RU2639573C2 - Бифункциональный пептид - Google Patents
Бифункциональный пептид Download PDFInfo
- Publication number
- RU2639573C2 RU2639573C2 RU2014134287A RU2014134287A RU2639573C2 RU 2639573 C2 RU2639573 C2 RU 2639573C2 RU 2014134287 A RU2014134287 A RU 2014134287A RU 2014134287 A RU2014134287 A RU 2014134287A RU 2639573 C2 RU2639573 C2 RU 2639573C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- gly
- peptide
- val
- bifunctional
- leu
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 232
- 230000001588 bifunctional effect Effects 0.000 title claims abstract description 110
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 claims abstract description 83
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 claims abstract description 81
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims abstract description 76
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 claims abstract description 76
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 claims abstract description 74
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 claims abstract description 48
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 claims abstract description 48
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 37
- 102000003990 Urokinase-type plasminogen activator Human genes 0.000 claims abstract description 33
- 108090000435 Urokinase-type plasminogen activator Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 32
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims abstract description 30
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 12
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims abstract description 11
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims abstract description 10
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims abstract description 7
- 108010064033 elastin-binding proteins Proteins 0.000 claims abstract description 6
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 claims abstract description 6
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 claims abstract description 4
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 4
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 33
- 229960005356 urokinase Drugs 0.000 claims description 27
- RLCSROTYKMPBDL-USJZOSNVSA-N 2-[[(2s)-1-[(2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]acetyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]acetic acid Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O RLCSROTYKMPBDL-USJZOSNVSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 12
- UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Leu Chemical group NCC(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O UESJMAMHDLEHGM-NHCYSSNCSA-N 0.000 claims description 11
- 230000009759 skin aging Effects 0.000 claims description 11
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 10
- 208000004210 Pressure Ulcer Diseases 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 230000037390 scarring Effects 0.000 claims description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 5
- 206010011985 Decubitus ulcer Diseases 0.000 claims description 4
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 2
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 49
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 abstract description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 47
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 39
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 37
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 33
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 32
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 28
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 28
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 27
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 23
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 22
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 20
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 19
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 18
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 16
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 13
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 13
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 13
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 12
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 description 11
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 10
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 10
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 10
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 10
- 230000037303 wrinkles Effects 0.000 description 10
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 9
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 9
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 9
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 8
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 8
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 8
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 7
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 7
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 7
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 7
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 7
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 6
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 6
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 6
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 6
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- 229940012957 plasmin Drugs 0.000 description 6
- 101100189913 Caenorhabditis elegans pept-1 gene Proteins 0.000 description 5
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 5
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 5
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 description 5
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 5
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 4
- 101100243401 Caenorhabditis elegans pept-3 gene Proteins 0.000 description 4
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 4
- 125000000998 L-alanino group Chemical group [H]N([*])[C@](C([H])([H])[H])([H])C(=O)O[H] 0.000 description 4
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 4
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 4
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 4
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 4
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 4
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 4
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 4
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 3
- 101100243399 Caenorhabditis elegans pept-2 gene Proteins 0.000 description 3
- 102100033601 Collagen alpha-1(I) chain Human genes 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000993285 Homo sapiens Collagen alpha-1(III) chain Proteins 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108010029483 alpha 1 Chain Collagen Type I Proteins 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000011382 collagen catabolic process Effects 0.000 description 3
- 229940096422 collagen type i Drugs 0.000 description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 3
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 3
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N trifluoroacetic acid Substances OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 125000003088 (fluoren-9-ylmethoxy)carbonyl group Chemical group 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 2
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- -1 Leu Chemical compound 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000579835 Merops Species 0.000 description 2
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 210000000651 myofibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 125000000999 tert-butyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(*)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N (2s)-2-azanyl-5-[bis(azanyl)methylideneamino]pentanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N.OC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N OIXLLKLZKCBCPS-RZVRUWJTSA-N 0.000 description 1
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001123248 Arma Species 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108030001720 Bontoxilysin Proteins 0.000 description 1
- 108700016947 Bos taurus structural-GP Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 108010059081 Cathepsin A Proteins 0.000 description 1
- 102000005572 Cathepsin A Human genes 0.000 description 1
- 102000012432 Collagen Type V Human genes 0.000 description 1
- 108010022514 Collagen Type V Proteins 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100022166 E3 ubiquitin-protein ligase NEURL1 Human genes 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 description 1
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 1
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 101000973232 Homo sapiens E3 ubiquitin-protein ligase NEURL1 Proteins 0.000 description 1
- 102000004125 Interleukin-1alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 1
- 108030004510 Interstitial collagenases Proteins 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 208000005230 Leg Ulcer Diseases 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100028524 Lysosomal protective protein Human genes 0.000 description 1
- 239000004909 Moisturizer Substances 0.000 description 1
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 description 1
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 241000208125 Nicotiana Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 101710176384 Peptide 1 Proteins 0.000 description 1
- 101800005149 Peptide B Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 206010051246 Photodermatosis Diseases 0.000 description 1
- 108010022233 Plasminogen Activator Inhibitor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100039418 Plasminogen activator inhibitor 1 Human genes 0.000 description 1
- 102100039419 Plasminogen activator inhibitor 2 Human genes 0.000 description 1
- 102000016611 Proteoglycans Human genes 0.000 description 1
- 108010067787 Proteoglycans Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 1
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 102000003978 Tissue Plasminogen Activator Human genes 0.000 description 1
- 108090000373 Tissue Plasminogen Activator Proteins 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 208000000558 Varicose Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 1
- PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CC#N.OC(=O)C(F)(F)F PMZXXNPJQYDFJX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RXSUFCOOZSGWSW-UHFFFAOYSA-M acetyloxy-(4-aminophenyl)mercury Chemical compound CC(=O)O[Hg]C1=CC=C(N)C=C1 RXSUFCOOZSGWSW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001195 anabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000001153 anti-wrinkle effect Effects 0.000 description 1
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001222 biopolymer Polymers 0.000 description 1
- 229940053031 botulinum toxin Drugs 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 230000001925 catabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000013522 chelant Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 230000035605 chemotaxis Effects 0.000 description 1
- 230000003366 colagenolytic effect Effects 0.000 description 1
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 1
- 238000004624 confocal microscopy Methods 0.000 description 1
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 210000004177 elastic tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003246 elastolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000004299 exfoliation Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000010195 expression analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000009499 grossing Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- DJGAAPFSPWAYTJ-UHFFFAOYSA-M metamizole sodium Chemical compound [Na+].O=C1C(N(CS([O-])(=O)=O)C)=C(C)N(C)N1C1=CC=CC=C1 DJGAAPFSPWAYTJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 238000002493 microarray Methods 0.000 description 1
- 244000000010 microbial pathogen Species 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 230000001333 moisturizer Effects 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 239000006225 natural substrate Substances 0.000 description 1
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 108010091748 peptide A Proteins 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002797 plasminogen activator inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108091006084 receptor activators Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 230000000250 revascularization Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005728 strengthening Methods 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004381 surface treatment Methods 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010065822 urokinase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 230000037314 wound repair Effects 0.000 description 1
- 230000037373 wrinkle formation Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/81—Protease inhibitors
- C07K14/8107—Endopeptidase (E.C. 3.4.21-99) inhibitors
- C07K14/8146—Metalloprotease (E.C. 3.4.24) inhibitors, e.g. tissue inhibitor of metallo proteinase, TIMP
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
- A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/08—Tripeptides
- C07K5/0802—Tripeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/0804—Tripeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1019—Tetrapeptides with the first amino acid being basic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/50—Fusion polypeptide containing protease site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
- C07K2319/70—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction
- C07K2319/74—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor
- C07K2319/75—Fusion polypeptide containing domain for protein-protein interaction containing a fusion for binding to a cell surface receptor containing a fusion for activation of a cell surface receptor, e.g. thrombopoeitin, NPY and other peptide hormones
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Zoology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Birds (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Cosmetics (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к бифункциональному пептиду, способному активировать синтез коллагена и ингибировать продуцирование матриксных металлопротеиназ, и может быть использовано в медицине и косметологии. Бифункциональный пептид имеет последовательность из трех пептидных участков А, В и С. Первый участок А - гексапептид, повторенный по меньшей мере три раза, способен связываться с эластинсвязывающим рецепторным белком, чтобы стимулировать синтез коллагена. Второй участок В - тетрапептид способен действовать как конкурентный ингибитор протеазы урокиназы и расщепляться указанной протеазой. Третий участок С - трипептид занимает по меньшей мере один активный сайт матриксных металлопротеиназ, чтобы разрешить ингибирование указанных протеиназ. Изобретение позволяет эффективно стимулировать синтез коллагена и ингибировать продуцирование матриксных металлопротеиназ для лечения хронических рубцующихся заболеваний, пролежней или язв, для восстановления или регенерации кожной ткани и для борьбы со старением кожи. 8 н. и 10 з.п. ф-лы, 7 пр., 8 ил.
