RU2503682C2 - Антитела и содержащие их фармацевтические композиции, подходящие для ингибирования активности металлопротеинов - Google Patents
Антитела и содержащие их фармацевтические композиции, подходящие для ингибирования активности металлопротеинов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2503682C2 RU2503682C2 RU2009132006/04A RU2009132006A RU2503682C2 RU 2503682 C2 RU2503682 C2 RU 2503682C2 RU 2009132006/04 A RU2009132006/04 A RU 2009132006/04A RU 2009132006 A RU2009132006 A RU 2009132006A RU 2503682 C2 RU2503682 C2 RU 2503682C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mmp
- antibodies
- antibody
- activity
- zinc
- Prior art date
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 46
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 title claims abstract description 31
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 13
- 108010063312 Metalloproteins Proteins 0.000 title claims description 27
- 102000010750 Metalloproteins Human genes 0.000 title claims description 27
- 102100030412 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 claims abstract description 100
- 108010015302 Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 claims abstract description 79
- 102100026802 72 kDa type IV collagenase Human genes 0.000 claims abstract description 70
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 69
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 42
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 21
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims abstract description 12
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 9
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims abstract description 9
- 101710151806 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 claims abstract 9
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract 4
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 43
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 30
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims description 27
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 20
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 18
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 17
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 16
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims description 14
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 13
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 10
- 208000022559 Inflammatory bowel disease Diseases 0.000 claims description 8
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 7
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 13
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 75
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 64
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 59
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 53
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 53
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 53
- 108010016165 Matrix Metalloproteinase 2 Proteins 0.000 description 44
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 42
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 40
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 38
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 38
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 33
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 31
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 30
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 29
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 28
- -1 thiol amides Chemical class 0.000 description 27
- 102000013382 Gelatinases Human genes 0.000 description 24
- 108010026132 Gelatinases Proteins 0.000 description 24
- 101000990902 Homo sapiens Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 24
- 235000014304 histidine Nutrition 0.000 description 24
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 23
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 21
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 21
- 101000627872 Homo sapiens 72 kDa type IV collagenase Proteins 0.000 description 20
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 19
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 19
- 102000036436 Metzincins Human genes 0.000 description 18
- 108091007161 Metzincins Proteins 0.000 description 18
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 17
- 102000005741 Metalloproteases Human genes 0.000 description 16
- 108010006035 Metalloproteases Proteins 0.000 description 16
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 16
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 16
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 16
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 15
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 15
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 15
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 14
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 14
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 14
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 14
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 14
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 14
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 14
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 14
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 13
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 13
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 13
- 108010000684 Matrix Metalloproteinases Proteins 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 12
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 12
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 12
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 12
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 12
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 12
- 229940124761 MMP inhibitor Drugs 0.000 description 11
- 102000002274 Matrix Metalloproteinases Human genes 0.000 description 11
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 11
- 230000000477 gelanolytic effect Effects 0.000 description 11
- 150000002411 histidines Chemical class 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 10
- 230000006957 competitive inhibition Effects 0.000 description 10
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 10
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 10
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 10
- 239000000463 material Substances 0.000 description 10
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 3-(trimethylsilyl)propane-1-sulfonic acid Chemical compound C[Si](C)(C)CCCS(O)(=O)=O TVZRAEYQIKYCPH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 9
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 9
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 9
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 9
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 9
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 description 9
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 9
- 238000007805 zymography Methods 0.000 description 9
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 8
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 8
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 8
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 8
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 8
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 8
- 108010067415 progelatinase Proteins 0.000 description 8
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 8
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 7
- 102000003846 Carbonic anhydrases Human genes 0.000 description 7
- 108090000209 Carbonic anhydrases Proteins 0.000 description 7
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 7
- RXSUFCOOZSGWSW-UHFFFAOYSA-M acetyloxy-(4-aminophenyl)mercury Chemical compound CC(=O)O[Hg]C1=CC=C(N)C=C1 RXSUFCOOZSGWSW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 239000002585 base Substances 0.000 description 7
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 7
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 7
- 206010009887 colitis Diseases 0.000 description 7
- 125000005745 ethoxymethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])OC([H])([H])* 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 7
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 7
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 7
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 7
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 7
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 7
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 7
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 7
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000013271 Hemopexin Human genes 0.000 description 6
- 108010026027 Hemopexin Proteins 0.000 description 6
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 6
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 6
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 6
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 6
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 6
- WMTBUOGSWYCHRF-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;zinc Chemical compound [Zn].OC(=O)[C@@H](N)CC1=CNC=N1 WMTBUOGSWYCHRF-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 5
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 5
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 5
- 201000008808 Fibrosarcoma Diseases 0.000 description 5
- SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N L-norVal-OH Natural products CCCC(N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 102100030417 Matrilysin Human genes 0.000 description 5
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 5
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 5
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 5
- 101710120037 Toxin CcdB Proteins 0.000 description 5
- 206010054094 Tumour necrosis Diseases 0.000 description 5
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 5
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 5
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 5
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 5
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000008298 dragée Substances 0.000 description 5
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 5
- 239000012133 immunoprecipitate Substances 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 5
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 5
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 5
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 5
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 5
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 5
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 5
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 5
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 5
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 5
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 5
- LSONWRHLFZYHIN-UHFFFAOYSA-N 2-[(4-phenoxyphenyl)sulfonylmethyl]thiirane Chemical compound C=1C=C(OC=2C=CC=CC=2)C=CC=1S(=O)(=O)CC1CS1 LSONWRHLFZYHIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010021809 Alcohol dehydrogenase Proteins 0.000 description 4
- 102000007698 Alcohol dehydrogenase Human genes 0.000 description 4
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 4
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 4
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 4
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 4
- 102000000380 Matrix Metalloproteinase 1 Human genes 0.000 description 4
- 108010016113 Matrix Metalloproteinase 1 Proteins 0.000 description 4
- 229920002472 Starch Chemical class 0.000 description 4
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 4
- IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N WHWLQLKPGQPMY Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C1=CNC=N1 IXKSXJFAGXLQOQ-XISFHERQSA-N 0.000 description 4
- 238000002056 X-ray absorption spectroscopy Methods 0.000 description 4
- YIYFFLYGSHJWFF-UHFFFAOYSA-N [Zn].N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 Chemical compound [Zn].N1C(C=C2N=C(C=C3NC(=C4)C=C3)C=C2)=CC=C1C=C1C=CC4=N1 YIYFFLYGSHJWFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 4
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 description 4
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 4
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 description 4
- 125000004435 hydrogen atom Chemical class [H]* 0.000 description 4
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 4
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 4
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 4
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 201000008482 osteoarthritis Diseases 0.000 description 4
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 4
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 4
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 4
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 4
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 4
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 4
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 4
- FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N sarcosine Chemical compound C[NH2+]CC([O-])=O FSYKKLYZXJSNPZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 4
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 4
- FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 2-Aminoisobutyric acid Chemical compound CC(C)(N)C(O)=O FUOOLUPWFVMBKG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001123248 Arma Species 0.000 description 3
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 3
- 241000425932 Buddleja globosa Species 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 3
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 3
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 3
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 3
- 229940121800 Gelatinase inhibitor Drugs 0.000 description 3
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 3
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 3
- QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N L-alpha-aminobutyric acid Chemical compound CC[C@H](N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 108090000855 Matrilysin Proteins 0.000 description 3
- VKZGJEWGVNFKPE-UHFFFAOYSA-N N-Isobutylglycine Chemical compound CC(C)CNCC(O)=O VKZGJEWGVNFKPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 206010038063 Rectal haemorrhage Diseases 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 102100030416 Stromelysin-1 Human genes 0.000 description 3
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 3
- DLAMVQGYEVKIRE-UHFFFAOYSA-N alpha-(methylamino)isobutyric acid Chemical compound CNC(C)(C)C(O)=O DLAMVQGYEVKIRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 3
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N ether Substances CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 3
- MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N fluorescein-5-isothiocyanate Chemical compound O1C(=O)C2=CC(N=C=S)=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 MHMNJMPURVTYEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002073 fluorescence micrograph Methods 0.000 description 3
- 230000006870 function Effects 0.000 description 3
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 3
- 239000002406 gelatinase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000012933 kinetic analysis Methods 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N methanol-d1 Chemical compound [2H]OC OKKJLVBELUTLKV-VMNATFBRSA-N 0.000 description 3
