 2
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 2
- -1 but not limited to Proteins 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 229960002433 cysteine Drugs 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960001305 cysteine hydrochloride Drugs 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 235000003869 genetically modified organism Nutrition 0.000 description 2
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000036541 health Effects 0.000 description 2
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 description 2
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 239000002198 insoluble material Substances 0.000 description 2
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 2
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 2
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 2
- QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N octafluoropropane Chemical compound FC(F)(F)C(F)(F)C(F)(F)F QYSGYZVSCZSLHT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 2
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 2
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229920002503 polyoxyethylene-polyoxypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 2
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 2
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000011012 sanitization Methods 0.000 description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 description 2
- 238000001881 scanning electron acoustic microscopy Methods 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 2
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 2
- 150000003432 sterols Chemical class 0.000 description 2
- 235000003702 sterols Nutrition 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- 241000701447 unidentified baculovirus Species 0.000 description 2
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 2
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N (2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(1-aminoethyl)oxan-2-yl]oxy-2-hydroxycyclohexyl]oxy-5-methyl-4-(methylamino)oxane-3,5-diol;(2r,3r,4r,5r)-2-[(1s,2s,3r,4s,6r)-4,6-diamino-3-[(2r,3r,6s)-3-amino-6-(aminomethyl)oxan-2-yl]o Chemical compound OS(O)(=O)=O.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@@H](CN)O2)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1C[C@@](O)(C)[C@H](NC)[C@@H](O)[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@@H](CC[C@H](O2)C(C)N)N)[C@@H](N)C[C@H]1N.O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N RDEIXVOBVLKYNT-VQBXQJRRSA-N 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- QWVRTSZDKPRPDF-UHFFFAOYSA-N 5-(piperidin-1-ylmethyl)-3-pyridin-3-yl-5,6-dihydro-2h-1,2,4-oxadiazine Chemical compound C1CCCCN1CC(N=1)CONC=1C1=CC=CN=C1 QWVRTSZDKPRPDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010042708 Acetylmuramyl-Alanyl-Isoglutamine Proteins 0.000 description 1
- NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N Acrylic acid Chemical compound OC(=O)C=C NIXOWILDQLNWCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 description 1
- 201000004813 Bronchopneumonia Diseases 0.000 description 1
- 206010006895 Cachexia Diseases 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 241000193403 Clostridium Species 0.000 description 1
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 1
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 description 1
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 1
- 235000019750 Crude protein Nutrition 0.000 description 1
- XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N Cyanamide Chemical compound NC#N XZMCDFZZKTWFGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102100038664 Fibrinogen-like protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 208000036119 Frailty Diseases 0.000 description 1
- 206010017533 Fungal infection Diseases 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000606831 Histophilus somni Species 0.000 description 1
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 1
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 1
- 206010023126 Jaundice Diseases 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 241001469654 Lawsonia <weevil> Species 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N Lincomycin Natural products CN1CC(CCC)CC1C(=O)NC(C(C)O)C1C(O)C(O)C(O)C(SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010027256 Meningitis streptococcal Diseases 0.000 description 1
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 1
- 208000001572 Mycoplasma Pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 241000202899 Mycoplasma flocculare Species 0.000 description 1
- 241000202938 Mycoplasma hyorhinis Species 0.000 description 1
- 201000008235 Mycoplasma pneumoniae pneumonia Diseases 0.000 description 1
- 208000031888 Mycoses Diseases 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 1
- 241001631646 Papillomaviridae Species 0.000 description 1
- 241000606860 Pasteurella Species 0.000 description 1
- 241000364057 Peoria Species 0.000 description 1
- RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N Poloxamer Chemical compound C1CO1.CC1CO1 RVGRUAULSDPKGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 206010037742 Rabies Diseases 0.000 description 1
- 208000035415 Reinfection Diseases 0.000 description 1
- 208000004756 Respiratory Insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 206010038669 Respiratory arrest Diseases 0.000 description 1
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 1
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 1
- 241000702670 Rotavirus Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 206010039438 Salmonella Infections Diseases 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N Sulphur dioxide Chemical compound O=S=O RAHZWNYVWXNFOC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 229940024546 aluminum hydroxide gel Drugs 0.000 description 1
- SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K aluminum;trihydroxide;hydrate Chemical compound O.[OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] SMYKVLBUSSNXMV-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 210000001132 alveolar macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical class N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 206010003549 asthenia Diseases 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012752 auxiliary agent Substances 0.000 description 1
- 229950010555 avridine Drugs 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940031416 bivalent vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000000621 bronchi Anatomy 0.000 description 1
- 210000003123 bronchiole Anatomy 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 229960001631 carbomer Drugs 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000007969 cellular immunity Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001886 ciliary effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000001784 detoxification Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000000378 dietary effect Effects 0.000 description 1
- 239000012897 dilution medium Substances 0.000 description 1
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 1
- 230000000459 effect on growth Effects 0.000 description 1
- 208000026500 emaciation Diseases 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000003349 gelling agent Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 108010037896 heparin-binding hemagglutinin Proteins 0.000 description 1
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003350 kerosene Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229940059904 light mineral oil Drugs 0.000 description 1
- OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N lincomycin Chemical compound CN1C[C@H](CCC)C[C@H]1C(=O)N[C@H]([C@@H](C)O)[C@@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](SC)O1 OJMMVQQUTAEWLP-KIDUDLJLSA-N 0.000 description 1
- 229960005287 lincomycin Drugs 0.000 description 1
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical compound OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 201000006509 pleuropneumonia Diseases 0.000 description 1
- 229960000502 poloxamer Drugs 0.000 description 1
- 229920001308 poly(aminoacid) Polymers 0.000 description 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 231100000272 reduced body weight Toxicity 0.000 description 1
- 201000004193 respiratory failure Diseases 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 206010039447 salmonellosis Diseases 0.000 description 1
- HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N schardinger α-dextrin Chemical class O1C(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC(C(O)C2O)C(CO)OC2OC(C(C2O)O)C(CO)OC2OC2C(O)C(O)C1OC2CO HFHDHCJBZVLPGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000000527 sonication Methods 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012536 storage buffer Substances 0.000 description 1
- 201000001739 streptococcal meningitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 150000003457 sulfones Chemical class 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- UURAUHCOJAIIRQ-QGLSALSOSA-N tiamulin Chemical compound CCN(CC)CCSCC(=O)O[C@@H]1C[C@@](C)(C=C)[C@@H](O)[C@H](C)[C@@]23CC[C@@H](C)[C@]1(C)[C@@H]2C(=O)CC3 UURAUHCOJAIIRQ-QGLSALSOSA-N 0.000 description 1
- 229960004885 tiamulin Drugs 0.000 description 1
- 210000003437 trachea Anatomy 0.000 description 1
- IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N trimethoprim Chemical compound COC1=C(OC)C(OC)=CC(CC=2C(=NC(N)=NC=2)N)=C1 IEDVJHCEMCRBQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001082 trimethoprim Drugs 0.000 description 1
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0241—Mollicutes, e.g. Mycoplasma, Erysipelothrix
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/0208—Specific bacteria not otherwise provided for
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/02—Bacterial antigens
- A61K39/116—Polyvalent bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/295—Polyvalent viral antigens; Mixtures of viral and bacterial antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/30—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Mycoplasmatales, e.g. Pleuropneumonia-like organisms [PPLO]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/36—Adaptation or attenuation of cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/521—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5252—Virus inactivated (killed)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
- A61K2039/552—Veterinary vaccine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55566—Emulsions, e.g. Freund's adjuvant, MF59
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10021—Viruses as such, e.g. new isolates, mutants or their genomic sequences
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/10011—Circoviridae
- C12N2750/10061—Methods of inactivation or attenuation
- C12N2750/10063—Methods of inactivation or attenuation by chemical treatment
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2770/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses positive-sense
- C12N2770/00011—Details
- C12N2770/10011—Arteriviridae
- C12N2770/10034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Изобретения касаются иммуногенной композиции, способа иммунизации, набора для осуществления такой иммунизации и способа получения иммуногенной композиции. Композиция содержит эффективное количество растворимой части цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo); где растворимая часть цельноклеточного препарата M.hyo содержит M.hyo-специфические растворимые протеиновые антигены и является отделенной от нерастворимого клеточного материала, в сущности, является свободной как от (i) lg G, так и от (ii) иммунокомплексов, состоящих из антигена, присоединенного к иммуноглобулину. Изобретения могут быть использованы для индуцирования иммунного ответа у субъекта против заболевания, вызванного M.hyo. 4 н. и 9 з.п. ф-лы, 10 ил., 14 табл., 13 пр.
Description
Отрасль изобретения
Данное изобретение касается Mycoplasma hyopneumoniae (М. hyopneumoniae или M.hyo). Более конкретно, изобретение касается растворимой части цельноклеточного лекарственного препарата M.hyo, и ее применения в вакцине для защиты свиней от энзоотической пневмонии.
Предпосылки создания изобретения
Энзоотическая пневмония у свиней, которую также называют микоплазменная пневмония, вызывается M.hyo. Заболевание является хроническим не смертельным заболеванием, которое поражает свиней в любом возрасте. Инфицированные свиньи проявляют только незначительные симптомы кашля и лихорадки, однако заболевание имеет значительное экономическое влияние в результате снижения эффективности питания и уменьшения прироста массы тела. Энзоотическая пневмония передается от свинье к свинье через носовые ходы организмами, которые переносятся воздухом, выделяющимся из легких пораженных свиней. За первичным инфицированием M.hyo может следовать вторичное инфицирование другими видами микоплазм (Mycoplasma hyorhinis и Mycoplasma flocculare), а также другими бактериальными патогенами.
M.hyo является маленьким прокариотическим микроорганизмом, способным к свободному существованию, хотя его часто находят в ассоциации с эукариотическими клетками, в силу того, что он имеет абсолютные требования для экзогенного стерина и жирных кислот. Эти требования, как правило, вызывают необходимость роста в среде, которая содержит сыворотку. M.hyo связывается с клеточной мембраной, а не клеточной стенкой.
Физическая ассоциация микоплазм с поверхностью клетки хозяина является основой развития и присутствия энзоотической пневмонии. M.hyo поражает дыхательные пути свиней, колонизируя трахею, бронхи и бронхиолы. Микоплазма продуцирует статический фактор ресничек, который вызывает повреждение реснитчатого эпителия дыхательных путей и остановку дыхания. Со временем, реснички дегенерируют, что делает свиней склонным к инфицированию вторичным патогеном. Характерные поражения от пурпурных к серым участкам уплотнений наблюдаются у инфицированных животных. Исследование забитых животных обнаружило поражение в 30-80% свиней. Результаты из 37 стад в 13 штатах указали на то, что 99% стад имели свиней с пневмоническими поражениями, типичными для энзоотической пневмонии. Поэтому существует значительная потребность в эффективных превентивных и лечебных средствах.
Антибиотики, такие как тиамулин, триметоприм, тетрациклины и линкомицин имеют некоторые преимущества, однако являются дорогими и нуждаются в пролонгированном применении. Кроме этого, антибиотики не устраняют распространение или повторное инфицирование M.hyo. Предотвращение путем поддерживания стад свободных от патогена иногда является возможным, однако часто случается повторное появление M.hyo. В результате серьезных экономических последствий пневмонии свиней, разрабатываются вакцины против M.hyo. Вакцины, которые включают композиции организмов микоплазм, выращенных в среде, которая содержит сыворотку, были представлены на рынке, однако растет обеспокоенность относительно обратных эффектов, вызванных компонентами сыворотки (такими как иммунокомплексы или неиммуногенные специфические протеины), которые присутствуют в материале для иммунизации. Другие попытки обеспечить вакцины М. hyo были успешными, однако заболевание остается широко распространенным.
M.hyo и цирковирус свиней типа 2 (PCV2) является двумя наиболее распространенными патогенами, с которыми сталкиваются в индустрии свиноводства. Свинья, инфицированная PCV2, проявляет синдром, который обычно называют полисистемным синдромом истощения после отбирания (PMWS). PMWS клинически характеризуется истощением, бледностью кожи, хилостью, дыхательной недостаточностью, диареей и желтухой. Кроме PMWS, PCV2 связана с несколькими другими инфекциями, включая ложное бешенство, репродуктивный и респираторный синдром свиней (PRRS), болезнь Гласера, стрептококковый менингит, сальмонеллез, коли-бактериоз после отбирания, диетический гепатоз и гнойная бронхопневмония. M.hyo связана с энзоотической пневмонией и считается одним из главных кофакторов в развитии заболевания, которое сопровождает цирковирус свиней (PCVAD).
Репродуктивный и респираторный синдром свиней (PRRS) вызывается артеривирусом, имеющим чрезвычайную афинность к макрофагам, особенно, которые находятся в легких (альвеолярные макрофаги). Эти макрофаги глотают и удаляют бактерии и вирусы, которые попали в организм, однако не в случае вируса PRRS (PRRSV). В случае вируса PRRS, он размножается внутри макрофага, образовывая еще большее количество вируса, и убивает макрофаги. Когда PRRSV попадает в стадо, он присутствует и остается активным бесконечно. До 40% макрофагов уничтожаются, что позволяет бактериям и другим вирусам пролиферировать и вредить. Типичным примером этого является заметное ухудшение симптомов энзоотической пневмонии у более взрослых/старых свиней, при инфицировании вирусом PRRS. Больше чем половина PRRS-негативних свиней возраста отбирания заражаются перед попаданием на рынок.
Поэтому потребностью является улучшенная вакцина против микоплазм у свиней. Желательно, вакцина M.hyo является совместимой с другими свиными антигенами, такими как антигены PCV2 и вируса PRRS, независимо от того, или их вводят параллельно как отдельные вакцины, или объединяют в готовую к применению вакцину. Желательно, обеспечить готовую к применению комбинированную вакцину PCV2/M.hyo в одном флаконе с одной дозой.
Резюме изобретения
Данное изобретение касается иммуногенной композиции, которая включает растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo), где растворимая часть композиции М. hyo в сущности является свободной как от (i) Ig G, так и (ii) иммунокомплексов, состоящих из антигена, присоединенного к иммуноглобулину. В одном аспекте, растворимую часть цельноклеточного препарата M.hyo обрабатывали протеином-А или протеином-G перед добавлением к иммуногенной композиции.
В одном варианте воплощения, растворимая часть препарата M.hyo включает, по меньшей мере, один антиген протеина M.hyo. В другом варианте воплощения, растворимая часть препарата M.hyo включает два или больше антигена протеина M.hyo.
В других вариантах воплощения, иммуногенная композиция данного изобретения также включает, по меньшей мере, один дополнительный антиген. В одном варианте воплощения, по меньшей мере, один дополнительный антиген защищает от микроорганизма, который может вызывать заболевание у свиней.
В одном варианте воплощения, микроорганизм включает бактерии, вирусы или простейших. В другом варианте воплощения, микроорганизм выбирают из, однако не ограничиваются следующими: цирковирус свиней тип 2 (PCV2), вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV), парвовирус свиней (PPV), Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcum suis, Staphylococcus hyicus, Actinobacilllus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis, Erysipelothrix rhusiopathiae, Mycoplama hyorhinis, Mycoplasma hyosynoviae, лептоспиры, Lawsonia intracellulars, вирус свиного гриппа (SIV), антиген Escherichia coli, Brachyspira hyodysenteriae, респираторный коронавирус свиней, вирус эпизоотической диареи свиней (PED), ротавирус, вирус гепатита (TTV), цитомегаловирус свиней, энтеровирусы свиней, вирус энцефаломиокардита, патоген, который вызывает болезнь Ауески, классическая свиная лихорадка (CSF) и патоген, который вызывает трансмиссивный гастроэнтерит свиней, или их комбинации.
В некоторых вариантах воплощения, по меньшей мере, один дополнительный антиген представлен антигеном цирковируса свиней тип 2 (PCV2), антигеном вируса PRRS или их комбинацией. В одном варианте воплощения, композиция данного изобретения вызывает защитный иммунный ответ у свиньи против как M.hyo, так и PCV2. В другом варианте воплощения, композиция данного изобретения вызывает защитный иммунный ответ у свиньи против M.hyo, PCV2 и вируса PRRS.
В одном варианте воплощения, антиген PCV2 находится в форме гибридного цирковируса тип-1-тип 2, где гибридный вирус, включает инактивированный рекомбинантный цирковирус свиней типа 1, экспрессирующий ORF2 протеин цирковируса свиней типа 2. В другом варианте воплощения, антиген PCV2 находится в форме рекомбинантного протеина ORF2. В другом варианте воплощения, рекомбинантный протеин ORF2 экспрессируется бакуловирусним вектором.
В некоторых вариантах воплощения, композиция данного изобретения также включает адъювант. В одном варианте воплощения, адъювант выбирают из, однако не ограничиваются следующими: адъювант масло в воде, полимерный и водный адъювант, адъювант вода в масле, адъювант гидроксид алюминия, адъювант витамин Е и их комбинации. В другом варианте воплощения, композиция данного изобретения также включает фармацевтически приемлемый носитель.
В определенных вариантах воплощения, композиция данного изобретения вызывает защитный иммунный ответ против M.hyo при введении однократной дозы. В других вариантах воплощения, композиция данного изобретения вызывает защитный иммунный ответ против M.hyo, и как минимум одного другого микроорганизма, который может вызвать заболевание у свиньи, при введении однократной дозы. В других вариантах воплощения, композиция данного изобретения вызывает защитный иммунный ответ против M.hyo и как минимум одного другого микроорганизма, который может вызвать заболевание у свиньи, при введении двух доз.
Данное изобретение также касается способа иммунизации свиньи против M.hyo. Этот способ включает введение свинье иммуногенной композиции, которая содержит растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo), где растворимая часть препарата М. hyo в сущности является свободной как от (i) Ig G, так и (ii) иммунокомплексов, состоящих из антигена, присоединенного к иммуноглобулину. В одном варианте воплощения, растворимая часть цельноклеточного препарата M.hyo введенной композиции включает как минимум один антиген протеина М. hyo.