Description
Настоящее изобретение относится к пептиду, который найдет применение именно в косметической и фармацевтической областях.
Настоящее изобретение найдет применение в основном в области восстановления или регенерации кожной ткани, пострадавшей, в частности, в результате старения колеи.
Старение кожи связано с более или менее большим дисбалансом механизмов контроля синтеза и деградацией компонентов внеклеточного матрикса дермы, причем последний составляет самый внутренний слой кожи. Таким образом, при старении кожи во внеклеточном матриксе дермы наблюдается, с одной стороны, уменьшение синтеза определенных макромолекул, а именно коллагена и эластина, а с другой стороны, увеличение экспрессии определенных ферментов, таких как матриксные металлопротеиназы, или ММР. Именно последние обладают коллагенолитической и эластолитической активностью и тем самым способствуют деградации макромолекул матрикса дермы. Как следствие, дерма теряет свой тонус, кожа растягивается, что приводит к образованию морщин. Это явление также может быть усилено внешними факторами, такими как воздействие ультрафиолетовых лучей, загрязнение окружающей среды, стресс или также табак.
Традиционно, из предшествующего уровня техники известны стратегии, которые направлены на замедление образования морщин. Такие стратегии состоят в следующем:
- отшелушивание или дермабразия, что соответствует инвазивному методу лечения кожи с целью уменьшения ее толщины;
- инъекции против морщин гиалуроновой кислоты или ботулинического токсина, которые обладают эффектом заполнения морщин и целенаправленного паралича мышц, временно уменьшающего морщины, соответственно; эти методы, однако, дорогие и дают только краткосрочные эффекты;
- применение поверхностной обработки, такой как увлажнители, кремы против морщин или разглаживающие кремы, которые замедляют образование морщин, но без корректировки уже образовавшихся;
- методы лечения, основанные на аутогенных стволовых клетках, которые еще плохо контролируются.
Уже в течение нескольких лет в целях борьбы с последствиями старения кожи лабораториями внедряются другие стратегии.
В частности, в европейской патентной заявке ЕР 1275372 предложено использование химических соединений, таких как производные N-ациламиноамида. Более конкретно, в этом документе предложена композиция, в которую включен, дополнительно к вышеупомянутому N-ациламиноамиду, ингибирующий металлопротеиназу белок, причем последний участвует в деградации коллагена.
Но такое решение не оптимальное, в частности потому, что оно требует, с одной стороны, комбинации нескольких соединений, а с другой стороны, не позволяет положительно воздействовать на синтез коллагена.
С целью предотвращения именно симптомов старения кожи разработано применение некоторых пептидных производных.
Следовательно, например, из FR 285489 известны косметические композиции, которые включают пептидные производные, которые исходят из волокнистого белка. Более конкретно, пептидное производное может иметь следующую последовательность R1-(AA)n-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-OR2, в которой
- R1 соответствует Н или алкильной цепи, содержащей от 2 до 22 атомов углерода,
- (АА)n соответствует пептидной цепи с АА, состоящей из любой аминокислоты или производного аминокислоты и в которой n изменяется от 0 до 3,
- R2 соответствует H или алкильной цепи, содержащей от 1 до 24 атомов углерода.
Косметическая композиция, включающая такое пептидное производное, дает возможность получать укрепляющий и реструктурирующий эффект.
Однако такое пептидное производное или композиция, включающая это производное, не разрешает ингибировать активность и/или экспрессию протеиназ ММР, участвующих в деградации коллагенов, которые составляют основные белки внеклеточного матрикса тканей тела, а именно дермы. Коллаген позволяет придать тканям устойчивость к растягивающим силам. Таким образом, пептид, описанный в вышеупомянутом документе, не дает возможности предотвратить деградацию этого белка, важного для сохранения тонуса кожи.
Из WO 2006053688 известна также комбинация, включающая несколько пептидов и используемая в лечении для предотвращения образования морщин. В частности, эти пептиды данной комбинации участвуют на нескольких уровнях процесса синтеза коллагена и/или фибронектина, а именно путем стимулирования этого синтеза.
В DE 102004055541, в свою очередь, раскрыта композиция, включающая комбинацию пептидов для стимулирования высвобождения фактора роста TGF-B, причем последний способен индуцировать синтез коллагена.
Тем не менее, пептиды, описанные в этих патентных документах, имеют те же недостатки, что и приведенное выше, а именно то, что предложенная в них последовательность не разрешает снизить экспрессию ферментов, отвечающих за деградацию белков внеклеточного матрикса, и в частности коллагена.
В настоящем изобретении предлагается возможность борьбы с различными недостатками предшествующего уровня техники за счет использования бифункционального пептида, обладающего как свойством стимулирования синтеза коллагенов, так и свойством ингибирования протеиназ, участвующих в каскаде деградации последних.
В связи с этим настоящее изобретение относится к бифункциональному пептиду, способному активировать синтез коллагена и ингибировать продуцирование матриксных металлопротеиназ, причем указанный пептид имеет последовательность, включающую три пептидных участка А, В и С,
- первый пептидный участок А, соответствующий гексапептиду, повторенному по меньшей мере три раза, причем указанный участок А способен связываться с эластинсвязывающим рецепторным белком, чтобы стимулировать синтез коллагена,
- второй пептидный участок В, соответствующий тетрапептиду, способному действовать как конкурентный ингибитор протеазы урокиназы и расщепляться указанной протеазой, и
- третий пептидный участок С, соответствующий трипептиду, занимающему по меньшей мере один активный сайт матриксных металлопротеиназ, чтобы разрешить ингибирование указанных протеиназ.
Предпочтительно, первый участок пептида А, стимулирующий синтез коллагена, имеет последовательность X1-Gly-X2-X3-Pro-Gly, причем эта последовательность повторяется по меньшей мере три раза, в которой:
- X1 соответствует любой аминокислоте,
- Х2 соответствует аминокислоте, выбранной из Val, Thr, Gln, Ala, Leu,
- Х3 соответствует аминокислоте, выбранной из Ala, Leu, Ile.
Более предпочтительно, первый пептидный участок А упомянутого пептида имеет последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly.
Предпочтительно, второй пептидный участок В, расщепляемый протеазой, имеет последовательность Arg-Y1-Arg-Y2, причем каждый из Y1 и Y2 соответствует аминокислоте, выбранной из Ser, Tyr, Gly, Ala, Arg, Val, Leu.
Более предпочтительно, второй пептидный участок В указанного пептида имеет последовательность Arg-Val-Arg-Leu.
В соответствии с одним интересным вариантом осуществления третий участок С, разрешающий ингибирование матриксных металлопротеиназ, имеет последовательность Z1-Ile-Z2, в которой:
- Z1 соответствует аминокислоте, выбранной из Gly, Ile, Leu, и
- Z2 соответствует аминокислоте, выбранной из Leu, Phe, Ala, Ile, Val.
Еще более предпочтительно, третий пептидный участок С указанного пептида имеет последовательность Gly-Ile-Leu.
В соответствии с предпочтительным вариантом осуществления пептид в соответствии с изобретением имеет следующую последовательность S1, соответствующую последовательности
SEQ ID No. 1:S1:N-(Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)n-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu-OH,
где N и ОН соответствуют N-концевой и С-концевой областям, соответственно, указанного пептида
и где N=3.
Однако последовательность бифункционального пептида в соответствии с изобретением также может соответствовать одной из последовательностей от SEQ ID Nо. 2 до SEQ ID No. 26.
Предпочтительно, бифункциональный пептид в соответствии с изобретением получают путем химического синтеза. Кроме того, пептид может успешно сохраняться в лиофилизированной форме.
Преимущественно, бифункциональный пептид в соответствии с изобретением может использоваться для лечения хронических рубцующихся заболеваний, а именно при лечении язв или пролежней.
Бифункциональный пептид в соответствии с изобретением также может использоваться для восстановления и/или регенерации кожной ткани, а именно для лечения старения кожи.
Изобретение также относится к косметической и/или фармацевтической композиции, включающей бифункциональный пептид в соответствии с изобретением.
Предпочтительно, концентрация бифункционального пептида в косметической композиции находится в диапазоне от 10 мкг/мл до 1 мг/мл и предпочтительно, по существу, равна 100 мкг/мл.