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 239000000816 peptidomimetic Substances 0.000 description 3
- 150000004032 porphyrins Chemical group 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 3
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 3
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 3
- 238000012552 review Methods 0.000 description 3
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 3
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RSPOGBIHKNKRFJ-MSZQBOFLSA-N (2S)-2-amino-2,3-dimethylpentanoic acid Chemical compound C[C@@](C(=O)O)(C(CC)C)N RSPOGBIHKNKRFJ-MSZQBOFLSA-N 0.000 description 2
- CWLQUGTUXBXTLF-RXMQYKEDSA-N (2r)-1-methylpyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CN1CCC[C@@H]1C(O)=O CWLQUGTUXBXTLF-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- YAXAFCHJCYILRU-RXMQYKEDSA-N (2r)-2-(methylamino)-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CCSC YAXAFCHJCYILRU-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- SCIFESDRCALIIM-SECBINFHSA-N (2r)-2-(methylazaniumyl)-3-phenylpropanoate Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-SECBINFHSA-N 0.000 description 2
- CZCIKBSVHDNIDH-LLVKDONJSA-N (2r)-3-(1h-indol-3-yl)-2-(methylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](NC)C(O)=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-LLVKDONJSA-N 0.000 description 2
- AKCRVYNORCOYQT-RXMQYKEDSA-N (2r)-3-methyl-2-(methylazaniumyl)butanoate Chemical compound C[NH2+][C@H](C(C)C)C([O-])=O AKCRVYNORCOYQT-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- OZRWQPFBXDVLAH-RXMQYKEDSA-N (2r)-5-amino-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CCCN OZRWQPFBXDVLAH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 2
- WTDHSXGBDZBWAW-QMMMGPOBSA-N (2s)-2-[cyclohexyl(methyl)azaniumyl]propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)N(C)C1CCCCC1 WTDHSXGBDZBWAW-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- IUYZJPXOXGRNNE-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-[cyclopentyl(methyl)amino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)N(C)C1CCCC1 IUYZJPXOXGRNNE-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- DFVGBNVFYCYLDR-JTQLQIEISA-N (2s)-2-[methyl(naphthalen-1-yl)amino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N(C)[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 DFVGBNVFYCYLDR-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N (2s)-2-amino-3,3-dimethylbutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)[C@H](N)C(O)=O NPDBDJFLKKQMCM-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 2
- AXDLCFOOGCNDST-VIFPVBQESA-N (2s)-3-(4-hydroxyphenyl)-2-(methylamino)propanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 AXDLCFOOGCNDST-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- KSZFSNZOGAXEGH-BYPYZUCNSA-N (2s)-5-amino-2-(methylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O KSZFSNZOGAXEGH-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N (2s,3s,4r,5r,6r)-5-amino-2-(aminomethyl)-6-[(2r,3s,4r,5s)-5-[(1r,2r,3s,5r,6s)-3,5-diamino-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-amino-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-hydroxycyclohexyl]oxy-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl]oxyoxane-3,4-diol;sulfuric ac Chemical compound OS(O)(=O)=O.N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](N)C[C@@H](N)[C@@H]2O)O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)N)O[C@@H]1CO LJRDOKAZOAKLDU-UDXJMMFXSA-N 0.000 description 2
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000000579 2,2-diphenylethyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])(C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FOUZISDNESEYLX-UHFFFAOYSA-N 2-(2-hydroxyethylazaniumyl)acetate Chemical compound OCCNCC(O)=O FOUZISDNESEYLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IVCQRTJVLJXKKJ-UHFFFAOYSA-N 2-(butan-2-ylazaniumyl)acetate Chemical compound CCC(C)NCC(O)=O IVCQRTJVLJXKKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEPOIJKOXBKKNJ-UHFFFAOYSA-N 2-(propan-2-ylazaniumyl)acetate Chemical compound CC(C)NCC(O)=O HEPOIJKOXBKKNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 2-[benzyl-(4-methoxyphenyl)sulfonylamino]-n-hydroxy-4-methylpentanamide Chemical compound C1=CC(OC)=CC=C1S(=O)(=O)N(C(CC(C)C)C(=O)NO)CC1=CC=CC=C1 VKUYLANQOAKALN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 2-aminoadipic acid Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC(O)=O OYIFNHCXNCRBQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- GAUBNQMYYJLWNF-UHFFFAOYSA-N 3-(Carboxymethylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)CCNCC(O)=O GAUBNQMYYJLWNF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AOKCDAVWJLOAHG-UHFFFAOYSA-N 4-(methylamino)butyric acid Chemical compound C[NH2+]CCCC([O-])=O AOKCDAVWJLOAHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000029791 ADAM Human genes 0.000 description 2
- 108091022885 ADAM Proteins 0.000 description 2
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 2
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 2
- VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L Calcium carbonate Chemical compound [Ca+2].[O-]C([O-])=O VTYYLEPIZMXCLO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 206010009900 Colitis ulcerative Diseases 0.000 description 2
- 102000000503 Collagen Type II Human genes 0.000 description 2
- 108010041390 Collagen Type II Proteins 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N D-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-UWTATZPHSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N D-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 2
- 101800001224 Disintegrin Proteins 0.000 description 2
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 description 2
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 description 2
- SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N L-2-aminopentanoic acid Chemical compound CCC[C@H](N)C(O)=O SNDPXSYFESPGGJ-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N L-homophenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC1=CC=CC=C1 JTTHKOPSMAVJFE-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 241000713666 Lentivirus Species 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 2
- 108010076557 Matrix Metalloproteinase 14 Proteins 0.000 description 2
- 102100030216 Matrix metalloproteinase-14 Human genes 0.000 description 2
- 102100026262 Metalloproteinase inhibitor 2 Human genes 0.000 description 2
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 2
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 description 2
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 2
- 102100030856 Myoglobin Human genes 0.000 description 2
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 2
- WRUZLCLJULHLEY-UHFFFAOYSA-N N-(p-hydroxyphenyl)glycine Chemical compound OC(=O)CNC1=CC=C(O)C=C1 WRUZLCLJULHLEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 2
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 208000001132 Osteoporosis Diseases 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 125000000066 S-methyl group Chemical group [H]C([H])([H])S* 0.000 description 2
- 108010077895 Sarcosine Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710108790 Stromelysin-1 Proteins 0.000 description 2
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 2
- 108010031372 Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 Proteins 0.000 description 2
- GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N Titan oxide Chemical compound O=[Ti]=O GWEVSGVZZGPLCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 2
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 2
- 201000006704 Ulcerative Colitis Diseases 0.000 description 2
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 2
- 230000033115 angiogenesis Effects 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 206010003246 arthritis Diseases 0.000 description 2
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 2
- XFILPEOLDIKJHX-QYZOEREBSA-N batimastat Chemical compound C([C@@H](C(=O)NC)NC(=O)[C@H](CC(C)C)[C@H](CSC=1SC=CC=1)C(=O)NO)C1=CC=CC=C1 XFILPEOLDIKJHX-QYZOEREBSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 2
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 2
- PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N carbonyldiimidazole Chemical compound C1=CN=CN1C(=O)N1C=CN=C1 PFKFTWBEEFSNDU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 2
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Chemical class 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Chemical class 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 2
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 2
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 2
- ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N coumarin Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C=CC2=C1 ZYGHJZDHTFUPRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000009266 disease activity Effects 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 2
- 230000029578 entry into host Effects 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 2
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 2
- 239000010685 fatty oil Substances 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 230000009454 functional inhibition Effects 0.000 description 2
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 2
- 238000000227 grinding Methods 0.000 description 2
- 108060003552 hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 125000002883 imidazolyl group Chemical group 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 230000008676 import Effects 0.000 description 2
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 230000007794 irritation Effects 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- OCSMOTCMPXTDND-OUAUKWLOSA-N marimastat Chemical compound CNC(=O)[C@H](C(C)(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)[C@H](O)C(=O)NO OCSMOTCMPXTDND-OUAUKWLOSA-N 0.000 description 2
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 description 2
- XJODGRWDFZVTKW-ZCFIWIBFSA-N n-methylleucine Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 2
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 2
- FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L paraquat dichloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].C1=C[N+](C)=CC=C1C1=CC=[N+](C)C=C1 FIKAKWIAUPDISJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 229960001639 penicillamine Drugs 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 2
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- YKPYIPVDTNNYCN-INIZCTEOSA-N prinomastat Chemical compound ONC(=O)[C@H]1C(C)(C)SCCN1S(=O)(=O)C(C=C1)=CC=C1OC1=CC=NC=C1 YKPYIPVDTNNYCN-INIZCTEOSA-N 0.000 description 2
- 229950003608 prinomastat Drugs 0.000 description 2
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 2
- 238000010188 recombinant method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 2
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 2
- VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N tetrachloromethane Chemical compound ClC(Cl)(Cl)Cl VZGDMQKNWNREIO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 2
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 2
- 229940040944 tetracyclines Drugs 0.000 description 2
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 2
- 150000003573 thiols Chemical class 0.000 description 2
- 230000007838 tissue remodeling Effects 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 230000007704 transition Effects 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 2
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- XLBVNMSMFQMKEY-SCSAIBSYSA-N (2r)-2-(methylamino)pentanedioic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CCC(O)=O XLBVNMSMFQMKEY-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- NHTGHBARYWONDQ-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-amino-3-(4-hydroxyphenyl)-2-methylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@@](N)(C)CC1=CC=C(O)C=C1 NHTGHBARYWONDQ-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- HYOWVAAEQCNGLE-SNVBAGLBSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-methyl-3-phenylpropanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@]([NH3+])(C)CC1=CC=CC=C1 HYOWVAAEQCNGLE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- ZYVMPHJZWXIFDQ-ZCFIWIBFSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-methyl-4-methylsulfanylbutanoate Chemical compound CSCC[C@@](C)(N)C(O)=O ZYVMPHJZWXIFDQ-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- OCLLVJCYGMCLJG-CYBMUJFWSA-N (2r)-2-azaniumyl-2-naphthalen-1-ylpropanoate Chemical compound C1=CC=C2C([C@@](N)(C(O)=O)C)=CC=CC2=C1 OCLLVJCYGMCLJG-CYBMUJFWSA-N 0.000 description 1
- LWHHAVWYGIBIEU-ZCFIWIBFSA-N (2r)-2-methylpyrrolidin-1-ium-2-carboxylate Chemical compound OC(=O)[C@@]1(C)CCCN1 LWHHAVWYGIBIEU-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- CYZKJBZEIFWZSR-ZCFIWIBFSA-N (2r)-3-(1h-imidazol-5-yl)-2-(methylamino)propanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CC1=CN=CN1 CYZKJBZEIFWZSR-ZCFIWIBFSA-N 0.000 description 1
- KSZFSNZOGAXEGH-SCSAIBSYSA-N (2r)-5-amino-2-(methylamino)-5-oxopentanoic acid Chemical compound CN[C@@H](C(O)=O)CCC(N)=O KSZFSNZOGAXEGH-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N (2r,3r,4s,5r,6s)-4,5-dimethoxy-2-(methoxymethyl)-3-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,4,5-trimethoxy-6-(methoxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[(2r,3r,4s,5r,6r)-4,5,6-trimethoxy-2-(methoxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxane Chemical compound CO[C@@H]1[C@@H](OC)[C@H](OC)[C@@H](COC)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](OC)[C@@H](OC)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OC)[C@H](OC)O[C@@H]2COC)OC)O[C@@H]1COC LNAZSHAWQACDHT-XIYTZBAFSA-N 0.000 description 1
- MUVQIIBPDFTEKM-IUYQGCFVSA-N (2r,3s)-2-aminobutane-1,3-diol Chemical compound C[C@H](O)[C@H](N)CO MUVQIIBPDFTEKM-IUYQGCFVSA-N 0.000 description 1
- KSPIYJQBLVDRRI-NTSWFWBYSA-N (2r,3s)-3-methyl-2-(methylazaniumyl)pentanoate Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](NC)C(O)=O KSPIYJQBLVDRRI-NTSWFWBYSA-N 0.000 description 1
- BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N (2s)-2-(cyclohexylazaniumyl)propanoate Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCCC1 BVAUMRCGVHUWOZ-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- LDUWTIUXPVCEQF-LURJTMIESA-N (2s)-2-(cyclopentylamino)propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC1CCCC1 LDUWTIUXPVCEQF-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- NVXKJPGRZSDYPK-JTQLQIEISA-N (2s)-2-(methylamino)-4-phenylbutanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CCC1=CC=CC=C1 NVXKJPGRZSDYPK-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- FPDYKABXINADKS-LURJTMIESA-N (2s)-2-(methylazaniumyl)hexanoate Chemical compound CCCC[C@H](NC)C(O)=O FPDYKABXINADKS-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- HCPKYUNZBPVCHC-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-(methylazaniumyl)pentanoate Chemical compound CCC[C@H](NC)C(O)=O HCPKYUNZBPVCHC-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N (2s)-2-(naphthalen-1-ylamino)propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2C(N[C@@H](C)C(O)=O)=CC=CC2=C1 IYKLZBIWFXPUCS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- GPYTYOMSQHBYTK-LURJTMIESA-N (2s)-2-azaniumyl-2,3-dimethylbutanoate Chemical compound CC(C)[C@](C)([NH3+])C([O-])=O GPYTYOMSQHBYTK-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- LWHHAVWYGIBIEU-LURJTMIESA-N (2s)-2-methylpyrrolidin-1-ium-2-carboxylate Chemical compound [O-]C(=O)[C@]1(C)CCC[NH2+]1 LWHHAVWYGIBIEU-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- XKZCXMNMUMGDJG-AWEZNQCLSA-N (2s)-3-[(6-acetylnaphthalen-2-yl)amino]-2-aminopropanoic acid Chemical compound C1=C(NC[C@H](N)C(O)=O)C=CC2=CC(C(=O)C)=CC=C21 XKZCXMNMUMGDJG-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- LNSMPSPTFDIWRQ-VKHMYHEASA-N (2s)-4-amino-2-(methylamino)-4-oxobutanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC(N)=O LNSMPSPTFDIWRQ-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N (2s)-4-methyl-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CC(C)C XJODGRWDFZVTKW-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- OZRWQPFBXDVLAH-YFKPBYRVSA-N (2s)-5-amino-2-(methylamino)pentanoic acid Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CCCN OZRWQPFBXDVLAH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- RHMALYOXPBRJBG-WXHCCQJTSA-N (2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[(2s)-6-amino-2-[[(2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[[(2s,3r)-2-[[(2s)-2-[[2-[[2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]acetyl]amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]acetyl]amino]propanoyl]amino]- Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@H](O)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(N)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 RHMALYOXPBRJBG-WXHCCQJTSA-N 0.000 description 1
- LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N (2s,3r)-2-[[(2r)-1-[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-hydroxybutanoic acid Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H]1CCCN1C(=O)[C@@H](N)CCCCN LOGFVTREOLYCPF-KXNHARMFSA-N 0.000 description 1
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N (4s,4ar,5s,5ar,6r,12ar)-4-(dimethylamino)-1,5,10,11,12a-pentahydroxy-6-methyl-3,12-dioxo-4a,5,5a,6-tetrahydro-4h-tetracene-2-carboxamide Chemical compound C1=CC=C2[C@H](C)[C@@H]([C@H](O)[C@@H]3[C@](C(O)=C(C(N)=O)C(=O)[C@H]3N(C)C)(O)C3=O)C3=C(O)C2=C1O SGKRLCUYIXIAHR-AKNGSSGZSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 1,2-dichloro-1,1,2,2-tetrafluoroethane Chemical compound FC(F)(Cl)C(F)(F)Cl DDMOUSALMHHKOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-2,4-dioxo-1,3-diazinane-5-carboximidamide Chemical compound CN1CC(C(N)=N)C(=O)NC1=O IXPNQXFRVYWDDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 2,3-bis[(z)-octadec-9-enoxy]propyl-trimethylazanium;chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCCOCC(C[N+](C)(C)C)OCCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC LDGWQMRUWMSZIU-LQDDAWAPSA-M 0.000 description 1
- PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 2-(2-azaniumylethylamino)acetate Chemical compound NCCNCC(O)=O PIINGYXNCHTJTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHGYLUFLENKZHH-UHFFFAOYSA-N 2-(3-aminopropylamino)acetic acid Chemical compound NCCCNCC(O)=O DHGYLUFLENKZHH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OGAULEBSQQMUKP-UHFFFAOYSA-N 2-(4-aminobutylamino)acetic acid Chemical compound NCCCCNCC(O)=O OGAULEBSQQMUKP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KGSVNOLLROCJQM-UHFFFAOYSA-N 2-(benzylamino)acetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC1=CC=CC=C1 KGSVNOLLROCJQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KQLGGQARRCMYGD-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclobutylamino)acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC1CCC1 KQLGGQARRCMYGD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RDLWRTMITWVDLV-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclododecylamino)acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC1CCCCCCCCCCC1 RDLWRTMITWVDLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NPLBBQAAYSJEMO-UHFFFAOYSA-N 2-(cycloheptylazaniumyl)acetate Chemical compound OC(=O)CNC1CCCCCC1 NPLBBQAAYSJEMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CTVIWLLGUFGSLY-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexylazaniumyl)-2-methylpropanoate Chemical compound OC(=O)C(C)(C)NC1CCCCC1 CTVIWLLGUFGSLY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQMYZVWIXPPDDE-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclohexylazaniumyl)acetate Chemical compound OC(=O)CNC1CCCCC1 OQMYZVWIXPPDDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PNKNDNFLQNMQJL-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclooctylazaniumyl)acetate Chemical compound OC(=O)CNC1CCCCCCC1 PNKNDNFLQNMQJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DFTZSHZOTLFTJU-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclopentylamino)-2-methylpropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)(C)NC1CCCC1 DFTZSHZOTLFTJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DXQCCQKRNWMECV-UHFFFAOYSA-N 2-(cyclopropylazaniumyl)acetate Chemical compound OC(=O)CNC1CC1 DXQCCQKRNWMECV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PRVOMNLNSHAUEI-UHFFFAOYSA-N 2-(cycloundecylamino)acetic acid Chemical compound OC(=O)CNC1CCCCCCCCCC1 PRVOMNLNSHAUEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobutanoic acid Natural products CCC(N)C(O)=O QWCKQJZIFLGMSD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxynonadecane-1,2,3-tricarboxylic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCC(C(O)=O)C(O)(C(O)=O)CC(O)=O HZLCGUXUOFWCCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HOJZAHQWDXAPDJ-UHFFFAOYSA-N 3-anilino-2-hydroxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CNC1=CC=CC=C1 HOJZAHQWDXAPDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 3-ethyl-2h-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=CC=C2N(CC)CSC2=C1 HQFLTUZKIRYQSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KDHWOCLBMVSZPG-UHFFFAOYSA-N 3-imidazol-1-ylpropan-1-amine Chemical compound NCCCN1C=CN=C1 KDHWOCLBMVSZPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLOADVWGNGAZCW-UHFFFAOYSA-N 3-phenyl-23H-porphyrin-2,18,20,21-tetracarboxylic acid Chemical compound OC(=O)C=1C(N2C(O)=O)=C(C(O)=O)C(=N3)C(C(=O)O)=CC3=CC(N3)=CC=C3C=C(N=3)C=CC=3C=C2C=1C1=CC=CC=C1 WLOADVWGNGAZCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800000535 3C-like proteinase Proteins 0.000 description 1
- 101800002396 3C-like proteinase nsp5 Proteins 0.000 description 1
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AEBRINKRALSWNY-UHFFFAOYSA-N 4-azaniumyl-2-methylbutanoate Chemical compound OC(=O)C(C)CCN AEBRINKRALSWNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000017304 72kDa type IV collagenases Human genes 0.000 description 1
- 108050005269 72kDa type IV collagenases Proteins 0.000 description 1
- 102000043279 ADAM17 Human genes 0.000 description 1
- 108091007505 ADAM17 Proteins 0.000 description 1
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 244000215068 Acacia senegal Species 0.000 description 1
- ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N Adamantane Natural products C1C(C2)CC3CC1CC2C3 ORILYTVJVMAKLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 208000037260 Atherosclerotic Plaque Diseases 0.000 description 1
- 208000008035 Back Pain Diseases 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 0 C**COCCC#N Chemical compound C**COCCC#N 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical group [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010007559 Cardiac failure congestive Diseases 0.000 description 1
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 1
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 1
- 206010008642 Cholesteatoma Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 1
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 206010011091 Coronary artery thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 208000011231 Crohn disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N D-Cysteine Chemical compound SC[C@@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N D-Isoleucine Chemical compound CC[C@@H](C)[C@@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-RFZPGFLSSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N D-Ornithine Chemical compound NCCC[C@@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N D-Proline Chemical compound OC(=O)[C@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N D-Serine Chemical compound OC[C@@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- 229930195711 D-Serine Natural products 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N D-alanine Chemical compound C[C@@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-UWTATZPHSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N D-alpha-Ala Natural products CC([NH3+])C([O-])=O QNAYBMKLOCPYGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930182847 D-glutamic acid Natural products 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N D-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 229930195715 D-glutamine Natural products 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N D-histidine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229930195721 D-histidine Natural products 0.000 description 1
- 229930182845 D-isoleucine Natural products 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N D-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- 229930182819 D-leucine Natural products 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N D-methionine Chemical compound CSCC[C@@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182818 D-methionine Natural products 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N D-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182832 D-phenylalanine Natural products 0.000 description 1
- 229930182820 D-proline Natural products 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N D-threonine Chemical compound C[C@H](O)[C@@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-STHAYSLISA-N 0.000 description 1
- 229930182822 D-threonine Natural products 0.000 description 1
- 229930182827 D-tryptophan Natural products 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N D-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-SECBINFHSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N D-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-MRVPVSSYSA-N 0.000 description 1
- 229930195709 D-tyrosine Natural products 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N D-valine Chemical compound CC(C)[C@@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-SCSAIBSYSA-N 0.000 description 1
- 229930182831 D-valine Natural products 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- 206010012689 Diabetic retinopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000004338 Dichlorodifluoromethane Substances 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 229930195710 D‐cysteine Natural products 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N Elaidinsaeure-aethylester Natural products CCCCCCCCC=CCCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010014561 Emphysema Diseases 0.000 description 1
- 241000792859 Enema Species 0.000 description 1
- 206010053177 Epidermolysis Diseases 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 108091006027 G proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000030782 GTP binding Human genes 0.000 description 1
- 108091000058 GTP-Binding Proteins 0.000 description 1
- 208000022461 Glomerular disease Diseases 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000084 Gum arabic Polymers 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 1
- 208000031220 Hemophilia Diseases 0.000 description 1
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 101000946053 Homo sapiens Lysosomal-associated transmembrane protein 4A Proteins 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N Hydroxyproline Chemical compound O[C@H]1CN[C@H](C(O)=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-DMTCNVIQSA-N 0.000 description 1
- 201000002980 Hyperparathyroidism Diseases 0.000 description 1
- 102000009786 Immunoglobulin Constant Regions Human genes 0.000 description 1
- 108010009817 Immunoglobulin Constant Regions Proteins 0.000 description 1
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 1
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 102000003777 Interleukin-1 beta Human genes 0.000 description 1
- 108090000193 Interleukin-1 beta Proteins 0.000 description 1
- 102000007351 Interleukin-2 Receptor alpha Subunit Human genes 0.000 description 1
- 108010032774 Interleukin-2 Receptor alpha Subunit Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-UHFFFAOYSA-N L-N-Boc-N-methylalanine Natural products CNC(C)C(O)=O GDFAOVXKHJXLEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N L-Ornithine Chemical compound NCCC[C@H](N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N L-Proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N L-alpha-phenylglycine zwitterion Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)C1=CC=CC=C1 ZGUNAGUHMKGQNY-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- 150000008575 L-amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 125000003338 L-glutaminyl group Chemical group O=C([*])[C@](N([H])[H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C(=O)N([H])[H] 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- NHTGHBARYWONDQ-JTQLQIEISA-N L-α-methyl-Tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@](N)(C)CC1=CC=C(O)C=C1 NHTGHBARYWONDQ-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102100034728 Lysosomal-associated transmembrane protein 4A Human genes 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 102000055008 Matrilin Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010072582 Matrilin Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010016160 Matrix Metalloproteinase 3 Proteins 0.000 description 1
- 102000001776 Matrix metalloproteinase-9 Human genes 0.000 description 1
- 101000990903 Mus musculus Matrix metalloproteinase-9 Proteins 0.000 description 1
- 206010028391 Musculoskeletal Pain Diseases 0.000 description 1
- HSHXDCVZWHOWCS-UHFFFAOYSA-N N'-hexadecylthiophene-2-carbohydrazide Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCNNC(=O)c1cccs1 HSHXDCVZWHOWCS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N N(alpha)-methyl-L-tryptophan Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H]([NH2+]C)C([O-])=O)=CNC2=C1 CZCIKBSVHDNIDH-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- SCIFESDRCALIIM-UHFFFAOYSA-N N-Me-Phenylalanine Natural products CNC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NTWVQPHTOUKMDI-YFKPBYRVSA-N N-Methyl-arginine Chemical compound CN[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N NTWVQPHTOUKMDI-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N N-methyl-L-alanine Chemical compound C[NH2+][C@@H](C)C([O-])=O GDFAOVXKHJXLEI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KSPIYJQBLVDRRI-WDSKDSINSA-N N-methyl-L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](NC)C(O)=O KSPIYJQBLVDRRI-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- YAXAFCHJCYILRU-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-methionine Chemical compound C[NH2+][C@H](C([O-])=O)CCSC YAXAFCHJCYILRU-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N N-methyl-L-phenylalanine Chemical compound C[NH2+][C@H](C([O-])=O)CC1=CC=CC=C1 SCIFESDRCALIIM-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N N-methyl-L-valine Chemical compound CN[C@@H](C(C)C)C(O)=O AKCRVYNORCOYQT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- CWLQUGTUXBXTLF-YFKPBYRVSA-N N-methylproline Chemical compound CN1CCC[C@H]1C(O)=O CWLQUGTUXBXTLF-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 101150054880 NASP gene Proteins 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 206010029113 Neovascularisation Diseases 0.000 description 1
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 1
- 102000008763 Neurofilament Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010088373 Neurofilament Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 1
- 108020003217 Nuclear RNA Proteins 0.000 description 1