В одном варианте воплощения способа данного изобретения, поливалентную композицию вводят внутримышечно, интрадермально, трансдермально или подкожно. В другом варианте воплощения способа данного изобретения, композицию вводят с однократным введением. В другом варианте воплощения способа данного изобретения, композицию вводят с двукратным введением.
В другом варианте воплощения способа данного изобретения, композицию вводят вместе с как минимум одним дополнительным антигеном, который защищает против микроорганизма, который может вызвать заболевание у свиньи, например, такого как описанные выше. Такие другие антигены могут вводиться параллельно с композицией M.hyo (то есть, в виде отдельных вакцин), или объединяться в готовую к использованию вакцину
В следующем варианте воплощения, композицию вводят свиньям, которые имеют материнские антитела против M.hyo. В следующем варианте воплощения, композицию вводят свиньям, которые имеют материнские антитела против M.hyo и как минимум одного другого микроорганизма, который может вызвать заболевание у свиньи.
В одном варианте воплощения, композицию вводят свиньям возрастом 3 недели или старшим.
Данное изобретение также касается набора. Набор включает флакон, который содержит иммуногенную композицию. Иммуногенная композиция включает растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo), где растворимая часть препарата M.hyo в сущности является свободной как от (i) Ig G, так и (ii) иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин. В одном варианте воплощения, набор так же включает инструкцию с информацией относительно введения свинье иммуногенной композиции.
Данное изобретение также касается способа получения иммуногенной композиции данного изобретения. Этот способ включает i) культивирование M.hyo в пригодной среде в течение периода в диапазоне 18-144 часа; ii) потом инактивацию культуры М. hyo; iii) сбор жидкости инактивированной культуры, где жидкость инактивированной культуры содержит цельноклеточный препарат M.hyo, включающий как растворимую жидкую фракцию, так и нерастворимый клеточный материал; iv) отделение растворимой жидкой фракции от нерастворимого клеточного материала; v) существенное удаление как Ig G, так и иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин из отделенной растворимой жидкой фракции.
Короткое описание чертежей
Фигура 1 является диаграммой, которая показывает эффективность моновалентных вакцин M.hyo, полученных из антигенов M.hyo из разных обработок (Т02-Т10 описаны в Примере 3) против плацебо (Т01). Результаты представлены как % LS значений поражений легких.
Фигура 2 является диаграммой, которая показывает результаты эффективности антигена PCV2 (ELISA PCV2 антигена) вакцин M.hyo в комбинации с убитым гибридным вирусом PCV тип1-тип2. Гибридный вирус включали в композиции в начальной концентрации 1,6≤RP. Состояние каждого образца выражали как относительную эффективность (RP).
Фигура 3 является диаграммой, которая показывает результаты виремии PCV2 (количественная ПЦР PCV2), наблюдаемые на композициях вакцин PCV/M.hyo, которые используют разные платформы адъювантов.
Фигура 4 является диаграммой, которая показывает серологические результаты ELISA антитела PCV2 (S/P), наблюдаемые на композициях вакцин PCV/M.hyo, которые используют разные платформы адъювантов, на 1-й, 20-й и 42-й дни стимуляции.
Фигура 5 является диаграммой, которая показывает фекальные выделения PCV2, полученные в группах обработки Т02-Т04, описанные в Примере 7, против плацебо (Т01). Результаты выражены как PCV2 ДНК копии/мл.
Фигура 6 является диаграммой, которая показывает назальные выделения PCV2, полученные в группах обработки Т02-Т04, описанных в Примере 7, против плацебо (Т01). Результаты выражены как PCV2 ДНК копии/мл.
Фигуры 7 (А и В) представлены графиками, показывающими результаты теста на интерферон-гамма (IFN-γ), который измеряет PCV2-специфический клеточно-опосредованный (КОИ) иммунный ответ. Результаты после-вакцинации/перед-заражением представлены на Фигуре 7А, и результаты после-вакцинации/после-заражения представлены на Фигуре 7В. Стимулирование 5×106 клеток считалось значительным.
Фигура 8 показывает эффективность M.hyo экспериментальных композиций вакцины PCV2/M.hyo в SP-масло. Показатели легких для композиций M.hyo с обработками Т02-Т08 против плацебо (Т01) изображены графически на Фигуре 8А. Таблица на Фигуре 8В показывает контраст обработок Т02-Т08 по сравнению с плацебо.
Фигура 9 является блок-схемой, которая показывает один вариант воплощения процесса производства, использованного для получения PCV2-совместимого M.hyo антигена, обработанного Протеином-А.
Короткое описание последовательностей
SEQ ID NO: 1 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая кодирует р46 штамма Р-5722 M.hyo;
SEQ ID NO: 2 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует р46 штамма Р-5722 M.hyo; SEQ ID NO: 3 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая кодирует р97 штамма Р-5722 M.hyo;
SEQ ID NO: 4 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует р97 штамма Р-5722 M.hyo; SEQ ID NO: 5 является одним вариантом воплощения геномной последовательности, которая кодирует гибридный вирус PCV1-2;
SEQ ID NO: 6 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая соответствует ORF2 цирковируса свиней;
SEQ ID NO. 7 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует полипептиду ORF2 цирковируса свиней; SEQ ID NO: 8 является одним вариантом воплощения геномной последовательности, которая кодирует гибридный вирус PCV1-2;
SEQ ID NO: 9 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая соответствует ORF2 цирковируса свиней;
SEQ ID NO: 10 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует полипептиду ORF2 цирковируса свиней;
SEQ ID NO: 11 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует полипептиду ORF2 цирковируса свиней;
SEQ ID NO: 12 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 11;
SEQ ID NO: 13 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует полипептиду ORF2 цирковируса свиней;
SEQ ID NO: 14 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая кодирует аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 13;
SEQ ID NO: 15 является одним вариантом воплощения аминокислотной последовательности, которая соответствует полипептиду ORF2 цирковируса свиней;
SEQ ID NO: 16 является одним вариантом воплощения геномной последовательности невирулентной формы изолята североамериканского вируса PRRS, обозначенного как Р129; и
SEQ ID NO: 17 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая соответствует ORF2 - ORF5 изолята вируса PRRS, обозначенного как ISU-55.
SEQ ID NO: 18 является одним вариантом воплощения нуклеотидной последовательности, которая соответствует ORF6 и ORF7 изолята вируса PRRS, обозначенного как ISU-55.
Детальное описание изобретения
Данное изобретение касается иммуногенной композиции, которая содержит растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (М. hyo), где растворимая часть препарата М. hyo в сущности является свободной как от (i) Ig G, так и (ii) иммунокомплексов, состоящих из антигена, присоединенного к иммуноглобулину. Заявители неожиданно обнаружили, что нерастворимая фракция цельноклеточного препарата M.hyo является неиммуногенной. Напротив, растворимый препарат M.hyo, свободный от Ig G, является иммуногенным и может быть эффективно комбинирован с антигенами другого патогена, такими как PCV2, без аналитической или иммунологической интерференции между антигенами. Это делает растворимый препарат M.hyo эффективной платформой для поливалентных вакцин этого изобретения, включая готовые к использованию препараты в одном флаконе. Заявители также неожиданно обнаружили, что удаление иммуноглобулина и нерастворимых остатков клеток из препарата M.hyo улучшает безопасность иммуногенной композиции.
В описании и формуле использование единичной формы включает также и множественную форму, пока контекст четко не указывает на обратное. Например, термин "антиген протеина" включает множественное число антигенов протеина, включая их смеси.
Как использовано в данном документе, термин "содержит" значит, что композиции и способы включают перечисленные элементы, однако не исключает другие элементы.
Как определено в данном документе, растворимая часть цельноклеточного препарата M.hyo касается растворимой жидкой фракции цельноклеточного препарата M.hyo после отделения нерастворимого материала и существенного удаления Ig G и антиген-связанных иммунокомплексов. Растворимая часть M.hyo может альтернативно означать фракцию супернатанта, культуральный супернатант и т.д. Она включает растворимые протеины, экспрессированные M.hyo (антиген протеина M.hyo), отделенные от или изолированные от нерастворимых протеинов, целые бактерии и другой нерастворимый клеточный материал M.hyo, с использованием обычных способов, таких как центрифугирование, фильтрация или осаждение. Кроме содержания М.hyo-специфических растворимых протеинов, растворимая часть цельноклеточного препарата M.hyo также включает гетерологические протеины, такие как те, которые содержатся в культуральной среде, использованной для ферментации M.hyo.
Термин "антиген" касается соединения, композиции или иммуногенного субстрата, который может стимулировать выработку антител или Т-клеточного ответа, или обоих у животного, включая композиции, которые вводят инъекцией или абсорбируются животными. Иммунный ответ может генерироваться в ответ на всю молекулу или ее часть (например, эпитоп или гаптен).
Как определено в данном документе, "иммуногенная или иммунологическая композиция", касается композиции, которая содержит, по меньшей мере, один антиген, который вызывает иммунологический ответ клеточного и/или антитело-опосредованного происхождения на композицию или вакцину у хозяина.
Термин "иммунный ответ" как использовано в данном документе, касается ответа, вызванного у животного. Иммунный ответ может касаться клеточного иммунитета (КОИ); гуморального иммунитета или может включать оба. Данное изобретение также включает ответ, ограниченный частью иммунной системы. Обычно, "иммунологический ответ" включает, однако не ограничивается одним или несколькими следующими эффектами: выработка или активация антител, В-клеток, хелперов Т-клеток, супрессоров Т-клеток и/или цитотоксических Т-клеток, и/или yd Т-клеток, направленных специфически на антиген или антигены, включенные в композицию или вакцину. Желательно, хозяин будет проявлять терапевтический или защитный иммунологический ответ, так что в результате будет улучшена резистентность к новой инфекции и/или уменьшена клиническая тяжесть болезни. Такая защита будет продемонстрирована уменьшением или отсутствием симптомов, которые в норме имеются у инфицированного хозяина, быстрым временем возобновления и/или снижением вирусного титра у инфицированного хозяина.
Как использовано в данном документе, термин "иммуногенность" означает способность вызывать иммунный ответ у животного хозяина против антигена или антигенов. Этот иммунный ответ формирует основу защитного иммунитета, вызванного вакциной против специфического инфекционного организма.
"Адъювант" как использовано в данном документе, означает композицию, которая состоит из одного или больше соединений, которые усиливают иммунный ответ на антиген(ы). Механизм действия адъюванта полностью не известен. Считается, что некоторые адъюванты усиливают иммунный ответ путем медленного высвобождения антигена, в то время как другие адъюванты является сильно иммуногенными сами по себе и действуют синергично.
Как использовано в данном документе, термин "поливалентная" означает вакцину, которая содержит больше чем один антиген одного вида (то есть, разные изоляты Mycoplasma hyopneumoniae), разных видов (то есть, изоляты как Pasteurella hemolytica, так и Pasteurella multocida), или вакцину, которая содержит антигены разного рода (например, вакцина, которая содержит антигены Pasteurella multocida, Salmonella, Escherichia coli, Haemophilus somnus и Clostridium).
Термин "свинья" или "поросенок" как использовано в данном документе, означает животное свиного происхождения, в то время как "свиноматка" касается свиньи женского рода репродуктивного возраста. "Молодая свинья" касается не супороносной свиньи женского рода.
Как использовано в данном документе, термин "вирулентный" означает изолят, который сохраняет способность к инфицированию животного хозяина.
"Инактивированная вакцина" означает композицию вакцины, которая содержит инфекционный организм или патоген, который больше не способен к репликации или росту. Патоген может быть бактериального, вирусного, протозойного или грибкового происхождения. Инактивация может осуществляться различными способами, включая замораживание-оттаивание, химическую обработку (например, обработку тимерозалом или формалином), обработку ультразвуком, облучение, нагревание или любой другой способ, который способен предотвратить репликацию или рост организма, при этом поддерживая его иммуногенность.
Термин "вариант" как использовано в данном документе, касается полипептида или последовательности нуклеиновой кислоты, которая кодирует полипептид, который имеет одну или больше консервативных аминокислотных вариаций или других второстепенных модификаций, так что соответствующий полипептид имеет в сущности эквивалентную функцию по сравнению с диким типом полипептида.
"Консервативная вариация" означает замену аминокислотного остатка другим биологически подобным остатком, или замену нуклеотида в последовательности нуклеиновой кислоты, так что аминокислотный остаток, который кодируется, не изменяется, или является другим биологически подобным остатком. Примеры консервативных вариаций включают замещение одного гидрофобного остатка, такого как изолейцин, валин, лейцин или метионин, на другой гидрофобный остаток, или замещение одного полярного остатка, например, замещение аргинина на лизин, глутаминовой кислоты на аспарагиновую кислоту, или глутамина на аспарагин, и т.д. Термин "консервативная вариация" также включает применение замещенной аминокислоты вместо незамещенной исходной аминокислоты, при условии, что антитела, вызванные против замещенного полипептида, также иммунореагируют с незамещенным полипептидом.
Как использовано в данном документе, термины "фармацевтически приемлемый носитель" и "фармацевтически приемлемый наполнитель" является взаимозаменяемыми и касаются жидкого наполнителя, который содержит антигены вакцины, которые можно вводить хозяину без побочных эффектов. Пригодные известные в отрасли фармацевтически приемлемые носители включают, однако не ограничиваются следующими: стерильная вода, солевой раствор, глюкоза, декстроза или забуференные растворы. Носители могут включать вспомогательные агенты, включая, однако не ограничиваясь следующими: разбавители, стабилизаторы (то есть, сахара и аминокислоты), консерванты, смачиватели, эмульгаторы, pH буферные агенты, добавки, которые улучшают вязкость, красители и т.д.
Как использовано в данном документе, термин "композиция вакцины" включает по меньшей мере, один антиген или иммуноген в фармацетивчно приемлемом наполнителе, пригодном для вызывания иммунного ответа у хозяина. Композиции вакцины могут быть введены в дозировках и с помощью способов хорошо известных специалистам в отрасли медицины или ветеринарии, принимая во внимание такие факторы как возраст, пол, масса, вид и состояние животного реципиента, и путь введения. Путь введения может быть чрезкожный, введение в слизистую (например, оральное, назальное, анальное, влагалищное) или парентеральное (интрадермальное, трансдермальное, внутримышечное, подкожное, внутривенное или интраперитонеальное). Композиции вакцины могут быть введены отдельно, или вместе или последовательно с другими обработками или терапиями. Формы введения могут включать суспензии, сиропы или эликсиры, и препараты для парентерального, подкожного, интрадермального, внутримышечного или внутривенного введения (например, инъективное введение), такие как стерильные суспензии или эмульсии. Композиции вакцины могут быть введены как спрей или подмешаны к еде и/или воде, или доставлены в смеси с пригодным носителем, растворителем или эксципиентом, таким как стерильная вода, солевой физраствор, глюкоза, и т.д. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как смачиватели или эмульгаторы, pH буферные агенты, адъюванты, гелеобразователи или добавки, которые улучшают вязкость, консерванты, ароматизаторы, красители, и т.д., в зависимости от пути введения и желаемого препарата. Стандартные фармацевтические пособия, такие как "Remington's Pharmaceutical Sciences", 1990 могут приниматься во внимание при приготовлении пригодных препаратов, избегая ненужных экспериментов.
"Североамериканский вирус PRRS" означает любой вирус PRRS с генетическими характеристиками, связанными с изолятом североамериканского вируса PRRS, таким как, однако не ограничиваясь вирусом PRRS, впервые изолированным в США в начале 1990-х (смотреть, например, Collins, J. Е., et al., 1992, J. Vet. Diagn. Invest. 4:117-126); изолятом североамериканского вируса PRRS MN-1b (Kwang, J. et al., 1994, J. Vet. Diagn. Invest. 6:293-296); штаммом вируса PRRS Quebec LAF-exp91 (Mardassi, H. et al., 1995, Arch. Virol. 140:1405-1418); и изолятом североамериканского вируса PRRS VR 2385 (Meng, X.-J et al., 1994, J. Gen. Virol. 75:1795-1801). Дополнительные примеры штаммов североамериканского вируса PRRS описаны в данном документе. Генетические характеристики касаются геномного сходства нуклеотидной последовательности и сходства аминокислотной последовательности штаммов североамериканского вируса PRRS. Штаммы китайского вируса PRRS обычно имеют приблизительно 80-93% сходства нуклеотидной последовательности с североамериканскими штаммами.
"Европейский вирус PRRS" касается любого штамма вируса PRRS с генетическими характеристиками, связанными с вирусом PRRS впервые изолированным в Европе приблизительно в 1991 (смотреть, например, Wensvoort, G., et al., 1991, Vet. Q. 13:121-130). "Европейский вирус PRRS" также иногда в отрасли называют "вирусом Lelystad". Примеры штаммов Европейского вируса PRRS описаны в данном документе.
Генетически модифицированный вирус является "аттенуированным", если он является менее вирулентным, чем его немодифицированный родительский штамм. Штамм является "менее вирулентным", если он показывает статистически значимое уменьшение одного или больше параметров, которые определяют тяжесть болезни. Такие параметры могут включать уровень виремии, лихорадку, тяжесть респираторного расстройства, тяжесть репродуктивных симптомов или количество или тяжесть поражений легких, и т.д.
"Инфекционный клон" являются изолированным или клонированным геномом агента заболевания (например, вируса), который может быть специфически и преднамеренно модифицирован в лаборатории, и потом использован для возобновления живого генетически модифицированного организма. Живой генетически модифицированный вирус, полученный из инфекционного клона, может быть применен в живой вирусной вакцине. Альтернативно, вакцины с инактивированным вирусом могут быть получены путем обработки живого вируса, полученного из инфекционного клона, инактивирующими агентами, такими как формалин или гидрофобные растворители, кислоты, и т.д., облучением ультрафиолетом или Х-лучами, нагреванием, и т.д.
Все имеющиеся на данное время вакцины M.hyo и комбинированные вакцины M.hyo получены из убитых цельноклеточных препаратов микоплазм (бактерины). Напротив, данное изобретение применяет растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo) для комбинирования с антигенами PCV2 и PRRS, где растворимая часть препарата M.hyo в сущности является свободной как от (i) Ig G, так и (ii) иммунокомплексов, состоящих из антигена, присоединенного к иммуноглобулину.