Бифункциональный пептид в соответствии с настоящим изобретением имеет много преимуществ. С одной стороны, он разрешает стимуляцию синтеза белков коллагена, а именно коллагенов типа I и типа III. Увеличение продуцирования коллагена последнего типа представляет особенный интерес; действительно, этот тип коллагена называется коллагеном «эмбрионального» типа, потому что он в основном синтезируется на эмбриональной стадии и в детстве. Этот тип коллагена обеспечивает особо оптимальное заживление тканей, известное как «идеальное» заживление. С другой стороны, указанный пептид позволяет уменьшить коллагенолиз с помощью протеаз. Кроме того, стимуляция синтеза коллагена и ингибирование металлопротеиназ достигаются одновременно благодаря пептидным участкам А и С, соответственно, бифункционального пептида, который дополнительно включает пептидный участок В, соединяющий два других участка и способный расщепляться урокиназой. В результате пептид в соответствии с изобретением может иметь короткую последовательность из примерно 25 аминокислот, что упрощает его химический синтез.
Дополнительные признаки и преимущества изобретения станут очевидны из следующего подробного описания неограничительного варианта осуществления изобретения со ссылкой на прилагаемые фигуры:
- Фигура 1 - схематическое изображение механизма действия пептида в соответствии с изобретением.
- Фигура 2 - схематическое изображение ферментативного каскада системы плазминоген/плазмин.
- Фигуры 3А и 3В соответствуют гистограммам, иллюстрирующим синтез коллагена типа I и типа III, соответственно, с помощью фибробласт, обработанных пептидом в соответствии с изобретением в концентрации 100 мкг/мл или фрагментами того же пептида.
- Фигура 4 представляет, в виде гистограмм, экспрессию генов COL1A1 и COL3A1 генов, кодирующих соответственно коллагены типа I и типа III в культурах дермальных фибробластов, обработанных пептидом в соответствии с изобретением или фрагментами того же пептида.
- На Фигуре 5 иллюстрируется, в зависимости от возраста пациентов (35-и, 42-х и 53-х лет), действие бифункционального пептида в соответствии с изобретением на экспрессию белка коллагенов типа I и III, соответственно, из дермальных фибробластов от этих пациентов.
- Фигуры 6А и 6В иллюстрируют действие бифункционального пептида на активность урокиназы по отношению к синтетическому субстрату.
- Фигуры 7А и 7В иллюстрируют действие бифункционального пептида на активность ММР-1 по отношению к синтетическому субстрату.
- На Фигурах 8А и 8В показан профиль элюции пептида в соответствии с изобретением, соответственно, без обработки и при обработке урокиназой.
Путем предварительной и информационной индикации в данном патентном описании для обозначения аминокислот используется международный трехбуквенный код. Таким образом, Ala соответствует аланину (A), Cys - цистеину (С), Asp - аспарагиновой кислоте (D), Glu - глутаминовой кислоте (Е), Phe - фенилаланину (F), Gly - глицину (G), His - гистидину (Н), Ile - изолейцину (I), Lys - лизину (K), Leu - лейцину (L), Met - метионину (М), Asn - аспарагину (N), Pro - пролину (P), Gln - глутамину (Q), Arg - аргинину (R), Ser - серину (S), Thr - треонину (Т), Val - валину (V), Trp - триптофану (W) и Tyr - тирозину (Y).
Старение кожи и в результате образование морщин характеризуются на клеточном и молекулярном уровне снижением экспрессии генов, отвечающих за синтез макромолекул, входящих в состав внеклеточного матрикса, таких как коллагены или эластин. Кроме того, снижение продуцирования этих матриксных белков обычно сопровождается чрезмерной экспрессией ферментов, которые отвечают за деградацию матриксных белков; эти ферменты, матриксные металлопротеиназы или ММР, таким образом, частично отвечают за снижение тонуса на уровне дермы, растяжение кожи и, в конце концов, к образованию морщин.
Коллагеновые белки являются преобладающими белками в построении внеклеточного матрикса тканей организма. В частности, коллагены присутствуют примерно на 90% на уровне дермы, которая составляет прочную опору кожи и играет роль и питательного вещества, и температурного контроля, а также роль защиты от патогенных микроорганизмов. Дерма формируется в основном из так называемых фибробластных клеток, которые принимают участие в синтезе, а именно коллагена, а также в организации внеклеточного матрикса.
Таким образом, остов внеклеточного матрикса формируется из коллагена, но также из эластина, структурных гликопротеинов и протеогликанов. Более конкретно, дермальный матрикс включает фибриллы коллагена типа I и III и сердцевину коллагена типа V.
Последний, вероятно, подвергается деградации так называемыми белками ММР, семейство которых включает не менее 26 членов. Более конкретно, эти белки соответствуют эндопептидазам, т.е., которые разрушают пептидные связи внутри белка.
Исследования, проведенные учеными (Voorhes et al., Hornebeck et al., 2009), позволяют продемонстрировать, что дряхление клеток кожи, фибробластов, характеризуется повышенной экспрессией этих эндопептидаз, а именно в отношении ММР-1. Последняя относится к группе интерстициальных коллагеназ и отвечает за расщепление белков коллагена типа I и III. ММР-1 рассматривается как главная коллагеназа, участвующая в старении кожи, хронологическом или фотоиндуцированном.
Таким образом, уменьшение дермальных матриксных белков, а именно коллагенов, связанных с увеличением ферментов деградации, а именно ММР-1, являются важными элементами, участвующими в старении кожи, что приводит к уменьшению тонуса кожи и образованию видимых морщин.
Таким образом, в рамках изобретательского уровня авторами разработан пептид, имеющий многие функции и разрешающий действовать как на уровне процессов синтеза молекул коллагена, так и на разных уровнях каскадов деградации этих же молекул.
И особенно выгодным является то, что бифункциональный пептид в соответствии с настоящим изобретением обладает отличительным свойством активизировать восстановление баланса между анаболическим (синтез) и катаболическим (распад) процессами внеклеточного, а именно дермального, матрикса.
Особо предпочтительно то, что пептид в соответствии с изобретением является бифункциональным и включает последовательность, которая может быть разделена на три участка:
- первый пептидный участок, называемый участком А, который предпочтительно обладает способностью увеличивать синтез коллагена;
- второй пептидный участок, называемый участком В, который предпочтительно имеет последовательность, распознаваемую протеазой урокиназой, в соответствии с чем указанный пептидный участок В может затем расщепляться этой протеазой;
- третий пептидный участок, называемый участком С, причем последний способен ингибировать ММР.
Пептид в соответствии с настоящим изобретением разрешает, таким образом, с одной стороны, стимулировать синтез коллагена и, с другой стороны, уменьшать деградацию указанного коллагена путем ингибирования урокиназы и протеаз ММР, а именно ММР-1.
Более конкретно, пептидный участок А, разрешающий увеличение синтеза коллагена, состоит из гексапептида, т.е. последовательность 6 аминокислотных остатков. Преимущественно, этот гексапептид повторяется по меньшей мере 3 раза в бифункциональном пептиде в соответствии с настоящим изобретением.
Более предпочтительно, пептидный участок А бифункционального пептида имеет следующую последовательность: X1-Gly-X2-X3-Pro-Gly, причем X1, Х2 и Х3 соответствуют аминокислотам. Как указано выше, эта последовательность гексапептида X-Gly-X2-X3-Pro-Gly повторяется по меньшей мере три раза в пептиде в соответствии с изобретением. Действительно, некоторые исследования показали, что при трех повторах указанная последовательность дала разные, даже более интересные, результаты с точки зрения активности последовательности (Alix 2001).
В соответствии с интересным вариантом осуществления остаток XI пептидного участка А соответствует любой из аминокислот. Остаток Х2, в свою очередь, преимущественно соответствует аминокислоте, выбранной из Val, Thr, Gln, Ala и Leu. Наконец, остаток Х3 предпочтительно соответствует аминокислоте, выбранной из Ala, Leu и Ile.
Еще более предпочтительно, X1 и Х2 соответствуют Val, а Х3 соответствует Ala. Таким образом, гексапептид, соответствующий участку А бифункционального пептида, имеет предпочтительно последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly.
Последовательность, повторенная не менее трех раз и связанная с пептидными участками В и С, разрешает существенную стимуляцию экспрессии белка коллагенов, а именно в отношении коллагена типа III, как показано на прилагаемых Фигурах 3А и 3В и описано в примере 1 ниже.