- 102000043141 Nuclear RNA Human genes 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N O-phosphoryl-L-serine Natural products OC(=O)C(N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N Orn-delta-NH2 Natural products NCCCC(N)C(O)=O AHLPHDHHMVZTML-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N Ornithine Natural products OC(=O)C(C)CCCN UTJLXEIPEHZYQJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 206010034016 Paronychia Diseases 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010043958 Peptoids Proteins 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 1
- 102000013566 Plasminogen Human genes 0.000 description 1
- 108010051456 Plasminogen Proteins 0.000 description 1
- 102000004211 Platelet factor 4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000778 Platelet factor 4 Proteins 0.000 description 1
- 208000002151 Pleural effusion Diseases 0.000 description 1
- 206010065159 Polychondritis Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 101000774655 Protobothrops mucrosquamatus Snake venom metalloproteinase TM-1 Proteins 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000219061 Rheum Species 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 208000007613 Shoulder Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000700584 Simplexvirus Species 0.000 description 1
- 229920002125 Sokalan® Polymers 0.000 description 1
- 208000007156 Spondylarthritis Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 101150002618 TCRP gene Proteins 0.000 description 1
- 240000002871 Tectona grandis Species 0.000 description 1
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 1
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 206010064390 Tumour invasion Diseases 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- 206010064996 Ulcerative keratitis Diseases 0.000 description 1
- 206010047249 Venous thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 229930003779 Vitamin B12 Natural products 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 239000005862 Whey Substances 0.000 description 1
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 238000000441 X-ray spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 101000998548 Yersinia ruckeri Alkaline proteinase inhibitor Proteins 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000862 absorption spectrum Methods 0.000 description 1
- 235000010489 acacia gum Nutrition 0.000 description 1
- 239000000205 acacia gum Substances 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000009824 affinity maturation Effects 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 1
- 229940040563 agaric acid Drugs 0.000 description 1
- 108010003059 aggrecanase Proteins 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000783 alginic acid Substances 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- 229960001126 alginic acid Drugs 0.000 description 1
- 150000004781 alginic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- HYOWVAAEQCNGLE-JTQLQIEISA-N alpha-methyl-L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@](N)(C)CC1=CC=CC=C1 HYOWVAAEQCNGLE-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- ZYVMPHJZWXIFDQ-LURJTMIESA-N alpha-methylmethionine Chemical compound CSCC[C@](C)(N)C(O)=O ZYVMPHJZWXIFDQ-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 125000006295 amino methylene group Chemical group [H]N(*)C([H])([H])* 0.000 description 1
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002491 angiogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008365 aqueous carrier Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000001188 articular cartilage Anatomy 0.000 description 1
- 210000004507 artificial chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000305 astragalus gummifer gum Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000468 autoproteolytic effect Effects 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 210000002469 basement membrane Anatomy 0.000 description 1
- 229950001858 batimastat Drugs 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229920000249 biocompatible polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000002805 bone matrix Anatomy 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 229910000019 calcium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000009400 cancer invasion Effects 0.000 description 1
- 150000001718 carbodiimides Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical group 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229960004424 carbon dioxide Drugs 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 150000001732 carboxylic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000001715 carotid artery Anatomy 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 1
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011281 clinical therapy Methods 0.000 description 1
- XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N cobalt(2+) Chemical compound [Co+2] XLJKHNWPARRRJB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 239000003433 contraceptive agent Substances 0.000 description 1
- 230000002254 contraceptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229940099112 cornstarch Drugs 0.000 description 1
- 208000002528 coronary thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 229960000956 coumarin Drugs 0.000 description 1
- 235000001671 coumarin Nutrition 0.000 description 1
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- QAVILNTZAVXKDE-UHFFFAOYSA-N cyclopropanimine Chemical compound N=C1CC1 QAVILNTZAVXKDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 description 1
- 239000000412 dendrimer Substances 0.000 description 1
- 229920000736 dendritic polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 229950006137 dexfosfoserine Drugs 0.000 description 1
- UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L di(octadecanoyloxy)lead Chemical compound [Pb+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O UQLDLKMNUJERMK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N dichlorodifluoromethane Chemical compound FC(F)(Cl)Cl PXBRQCKWGAHEHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940042935 dichlorodifluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 235000019404 dichlorodifluoromethane Nutrition 0.000 description 1
- 229940087091 dichlorotetrafluoroethane Drugs 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 125000002228 disulfide group Chemical group 0.000 description 1
- PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N dl-hydroxyproline Natural products OC1C[NH2+]C(C([O-])=O)C1 PMMYEEVYMWASQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 229960003722 doxycycline Drugs 0.000 description 1
- 238000009509 drug development Methods 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 description 1
- 239000007920 enema Substances 0.000 description 1
- 229940079360 enema for constipation Drugs 0.000 description 1
- 239000003344 environmental pollutant Substances 0.000 description 1
- LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N ethyl oleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OCC LVGKNOAMLMIIKO-QXMHVHEDSA-N 0.000 description 1
- 229940093471 ethyl oleate Drugs 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 238000000192 extended X-ray absorption fine structure spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 206010016256 fatigue Diseases 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 108060002894 fibrillar collagen Proteins 0.000 description 1
- 102000013373 fibrillar collagen Human genes 0.000 description 1
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001506 fluorescence spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 238000007421 fluorometric assay Methods 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940014259 gelatin Drugs 0.000 description 1
- 238000007804 gelatin zymography Methods 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 231100000852 glomerular disease Toxicity 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002743 glutamine Drugs 0.000 description 1
- 125000000404 glutamine group Chemical group N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 150000003278 haem Chemical group 0.000 description 1
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 102000054439 human MMP9 Human genes 0.000 description 1
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 229960002591 hydroxyproline Drugs 0.000 description 1
- 239000001866 hydroxypropyl methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010979 hydroxypropyl methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920003088 hydroxypropyl methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 1
- NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N iminodiacetic acid Chemical compound OC(=O)CNCC(O)=O NBZBKCUXIYYUSX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000009851 immunogenic response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 230000004968 inflammatory condition Effects 0.000 description 1
- 208000027866 inflammatory disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- RGXCTRIQQODGIZ-UHFFFAOYSA-O isodesmosine Chemical compound OC(=O)C(N)CCCC[N+]1=CC(CCC(N)C(O)=O)=CC(CCC(N)C(O)=O)=C1CCCC(N)C(O)=O RGXCTRIQQODGIZ-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N isomaltotriose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C=O)O1 FZWBNHMXJMCXLU-BLAUPYHCSA-N 0.000 description 1
- 150000003951 lactams Chemical class 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 229940057995 liquid paraffin Drugs 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 1
- 230000005976 liver dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 229950008959 marimastat Drugs 0.000 description 1
- 230000021121 meiosis Effects 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003475 metalloproteinase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000001394 metastastic effect Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005012 migration Effects 0.000 description 1
- 238000013508 migration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000003068 molecular probe Substances 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N n-[(2s,3r,4r,5s,6r)-2-[(2r,3s,4r,5r,6s)-5-acetamido-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-(4-methyl-2-oxochromen-7-yl)oxyoxan-3-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](NC(C)=O)[C@H](OC=2C=C3OC(=O)C=C(C)C3=CC=2)O[C@@H]1CO UPSFMJHZUCSEHU-JYGUBCOQSA-N 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N olefin Natural products CCCCCCCC=C JRZJOMJEPLMPRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011275 oncology therapy Methods 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 239000003791 organic solvent mixture Substances 0.000 description 1
- 150000002902 organometallic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229960003104 ornithine Drugs 0.000 description 1
- 230000016087 ovulation Effects 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001151 peptidyl group Chemical group 0.000 description 1
- 208000028169 periodontal disease Diseases 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N phosphoserine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)COP(O)(O)=O BZQFBWGGLXLEPQ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000004014 plasticizer Substances 0.000 description 1
- 231100000719 pollutant Toxicity 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 description 1
- 229920001592 potato starch Polymers 0.000 description 1
- 229940116317 potato starch Drugs 0.000 description 1
- 239000000955 prescription drug Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 239000003380 propellant Substances 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000001742 protein purification Methods 0.000 description 1
- 201000001474 proteinuria Diseases 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000008707 rearrangement Effects 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 239000012925 reference material Substances 0.000 description 1
- 230000027756 respiratory electron transport chain Effects 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 150000004492 retinoid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 208000011581 secondary neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 235000011803 sesame oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008159 sesame oil Substances 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 235000010413 sodium alginate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000661 sodium alginate Substances 0.000 description 1
- 229940005550 sodium alginate Drugs 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- 239000007901 soft capsule Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000012439 solid excipient Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000003393 splenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 238000012916 structural analysis Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229940124530 sulfonamide Drugs 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000002511 suppository base Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000012622 synthetic inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 239000004408 titanium dioxide Substances 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 238000012876 topography Methods 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N trans-L-hydroxy-proline Natural products ON1CCCC1C(O)=O FGMPLJWBKKVCDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N trichlorofluoromethane Chemical compound FC(Cl)(Cl)Cl CYRMSUTZVYGINF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940029284 trichlorofluoromethane Drugs 0.000 description 1
- 230000005747 tumor angiogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 239000002966 varnish Substances 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000019163 vitamin B12 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011715 vitamin B12 Substances 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 229940070524 zinc protein complex Drugs 0.000 description 1
- 230000034365 zymogen activation Effects 0.000 description 1
- 230000003462 zymogenic effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
- C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/44—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material not provided for elsewhere, e.g. haptens, metals, DNA, RNA, amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/66—Phosphorus compounds
- A61K31/675—Phosphorus compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pyridoxal phosphate
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
- A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
- C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
- C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
- C07D233/61—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms not forming part of a nitro radical, attached to ring nitrogen atoms
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
- C07F3/00—Compounds containing elements of Groups 2 or 12 of the Periodic Table
- C07F3/06—Zinc compounds
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Immunology (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Pain & Pain Management (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к соединению, имеющему общую формулу (I):
где m и n являются независимо целыми числами от 1 до 6; каждый из X1-X3 и Y1-Y3 является О; R1-R3 каждый независимо выбирают из группы, состоящей из водорода или алкила; и R является O-(CH2)x-C(=O)NR'-(CH2)y-NHR', причем: x и y каждый являются независимо целыми числами от 1 до 6; и R' выбирают из группы, состоящей из водорода и алкила. Также предложены антитело, содержащее область распознавания антигена, использование соединения, фармацевтическая композиция, применение антитела, способ ингибирования активности ММП-2 или ММП-9 в пробе и композиция для определения ММП-2 или ММП-9. Изобретение позволяет получить соединения, способные ингибировать активность ММП-2 и ММП-9. 7 н. и 4 з.п. ф-лы, 16 ил., 4 табл., 11 пр.
