RU2538593C2

RU2538593C2 - НОВЫЕ СТАБИЛЬНЫЕ КРИСТАЛЛЫ МОНОГИДРОХЛОРИДА 1-(2-β-D-АРАБИНОФУРАНОЗИЛ)ЦИТОЗИНА

Info

Publication number: RU2538593C2
Application number: RU2011146144/04A
Authority: RU
Inventors: Сотаро ВАТАНАБЕ; Такахиро ХАТАКЕЯМА
Original assignee: Дельта-Флай Фарма, Инк.
Priority date: 2009-05-15
Filing date: 2010-05-14
Publication date: 2015-01-10
Also published as: CN102414216B; PL2431376T3; EP2431376B1; PT2431376E; WO2010131475A1; CN102414216A; DK2431376T3; US20120029182A1; KR101414888B1; EP2431376B2; JP6307045B2; DK2431376T4; FI2431376T4; JPWO2010131475A1; RU2011146144A; JP5801715B2; HRP20131090T1; KR20120022940A; EP2431376A4; US8377905B2

Abstract

Настоящее изобретение относится к новым кристаллам типа I моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, имеющим характеристические пики при 13,7°, 15,7°, 16,0°, 18,6°, 20,3° и 22,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при порошковом рентгеноструктурном анализе, и температуру плавления 192-197°C, а также к новым кристаллам типа II моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, имеющим характеристические пики при 6,4°; 12,6°; 17,3° и 21,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при порошковом рентгеноструктурном анализе, и температуру плавления 192-196°C, обладающим противоопухолевыми свойствами. Также изобретение относится к противоопухолевому средству, содержащему предлагаемые кристаллы, и к способам получения кристаллов типа I и кристаллов типа II моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина. 5 н. и 2 з.п. ф-лы, 3 ил., 1 табл., 5 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Объект изобретения относится к новым стабильным кристаллам моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, которые применимы в качестве лекарственного средства, проявляющего отличную противоопухолевую активность, и к фармацевтической композиции, содержащей их.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В основном, когда соединение используют в качестве эффективного активного ингредиента фармацевтического продукта, нужно, чтобы данное соединение было химически и физически стабильным, так чтобы стабильно сохранялось качество и/или облегчалась организация хранения. Поэтому предпочтительно, чтобы получаемое соединение находилось в форме стабильных кристаллов, и обычно находится много примеров, в которых в качестве лекарственных средств для фармацевтических продуктов выбраны ультрастабильные кристаллы.

Однако в патентном документе 1, не патентном документе 1 и не патентном документе 2 описано, что моногидрохлорид 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, который является нуклеозидным производным пиримидина, представляемый следующей формулой (1):

проявляет подавляющее действие in vitro в отношении человеческих и мышиных опухолевых клеток, а также проявляет отличную противоопухолевую активность in vivo.

Сообщено о способах получения данного соединения, например о способе растворения моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)-N⁴-ацетилцитозина, представляемого следующей формулой (2):

в метанольном растворе соляной кислоты, что дает возможность соединению прореагировать при перемешивании при комнатной температуре и после завершения реакции кристаллизоваться в виде продукта из этанола и эфира (не патентные документы 1 и 2); и о способе с нагреванием соединения, представляемого представленной выше формулой (2), до кипения с обратным холодильником в уксусной кислоте, чтобы тем самым подвергнуть соединение де-N-ацетилированию с последующим получением 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, представляемого следующей формулой (3):

с помощью колоночной хроматографии на силикагеле, растворения данного соединения в метанольном растворе соляной кислоты, что позволяет данному соединению прореагировать при перемешивании при комнатной температуре и после завершения реакции кристаллизоваться продукта из этанола и эфира (патентный документ 1).

Кристаллы, получаемые по этим методам, как полагают, являются на 1/2 этанолятами в то время, когда был представлен этот документ, и температура плавления кристаллов, по рассмотрению, равна 175°С-176°С (патентный документ 1 и не патентные документы 1 и 2). Однако, кроме этой температуры плавления, не представлено конкретных сообщений в отношении полиморфизма кристаллов или стабильности.

