RU2635966C2 - Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени - Google Patents

Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени Download PDF

Info

Publication number
RU2635966C2
RU2635966C2 RU2014133615A RU2014133615A RU2635966C2 RU 2635966 C2 RU2635966 C2 RU 2635966C2 RU 2014133615 A RU2014133615 A RU 2014133615A RU 2014133615 A RU2014133615 A RU 2014133615A RU 2635966 C2 RU2635966 C2 RU 2635966C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
group
pharmaceutical composition
fragment
exendin
immunoglobulin
Prior art date
Application number
RU2014133615A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2014133615A (ru
Inventor
Се Ёнг ЛИМ
Сан Хи ПАРК
Рён Э ШИН
Ин Юнг ЧХОЙ
Се Чан КВОН
Original Assignee
Ханми Сайенс Ко., Лтд.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ханми Сайенс Ко., Лтд. filed Critical Ханми Сайенс Ко., Лтд.
Publication of RU2014133615A publication Critical patent/RU2014133615A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2635966C2 publication Critical patent/RU2635966C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/26—Glucagons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/22—Hormones
    • A61K38/28—Insulins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6883—Polymer-drug antibody conjugates, e.g. mitomycin-dextran-Ab; DNA-polylysine-antibody complex or conjugate used for therapy
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00—Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50—Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/605—Glucagons
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к области фармацевтики и медицины и касается фармацевтической композиции для предупреждения и лечения неалкогольной жировой болезни печени (НЖБП), включающей конъюгат, полученный путем ковалентного связывания инсулинотропного пептида и Fc-фрагмента иммуноглобулина посредством непептидильного полимера, в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель, где неалкогольная жировая болезнь печени выбрана из группы: простого стеатоза, жировых заболеваний печени, вызванных недостаточностью питания, голоданием, ожирением и диабетом, стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени. Раскрыт также способ лечения. Группа изобретений обеспечивает сохранение in-vivo активности пептида на относительно высоком уровне и заметно увеличивает период полувыведения из крови, предупреждая тем самым накопление триглицеридов, которое является характерной особенностью неалкогольной жировой болезни печени. 2 н. и 15 з.п. ф-лы, 2 ил., 1 табл., 3 пр.