M.hyo имеет абсолютные требования к экзогенному стерину и жирным кислотам. Эти требования обычно являются необходимыми для роста M.hyo в среде, которая содержит сыворотку, такую как свиная сыворотка. Отделение нерастворимого материала от растворимой части цельноклеточного препарата M.hyo (например, центрифугированием, фильтрацией или осаждением) не удаляет свиной Ig G или иммунные комплексы. В одном варианте воплощения данного изобретения, растворимая часть M.hyo обрабатывается протеином-А или протеином-G для значительного удаления Ig G и иммунных комплексов, которые содержатся в культуральном супернатанте. В этом варианте воплощения, понятно, что обработка протеином А осуществляется после ферментации M.hyo. Она в данном документе альтернативно называется даунстрим обработка протеином А. В другом варианте воплощения, может быть применена апстрим обработка ростовой среды протеином А (то есть, перед ферментацией M.hyo). Протеин А связывается из Fc частью Ig G. Протеин G связывается преимущественно из Fc частью Ig G, однако также может связываться и с Fab участком. В отрасли известны способы очистки/удаления общего Ig G из неочищенной смеси протеинов, такой как культуральный супернатант ткани, сыворотка и свободная жидкость брюшной полости.
В некоторых вариантах воплощения, растворимая часть препарата M.hyo включает по меньшей мере, один антиген протеина M.hyo. В других вариантах воплощения, растворимая часть препарата M.hyo включает два или больше антигена протеина M.hyo.
В одном варианте воплощения, фракция супернатанта M.hyo включает один или больше следующих специфических антигенных протеинов M.hyo: протеины M.hyo приблизительно молекулярной массы 46 кД (р46), 64 кД (р64) и 97 кД (р97). В другом варианте воплощения, фракция супернатанта включает по меньшей мере р46, р64 и р97 антигенные протеины M.hyo. Протеин M.hyo приблизительно 64 кД (р64) альтернативно называется в данном документе р65 поверхностный антиген M.hyo, описанный Kim et al. [Infect. Immun. 58(8):2637-2643 (1990)], а также в патенте США №5,788,962.
Futo et al. описали клонирование и характеристику поверхностного протеина M.hyo с массой 46 кД, который может быть применен в композициях данного изобретения [J. Bact 177: 1915-1917 (1995)]. В одном варианте воплощения, M.hyo культуральный супернатант включает р46, чьи соответствующие нуклеотидные и аминокислотные последовательности штамма Р-5722 показаны в SEQ ID NO: 1 и 2, соответственно. Также считается, что варианты таких последовательностей р46 могут быть применены в композициях данного изобретения, как описано ниже.
Zhang et al. описали и охарактеризовали адгезин протеин р97 из M.hyo [Infect. Immun. 63: 1013-1019, 1995]. Кроме этого, King et al. описали протеин массой 124 кД, который называется Mhp1 из штамма Р-5722 M.hyo, и представленные данные предусматривают, что Mhp1 и р97 является одинаковыми протеинами [Vaccine 15:25-35 (1997)]. Такие протеины р97 могут быть применены в композициях этого изобретения. В одном варианте воплощения, культуральный супернатант M.hyo включает р97, чьи соответствующие нуклеотидные и аминокислотные последовательности штамма Р-5722 показаны в SEQ ID NO: 3 и 4, соответственно. Также считается, что варианты таких последовательностей могут быть применены в композициях данного изобретения, как описано ниже.
M.hyo культуральный супернатант также может включать специфические антигенные протеины M.hyo такие как, однако не ограничиваясь, протеинами с молекулярной массой приблизительно 41 кД (р41), 42 кД (р42), 89 кД (р89) и 65 кД (р65). Смотреть, Okada et al., 2000, J. Vet. Med. В 47:527-533 и Kim et al., 1990, Infect. Immun. 58(8):2637-2643. Кроме этого, M.hyo культуральный супернатант может содержать специфические антигенные протеины M.hyo с молекулярной массой приблизительно 102 кД (р102) и 216 кД (р216). Смотреть патенты США №6,162,435 и 7,419,806 Minnion et al.
Любой штамм M.hyo может быть использован в качестве исходного материала для получения растворимой части препарата композиций M.hyo данного изобретения. Приемлемые штаммы M.hyo могут быть получены из коммерческих или академических источников, включая депозитарии, такие как Культуральная Коллекция Американского Типа (АТСС) (Manassas, Va.) и Культуральная Коллекция NRRL (Agricultural Research Service, U.S. Department of Agriculture, Peoria, III.). Только АТСС приводит шесть следующих штаммов M.hyo для продажи: M.hyo АТСС 25095, M.hyo АТСС 25617, M.hyo АТСС 25934, M.hyo АТСС 27714, M.hyo АТСС 27715 и M.hyo АТСС 25934D. Желаемый штамм M.hyo для применения в вариантах воплощения этого изобретения идентифицировано как штамм Р-5722-3, АТСС #55052, депонированный 30.05.1990, в соответствии с правилами доступности патентного ведомства США. Учитывая широкую распространенность болезни, штаммы также могут быть получены путем возобновления M.hyo из секретов легких или тканей свиней, инфицированных известными штаммами, которые вызывают атипическую пневмонию у свиней.
Специалист в отрасли понимает, что варианты последовательностей M.hyo могут быть применены в композициях данного изобретения. Такие варианты могут отличаться где-то на 10-20% идентичности последовательности и все еще сохранять антигенные характеристики, которые делают их пригодными для иммуногенных композиций. Желательно, варианты M.hyo имеют по меньшей мере 80%, желательно по меньшей мере 85%, более желательно по меньшей мере 90%, еще более желательно по меньшей мере 95% идентичности последовательности с непроцессированной геномной последовательностью штамма дикого типа M.hyo. Антигенные характеристики иммунологической композиции могут быть, например, оценены в экспериментах заражения, как показано в Примерах. Более того, антигенная характеристика модифицированного антигена M.hyo еще сохраняется, когда модифицированный антиген предоставляет по меньшей мере 70%, желательно 80%, более желательно 90% защитного иммунитета, по сравнению с протеином дикого типа M.hyo.
В одном варианте воплощения, растворимый р46 антиген M.hyo является включенным в композициях изобретения в конечной концентрации от приблизительно 1,5 мкг/мл до приблизительно 10 мкг/мл, желательно от приблизительно 2 мкг/мл до приблизительно 6 мкг/мл. Указано, что р46 является протеином, использованным для теста на активность M.hyo (смотреть секцию Примеры ниже). В другом варианте воплощения, антиген M.hyo может быть включенным в композициях в конечной концентрации от приблизительно 5,5% до приблизительно 35% супернатанта обработанной протеином-А культуры M.hyo.
Растворимый препарат M.hyo данного изобретения является как безопасным, так и эффективным против M.hyo, и является пригодным для одноразового введения. Кроме этого, заявители неожиданно обнаружили, что растворимый препарат M.hyo может быть эффективно комбинирован с антигенами другого патогена, включая PCV2, без иммунологической интерференции антигенов. Это делает растворимый препарат M.hyo эффективной платформой для поливалентных вакцин, включая комбинированную вакцину PCV2/M.hyo этого изобретения. PCV2 антиген может быть введен одновременно с композицией M.hyo (то есть, как две отдельных одиночных вакцины), однако желательно растворимый препарат M.hyo объединяют с антигеном PCV2 в готовую к использованию жидкую композицию.
В одном варианте воплощения, иммуногенные композиции PCV2/M.hyo данного изобретения включают, по меньшей мере, один дополнительный антиген. В одном варианте воплощения, по меньшей мере, один дополнительный антиген защищает от микроорганизма, который может вызывать заболевание у свиней.
В некоторых вариантах воплощения, по меньшей мере, один дополнительный антиген защищает от бактерий, вирусов или простейших, которые могут вызывать заболевание у свиней. Примеры таких микроорганизмов включают, однако не ограничиваются следующими: цирковирус свиней тип 2 (PCV2), вирус репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRSV), парвовирус свиней (PPV), Haemophilus parasuis, Pasteurella multocida, Streptococcum suis, Staphylococcus hyicus, Actinobacilllus pleuropneumoniae, Bordetella bronchiseptica, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis, Erysipelothrix rhusiopathiae, Mycoplama hyorhinis, Mycoplasma hyosynoviae, лептоспиры, Lawsonia intracellulars, вирус свиного гриппа (SIV), антиген Escherichia coli, Brachyspira hyodysenteriae, респираторный коронавирус свиней, вирус эпизоотической диареи свиней (PED), ротавирус, вирус гепатита (TTV), цитомегаловирус свиней, энтеровирусы свиней, вирус энцефаломиокардита, патоген, который вызывает болезнь Ауески, классическая свиная лихорадка (CSF) и патоген, который вызывает трансмиссивный гастроэнтерит свиней, или их комбинации.
В одном варианте воплощения, иммуногенная композиция данного изобретения включает комбинацию как минимум одного растворимого антигена M.hyo (например, два или больше) и антигена PCV2. В другом варианте воплощения, композиция вызывает защитный иммунный ответ у свиньи против как M.hyo, так и PCV2.
В одном варианте воплощения, комбинированная вакцина PCV2/M.hyo данного изобретения обеспечивается как готовая к использованию вакцина в одном флаконе. Такая готовая к использованию комбинированная вакцина не нуждается в смешивании отдельных вакцин, таким образом, не имеет риска загрязнения или дополнительных рабочих расходов, связанных со смешиванием, и не имеет потребность в использовании смеси в течение нескольких часов. Также, комбинированная вакцина PCV2/M.hyo в одном флаконе на половину уменьшает расходы и место для хранения в рефрижераторе. Более того, одноразовое введение исключает роботу, связанную с введением второй дозы животному. Указано, что хотя в данное время существуют комбинированные вакцины PCV2/M.hyo, они поставляются в виде готовой к использованию вакцины с двумя дозами (Circumvent®PCVM) или вакцины в 2-х флаконах с одной дозой, которая требует одновременного введения отдельных вакцин (наприклад, Ingelvac CircoFLEX® и Ingeivac MycoFLEX®). Желательно, комбинация PCV2/M.hyo данного изобретения является совместимой с другими антигенами, такими як антиген вируса PRRS, так что все антигены могут быть введены с одной дозой.
В некоторых вариантах воплощения, антигенный компонент PCV2 комбинированной вакцины PCV2/M.hyo находится в форме цирковируса гибридного типа-1-типа 2. Гибридный вирус включает инактивированный рекомбинантный цирковирус свиней типа 1, экспрессирующий ORF2 протеин цирковируса свиней типа 2. Гибридные цирковирусы свиней и способы их получения описаны в WO 03/049703 А2, а также в патентах США 7,279,166 и 7,575,752, включенных в данный документ с помощью ссылок.
В одном варианте воплощения, непроцессированная последовательность ДНК генома гибридного вируса PCV1-2 соответствует SEQ ID NO: 5 или ее вариантам, как описано ниже. В другом варианте воплощения, иммуногенный ORF2 капсидный ген гибридного вируса PCV1-2 соответствует SEQ ID NO: 6. В следующем варианте воплощения, аминокислотная последовательность иммуногенного ORF2 протеина, которая экспрессируется гибридным вирусом PCV1-2, соответствует SEQ ID NO: 7.
В одном варианте воплощения, непроцессированная последовательность ДНК генома гибридного вируса PCV1-2 соответствует SEQ ID NO: 8. В одном варианте воплощения, иммуногенный ORF2 капсидный ген гибридного вируса PCV1-2 соответствует SEQ ID NO: 9. В следующем варианте воплощения, аминокислотная последовательность иммуногенного ORF2 протеина, которая экспрессируется гибридным вирусом PCV1-2 соответствует SEQ ID NO: 10.
Однако, ДНК ORF2 PCV2 и протеин гибридного вируса PCV1-2 не ограничены вышеописанными последовательностями, ввиду того, что ДНК ORF2 PCV2 и протеин является высоко консервативным доменом изолятов PCV2.
В некоторых вариантах воплощения, антигенный компонент PCV2 комбинированной вакцины M.hyo/PCV2/PRRS находится в форме рекомбинантного протеина ORF2. В одном варианте воплощения, рекомбинантный протеин ORF2 экспрессируется бакуловирусным вектором. Альтернативно, могут быть использованы другие известны векторы экспрессии, такие как, однако не ограничиваясь, парапокс векторами.
В одном варианте воплощения, рекомбинантный протеин ORF2 PCV2 имеет последовательность SEQ ID NO: 11, которая кодируется SEQ ID NO: 12 (номер доступа в банке генов AF086834). В другом варианте воплощения, рекомбинантный протеин ORF2 имеет последовательность SEQ ID NO: 13, которая кодируется SEQ ID NO: 14. В другом варианте воплощения, рекомбинантный протеин ORF2 соответствует SEQ ID NO: 15. В другом варианте воплощения, рекомбинантный протеин PCV2 ORF2 соответствует SEQ ID NO: 7. В следующем варианте воплощения, рекомбинантный протеин PCV2 ORF2 соответствует SEQ ID NO: 10.
Однако, дано изобретение не ограниченно определенной ДНК ORF2 и вышеописанными последовательностями протеина. Ввиду того, что ДНК ORF2 PCV2 и протеин является высоко консервативным доменом изолятов PCV2, любой ORF2 PCV2 должен быть эффективным в качестве источника ДНК ORF2 PCV2 и/или полипептида, использованных в гибридном вирусе PCV1-2 или в рекомбинантном протеине PCV2.
Примером пригодного PCV2 изолята, из которого может происходить ДНК ORF2 PCV2 и последовательности протеина, является PCV2 изолят номер 40895 (депонируемый в АТСС 07,12,2001 и имеет АТСС обозначения патентного депозита РТА-3914). Геномная (нуклеотидна) последовательность изолята PCV2 номер 40895 является доступной под номером доступа в банке генов AF264042. Другие примеры пригодных PCV2 изолятов, из которых могут происходить ДНК ORF2 PCV2 и последовательности протеина, включают, однако не ограничиваются следующими: Imp.999, Imp.1010-Stoon, Imp.1011-48121, и Imp.1011-48285. Номера доступа в банке генов геномных последовательностей, которые отвечают этим PCV2 изолятам, включают AF055391, AF055392, AF055393 и AF055394, соответственно.
В некоторых формах, иммуногенные части протеина ORF2 PCV2 использованы в качестве антигенного компонента в композиции. Например, усеченные и/или замещены формы или фрагменты протеина ORF2 PCV2 могут быть применены в композициях данного изобретения.
Специалист в отрасли понимает, что варианты последовательностей PCV2 могут быть применены в композициях данного изобретения. Такие варианты могут отличаться на приблизительно 10-20% идентичности последовательности и все же сохранять антигенные характеристики, которые делают их пригодными для иммуногенных композиций. Желательно, PCV2 варианты имеют по меньшей мере 80%, желательно по меньшей мере 85%, более желательно по меньшей мере 90%, еще более желательно по меньшей мере 95% идентичности последовательности с непроцессированной геномною последовательностью дикого типа изолята PCV2. Антигенные характеристики иммунологической композиции могут быть, например, оценены по эксперименту заражения, приведенному в секции Примеры. Более того, антигенная характеристика модифицированного антигена PCV2 все еще сохраняется, когда модифицированный антиген вызывает по меньшей мере 70%, желательно 80%, более желательно 90% защитного иммунитета по сравнению с дикими типом протеина ORF2 PCV2.
Антигенный компонент PCV2 обеспечивается в иммуногенной композиции на уровне включения антигена, эффективном для вызывания желаемого иммунного ответа, а именно, снижение заболеваемости или уменьшение тяжести клинических признаков, после инфекции PCV2.
В одном варианте воплощения, гибридный вирус PCV1-2 включен в композициях изобретения на уровне по меньшей мере 1,0≤RP≤5,0, где RP является единицей относительной активности, определенной с помощью количественного анализа антигена ELISA (тест на активность in vitro) по сравнению с контрольной вакциной. В другом варианте воплощения, гибридный вирус PCV1-2 включен в композициях изобретения в конечной концентрации от приблизительно 0,5% до приблизительно 5% 20-раз (20Х) концентрированной массы PCV1-2 антигена.
В другом варианте воплощения, рекомбинантный протеин ORF2 PCV2 включен в композициях изобретения на уровне по меньшей мере 0,2 мкг антиген/мл конечной иммуногенной композиции (мкг/мл). В следующем варианте воплощения, уровень включения рекомбинантного протеина ORF2 PCV2 составляет от приблизительно 0,2 до приблизительно 400 мкг/мл. В другом варианте воплощения, уровень включения рекомбинантного протеина ORF2 PCV2 составляет от приблизительно 0,3 до приблизительно 200 мкг/мл. В следующем варианте воплощения, уровень включения рекомбинантного протеина ORF2 PCV2 составляет от приблизительно 0,35 до приблизительно 100 мкг/мл. В другом варианте воплощения, уровень включения рекомбинантного протеина ORF2 PCV2 составляет от приблизительно 0,4 до приблизительно 50 мкг/мл.
В одном варианте воплощения, трехвалентная иммуногенная композиция данного изобретения включает комбинацию, по меньшей мере, одного растворимого антигена M.hyo (например, два или больше) и антигена цирковируса свиней типа 2 (PCV2), а также антигена вируса PRRS изобретения. В другом варианте воплощения, композиция вызывает защитный иммунный ответ у свиньи против M.hyo, PCV2 и вируса PRRS.
В одном варианте воплощения, комбинированная вакцина PCV2/M.hyo/PRRS обеспечивается в виде вакцины с одной дозой в 2-х флаконах. Например, в некоторых вариантах воплощения, комбинация PCV2/M.hyo обеспечивается как стабильная жидкая композиция в первом флаконе, и вирус PRRS обеспечивается в лиофилизированном состоянии во втором флаконе. В некоторых вариантах воплощения, дополнительные свиные антигены могут быть прибавлены как к первому, так и ко второму флакону.