ПАТЕНТНЫЙ ДОКУМЕНТ

Патентный документ 1: JP-B-2559917 (JP-A-4-235182)

НЕ ПАТЕНТНЫЙ ДОКУМЕНТ

Не патентный документ 1: Journal of Medicinal Chemistry, Vol. 34, 2917-2919 (1991)

Не патентный документ 2: Journal of Medicinal Chemistry, Vol. 36, 4183-4189 (1993)

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

ПРОБЛЕМА, КОТОРАЯ МОЖЕТ БЫТЬ РЕШЕНА ДАННЫМ ИЗОБРЕТЕНИЕМ

Целью предлагаемого изобретения является получение стабильных кристаллов соединения, которое применимо в качестве противоопухолевого средства.

СРЕДСТВА РЕШЕНИЯ ПРОБЛЕМЫ

Целью предлагаемого изобретения являлось получение стабильных кристаллов моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, и впервые предпринята попытка получения кристаллов на 1/2 этанолята, имеющих температуру плавления от 175°С до 176°С, известными способами, описанными в патентном документе 1 и не патентных документах 1 и 2.

Однако неожиданно при работе по рассматриваемому изобретению невозможно было воспроизвести кристаллы на 1/2 этанолята, имеющие температуру плавления от 175°С до 176°С, описанные в документе (здесь далее называемые «кристаллами по известному документу») в эксперименте, предназначенном для воспроизведения известных способов, описанных выше.

Кроме того, проведены расширенные эксперименты для получения кристаллов на 1/2 этанолята, имеющих температуру плавления от 175°С до 176°С с учетом различных условий получения кристаллов (см. International Journal of Phamaceuticals, Vol. 60, 11-26 (1990) и т.п.). Однако, в конечном счете, оказалось невозможно воспроизвести кристаллы, описанные в известном документе.

В таком случае предположили, что кристаллы, которые невозможно было получить, даже когда такие разные условия получения приняты во внимание, нельзя рассматривать как предпочтительные кристаллы, которые могут быть получены и стабильно применены в промышленном масштабе. Причиной может быть то, что кристаллы, полученные таким образом, могут быть кристаллическим полиморфом. Если подтверждено наличие кристаллического полиморфа в лекарственном веществе для фармацевтических продуктов, то обычно далее уже нелегко стабильно получать однородные кристаллы или смешанный тип кристаллов, в которых соотношение содержания сохраняется постоянным, и поэтому необходимы расширенные исследования.

Однако есть некоторые сообщения, опубликованные в последнее время, в которых описывается, что кристаллы, которые могли быть получены обычным путем, с определенного времени неожиданно нельзя было получить по методикам, используемым в соответствующей области. Например, в случае ритонавира, лекарственного средства против вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), в документе сообщено, что из-за внезапного появления формы II (стабильный кристалл) традиционно получаемые кристаллы формы I невозможно больше получать по обычному способу их производства (Organic Process Research and Development, vol. 4, 413-417 (2000)). Также в случае соединения, которое было разработано как антибиотическое вещество на основе цефема, в документе сообщено, что из-за неожиданного появления γ-кристаллов (стабильные кристаллы) традиционно получаемые α-кристаллы больше невозможно получать по традиционному способу производства (Bunri Gijutsu (Separation Technology), Vol. 33, 379-385 (2003)). Даже в случае соединения, которое было разработано как ингибитор обратной транскриптазы ВИЧ-1, в документах сообщено, что из-за внезапного появления кристаллов формы III (стабильные кристаллы) традиционно получаемые кристаллы формы I невозможно больше получать по обычному способу их производства (Organic Process Research and Development, vol. 9, 933-942 (2005)).

В соответствии с этими данными предположили, что кристаллы по предыдущему документу, получаемому в имеющий отношение к делу период времени, не могли быть получены из-за того, что кристаллы по предшествующему документу были худшего качества по отношению к кристаллам рассматриваемого изобретения в отношении стабильности. Сделано предположение, что даже если кристаллы по предшествующему документу временно образовываются в реакционной системе, эти кристаллы по предшествующему документу сразу же изменяются в стабильные кристаллы посредством кристаллического перехода, и, следовательно, кристаллы по предшествующему документу не могут быть получены.