Description

Область техники
Настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, включающей длительно действующий конъюгат инсулинотропного пептида, который можно применять для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени. В частности, настоящее изобретение относится к конъюгату инсулинотропного пептида, в котором инсулинотропный пептид, непептидильный полимер и Fc-фрагмент иммуноглобулина ковалентно связывают друг с другом, для того чтобы заметно увеличивать период полувыведения из крови, эффективно предупреждать накопление триглицеридов и применять его для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени.
Предшествующий уровень техники
Неалкогольная жировая болезнь печени относится к широкому спектру заболеваний в диапазоне от простого стеатоза, который не сопровождается воспалительным ответом у пациента, не употребляющего чрезмерно алкоголь, до фиброза печени и цирроза печени, которые являются результатом прогрессирования простого стеатоза и демонстрируют печеночно-клеточное воспаление.
Неалкогольную жировую болезнь печени можно классифицировать на первичные и вторичные неалкогольные жировые болезни печени в зависимости от патологической причины. Первичное заболевание вызывается гиперлипидемией, диабетом, ожирением или тому подобным, которое представляет собой признак метаболического синдрома. Вторичное заболевание является результатом причин, обусловленных питанием (внезапная потеря массы тела, голодание, операция шунтирования тонкой кишки), различными лекарственными средствами, токсическими веществами (ядовитые грибы, бактериальные токсины), метаболических причин и других факторов.
Известно, что коэффициент заболеваемости первичной неалкогольной жировой болезнью печени, при которой главным фактором являются диабет и ожирение, представляющие собой важные признаки метаболического синдрома, составляет примерно 50% у больных диабетом, примерно 76% у больных ожирением и самый высокий у больных с диабетом, страдающих ожирением (Gupte Ρ et al., 2004). Кроме того, при выполнении биопсии печени у больных диабетом и ожирением с повышенным уровнем аланинаминотрансферазы (ALT), коэффициент заболеваемости стеатогепатитом находится в диапазоне от 18 до 36% (Braillon A et al., 1985).
В настоящее время отсутствует общепринятый способ определения причины неалкогольной жировой болезни печени. Причина состоит в том, что коэффициент заболеваемости неалкогольной жировой болезнью печени связан с рядом факторов, таких как диабет, ожирение, ишемическая болезнь сердца и привычки, связанные с образом жизни. Имеются некоторые сообщения об эффектах лекарственных средств против диабета или ожирения, оказываемых на жировую болезнь печени. Орлистат, который применяют в качестве перорального лекарственного средства против ожирения, демонстрировал гистологические улучшения в печени пациентов со стеатогепатитом (Hussein et al., 2007), а метформин демонстрировал снижение уровней печеночных ферментов в крови и некротизирующего воспаления печени и фиброза при неалкогольной жировой болезни печени у пациентов без проявления диабета (Bugianesi et al., 2005). Кроме того, лекарственные средства класса тиазолидиндионов (TZD), которые представляют собой агонисты PPAR (рецептора, активирующего пролиферацию пероксисом), ингибируют накопление жира в печени и мышцах, и оказывают непосредственное противофиброзное воздействие на печень в животных моделях неалкогольных жировых заболеваний печени (Galli A et al., 2002).
В то же время, глюкагоноподобный пептид-1 (GLP-1) представляет собой эндогенный пептид, присутствующий в организме, и представляет собой гормон, секретируемый из L-клеток кишечника в ответ на стимулирование посредством питательных веществ или уровень глюкозы в крови в кишечнике. GLP-1 имеет разнообразие физиологических активностей, включая регулирование уровня глюкозы в крови путем стимулирования секреции инсулина, пролиферацию β-клеток поджелудочной железы, подавление моторики верхних отделов желудочно-кишечного тракта и подавление аппетита. Недавно в гепатоцитах обнаружили экспрессию рецепторов GLP-1, и GLP-1 демонстрирует хорошие эффекты в отношении неалкогольной жировой болезни печени путем активации фосфоинозитид-зависимой киназы-1 (PDK-1) и протеинкиназы С-(PKC-), которые являются главными белками в инсулиновом сигнальном пути, при помощи GLP-1-рецепторов гепатоцитов (Gupta NA et al., 2010). GLP-1 также работает на снижение накопления жирной кислоты или защищает гепатоциты от смерти, вызываемой стрессом эндоплазматического ретикулума, посредством активации как шаперон-опосредованной аутофагии (СМА), так и макроаутофагии (Sharma S et al., 2011). В недавнем исследовании сообщалось, что GLP-1 способствует окислению печеночных липидов для предупреждения накопления печеночного жира и способствует активности инсулина (Svegliati-Baroni G et al., 2011). Эти многочисленные сообщения наводят на мысль, что производное GLP-1 может быть важным кандидатом для создания профилактического и терапевтического агента для неалкогольной жировой болезни печени.
Однако основным препятствием для применения GLP-1 в качестве терапевтического агента для неалкогольной жировой болезни печени является его короткий период полувыведения из крови (максимальный период полувыведения: 2 минуты). Это объясняется потерей титров GLP-1 из-за расщепления между 8-ой аминокислотой (Ala) и 9-ой аминокислотой (Asp) посредством дипептидилпептидазы IV (DPP IV) в организме. По этой причине были выполнены различные исследования на аналоге GLP-1, имеющем устойчивость к DPP IV, и были выполнены испытания по замене Ala8 на Gly (Deacon et al., 1998; Burcelin et al., 1999), или на Leu или на D-Ala (Xiao et al., 2001), тем самым повышая устойчивость к DPP IV, сохраняя при этом активность. N-концевая аминокислота His7 GLP-1 имеет решающее значение для активности GLP-1 и служит в качестве мишени DPP IV. Таким образом, в патенте США №5545618 описано, что N-конец модифицируют алкильной или ацильной группой и Gallwitz, et al. описывает, что 7-ой His подвергали N-метилированию, или альфа-метилированию, или весь His заменяют на имидазол для увеличения устойчивости к DPP IV и сохранения физиологической активности.
В дополнение к этим модификациям эксендин-4, который представляет собой аналог GLP-1, выделенный из слюнной железы ящерицы-ядозуба (патент США №5424686), имеет устойчивость к DPP IV и более высокую физиологическую активность, чем GLP-1. В результате он имел период полувыведения in-vivo от 2 до 4 часов, промежуток времени, который длиннее, чем у GLP-1. Однако с помощью одного лишь способа повышения устойчивости к DPP IV, физиологическая активность не является достаточно длительной и, например, в случае имеющегося в продаже эксендина-4 (эксенатид), его необходимо инъецировать пациенту дважды в сутки. Такая частота все же сложна для пациентов. Пептид, полученный для решения проблемы, представляет собой эксендин-4, который устойчив к DPP IV и имеет период полувыведения из крови от 2 до 4 часов. Хотя его период полувыведения из крови дольше, чем для GLP-1, его также необходимо инъецировать ежедневно.
Описание изобретения
Техническая задача
Таким образом, авторы настоящего изобретения использовали способ сайт-специфического связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина, непептидильного полимера и инсулинотропного пептида ковалентной связью для того, чтобы максимизировать эффекты увеличения периода полувыведения из крови для инсулинотропного пептида и сохранения активности in-vivo. В результате авторы настоящего изобретения обнаружили, что способ заметно увеличивал период полувыведения из крови конъюгата пептида и обеспечивал намного более длительный период полувыведения из крови, по сравнению с известным способом слияния в рамке считывания. Авторы настоящего изобретения также обнаружили, что конъюгат, полученный сайт-специфическим связыванием Fc-фрагмента иммуноглобулина с аминогруппой или тиоловой группой, присутствующей в аминокислотном остатке, который не является N-концевым остатком инсулинотропного пептида, сохраняет более высокие титры, чем конъюгат, полученный связыванием на N-конце инсулинотропного пептида. В результате было подтверждено, что конъюгат демонстрирует превосходные терапевтические эффекты на неалкогольную жировую болезнь печени, даже если его вводили реже, чем известные композиции эксендина-4, тем самым завершая настоящее изобретение.
Решение проблемы
Цель настоящего изобретения заключается в предложении длительно действующего конъюгата инсулинотропного пептида, который сохраняет пролонгированный in-vivo период полувыведения и эффективно предупреждает накопление триглицеридов и, таким образом, является полезным для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени.
Полезные эффекты изобретения
Конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению сохраняет in-vivo активность пептида на относительно высоком уровне, имеет заметно увеличенный период полувыведения из крови и эффективно активирует главные белки, вовлеченные в липолиз, для предупреждения накопления триглицеридов, тем самым оказываясь полезным для предупреждения и лечения неалкогольной жировой болезни печени.
Краткое описание графических материалов
На ФИГ. 1 показаны изображения ткани печени мыши ob/ob, которой вводили длительно действующий конъюгат эксендина-4 согласно одному воплощению настоящего изобретения (окрашивание гематоксилином и эозином, Н&Е окрашивание, область, окрашенная в фиолетовый цвет: нормальная ткань печени; область, окрашенная в белый цвет: капли жира); и
На ФИГ. 2 показана диаграмма накопления внутрипеченочных триглицеридов у мышей с индуцированным ожирением, находящихся на высокожирной диете, которым вводили длительно действующий конъюгат эксендина-4 согласно одному воплощению настоящего изобретения (#: значимое повышение с доверительным интервалом 99%, по сравнению с группой с нормальной диетой (p<0,01), *: значимое снижение с доверительным интервалом 99%, по сравнению с группой с высокожирной диетой (p<0,01)).
Лучший вариант осуществления изобретения
В одном аспекте для достижения вышеупомянутых целей одно воплощение относится к фармацевтической композиции для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, включающей лекарственный конъюгат инсулинотропного пептида в качестве активного ингредиента, который получают ковалентным связыванием инсулинотропного пептида и Fc-фрагмента иммуноглобулина с помощью непептидильного полимера.
В фармацевтической композиции по настоящему изобретению инсулинотропный пептид выбирают из группы, состоящей из эксендина-4, производного эксендина-4, полученного путем удаления N-концевой аминогруппы эксендина-4, производного эксендина-4, полученного путем замены N-концевой аминогруппы эксендина-4 на гидроксильную группу, производного эксендина-4, полученного путем модифицирования N-концевой аминогруппы эксендина-4 диметильной группой, и производного эксендина-4, полученного путем удаления альфа-углерода N-концевого остатка гистидина эксендина-4 и N-концевой аминогруппы, связанной с альфа-углеродом.
Непептидильный полимер выбирают из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоль-пропиленгликоль, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемых полимеров, полимеров липидов, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций.
Инсулинотропный пептид по настоящему изобретению представляет собой пептид, обладающий инсулинотропной функцией для стимулирования синтеза и экспрессии инсулина в бета-клетках поджелудочной железы. Эти пептиды включают предшественники, производные, фрагменты, варианты или тому подобное и, предпочтительно, GLP (глюкагоноподобный пептид)-1, эксендин-3, эксендин-4 или тому подобное.