В одном варианте воплощения, вирусный компонент PRRS обеспечивается в виде лиофилизированного генетически модифицированного живого вируса. Перед введением, жидкость PCV2/M.hyo из первого флакона может быть использована для регидратации вируса PRRS во втором флаконе, так что все три антигена могут быть введены животному в одной дозе. Обращаем внимание на то, что хотя комбинированные вакцины PCV2/M.hyo/PRRS существуют на данное время, они обеспечиваются в виде вакцины с одной дозой в 3-х флаконах, что требует одновременного введения трех отдельных вакцин (например, Ingelvac CircoFLEX®, Ingelvac MycoFLEX® и Ingelvac®PRRS MLV).
Этиологический агент PRRS впервые изолировали в Нидерландах, и назвали вирусом Lelystad. Этот вирус описан в WO 92/21375 (Stichting Centraal Diegeneeskundig Instituut). Изолят Европейского вируса PRRS депонирован в институте Пастера в Париже, под номером 1-1102. Североамериканский тип изолирован практически одновременно с европейским вирусом, и описан в WO-93/03760 (Collins et al.) Изолят североамериканского типа вируса депонирован в коллекции культур американского типа (АТСС), под номером VR-2332.
Были изолированы разные штаммы как из европейского, так и из североамериканского типа вируса. WO 93/07898 (Akzo) описывает европейский штамм и вакцины, которые происходят от него, депонируемый в CNCM (институт Пастера), под номером 1-1140. Также, WO 93/14196 (Rhone-Merieux) описывает новый штамм, изолированный во Франции, депонируемый в CNCM (институт Пастера), под номером I-1153. Более того, ЕР 0595436 B1 (Solvay) описывает новый североамериканский тип штамма, более вирулентный, чем тот, что был описан сначала, и его вакцины. Этот штамм депонируется в АТСС, однако номер депонирования не указан в патентной заявке. Кроме того, ES 2074950 ВА (Cyanamid Iberica) и его эквивалент GB 2282811 В2 описывают так называемый "Испанский штамм", который отличается от европейского и североамериканского штаммов. Этот "Испанский штамм" депонируется в европейской коллекции культур клеток животных (ЕАССС), под номером V93070108.
Пригодные антигены вируса PRRS для применения в композициях PCV2/M.hyo/PRRS данного изобретения включают изоляты североамериканского вируса PRRS, штаммы китайского вируса PRRS, и штаммы европейского вируса PRRS, а также генетически модифицированные версии таких изолятов/штаммов. В одном варианте воплощения, антигенный компонент вируса PRRS, примененный в композициях данного изобретения, является североамериканским вирусом PRRS.
В некоторых вариантах воплощения, антигенный компонент вируса PRRS, примененный в композициях этого изобретения, является изолятом североамериканского вируса PRRS, обозначенным как Р129 или его живой генетически модифицированной версией. Желательно, генетически модифицированный вирус PRRS не способен продуцировать патогенную инфекцию, однако способен вызывать иммунный защитный ответ против инфекции, вызванной диким типом вируса PRRS.
Генетически модифицированный вирус PRRS для применения в композициях изобретения может быть получен из инфекционного клона. Получение инфекционного кДНК клона изолята североамериканского вируса PRRS, обозначенного Р129, описано в патенте США 6,500,662, который включен с помощью ссылок. Последовательность кДНК Р129 описана в банке генов под номером доступа AF494042 и в патенте США №6,500,662.
В одном варианте воплощения, нуклеотидная последовательность невирулентной формы Р129, для применения в композициях данного изобретения, представлена SEQ ID NO: 16. Однако, данное изобретение не ограниченно этой последовательностью. Эта последовательность и последовательности других невирулентных форм Р129 описаны в международной заявке PCT/IB 2011/055003, поданной 09.11.2011, содержание которой (включая любые национальные заявки, поданные в США, на основе этой международной заявки) включено в данный документ с помощью ссылок. Желательно, вирус PRRS является модифицированным для предотвращения даун-регулирования интерферон-опосредованной функции.
В других вариантах воплощения, антигенный компонент вируса PRRS, примененный в композициях изобретения, является вирусным изолятом PRRS обозначенным как ISU-55. Изолят ISU-55 депонирован в коллекции культур американского типа (АТСС), под номером доступа VR2430. Нуклеотидная последовательность генов ORF2 - ORF5 изолята ISU-55 представлена SEQ ID NO: 17. Нуклеотидна последовательность генов ORF6 и ORF7 изолята ISU-55 представлена SEQ ID NO: 18.
Другим пригодным изолятом североамериканского вируса PRRS, который можно использовать в композициях, является ISU-12, депонированный в АТСС под номерами доступа VR2385 [3 × очищен от тромбоцитов] и VR2386 [неочищенный от тромбоцитов]. Другие пригодные североамериканские вирусы PRRS, которые могут быть применены в композициях этого изобретения, представлены: ISU-51, ISU-3927, ISU-1894, ISU-22 и ISU-79, депонированные в АТСС под номерами доступа VR2498, VR2431, VR2475, VR2429 и VR2474, соответственно. Генетически модифицированные версии любого из этих изолятов ISU могут быть применены в композициях этого изобретения. Эти ISU изоляты и изолят ISU-55, детально описанные в патентах США Paul, et al: US 5,695,766, 6,110,467, 6,251,397, 6,251,404, 6,380,376, 6,592,873, 6,773,908, 6,977,078, 7,223,854, 7,264,802, 7,264,957 и 7,517,976, все включены в данный документ с помощью ссылок.
В других вариантах воплощения, антигенным компонентом вируса PRRS, примененным в композициях данного изобретения, является североамериканский тип, депонированный в коллекции культур американского типа (АТСС) под номером VR-2332, или его генетически модифицированная версия. Например, вирус PRRS может быть модифицированным живым вирусом на основе изолята, идентифицированного как АТСС VR2332, который применяют в INGELVAC® PRRS ATP и INGELVAC® PRRS MLV, производства Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc.
В других вариантах воплощения, антигенный компонент вируса PRRS, применный в композициях данного изобретения, является изолятом Европейского вируса PRRS или вирусом Lelystad или его генетически модифицированной версией. Пример пригодного штамма вируса PRRS идентифицирован как депонируемый под номером №I-1102, описанный выше. Нуклеотидные и аминокислотные последовательности, отвечающие номеру депонирования I-1102, описанные в патенте США №5,620,691 Wensvoort et al, включенном в данный документ с помощью ссылок. Получение инфекционного клонам изолята Европейского вируса PRRS или вируса Lelystad описано в патенте США №6,268,199, включенном в данный документ с помощью ссылок.
Другие примеры пригодных изолятов вируса PRRS включают, однако не ограничиваются описанными выше. Также, живые генетически модифицированные версии изолятов вируса PRRS могут быть применены в композициях данного изобретения. Инфекционные клоны могут быть использованы для восстановления таких живых генетически модифицированных организмов.
Специалист в отрасли понимает, что варианты последовательности вируса PRRS могут быть применены в композициях данного изобретения. Такие варианты могут отличаться практически на 10-20% идентичности последовательности, и все же хранить антигенные характеристики, которые делают их пригодными для иммуногенных композиций. Желательно, варианты вируса PRRS имеют по меньшей мере 80%, желательно по меньшей мере 85%, более желательно по меньшей мере 90%, еще более желательно по меньшей мере 95% идентичности последовательности с непроцессированной геномною последовательностью изолята дикого типа вируса PPRS. Антигенные характеристики иммунологической композиции могут быть, например, оценены экспериментами заражения. Более того, антигенная характеристика модифицированного антигена вируса PRRS все еще сохраняется, когда модифицированный антиген вызывает, по меньшей мере, 70%, желательно 80%, более желательно 90% защитного иммунитета, по сравнению с диким типом антигена вируса PRRS.
В одном варианте воплощения, антигенный компонент вируса PRRS является генетически модифицированным живым вирусом, который включен в композициях изобретения на уровне по меньшей мере 2,1 ≤ TCID50 ≤ 5,2, где TCID50 означает 50% инфекционной дозы культуры тканей, определенной подсчетом количества антигена (тест на активность in vitro).
Антигенный компонент PCV2 композиции изобретения PCV2/M.hyo/PRRS может находиться в форме гибридного цирковируса типа-1-типа 2, гибридного вируса, включая инактивированный рекомбинантный цирковирус свиней типа 1, экспрессирующий ORF2 протеин цирковируса свиней типа 2. В другом варианте воплощения, антигенный компонент PCV2 композиции изобретения PCV2/M.hyo/PRRS находится в форме рекомбинантного протеина ORF2.
Пригодные PCV2 антигены для применения в композиции PCV2/M.hyo/PRRS могут происходить от любого изолята PCV2, описанного выше, а также других PCV2 изолятов. Пригодные PCV2 антигены для применения в композициях изобретения включают, однако не ограничиваются следующими: описанные выше PCV2 последовательности и их варианты.
Вакцины данного изобретения формулируют согласно принятой конвенции с включением приемлемых носителей для животных, включая людей (в случае необходимости), таких как стандартные буферы, стабилизаторы, разбавители, консерванты и/или солюбилизаторы, а также формулируют для содействия постоянному высвобождению. Разбавители включают воду, солевой раствор, декстрозу, этанол, глицерин, и т.д. Добавки для изотоничности включают хлорид натрия, декстрозу, манитол, сорбитол и лактозу, и т.д. Стабилизаторы включают альбумин, и т.д. Другие пригодные наполнители вакцин и добавки, включая приемлемые для модифицированных живых вакцин, являются известными и очевидными для специалиста в отрасли. Смотреть, например, Remington's Pharmaceutical Science, 18th ed., 1990, Mack Publishing, включенную в данный документ с помощью ссылок.
Вакцины данного изобретения могут также содержать один или больше дополнительных иммуномодуляторов, таких как, например, адъювант или цитокин, и т.д. Виды пригодных адъювантов для применения в композициях данного изобретения включают следующие: адъювант масло в воде, полимерный и водный адъювант, адъювант вода в масле, адъювант гидроксид алюминия, адъювант витамин Е и их комбинации. Некоторые конкретные примеры адъювантов включают, однако не ограничиваются следующими: полный адъювант Фройнда, неполный адъювант Фройнда, Corynebacterium parvum, Bacillus Calmette Guerin, гель гидроксида алюминия, глюкан, декстрин сульфат, оксид железа, альгинат натрия, бакто-адъювант, определенные синтетические полимеры, такие как полиаминокислоты и сополимеры аминокислот, блок-сополимеры (CytRx, Atlanta, Ga.), QS-21 (Cambridge Biotech Inc., Cambridge Mass.), SAF-M (Chiron, Emeryville Calif.), AMPHIGEN® адъювант, сапонин, Quil А или другие фракции сапонина, монофосфорит липид А, и Avridine липид-амин адъювант (N,N-диоктадецил-N',N'-- бис(2-гидроксиэтил) - пропандиамин), "REGRESSIN" (Vetrepharm, Athens, Ga.), керосин, система адъювантов RIBI (Ribi Inc., Hamilton, Mont.), мурамил дипептид и т.д.
Неограниченные примеры эмульсии масло в воде, пригодные для вакцины изобретения, включают модифицированные композиции SEAM62 и SEAM 1/2. Модифицированная SEAM62 является эмульсией масло в воде, которая содержит 5% (о./о.) сквалена (Sigma), 1% (о./о.) SPAN® 85 детергента (ICI поверхностно активные вещества), 0,7% (о./о.) TWEEN® 80 детергента (ICI поверхностно активные вещества), 2,5% (о./о.) этанола, 200 мкг/мл Quil А, 100 мкг/мл холестерина, и 0,5% (о./о.) лецитина. Модифицированная SEAM 1/2 является эмульсией масло в воде, которая содержит 5% (о./о.) сквалена, 1% (о./о.) SPAN® 85 детергента, 0,7% (о./о.) Tween 80 детергента, 2,5% (о./о.) этанола, 100 мкг/мл Quil А и 50 мкг/мл холестерина.
Другим примером адъюванта, пригодного в композициях изобретения, является SP-масло. В описании и формуле, термин "SP масло" означает масляную эмульсию, которая содержит блок-сополимер полиоксиэтилен-полиоксипропилен, сквалан, полиоксиэтилен сорбитан моноолеат и забуференный солевой раствор. Блок-сополимеры полиоксиэтилен-полиоксипропилен являются поверхностно-активными веществами, которые помогают суспендировать твердые вещества и жидкие компоненты. Эти поверхностно-активные вещества имеются на рынке в виде полимеров под торговой маркой Pluronic®. Желаемыми поверхностно-активными веществами являются полоксамер 401, присутствующий на рынке под торговой маркой Pluronic® L-121. В целом, эмульсия SP масло является иммуностимулирующей смесью адъювантов, которая содержит приблизительно 1-3% о./о. блок-сополимера, приблизительно 2-6% о./о. сквалана, в частности приблизительно 3-6% сквалана, и приблизительно 0,1-0,5% о./о. полиоксиэтилен сорбитан моноолеата, с остатком, представленным забуференным солевым раствором. В одном варианте воплощения, эмульсия SP-масло находится в конечной композиции в о./о. количестве приблизительно 1% - 25%, желательно приблизительно 2% - 15%, более желательно приблизительно 5% - 12% о./о.
В другом примере, пригодным адъювантом для применения в композициях изобретения является AMPHIGEN™ адъювант, который состоит из обезжиренного лецитина, растворенного в масле, обычно легком жидком вазелиновом масле.
Другие примеры адъювантов, пригодных в композициях изобретения, включают следующие пропиретарные адъюванты: Microsol Diluvac Forte® duel система эмульсия адъювант, Emunade адъювант, и Xsolve адъювант. Как Emunade, так и Xsolve адъюванты является эмульсиями легкого минерального масла в воде, однако Emunade также содержит альгидрогель, а d.I-α-токоферил ацетат является частью XSolve адъюванта. Еще один пример пригодного адъюванта для применения в композициях изобретения включает ImpranFLEX™ адъювант (адъювант вода в масле). Еще один пример пригодного адъюванта включает адъювант на основе Carbomer (Carbopol®). Желаемые Carbopol® адъюванты включают полимер Carbopol® 934 и полимер Carbopol®941.
В одном варианте воплощения, адъювант или смесь адъювантов добавляют в количестве приблизительно 100 мкг до приблизительно 10 мг на дозу. В другом варианте воплощения, адъювант/смесь адъювантов добавляют в количестве от приблизительно 200 мкг до приблизительно 5 мг на дозу. В одном варианте воплощения, адъювант/смесь адъювантов добавляют в количестве от приблизительно 300 мкг до приблизительно 1 мг/дозу.
Адъювант или смесь адъювантов обычно присутствуют в композиции вакцины изобретения в о./о количестве приблизительно 1% - 25%, желательно приблизительно 2% - 15%, более желательно приблизительно 5% - 12% о./о.
Другие "иммуномодуляторы", которые могут быть включены в вакцину, включают, например, один или больше интерлейкинов, интерферонов или других известных цитокинов. В одном варианте воплощения, адъювант может означать производную циклодекстрина или полианионный полимер, такие как описанные в патентах США 6,165,995 и 6,610,310, соответственно.
Следующий аспект касается способа получения иммуногенной композиции данного изобретения. Этот способ включает i) культивирование M.hyo в пригодной среде в течение периода в диапазоне 18-144 часа; ii) потом инактивацию культуры М.hyo; iii) сбор жидкости инактивированной культуры, где жидкость инактивированной культуры содержит цельноклеточный препарат M.hyo, включающий как растворимую жидкую фракцию, так и нерастворимый клеточный материал; iv) отделение растворимой жидкой фракции от нерастворимого клеточного материала; v) существенное удаление как Ig G, так и иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин из отделенной растворимой жидкой фракции с образованием растворимой части цельноклеточного препарата M.hyo; и vi) последующее объединение растворимой части цельноклеточного препарата M.hyo с антигеном PCV2.
Примером пригодной среды для культивирования M.hyo является PPLO бульон (бульонная основа Mycoplasma), который при дополнении питательными элементами, используют для удаления и культивирования Mycoplasma.
В некоторых вариантах воплощения, культуру M.hyo выращивают до поздней логарифмической фазы роста, после чего культуру инактивируют. В некоторых других вариантах воплощения, культуру инактивируют увеличением pH (например, до приблизительно 7,8). Это осуществляют путем обработки культуры инактивирующим агентом, таким как бинарный этиленимин (BEI). BEI получают in situ в течение инкубации L-бромэтиламин гидробромида (ВЕА) в культуре. Потом, pH инактивированной культуры нейтрализуют, например, добавлением эквивалентного количества агента, который нейтрализует агент инактивации в растворе. В некоторых вариантах воплощения, агентом инактивации является BEI, а нейтрализующим агентом является тиосульфат натрия. В одном варианте воплощения, pH инактивированной культуры доводили до приблизительно 7,4 добавлением тиосульфата натрия.
В некоторых вариантах воплощения, растворимую жидкую фракцию цельноклеточного препарата M.hyo отделяли от нерастворимого клеточного материала, используя обычные способы. В одном варианте воплощения, это разделение осуществляли фильтрацией. В другом варианте воплощения, это разделение осуществляли центрифугированием. В другом варианте воплощения, это разделение осуществляли осаждением.
В одном варианте воплощения, растворимую жидкую фракцию инактивированного, нейтрализованного цельноклеточного препарата M.hyo обрабатывали Протеин А смолой для значительного удаления как Ig G, так и иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин. В другим вариантах воплощения, Протеин G смола может быть использована для значительного удаления как Ig G, так и иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин, которые содержатся в растворимой жидкой фракции. Способы удаления как Ig G, так и иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин Протеин А или Протеин G смолами хорошо известны в отрасли.
Согласно следующему аспекту, способ получения поливалентной иммуногенной композиции данного изобретения включает приготовление растворимого M.hyo антигена как описано выше, и его смешивание из PCV2 антигеном, пригодным адъювантом, и одним или больше фармацевтически приемлемым носителем. Этот способ необязательно включает добавление, по меньшей мере, одного дополнительного свиного антигена, такого как, но не ограничиваясь, антигеном вируса PRRS, как описано выше.