Пептид в соответствии с изобретением также разрешает увеличение экспрессии генов COL1A1 и COL3A1, как показано на Фигуре 4, соответственно, кодирующих коллаген типа I и коллагена типа III. Действие бифункционального пептида на синтез коллагена типа III представляет особый интерес; действительно, последний известен как доминирующий коллаген на эмбриональном уровне и его продуцирование постепенно уменьшается в детстве, пока не достигнет очень низкого уровня продуцирования у взрослых. В качестве примера, наличие коллагена типа III в 6 раз меньше у взрослых, чем коллагена типа I (Melissopoulos 1998; Herbage, 1997). Коллаген типа III синтезируется главным образом миофибробластами во время заживления, чтобы заменить поврежденные ткани. На эмбриональном уровне коллаген типа III разрешает так называемое «идеальное» заживление (Lorena et al, 2002. Ferguson & O'Kane, 2004).
Последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly бифункционального пептида в соответствии с изобретением смоделирована из пептидов эластина или эластокинов, полученных в результате деградации эластичных волокон. Такая последовательность принимает форму 6-изгиба типа VIII благодаря присутствию остатков пролина и глицина в указанной последовательности X1-Gly-X2-X3-Pro-Gly (Floquet et al. 2004). Эта структурная схема распознается рецепторным белком эластина, который традиционно упоминается под английским названием Elastin Binding Protein [Эластин-Связывающий Белок] и сокращенно ЕВР. Последний иммобилизируется на поверхности клеток совместно с двумя другими субъединицами: защитный белок или катепсин А (РРСА) и нейраминидаза (Neu-1), которые связаны с клеточной мембраной. Захват рецепторного белка ЕВР пептидным участком А бифункционального пептида, показано на Фигуре 1, вызывает активацию молекулярной единицы, что вызывает синтез коллагена типа I и типа III.
Такая активация молекулярной единицы может также действовать на хемотаксис, пролиферацию, адгезию и выживание фибробластов, а также на ангиогенез, который важен в процессе реваскуляризации хронических ран, таких как язвы или пролежни.
Что касается пептидного участка В, то он предпочтительно состоит из тетрапептида, т.е. последовательности, включающей 4 аминокислоты.
Более конкретно, этот тетрапептид представляет собой рычаг, который может взаимодействовать как субстрат или конкурентный ингибитор с сериновой протеазой урокиназой. Таким образом, это разрешает высвобождение двух других пептидных участков А и С вблизи клетки.
Урокиназа предпочтительно расщепляет последовательность, имеющую две аминокислоты Arg. Следовательно, пептидный участок В предпочтительно имеет последовательность Arg-Y1-Arg-Y2, где Y1 и Y2 соответствуют аминокислотам.
В соответствии с конкретным иллюстративным примером варианта осуществления каждый из Y1 и Y2 соответствует аминокислоте, выбранной из Ser, Tyr, Gly, Ala, Arg, Leu и Val. Эти аминокислоты, связанные с сайтом расщепляемой Arg, предпочтительно расщепляются протеазой урокиназой.
Еще более предпочтительно, пептидный участок В бифункционального пептида в соответствии с изобретением включает последовательность Arg-Val-Leu-Arg.
Протеаза урокиназа является одним из активаторов системы плазминоген-плазмин. Плазминоген является физиологическим субстратом урокиназы, что позволит активировать его в форме плазмина. Такая активация запускает протеолитический каскад, который заканчивается активацией ММР-1 и ММР-3. Ферментный каскад системы плазминоген/плазмин, запущенный протеазой урокиназой, представлен на прилагаемой Фигуре 2.
Таким образом, действие урокиназы на плазминоген косвенно отвечает за деградацию коллагена, и именно коллагена типа I и типа III. Следовательно, присутствие пептидного участка В в бифункциональном пептиде в соответствии с изобретением будет действовать как субстрат или конкурентный ингибитор урокиназы. Как следствие, последняя будет расщеплять сайты Arg, присутствующие на пептидном участке В и будет менее доступна, чтобы вызвать ингибирование плазминогена в плазмине; деградация молекул коллагена, таким образом, уменьшится. Действие пептида в соответствии с изобретением на активность урокиназы, в частности, показано на Фигурах 6А и 6В.
Далее что касается пептидного участка С бифункционального пептида, он преимущественно состоит из трипептида, это последовательность, включающая 3 аминокислоты.
Предпочтительно, пептидный участок С имеет последовательность Z1-Ile-Z2, причем каждый из Z1 и Z2 соответствует остатку аминокислот.
В соответствии с одним интересным иллюстративным примером варианта осуществления Z1 представляет собой аминокислоту, выбранную из Gly, Leu и Ile, a Z2 выбирают из Leu, Phe, Ala, Ile, Val.
Еще более предпочтительно, Z1 соответствует Gly, a Z2 соответствует Leu. Таким образом, пептидный участок С бифункциональным пептидом предпочтительно имеет последовательность Gly-Ile-Leu. Трипептид Gly-Ile-Leu действительно может занимать часть активного сайта ММР-1 и действовать как конкурентный ингибитор фермента.
Действительно, эти аминокислоты представляют особый интерес, потому что они, вероятно, имеют три кармана ММР типа I, карманы Р'1, Р'2 и Р'3. Как следствие, активный сайт коллагеназы типа I больше не может хелатировать ионы Zn2+, которые важны для активности указанной коллагеназы. Деградация молекул коллагена с помощью ММР-1, таким образом, уменьшается благодаря бифункциональному пептиду в соответствии с изобретением. Это иллюстрируется, в частности, прилагаемыми Фигурами 7А и 7В.
Таким образом, в соответствии с предпочтительным вариантом осуществления, который позволяет получить интересные результаты в плане синтеза коллагена и ингибирования металлопротеиназ, в частности, ММР-1, бифункциональный пептид в соответствии с настоящим изобретением имеет следующую последовательность, обозначенную как последовательность S1 и соответствующую SEQ ID No: 1:
S1: N-(Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)n-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu-OH.
Предпочтительно, последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly повторяется 3 раза; другими словами, значение n предпочтительно равно 3. Однако повторов последовательности также может быть больше 3.
Пептид в соответствии с изобретением может также иметь, например, последовательности, обозначенные как SEQ ID No: 2 до SEQ ID No: 26.
Этот перечень последовательностей, однако, не исчерпывающий и, следовательно, не является ограничительным для изобретения.
Более конкретно, аминокислоты последовательностей от SEQ ID No. 1 до 26 могут быть, например, замещены аминокислотами, являющимися химически эквивалентными, т.е. имеющими эквивалентные физические и химические характеристики; замещения между эквивалентными аминокислотами выполняются, например, между неполярными алифатическими аминокислотами Ala, Val, Ile, Leu или между полярными аминокислотами, содержащими гидроксильную группу Ser и Thr, между аминокислотами Asn и Gln, между аминокислотами, выполняющими две кислотные функции Asp и Glu, и т.д. Эта информация приведена в базе данных протеаз, Merops (http://merops.sanger.ac.uk/).
Бифункциональный пептид в соответствии с настоящим изобретением предпочтительно получают путем химического синтеза.
Предпочтительно, удлинение пептидных цепей на смолах Fmoc-Leu-Wang PS осуществляется флуоренилметоксикарбонильным методом (Fmoc) с трет-бутильной (tBu) защитой.
Однако такой вариант осуществления не является ограничительным для изобретения и химический синтез бифункционального пептида может выполняться любым другим подходящим методом для этой цели, известным специалистам в данной области.
Предпочтительно, пептид в соответствии с изобретением лиофилизируют для обеспечения его оптимального сохранения.
Бифункциональный пептид в соответствии с настоящим изобретением представляет особый интерес для использования в производстве косметических композиций, направленных на активизацию восстановления и/или регенерации кожной ткани. Действительно, за счет его действия на продуцирование коллагена указанный пептид позволяет ограничить образование морщин.
Кроме того, авторы продемонстрировали, что влияние бифункционального пептида в соответствии с изобретением на продуцирование коллагена, похоже, зависит от возраста пациентов. Действительно, результаты, представленные в примере 3 ниже, в сочетании с Фигурой 5, показывают, что экспрессия коллагена типа I и особенно экспрессия коллагена типа III более высокая у пациентов старшего возраста. Такие результаты, таким образом, подтверждают пользу указанного пептида для использования в косметических композициях для борьбы со старением кожи.
Но такой вариант не является ограничительным для изобретения. Например, бифункциональный пептид в соответствии с изобретением также может быть использован для получения фармацевтических композиций.
Действительно, оказывается, что нарушение баланса между синтезом белков матрикса, таких как коллаген, и деградацией этих же белков может привести к развитию хронических ран, также известных под названием хронических рубцующихся заболеваний, таких как пролежни, язвы, или также люди с тяжелыми ожогами. Эти заболевания, в частности, характеризуются сверхэкспрессией матриксных протеаз ММР и, как правило, связаны с такими заболеваниями, как диабет или сосудистые заболевания.