GLP-1 представляет собой гормон, который секретируется в тонком кишечнике. В общем случае он способствует биосинтезу и секреции инсулина, подавляет секрецию глюкагона и способствует абсорбции глюкозы в клетках. В тонком кишечнике предшественник глюкагона распадается на три пептида, а именно глюкагон, GLP-1 и GLP-2. Здесь GLP-1 обозначает GLP-1 (1-37), который изначально находится в форме, не имеющей инсулинотропной функции. Но затем он обрабатывается и превращается в активированную форму GLP-1 (7-37). Аминокислотная последовательность GLP-1 (7-37) является следующей:
GLP-1 (7-37)(SEQ ID NO: 1)
HAEGT FTSDV SSYLE GQAAK EPIAW LVKGR G
Производное GLP-1 обозначает пептид, который демонстрирует гомологию аминокислотных последовательностей с последовательностью GLP-1 по меньшей мере 80%, может находиться в химически модифицированной форме и демонстрирует инсулинотропную функцию, по меньшей мере эквивалентную таковой GLP-1 или большую.
Фрагмент GLP-1 обозначает форму, в которой одну или более аминокислот добавляют в N-конец или С-конец нативного GLP-1 или удаляют из них, и добавленная аминокислота возможно представляет собой аминокислоту неприродного происхождения (например, аминокислоту D-типа).
Вариант GLP-1 обозначает пептид, имеющий инсулинотропную функцию, который имеет одну или более аминокислотных последовательностей, отличных от последовательностей нативного GLP-1.
Эксендин-3 и эксендин-4 представляют собой инсулинотропные пептиды, состоящие из 39 аминокислот, которые имеют гомологию аминокислотных последовательностей с GLP-1 53%. Аминокислотные последовательности эксендина-3 и эксендина-4 являются следующими:
Эксендин-3 (SEQ ID NO: 2)
HSDGT FTSDL SKQME EEAVR LFIEW LKNGG PSSGA PPPS
Эксендин-4 (SEQ ID NO: 3)
HGEGT FTSDL SKQME EEAVR LFIEW LKNGG PSSGA PPPS
Производное эксендина означает пептид, имеющий гомологию аминокислотных последовательностей с нативным эксендином по меньшей мере 80%, который может иметь некоторые химически замещенные группы на аминокислотном остатке и демонстрирует инсулинотропную функцию, по меньшей мере эквивалентную таковой нативного эксендина или большую.
Фрагмент эксендина означает фрагмент, имеющий одну или более аминокислот, добавленных в N-конец или в С-конец нативного эксендина или удаленных из них, и добавленная аминокислота возможно представляет собой аминокислоту неприродного происхождения (например, аминокислоту D-типа).
Вариант эксендина означает пептид, обладающий инсулинотропной функцией, который имеет одну или более аминокислотных последовательностей, отличных от последовательностей нативного эксендина.
В конкретном воплощении нативный инсулинотропный пептид, применяемый в настоящем изобретении, и модифицированный инсулинотропный пептид можно синтезировать, используя способ твердофазного синтеза, и большую часть нативных пептидов, включая нативный инсулинотропный пептид, можно получать посредством технологии рекомбинации.
Кроме того, инсулинотропный пептид, применяемый в настоящем изобретении, может связываться с непептидильным полимером на различных участках.
Конъюгат, полученный в настоящем изобретении, может иметь активность, которая варьирует в зависимости от участков связывания инсулинотропного пептида.
Например, его можно соединять с N-концом и другим концом, включая С-конец, соответственно, которые показывают различие in-vitro активности. Альдегидная реакционноспособная группа избирательно связывается с N-концом при низком pH и может связываться с остатком лизина с образованием ковалентной связи при высоком pH, например pH 9,0. Реакция пегилирования дает возможность действовать при переменном pH, и затем для отделения позиционного изомера из реакционной смеси можно использовать ионообменную колонку.
Если инсулинотропный пептид подлежит соединению в участке, отличном от N-конца, который является важным участком для in-vivo активности, реакционноспособную тиоловую группу можно вводить в участок подлежащего модифицированию аминокислотного остатка в нативной аминокислотной последовательности, чтобы образовать ковалентную связь, используя малеимидный линкер в непептидильном полимере.
Если инсулинотропный пептид подлежит соединению в участке, отличном от N-конца, который является важным участком для in-vivo активности, реакционноспособную аминогруппу можно вводить в участок подлежащего модифицированию аминокислотного остатка в нативной аминокислотной последовательности, чтобы образовать ковалентную связь, используя альдегидный линкер в непептидильном полимере.
Когда используют альдегидный линкер в непептидильном полимере, его приводят во взаимодействие с аминогруппой на N-конце и остатком лизина, и модифицированную форму инсулинотропного пептида можно использовать для избирательного увеличения выхода реакции. Например, только одну аминогруппу для взаимодействия можно оставлять на желаемом участке, используя способ блокирования N-конца, способ замены остатка лизина, способ введения аминогруппы на карбоксильном конце или тому подобное, тем самым увеличивая выход пегилирования и реакций связывания. Способы защиты N-конца включают диметилирование, а также метилирование, дезаминирование, ацетилирование и так далее, но не ограничиваются такими способами алкилирования.
В одном предпочтительном воплощении конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению представляет собой конъюгат инсулинотропного пептида, в котором Fc-фрагмент иммуноглобулина специфически связывается с аминогруппой, отличной от групп на N-конце инсулинотропного пептида.
В одном конкретном воплощении авторы настоящего изобретения индуцировали пегилирование нативного эксендина-4 при pH 9,0 для избирательного соединения ПЭГ с остатком лизина инсулинотропного пептида. Альтернативно, для соединения можно синтезировать производные эксендина-4, имеющие удаленный или защищенный N-конец. Пегилирование на N-конце можно блокировать либо путем удаления аминогруппы альфа N-концевого гистидина, либо путем модифицирования N-концевого гистидина двумя метильными группами. Такая N-концевая модификация не влияет на in-vitro активность (Таблица 1).
В отличие от N-концевого связывания эксендина-4, связывание на остатке лизина сохраняло приблизительно 6% in-vitro активности (Таблица 1). Кроме того, конъюгат эксендин-4-ПЭГ-Fc-фрагмент иммуноглобулина, полученный в настоящем изобретении, демонстрировал заметно увеличенный период полувыведения из крови 60~70 часов, что указывает на неожиданно высокий период эффективности. По этой причине также минимизировали снижение титра посредством связывания с остатком лизина, который не влияет на активность, и таким образом может быть получена новая композиция длительно действующего эксендина-4, способная к сохранению in-vivo активности.
Fc-фрагмент иммуноглобулина безопасен для применения в качестве носителя лекарственного средства, так как он представляет собой биоразлагаемый полипептид, который метаболизируется in vivo. Также Fc-фрагмент иммуноглобулина имеет относительно низкую молекулярную массу по сравнению с целыми молекулами иммуноглобулина и, таким образом, является полезным для получения, очистки и выхода конъюгата. Так как Fc-фрагмент иммуноглобулина не содержит Fab-фрагмент, аминокислотная последовательность которого отличается согласно подклассам антител и который, таким образом, является весьма негомогенным, можно ожидать, что Fc-фрагмент иммуноглобулина может значительно увеличивать гомогенность веществ и быть менее антигенным.
Термин «Fc-фрагмент иммуноглобулина» при использовании здесь относится к константной области тяжелых цепей 2 (CH2) и к константной области тяжелых цепей 3 (CH3) и не включает вариабельные области тяжелых и легких цепей, к константной области тяжелых цепей 1 (CH1) и к константной области легких цепей 1 (CL1) иммуноглобулина. Он может дополнительно включать шарнирную область в константной области тяжелых цепей. Также Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может содержать часть или весь Fc-фрагмент, включая константную область тяжелых цепей 1 (CH1) и/или константную область легких цепей 1 (CL1), за исключением вариабельных областей тяжелых и легких цепей, при условии, что он обладает эффектами, по существу аналогичными нативному белку или лучшими, чем у него. Также Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой фрагмент, имеющий делецию в относительно длинной части аминокислотной последовательности CH2 и/или CH3. То есть Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению может включать 1) домен CH1, домен CH2, домен CH3 и домен CH4, 2) домен CH1 и домен CH2, 3) домен CH1 и домен CH3, 4) домен CH2 и домен CH3, 5) комбинацию одного или более доменов и шарнирной области иммуноглобулина (или часть шарнирной области) и 6) димер каждого домена константных областей тяжелых цепей и константной области легких цепей.
Fc-фрагмент иммуноглобулина по настоящему изобретению включает нативную аминокислотную последовательность и производное этой последовательности (мутант). Производное аминокислотной последовательности представляет собой последовательность, которая отличается от нативной аминокислотной последовательности вследствие делеции, вставки, неконсервативного или консервативного замещения одного или более аминокислотных остатков, или их комбинаций. Например, известно, что аминокислотные остатки в Fc IgG, важные для связывания, в положениях от 214 до 238, от 297 до 299, от 318 до 322 или от 327 до 331 можно использовать в качестве подходящей мишени для модифицирования. Также являются возможными другие различные производные, включая те, в которых фрагмент, способный к образованию дисульфидной связи, удаляют или конкретные аминокислотные остатки исключают из N-конца нативной формы Fc, или добавляют туда остаток метионина. Кроме того, для удаления эффекторных функций может иметь место делеция в участке связывания комплемента, таком как участок связывания C1q и участок ADCC (антителозависимая клеточно-опосредованная цитотоксичность). Методы получения таких производных последовательности Fc-фрагмента иммуноглобулина раскрыты в публикациях международных патентных заявок WO 97/34631 и WO 96/32478.
Аминокислотные замены в белках и пептидах, которые обычно не изменяют активность молекул, известны в данной области техники (H. Neurath, R.L. Hill, The Proteins, Academic Press, New York, 1979). Обычно имеющие место замены представляют собой Ala/Ser, Val/lle, Asp/Glu, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Thy/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Leu/lle, Leu/Val, Ala/Glu, Asp/Gly в обоих направлениях.
Fc-фрагмент, если желательно, можно модифицировать путем фосфорилирования, сульфатирования, акрилирования, гликолизирования, метилирования, фарнезилирования, ацетилирования, амидирования и тому подобного.
Вышеупомянутые производные Fc представляют собой производные, которые имеют биологическую активность, идентичную Fc-фрагменту по настоящему изобретению, или улучшенную структурную устойчивость к нагреванию, pH или тому подобному.
Кроме того, эти Fc-фрагменты можно получать из нативных форм, выделенных из людей и других животных, включая крупный рогатый скот, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс и морских свинок, или они могут представлять собой их рекомбинанты или производные, полученные из трансформированных животных клеток или микроорганизмов. В данном описании изобретения они могут быть получены из нативного иммуноглобулина путем выделения целых иммуноглобулинов из организма человека или животного и их обработки протеолитическим ферментом. Папаин гидролизует нативный иммуноглобулин на фрагменты Fab и Fc, а обработка пепсином приводит к получению фрагментов pF'c и F(ab)2. Эти фрагменты можно подвергать гель-хроматографии для выделения Fc или pF'c.
Предпочтительно, Fc-фрагмент, полученный от человека, представляет собой Fc-фрагмент рекомбинантного иммуноглобулина, который получают из микроорганизма.
Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина может находиться в форме, содержащей нативные сахарные цепи, увеличенные сахарные цепи по сравнению с нативной формой, или уменьшенные сахарные цепи по сравнению с нативной формой, или может находиться в дегликолизированной форме. Увеличение, уменьшение или удаление сахарных цепей Fc-фрагмента иммуноглобулина может быть достигнуто способами, общепринятыми в данной области техники, такими как химический способ, ферментный способ и способ генной инженерии, использующий микроорганизм. Удаление сахарных цепей из Fc-фрагмента приводит к резкому уменьшению аффинности связывания с комплементом (c1q) и к уменьшению или потере антителозависимой клеточно-опосредованной цитотоксичности или комплементозависимой цитотоксичности, тем самым не индуцируя ненужные иммунные ответы in-vivo. В этом смысле, Fc-фрагмент иммуноглобулина в дегликолизированной или агликолизированной форме может быть более подходящим для цели настоящего изобретения в качестве носителя лекарственного средства.
При использовании здесь, термин «дегликолизирование» относится к ферментативно удаленным из Fc-фрагмента сахарным группировкам, а термин «агликолизирование» означает, что Fc-фрагмент продуцируется в негликолизированной форме прокариотом, предпочтительно Е. coli.
Хотя Fc-фрагмент иммуноглобулина можно предпочтительно получать от людей, его можно также получать от других животных, включая крупный рогатый скот, коз, свиней, мышей, кроликов, хомяков, крыс и морских свинок. Кроме того, Fc-фрагмент иммуноглобулина может представлять собой Fc-фрагмент, который получают из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM, или который изготавливают посредством их комбинаций или их гибридов. Предпочтительно, его получают из IgG или IgM, который принадлежит к наиболее часто встречающимся белкам в крови человека, и наиболее предпочтительно получают из IgG, который, как известно, увеличивает периоды полувыведения лиганд-связывающих белков.
С другой стороны, термин «комбинация» при использовании здесь означает, что полипептиды, кодирующие одиночные цепи Fc-фрагментов иммуноглобулина одного и того же происхождения, связывают с одноцепочечным полипептидом другого происхождения с образованием димера или мультимера. То есть димер или мультимер можно образовывать из двух или более фрагментов, выбранных из группы, состоящей из фрагментов IgG Fc, IgA Fc, IgM Fc, IgD Fc, и IgE Fc.
Термин «гибрид», при использовании здесь, означает, что последовательности, кодирующие два или более Fc-фрагментов иммуноглобулина различного происхождения, присутствуют в одноцепочечном Fc-фрагменте иммуноглобулина. В настоящем изобретении возможны различные типы гибридов. То есть гибриды домена могут состоять из от одного до четырех доменов, выбранных из группы, состоящей из CH1, CH2, CH3 и CH4 из IgG Fc, IgM Fc, IgA Fc, IgE Fc и IgD Fc, и могут включать шарнирную область.
С другой стороны, IgG можно разделить на подклассы IgG1, IgG2, IgG3 и IgG4, и настоящее изобретение может включать их комбинации и гибриды. Предпочтительными являются подклассы IgG2 и IgG4, и наиболее предпочтительным является Fc-фрагмент из IgG4, редко обладающий эффекторными функциями, такими как CDC (комплементозависимая цитотоксичность).
То есть в качестве носителя лекарственного средства по настоящему изобретению наиболее предпочтительным Fc-фрагментом иммуноглобулина является негликолизированный Fc-фрагмент, полученный из IgG4 человека. Полученный от человека Fc-фрагмент является более предпочтительным, чем полученный от другого организма Fc-фрагмент, который может выступать в роли антигена в организме человека и вызывать нежелательные иммунные ответы, такие как продуцирование нового антитела против антигена.
Термин «непептидильный полимер» при использовании здесь относится к биосовместимому полимеру, включающему две или более повторяющихся единиц, связанных друг с другом посредством любой ковалентной связи, исключая пептидную связь.
Непептидильный полимер, который можно применять в настоящем изобретении, может быть выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоля и пропиленгликоля, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемых полимеров, таких как PLA (полимолочная кислота) и PLGA (полимолочная-гликолевая кислота), полимеров липидов, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, из которых предпочтительным является полиэтиленгликоль. Их производные, хорошо известные в данной области техники и легко получаемые специалистом в данной области техники, также включены в объем настоящего изобретения.
Пептидный линкер, который используют в слитых белках, полученный посредством общепринятого способа слияния в рамке, имеет недостатки в том, что он легко расщепляется in-vivo протеолитическим ферментом и, таким образом, достаточный эффект увеличения периода полувыведения из крови активного лекарственного средства посредством носителя не может быть получен, как ожидалось. Однако в настоящем изобретении полимер, обладающий устойчивостью к протеолитическому ферменту, можно использовать, чтобы сохранить период полувыведения из крови пептида аналогичным таковому периоду для носителя. По этой причине любой непептидильный полимер для применения в настоящем изобретении можно использовать без какого-либо ограничения, пока он является полимером, обладающим вышеупомянутой функцией, то есть полимером, имеющим устойчивость к in-vivo протеолитическому ферменту. Непептидильный полимер предпочтительно имеет молекулярную массу в диапазоне от 1 до 100 кДа и предпочтительно от 1 до 20 кДа. Также непептидильный полимер по настоящему изобретению, связанный с Fc-фрагментом иммуноглобулина, может представлять собой один полимер или комбинацию различных типов полимеров.
Непептидильный полимер, используемый в настоящем изобретении, имеет реакционноспособную группу, способную связываться с Fc-фрагментом иммуноглобулина и белковым лекарственным средством.
Непептидильный полимер имеет на обоих концах реакционноспособную группу, которую предпочтительно выбирают из группы, состоящей из реакционноспособной альдегидной группы, группы пропиональдегида, группы бутиральдегида, группы малеимида и производного сукцинимида. Производное сукцинимида может представлять собой сукцинимидилпропионат, гидроксисукцинимидил, сукцинимидилкарбоксиметил или сукцинимидилкарбонат. В частности, когда непептидильный полимер имеет на обоих концах реакционноспособную альдегидную группу, он эффективен в связывании на обоих концах с физиологически активным полипептидом и иммуноглобулином с минимальными неспецифическими реакциями. Конечный продукт, образованный путем восстановительного алкилирования с помощью альдегидной связи, является гораздо более устойчивым, чем при связывании посредством амидной связи. Альдегидная реакционноспособная группа избирательно связывается с N-концом при низком pH и может связываться с остатком лизина с образованием ковалентной связи при высоком pH, например при pH 9,0.
Реакционноспособные группы на обоих концах непептидильного полимера могут быть одинаковыми или разными. Например, непептидильный полимер может иметь группу малеимида на одном конце, а на другом конце он может иметь альдегидную группу, группу пропиональдегида или группу бутиральдегида. Когда в качестве непептидильного полимера используют полиэтиленгликоль, имеющий реакционноспособную гидроксигруппу на обоих концах, гидроксигруппа может быть включена в различные реакционноспособные группы путем известных химических реакций, или можно использовать полиэтиленгликоль, имеющий модифицированную реакционноспособную группу, имеющийся в продаже, для того чтобы получить конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению.
В другом воплощении настоящего изобретения предложен способ получения конъюгата инсулинотропного пептида, включающий стадии:
1) ковалентного связывания непептидильного полимера, имеющего на обоих концах реакционноспособную группу альдегида, малеимида или производного сукцинимида, с аминогруппой или тиоловой группой инсулинотропного пептида;
2) выделения конъюгата, включающего инсулинотропный пептид, из реакционной смеси (1), в котором непептидильный полимер ковалентно связывают в участке, отличном от N-конца; и
3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом непептидильного полимера выделенного конъюгата, чтобы получить конъюгат пептида, имеющий Fc-фрагмент иммуноглобулина и инсулинотропный пептид, которые связаны с каждым концом непептидильного полимера.
Термин «конъюгат» при использовании здесь относится к промежуточному соединению, полученному путем ковалентного связывания непептидильного полимера с инсулинотропным пептидом, и потом Fc-фрагмент иммуноглобулина связывают с другим концом непептидильного полимера в конъюгате.
В одном предпочтительном воплощении настоящего изобретения предложен способ получения, включающий стадии:
1) ковалентного связывания непептидильного полимера, имеющего на обоих концах альдегидную реакционноспособную группу с остатком лизина эксендина-4;
2) выделения конъюгата, включающего эксендин-4, из реакционной смеси (1), в котором непептидильный полимер ковалентно связывают с остатком лизина; и
3) ковалентного связывания Fc-фрагмента иммуноглобулина с другим концом непептидильного полимера выделенного конъюгата, чтобы получить конъюгат белка, включающий Fc-фрагмент иммуноглобулина и эксендин-4, которые связаны с каждым концом непептидильного полимера. Более предпочтительно, непептидильный полимер и остаток лизина эксендина-4 в (1) связывают при pH 9,0 или выше.
Конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению активирует главные белки инсулинового сигнального пути с помощью рецепторов GLP-1 и, таким образом, может быть применен для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени. В частности, конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению увеличивает активность PKC-ζ (протеинкиназы C-ζ), которая регулирует ферментную активность, вовлеченную в липолиз, и сохраняет in-vivo активность известного инсулинотропного пептида, который увеличивает экспрессию Glut2 (белок-транспортер глюкозы 2) и увеличивает период полувыведения из крови инсулинотропного пептида, тем самым заметно увеличивая период in-vivo эффективности. Таким образом, можно получать превосходные терапевтические эффекты на неалкогольную жировую болезнь печени при меньшей частоте введения, чем известные композиции.
В настоящем изобретении неалкогольная жировая болезнь печени (НЖБП) включает первичные и вторичные неалкогольные жировые заболевания печени, и более конкретно означает неалкогольную жировую болезнь печени, вызванную первичной гиперлипидемией, диабетом или ожирением. Например, неалкогольная жировая болезнь печени включает простой стеатоз, жировые заболевания печени, вызванные недостаточностью питания, голоданием, ожирением и диабетом, стеатогепатит и фиброз печени, и цирроз печени имеет место из-за прогрессирования этих заболеваний.
Фармацевтическая композиция, включающая конъюгат инсулинотропного пептида по настоящему изобретению, может дополнительно включать фармацевтически приемлемый носитель. Для перорального введения фармацевтически приемлемый носитель может включать связующее вещество, смазывающее вещество, разрыхлитель, эксципиент, солюбилизатор, диспергирующий агент, стабилизатор, суспендирующий агент, краситель и ароматизатор. Для инъецируемых препаратов фармацевтически приемлемый носитель может включать буферный агент, консервант, анальгетик, солюбилизатор, изотонический агент и стабилизатор. Для препаратов для местного применения фармацевтически приемлемый носитель может включать основу, эксципиент, смазывающее вещество и консервант. Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно изготовить в виде ряда лекарственных форм в комбинации с вышеупомянутыми фармацевтически приемлемыми носителями. Например, для перорального введения фармацевтическую композицию можно изготовить в виде таблеток, пастилок, капсул, эликсиров, суспензий, сиропов или облаток. Для инъецируемых препаратов фармацевтическую композицию можно изготовить в виде ампулы в качестве однодозовой лекарственной формы или в стандартной лекарственной форме, такой как многодозовый контейнер. Фармацевтическую композицию можно также изготовить в виде растворов, суспензий, таблеток, пилюль, капсул и длительно действующих препаратов.