Во время исследования по предмету изобретения обнаружено, что, как показано в примерах, описанных ниже, получены кристаллы, которые не содержат этанола и имеют температуру плавления на величину от 15°С до 20°С выше, чем температура плавления 175°С-176°С общеизвестных кристаллов (здесь далее называемые также «кристаллами рассматриваемого изобретения»), и что так как температура плавления кристаллов, обладающих отличной стабильностью (стабильные кристаллы), обычно выше, чем температура плавления нестабильных кристаллов (метастабильных кристаллов), кристаллы заявленного изобретения являются стабильными кристаллами. Соответственно было выполнено заявленное изобретение.

Заявленное изобретение относится к следующим предметам с (1) по (4).

(1) Кристаллы моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, имеющие характеристические пики на 13,7°, 15,7°, 16,0°, 18,6°, 20,3° и 22,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа, и имеющие температуру плавления 192°С-197°С.

(2) Кристаллы моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, имеющие характеристические пики на 6,4°, 12,6°, 17,3° и 21,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа, и имеющие температуру плавления 192°С-197°С.

(3) Фармацевтическая композиция, содержащая кристаллы по (1) или (2).

(4) Противоопухолевое средство, содержащее кристаллы по (1) или (2).

ЭФФЕКТ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Так как кристаллы моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина заявляемого изобретения демонстрируют отличную физическую стабильность и/или химическую стабильность, данные кристаллы превосходят по свойствам другие аморфные формы, другие кристаллические формы или подобные 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозину с точки зрения, например, хранения, стабильности, чистоты, удобства использования (более низкая гигроскопичность) и/или управления производством и с точки зрения того, что эти кристаллы обладают превосходным противоопухолевым эффектом и поэтому применимы в качестве противоопухолевых средств. Таким образом, кристаллы заявляемого изобретения применимы в качестве лекарственного средства.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фиг. 1 представляет порошковую рентгенограмму кристалла типа I.

Фиг. 2 представляет порошковую рентгенограмму кристалла типа II.

Фиг. 3 представляет порошковую рентгенограмму кристалла типа III.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Кристаллы заявляемого изобретения, в частности три типа кристаллов, такие как кристаллы типа I, кристаллы типа II и кристаллы типа III, могут быть соответственно получены путем кристаллизации или перекристаллизации из раствора, содержащего моногидрохлорид 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозин, представляемый приведенной выше формулой (1) (здесь далее называемый также «соединением (1)»).

Кроме того, соединение (1) может быть не в кристаллической форме, а также соединение (1) может быть в кристаллической форме. Если соединение (1) находится в кристаллической форме, например, кристаллы типа I могут быть выделены при использовании кристаллов типа II в качестве сырьевого материала или кристаллы типа I могут быть выделены при использовании кристаллов типа III в качестве сырьевого материала.

Моногидрохлорид 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина (соединение (1)), использованный в заявляемом изобретении, может быть получен по методу органического химического синтеза с использованием 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)-N⁴-ацетилцитозина, представляемого приведенной выше формулой (2) (здесь далее, называемого также «соединением (2)»), или 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, представляемого приведенной выше формулой (3) (здесь далее называемого также «соединением (3)»), в качестве сырьевого материала. Например, соединение (1) может быть получено путем проведения де-N-ацетилирования соединения (2) и добавления соляной кислоты или путем проведения присоединения соляной кислоты к соединению (3).

Более конкретные примеры способа получения соединения (1) включают, например, способ воздействия на соединение (2) кислоты с получением соединения (3) и присоединения соляной кислоты к этому соединению с получением соединения (1); способ воздействия на соединение (2) кислотой и присоединение соляной кислоты на одной стадии путем использования метанольного раствора соляной кислоты с получением тем самым соединения (1).

Среди этого, с точки зрения улучшения эффективности рабочего процесса или выхода, предпочтительно проводить обработку кислотой и присоединение соляной кислоты на одной стадии и по условиям реакции в этом случае предпочтительно использовать от 1 до 20 мл 0,5-3% метанольного раствора соляной кислоты на 100 мг соединения (2) и перемешивание смеси при примерно 10°С-40°С (предпочтительно, при комнатной температуре) в течение от 0,5 до 3 часов (предпочтительно, в течение 1±0,25 часа).