Description
ОБЛАСТЬ И УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к молекулам гаптена и антителам, направленным против них, которые могут быть использованы для ингибирования активности металлопротеинов, таких как металлопротеазы, а также к способам, в которых используются эти антитела для лечения таких заболеваний, как метастазирующий рак, которые связаны с аномальной активностью металлопротеина.
Матриксные металлопротеины (ММП) являются основными ферментами, участвующими в ремоделировании внеклеточного матрикса (ВКМ). Эти ферменты способны разрушать различные компоненты соединительной ткани суставного хряща или базальных мембран.
Семейство генов ММП человека состоит по меньшей мере из 28 структурно родственных белков (см. ФИГ.1), которые имеют сходную общую сферическую топологию (ФИГ.2 и Боркакоти, 1998). Каждый ММП секретируется как неактивный латентный профермент. Домен каталитического цинка состоит приблизительно из 180 аминокислот, где высоко консервативная последовательность HE-GH-LGL-H дает три гистидиновых (т.е., Н) остатков, которые связаны с ионом металлического цинка Zn(2+). Четвертый участок связывания иона каталитического цинка в проферменте связан с цистеиновым остатком (Моргунова и др., 1999), на котором ферментная активация отсоединяется от активного участка (Ван-Варт и Биркедаль-Хансен, 1990). В результате этого, четвертый участок связывания в активированном ММП занимает молекула воды, которая также имеет водородную связь с консервативным глутаминовым остатком. Этот процесс облегчает гидролиз пептидной связи целевого субстрата с активированной молекулой воды.
Неконтролируемое разрушение соединительной ткани металлопротеазами является признаком многих патологических состояний, вероятно являющихся результатом чрезмерной активности ММП или несбалансированного соотношения между естественными тканевыми ингибиторами ММП (ТИМП) и ММП. ТИМП ингибируют ММП путем формирования стехиометрических комплексов с активным участком связывания цинка (Гомес и др, 1997; Генриет и др., 1999; Боде и др., 1999; Уилл и др., 1996). Когда уровни ТИМП недостаточны, прогрессирующая медленная деградация ВКМ может приводить к потере матрикса хрящевой ткани при ревматоидном артрите (Валаковиц и др., Arthritis Rheum, 35:35-42, 1992) и остеоартрите (Дин и др., J. Clin. Invest. 84:678-685, 1989) или деградации матрикса костной ткани при остеопорозе (Хилл и др., Biochem. J. 308:167-175, 1995). В других ситуациях, таких как застойная сердечная недостаточность, может происходить быстрая деградация ВКМ сердца (Армстронг и др., Canadian J. Cardiol. 10:214-220, 1994).
Кроме того, как известно, ММП играют некоторую роль в мейозе цитокинов и хемокинов, таких как галестин-3 (Очиенг Дж., Biochemistry, 1994 33(47):14109-14), плазминоген (Паттерсон, Б.К., JBC, 1997 272(46):28823-5), интерлейкина-8, активирующего соединительную ткань пептида III, тромбоцитарного фактора-4 (Ван ден Стеен, 2000 Blood. 2000 Oct 15; 96(8):2673-81.), проинтерлейкина-1β (Шенбек, 1998), цепи α рецептора интерлейкина-2 [Шю, Б.К., Хсю, С.М., Хо, X., Лиен, Х.К., Хуанг, С.К., Лин, Р.Х. «Новая роль металлопротеиназы в опосредованном раком подавлении иммунного ответа», Cancer Research (2001) 61, 237-242] и протрансформирующего фактора-β роста [TGF-β, Ю, К., Стаменкович, И. «Локализованная на поверхности клеток матриксная металлопротеиназа-9 протеолитически активирует TGF-beta и способствует инвазии и ангиогенезу опухоли», Genes Dev (2000) 14, 163-176].
Другие патологические состояния, которые также связаны с нерегулируемой активностью ММП, включают быстрое ремоделирование ВКМ метастатическими опухолевыми клетками. В таких состояниях активируемые ММП или выражены раковыми клетками или окружающими тканями. Существует достаточно доказательств того, что ММП вовлечены в рост и распространение опухолей (см., например, Дэвидсон и др., Chemistry & Industry, 258-261, 1997, и указанные в статье справочные материалы). В процессе метастазирования опухоли ММП используются для разрушения ВКМ, что позволяет раковым клеткам первичной опухоли вторгаться в соседние кровеносные сосуды, откуда они транспортируются в различные органы и создают вторичные опухоли. Инвазивный рост в этих вторичных местах опосредован ММП, которая разрушает ткань. Кроме того, активность ММП способствует инвазивному росту новых кровеносных сосудов, также называемому ангиогенезом, вследствие которого опухоли вырастают больше определенного размера. Было продемонстрировано, что среди членов семейства ММП секретированная ММП-9 человека, также известная как гелатиназа В, играет главные роли не только в катаболизме внеклеточного матрикса (ВКМ), но и в обработке белковых веществ, которые релевантны для неврологических заболеваний, таких как рассеянный склероз (PC) (Опденаккер, 2003). Недавние исследования показали, что ММП-9 играет критическую роль в содействии аутоиммунным заболеваниям путем расщепления предварительно обработанного коллагена типа II (Ван ден Стеен, 2004). Продуктами являются фрагменты коллагена типа II, которые являются оставшимися эпитопами, которые, как считается, генерируют аутоиммунные заболевания.
Учитывая большую роль ММП в физиологии и патологии человека, неудивительно, что делаются многочисленные попытки создать лекарства, которые ингибируют чрезмерную активность ММП.
Попытки разработки лекарств фокусируются на тех классах ингибиторов, которые содержат функциональную группу, координирующую ион цинка и этим деактивирующую целевую ММП. Одним таким классом ингибиторов являются гидроксаматные ингибиторы, небольшие пептидные аналоги фибриллярных коллагенов, которые специфически взаимодействуют двунаправленным образом через гидроксильный и карбонильный кислород гидроксамовой группы с ионом цинка в каталитическом сайте [Грамс и др., (1995), Biochem. 34:14012-14020; Боде и др., (1994), EMBO J., 13:1263-1269].
Ингибиторы ММП на основе гидроксамата обычно состоят или из углеродного остова (WO 95/29892, WO 97/24117, WO 97/49679 и ЕР 0780386), пептидильного остова (WO 90/05719, WO 93/20047, WO 95/09841 и WO 96/06074) или пептидомиметического остова [Шварц и др., Progr. Med. Chem., 29:271-334(1992); Расмуссен и др., Pharmacol. Ther., 75:69-75 (1997); Денис и др., Invest. New Drugs, 15:175-185 (1997)]. Альтернативно, они содержат сульфоамидосульфонильную группу, которая связана на одной стороне с фенильным кольцом, и сульфоамидоазот, который связан с гидроксаматной группой через цепь из одного - четырех атомов углерода (ЕР 0757984 А1).
Другими ингибиторами ММП на основе пептидов являются тиоловые амиды, которые имеют активность, ингибирующую коллагеназу (патент США 4,595,700), N-карбоксиалкилпроизводные, содержащие бифенилэтилглицин, которые ингибируют ММП-3, ММП-2 и коллагеназу (Дюретт и др., WO-9529689), производные лактама, которые ингибируют ММП, TNF-alpha и аггреканазу (см. патент США 6,495,699), и трициклические сульфонамидные соединения (см. патент США 6,492,422).
Хотя ингибиторы ММП на основе пептидов имеют явный терапевтический потенциал, их использование в клинической терапии ограничено. Гидроксаматы на основе пептида дороги в производстве и имеют низкую метаболическую стабильность и оральную биодоступность [например, батимастат (ВВ-94)]. Эти соединения быстро глюкуронизируются, окисляются до карбоновой кислоты и выводятся в желчь [Сингх и др., Bioorg. Med. Chem. Lett. 5: 337-342, 1995; Ходгсон, "Ремоделирование ММПИ", Biotechnology 13: 554-557, 1995)]. Кроме того, ингибиторы ММП на основе пептидов часто оказывают такие же или сходные на каждый из ферментов ММП. Например, ба-тимастат по сообщениям имеет значения IC50 приблизительно от 1 до 20 нмоль против каждой из ММП-1, ММП-2, ММП-3, ММП-7 и ММП-9 [Расмуссен и др., Pharmacol. Ther., 75(1): 69-75 (1997)]. Кроме того, использование нескольких гидроксаматных ингибиторов было связано с серьезными побочными эффектами, такими как мышцеске-летные проблемы от маримастата (ВВ-2516), широко распространенная язвенная сыпь от CGS27023A (Novartis) [Левитт и др., 2001, Clin. Cancer Res. 7: 1912-1922] и нарушения работы печени, анемия, боли в плечах и спине, тромбоцитопения, тошнота, усталость, диарея и тромбоз вен от BAY12-9566 (Bayer) [Хис и др., 2001, Cancer Chemother. Pharmacol. 48: 269-274]. Более того, клинические испытания фазы III на пациентах с развившимся раком, которым назначали маримастат, приномастат (AG 3340, Agouron) и Bay 12-9566, не продемонстрировали клинической эффективности в ингибировании метастаз (Цукер и др., 2000, Oncogene 19: 6642-50).
Другими ингибиторами ММП являются химически модифицированные немикробные тетрациклины (ХМТ), которые блокируют выражение нескольких ММП in vitro. Однако, было выявлено, что эффективность этих соединений in vivo является ограниченной, например, ингибитор ХМТ, доксициклин, снижал тканевые уровни ММП-1, но не ММП-2, 3, или 9 в атеросклерозных бляшках в сонной артерии у людей (Аксиса и др., 2002, Строук 33: 2858-2864).
Недавно разработан ингибитор механизма ММП, SB-3CT, который основан на рентгеновской кристаллографической информации об активном сайте ММП (Браун и др., 2000). Рентгенографические абсорбционные исследования показали, что связывание этой молекулы с каталитическим цинком реконструирует конформационную среду вокруг иона металла в активном сайте обратно до среды профермента [Кляйфельд и др., 2001, J Biol. Chem. 276: 17125-31]. Однако терапевтическую эффективности этого вещества еще предстоит определить.
Еще одним классом естественных ингибиторов являются моноклональные антитела. Несколько антител были выбраны против специфических пептидных последовательностей в каталитическом домене ММП-1 (Гальвез и др., 2001, J. Biol. Chem., 276: 37491-37500). Однако, хотя эти антитела могли ингибировать активность ММП in vitro, результаты, демонстрирующие эффективность таких тел in vivo еще не получены.