С другой стороны, примеры носителя, эксципиента и разбавителя, подходящих для фармацевтических композиций, включают лактозу, декстрозу, сахарозу, сорбит, маннит, ксилит, эритрит, мальтит, крахмал, гуммиарабик, альгинат, желатин, фосфат кальция, силикат кальция, целлюлозу, метилцеллюлозу, микрокристаллическую целлюлозу, поливинилпирролидон, воду, метилгидроксибензоат, пропилгидроксибензоат, тальк, стеарат магния и минеральные масла. Кроме того, фармацевтические композиции могут дополнительно включать наполнители, антикоагулянты, смазывающие вещества, увлажнители, ароматизаторы и антисептики.
Конъюгат по настоящему изобретению является полезным для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени. Таким образом, фармацевтическую композицию, включающую конъюгат, можно вводить для лечения болезни.
Термин «введение» при использовании здесь означает ввод заранее определенного вещества в организм пациента посредством определенного подходящего способа. Конъюгат по настоящему изобретению можно вводить с помощью любого из общепринятых путей, при условии, что он способен достичь желаемой ткани. Предполагается разнообразие способов введения, включая внутрибрюшинный, внутривенный, внутримышечный, подкожный, внутрикожный, пероральный, местный, интраназальный, внутрилегочный и ректальный, но настоящее изобретение не ограничивается этими приведенными в пример способами введения. Однако, так как пептиды гидролизуются при пероральном введении, активные ингредиенты композиции для перорального введения следует покрывать оболочкой или изготавливать для защиты от деградации в желудке. Предпочтительно, настоящую композицию можно вводить в инъецируемой форме. Кроме того, фармацевтическую композицию можно вводить, используя определенное устройство, способное к переносу активных ингредиентов в клетку-мишень.
Фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно определять несколькими связанными факторами, включая типы заболеваний, подлежащих лечению, пути введения, возраст пациента, пол, массу и тяжесть заболевания, а также типами лекарственного средства в качестве активного компонента. Так как фармацевтическая композиция по настоящему изобретению имеет превосходную продолжительность эффективности in-vivo и титр, можно заметно уменьшать частоту введения и дозу фармацевтических лекарственных средств по настоящему изобретению.
Кроме того, фармацевтическую композицию по настоящему изобретению можно применять самостоятельно или в комбинации с хирургической операцией, гормональной терапией, лекарственной терапией и регуляторами биологического ответа с целью предупреждения и лечения неалкогольной жировой болезни печени.
В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению фармацевтической композиции в изготовлении лекарственных средств для предупреждения или лечения неалкогольной болезни печени.
Осуществление изобретения
В дальнейшем в этом документе настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на следующие Примеры. Однако эти Примеры предназначены только для иллюстративных целей, и изобретение не должно ограничиваться этими Примерами.
Пример 1. Испытание in-vitro активности длительно действующего эксендина-4
Целый ряд производных длительно действующего эксендина-4, используемых в этом эксперименте, получали таким же способом, как в корейском патенте №10-1058315 тех же авторов, которые разработали настоящее изобретение.
Использовали способ измерения in-vitro клеточной активности, чтобы измерить эффективность длительно действующего препарата эксендина-4. Во время измерения in-vitro активности использовали RIN-m5F, которые известны как клетки инсулиномы крыс. Так как эти клетки имеют рецепторы GLP-1, их обычно используют в способах измерения in-vitro активности семейства GLP-1. RIN-m5F обрабатывали GLP-1, эксендином-4 и испытываемыми веществами в варьирующихся концентрациях. Значения EC50 определяли путем измерения распространенности cAMP, которые являются сигнальными молекулами в клетках, вызываемой испытываемыми веществами, и сравнивали друг с другом. Результаты обобщены в Таблице 1.
Figure 00000001
Эксендин-4(N)-ПЭГ-Fc: конъюгат, полученный посредством связывания N-конца эксендина-4 и Fc-фрагмента с помощью ПЭГ.
Эксендин-4(Lys27)-ПЭГ-Fc: конъюгат, полученный посредством связывания 27-го остатка лизина эксендина-4 и Fc-фрагмента с помощью ПЭГ.
Как показано в Таблице 1, когда непептидильный полимер связывали с остатком лизина, который не является N-концевым остатком нативного эксендина-4, титр in-vitro сохранялся на 6,3%, и период полувыведения из крови заметно увеличивался до приблизительно 70 часов.
Пример 2. Воздействия на образование жировой печени у мышей ob/ob, животной модели ожирения
<2-1> Разделение экспериментальных животных
Самок 5-недельных мышей линии ob/ob (C57BL/6JHamSlc-ob/ob, 24-34 г) покупали у SIc, Япония. Мышь ob/ob представляет собой животную модель, используемую обычно в испытаниях эффективности композиций от ожирения и против диабета. Их кормили без ограничения твердым кормом для экспериментальных животных, который стерилизовали облучением (производитель: Picolab Rodent Diet, продукт номер: 5053), и обеспечивали свободный доступ к фильтрованной, стерилизованной ультрафиолетовым излучением водопроводной воде в баллоне для воды. Их содержали в корпусной системе, удовлетворяющей требованиям стандарта GLP (надлежащей лабораторной практики), с 12 ч циклом дня и ночи (свет включали в 6:00 утра и выключали в 18:00 вечера) в соответствии с типовыми нормами ухода за животными. После этого выбирали здоровых мышей ob/ob и акклиматизировали в лабораторных условиях в течение 1 недели. Затем выполняли введение лекарственного средства и мышей разделяли на 4 группы и вводили как указано ниже.
Группа 1 (отрицательный контроль): подкожная инъекция физиологического раствора, забуференного фосфатом Дульбекко (Sigma) один или более раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
Группа 2 (положительный контроль): подкожная инъекция 10,8 нмоль/кг BYETTA ежедневно с объемом введения 5 мл/кг
Группа 3 (группа, обработанная 3,7 нмоль/кг длительно действующим производным эксендина-4): подкожная инъекция 3,7 нмоль/кг длительно действующего производного эксендина-4 (НМ11260С) один раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
Группа 4 (группа, обработанная 8,2 нмоль/кг длительно действующим производным эксендина-4): подкожная инъекция 8,2 нмоль/кг длительно действующего производного эксендина-4 (НМ11260С) один раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
BYETTA (Eli Lilly) представляет собой нативный эксендин-4, и длительно действующее производное эксендина-4 (НМ11260С) представляет собой конъюгат СА эксендин-4-ПЭГ-Fc, полученный посредством связывания имидазоацетил-эксендина-4, с удалением альфа-углерода первого аминокислотного остатка гистидина, с Fc-фрагментом с помощью ПЭГ, как описано в корейском патенте №10-1058315.
Каждой группе вводили солевой раствор или лекарственные средства в течение 7 недель и анализировали их эффекты на образование жировой печени.
<2-2> Эффекты длительно действующего производного эксендина-4 на образование жировой печени
С целью изучения эффектов длительно действующих производных эксендина-4 по настоящему изобретению на образование жировой печени у мыши ob/ob выполняли следующий эксперимент. Лекарственные средства вводили в группах, разделенных в Примере <2-1>, и забирали печени у мышей ob/ob, и часть их фиксировали в 4% формальдегиде и заделывали в парафин с последующим окрашиванием гематоксилином и эозином. Результаты показаны на ФИГ. 1.
Как показано на ФИГ. 1, патологические особенности жировой печени отчетливо наблюдались в группе отрицательного контроля, обработанной носителем, в то время как в экспериментальной группе, обработанной длительно действующим производным эксендина-4 по настоящему изобретению, наблюдали существенное дозозависимое уменьшение патологических особенностей жировой печени. Также обнаружили, что длительно действующее производное эксендина-4 по настоящему изобретению демонстрирует превосходные терапевтические эффекты на жировую печень даже при более низкой дозе по сравнению с положительным контролем BYETTA.
Пример 3. Воздействия на накопление внутрипеченочных триглицеридов у мышей с ожирением, индуцированным высокожирной диетой
<3-1> Разделение экспериментальных животных
6-недельных мышей C57BL/6 стабилизировали и разделяли на две группы, они получали нормальную диету, содержащую 10% жира и высокожирную диету, содержащую 60% жира в течение 12 недель, (производитель: Research diets Inc., продукт номер: D12492). Таким образом, получали и использовали для экспериментов нормальных мышей и мышей с ожирением, индуцированным высокожирной диетой. Их содержали в корпусной системе, удовлетворяющей требованиям стандарта GLP (надлежащей лабораторной практики), с 12 ч циклом дня и ночи (свет включали в 6:00 утра и выключали в 18:00 вечера) в соответствии с типовыми нормами ухода за животными. После этого выбирали здоровых мышей с ожирением, индуцированным высокожирной диетой, и акклиматизировали в лабораторных условиях в течение 1 недели. Затем выполняли введение лекарственного средства и мышей разделяли на 4 группы и вводили как указано ниже.
Группа 1 (группа с нормальной диетой): подкожная инъекция физиологического раствора, забуференного фосфатом Дульбекко (Sigma) один или более раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
Группа 2 (группа с высокожирной диетой): подкожная инъекция физиологического раствора, забуференного фосфатом Дульбекко (Sigma) один или более раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
Группа 3 (группа с высокожирной диетой, обработанная 3 нмоль/кг длительно действующим производным эксендина-4): подкожная инъекция 3 нмоль/кг длительно действующего производного эксендина-4 (НМ11260С) один раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
Группа 4 (группа с высокожирной диетой, обработанная 10 нмоль/кг длительно действующим производным эксендина-4): подкожная инъекция 10 нмоль/кг длительно действующего производного эксендина-4 (НМ11260С) один раз в неделю с объемом введения 5 мл/кг
Каждой группе вводили солевой раствор или лекарственные средства в течение 2 недель и анализировали количество триглицеридов, накопленных в ткани печени.
<3-2> Измерение накопления внутрипеченочных триглицеридов у мышей с ожирением, индуцированным высокожирной диетой
Забирали печени в группах, разделенных в Примере <3-1>, которые представляли собой мышей с ожирением, индуцированным высокожирной диетой, с введенным длительно действующим производным эксендина-4 или без него, и определяли концентрации внутрипеченочных триглицеридов. Как показано на ФИГ. 2, концентрация внутрипеченочных триглицеридов у группы с высокожирной диетой составила 172,3 мг/г, что было выше, чем у группы с диетой с низким содержанием жира (114,0 мг/г), но группа с высокожирной диетой, обработанная 3 нмоль/кг длительно действующим производным эксендина-4, показала уровень триглицеридов 93 мг/г, демонстрируя уменьшение на 46% по сравнению с группой с высокожирной диетой. Эти результаты наводят на мысль, что длительно действующее производное эксендина-4 по настоящему изобретению обладает терапевтическим эффектами на неалкогольную жировую болезнь печени.