Соединения (2) и (3) могут быть получены посредством способов производства, описанных в приведенном выше патентном документе 1 и не патентных документах 1 и 2.

Кроме того, примеры кислоты, которую используют при обработке (воздействии) кислотой, включают неорганические кислоты, такие как серная кислота и соляная кислота; и органические кислоты, такие как уксусная кислота и трифторуксусная кислота. Эти кислоты можно использовать отдельно или в виде смесей из двух или более видов кислот.

Способ осаждения кристаллов по заявляемому изобретению конкретно не ограничивается, включая, например, способ растворения соединения (1) в растворителе, в котором растворяют соединение (1) при нагревании (здесь далее, называемом «растворяющим растворителем»), позволяя раствору, в котором растворено соединение (1), еще постоять или охлаждая раствор с помощью охлаждающих средств и тем самым осаждая кристаллы; способ осаждения кристаллов из раствора, в котором растворено соединение 1 (здесь далее называемый также «раствором с полным растворением»), с использованием растворителя, в котором соединение (1) имеет низкую растворимость (здесь далее, называемого также «растворитель, дающий низкую растворимость»). Среди этих способов, способ осаждения кристаллов из раствора с полным растворением с использованием растворителя, дающего низкую растворимость, является предпочтительным. Примером этого способа может быть, например, способ добавления раствора с полным растворением в предварительно охлажденный растворитель, дающий низкое растворение и тем самым осаждение кристаллов.

Растворитель, используемый при данном процессе осаждения кристаллов, конкретно не ограничивается, причем такой растворитель включает, например, воду; спирты, такие как метанол, этанол и изопропанол; кетоны, такие как ацетон и метилэтилкетон; эфиры, такие как диэтиловый эфир, диизопропиловый эфир и т-бутилметиловый эфир. Эти растворители можно использовать отдельно или в виде смеси из многих растворителей.

Растворитель, дающий полное растворение, предпочтительно является растворителем, который способен растворить соединение (1) при нагревании, а конкретно, спирты являются более предпочтительными с точки зрения их стабильности. Среди них предпочтителен спирт, имеющий от 1 до 5 атомов углерода, в частности этанол. Обычно температура растворителя, дающего полное растворение, когда его нагревают, предпочтительно составляет от 0°С до температуры кипения растворителя, а более предпочтительно от 20°С до 40°С. Концентрация соединения (1), которая конкретно не ограничивается, предпочтительно составляет от 0,25 до 0,6 (в/о)% в растворе при полном растворении.

Растворитель, дающий низкую растворимость, предпочтительно является растворителем, который способен дать осаждение кристаллов, когда этот растворитель добавляют к раствору, в котором соединение (1) растворено, а затем смесь оставляют стоять или охлаждают. В частности, предпочтительны простые эфиры с точки зрения стабильности, и среди них особенно предпочтительным является диэтиловый эфир.

Когда добавляют раствор с полным растворением, температура растворителя, дающего низкую растворимость, предпочтительно составляет от -40°С до температуры кипения растворителя, более предпочтительно от -20°С до 20°С и еще предпочтительнее от 0°С до 10°С. С другой стороны, температура раствора с полным растворением, когда раствор с полным растворением добавляют в растворитель, дающий низкую растворимость, предпочтительно составляет от -20°С до температуры кипения растворителя, более предпочтительно от -5°С до 45°С и еще предпочтительнее от 0°С до 40°С.

Количество используемого растворителя, дающего низкую растворимость, предпочтительно составляет от 0 до 1 части по объему на 1 часть по объему раствора с полным растворением.

Температура во время осаждения обычно предпочтительно составляет от -50°С до 30°С, более предпочтительно от -40°С до 20°С и еще более предпочтительно от -30°С до 10°С. В этом случае раствор с полным растворением или смешанный раствор из раствора с полным растворением и растворителя, дающего низкую растворимость, может быть охлажден с помощью средств охлаждения. Например, можно осуществлять добавление по каплям раствора с полным растворением в охлажденный сосуд; охлаждение раствора с полным растворением или смешанного раствора. При осаждении раствор можно оставлять еще постоять или можно его перемешивать.