Хронические рубцующиеся заболевания неуклонно увеличиваются в развитых странах, в основном за счет старения населения. Таким образом, лечение и управление этими заболеваниями требуют немалых затрат.
На клеточном уровне было показано, что большое количество протеаз, а именно металлопротеиназ типа ММР-1, высвобождается возле таких хронических ран типа пролежней. Исследования также предоставили доказательства того, что активность коллагеназы типа I, или ММР-1, значительно увеличивалась в экссудатах хронических ран. Такое увеличение отвечает за деградацию молекул коллагена типа I и типа III, которые присутствуют возле указанной раны (Barone et al, 1998. Shi et al, 2006.).
Далее в отношении, в частности, язв, было также продемонстрировано, что возле этих ран были обнаружены большие количества протеаз. В частности, исследования позволили определить скорость ММР-1, которая в 65 раз больше обычной, причем эти ММР затем вызывают чрезмерную и длительную деградацию белков внеклеточного матрикса, а также факторы роста, ведущие к задержке заживления (Fischer et al. 2009).
Наконец, было продемонстрировано, что концентрация урокиназного активатора системы плазминоген/плазмин, как видно на Фигуре 2, и косвенно отвечающая за активацию определенных ММР, была значительно повышена в язвах на ногах, а также на уровне пролежней (Werckroth et al. 2004).
Таким образом, оказывается, что пептид в соответствии с изобретением, который способен и уменьшить активность протеаз ММР, и увеличить синтез белков матрикса, смог бы способствовать облегчению лечения этих хронических ран и заменить существующие медицинские процедуры, тяжелые, дорогие и неэффективные.
В соответствии с конкретным вариантом осуществления бифункциональный пептида в соответствии с изобретением вводят в пластырь, который должен крепиться на область тела, пораженной хронической раной.
Однако такой вариант осуществления ни в коем случае не является ограничительным для изобретения, и можно легко предположить, что возможно включать бифункциональный пептид в соответствии с изобретением в такие препараты, как крем, мазь, гель и т.д., которые можно наносить на рану, подлежащего лечению.
В соответствии с вариантом осуществления бифункциональный пептид предпочтительно используется в концентрации, в основном, от 10 мкг/мл до 1 мг/мл. Действительно, никакой токсичности пептида в соответствии с изобретением не наблюдалось на дермальных фибробластах, обработанных пептидными концентрациями вплоть до 1 мг/мл. Кроме того, исследования, проведенные, чтобы обнаружить гены токсичности с помощью статистического метода SAM (Significance Analysis of Microarrays), показали, что гибель клеток, разрушение соединительной ткани и опухолевая инвазия индуцируются только в результате высокой концентрацией бифункционального пептида, выше, чем 1 мг/мл.
Еще более предпочтительно, рекомендуемая концентрация для использования пептида, а именно в фармацевтических и/или косметических композициях, в основном, равна 100 мкг/мл.
Дополнительные признаки и преимущества настоящего изобретения будут также ясны при прочтении следующих примеров, приведенных в качестве иллюстрации и не являющихся ограничительными.
Пример 1: Действие бифункционального пептида на синтез коллагена - анализ белков
Дермальные фибробласты были выделены из биопсий кожи живота, полученных во время хирургических операций, проведенных на здоровых пациентах в возрасте от 35 до 75 лет.
После удаления эпидермиса фибробласты извлекли путем ферментативного расщепления, а затем культивировали при 37°С в среде DMEM (модифицированная по способу Дульбекко среда Игла) с добавлением 10% фетальной телячьей сыворотки и 1% пенициллина/стрептомицина.
Фибробласты затем обработали пептидом, имеющим последовательность S1 или различные фрагменты этой последовательности, в концентрации 100 мкг/мл. Протестированы следующие различные фрагменты:
- пептид 1 (pept 1): пептид, имеющий последовательность S1
- пептид 2 (pept 2): последовательность N-(Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)3 Arg-Val-Arg-Leu-OH
- пептид 3 (pept 3): N-(Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)3-OH
- пептид 4 (pept 4): N-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu-OH
- пептид 5 (pept 5): N-Gly-Ile-Leu-OH
Экспрессия белка коллагена типа I и коллагена типа III была затем продемонстрирована с помощью вестернблоттинга и выражена количественно с помощью Image J. Результаты представлены соответственно на прилагаемых Фигурах 3А и 3В. Контроль (Ctrl) соответствует экспрессии коллагена типа I и III на уровне клеток, не обработанных пептидами. Эксперименты проводились в трех повторностях.
Представленные на Фигуре 3А результаты показывают, что пептид в соответствии с изобретением (pept 1), а также фрагменты (pept 2 и pept 3), включающие последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly, которая соответствует участку А пептида в соответствии с изобретением стимулируют на 30% экспрессию белка коллагена типа I. Пептидные фрагменты (pept 4 и 5 pept), которые не содержат участок А пептида в соответствии с изобретением, не разрешают стимуляцию синтеза коллагена типа I; напротив, доля коллагена синтезированного, когда фибробласты контактируют с pept 4 и pept 5, по-видимому, меньше. Последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly, следовательно, действительно отвечает за стимулирование синтеза коллагена типа I.
На Фигуре 3В показано, что пептид в соответствии с изобретением, имеющий последовательность S1, позволяет увеличить синтез коллагена типа III; действительно, как видно на гистограмме, продуцирование коллагена типа III более чем в два раза выше, когда фибробласты обрабатываются пептидом, имеющим последовательность S1.
Также интересно отметить, что обработка фибробластов пептидом, имеющим последовательность S1 (pept 1), разрешает увеличение синтеза коллагена типа III на 36%, по сравнению с фибробластами, обработанными пептидом, имеющим только последовательность (Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)3 (pept 3). Остальные участки пептида в соответствии с изобретением, таким образом, также имеют значение в увеличении синтеза коллагена типа III.
Пептид в соответствии с изобретением, таким образом, представляет особый интерес; действительно, дополнительно к разрешению увеличения синтеза коллагена типа I, он также способствует продуцированию коллагена типа III.
Пример 2: Действие бифункционального пептида на синтез коллагена - анализ экспрессии гена
Экспрессия гена коллагенов типа I и III в культурах фибробластов также протестировали в присутствии различных пептидов (от pept 1 до pept 5) в концентрации 100 мкг/мл.
Через 24 часа после обработки различными пептидами рибонуклеиновые кислоты [РНК] экстрагировали из культур с помощью набора RNeasy® (QIAGEN), затем вновь транскрибировали в комплементарные ДНК (кДНК) с помощью набора для синтеза первой цепи RT2 [RT2 First Strand Kit] производства SABiosciences™.
Далее выполнили анализы ПЦР в реальном времени с помощью термоциклера Mx3000p производства Stratagene в 96-луночном планшете. Каждый образец проанализировали в трех повторностях. КДНК служат в качестве матриц в реакционной смеси, содержащей реагенты RT2 SYBR® Green/ROX™ qPCR Master Mix (SABiosciences™) и смысловой и антисмысловой праймеры, специфичные для гена, подлежащего амплификации. В конце каждого цикла снимали показания флюоресценции и анализировали с помощью программного обеспечения MxPro (Stratagene). Относительная экспрессия исследуемых генов COL1A1 и COL3A1, кодирующих коллаген типа I и типа III, была получена путем нормализации количества продуктов для амплификации гена, исследуемого с помощью количества ДНК, амплифицированного из гена «домашнего хозяйства», в данном случае РНК гена, кодирующего глицеральдегид-3-фосфат дегидрогеназу (GAPDH). Что касается числа циклов, соответствующих амплификации с 100% эффективностью, относительное количество исследуемых кДНК было рассчитано с помощью метода 2-ΔΔCT (Livak & Schmittgen, 2001).
Результаты, представленные на Фигуре 4, подтверждают результаты, полученные при исследовании экспрессии белка. Бифункциональный пептид в соответствии с изобретением, а также пептидные фрагменты pept 2 и pept 3, содержащие последовательность (Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)3, стимулируют экспрессию гена коллагенов типа I и III. Увеличение синтеза коллагена типа III также наблюдалось, когда фибробласты обрабатывали с помощью пептида, имеющего последовательность S1 (pept 1) по отношению к клеткам, введенным в присутствии пептида 3, содержащего только последовательность (Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly)3.
Производные пептиды pept 4 и pept 5, содержащие последовательность Gly-Ile-Leu, не влияют на экспрессию генов, кодирующих коллагены типа I и III.
Контроль (Ctrl) соответствует экспрессии генов, кодирующих оба типа коллагена, когда фибробласты не обрабатываются.