Как сказано выше, каталитический сайт ММП включает координированный ион металла, который становится доступным для связывания субстрата после ферментной активации (см. ФИГ.2а-с). Таким образом, идея заключается в том, что традиционные антитела, направленные на первичную аминокислотную последовательность фермента, не будут отличать активную форму от неактивной формы фермента и, следовательно, не будут являться мощными ингибиторами таких ферментов.
Авторы настоящего изобретения ранее демонстрировали, что антитела, которые распознают электронные и структурные детерминанты каталитического сайта ММП, являются ее мощными ингибиторами и, как таковые, могут использоваться для лечения заболеваний, связанных с несбалансированной активностью ММП (см. публикацию РСТ WO 2004/087042).
Таким образом, существует признанная необходимость и желание получить специфические гаптеновые соединения, которые имитируют электронные и структурные детерминанты каталитического сайта металлопротеинов, как специфические антитела, направленные против них.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно одному аспекту настоящего изобретения предложено соединение, имеющее общую формулу (I):
где:
m и n являются независимо целыми числами от 1 до 6;
X1-Х3 и Y1-Y3 являются независимо О или S;
R1-R3 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и циклоалкила; и R-(CH2)x-C(=O)NR'-(CH2)y-NR'R"
тогда как:
x и y являются независимо целыми числами от 1 до 6; и
R' и R" независимо выбирают из группы состоящей из водорода, алкила и циклоалкила.
Согласно другим признакам предпочтительных вариантов осуществления, описанных ниже, соединение имеет формулу (II):
где R=-CH2-C(O)NH-CH2-CH2-NH2
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложено соединение, имеющее формулу (II):
где R=-CH2-C(=O)NH-CH2-CH2-NH2
Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения предложено антитело, содержащее участок распознания антигенов, способный специфически связывать вышеуказанное соединение.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления участок распознания антигенов содержит аминокислотную последовательность CDR, выбираемую из группы, состоящей из SEQ ID NO:7, 8, 9, 10, 11 и 12.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления аминокислотная последовательность CDR кодируется последовательностью нуклеиновой кислоты, выбираемой из группы, состоящей из SEQ ID NO:13, 14, 15, 16, 17 и 18.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления антитело способно ингибировать активность металлопротеина.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления металлопротеином является матриксная металлопротеаза.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления матриксной металлопротеазой является гелатиназа.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления гелатиназу выбирают из группы из ММП-2 и ММП-9.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ производства ингибитора металлопротеинов, причем этот способ содержит создание антител, направленных на вышеуказанное соединение, этим создавая ингибитор металлопротеинов.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления антителами являются поликлональные антитела.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления антителами являются моноклональные антитела.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая упомянутое антитело и фармацевтически приемлемый носитель.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ лечения заболевания, связанного с несбалансированной или аномальной активностью металлопротеинов у пациента, причем этот способ включает назначение пациенту терапевтически эффективного количества любого одного из антител по пунктам 4-10, посредством чего лечат заболевание, связанное с несбалансированной или аномальной активностью металлопротеинов у пациента.
Согласно другим признакам указанных предпочтительных вариантов осуществления заболеванием является воспалительное заболевание внутреннего органа.
Согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования активности матриксной металлопротеазы в клетке, причем способ включает контакт клетки с любым одним из антител по пунктам 4-10, этим ингибируя активность матриксной металлопротеазы в клетке.
Настоящее изобретение успешно преодолевает недостатки известных конфигураций путем предложения новой гаптеновой композиции, которую можно использовать для генерации антител, которые распознают электронные и структурные детерминанты каталитического сайта металлопротеинов.
Если не указано иное, все технические и научные термины в настоящем описании имеют такое же значение, которое обычно понимается средним специалистом в области настоящего изобретения. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным здесь, могут быть использованы при практическом осуществлении или тестировании настоящего изобретения, подходящие способы и материалы описаны ниже. В случае противоречия, главным является описание изобретения, включая определения. Кроме того, материалы, способы и примеры являются только иллюстративными, но не ограничивающими.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Далее изобретение описано, причем только для примера, со ссылками на прилагаемые чертежи. Теперь с конкретной ссылкой на подробные чертежи подчеркивается, что показанные детали приведены только для примера и для целей иллюстративного описания предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения и представлены для предложения того, что считается наиболее подходящим и легко понятным описанием принципов и концептуальных аспектов изобретения. В этом отношении не делается попытки показать структурные детали изобретения более подробно чем необходимо для его фундаментального понимания, причем описание, взятое вместе с чертежами, делает очевидным для специалистов в данной области, как несколько форм изобретения могут быть осуществлены на практике. На чертежах:
ФИГ.1A-D - схемы молекулярной структуры Co/ZnTCPP - [мезо-Тетракис (4-карбоксифенил)-порфиринато] кобальт/цинк (II) (ФИГ.1А-В, Imisdp - [2-(2-миноэтилкарбомоил)-этоксиметил]-трис-[2-(N-(3-имидазол-1-ил-пропил))этоксиметил]метан, и консервативное сшивание цинка-протеина в сайте каталитического цинка в ММП.
ФИГ.1Е-Н - три пространственные схемы структур, показанных на ФИГ.1A-D. Отметьте, что ZnTCPP остается планарной конформацией, а СоТСРР имеет искаженную конформацию микроцикла. Заметно, что структура Imisdp в высокой степени аналогична ближайшей среде иона каталитического цинка в ММП-9, как показано на ФИГ.1G.
ФИГ.2А - структурное наложение трех пространственных вычисленных структур Imisdp (зеленые атомы углерода) и три консервативных гистидина в активном сайте ММП-9 (PDB код 1GKC, серые атомы углерода). Ион каталитического цинка показан как оранжевый шар, молекула воды показана как синий шар, азот окрашен синим, кислород окрашен красным.
ФИГ.2В - структурное наложение порфиринового кольца ZnTCPP (CSD-код AKICOM) (зеленые атомы углерода) и трех консервативных гистидинов в активном сайте ММП-9 (зеленые атомы углерода PDB-код 1GKC), ион каталитического цинка показан как оранжевый шар, азот окрашен синим.
ФИГ.3А-С - изображения вестерн блоттинга, показывающие способность IgG мыши - иммобилизированных агарозой моноклональных антител вытягивать рекомбинантный каталитический домен ММП-2 (ММП-2cat) или Pro-ММП-2 и Pro-ММП-9 из раствора. В каждом эксперименте использовали антитела 6С6, 13Е11 и 13Е15. ФИГ.3А - ММП-2cat (2 мкг) инкубировали с IgG антимыши - агарозой (контроль, дорожка 1) или моноклональным антителом против СоТСРР, ZnTCPP и Imisdp (10 мкг) - IgG антимыши - агарозой в течение 2 часов при 20°C, иммунопреципитаты (дорожки 2, 3, 5) центрифугировали и промывали три раза, отделяли на геле SDS/PAGE и визуализировали окрашиванием кумасси. ФИГ.3В - Pro-ММП-2, Pro-ММП-9 инкубировали с моноклональным антителами антимыши IgG - агарозой таким же порядком, что и в А. Иммунопреципитаты (дорожки 2, 4, 6 слева и 1, 3, 5 справа) и несвязанную фракцию (дорожки 1, 3, 5 слева и 2, 4, 6 справа) отделяли на геле SDS/PAGE и визуализировали окрашиванием кумасси. ФИГ.3С - кондиционированная среда клеток НТ1080, которые или прошли активацию АРМА (слева) или не проходили (справа), была иммуноосаждена с помощью моноклонального антитела против СоТСРР и проанализирована вестерн блоттингом с помощью антител, специфических против ММП-2.
ФИГ.4А-В - графики Лайнвивера-Берка ингибирования ММП-2 (А) и ММП-9 (В) с помощью моноклонального антитела против СоТСРР. Единицей скорости является мкмоль/с-1, и единицей субстрата является мкмоль-1. ФИГ.4А - концентрации моноклонального антитела составили: 6 (черные треугольники), 18 (черные квадраты), 24 (белые круги), and 0 мкмоль (белые квадраты). Концентрация ММП-2cat составила 200 нмоль. ФИГ.4В - Ингибирование полной длины ММП-9, активированной АРМА, концентрации моноклонального антитела составили 6 (белые квадраты), 12 (черные треугольники), 24 (белые квадраты) и 0 мкмоль (черные квадраты). Концентрация ММП-9 составила 20 нмоль. Модель ингибирования показывает, что моноклональное антитело против СоТСРР ведет себя как конкурентный ингибитор ММП-2 и ММП-9.
ФИГ.5 - график, показывающий ингибирование ММП-2 и ММП-9 с помощью моноклонального антитела против Imisdp. Каталитический домен ММП-9 (20 нмоль) (черные круги) или полная длина ММП-2, активированной АРМА (черные треугольники, 5 нмоль), был добавлен в смеси флуорогенного субстрата OCAcPLGLA2pr(Dnp)-AR-NH2 (10 мкмоль) в буферном растворе R, содержащем увеличивающиеся концентрации моноклонального антитела. Линии представляют выравнивания по методу наименьших квадратов к уравнению:
vi/vo=(Km+[S])/(Km(1+[I]/Ki)+[S]), используя программу Origin.
На ФИГ.6А показаны спектры К-края активных и ингибированных моноклональным антителом против СоТСРР форм ММП-2cat для цинка. Показаны нормализованные необработанные данные XAS по области K-края цинка для активного (точки) и комплекса ММП-2cat - моноклональное антитело (сплошная линия).
На ФИГ.6В показано краевое положение, в котором комплекс (сплошная линия) ММП-2cat - моноклональное антитело сдвигается в сторону более высокой энергии по отношению к активной ММП-2cat (точки).
На ФИГ.6С показаны результаты EXAFS для активной (черный) и ингибированной (зеленый) форм ММП-2cat. Эти результаты представлены в R-пространстве и трансформированы обратно в k-пространство.
ФИГ.7А-В - фотографии, показывающие способность моноклонального антитела против СоТСРР ингибировать активность гелатиназы на поверхности клетки. Представительные флуоресцентные микрофотографии клеток НТ1080, нанесенных на покровные стекла, покрытые DQ-желатином в присутствии или отсутствии 1 мкмоль моноклонального антитела 13Е11. Гелатинолитическую активность поверхности клетки оценивали как меру флуоресценции, испускаемой разлагаемым желатином. Необработанные клетки проявляли значительную активность гелатиназы на поверхности клетки, которая была значительно ингибирована в присутствии 1 мкмоль моноклонального антитела против СоТСРР. Окрашивание 4'-6-диамидино-2-фенилиндолом (DAPI), синего цвета, указывает местонахождение ядер клеток.
ФИГ.8 - схема, показывающая конфигурацию различных активных сайтов ММП (SI-карман).
ФИГ.9 - схема синтеза Imisdp.
На ФИГ.10 показаны аминокислотные последовательности антител настоящего изобретения с выделенными участками CDR.
ФИГ.11A-D - фотографии и модели, показывающие, что 6С6 связывает только активную конформацию ММП9 и ММП2.