Осажденные кристаллы могут быть выделены из раствора с полным растворением или из смешанного раствора и очищены, например, с помощью известных методов выделения и очистки, таких как фильтрование, промывание органическим растворителем и сушка под пониженным давлением. Примеры органического растворителя, используемого в процессе промывания, включают растворители, дающие низкую растворимость, упомянутые выше, и среди них предпочтительно используют эфиры, описанные выше.

При этом способе заявляемого изобретения, в частности, могут быть получены кристаллы типа I, кристаллы типа II и кристаллы типа III.

Например, в качестве способа получения кристаллов типа I предпочтительно получать кристаллы типа I путем растворения при нагревании соединения (1) в этаноле, а затем добавления по каплям этого раствора в диэтиловый эфир, который охлаждали до 0±5°С при перемешивании смеси.

В качестве способа получения кристаллов типа II предпочтительно получать кристаллы типа II путем растворения при нагревании соединения (1) или кристаллов типа I в этаноле, затем охлаждения этого раствора до 40±5°С, а затем добавления по каплям диэтилового эфира к раствору при перемешивании смеси.

Кроме того, в качестве способа получения кристаллов типа III предпочтительно получать кристаллы типа III путем растворения при нагревании соединения (1) или кристаллов типа I в этаноле, а затем добавления по каплям этого раствора на пластину, которую охлаждают до 0±5°С.

Температура плавления кристаллов типа I-III соединения (1), полученных как описано выше, составляет от 192°С до 197°С и, как показано на дифрактограммах порошкового рентгеноструктурного анализа на фиг. с 1 по 3, эти кристаллы отличаются следующими характеристическими дифракционными пиками.

То есть, как показано на фиг. 1, на дифрактограмме порошка кристалла типа I характеристические пики проявляются около 13,7°, 15,7°, 16,0°, 18,6°, 20,3° и 22,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа.

Как показано на фиг. 2, на дифрактограмме порошка кристалла типа II характеристические пики проявляются около 6,4°, 12,6°, 17,3° и 21,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа.

Кроме того, как показано на фиг. 3, на дифрактограмме порошка кристалла типа III характеристические пики проявляются около 14,2°, 16,4°, 17,0°, 18,0° и 20,2° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа.

Кристаллы заявляемого изобретения проявляют высокую стабильность при хранении, обладают преимуществами в отношении управления качеством, а также их свойства включают удобство работы и простоту использования. В частности, как показано в примерах, описанных ниже, даже если кристаллы типа I хранят в течение длительного времени в условиях высокой температуры и высокой влажности, содержание всех аналогов трудно обнаружить, и изменение кристаллической формы едва обнаруживается. А также, так как кристаллы типа II или кристаллы типа III превращаются в кристаллы типа I, когда кристаллы типа II или кристаллы типа III нагревают до примерно 70°С-90°С и выдерживают при этой температуре в течение нескольких часов и хранят при около 30°С-50°С в течение длительного срока (один месяц) и при влажности 75% ОВ или выше, кристаллы типа I обладают превосходной стабильностью по сравнению с кристаллами типа II или кристаллами типа III.

Как видно из описаний патентного документа 1, так как соединение (1) проявляет сильную противоопухолевую активность, фармацевтическую композицию, содержащую кристаллы заявляемого изобретения, можно, в частности, использовать в качестве противоопухолевого средства и можно использовать для производства этого средства.

Чистота кристаллов заявляемого изобретения, в частности кристаллов типа I, типа II и типа III, в соответствующих их кристаллических формах составляет по существу 95% или более, более предпочтительно по существу 98% или более и еще предпочтительнее по существу 99% или более.