Claims (20)

1. Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени, содержащая в качестве активного ингредиента лекарственный конъюгат инсулинотропного пептида, полученный ковалентным связыванием инсулинотропного пептида и Fc-фрагмента иммуноглобулина посредством непептидильного полимера, в эффективном количестве и фармацевтически приемлемый носитель,
где инсулинотропный пептид выбран из группы, состоящей из эксендина-4, производного эксендина-4, полученного путем удаления N-концевой аминогруппы эксендина-4, производного эксендина-4, полученного путем замены N-концевой аминогруппы эксендина-4 на гидроксильную группу, производного эксендина-4, полученного путем модифицирования N-концевой аминогруппы эксендина-4 диметильной группой, и производного эксендина-4, полученного путем удаления альфа-углерода N-концевого остатка гистидина эксендина-4 и N-концевой аминогруппы, связанной с альфа-углеродом,
а непептидильный полимер выбран из группы, состоящей из полиэтиленгликоля, полипропиленгликоля, сополимеров этиленгликоль-пропиленгликоль, полиоксиэтилированных полиолов, поливинилового спирта, полисахаридов, декстрана, поливинилэтилового эфира, биоразлагаемых полимеров, полимеров липидов, хитинов, гиалуроновой кислоты и их комбинаций, и
где непептидильный полимер связан с аминокислотным остатком, который не является N-концевым остатком инсулинотропного пептида.
2. Фармацевтическая композиция по п. 1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина и аминогруппа или тиоловая группа инсулинотропного пептида связаны с обоими концами непептидильного полимера, соответственно.
3. Фармацевтическая композиция по п. 1, где непептидильный полимер связан с остатком лизина инсулинотропного пептида.
4. Фармацевтическая композиция по п. 1, где непептидильный полимер представляет собой полиэтиленгликоль.
5. Фармацевтическая композиция по п. 1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина является агликолизированным.
6. Фармацевтическая композиция по п. 1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина состоит из от одного до четырех доменов, выбранных из группы, состоящей из доменов СН1, СН2, СН3 и СН4.
7. Фармацевтическая композиция по п. 6, где Fc-фрагмент иммуноглобулина дополнительно включает шарнирную область.
8. Фармацевтическая композиция по п. 1, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fc-фрагмент, полученный из иммуноглобулина, выбранного из группы, состоящей из IgG, IgA, IgD, IgE и IgM.
9. Фармацевтическая композиция по п. 8, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой Fc-фрагмент IgG4.
10. Фармацевтическая композиция по п. 9, где Fc-фрагмент иммуноглобулина представляет собой негликолизированный Fc-фрагмент IgG4 человека.
11. Фармацевтическая композиция по п. 1, где реакционноспособная группа непептидильного полимера выбрана из группы, состоящей из альдегидной группы, группы пропиональдегида, группы бутиральдегида, группы малеимида и производного сукцинимида.
12. Фармацевтическая композиция по п. 11, где производное сукцинимида выбрано из группы, состоящей из сукцинимидилпропионата, сукцинимидилкарбоксиметила, гидроксисукцинимидила и сукцинимидилкарбоната.
13. Фармацевтическая композиция по п. 1, где непептидильный полимер имеет реакционноспособные альдегидные группы на обоих концах.
14. Фармацевтическая композиция по п. 1, где лекарственный конъюгат инсулинотропного пептида увеличивает активность
Figure 00000002
(протеинкиназы
Figure 00000003
), регулируя ферментную активность, вовлеченную в липолиз.
15. Фармацевтическая композиция по п. 1, где лекарственный конъюгат инсулинотропного пептида увеличивает экспрессию Glut2 (белок-транспортер глюкозы 2), вовлеченного в липолиз.
16. Фармацевтическая композиция по п. 1, где неалкогольная жировая болезнь печени выбрана из группы, состоящей из простого стеатоза, жировых заболеваний печени, вызванных недостаточностью питания, голоданием, ожирением и диабетом, стеатогепатита, фиброза печени и цирроза печени.
17. Способ предупреждения или лечения неалкогольной болезни печени, включающий стадию введения субъекту фармацевтической композиции по любому из пп. 1-16.
RU2014133615A 2012-03-09 2013-03-08 Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени RU2635966C2 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2012-0024632 2012-03-09
KR1020120024632A KR101665009B1 (ko) 2012-03-09 2012-03-09 비알콜성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
PCT/KR2013/001897 WO2013133667A1 (en) 2012-03-09 2013-03-08 Pharmaceutical composition for the prevention or treatment of non-alcoholic fatty liver disease