ФИГ.11А: Детектирование активной ММП9, которая очищена вместе с 6С6 от асцитной жидкости мышей. Моноклональное антитело (10 мкг), очищенное от асцитной жидкости мышей, содержащей ММП9, было подвергнуто вестерн блоттингу (ВБ) с использованием коммерческого антитела к ММП9. Несвязанное моноклональное антитело IgG, которое было очищено таким же образом, служило в качестве отрицательного контроля (контроль моноклонального антитела). Человеческая Про-ММП9, очищенная от трансформированных клеток Hilla, служила в качестве маркера молекулярной массы для распознания активных видов. Очистку выполнили аффинной хроматографией с использованием гранул белка G, которые связывали моноклональное антитело через его постоянный домен, оставляя сайт связывания антигена свободным для взаимодействия с антигеном.
ФИГ.11В,С: 6С6 моноклональное антитело, иммобилизированное к гранулам белка А, анализировали на его способность вытягивать каталитический фрагмент ProММП2, ProММП9 или ММП2 (в отсутствии гемопексина и продоменов) из раствора. MAbs 6С6 (10 мкг), иммобилизированное к гранулам сефарозы белка А, инкубировали с каталитическим фрагментом ММП2 (1 мкг) - ФИГ.11В, ProММП9 - ФИГ.11С верх или ProММП2 (2 мкг) ФИГ.11C низ, в течение 2 часов при 20°C. Связанный гранулами комплекс моноклонального антитела отделили центрифугированием и промыли три раза, отделили на геле SDS/PAGE и визуализировали окрашиванием кумасси. Иммунопреципитаты (6С6) и несвязанные фракции отделили на геле SDS/PAGE и визуализировали окрашиванием кумасси. В качестве отрицательного контроля для неспецифического поглощения фермент инкубировали с гранулами сефарозы белка А.
ФИГ.11D: Трехмерная структура ММП2 без домена гемопексина с про доменом (внизу) и без продомена (вверху) показана в поверхностном представлении (PDB ID: 1CK7). Каталитический и фибронектиновый домены показаны цианом, и пропептид показан красным. Ион каталитического цинка показан как оранжевая сфера; он связан с тремя консервативными гистидинами, показанными как желтые стержни. Как показано, пропептидный домен стерильно блокирует активный сайт.
ФИГ.12А-В - графики и данные, относящиеся к механизму ингибирования ММП-9 с помощью моноклонального антитела 6С6.
ФИГ.12А: рекомбинантный каталитический фрагмент ММП-9 (без гемопексина и продомена) инкубировали с разными количествами моноклонального антитела. Остаточную ферментную активность измеряли после добавления флуорогенного пептидного субстрата (10 мкмоль). Ki оценивали путем подбора к уравнению конкурентного ингибирования (vi/vo=Km+[S]/(Km(1+I/Ki)+[S]) Km=9,14±0,8) (Вставка). Активную ММП-9 (при фиксированной концентрации 2 нмоль) предварительно инкубировали в течение 60 минут при 37°C в отсутствии (•) или присутствии 0,7 (■) или 2 мкмоль (О) моноклонального антитела в 100 ммоль NaCl, 10 ммоль CaCl2, 100 ммоль Трис рН 7,5. Затем добавили флуорогенный пептидный субстрат (Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2) для получения конечных концентраций (S) в диапазоне 0-30 мкмоль, и начальную скорость гидролиза субстрата определяли путем измерения возрастающей флуоресценции. Значения видимых Km и Vmax были получены путем подбора экспериментальных данных к уравнению Микаэлиса-Ментена. Полученные значения использовали для реконструирования двойной обратной кривой Линвивера-Берка, где точки пересечения показывают конкурентное ингибирование ММП-9 с помощью 6С6.
ФИГ.12В: Разные ММП были предварительно инкубированы с изменяющимися количествами моноклонального антитела. Остаточную ферментную активность измеряли после добавления флуорогенного пептидного субстрата (10 мкмоль). Ki оценивали путем подбора к уравнению конкурентного ингибирования (vi/vo=Km+[S]/(Km(1+I/Ki)+[S]) Km=2.46±0,34 для полной длины ММП2, очищенной от клеток Hila, Km=16±1 для каталитического домена МТ1-ММП). Эффективное ингибирование 6С6 также детектировали с использованием полной длины ММП-2 и ММП-9 (данные не показаны).
ФИГ.13 - структурное наложение разных ММП, показывающее общую консервативную топологию активного сайта с изменениями, главным образом, в периферийных петлях. ММП9 (PDB 1GKC) - циан, ММП2 (PDB 1QIB) - ярко-красный, МТ1-ММП (PDB 1BUV) - оранжевый, ММП7 (PDB 1MMQ) - красный, ТАСЕ (PDB 2147) - желтый. Консервативные гистидины показаны как стержни, ион каталитического цинка - как оранжевый шар. Заметно, что общая топография периферийных петель ММП-2 и ММП-9 сходна. Это может объяснить селективность 6С6 к ММП-2 и ММП-9 в испытанной группе ферментов.
ФИГ.14А-С - флуоресцентные микрофотографии, иллюстрирующие, что 6С6 ингибирует активность гелатиназы на поверхности клеток. Представительные флуоресцентные микрофотографии (генерируемые прямым зимографическим анализом) клеток НТ1080, помещенных на покровные стекла, покрытые DQ-желатином, в отсутствии (ФИГ.14А) или присутствии (ФИГ.14В) 5 мкмоль моноклинального антитела или 15 мкмоль SB-3CT основанным на механизме наномолярным ингибитором гелатиназ (ФИГ.14С). Активность гелатиназы на поверхности клеток анализировали как меру флуоресценции, испускаемой разлагающимся желатином. Необработанные клетки показывали значительную активность гелатиназы на поверхности (зеленый цвет), которая значительно ингибировалась в присутствии моноклонального антитела.
ФИГ.15А-С - графики, иллюстрирующие воздействие 6С6-обработки на различные проявления острого колита, вызванного DSS, у мышей C57BL/6. Заболевание индуцировали 2%-м DSS в течение 5 суток. Лечение 6С6 в количестве 1,5 мг/мышь, назначали в виде ежедневной внутрибрюшинной инъекции, начиная с дня 0. ФИГ.15А: Клинический показатель оценивали путем ежедневного мониторинга DAI (т.е., объединенного показателя массы тела, ректального кровотечения и консистенции стула, по шкале от 0 до 4). Данные выражены как распределение точек среднего значения для каждого животного по дням 6-10. ФИГ.15В: Длина ободочной кишки. ФИГ.15С: Смертность. Представленные данные являются объединенными результатами из двух экспериментов, при 15 мышах в группе.*, значительный эффект по сравнению с мышами с колитом, не получавшими лечения (p<0,05).
ФИГ.16 - график результатов рентгеновской абсорбционной спектроскопии на К-крае цинка для активной ММП9 (черный) и ингибированного комплекса ММП9-6С6 (красный). Результаты представлены в форме радиального распределения от иона цинка. Краевое положение комплекса (красный) каталитического домена ММП-9 - моноклональное антитело сдвигается в сторону более высокой энергии по отношению к активной ММП-9 (вставка), указывая на связывание с ионом каталитического цинка. Структурный анализ данных рентгеновской спектроскопии показывает, что 6С6 прямо связывает ион цинка и формирует пятикоординатный комплекс цинка-белка. Заметно, что этот режим связывания аналогичен связыванию ТИМП в активном сайте ММП.
ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ
Настоящее изобретение относится к антителам и их фрагментам, которые можно использовать для ингибирования активности металлопротеинов. Специфически, антитела настоящего изобретения можно использовать для лечения заболеваний, связанных с несбалансированной активностью матриксной металлопротеазы, таких как рассеянный склероз, аутоиммунных заболеваний и метастатических раков.
Принципы и действие настоящего изобретения могут быть лучше поняты со ссылками на чертежи и соответствующие описания.
Перед тем, как подробно объяснить по меньшей мере один вариант осуществления, необходимо сказать, что изобретение не ограничено в применении подробностями, изложенными в последующем описании или Примерах. Изобретение может быть осуществлено на практике в других вариантах. Также необходимо понимать, что примененная здесь фразеология и терминология предназначена для целей описания и не должна рассматриваться как ограничивающая.
Матриксные металлопротеазы участвуют в многих биологических процессах, от разрастания и дифференциации клеток и ремоделирования внеклеточного матрикса (ВКМ) до васкуляризации и миграции клеток. Эти процессы требуют точного баланса между функциями матриксных металлопротеаз (ММП) и их природными тканевыми ингибиторами (ТИМП). Утрата этого баланса является признаком многочисленных патологических состояний, включая метастатические опухоли, невродегенеративные заболевания и остеоартрит.
Известны многие ингибиторы ММП, включая малые пептидные ингибиторы, такие как гидроксомат, немикробные тетрациклины и моноклональные антитела. Хотя первый ограничен высокой стоимостью производства, высокой скоростью распада, низкой оральной доступностью и отсутствием специфичности, ни один из последних не продемонстрировал терапевтическую эффективность in vivo.
Авторы настоящего изобретения ранее выявили, что антитела, которые распознают электронные и структурные детерминанты каталитического сайта металлоферментов, могут быть использованы в качестве их мощных ингибиторов. Использование гаптенов, имитирующих связанный с металлом каталитический сайт металлоферментов, в качестве иммуногенов позволило создать высоко эффективные терапевтические антитела, которые можно использовать для лечения клинических состояний, характеризующихся повышенной активностью металлопротеинов (см. WO2004/087042 авторов настоящего изобретения).
При осуществлении настоящего изобретения на практике авторы разработали новое гаптеновое соединение, которое достаточно точно имитирует локальную структуру и конформацию реактивного сайта цинка в ММП. Это соединение, [2-(2-миноэтилкарбомоил)-этоксиметил]-трис-[2-(N-(3-имидазол-1-ил-пропил))этоксиметил]метан, сокращенно Imisdp (см. ФИГ.1), может имитировать 4-координатную геометрию и силовое поле, сходное с индуцируемым ионом цинка на скоординированной трехгистидинной матрице и воде. Почти четырехугольная конформация сформирована тремя имидазольными основаниями и молекулой воды в качестве четвертого лиганда. На ФИГ.2А показано наложение сконструированной трехмерной модели соединения Imisdp на каталитический сайт ММП-9 (PDB 1GKC), который был модифицирован для того, чтобы представлять четырехугольную геометрию лигандов цинка. Модификации включают замену лиганда, присутствующего в рентгеновской структуре (гидроксаматный ингибитор), молекулой воды и оптимизацию полного фермента до локального минимума многослойным подходом QM/MM (см. материалы и способы). Существует высокое подобие между вычисленным расположением гистидинного цинка в ММП-9 и Imisdp в смысле расстояний ε-азота гистидинов от иона цинка (2,04+0,06 и 2,02, соответственно) и относительной ориентацией трех гистидинов по отношению к металлу.