Следующий аспект данного изобретения касается набора. "Набор" касается многих компонентов, сгруппированных вместе. В одном варианте воплощения, набор данного изобретения включает флакон (или другую пригодную тару), который содержит иммуногенную композицию. Эта иммуногенная композиция включает как антиген PCV2, так и растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo), где растворимая часть препарата M.hyo в сущности является свободной как от (i) Ig G, так и (ii) иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин. Необязательно, набор может дополнительно включать инструкцию. Инструкция включает информацию по введению иммуногенной композиции.
В некоторых вариантах воплощения, набор, содержащий растворимую часть препарата M.hyo, так же включает антиген PCV2. В некоторых вариантах воплощения, комбинация PCV2/M.hyo во флаконе обеспечивается в виде готовой к использованию жидкой композиции.
В других вариантах воплощения, набор включает второй флакон, который содержит антиген вируса PRRS. В некоторых вариантах воплощения, антиген вируса PRRS находится в форме генетически модифицированного живого вируса, который обеспечивается в лиофилизированном состоянии. В таких случаях, инструкция включает способы регидратации вирусного компонента PRRS жидким содержанием из флакона, который содержит комбинацию PCV2/M.hyo. Инструкция также включает информацию по введению полученной трехвалентной композиции(й) PCV2/M.hyo/PRRS.
В некоторых вариантах воплощения, иммуногенную композицию данного изобретения вводят свиньям, которые имеют материнские антитела против M.hyo. В других вариантах воплощения, иммуногенную композицию данного изобретения вводят свиньям, которые имеют материнские антитела, против M.hyo и как минимум одного другого микроорганизма, способного вызвать заболевание у свиней.
В некоторых вариантах воплощения, поливалентную иммуногенную композицию данного изобретения вводят поросенку возрастом 3 недели или старше. Однако, предусматривается, что поливалентная вакцинная композиция изобретения также может быть использована для повторной вакцинации молодых свиней до размножения. В отрасли также известно, что молодая свинья является свиньей женского рода, которая не была супоросной. Вакцинированные молодые свиньи будут пропускать материнские антитела их новорожденным поросятам с помощью молозива.
Также предусматривается, что поливалентная вакцина изобретения может быть использована для ежегодной повторной вакцинации стада, которое размножается. Желательно, поливалентную вакцину данного изобретения вводят свиньям (например, поросятам или молодым свиньям) в одной дозе. В одном варианте воплощения, поливалентная вакцина данного изобретения не нуждается в смешивании отдельных моновалентных вакцин перед введением, то есть, она обеспечивается как готовая к использованию композиция. В другом варианте воплощения, поливалентная композиция требует смешивания бивалентной вакцины данного изобретения, которая содержится в первом флаконе, с моновалентной вакциной, которая содержится во втором флаконе. Необязательно, дополнительные антигены могут быть добавлены к любому из этих флаконов.
В некоторых вариантах воплощения, иммунитет начинает проявляться через 2-3 недели после вакцинации моновалетной или поливалентной композицией вакцины данного изобретения. В других вариантах воплощения, длительность иммунитета составляет приблизительно 17-23 недели после вакцинации моновалетной или поливалентной композицией вакцины данного изобретения.
Следующие примеры приводят предпочтительные материалы и способы данного изобретения. Однако, нужно понимать, что эти примеры приведены только с целью иллюстрации, и не ограничивают объем прав изобретения.
Примеры
Пример 1: Способы получения Mycoplasma hyopneumoniae для антигена M.hyo. способного к объединению с PCV2
Ферментация и инактивация M.hyo
Среду для разведений исходного вируса и антигена готовили следующим образом. Бульон плевропневмония-подобного организма, полученного из сердца свиней (PPLO) (BD Biosciences каталог No. 21498), получали по инструкции производителей (то есть, 21 г/л), и раствор экстракта дрожжей получали с концентрацией 21 г/л в USP. Раствор дрожжевого экстракта потом добавляли к PPLO при 6,25%, и смесь стерилизовали, нагревая к 121°С в течение > 30 минут. Гидрохлорид цистеина получали с концентрацией 90 г/л и стерилизовали фильтрованием. Раствор декстрозы получали добавлением 450 г декстрозы на литр USP воды, после чего стерилизовали нагреванием. Для получения конечной среды, свиную сыворотку добавляли к основной среде с концентрацией 10%, после чего цистеин с концентрацией 0,01% и декстрозу с концентрацией 1,0%. Среду инокулировали 10% о.:о. культуры М. hyopeumoniae (штамм Р-5722-3) в логарифмической фазе роста. Культуру выдерживали при 37°С, и pH и dO поддерживали на уровне 7,0 и 25%, соответственно. В логарифмической фазе роста, культуру инактивировали бинарным этиленимином (BEI), азиридином, полученным из 2-бромэтиламин гидробромида. В частности, инактивацию осуществляли путем повышения pH до 7,8 добавлением 2-бромэтиламингидробромида (ВЕА) к конечной концентрации 4 мМ и инкубированием в течение 24 часов. BEI нейтрализовали добавлением тиосульфата натрия в молярном соотношении 1:1, после чего инкубировали в течение еще 24 часов. Жидкость инактивированной культуры выдерживали при 2-8°С до последующей обработки.
Пример 2: Способы получения гибридного цирковируса свиней (cPCV) 1-2
cPCVI-2 конструировали путем клонирования иммуногенного капсидного гена патогенного цирковируса свиней типа 2 (PCV2) в геномный скелет непатогенного цирковируса свиней типа 1 (PCV1). Процедура конструирования клонам гибридной ДНК описана, например, в патенте США №7,279,166, который включен в данный документ с помощью ссылок. Инфекционный материал гибридного вируса получали от доктора X.J. Meng, университет Virginia Polytechnic Institute and State University, Блексбург, Вирджиния, и использовали для инфицирования клеток почек свиней (РК)-15, выращенных в минимальной поддерживающей среде (MEM), обогащенной 0,05% гидролизатом лактальбумина (LAH), 30 мкг/мл гентамицин сульфата, и 5% фетальной бычьей сыворотки. Полученные cPCVI-2 инфицированные РК-15 клетки размножали серийными пассажами еще четыре раза, используя такую же среду, за исключением того, что использовали 2-3% фетальную бычью сыворотку. Пятый пассаж замораживали, размораживали и фильтровали, и полученные лизаты использовали для приготовления предыдущего вакцинного вируса и потом исходного вакцинного вируса.
Среда, что использовали для приготовления вирусного инокулята, была такой же как использовали для приготовления вирусного посевного материала. Как ростовая среда MEM, OPTIMEM, или эквивалентом является базальная среда, которую можно использовать для высаживания клеточной линии РК-15 для разрастания. Ростовая среда может быть дополнена до 10% бычьей сывороткой, до 0,5% гидролизатом лактальбумина, до 0,5% бычьей сывороткой альбумина, и до 30 мкг/мл гентамицином. Как среду размножения вируса используют MEM, OPTIMEM или эквивалентную. Среда размножения вируса может быть дополнена до 0,5% гидролизатом лактальбумина, до 2% бычьей сывороткой, до 0,5% бычьей сывороткой альбумина, и до 30 мкг/мл гентамицином. До 5 г/л глюкозы и до 5 ммоль/л L-глутамина могут быть добавлены к ростовой среде и/или среде размножения вируса, что необходимо для поддержания клеток.
cPCN/1-2 исходный вакцинный вирус добавляли к суспензии клеток РК-15 и адсорбировали до 3 часов. Вирусный инокулят разводили в ростовой базальной среде для обеспечения многочисленности инфекции (MOI) 0,1-0,0001.
Культуры клеток РК-15 сначала инокулировали рабочим вирусным инокулятом во время высаживания клеток, или когда клетки достигали приблизительно 20% - 50% конфлюенции. Этот первый пассаж может называться "одно-стадийный способ инфицирования" для получения пула антигена, или может быть использован в последующем для серийных пассажей. Для серийных пассажей, cPCVI-2 инфицированные клетки РК-15 дальше размножали до 7 пассажей серийными разделением в соотношении 1:5-20 для размножения вируса. Культуральная среда, что содержит суспензию инфицированных клеток из предыдущего пассажа, служила посевным материалом для следующего пассажа. cPCVI-2 инфицированные клетки инкубировали в течение 3-14 суток для каждого пассажа при 36±2°С, до достижения клетками >90% конфлюенции. Вирус cPCVI-2 вызывает видимые цитопатические изменения на протяжении репликации вируса. При сборе культуры клеток, наблюдали округление клеток и значительные плавучие куски. Культуры также наблюдали на визуальное присутствие бактериального или грибкового поражения. Время инкубирования между сбором для cPCV антигенов приведено в Таблице 1 ниже:
Культуральные жидкости cPCVI-2 собирали в стерильные пробирки и отбирали образцы на исследование микоплазмы, используя известные способы. Многочисленные сборы можно осуществлять из роллер-флаконов, биореакторов и перфузионных колб.
Перед инактивацией собранного вируса cPCVI-2, один или больше серий антигенов концентрировали (например, к 60Х) путем ультрафильтрации. Концентраты промывали сбалансированным солевым раствором для удаления протеинов сыворотки.
Способы инактивации, аттенуации или детоксификации вируса cPCVI-2 описаны дальше. После концентрирования cPCV антигена, бета-пропиолактон (BPL) добавляли к объединенному вирусному материалу cPCV1-2 с получением приблизительной концентрации 0,2% о./о. Объединены вирусные жидкости потом перемешивали в течение минимум 15 мин., и потом инактивированный объем жидкостей антигена переносили во вторую стерильную колбу. Перенесенные жидкости антигена выдерживали при 2-7°С, с постоянным взбалтыванием, в течение минимум 24 часов. После минимум 24 часов, второе добавление 0,2% о./о BPL добавляли к объединенной суспензии. Содержание потом взбалтывали, переносили в третью колбу, и выдерживали при 2-7°С, с постоянным взбалтыванием, в течение дополнительного времени не меньше чем 84 часов. В целом, время полной инактивации равняется не меньше, чем 108 часов, и не больше, чем 120 часов. Способ инактивации показан в Таблице 2 ниже.
Инактивацию завершали добавлением финальной концентрации - не больше, чем 0,1 М раствор тиосульфата натрия. pH инактивированного пула антигена доводили до приблизительно 6,8, используя NAOH или HCl. После инактивации, типичный образец брали из пула и тестировали на завершение инактивации. Инактивированный продукт cPCV1-2 антигена стандартизировали для достижения цели в более чем 1,0 RP, измеренной с помощью ELISA эффективности.
Пример 3: Даун-стрим обработка М. hyo антигенов и аналитическое тестирование этих обработанных антигенов
Даун-стрим обработка M.hyo антигенов:
Инактивированную ферментационную жидкость (полученную как описано выше в Примере 1) обрабатывали следующим образом для каждой указанной группы. Эти обработанные M.hyo антигены применяли в Примере 4 ниже.
Т02: (вся масса) не обработанные.
Т03: (10 X УФ концентрированные) Концентрировали с помощью фильтрации с тангенциальным потоком, используя мембрану с отсечкой по молекулярной массе 100 КДа (пористое волокно). Уменьшение конечного объема составляло 10Х.
Т04 и Т05: (10Х УФ концентрированные и центрифугированные) Концентрированные клетки микоплазмы (из Т03) собирали и промывали один раз PBS с помощью центрифугирования при ~20,000×g (модель Sorvall RC5B).
Т06 и Т07: (10Х центрифугированы) Инактивированную ферментационную жидкость центрифугировали при ~20,000×g (Sorvall RC5B) и промывали один раз путем ресуспендирования клеток в PBS, после чего дополнительным центрифугированием. Уменьшение конечного объема равнялось 10Х.
Т08: (10Х центрифугированы и нагреты) Клетки Mycoplasma концентрировали и промывали на Т06 и нагревали до 65°С в течение 10 минут.
Т09: (супернатант без клеток) Супернатант, собранный из первого центрифугирования как описано для Т06, стерилизовали фильтрованием сквозь фильтр 0,2 микрон (Nalgene).
Т10: (супернатант без клеток, обработанный протеином-А) Стерильный супернатант (приготовленный для Т09) смешивали со смолой протеин А (Протеин А Сефароза, Pharmacia Inc) при объемном соотношении 10:1 в течение 4 часов. Смолу удаляли стерильной фильтрацией, и фильтруемую жидкость хранили при 2-8°С. Этот способ использует после ферментационную обработку "даунстрим" протеином А для удаления антител и иммунокомплексов. Хотя данное изобретение не исключает апстрим обработки протеином А, изобретатели выяснили, что в случае M.hyo, апстрим обработка протеином А ростовой среды приводит к р46 результатам, худшим и не соответствующим необработанной среде (данные не приведены).
Аналитическое тестирование антигенов M.hyo, обработанных даунстрим
Обработанные даустрим препараты антигенов M.hyo (полученные как описано выше) тестировали на восстановление M.hyo специфического р46 антигена, и присутствие PCV2 антитела. Кроме этого, эти препараты M.hyo антигенов тестировали на присутствие вируса гепатита (TTV), включая генотип 1 (g1TTV) и генотип 2 (g2TTV). Результаты представлены ниже в Таблице 3.
Со ссылкой на Таблицу 3 выше, восстановление M.hyo-специфического р46 антигена демонстрировали для каждого из M.hyo даунстрим обработанного антигенного препарата. Кроме этого, следующие обработки успешно удалили PCV2 антитело: 10Х УФ концентрированные и центрифугированные, 10х центрифугированные, 10Х центрифугированные и нагретые, и супернатант без клеток (обработанные протеином А). Относительно TTV, следующие обработки успешно удалили g1TTV: 10Х УФ концентрированные и центрифугированные, 10х центрифугированные и нагретые, и супернатант без клеток (обработанные протеином А). Только обработка, обозначенная 10Х УФ концентрированные и центрифугированные, удаляла g2TTV. Изоляты вируса гепатита, включая генотипы 1 и 2, описаны в US 20110150913, который включен в данный документ с помощью ссылок.
Ввиду того, что в отрасли известно, что протеин А связывает Ig G, специалисту в отрасли понятно, что не только PCV2 антитело, но и другие свиные антитела, включая PRRS антитело, HPS антитело и SIV антитело, можно эффективно удалять обработкой протеином А. Это делает бесклеточный обработанный протеином А супернатант M.hyo этого изобретения совместимым не только с PCV2 антигеном, а также с другими свиными антигенами, в результате отсутствия иммунологической интерференции между антигенами. Кроме этого, ожидается, что удаление остатков незащитных клеток и удаления иммуноглобулина и комплексов антиген/иммуноглобулин сделает вакцину безопаснее.
Пример 4: Получение композиций экспериментальных вакцин M.hyo
Все экспериментальные вакцины M.hyo формулировали с конечной концентрацией адъюванта 5%. Кроме этого, все вакцины стандартизировали с помощью р46 ELISA и фиксировали тимеросолом. Композиции экспериментальной вакцины получали с M.hyo антигенами, обработанными согласно обработкам Т02-Т10 выше. Кроме этого, Обработка Т01 отвечала плацебо (не содержала M.hyo антигена, только 5% Amphigen адъюванта), в то время как Обработка Т11 означала позитивный контроль, который отвечал вакцине M.hyo на основе бактерина, где закончился термин действия (RespiSure-ONE®, Pfizer Animal Health). Эти композиции описаны в Таблице 4 ниже.
Пример 5: Оценка in vivo эффективности вакцины M.hyo с M.hyo антигенами от разных обработок даунстрим
Это исследование проводили для оценки in vivo эффективности вакцин Mycoplasma hyopneumoniae (М.hyo) с М.hyo антигенами от разных даунстрим обработок (DSP). Свиней возрастом 3 недели внутримышечно инокул провал и однократной дозой разных композиций вакцин, описанных в Таблице 4 выше. Шестнадцать животных инокул провал и в каждой из групп обработок. Животных заражали через 21 сутки после вакцинации вирулентным изолятом M.hyo из исследуемой станции. Трупы животных разрезали через 28 суток после заражения, и легкие удаляли и подсчитывали уплотнения совместимые с инфекцией M.hyo. Первичным критерием для защиты против заражения M.hyo была оценка уплотнений в легких. Обычно принято, что существует взаимосвязь между размером поражений легких, вызванных энзоотической пневмонией, и обратным эффектом на скорость роста. Таблица 5 ниже содержит оценку поражений легких для соответствующих групп обработки. Статистическая значимость продемонстрирована с помощью анализа смешанной модели оценок легких для каждой группы.
С ссылкой на Таблицу 5 выше, результаты с M.hyo антигенами от разных даунстрим обработок указали на то, что все экспериментальные вакцины, кроме Т04, значительно отличались от плацебо. Эти результаты поражений M.hyo графически изображенные на Фигуре 1. Как показано на Фигуре 1, Т04 дала неприемлемые результаты. Все другие обработки значительно отличались от плацебо (Т01). Оценка уплотнений легких указала, что Т02, Т03 и Т09-Т11 предоставили наиболее эффективную защиту против заражения M.hyo
Относительную эффективность р46 экспериментальных вакцин оценивали, используя двойной антитело сендвич ферментный иммуносорбентный анализ (DAS ELISA). Результаты р46 DAS ELISA, показанные в Таблице 5 выше, указывают на то, что все экспериментальные вакцины превысили намеченную эффективность. Кроме этого, р46 относительная эффективность поддерживалась или увеличивалась при хранении вакцин в течение месяца (данные не приведены). Заметное увеличение активности со временем наблюдали у центрифугированных антигенов, за исключением антигенов, которые поддавались нагреванию. Не привязываясь к теории, вероятно, что "каркасы" клеток со временем разрушаются и высвобождают больше связанного мембраной р46 антигена в случае центрифугированных антигенов.
Пример 6: Оценка совместимости экспериментальных вакцин M.hyo из PCV2 антигеном
Это исследование осуществляли для оценки совместимости экспериментальных вакцин M.hyo с М.hyo антигенами от разных даунстрим обработок PCV2 антигеном. Композиции экспериментальной вакцины M.hyo описаны в Таблицах 4 и 5 выше. Экспериментальные р46 относительные эффективности этих вакцин описаны в Таблице 5 выше. Каждую из этих экспериментальных вакцин M.hyo объединяли с PCV2 антигеном. В этом примере, антиген PCV2 представляет убитый гибридный вирус PCV тип 1-тип 2 (Fostera PCV), полученный как описано выше в Примере 2. Гибридный вирус включали в композиции в начальной концентрации 1,6 ≤ RP, где RP является единицей относительной эффективности, определенной с помощью количественного анализа антигена PCV2 ELISA (тест на активность in vitro) по сравнению с эффективной вакциной.