Пример 3: Действие бифункционального пептида на синтез коллагена - испытания экспрессии белка и гена в зависимости от возраста пациентов
Дермальные фибробласты от молодых и пациентов более старшего возраста (35-и, 42-х и 53-х лет) культивировали и бифункциональный пептид в соответствии с изобретением, имеющий последовательность S1, испытали в отношении экспрессии белка и гена коллагена типа I и типа III. Полученные результаты относительно экспрессии белка двух типов коллагена представлены на Фигуре 5. Видно, что действие пептида в соответствии с изобретением на синтез коллагена сильнее, когда фибробласты происходят от пациентов более старшего возраста.
Пример 4: Конкурентное ингибирование урокиназы бифункциональным пептидом
Определили действие бифункционального пептида в соответствии с изобретением на урокиназу, фермент в обратном направлении каскада активации протеиназы ММР-1.
Протестировали активность урокиназы на ее синтетическом субстрате, D-Glu-Gly-Arg+NHPhNO2 (S2444) в присутствии и в отсутствие пептида в соответствии с изобретением в различных концентрациях.
Результаты представлены на прилагаемых Фигурах 6А и 6В.
Кинетику гидролиза субстрата S2444 (0,3 нМ) с помощью урокиназы (9,25*10-6 мМ) проводили в присутствии бифункционального пептида, имеющего последовательность S1, и концентрировали при 10-3, 10-4 и 10-5 М в течение одного часа. Контроль соответствует кинетике в отсутствие пептида. Действие фермента оценивали путем измерения оптической плотности (DO) при 405 нм каждые 5 минут в течение 35 мин. Результаты показаны на Фигуре 6А.
На Фигуре 6В представлено графическое изображение зависимости доза/эффект между действием урокиназы и концентрацией бифункционального пептида, используемого в момент 15 мин. Пунктирная линия на фигуре позволяет определить IC50, т.е. концентрацию пептида, необходимую для уменьшения действия урокиназы на 50%. IC50 соответствует 0,83*10-5 М пептида, т.е. массовой концентрации пептида 19 мкг/мл.
Таким образом, оказывается, что бифункциональный пептида в соответствии с изобретением ведет себя как конкурентный ингибитор урокиназы.
Пример 5: Влияние бифункционального пептида на активность протеазы ММР-1
Затем оценили влияние бифункционального пептида в соответствии с изобретением непосредственно на активность ММР-1, которая представляет собой фермент в обратном направлении каскада, активированного урокиназой.
Субстрат ММР-1, который использовали для проверки ее активности в присутствии пептида, представляет собой синтетический субстрат, DNP-Pro-Cha-Gly-Cys (Me)-His-Ala-Lys (N-Me-Abz)-NH2.
Концентрацию 80 нг/µл ММР-1 получили в присутствии 0,4 нг/µл синтетического субстрата, в присутствии или в отсутствие бифункционального пептида, концентрированного при 10-3, 10-4 и 10-5 М в течение одного часа. Результаты представлены на Фигурах 7А и 7В.
Более конкретно, на Фигуре 7А представлена кинетика гидролиза синтетического субстрата ММР-1 в присутствии или в отсутствие (контроль) пептида в различных концентрациях. Ферментативную активность ММР-1 оценивали путем измерения оптической плотности (DO) при 465 нм каждые 5 минут в течение 35 мин.
На Фигуре 7В представлено графическое изображение зависимости доза-эффект между активностью ММР-1 и концентрацией используемого бифункционального пептида в момент 15 мин. Пунктирная линия на фигуре позволяет определить концентрацию IC50, которая здесь соответствует 0,4*10-4 М, т.е. концентрации бифункционального пептида, равной 91 мкг/мл.
Также протестировали влияние пептида в соответствии с изобретением на активность ММР-1 в присутствии ее природного субстрата, т.е. коллагеновых волокон дермы человека.
Для этой цели ММР-1 предварительно активировали с помощью АРМА (4-аминофенилртутьацетат) при 20 мМ в течение 1 часа 30 минут при температуре 37°С. Активированную таким образом ММР-1 затем нанесли на срезы кожи толщиной 5μ в присутствии или в отсутствие пептида в соответствии с изобретением (100 мкг/мл). Через 3 часа срезы кожи окрасили с использованием иммунной метки, чтобы выявить присутствие коллагена типа I и III, после этого исследовали с помощью конфокальной микроскопии. Результаты, не представлены, показывают, что на уровне среза, который не был обработан пептидом, коллагены I и III были полностью деградированы с помощью ММР-1. С другой стороны, в присутствии бифункционального пептида действие упомянутой ММР-1 ингибируется; действительно, коллагены I и III были обнаружены.
Бифункциональный пептид в соответствии с изобретением ингибирует деградацию коллагенов путем ингибирования на месте активности ММР-1.
Пример 6: Расщепление бифункционального пептида с помощью урокиназы
На околоклеточном уровне наблюдался избыток урокиназы, примерно 10-4 М. Пептид мог бы быть, таким образом, расщеплен урокиназой, действующей, в частности, на уровне остатков аргинина (Arg) участка В пептида в соответствии с изобретением.
Были выполнены исследования с помощью ВЭЖХ на колонке С18 Jupiter Chromolith (50×4,6 мм) и с применением линейного градиента 0,1% TFA ацетонитрила в 0,1% TFA [трифторуксусная кислота] в воде, от 0 до 100% в течение 100 мин. Результаты показали наличие спектрального пика на 11,75 минуте, что характерно для бифункционального пептида (Фигура 8А). Однако после действия избытка урокиназы на бифункциональный пептид (0,45 мМ), спектральный пик был другой; действительно, на 20 минуте был элюирован новый пик, что, таким образом, характеризует расщепление бифункционального пептида урокиназой (Фигура 8В).
Таким образом, в условиях старения кожи в присутствии больших количеств урокиназы бифункциональный пептид в соответствии с изобретением расщепляется, таким образом, высвобождая С-конец указанного пептида, содержащего последовательность Gly-Ile-Leu.
Пример 7: Действие последовательности Gly-Ile-Leu на активность ММР-1
Последовательность Gly-Ile-Leu была выбрана авторами за ее способность занимать Р'1 р'2 и Р'3 карманы коллагеназы типа I, ММР-1. Активность последней протестировали на синтетическом субстрате, DNP-Pro-Cha-Gly-Cys (Me)-His-Ala-Lys(N-Me-Abz)-NH2, в присутствии или в отсутствие пептида 5 с последовательностью Gly-Ile-Leu в концентрациях 10-5,10-4 and 10-3 М.
Результаты (не представлены) показывают, что пептид 5 уменьшает зависимым от дозы способом активность ММР-1 на его синтетическом субстрате. Измерили IC50 пептида Gly-Ile-Leu; измеренная величина составила 0,71*10-4 М, т.е. концентрация пептида 21,3 мкг/мл.
Концевой участок С, Gly-Ile-Leu, бифункционального пептида в соответствии с изобретением может, таким образом, вырабатываться в случае избытка урокиназы и вызывать ингибирование активности ММР-1. Эти данные подтверждают важность пептида для борьбы со старением кожи и/или для заживления хронических ран.
Исследования были также проведены на модели более всестороннего комплексного изучения: модели кожи ex vivo позволяют имитировать старение кожи и некоторые сопровождающие патологии. Полученные результаты не представлены, но они подтверждают результаты, полученные in vitro.
Конечно, изобретение не ограничено примерами, представленными и описанными выше, которые могут иметь вариации и модификации без отхода от объема настоящего изобретения.
БИБЛИОГРАФИЯ
- Alix, A.J. A turning point in the knowledge of the structure-function-activity relations of elastin. J Soc Biol 2001; 195 (2): 181-93.
- Barone, E.J., et al., Interleukin-1 alpha and collagenase activity are elevated in chronic wounds. Plast Reconstr. Surg, 1998 102(4): p. 1023-7; discussion 1028-9.
- Ferguson, M.W. and S. O'Kane, Scar-free healing: from 10 embryonic mechanisms to adult therapeutic intervention. Philos Trans R Soc Lond В Biol Sci, 2004 359(1445): p. 839-50.
- Fisher, G.J., et al., Collagen fragmentation promotes oxidative stress and elevates matrix metalloproteinase-1 in fibroblasts in aged human skin. Am J Pathol, 2009 174 (1): p. 101-14.
- Floquet, N., 
, S., Dauchez, M., Derreumaux, P., Tamburro, A.M., Alix, A.J. Structural characterization of VGVAPG, an 
peptide. Biopolymers, 2004; 76 (3): 266-80. Review
- Herbage, D. 
et 
du derme: 
actuelles, in Biologie de la peau. 1997
- Hornebeck, W., 
et cascades 
et 
Vol. 1. 2009: Elsevier Masson. 38-43
- Livak, K.J. and T.D. Schmittgen, Analysis of relative gene expression data using real-time quantitative PCR and the 2(-Delta Delta C(T)) Method. Methods, 2001 25(4): p. 402-8.