Кристаллы согласно рассматриваемому изобретению могут быть переработаны, после превращения в порошок или без превращения в порошок, в разные лекарственные формы противоопухолевых средств, например пероральные препараты, такие как таблетки, капсулы, гранулы, мелкие гранулы, порошки и сиропы; парентеральные препараты, такие как внутривенные инъекционные препараты, подкожные инъекционные препараты, внутримышечные инфекционные препараты, и суппозитории. Кристаллы заявляемого изобретения предназначены для внутривенного введения, и дозированной лекарственной формой предпочтительно является инъекционный препарат. Такой инъекционный препарат желательно использовать в виде твердого инъекционного препарата, такого как лиофилизированный инъекционный препарат или порошковый инъекционный препарат, который можно использовать путем растворения непосредственно перед применением.

Противоопухолевое средство может быть изготовлено по способу получения, известному и обычно применяемому специалистами в данной области путем использования фармацевтически приемлемого носителя. В этом случае также можно использовать в комбинации другие противоопухолевые средства, например 5-ФУ, тегафур-урациловый препарат, препарат тегафур-гимерацил-отерацил-калия, доксорубицин, эпирубицин, иринотекан-гидрохлорид, этопозид, доцетаксел, паклитаксел, цисплатин, карбоплатин, оксалиплатин, крестин, лентинан, пицибанил.

Дозированное количество кристаллов представленного изобретения в случае использования противоопухолевого средства может меняться в зависимости, например, от симптомов у пациента, у которого применяют это противоопухолевое средство, дозированной лекарственной формы; однако, в основном, предпочтительно вводить противоопухолевое средство один или несколько раз в день в количестве 2,0-4,0 мг/м², в отношении кристаллов представленного изобретения.

ПРИМЕРЫ

Здесь далее, способ производства представленного изобретения конкретно описан путем примеров и примеров сравнения.

Сравнительный пример 1

Синтез 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)-N⁴-ацетилцитозина

1 М раствора тетрабутиламмония фторида в ТГФ (2 мл) и 0,06 мл (1 ммоль) уксусной кислоты добавляли к раствору N⁴-ацетил-2′-циано-2′-дезокси-3′,5′-О-(1,1,3,3-тетраизопропилдисилоксан-1,3-диил)-1-β-D-арабинофуранозилацитозина (537 мг, 1 ммоль) в ТГФ (5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 минут. После перемешивания смесь концентрировали и остаток очищали колоночной хроматографией на силикагеле (11 г), используя этанол-хлороформ в качестве проявляющего растворителя. Концентрированный остаток целевой фракции промывали гексаном-диэтиловым эфиром и, таким образом, получали 259 мг (выход: 88%) названного в заголовке соединения в виде белых кристаллов.

Пример 1

Синтез моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина

1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)-N⁴-ацетилцитозин (100 мг, 0,34 ммоль) растворяли в 1% соляной кислоте-метаноле (7,5 мл) и смесь перемешивали при комнатной температуре (20°С-25°С) в течение одного часа. Реакционную жидкость концентрировали и в этот концентрат выливали этанол (10 мл). Смесь выпаривали и, таким образом, получали 34 мг названного в заголовке соединения (выход 35%).

Температура плавления: 192°С.

Элементный анализ

Расчетное значение (как C₁₀H₁₃ClN₄O₄): С 41,60; Н 4,54; N 19,41.

Найденное значение: С 41,45; Н 4,52; N 19,41.

Пример 2

Получение кристаллов моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина типа I

Моногидрохлорид 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина (200 мг), полученный в примере 1, нагревали до кипения с обратным холодильником в этаноле (34 мл), и он растворялся в нем. Этот раствор по каплям добавляли в диэтиловый эфир (34 мл), который был охлажден до 0°С. Смесь перемешивали в течение 2 часов, а затем осадок собирали фильтрованием и сушили под пониженным давлением при 35°С. Таким образом получали 123 мг (выход 62%) названного в заголовке соединения в виде кристаллов I типа.

Температура плавления: 192°С-197°С.

Элементный анализ

Найденное значение: С 41,64; Н 4,51; N 19,28.

На фиг. 1 показана дифрактограмма порошкового рентгеноструктурного анализа полученного здесь кристалла типа I. Характеристические пики определены около 13,7°, 15,7°, 16,0°, 18,6°, 20,3° и 22,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа.