Композиции экспериментальной комбинации M.hyo/PCV2 оценивали с помощью PCV2 ELISA. Результаты представлены на Фигуре 2. Как показано на Фигуре 2, только препараты M.hyo антигена после следующих даунстрим обработок были совместимыми с PCV2 антигеном: Ультрафильтрация и Центрифугирование (Т04 & Т05), Центрифугирование (Т06 и Т07), Центрифугирование, плюс нагревание (Т08) и Супернатант, обработанный протеином А (Т10). Среди них, Супернатант M.hyo, обработанный протеином А, был наиболее совместимым с PCV2 антигеном, по сравнению из плацебо контролем, который включал гибридный вирус и Amphigen адъювант, однако не содержал M.hyo антиген. Уровень гибридного вируса PCV в супернатанте, обработанном протеином А, составлял 1,5 RP, по сравнению с 1,69 RP для плацебо. Таким образом, заключили, что отсутствует или присутствует минимальная иммунологическая интерференция между препаратом растворимого антигена M.hyo, обработанного протеином А, и PCV2 антигеном гибридного вируса.
Эффективность in vivo Супернатанта M.hyo, обработанного протеином А, продемонстрированная в Примере 5 выше, вместе с результатами описанными в этом Примере, указывает на то, что Супернатант, обработанный протеином А, является потенциально эффективной платформой для комбинаций M.hyo-PCV2.
Пример 7: Оценка эффективности PCV2 комбинированной вакцины PCV2/M.hvo в одном флаконе в разных композициях адъюванта
Это исследование осуществляли для оценки эффективности PCV2 в комбинированной вакцине PCV2/M.hyo в одном флаконе в разных композициях адъюванта. В этом примере, антиген PCV2 представлял гибридный вирус PCN/тип 1-тип 2 (Fostera PCV). Гибридный вирус объединяли с препаратом растворимого антигена M.hyo, который в сущности не содержал Ig G (то есть, супернатант, обработанный протеином А).
Обработка жидкостей:
Ферментированную жидкость с инактивированным M.hyo (описанную выше в Примере 1), обрабатывали для каждой указанной группы следующим образом.
Т02-Т04: Полную ферментированную жидкость, которая содержит живые клетки М. hyopneumoniae (описанную выше) центрифугировали при ~20,000×g (Sorvall RC5B), и собирали супернатант и стерилизовали через фильтр 0,2 мкМ. Протеин А Сефароза (номер компонента 17-5199-03, GE Healthcare) паковали в 1L хроматографическую колонку. После удаления буфера для хранения и обработки двумя объемами колонки 1М уксусной кислоты, смолу уравновешивали 5-ю объемами колонки буфера 50 мМ NaPO4/1M NaCl, pH 7,04. Приблизительно 2 литра очищенной/профильтрованной жидкости, которая содержит антиген М. Hyopneumoniae, пропускали сквозь смолу Протеин А со скоростью потока 100 см/час. Пропущенную жидкость собирали и стерилизовали с помощью фильтра 0,2 мкМ.
Т05: это позитивный контроль, который отвечает Fostera PCV-подобной композиции (не содержит M.hyo антигена). Содержание гибридного вируса в этой Fostera PCV-подобной композиции составляло приблизительно уровень Минимальной Иммунизирующей Дозы (MID) в композиции. Гибридный вирус включали в экспериментальные вакцины PCV2/M.hyo в одинаковом количестве.
Все экспериментальные вакцины PCV2/M.hyo формулировали с разными композициями адъювантов. Композиции экспериментальной вакцины получали с M.hyo антигенами, обработанными согласно обработок Т02-Т04 выше. Кроме этого, Обработка Т01 отвечала плацебо (стерильный солевой раствор).
Все вакцины стандартизировали с помощью р46 ELISA и фиксировали тимеросолом.
Эти экспериментальные композиции описаны в Таблице 6 ниже, где символ * указывает на М. hyo антиген из супернатанта глобального посева М. hyo, обработанного Протеином А, и символ ** указывает на Исследуемый Ветеринарный Продукт (ИВП) серийный.
Свиней возрастом 3 недели внутримышечно инокулировали одной дозой разных композиций вакцин, описанных в Таблице 6 выше. Шестнадцать животных включали в каждую из обрабатываемых групп. Животных заражали через 21 сутки после вакцинации вирулентным изолятом PCV2 из исследуемой станции.
Фигура 3 является диаграммой, которая показывает результаты виремии PCV2 (PCV2 количественная ПЦР) полученные с разными платформами адъювантов. Отмечено, что виремию PCV2 использовали в качестве первичной переменной эффективности. Результаты виремии PCV2 представлены как ДНК копии/мл. Как показано на Фигуре 3, все обработки имели значительно меньший уровень виремии по сравнению с плацебо на 28, 35 и 42 (заражение на 21 сутки) сутки. 10% SP-масло адъювант имел значительно меньший уровень виремии по сравнению с 5% Amphigen на 28-е и 35-е сутки. 5% Amphigen плюс 5% SLCD адъювант имел значительно меньший уровень виремии по сравнению с 5% Amphigen на 28-е и 35-е сутки. Платформа 20% SLCD адъюванта имела значительно меньший уровень виремии по сравнению с 5% Amphigen на 28, 35 и 42-е сутки.
Серологию PCV2, PCV2 фекальные выделения, PCV2 назальные выделения, клеточно-опосредованный иммунный (КОИ) ответ, истощение лимфоидной ткани, и иммуногистохимию (ИГХ) также мониторили как вторичные переменные эффективности. Эти результаты будут описаны ниже.
Фигура 4 является диаграммой, которая показывает результаты PCV2 ELISA на 1, 20 и 42-е сутки исследования (заражения осуществляли на 21-е сутки). Статус каждого образца выражали как образец к позитивному соотношению (S/P). Как показано на Фигуре 4, 20% SLCD было единственной обработкой, которая значительно отличалась от плацебо (Т01) как на 20-е, так и на 42-е сутки. Также, 5% Amphigen было единственной обработкой, которая значительно не отличалась от плацебо на 20-е сутки.
Фигура 5 является диаграммой, которая показывает PCV2 фекальных выделений, полученных в обработках Т02-Т04 против плацебо (Т01). Эти результаты выражали как PCV2 ДНК копии/мл. Результаты на Фигуре 5 указывают на то, что все обработки имели значительно меньшие фекальные выделения по сравнению с плацебо на 42-е сутки. Кроме этого, 5% Amphigen & 5% SLCD (Т04) имели значительно меньшие фекальные выделения по сравнению с 5% Amphigen (Т03) на 42-е сутки. Никаких других различий между обработками не зафиксировано.
Фигура 6 является диаграммой, которая показывает PCV2 назальных выделений, полученных в обработках Т02-Т04 против плацебо (Т01). Эти результаты выражали как PCV2 ДНК копии/мл. Результаты на Фигуре 6 указывают на то, что все обработки имели значительно меньшие назальные выделения по сравнению с плацебо на 42-е сутки. Кроме этого, 20% SLCD (Т05) имела значительно меньшие назальные выделения по сравнению с 5% Amphigen (Т03) на 42-е сутки. Никаких других различий между обработками не зафиксировано.
Фигуры 7 (А и В) является двумя графиками, которые показывают результаты теста интерферон-гамма (IFN-γ), который измеряет PCV2-специфический клеточно-опосредованный иммунный (КОИ) ответ.Результаты КОИ показаны как после вакцинации/перед заражением (Фигура 7А), и после вакцинации/после заражения (Фигура 7В). На этом графике, стимулирование 5×106 клеток считали значимым (…). Все экспериментальные вакцины PCV2/M.hyo дали способный к выявлению IFN-γ ответ после вакцинации. 10% SP-масло (Т02) дало самый сильный IFN-γ ответ после вакцинации. 20% SLCD (Т05) вызывала сам ранний ответ, однако самый слабый ответ на 20-е сутки. Наблюдали значительный ответ после заражения, особенно в группе плацебо. Кроме этого, ответ после заражения был ниже в группах с вакцинированными свиньями, по сравнению с группой плацебо.
Таблица 7 ниже показывает истощение лимфоидной ткани, полученное после экспериментальных обработок, на контрасте с плацебо.
Результаты, представленные в Таблице 7 выше, показывают, что все вакцины дали значительную защиту против истощения лимфоидной ткани. Также, не наблюдали статистически значимых контрастов между обработками вакцин.
Таблица 8 ниже показывает иммуногистохимию, полученную от экспериментальных обработок по сравнению с плацебо.
Результаты, представленные в Таблице 8 выше, показывают, что все вакцины дали значительную защиту против PCV2 колонизации, что подтверждено иммуногистохимией. Также, не наблюдали статистически значимых контрастов между обработками вакцин.
В итоге, результаты, представленные в этом примере, демонстрируют, что растворимый препарат антигена M.hyo не мешает эффективности PCV2. Результаты также демонстрируют, что все экспериментальные композиции вакцин PCV/M.hyo имеют эффективность против заражения PCV2. Кроме этого, результаты указывают на то, что существуют некоторые статистические и цифровые разницы, полученные с разными композициями адъюванта, где 10% SP-масло дало наибольшую эффективность.
Пример 8: Оценка эффективности M.hyo комбинированной вакцины PCV2/M.hvo в одном Флаконе с разными композициями адъюванта
Это исследование проводили для оценки эффективности M.hyo комбинированной вакцины PCV2/M.hyo в одном флаконе с разными композициями адъюванта. Антиген M.hyo комбинировали с цирковирусом свиней (тип 1-тип 2 гибрид, или PCV1-2, убитый вирус) в одном флаконе.
Обработка жидкостей:
Ферментированную жидкость с инактивированным M.hyo (описанную выше в Примере 1) обрабатывали для каждой группы следующим образом.
Т02-Т04: Эти обработки были такими же, как описанные для групп Т02-Т04 в Примере 7 выше.
Т05: формулировали с инактивированными клетками M.hyo (M.hyo бактерии), как описано в Примере 1 выше, под названием "Ферментация и инактивация".
Все экспериментальные вакцины PCV2/M.hyo формулировали с разными композициями адъюванта. Композиции экспериментальной вакцины получали с антигенами M.hyo, обработанными согласно обработок Т02-Т04. Кроме этого, Обработка Т01 отвечала плацебо (стерильный солевой раствор). Обработка Т05 является позитивным контролем, что отвечает вакцине RespiSure® с законченным сроком действия, которая представляет собой вакцину на основе бактерина M.hyo (Pfizer Animal Health).
Эти экспериментальные композиции описаны в Таблице 9 ниже, где символ * означает супернатант М. hyo антигена из глобального посева М. hyo, обработанного Протеином А, и символ** означает Исследуемый Ветеринарный Продукт (ИВП) серийный.
Свиней возрастом 3 недели внутримышечно инокулировали одной дозой разных композиций вакцин, описанных в Таблице 9 выше. Четырнадцать животных включали как в группу плацебо, так и в 10% SP-масло, тринадцать животных включали в группу позитивного контроля, и шестнадцать животных включали как в группу 5% Amphigen, так и в 5% Amphigen + 5% SLCD.
Животных заражали через 21 сутки после вакцинации вирулентным изолятом M.hyo из исследуемой станции. Трупы животных разрезали на 28-е сутки после заражения и легкие удаляли и оценивали на содержание уплотнений совместимых с инфекцией M.hyo. Таблица 10 ниже содержит оценки поражений легких для соответствующих групп обработки. Статистическая значимость определялась за анализом смешанной модели оценок легких в каждой группе.
Как указано в Таблице 10 выше, группа плацебо имела среднюю оценку поражения легких 13,1%, по сравнению с группами 10% SP-масло и 5% Amphigen, которые имели среднюю оценку поражения легких 4,3% и 4,7%, соответственно. Как композиция 10% SP-масло, так и 5% Amphigen уменьшали и/или предотвращали поражение легких. Таким образом, экспериментальные вакцины PCV/M.hyo формулируемые с 10% SP-масло или 5% Amphigen считаются эффективными. PCV2 антиген не препятствует эффективности M.hyo в этих композициях.
Напротив, группа 5% Amphigen + 5% SLCD имела средний уровень поражения легких 12,0%. Что было неприемлемым результатом, поскольку он не отличался по сравнению с плацебо. В результате, экспериментальная вакцина PCV/M.hyo формулируемая с 5% Amphigen + 5% SLCD не считается эффективной.
Отмечено, что в результате уменьшенного количества животных и значительной вариабельности оценки поражения легких, не возможно продемонстрировать статистическое влияние обработки в этом исследовании. По этой причине, решили, что другое исследование разработают для тестирования эффективности M.hyo экспериментальных композиций PCV/M.hyo в 10% SP-масло. Это повторяемое исследование представлено в Примере 9 ниже.
Пример 9: Оценка эффективности M.hyo комбинированной вакцины PCV2/M.hvo в одном Флаконе в 10% SP-масло
Это исследование разработано для оценки эффективности фракции M.hyo в четырех экспериментальных вакцинах PCV2/M.hyo (серийные номера L0711RK11, L0711RK12, L0711RK13 и L0711RK14, в Таблице 11 ниже), полученных согласно разным способам получения M.hyo, которые используют Протеин А для удаления Ig G по сравнению с контрольными вакцинами, полученными согласно стандартному способу получения M.hyo. Каждая из этих четыре экспериментальных вакцин PCV2/M.hyo включает 10% SP-масло в качестве адъюванта.
Обработка жидкостей:
Т02: Инактивированный М. hyopneumoniae антиген как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" в Примере 1 выше.
Т03 и Т04: Формулируемые с инактивированными клетками М. hyopneumoniae, как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" в Примере 1 выше.
Т05: Обработку среды Протеином А использовали для роста М. hyopneumoniae. PPLO (происхождение свиное сердце) получали по инструкции производителей (то есть, 21 г/л) и раствор экстракта дрожжей готовили с концентрацией 21 г/л в USP. Раствор дрожжевого экстракта добавляли к PPLO с концентрацией 6,25%, и смесь стерилизовали, нагревая до 121°С в течение > 30 минут. Гидрохлорид цистеина получали с концентрацией 90 г/л и стерилизовали фильтрованием. Раствор декстрозы получали добавлением 450 г декстрозы на литр USP воды, после чего стерилизовали нагреванием. Для получения конечной среды, свиную сыворотку добавляли к основной среде с концентрацией 10%, после чего цистеин с концентрацией 0,01% и декстрозу с концентрацией 1,0%. Антитела в полной среде PPLO удаляли обработкой протеином А. Коротко, 1 л Протеин А Сефароза (номер партии 17-5199-03 GE Healthcare) паковали в стеклянную колонку (10 X 11,5 см). После удаления буфера для хранения, колонку обрабатывали 2-мя объемами колонки 1М. Смолу уравновешивали 5-ю объемами колонки буфера 50 мМ NaPO4, 1М NaCl (pH 7,0). 15 л Полной PPLO среды загружали на смолу при линейной скорости потока 140 см/час. Прогонку колонки собирали и стерилизовали фильтрованием через фильтр 0,2 микрон (Sartorius). Обработанную среду использовали для размножения клеток М. Hyopneumoniae, как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" выше. Полностью инактивированную культуру (включая клетки) формулировали в конечную вакцину.
Т06: Инактивированные клетки М. hyopneumoniae получали, как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" в Примере 1 выше. Инактивированную ферментационную жидкость центрифугировали при ~20,000×g (Sorvall RC5B) в течение 30 мин., и супернатант стерилизовали фильтрацией 0,2 мкМ. 115 мл Протеин А смолы (номер партии 12-1279-04, MAbSelect, GE Healthcare) паковали в хроматографическую колонку (5×6 см). После удаления буфера для хранения и обработки двумя объемами колонки 1М, смолу уравновешивали 5-ю объемами колонки буфера 50 мМ NaPO4/1M NaCl, pH 7,01. Приблизительно 1,2 литры очищенной/профильтрованной жидкости, которая содержит антиген М. Hyopneumoniae, пропускали через смолу со скоростью потока 120 см/час. Пропущенную жидкость собирали и стерилизовали с помощью фильтра 0,2 мкМ.
Т07: Инактивированные клетки М. hyopneumoniae получали, как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" в Примере 1 выше. Инактивированную ферментационную жидкость очищали фильтрацией тангенциальным потоком. Коротко, фильтр из полиэфир сульфона (GE HealthCare, номер партии 56-4102-71) с номинальным размером пор 0,2 мкМ санировали 0.5N раствором гидроксида натрия, после чего тщательным образом промывали стерильной USP водой. Инактивированную культуральную жидкость микоплазм вводили в аппарат со скоростью рециркуляции, которая приближалась к 14,6 л/мин. и трансмембранным давлением 2-3,4 PSI. Очистку осуществляли при комнатной температуре. Пермеат фильтра собирали и хранили при 2-8°С до последующей обработки. 115 мл Протеин А смола (номер партии 12-1279-04, MAbSelect, GE Healthcare) паковали в хроматографическую колонку (5×6 см). После удаления буфера для хранения и обработки двумя объемами колонки 1М, смолу уравновешивали 5-ю объемами колонки буфера 50 мМ NaPO4/1M NaCl, pH 7,01. Приблизительно 2,3 л очищенной/профильтрованной жидкости, которая содержит антиген М. Hyopneumoniae, пропускали через смолу со скоростью потока 120 см/час. Пропущенную жидкость собирали и стерилизовали с помощью фильтра 0,2 мкМ.