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2014133615A RU2014133615A (ru) 2016-04-27
RU2635966C2 true RU2635966C2 (ru) 2017-11-17

Family

ID=49117073

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014133615A RU2635966C2 (ru) 2012-03-09 2013-03-08 Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени

Country Status (25)

Country Link
US (1) US20150056223A1 (ru)
EP (1) EP2838549B1 (ru)
JP (4) JP2015510880A (ru)
KR (1) KR101665009B1 (ru)
CN (2) CN110075277A (ru)
AR (1) AR090287A1 (ru)
AU (1) AU2013228152C1 (ru)
CA (1) CA2864250C (ru)
DK (1) DK2838549T3 (ru)
ES (1) ES2900823T3 (ru)
HK (1) HK1199220A1 (ru)
HU (1) HUE057245T2 (ru)
IL (1) IL234133B (ru)
IN (1) IN2014DN06694A (ru)
MX (2) MX2014010542A (ru)
MY (1) MY167214A (ru)
NZ (1) NZ628828A (ru)
PH (1) PH12014501785B1 (ru)
PL (1) PL2838549T3 (ru)
PT (1) PT2838549T (ru)
RU (1) RU2635966C2 (ru)
SG (1) SG11201404733UA (ru)
TW (2) TWI658835B (ru)
WO (1) WO2013133667A1 (ru)
ZA (1) ZA201405918B (ru)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2765101C1 (ru) * 2018-07-23 2022-01-25 Дж2Х Биотек Инк. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения неалкогольного стеатогепатита