Данные порошкового рентгеноструктурного анализа получены при облучении кристалла лучами CuKα (1,541 Å) с использованием аппарата для рентгеноструктурного анализа (торговое наименование: PW3050, производимого Koninklijke Philips Electronics N.V.) и определением углов с использованием вертикального гониометра.

Пример 3

Получение кристаллов моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина типа II

Моногидрохлорид 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина (200 мг), полученный в примере 1, нагревали до кипения с обратным холодильником в этаноле (34 мл), и он растворялся в нем, и раствор охлаждали до 40°С. Затем этанол (34 мл), в котором растворено это соединение, выливали при добавлении по каплям в диэтиловый эфир (34 мл), который находился в состоянии кипения с обратным холодильником (реакционный сосуд нагревали до 40°С). Смесь перемешивали в течение одного часа при кипении с обратным холодильником, а затем образовавшийся в диэтиловом эфире осадок собирали фильтрованием и сушили под пониженным давлением при 35°С. Таким образом получали 119 мг (выход: 60%) названного в заголовке соединения в виде кристаллов типа II.

На фиг. 2 показана дифрактограмма порошкового рентгеноструктурного анализа полученного здесь кристалла типа II. Этот кристалл типа II анализировали, используя аппарат для порошкового рентгеноструктурного анализа таким же образом, который описан выше, и характеристические пики определены около 6,4°; 12,3°; 17,3° и 21,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа.

Температура плавления: 192°С-196°С.

Элементный анализ

Найденное значение: С 41,48; Н 4,57; N 19,14.

Пример 4

Получение кристаллов моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина типа III

Моногидрохлорид 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина (200 мг), полученный в примере 1, нагревали до кипения с обратным холодильником в этаноле (34 мл), и он растворялся в нем, и полученный таким образом раствор медленно по каплям добавляли в сосуд, который был охлажден до 0°С. Раствор перемешивали в течение 2 часов, а затем осадок собирали фильтрованием и сушили под пониженным давлением при 35°С. Таким образом получали 66 мг (выход: 33%) названного в заголовке соединения в виде кристаллов типа III.

На фиг. 3 показана дифрактограмма порошкового рентгеноструктурного анализа полученного здесь кристалла типа III. Кристалл этого типа III анализировали, используя аппарат для порошкового рентгеноструктурного анализа таким же образом, который описан выше, и характеристические пики определены около 14,2°; 16,4°; 17,0°, 18,0° и 20,2° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при помощи порошкового рентгеноструктурного анализа.

Температура плавления: 195°С.

Элементный анализ

Найденное значение: С 41,59; Н 4,42; N 19,29.

Пример 5

Испытание на стабильность

Порошки кристаллов типа I и типа II соответственно равномерно распределяли в стеклянной чашке Петри и в качестве крышки использовали алюминиевую фольгу (или пленку из прозрачной смолы в целях хранения в условиях воздействия света), которую соответственно перфорировали в виде вентиляционных отверстий в ней, с получением образцов для испытания. Эти образцы соответственно хранили в течение 30 дней при четырех видах условий, таких как [60°С], [40°С/относительная влажность (ОВ) 75%], [25°С/относительная влажность (ОВ) 60%, воздействие света 2000 лк·ч] и [25°С/относительная влажность (ОВ) 60%, затененное освещение], а затем образцы испытывали, используя высокоэффективную жидкостную хроматографию (ВЭЖХ) и порошковый рентгеноструктурный анализ (РСА).

Что касается порошкового рентгеноструктурного анализа (РСА), анализ проводили, как описано выше.

Для анализа ВЭЖХ 22,9 мг образца растворяли в 10 мл соляной кислоты 0,01 моль/л, а затем содержание аналогов в кристаллах оценивали при следующих условиях.

Колонка: Synergi Hydro-RP 80F Phenomenex (φ4,6 мм×25 см, 4 мкм); температура 25°С.

Мобильная фаза: 2,05 г гидрофосфата калия растворяли в 3000 мл воды и к раствору добавляли фосфорную кислоту, чтобы довести рН до 3,0. Подвижную фазу получали добавлением 60 мл метанола к 2940 мл жидкости раствора.