- Lorena, D., et al., Normal scarring: importance of myofibroblasts. Wound Repair Regen, 2002 10(2): p. 86-92.
- 
A., L.C., La peau. 
et internationales ed. 1998.
- Shi, В., et al., Effect of vacuum assisted closure on collagenase activity in human chronic wound. Zhonghua Zheng Xing Wai Ke Za Zhi, 2006 22(6): p. 465-7.
- Voorhees, J.J., et al, Collagen degradation in aged/photodamaged skin in vivo and after exposure to matrix metalloproteinase-1 in vitro. J Invest Dermatol, 2003; 120(5): p. 842-8
- Weckroth, M., et al., Epithelial tissue-type plasminogen activator expression, unlike that of urokinase, its receptor, and plasminogen activator inhibitor-1, is increased in chronic venous ulcers. Br J Dermatol, 2004 151(6): p. 1189-96
СПИСОК ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ
<110> РЕЖЕНТИС ИНТЕРНАСЬОНАЛЬ, FR,
РЕЙМСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ОБЛАСТИ ШАМПАНЬ-АРДЕННЫ, FR, НАЦИОНАЛЬНЫЙ ЦЕНТР НАУЧНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ, FR
<120> БИФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ ПЕПТИД
<130> 9R59 BT FR 1
<160> 26
<210> 1 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 1
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 2 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 2
Val-Gly-Thr-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Thr-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Thr-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 3 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 3
Val-Gly-Gln-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Gln-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Gln-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 4 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 4
Val-Gly-Ala-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Ala-Ala-Pro-Gly-Val- 1 5 10
Gly-Ala-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 5 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 5
Val-Gly-Leu-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Leu-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Leu-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 6 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность
<220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 6
Val-Gly-Val-Leu-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Leu-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Leu-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 7 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 7
Val-Gly-Val-Ile-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ile-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ile-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 8 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 8
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Ile-Ile-Leu 15 20 25
<210> 9 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 9
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Leu-Ile-Leu 15 20 25
<210> 10 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 10
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 1 5 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Val-Leu 15 20 25
<210> 11 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 11
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ala-Leu 15 20 25
<210> 12 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 12
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Gly-Leu 15 20 25
<210> 13 <211> 25 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 13
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Phe 15 20 25
<210> 14 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 14
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 1 5 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Ala 15 20 25
<210> 15 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 15
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Ile 15 20 25
<210> 16 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 16
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 1 5 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Val 15 20 25
<210> 17 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 17
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Ser-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 18 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 18
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 1 5 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Tyr-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 19 <211> 25 <212> БЕЛОК
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 19
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Gly-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 20 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 20
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Ala-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 21 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 21
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Arg-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 22 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 22
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Ser-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 23 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 23
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Tyr-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 24 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ <400> 24Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Gly-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 25 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 25
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 15 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Ala-Gly-Ile-Leu 15 20 25
<210> 26 <211> 25 <212> Белок
<213> Искусственная последовательность <220>
<223> Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продукцию матричных металлопротеиназ
<400> 26
Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Val- 1 5 10
Gly-Val-Ala-Pro-Gly-Arg-Val-Arg-Arg-Gly-Ile-Leu 15 20 25
Claims (30)
1. Бифункциональный пептид, способный активировать синтез коллагена и ингибировать продуцирование матриксных металлопротеиназ, причем указанный пептид имеет последовательность, имеющую три пептидных участка А, В и С:
- первый пептидный участок А, соответствующий гексапептиду, повторенному по меньшей мере три раза, причем указанный участок А способен связываться с эластинсвязывающим рецепторным белком, чтобы стимулировать синтез коллагена, и причем указанный первый пептидный участок А, стимулирующий синтез коллагена, имеет последовательность X1-Gly-X2-X3-Pro-Gly, причем эта последовательность повторяется по меньшей мере три раза, в которой
X1 соответствует любой аминокислоте,
Х2 соответствует аминокислоте, выбранной из Val, Thr, Gln, Ala, Leu,
Х3 соответствует аминокислоте, выбранной из Ala, Leu, Ile;
- второй пептидный участок В, соответствующий тетрапептиду, способному действовать как конкурентный ингибитор протеазы урокиназы и расщепляться указанной протеазой, причем указанный участок В, расщепляемый протеазой, имеет последовательность Arg-Y1-Arg-Y2, причем
каждый из Y1 и Y2 соответствует аминокислоте, выбранной из Ser, Туг, Gly, Ala, Arg, Val, Leu, и
- третий пептидный участок С, соответствующий трипептиду, занимающему по меньшей мере один активный сайт матриксных металлопротеиназ, чтобы разрешить ингибирование указанных протеиназ, причем указанный третий пептидный участок С, разрешающий ингибирование матриксных металлопротеиназ, имеет последовательность Z1-Ile-Z2, в которой
Z1 соответствует аминокислоте, выбранной из Gly, Ile, Leu, и
Z2 соответствует аминокислоте, выбранной из Leu, Phe, Ala, Ile, Val.
2. Бифункциональный пептид по п. 1, отличающийся тем, что первый пептидный участок А указанного пептида имеет последовательность Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly.
3. Бифункциональный пептид по п. 1, отличающийся тем, что второй пептидный участок В указанного пептида имеет последовательность Arg-Val-Arg-Leu.
4. Бифункциональный пептид по п. 1, отличающийся тем, что третий пептидный участок С указанного пептида имеет последовательность Gly-Ile-Leu.
5. Бифункциональный пептид по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что имеет следующую последовательность S1, соответствующую последовательности SEQ ID No. 1:
S1: N-(Val-Gly-Val-Ala-Pro-Gly) n-Arg-Val-Arg-Leu-Gly-Ile-Leu-OH,
где N и ОН соответствуют N-концевой и С-концевой областям указанного пептида, соответственно, и
где n=3.
6. Бифункциональный пептид по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что соответствует одной из последовательностей от SEQ ID No. 2 до SEQ ID No. 26.
7. Бифункциональный пептид по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что его получают путем химического синтеза.
8. Бифункциональный пептид по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что его сохраняют в лиофилизированной форме.
9. Применение бифункционального пептида по любому из пп. 1-8 для лечения хронических рубцующихся заболеваний.
10. Применение бифункционального пептид по любому из пп. 1-8 для лечения пролежней или язв.
11. Применение бифункционального пептида по любому из пп. 1-8 для восстановления или регенерации кожной ткани.
12. Применение бифункционального пептида по любому из пп. 1-8 для борьбы со старением кожи.
13. Косметическая композиция для восстановления и/или регенерации кожной ткани, включающая бифункциональный пептид по любому из пп. 1-8, причем концентрация указанного бифункционального пептида варьируется от 10 мкг/мл до 1 мг/мл.
14. Косметическая композиция по п. 13, отличающаяся тем, что концентрация бифункционального пептида равна 100 мкг/мл.
15. Фармацевтическая композиция для лечения хронических рубцующихся заболеваний, включающая бифункциональный пептид по любому из пп. 1-8, причем концентрация бифункционального пептида варьируется от 10 мкг/мл до 1 мг/мл.
16. Фармацевтическая композиция по п. 15, отличающаяся тем, что концентрация бифункционального пептида равна 100 мкг/мл.
17. Фармацевтическая композиция для борьбы со старением кожи, включающая бифункциональный пептид по любому из пп. 1-8, причем концентрация бифункционального пептида варьируется от 10 мкг/мл до 1 мг/мл.