Т08: Инактивированные клетки М. hyopneumoniae получали, как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" выше. Инактивированную ферментационную жидкость центрифугировали при ~20,000×g (Sorvall RC5B) в течение 30 мин., и супернатант стерилизовали через фильтр 0,2 мкМ. 115 мл Протеин А Сефароза (номер партии 17-5199-03 GE Healthcare) паковали в хроматографическую колонку (5×6 см). После удаления буфера для хранения и обработки двумя объемами колонки 1М, смолу уравновешивали 5-ю объемами колонки буфера 50 мМ NaPO4/1M NaCl, pH 7,01. Приблизительно 1,2 л очищенной/профильтрованной жидкости, которая содержит антиген М. Hyopneumoniae, пропускали сквозь смолу со скоростью потока 120 см/час. Пропущенную жидкость собирали и стерилизовали с помощью фильтра 0,2 мкМ.
Композиции экспериментальной вакцины получали с антигенами M.hyo, обработанными, согласно обработок Т02-Т08 выше. Т02, Т03 и Т04 отвечают позитивным контролям. Кроме этого, Обработка Т01 отвечала плацебо (стерильный солевой раствор).
Эти экспериментальные композиции описаны в Таблице 11 ниже. M.hyo антиген отвечает M.hyo антигену из супернатанта глобального посева M.hyo, обработанного Протеином А. Информация в разделе "Обработка Протеином А" указывает на то, или супернатант M.hyo обрабатывали Протеином А перед или после ферментации.
Свиней возрастом 3 недели внутримышечно инокулировали одной дозой разных композиций вакцин, описанных в Таблице 11 выше. В каждую группу обработки включали по 18 свиней.
Животных заражали через 21 сутки после вакцинации вирулентным изолятом M.hyo из исследуемой станции. Трупы животных разрезали на 28-е сутки после заражения, и легкие удаляли и оценивали на содержание уплотнений совместимых с инфекцией M.hyo. Фигура 8 (А и В) показывают оценку поражения легких для соответствующих групп обработки. Статистическая значимость определялась по анализу смешанной модели оценок легких в каждой группе.
Результаты поражения легких, показанные на Фигурах 8А и 8В, указывают на то, что среди всех обработок только две (Т07 и Т08) имели 100% свиней в категории <5% поражения легких. Отмечено, что в этом исследовании наблюдали значительную статистическую разницу.
Результаты данного примера демонстрируют значительную эффективность M.hyo в экспериментальной композиции PCV2/M.hyo в одном флаконе, которая использует супернатант M.hyo, обработанный Протеином А, и SP-масло как адъювант. Кроме этого, Пример 7 выше демонстрирует PCV2 эффективность в композиции PCV2/M.hyo в одном флаконе, которая использует супернатант M.hyo, обработанный Протеином А, и SP-масло как адъювант.Была продемонстрирована эффективность как M.hyo, так и PCV2 в комбинациях PCV2/M.hyo в одном флаконе, которые используют супернатант M.hyo, обработанный Протеином А.
Пример 10: In vivo безопасность экспериментальных вакцин PCV2/M.hvo
Это исследование осуществляли для оценки in vivo безопасности экспериментальных вакцин PCV2-M.hyo, формулируемых с максимальной дозой антигена в разных композициях адъюванта, на животном хозяине, которые вводили животным в очень молодом возрасте (возрастом 3 недели). Разные платформы адъювантов оценивали для определения того, какая из платформ будет обеспечивать приемлемый профиль безопасности на основе температуры, реакций по месту введения инъекции и клинических наблюдений. Композицию 20% SLCD/10% SP-масло использовали в качестве позитивного ("небезопасного") контроля исходя из предыдущих данных относительно реакций по месту введения инъекции, которые наблюдали для этой группы исследования и других.
Обработка жидкостей:
Все вакцины получали с инактивированным антигеном М. Hyopneumoniae, как описано в разделе "Ферментация и Инактивация" в Примере 1. Использовали полный материал антигена M.hyo в силу того, что известно, что он содержит растворимый и нерастворимый антигены M.hyo, кроме иммуноглобулинов и иммунокомплексов, которые будут удалены при обработке протеином А. Справедливо заключить, что удаление кусков нерастворимых клеток и иммуноглобулинов и иммунокомплексов только дополнительно улучшит безопасность композиций. Целью этого исследования было жесткое тестирование безопасности разных композиций адъюванта, которые содержат PCV2 антиген и M.hyo антиген. PCV2 и M.hyo антигены формулировали с максимальным уровнем высвобождения для дополнительной оценки безопасности. Эти экспериментальные композиции описаны в Таблице 12 ниже. ИВП означает Исследуемый Ветеринарный Продукт (ИВП).
Параметры безопасности, примененные в этом исследовании, включали профиль ректальной температуры и реакцию по месту инъекции. Результаты этого исследования указывают на то, что все платформы адъюванта обеспечивали приемлемые профили безопасности в рамках профиля ректальной температуры и клинических наблюдений (результаты не приведены). Только 20% SLCD+10% SP-масло (то есть, позитивный контроль) значительно отличался от вакцины из плацебо и имел несколько жестких реакций по месту инъекции (результаты не приведены).
Пример 11: Получение антигена M.hyo. обработанного Протеином А. для базовых исследований
Фигура 9 является блок-схемой, которая показывает один вариант воплощения способа получения, использованного для приготовления PCV2 совместимого антигена M.hyo, обработанного протеином А. Инактивированные полные культуры M.hyo очищали от клеток фильтрацией в тангенциальном потоке. Коротко, фильтр полиэфир сульфона (GE Healthcare, номер партии 56-4102-49) с номинальным размером пор 0,45 мкМ санировали 0.5N раствором гидроксида натрия, после чего тщательным образом промывали стерильной USP водой. Инактивированную культуральную жидкость микоплазм вводили в аппарат со скоростью рециркуляции, которая приближается до 11,0 л/мин. и трансмембранным давлением ~5 PSI. Очистку осуществляли при комнатной температуре. Пермеат фильтра собирали и хранили при 2-8°С до последующей обработки.
После очистки, жидкость с антигеном обрабатывали протеин А смолой для уменьшения уровня антитела. Коротко, MAbSelect протеин А смолу (GE Healthcare) паковали в стеклянную колонку до уровня 12 см. Смолу уравновешивали 5-ю объемами колонки 50 мМ фосфата натрия, 250 мМ буфера NaCl (pH 7,0). Жидкость с антигеном, эквивалент до 10 объемов колонки, загружали на смолу с линейной скоростью потока 100 см/час. Пропущенную через колонку жидкость собирали и стерилизовали фильтрованием через фильтр 0,2 микрон. Восстановление колонки получали с помощью последующих 3-х объемов колонки 25 мМ раствора ацетата при pH 3,7, после чего 4-мя объемами колонки 1М раствора. Уровни анти-PCV2 антител и антигена М. hyopneumoniae измеряли в конечной антигенной жидкости с помощью количественной ELISA PCV2 специфического антитела и ELISA р46 антигена, соответственно.
Пример 12: Оценка вирулицидной активности против вируса PRRS
Исследование, представленное в данном примере, разработано для оценки разных платформ адъювантов на вирулицидную активность против вируса PRRS. Начальные эксперименты сфокусированы только на адъюванте (то есть, композиции не содержали антигены PCV или M.hyo). Оценка адъюванта для вирулицидной активности против PRRS представлена на Фигуре 10. Предыдущие оценки вирулицидности указывают на то, что 10% SP-масло, 0,2% Carbopol и 2,5% Amphigen являются не вирулицидными против вируса PRRS. Напротив, 20% SLCD адъювант оказался вирулицидным против вируса PRRS.
Следующие исследования осуществляли для оценки того или композиции PCV/M.hyo с разными платформами адъювантов являются вирулицидными против вируса PRRS. Эти результаты представлены в Таблице 13 ниже, где символ * указывает на те серийные вакцины, которые оказались вирулицидными против вируса PRRS.
Результаты представлены в Таблице 13 выше указывают на то, что 10% SP-масло является невирулицидным против вируса PRRS.
Также серийные вакцины PCV/M.hyo получали, используя 10% SP-масло как адъювант (Таблица 14). Антигенную активность этих вакцин сравнивали со сравнительной серийной вакциной PCV/M.hyo (L1211RK15), которая содержала 0,688% 20Х концентрированного антигена PCV2 (полученного как описано в Примере 11); и 9,40% антигена M.hyo, полученного как описано в Примере 11, описана выше. Результаты, показанные в Таблице 14 ниже, также указывают на то, что 10% SP-масло является невирулицидным против вируса PRRS. Значения тест образца в Таблице 14 все были более высокими (отметка +) чем вирулицидность контроля, что выражено в геометрически среднем титре (GMT) приблизительно 5,9±0,5 log/мл.
Результаты, представленные в этом примере, демонстрируют, что 10% SP-масло является не вирулицидным против вируса PRRS. Результаты, представленные в этом примере, также демонстрируют, что композиция PCV/M.hyo с адъювантом 10% SP-масло была среди тех вакцин, которые считались не вирулицидными против вируса PRRS (Таблица 13 та Таблица 14). Подытоживая, композиция PCV/M.hyo с адъювантом 10% SP-масло считается эффективной платформой для трехвалентной комбинации, которая содержит PCV, M.hyo и вирус PRRS.
Пример 13: Получение комбинированной вакцины PCV/M.hvo/PRRS
Композиция PCV/M.hyo с адъювантом, который является не вирулицидным против вируса PRRS (смотреть Таблицы 13 и 14 выше), обеспечивается в виде готовой к использованию жидкой композиции в одном флаконе. Эта композиция PCV/M.hyo в одном флаконе использует супернатант M.hyo, обработанный Протеином А. Как M.hyo, так и PCV2 продемонстрировали эффективность в таких композициях PCV2/M.hyo, которые используют супернатант M.hyo, обработанный Протеином А (смотреть Примеры 7-9). В данном примере, эта двухвалентная композиция PCV2/M.hyo комбинирована с моновалентным антигеном вируса PRRS.
В одном варианте воплощения, комбинация PCV/M.hyo в 10% SP-масло и соответствующие серийные вакцины L0711RK11, L0711RK12, L0711RK13 и L0711RK14, в Таблице 11 выше обеспечиваются в виде готовой к использованию жидкой композиции в одном флаконе. Результаты представленные в Примере 12 выше демонстрируют, что 10% SP-масло является не вирулицидным против вируса PRRS. Пример 12 также демонстрирует, что композиции PCV2/M.hyo с адъювантом 10% SP-масло были среди тех серийных вакцин, которые оказались не вирулицидными против вируса PRRS. В данном примере, такая PCV2/M.hyo жидкая композиция в одном флаконе используется для регидратации лиофилизированной генетически модифицированной живой вирусной композиции PRRS, которая содержится во втором флаконе, так что все антигены содержатся в единственном флаконе перед введением свинье в приемлемом возрасте (например, возрасте 3 недели или старшие).
В одном варианте воплощения, вирус PRRS имеет геномную последовательность, которая соответствует SEQ ID NO: 16 или ее варианту. В другом варианте воплощения, вирус PRRS, примененный в трехвалентной композиции, является изолятом вируса PRRS, обозначенным ISU-55, который депонируется в АТСС под номером доступа VR 2430. Пригодные количества соответствующих антигенов описаны в данном документе. Желательно, все антигены вводят свинье с однократным введением.
Claims (18)
1. Иммуногенная композиция для индуцирования иммунного ответа у субъекта против заболевания, вызванного Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo), которая содержит эффективное количество растворимой части цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo); где растворимая часть цельноклеточного препарата M.hyo содержит M.hyo-специфические растворимые протеиновые антигены и является отделенной от нерастворимого клеточного материала, в сущности является свободной как от (i) lg G, так и от (ii) иммунокомплексов, состоящих из антигена, присоединенного к иммуноглобулину.
2. Композиция по п. 1, где растворимую часть препарата M.hyo обрабатывали протеином-А или протеином-G перед добавлением к иммуногенной композиции.
3. Композиция по п. 1, где композиция дополнительно содержит адъювант.
4. Композиция по п. 3, где адъювант выбирают из группы, которая состоит из следующих: адъювант масло в воде, полимерный и водный адъювант, адъювант вода в масле, адъювант гидроксид алюминия, адъювант витамин Е и их комбинации.
5. Композиция по п. 1, где композиция дополнительно содержит фармацевтически приемлемый носитель.
6. Композиция по п. 1, где композиция вызывает защитный иммунный ответ против M.hyo при введении одной дозы.
7. Способ иммунизации свиньи против Mycoplama hyopneumoniae (M.hyo), который включает введение свинье композиции по п. 1.
8. Способ по п. 7, где композицию вводят внутримышечно, интрадермально, трансдермально или подкожно.
9. Способ по п. 7, где композицию вводят в виде одной дозы.
10. Способ по п. 7, где композицию вводят свиньям, которые имеют материнские антитела против M.hyo.
11. Способ по п. 7, где композицию вводят свиньям в возрасте 3 недели или старшим.
12. Набор для осуществления способа по п. 7, который включает: флакон, содержащий иммуногенную композицию, которая содержит растворимую часть цельноклеточного препарата Mycoplasma hyopneumoniae (M.hyo), где растворимая часть цельноклеточного препарата M.hyo содержит M.hyo-специфические растворимые протеиновые антигены и является отделенной от нерастворимого клеточного материала и в сущности является свободной как от (i) lg G, так и от (ii) иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин; и инструкцию для пользователя, содержащую информацию касательно введения иммуногенной композиции.