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TR201901402T4 (tr) 2011-06-17 2019-02-21 Hanmi Science Co Ltd Oksintomodulin ve bir immünoglobulin fragmanı içeren bir konjugat ve onun kullanımı.
KR101968344B1 (ko) 2012-07-25 2019-04-12 한미약품 주식회사 옥신토모듈린 유도체를 포함하는 고지혈증 치료용 조성물
PH12018501454A1 (en) 2012-11-06 2020-02-17 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Liquid formulation of protein conjugate comprising the oxyntomodulin and an immunoglubin fragment
MX369656B (es) 2014-01-20 2019-11-15 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Insulina de accion prolongada y uso de la misma.
AR100639A1 (es) 2014-05-29 2016-10-19 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Composición para tratar diabetes que comprende conjugados de análogos de insulina de acción prolongada y conjugados de péptidos insulinotrópicos de acción prolongada
TWI684458B (zh) 2014-05-30 2020-02-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 包含胰島素及ｇｌｐ-１/昇糖素雙重促效劑之治療糖尿病之組成物
TWI802396B (zh) * 2014-09-16 2023-05-11 南韓商韓美藥品股份有限公司 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
KR102418477B1 (ko) 2014-12-30 2022-07-08 한미약품 주식회사 글루카곤 유도체
UY36870A (es) 2015-08-28 2017-03-31 Hanmi Pharm Ind Co Ltd Análogos de insulina novedosos
KR102231217B1 (ko) * 2015-09-24 2021-03-24 한미약품 주식회사 면역글로불린 단편의 특정 위치를 연결 부위로 이용한 단백질 결합체
KR20180033105A (ko) 2016-09-23 2018-04-02 한미약품 주식회사 인슐린 수용체와의 결합력이 감소된, 인슐린 아날로그 및 이의 용도
KR101906333B1 (ko) 2016-12-07 2018-10-11 고려대학교 산학협력단 지방간의 진단 또는 치료를 위한 류신 지퍼 단백질의 용도
KR101964743B1 (ko) 2017-01-19 2019-08-14 울산대학교 산학협력단 Gnpat을 유효성분으로 포함하는 비알콜성 지방간염 진단용 또는 치료 예후 예측용 바이오마커 조성물
EP3604328A4 (en) 2017-03-23 2021-01-06 Hanmi Pharm. Co., Ltd. REDUCED INSULIN ANALOGUE COMPLEX FOR INSULIN RECEPTOR AND ITS USE
CN109248323B (zh) * 2017-07-14 2023-09-08 杭州先为达生物科技有限公司 酰化的glp-1衍生物
EP3437651A1 (en) * 2017-08-03 2019-02-06 Université de Strasbourg Peptides for treatment and prevention of nonalcoholic fatty liver disease
KR102174436B1 (ko) * 2017-08-17 2020-11-04 주식회사 엘지화학 불용성 안료 화합물의 정성분석방법
JP2021530533A (ja) * 2018-07-19 2021-11-11 ディーアンドディー ファーマテック インコーポレイテッド ポリペプチドを含む医薬組成物
KR20200135618A (ko) 2019-05-23 2020-12-03 ㈜ 디앤디파마텍 폴리펩티드를 포함하는 비알코올성 지방간 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물
CN110151980B (zh) * 2019-06-30 2022-12-09 中国药科大学 Glp-1受体激动剂融合蛋白在制备预防或治疗高血脂药物中的应用
KR102315866B1 (ko) * 2020-03-24 2021-10-21 한국원자력의학원 섬유화 질환 복합 치료제 개발

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100105877A1 (en) * 2007-01-05 2010-04-29 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. An insulinotropic complex using an immunoglobulin fragment
US20100330108A1 (en) * 2003-11-13 2010-12-30 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
US20110200623A1 (en) * 2008-07-23 2011-08-18 Hanmi Holdings Co., Ltd. Polypeptide complex comprising non-peptidyl polymer having three functional ends

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5545618A (en) 1990-01-24 1996-08-13 Buckley; Douglas I. GLP-1 analogs useful for diabetes treatment
US5424686A (en) 1994-04-20 1995-06-13 Philips Electronics North America Corporation Negative-resistance-compensated microwave buffer
US6096871A (en) 1995-04-14 2000-08-01 Genentech, Inc. Polypeptides altered to contain an epitope from the Fc region of an IgG molecule for increased half-life
WO1997034631A1 (en) 1996-03-18 1997-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
KR101135244B1 (ko) * 2007-11-29 2012-04-24 한미사이언스 주식회사 인슐린 분비 펩타이드 결합체를 포함하는 비만 관련질환 치료용 조성물
BRPI0416933A (pt) * 2003-11-25 2007-01-16 Novo Nordisk As composto, composição farmacêutica, método para tratar uma doença, uso de um composto, e, métodos para aumentar a respiração mitocondrial em um paciente, e para reduzir a quantidade de espécies de oxigênio reativas em um paciente
US8389472B2 (en) * 2005-08-19 2013-03-05 Amylin Pharmaceuticals, Llc Exendin-4 to treat nonalcoholic steatohepatitis and nonalcoholic fatty liver disease
WO2008108439A1 (ja) * 2007-03-06 2008-09-12 Bridgestone Corporation ゴムクローラ
US8200340B2 (en) * 2008-07-11 2012-06-12 Medtronic, Inc. Guided programming for posture-state responsive therapy
EP2248449A1 (en) * 2009-05-08 2010-11-10 Koninklijke Philips Electronics N.V. Kitchen appliance
WO2011109787A1 (en) * 2010-03-05 2011-09-09 Conjuchem, Llc Methods of administering insulinotropic peptides
KR101382593B1 (ko) * 2010-07-21 2014-04-10 한미사이언스 주식회사 신규한 지속형 글루카곤 결합체 및 이를 포함하는 비만 예방 및 치료용 약학적 조성물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100330108A1 (en) * 2003-11-13 2010-12-30 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. Pharmaceutical composition for treating obesity-related disease comprising insulinotropic peptide conjugate
US20100105877A1 (en) * 2007-01-05 2010-04-29 Hanmi Pharmaceutical Co., Ltd. An insulinotropic complex using an immunoglobulin fragment
US20110200623A1 (en) * 2008-07-23 2011-08-18 Hanmi Holdings Co., Ltd. Polypeptide complex comprising non-peptidyl polymer having three functional ends

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2765101C1 (ru) * 2018-07-23 2022-01-25 Дж2Х Биотек Инк. Фармацевтическая композиция для предотвращения или лечения неалкогольного стеатогепатита
US12011443B2 (en) 2018-07-23 2024-06-18 J2H Biotech Inc. Pharmaceutical composition for preventing or treating nonalcoholic steatohepatitis

Also Published As

Publication number Publication date
DK2838549T3 (da) 2022-01-03
TW201919688A (zh) 2019-06-01
ES2900823T3 (es) 2022-03-18
JP2015510880A (ja) 2015-04-13
CN110075277A (zh) 2019-08-02
JP2018009022A (ja) 2018-01-18
JP2019214627A (ja) 2019-12-19
AU2013228152B2 (en) 2017-08-10
CA2864250C (en) 2022-08-16
TW201340981A (zh) 2013-10-16
MX2020001697A (es) 2020-03-20
US20150056223A1 (en) 2015-02-26
EP2838549A4 (en) 2015-12-23
JP2022025114A (ja) 2022-02-09
AU2013228152A1 (en) 2014-09-04
MY167214A (en) 2018-08-14
AU2013228152C1 (en) 2017-11-23
EP2838549A1 (en) 2015-02-25
AR090287A1 (es) 2014-11-05
PT2838549T (pt) 2021-12-31
SG11201404733UA (en) 2014-09-26
PL2838549T3 (pl) 2022-02-14
PH12014501785A1 (en) 2014-11-17
TWI658835B (zh) 2019-05-11
HK1199220A1 (en) 2015-06-26
WO2013133667A1 (en) 2013-09-12
HUE057245T2 (hu) 2022-04-28
ZA201405918B (en) 2015-08-26
CN104159597A (zh) 2014-11-19
CA2864250A1 (en) 2013-09-12
MX2014010542A (es) 2014-12-05
IN2014DN06694A (ru) 2015-05-22
EP2838549B1 (en) 2021-09-22
KR101665009B1 (ko) 2016-10-11
PH12014501785B1 (en) 2014-11-17
NZ628828A (en) 2016-09-30
KR20130103190A (ko) 2013-09-23
RU2014133615A (ru) 2016-04-27
IL234133B (en) 2020-09-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2635966C2 (ru) Фармацевтическая композиция для предупреждения или лечения неалкогольной жировой болезни печени
JP7341263B2 (ja) オキシントモジュリン誘導体を含む糖尿病又は肥満性糖尿病の治療用組成物
JP6903086B2 (ja) オキシントモジュリン誘導体を含む高脂血症の治療のための組成物
AU2012263098B2 (en) Composition for treating diabetes comprising long-acting insulin conjugate and long-acting insulinotropic peptide conjugate
TWI802396B (zh) 長效glp-1/高血糖素受體雙促效劑治療非酒精性脂肝疾病之用途
EA042870B1 (ru) Применение двойного агониста рецепторов glp-1/глюкагона пролонгированного действия для лечения неалкогольной жировой болезни печени
NZ618793B2 (en) Composition for treating diabetes comprising long-acting insulin conjugate and long-acting insulinotropic peptide conjugate