18. Фармацевтическая композиция по п. 17, отличающаяся тем, что концентрация бифункционального пептида равна 100 мкг/мл.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1250932A FR2986233B1 (fr) | 2012-02-01 | 2012-02-01 | Peptide bifonctionnel |
| FR1250932 | 2012-02-01 | ||
| PCT/FR2013/000033 WO2013114013A1 (fr) | 2012-02-01 | 2013-01-31 | Peptide bifonctionnel |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014134287A RU2014134287A (ru) | 2016-03-20 |
| RU2639573C2 true RU2639573C2 (ru) | 2017-12-21 |
Family
ID=48014041
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014134287A RU2639573C2 (ru) | 2012-02-01 | 2013-01-31 | Бифункциональный пептид |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9115212B2 (ru) |
| EP (1) | EP2809342B1 (ru) |
| JP (1) | JP6190825B2 (ru) |
| KR (1) | KR101999283B1 (ru) |
| CN (1) | CN104159599B (ru) |
| AU (1) | AU2013214039B2 (ru) |
| CA (1) | CA2863472C (ru) |
| DK (1) | DK2809342T3 (ru) |
| ES (1) | ES2631030T3 (ru) |
| FR (1) | FR2986233B1 (ru) |
| HK (1) | HK1203836A1 (ru) |
| HU (1) | HUE031782T2 (ru) |
| NZ (1) | NZ628660A (ru) |
| PL (1) | PL2809342T3 (ru) |
| PT (1) | PT2809342T (ru) |
| RU (1) | RU2639573C2 (ru) |
| WO (1) | WO2013114013A1 (ru) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP6317993B2 (ja) * | 2014-05-07 | 2018-04-25 | ポーラ化成工業株式会社 | 肌改善剤のスクリーニング方法 |
| US10149811B2 (en) | 2016-02-11 | 2018-12-11 | Elc Management Llc | Methods and compositions for stimulating collagen synthesis in skin cells |
| CN111961119B (zh) * | 2020-09-02 | 2021-03-12 | 方晓东 | 多肽在制备促进胶原蛋白分泌的药物或化妆品中的用途 |
| WO2024014953A1 (en) * | 2022-07-12 | 2024-01-18 | Resiliun B.V. | Treating conditions with hypoglycemia associated with hyperinsulinemia. |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1275372A1 (fr) * | 2001-06-26 | 2003-01-15 | L'oreal, S.A. | Composition cosmétique ou dermatologique comprenant un dérivé de N-Acylaminoamide et un inhibiteur de métalloprotéinase |
| DE102004055541A1 (de) * | 2004-11-17 | 2006-05-18 | Henkel Kgaa | Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen zur Behandlung reifer Haut |
| RU2318873C2 (ru) * | 2001-08-16 | 2008-03-10 | Кимберли-Кларк Ворлдвайд, Инк. | Противовозрастные и ранозаживляющие составы |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AUPP472398A0 (en) * | 1998-07-17 | 1998-08-13 | University Of Sydney, The | Protease susceptibility II |
| AU2003255621A1 (en) * | 2002-06-03 | 2003-12-19 | L'oreal | Topical use of at least one double-stranded rna oligonucleotide (ds rna) |
| FR2854896B1 (fr) | 2003-05-16 | 2007-08-17 | Mayoly Spindler Lab | Nouveaux tensioactifs, compositions les comprenant |
| DE102004039550A1 (de) * | 2004-08-13 | 2006-02-23 | Henkel Kgaa | Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen mit (2-Hydroxyethyl)harnstoff |
-
2012
- 2012-02-01 FR FR1250932A patent/FR2986233B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2013
- 2013-01-31 NZ NZ628660A patent/NZ628660A/en unknown
- 2013-01-31 PL PL13712827T patent/PL2809342T3/pl unknown
- 2013-01-31 CA CA2863472A patent/CA2863472C/fr active Active
- 2013-01-31 CN CN201380012956.7A patent/CN104159599B/zh active Active
- 2013-01-31 EP EP13712827.8A patent/EP2809342B1/fr active Active
- 2013-01-31 KR KR1020147024565A patent/KR101999283B1/ko active IP Right Grant
- 2013-01-31 AU AU2013214039A patent/AU2013214039B2/en active Active
- 2013-01-31 ES ES13712827.8T patent/ES2631030T3/es active Active
- 2013-01-31 US US14/375,414 patent/US9115212B2/en active Active
- 2013-01-31 WO PCT/FR2013/000033 patent/WO2013114013A1/fr active Application Filing
- 2013-01-31 DK DK13712827.8T patent/DK2809342T3/en active
- 2013-01-31 RU RU2014134287A patent/RU2639573C2/ru active
- 2013-01-31 HU HUE13712827A patent/HUE031782T2/en unknown
- 2013-01-31 JP JP2014555282A patent/JP6190825B2/ja active Active
- 2013-01-31 PT PT137128278T patent/PT2809342T/pt unknown
-
2015
- 2015-05-13 HK HK15104539.3A patent/HK1203836A1/xx unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP1275372A1 (fr) * | 2001-06-26 | 2003-01-15 | L'oreal, S.A. | Composition cosmétique ou dermatologique comprenant un dérivé de N-Acylaminoamide et un inhibiteur de métalloprotéinase |
| RU2318873C2 (ru) * | 2001-08-16 | 2008-03-10 | Кимберли-Кларк Ворлдвайд, Инк. | Противовозрастные и ранозаживляющие составы |
| DE102004055541A1 (de) * | 2004-11-17 | 2006-05-18 | Henkel Kgaa | Kosmetische und dermatologische Zusammensetzungen zur Behandlung reifer Haut |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| LIX A. J., A turning point in the knowledge of the structure-function-activity relations of elastin, JOURNAL DE LA SOCIETE DE BIOLOGIE, 2001, v. 195, n. 2, p.181 - 193. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NZ628660A (en) | 2015-12-24 |
| AU2013214039A1 (en) | 2014-09-04 |
| FR2986233B1 (fr) | 2014-02-28 |
| PT2809342T (pt) | 2017-02-21 |
| HK1203836A1 (en) | 2015-11-06 |
| EP2809342A1 (fr) | 2014-12-10 |
| WO2013114013A1 (fr) | 2013-08-08 |
| US20150031633A1 (en) | 2015-01-29 |
| DK2809342T3 (en) | 2017-02-20 |
| ES2631030T3 (es) | 2017-08-25 |
| US9115212B2 (en) | 2015-08-25 |
| FR2986233A1 (fr) | 2013-08-02 |
| KR20140134282A (ko) | 2014-11-21 |
| HUE031782T2 (en) | 2017-08-28 |
| CN104159599A (zh) | 2014-11-19 |
| PL2809342T3 (pl) | 2017-06-30 |
| CA2863472A1 (fr) | 2013-08-08 |
| JP2015506956A (ja) | 2015-03-05 |
| CN104159599B (zh) | 2017-02-01 |
| KR101999283B1 (ko) | 2019-07-11 |
| CA2863472C (fr) | 2017-06-06 |
| JP6190825B2 (ja) | 2017-08-30 |
| AU2013214039B2 (en) | 2016-12-01 |
| EP2809342B1 (fr) | 2016-12-21 |
| RU2014134287A (ru) | 2016-03-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR101668803B1 (ko) | 보호용 피부 관리 테트라펩티드 | |
| Zhang et al. | The effects and mechanism of collagen peptide and elastin peptide on skin aging induced by D-galactose combined with ultraviolet radiation | |
| KR100844914B1 (ko) | 탄력섬유형성의 불완전, 결여 혹은 해체로 인한 질병을제어하는 라이실 옥시다제의 동종효소의 활성 촉진 | |
| CN113248573B (zh) | 改善皮肤生理特性的活性肽与间充质干细胞外泌体在药品或化妆品中的应用 | |
| KR20040023708A (ko) | 노화 방지 및 상처 치유를 위한 화합물 | |
| KR20070100329A (ko) | 콜라겐 합성 및/또는 kgf 발현의 촉진 방법 | |
| RU2639573C2 (ru) | Бифункциональный пептид | |
| CA2640064A1 (en) | Novel peptide and use thereof | |
| KR101830926B1 (ko) | 피부 노화를 방지 및/또는 개선하기 위해 사용되는 pedf-유도 폴리펩티드의 용도 | |
| EP4385516A1 (en) | Synthetic peptide, and cosmetic composition or pharmaceutical composition and application thereof | |
| CN113307851B (zh) | 一种改善皮肤生理特性的活性肽与间充质干细胞外泌体在药品或化妆品中的应用 | |
| KR101889322B1 (ko) | 주름 개선 및 항노화 효과를 가지는 펩타이드, 및 이의 용도 | |
| US20060073132A1 (en) | Agents for wound healing | |
| MX2012006090A (es) | Enzimas fluidas incubadas y usos de las mismas. | |
| JP4342731B2 (ja) | プロテアーゼ感受性ｉｉ | |
| JPH10310534A (ja) | 創傷治療用組成物及びペプチドの使用 | |
| KR20050092026A (ko) | 피브로넥틴의 증가 방법 | |
| CA3137533A1 (en) | Aging progression suppressing agent, and food or beverage product comprising same | |
| CN108602853A (zh) | 用于预防和根治性治疗脱发的肽 | |
| TW202228756A (zh) | 老化之進行抑制劑、及包含其之飲食品 | |
| Leem | Effects of Meretrix Extracts on the Collagenase Activity and Procollagen Synthesis in HS68 Human Fibroblasts and Tyrosinase Activity | |
| Grant et al. | Gene Expression and Endothelial Cell Differentiation |