13. Способ получения иммуногенной композиции по п. 1, где способ включает:
i) культивирование M.hyo в пригодной среде в течение периода в диапазоне 18-144 часа;
ii) потом инактивацию культуры M.hyo;
iii) сбор жидкости инактивированной культуры, где жидкость инактивированной культуры содержит цельноклеточный препарат M.hyo, который содержит как растворимую жидкую фракцию, так и нерастворимый клеточный материал;
iv) отделение растворимой жидкой фракции от нерастворимого клеточного материала; и
v) существенное удаление как lg G, так и иммунокомплексов антиген/иммуноглобулин из отделенной растворимой жидкой фракции.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261620165P | 2012-04-04 | 2012-04-04 | |
US61/620,165 | 2012-04-04 | ||
PCT/US2013/035083 WO2013152081A1 (en) | 2012-04-04 | 2013-04-03 | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2014140107A RU2014140107A (ru) | 2016-05-27 |
RU2644254C2 true RU2644254C2 (ru) | 2018-02-08 |
Family
ID=48087777
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2014140107A RU2644254C2 (ru) | 2012-04-04 | 2013-04-03 | Вакцина mycoplasma hyopneumoniae |
Country Status (32)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US9120859B2 (ru) |
EP (2) | EP4039271A1 (ru) |
JP (1) | JP6271502B2 (ru) |
KR (1) | KR101747507B1 (ru) |
CN (1) | CN104271154B (ru) |
AR (1) | AR090611A1 (ru) |
AU (1) | AU2013243535C1 (ru) |
BR (1) | BR112014024533B1 (ru) |
CA (1) | CA2869603C (ru) |
CL (1) | CL2014002674A1 (ru) |
CO (1) | CO7160026A2 (ru) |
CR (1) | CR20140436A (ru) |
CY (1) | CY1124982T1 (ru) |
DK (1) | DK2833908T3 (ru) |
ES (1) | ES2905302T3 (ru) |
GT (1) | GT201400210A (ru) |
HK (1) | HK1207284A1 (ru) |
HR (2) | HRP20220175T1 (ru) |
HU (1) | HUE058321T2 (ru) |
LT (1) | LT2833908T (ru) |
MX (2) | MX336504B (ru) |
MY (1) | MY166792A (ru) |
NI (1) | NI201400117A (ru) |
PH (1) | PH12014502250A1 (ru) |
PL (1) | PL2833908T3 (ru) |
PT (1) | PT2833908T (ru) |
RS (1) | RS62881B1 (ru) |
RU (1) | RU2644254C2 (ru) |
SI (1) | SI2833908T1 (ru) |
TW (1) | TWI602575B (ru) |
UA (1) | UA114502C2 (ru) |
WO (1) | WO2013152081A1 (ru) |
Families Citing this family (26)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8546149B2 (en) | 2010-08-27 | 2013-10-01 | Intervet Inc. | Potency test for vaccine formulations |
UA114504C2 (uk) * | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
UA114503C2 (uk) * | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
US9120859B2 (en) * | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
WO2014105672A1 (en) | 2012-12-28 | 2014-07-03 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Method of making a mycoplasma vaccine |
EA038206B1 (ru) * | 2012-12-28 | 2021-07-23 | Бёрингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх | Иммуногенная композиция, содержащая антигены микоплазм |
US9649370B2 (en) | 2013-05-08 | 2017-05-16 | Protatek International, Inc. | Vaccine for PCV2 and mycoplasma |
CN104248759B (zh) * | 2013-11-19 | 2017-05-10 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 一种疫苗组合物及其制备方法和应用 |
CN105792841B (zh) * | 2013-11-21 | 2019-07-26 | 财团法人农业科技研究院 | 防治霉浆菌感染的组合物 |
BR102014014727B1 (pt) * | 2014-06-16 | 2018-04-03 | Ouro Fino Saúde Animal Ltda | COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae, GENE SINTÉTICO CODIFICANTE DO COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae, COMPOSIÇÃO ANTIGÊNICA, PROCESSO DE OBTENÇÃO DE UM COMPLEXO DE POLIPROTEÍNAS IMUNOGÊNICAS DE M. hyopneumoniae |
CN104324370B (zh) * | 2014-09-30 | 2019-12-20 | 普莱柯生物工程股份有限公司 | 疫苗组合物及其制备方法和应用 |
KR20180094116A (ko) * | 2016-01-07 | 2018-08-22 | 유니버시테이트 젠트 | 브라키스피라 하이오디센테리애의 백신 균주 |
JP2019509302A (ja) * | 2016-03-23 | 2019-04-04 | インターベット インターナショナル ベー. フェー. | アルブミンを含むpcv2及びprrsウイルス感染症に対する混合ワクチン |
CN106497850B (zh) * | 2016-12-20 | 2019-10-29 | 天津瑞普生物技术股份有限公司 | 一种纯化猪肺炎支原体的方法 |
BR112019012504A2 (pt) | 2016-12-23 | 2019-11-19 | Intervet Int Bv | vacina de combinação para suínos |
WO2019121916A1 (en) * | 2017-12-22 | 2019-06-27 | Hipra Scientific, S.L.U. | Intradermal combination vaccine against mycoplasma and porcine circovirus |
AU2020290984A1 (en) | 2019-06-10 | 2022-01-20 | Elanco Us Inc. | Mycoplasma media formulations |
WO2021018806A1 (en) * | 2019-07-26 | 2021-02-04 | Ceva Sante Animale | Igg-depleted porcine serum and the uses thereof |
BR112023001324A2 (pt) | 2020-07-24 | 2023-02-14 | Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc | Combinação de vacina de suíno |
KR20220168097A (ko) | 2021-06-15 | 2022-12-22 | 엘지전자 주식회사 | 조리기기 |
KR20220168101A (ko) | 2021-06-15 | 2022-12-22 | 엘지전자 주식회사 | 조리기기 |
KR20220168100A (ko) | 2021-06-15 | 2022-12-22 | 엘지전자 주식회사 | 조리기기 |
KR20220168098A (ko) | 2021-06-15 | 2022-12-22 | 엘지전자 주식회사 | 조리기기 |
KR20220168102A (ko) | 2021-06-15 | 2022-12-22 | 엘지전자 주식회사 | 조리기기 |
KR20220168099A (ko) | 2021-06-15 | 2022-12-22 | 엘지전자 주식회사 | 조리기기 |
CN114134098A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-03-04 | 成都史纪生物制药有限公司 | 一种猪肺炎支原体的灭活方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996028472A1 (en) * | 1995-03-16 | 1996-09-19 | The University Of Melbourne | Antigen composition against mycoplasma |
EA009901B1 (ru) * | 2001-07-02 | 2008-04-28 | Пфайзер Продактс Инк. | Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae |
Family Cites Families (72)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4606918A (en) | 1983-08-22 | 1986-08-19 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants |
US4681870A (en) * | 1985-01-11 | 1987-07-21 | Imre Corporation | Protein A-silica immunoadsorbent and process for its production |
JPH0832637B2 (ja) | 1985-02-14 | 1996-03-29 | アクゾ・エヌ・ヴエー | 合成免疫原 |
EP0263840A1 (de) | 1986-03-13 | 1988-04-20 | ZF FRIEDRICHSHAFEN Aktiengesellschaft | Einrichtung zum bestrahlen von flüssigkeiten mit radioaktiven strahlen |
US5084269A (en) | 1986-11-06 | 1992-01-28 | Kullenberg Fred W | Adjuvant for dose treatment with antigens |
EP0283085B1 (en) | 1987-03-17 | 1992-11-11 | Akzo N.V. | Adjuvant mixture |
EP0283840A3 (en) | 1987-03-26 | 1989-08-09 | Ml Technology Ventures, L.P. | Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor |
US5252328A (en) * | 1987-03-26 | 1993-10-12 | Martin Marietta Energy Systems, Inc. | Mycoplasma hyopneumoniae antigen and uses therefor |
IE63692B1 (en) | 1987-11-03 | 1995-05-31 | Syntex Inc | Vaccine adjuvant |
US4985243A (en) | 1988-01-20 | 1991-01-15 | Ml Technology Ventures, L.P. | Composition and method for protecting against diseases caused by microorganisms |
US5240706A (en) | 1989-04-07 | 1993-08-31 | Ml Technology Ventures, L.P. | Intranasal administration of Mycoplasma hyopneumoniae antigen |
ZA906806B (en) | 1989-08-31 | 1991-06-26 | Ici Australia Operations | Plants |
US6113916A (en) | 1990-05-29 | 2000-09-05 | American Cyanamid Company | Method of enhancing cell mediated immune responses |
JP3187419B2 (ja) | 1990-05-29 | 2001-07-11 | アメリカン・サイアナミド・カンパニー | ブタ肺炎ワクチンおよびその製造方法 |
US5695769A (en) | 1990-06-13 | 1997-12-09 | Pfizer Inc. | Pasteurella multocida toxoid vaccines |
US5565205A (en) | 1990-08-16 | 1996-10-15 | Solvay Animal Health, Inc. | Inactivated Mycoplasma hypopneumoniae bacterin and method of use thereof |
CA2103460C (en) | 1991-06-06 | 2000-09-26 | Gert Wensvoort | Causative agent of the mystery swine disease, vaccine compositions and diagnostic kits |
CA2116348C (en) | 1991-08-26 | 2001-07-03 | James E. Collins | Sirs vaccine and diagnosis method |
WO1993007898A1 (en) | 1991-10-14 | 1993-04-29 | Akzo Nobel N.V. | Porcine reproductive respiratory syndrome vaccine and diagnostic |
CA2123222C (en) | 1991-11-15 | 2001-02-27 | Donald A. Dearwester | Gram-negative bacterial vaccines |
FR2686097B1 (fr) | 1992-01-14 | 1994-12-30 | Rhone Merieux | Preparation d'antigenes et de vaccins de virus de la mystery disease, antigenes et vaccins obtenus pour la prevention de cette maladie. |
US5338543A (en) | 1992-02-27 | 1994-08-16 | Ambico, Inc. | Thimerosal inactivated mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
US5534256A (en) | 1992-07-02 | 1996-07-09 | University Of Saskatchewan | Haemophilus somnus outer membrane protein extract enriched with iron-regulated proteins |
US6773908B1 (en) | 1992-10-30 | 2004-08-10 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
US6380376B1 (en) | 1992-10-30 | 2002-04-30 | Iowa State University Research Foundation | Proteins encoded by polynucleic acids of porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
US6251397B1 (en) | 1992-10-30 | 2001-06-26 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Proteins encoded by polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus and immunogenic compositions containing the same |
US5695766A (en) | 1992-10-30 | 1997-12-09 | Iowa State University Research Foundation | Highly virulent porcine reproductive and respiratory syndrome viruses which produce lesions in pigs and vaccines that protect pigs against said syndrome |
US6592873B1 (en) | 1992-10-30 | 2003-07-15 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Polynucleic acids isolated from a porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) and proteins encoded by the polynucleic acids |
ES2074950B1 (es) | 1993-09-17 | 1996-03-16 | Iberica Cyanamid | Vacuna para la prevencion de la enfermedad reproductiva y respiratoria de la cerda. |
CA2189979C (en) | 1994-05-10 | 2011-04-19 | Hsien-Jue Chu | Improved modified live brsv vaccine |
BE1008978A5 (fr) | 1994-12-27 | 1996-10-01 | Solvay | Adjuvants pour vaccins. |
US5788962A (en) | 1995-01-17 | 1998-08-04 | The Curators Of The University Of Missouri | DNA sequences coding for mycoplasma hyopneumoniae surface antigens, corresponding proteins and use in vaccines and diagnostic procedures |
US5820869A (en) | 1995-06-07 | 1998-10-13 | American Home Products Corporation | Recombinant raccoon pox viruses and their use as an effective vaccine against feline immunodeficiency virus infection |
DE19601754A1 (de) | 1996-01-19 | 1997-07-24 | Hoechst Ag | Dictyocaulus viviparus Antigen zur Diagnose des Lungenwurmbefalls und zur Vakzinierung |
US5846735A (en) | 1996-04-18 | 1998-12-08 | University Of Iowa Research Foundation | Hepatitis C virus Fc-binding function |
GB9622159D0 (en) | 1996-10-24 | 1996-12-18 | Solvay Sociutu Anonyme | Polyanionic polymers as adjuvants for mucosal immunization |
EP0839912A1 (en) | 1996-10-30 | 1998-05-06 | Instituut Voor Dierhouderij En Diergezondheid (Id-Dlo) | Infectious clones of RNA viruses and vaccines and diagnostic assays derived thereof |
CA2274495C (en) | 1996-12-20 | 2009-06-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Uspa1 and uspa2 antigens of moraxella catarrhalis |
EP1034004A1 (en) | 1997-11-26 | 2000-09-13 | Iowa State University Research Foundation, Inc. | Recombinant mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
FR2772047B1 (fr) | 1997-12-05 | 2004-04-09 | Ct Nat D Etudes Veterinaires E | Sequence genomique et polypeptides de circovirus associe a la maladie de l'amaigrissement du porcelet (map), applications au diagnostic et a la prevention et/ou au traitement de l'infection |
US6342231B1 (en) | 1998-07-01 | 2002-01-29 | Akzo Nobel N.V. | Haemophilus parasuis vaccine and diagnostic |
NZ513289A (en) | 1998-12-22 | 2003-04-29 | Pfizer Prod Inc | Infectious cDNA clone of north american procine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) virus and uses thereof |
US6632439B2 (en) | 1999-09-29 | 2003-10-14 | Novartis Animal Health, Inc. | Fusobacterium necrophorum vaccine and method for making such vaccine |
US6585981B1 (en) | 2000-07-27 | 2003-07-01 | Regents Of The University Of Minnesota | Temperature-sensitive live vaccine for Mycoplasma hyopneumoniae |
MY129765A (en) | 2000-12-19 | 2007-04-30 | Wyeth Corp | Improved mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
US7018638B2 (en) | 2000-12-19 | 2006-03-28 | Wyeth | Mycoplasma hyopneumoniae bacterin vaccine |
BR0211049A (pt) * | 2001-07-02 | 2004-07-20 | Pfizer Prod Inc | Método de tratamento ou prevenção de doenças ou disfunções e uso de mycoplasma hyopneumoniae |
US7276353B2 (en) | 2001-12-12 | 2007-10-02 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
US7279166B2 (en) * | 2001-12-12 | 2007-10-09 | Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. | Chimeric infectious DNA clones, chimeric porcine circoviruses and uses thereof |
BR0312274A (pt) | 2002-06-28 | 2007-06-19 | Univ Iowa State Res Found Inc | polipeptìdeos imunogênicos de mycoplasma hyopneumoniae |
KR101146545B1 (ko) * | 2003-07-24 | 2012-07-05 | 메리얼 리미티드 | 수중유 에멀젼을 포함하는 백신 제형물 |
US8449989B2 (en) | 2003-10-17 | 2013-05-28 | Lg Chem, Ltd. | Organic compound and organic light emitting device using the same |
RU2007130801A (ru) | 2005-01-13 | 2009-02-20 | Берингер Ингельхайм Ветмедика Гмбх (De) | Улучшенные вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней (prrs) |
US20080248061A1 (en) * | 2005-09-09 | 2008-10-09 | Intervet International B.V. | Pcv-2 Vaccine |
EP1792996A1 (en) | 2005-12-01 | 2007-06-06 | Consejo Superior de Investigaciones Cientificas | Nucleic acid sequences encoding vaccines against Porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) |
PL1968630T3 (pl) | 2005-12-29 | 2018-08-31 | Boehringer Ingelheim Vetmedica, Inc. | Multiwalentne immunogenne kompozycje PCV2 |
WO2007116032A1 (en) | 2006-04-10 | 2007-10-18 | Intervet International B.V. | Vaccine against mycoplasma prrsv |
US20090017064A1 (en) * | 2007-07-10 | 2009-01-15 | Wyeth | Methods and Compositions for Immunizing Pigs Against Porcine Circovirus |
MX2010005014A (es) * | 2007-11-06 | 2010-06-30 | Wyeth Llc | Vacuna viva avirulenta de mycoplasma hyopneumoniae con adyuvante. |
EP2242511A4 (en) | 2008-01-23 | 2012-10-24 | Boehringer Ingelheim Vetmed | IMMUNOGENIC COMPOSITIONS OF MYCOPLASMA HYOPNEUMONIAE PCV2, AND METHODS FOR PRODUCING SUCH COMPOSITIONS |
TWI449533B (zh) | 2008-04-18 | 2014-08-21 | Intervet Int Bv | 防備胞內勞森菌(Lawsonia intracellularis)、豬肺炎黴漿菌(Mycoplasma hyopneumoniae)及豬環狀病毒(Porcine circo virus)用疫苗 |
US8444989B1 (en) | 2008-04-18 | 2013-05-21 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | One dose vaccination against mycoplasma infections of pigs |
JP2012505653A (ja) | 2008-10-16 | 2012-03-08 | ファイザー・インク | トルクテノウイルス(TorqueTenoVirusu:TTV)単離株および組成物 |
DK2569007T3 (en) | 2010-05-11 | 2016-01-25 | Intervet Int Bv | VACCINE AGAINST Mycoplasma hyopneumoniae SUITABLE FOR ADMINISTRATION IN PRESENCE OF maternally derived antibodies |
BR112013004594B1 (pt) * | 2010-08-27 | 2020-07-28 | Intervet International B. V. | método para a determinação de um conteúdo de antígeno |
US8546149B2 (en) | 2010-08-27 | 2013-10-01 | Intervet Inc. | Potency test for vaccine formulations |
UA108902C2 (uk) | 2010-11-10 | 2015-06-25 | Вірус північноамериканського репродуктивного та респіраторного синдрому свиней (prrs) та його застосування | |
MX362166B (es) | 2012-03-07 | 2018-12-14 | Ceva Sante Animale | Nueva vacuna veterinaria. |
UA114504C2 (uk) * | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv, mycoplasma hyopneumoniae та prrs |
UA114503C2 (uk) * | 2012-04-04 | 2017-06-26 | Зоетіс Сервісіз Ллс | Комбінована вакцина pcv та mycoplasma hyopneumoniae |
US9120859B2 (en) * | 2012-04-04 | 2015-09-01 | Zoetis Services Llc | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine |
KR102012109B1 (ko) * | 2012-05-17 | 2019-08-19 | 조에티스 엘엘씨 | 이유 전 돼지 생식기 호흡기 증후군(prrs) 바이러스에 대한 효과적인 백신접종 |
-
2013
- 2013-03-26 US US13/850,318 patent/US9120859B2/en active Active
- 2013-04-02 TW TW102111967A patent/TWI602575B/zh active
- 2013-04-03 DK DK13715881.2T patent/DK2833908T3/da active
- 2013-04-03 CA CA2869603A patent/CA2869603C/en active Active
- 2013-04-03 RS RS20220098A patent/RS62881B1/sr unknown
- 2013-04-03 PL PL13715881T patent/PL2833908T3/pl unknown
- 2013-04-03 RU RU2014140107A patent/RU2644254C2/ru active
- 2013-04-03 KR KR1020147030860A patent/KR101747507B1/ko active IP Right Grant
- 2013-04-03 ES ES13715881T patent/ES2905302T3/es active Active
- 2013-04-03 HR HRP20220175TT patent/HRP20220175T1/hr unknown
- 2013-04-03 MY MYPI2014702899A patent/MY166792A/en unknown
- 2013-04-03 SI SI201331966T patent/SI2833908T1/sl unknown
- 2013-04-03 UA UAA201410837A patent/UA114502C2/uk unknown
- 2013-04-03 JP JP2015504698A patent/JP6271502B2/ja active Active
- 2013-04-03 HU HUE13715881A patent/HUE058321T2/hu unknown
- 2013-04-03 LT LTEPPCT/US2013/035083T patent/LT2833908T/lt unknown
- 2013-04-03 MX MX2014012014A patent/MX336504B/es unknown
- 2013-04-03 AU AU2013243535A patent/AU2013243535C1/en active Active
- 2013-04-03 PT PT137158812T patent/PT2833908T/pt unknown
- 2013-04-03 CN CN201380023655.4A patent/CN104271154B/zh active Active
- 2013-04-03 EP EP21216402.4A patent/EP4039271A1/en active Pending
- 2013-04-03 BR BR112014024533-9A patent/BR112014024533B1/pt active IP Right Grant
- 2013-04-03 WO PCT/US2013/035083 patent/WO2013152081A1/en active Application Filing
- 2013-04-03 EP EP13715881.2A patent/EP2833908B1/en active Active
- 2013-04-04 AR ARP130101111 patent/AR090611A1/es not_active Application Discontinuation
-
2014
- 2014-09-22 CR CR20140436A patent/CR20140436A/es unknown
- 2014-10-03 NI NI201400117A patent/NI201400117A/es unknown
- 2014-10-03 HR HRP20140957AA patent/HRP20140957A2/hr not_active Application Discontinuation
- 2014-10-03 CL CL2014002674A patent/CL2014002674A1/es unknown
- 2014-10-03 CO CO14219860A patent/CO7160026A2/es unknown
- 2014-10-03 PH PH12014502250A patent/PH12014502250A1/en unknown
- 2014-10-03 GT GT201400210A patent/GT201400210A/es unknown
- 2014-10-03 MX MX2015015466A patent/MX354756B/es unknown
-
2015
- 2015-05-14 US US14/712,393 patent/US9650600B2/en active Active
- 2015-07-27 HK HK15107181.7A patent/HK1207284A1/xx unknown
-
2017
- 2017-04-06 US US15/480,949 patent/US10206991B2/en active Active
-
2019
- 2019-01-16 US US16/249,031 patent/US10668139B2/en active Active
-
2020
- 2020-04-27 US US16/859,093 patent/US11141472B2/en active Active
-
2022
- 2022-02-11 CY CY20221100121T patent/CY1124982T1/el unknown
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1996028472A1 (en) * | 1995-03-16 | 1996-09-19 | The University Of Melbourne | Antigen composition against mycoplasma |
EA009901B1 (ru) * | 2001-07-02 | 2008-04-28 | Пфайзер Продактс Инк. | Способ лечения или предупреждения заболевания или нарушения у животного, вызванного mycoplasma hyopneumoniae |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
AUSTEN Y. CHEN et al., Evaluation of immune response to recombinant potential protective antigens of Mycoplasma hyopneumoniae delivered as cocktail DNA and/or recombinant protein vaccines in mice, Vaccine 2008, Vol.26, pp.4372-4378. * |
SI’ DJORDJEVIC et al., Serum and mucosal antibody responses and protection in pigs vaccinated against Mycoplasma hyopneumoniae with vaccines containing a denatured membrane antigen pool and adjuvant, Aust Vet J, 1997 July, Vol.75, No.7, 504-511. * |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US11141472B2 (en) | Mycoplasma hyopneumoniae vaccine | |
US11154609B2 (en) | PCV/mycoplasma hyopneumoniae vaccine | |
RU2644256C2 (ru) | Комбинированная вакцина pcv/mycoplasma hyopneumoniae/prrs (pcv/mycoplasma hyopneumoniae/prrs combination vaccine) |