Скорость потока: примерно 1,0 мл/мин.

Детектор: абсорбциометр ультрафиолетового излучения (оценка по длине волны 254 нм).

Стандартный образец: моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина.

Термин «аналоги в целом» относится к обнаруживаемым веществам помимо моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, а термин «аналоги в целом %» относится к относительному содержанию аналогов в целом по отношению к стандартному образцу.

Результаты этого испытания на стабильность представлены в таблице 1.

Проводили испытание на стабильность кристаллов типа I и кристаллов типа II при разных условиях (в условиях влажности и выдержки). В результате не было установлено повышение количества аналогов в целом, что представлено в таблице 1, и было обнаружено, что данные кристаллы являются высокоустойчивыми кристаллическими формами.

Кроме того, кристаллы типа II превращались в кристаллы типа I через 30 дней хранения в условиях 40°С/относительная влажность (ОВ) 75%, и температура плавления и дифрактограмма порошкового рентгеноструктурного анализа находились в согласии с показателями, полученными в примере 1. А также кристаллы типа III превращались в кристаллы типа I при нагревании до 80°С и выдерживании при этой температуре в течение 2 часов, и температура плавления и дифрактограмма порошкового рентгеноструктурного анализа находились в согласии с показателями, полученными в примере 1.

По этим результатам было обнаружено, что температуры плавления кристаллов типа I и III равны 192°С и 197°С и обладают свойством отличной стабильности. В частности, кристаллы типа I, как обнаружено, проявляют превосходящую стабильность по сравнению с кристаллами типа II или кристаллами типа III.

Таблица 1
Температура хранения	Аналоги в целом (%)						Изменение кристаллической формы от исходного значения
	Форма кристаллов	Период хранения				Количество повышения от исходного значения
	Форма кристаллов	исходное	10 дней	18 дней	30 дней	Количество повышения от исходного значения
60°С	I	0,07	0,06	0,07	0,07	0,00	Нет изменения
60°С	II	0,06	0,06	0,07	0,07	0,01	Нет изменения
40°С/75% ОВ	I	0,07	0,07	0,06	0,05	-0,02	Нет изменения
40°С/75% ОВ	II	0,06	0,06	0,08	0,16	0,10	Измененная (II→I)
25°С/60% ОВ/2000 лк	I	0,07	0,09	0,09	0,13	0,06	Нет изменения
25°С/60% ОВ/2000 лк	II	0,06	0,15	0,23	0,38	0,32	Нет изменения
25°С/60% ОВ/ затененный свет	I	0,07	0,07	0,06	0,07	0,00	Нет изменения
25°С/60% ОВ/ затененный свет	II	0,06	0,06	0,07	0,09	0,03	Нет изменения

Claims

1. Кристаллы типа I моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, имеющие характеристические пики при 13,7°, 15,7°, 16,0°, 18,6°, 20,3° и 22,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при порошковом рентгеноструктурном анализе, и имеющие температуру плавления 192-197°C.

2. Кристаллы типа I по п.1, которые не содержат этанола.

3. Кристаллы типа II моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина, имеющие характеристические пики при 6,4°; 12,6°; 17,3° и 21,7° в виде углов дифракции (2θ±0,1°), измеренных при порошковом рентгеноструктурном анализе, и имеющие температуру плавления 192-196°C.

4. Кристаллы типа II по п.3, которые не содержат этанола.

5. Противоопухолевое средство, содержащее кристаллы по любому из пп.1-4.

6. Способ получения кристаллов типа I, определенных как указано в п.1 или 2, включающий стадии растворения при нагревании моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина в этаноле, а затем добавления этого раствора по каплям в диэтиловый эфир, который охлажден до 0±5°C, при перемешивании смеси с получением кристаллов типа I.

7. Способ получения кристаллов типа II, определенных как указано в п.3 или 4, включающий стадии растворения при нагревании моногидрохлорида 1-(2′-циано-2′-дезокси-β-D-арабинофуранозил)цитозина в этаноле, затем охлаждения этого раствора до 40±5°C и затем добавления по каплям диэтилового эфира к раствору при перемешивании смеси с получением кристаллов типа II.