Как проиллюстрировано ниже в описании и Примерах, авторы настоящего изобретения иммунизировали мышей препаратом Imisdp и провели их скрининг на антитело к ММП, перекрестно реагирующее с ММП-2 и ММП-9. Это антитело было названо 6С6 (см. ФИГ.10 и Примеры 1-2). Было выявлено, что 6С6 связывает ММП-2/9 и конкурентно ингибирует активность ММП-9, ММП-2 (Ki-диапазон 1 мкмоль - 5 мкмоль) и МТ1-ММП (Ki 15 мкмоль, см. таблицу 4 ниже). Связывание и ингибирование ММП-9 и ММП-2 было продемонстрировано in vitro и in situ с помощью биохимических и биофизических средств (см. Примеры 4-7 и 9). Что важно, 6С6 связывает только активированную форму ММП-9 и ММП-2 (см. Пример 3 и Пример 8). В этой форме фермента отсутствует продомен, который защищает комплекс каталитического цинка, находящегося в части фермента. Авторы показали, что антитела, созданные по настоящему способу, способны соединяться in vivo с ММП-9 (ФИГ.11А). Кроме того, авторы показали, что антитела настоящего изобретения имеют терапевтический потенциал для лечения воспалительного заболевания кишечника (Пример 10).
Эти данные поддерживают использование Imisdp в качестве важного реагента (платформы) для производства ингибиторов металлопротеинов, а также 6С6 и производных пептидов и пептидоимитаторов в качестве ценного терапевтического средства.
Эти результаты демонстрируют потенциал использования этих антител как платформы для разработки селективных пептидных ингибиторов для отдельных ММП посредством отображения бактериофагов и точечных мутаций моноклональных антител или их фрагментов.
Так, согласно одному аспекту настоящего изобретения предложено соединение, имеющее общую формулу (I):
где:
m и n являются независимо целыми числами от 1 до 6;
X1-Х3 и Y1-Y3 являются независимо О или S;
R1-R3 независимо выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила и циклоалкила; и R-(CH2)x-C(=O)NR'-(CH2)y-NR'R"
поскольку:
x и y являются независимо целыми числами от 1 до 6; и
R и R" независимо выбирают из группы состоящей из водорода, алкила и циклоалкила.
Согласно предпочтительному варианту осуществления этого аспекта настоящего изобретения, этим соединением является [2-(2-миноэтилкарбомоил)-этоксиметил]-трис-[2-(N-(3-имидазол-1-ил-пропил))-этоксиметил] метан, названное, Imisdp, которое имеет общую формулу (II):
где R=-CH2-C(=O)NH-CH2-CH2-NH2
Синтез Imisdp описан в Примере 7.
Поскольку Imisdp имитирует локальную структуру и переходную конформацию реактивного сайта цинка в ММП-9 и ММП-2, его можно использовать для производства ингибиторов металлопротеинов.
Так, согласно одному аспекту настоящего изобретения предложен способ производства ингибитора металлопротеинов.
Способ осуществляют путем создания антител или фрагментов антител, направленных на вышеописанное соединение (т.е., Imisdp). Смотрите Примеры 1-2, а также раздел "Материалы и способы" в разделе «Примеры».
Термин "металлопротеин" настоящего изобретения относится к метало-связанному белку, в котором сайт связи с металлом образует часть каталитического домена фермента, который электронно и структурно напоминает таковой у Imisdp.
Металлопротеин данного аспекта настоящего изобретения предпочтительно является металлопротеазой - ММП (например, гелатиназой, такой как ММП-2 и ММП-9).
Будет понятно, что все члены семейства ММП воспринимаются как латентные ферменты, которые после активации преобразуются в активные ферменты, у которых ион металла в активном сайте доступен для связи с субстратом. Например, для объяснения активации ММП in vitro ранее была предложена «модель перехода цистеина». Модель перехода цистеина предполагает, что после активации сайт образования связи с латентным цинком преобразуется в сайт образования связи с каталитическим цинком путем диссоциации тиолового пропептида с (Cys) от атома цинка. Расщепление этого пропептида приводит к разрушению продоменной структуры фермента, и утрате защиты ионом каталитического цинка. Следовательно, ион металла и карман активного сайта доступны для связи с субстратом и гидролиза [Ван Варт и Биркедаль-Хансен (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 5578-5582].
Антитела и фрагменты антител, созданные по настоящему изобретению, служат в качестве мощных ингибиторов ММП из-за их способности связывать ион металла и координирующие аминокислоты в сайте каталитического цинка, этим специфически ингибируя активную конформацию этих ферментов, которые непосредственно вовлечены в вышеуказанные патологические процессы.
Используемый здесь термин «антитело» относится к интактной молекуле антитела, и фраза «фрагмент антитела» относится к ее функциональному фрагменту, такому как Fab, F(ab')2 и Fv, которые способны устанавливать связь с макрофагами. Эти функциональные фрагменты антител имеют следующие определения: (i) Fab, фрагмент, который содержит моновалентный фрагмент молекулы антитела, устанавливающий связь с антигеном, может быть получен путем переваривания всего антитела с ферментом папаином для получения интактной легкой цепи и части одной тяжелой цепи; (ii) Fab', фрагмент молекулы антитела, который может быть получен путем обработки всего антитела пепсином с последующим восстановлением для получения интактной легкой цепи и части тяжелой цепи; два фрагмента Fab' могут быть получены из молекулы антитела; (iii) (Fab')2, фрагмент антитела, который может быть получен путем обработки всего антитела ферментом пепсином без последующего восстановления; F(ab')2 является димером двух фрагментов Fab', удерживаемых вместе двумя дисульфидными связями; (iv) Fv, определенный как полученный генной инженерией фрагмент, содержащий переменную область легкой цепи и переменную область тяжелой цепи, выраженных как две цепи; (v) однонитевое антитело («SCA»), молекула, полученная генной инженерией, содержащая переменную область легкой цепи и переменную область тяжелой цепи, связанных подходящим полипептидным линкером как генетически сплавленная молекула с одной цепью; и (vi) пептидное кодирование для одной определяющей комплементарность области (CDR).
Хорошо известны способы создания антител (т.е., моноклональных и поликлональных). Антитела могут быть созданы любым из известных способов, в которых может быть применена индукция для производства молекул антител in vivo, скринингом иммуноглобулиновых библиотек или панелей высоко специфических связывающих реагентов [Орланди Д.Р. и др. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. 86:3833-3837, Винтер Г. и др. (1991) Nature 349:293-299] или создания молекул моноклональных антител непрерывными линиями клеток в культуре. Они включают без ограничения способ гибридомы, способ гибридомы человеческих В-клеток и способ гибридомы Эпштейн-Бар вируса (EBV) [Колер Г., и др. (1975) Nature 256:495-497, Козбор Д., и др. (1985) J. Immunol. Methods 81:31-42, Коут Р.Дж. и др. (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. 80:2026-2030, Коул С.П. и др. (1984) Mol. Cell. Biol. 62:109-120].
В тех случаях, когда соединения настоящего изобретения слишком малы для того, чтобы вызвать сильную иммуногенную реакцию, такие антигены (гаптены) могут быть соединены с антигенно-нейтральными носителями, такими как носители моллюскового гемоцианина (KLH) или сывороточного альбумина (например, бычьего сывороточного альбумина (БСА)) (см. патенты США 5,189,178 и 5,239,078 и Пример 2). Соединение с носителем может быть осуществлено с использованием хорошо известных способов. Например, может быть осуществлена прямая связь с аминогруппами после чего, по желанию, может быть выполнено восстановление образовавшейся иминосвязи. Как вариант, носитель может быть соединен с использованием конденсирующих агентов, таких как дификлогексилкарбодиимид или других веществ, дегидрирующих карбодиимид. Для осуществления связи также могут быть использованы линкерные соединения; гомобифункциональные и генеробифункциональные линкеры предлагает компания Pierce Chemical Company, Рокфорд, штат Иллинойс. Полученный иммуногенный комплекс затем может быть введен подходящим млекопитающим, таким как мыши, кролики и т.п. Подходящие протоколы включают повторную инъекцию иммуногена в присутствии адьювантов по графику, который ускоряет производство антител в сыворотке. Титры иммунной сыворотки можно легко измерить путем хорошо известных процедур иммунологического анализа.
Полученные антисыворотки можно использовать непосредственно, или можно получить моноклональные антитела, как сказано выше.
Фрагменты антител могут быть получены хорошо известными способами. (Смотрите, например, Харлоу и Лейн, «Антитела: Лабораторный справочник», Cold Spring Harbor Laboratory, Нью-Йорк, 1988, включенный в настоящий документ путем ссылки). Например, фрагменты антител согласно настоящему изобретению могут быть приготовлены путем протеолитического гидролиза антитела или путем экспрессии в Е.coli или клетках млекопитающих (например, в культуре клеток яичника китайского хомячка или в других системах экспрессии белков) ДНК, кодирующей фрагмент.
Как вариант, фрагменты антител могут быть получены путем переваривания целых антител пепсином или папаином известными способами. Например, фрагменты антител могут быть произведены ферментативным расщеплением антител с пепсином для получения фрагмента 5S, обозначаемого F(ab')2. Этот фрагмент может быть далее расщеплен с использованием тиолового восстанавливающего агента и, по желанию, блокирующей группы для сульфогидрильных групп, получаемых при расщеплении дисульфидных связей, для получения моновалентных фрагментов 3.5S Fab'. Как вариант, ферментативное расщепление с использованием пепсина дает два моновалентных фрагмента Fab' и фрагмент Fc. Эти способы описаны, например, Гольденбергом, в патентах США 4,036,945 и 4,331,647 и в указанных в них справочных материалах, причем эти патенты включены в настоящий документ в полном объеме путем ссылки. Смотрите также Портер P.P., Biochem. J., 73:119-126, 1959. Также могут быть использованы другие способы расщепления антител, такие как отделение тяжелых цепей для формирования моновалентных фрагментов легких-тяжелых цепей, дальнейшее расщепление фрагментов, или другие ферментные, химические или генетические способы, в которых фрагменты образуют связи с антигеном, который распознается интактным антителом.
Фрагменты Fv содержат связь цепей VH и VL. Эта связь может быть нековалентной, как описано Инбаром и др., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 69:2659-25 62, 1972. Как вариант, переменные цепи могут быть связаны межмолекулярной дисульфидной связью или сшиты химическими веществами, такими как глутаральдегид. Предпочтительно, фрагменты Fv содержат цепи VH и VL, соединенные пептидным линкером. Эти белки (sFv) с одной цепью, устанавливающие связь с антигеном, готовят путем конструирования структурного гена, содержащего последовательности ДНК, кодирующие домены VH и VL, соединенные олигонуклеотидом. Этот структурный ген вводят в вектор экспрессии, который после этого вводят в клетку-хозяин, например Е.coli. Рекомбинантные клетки-хозяева синтезируют одну полипептидную цепь с пептидом-линкером, связывающим два домена V. Способы производства sFv описаны, например, Уитлоу и Филпулой, Methods, 2:97-105, 1991; Бердом и др., Science 242:423-426, 1988; Пэком и др., Bio/Technology 11:1271-77, 1993; Ладнером и др., патент США 4,946,778.
Пептиды CDR («минимальные единицы распознавания») могут быть получены путем конструирования генов, кодирующих CDR соответствующего антитела. Такие гены готовят, например, путем цепной реакции полимеразы для синтеза переменной области из РНК клеток, производящих антитела. Смотрите, например, Лэррик и Фрай, «Методы», 2:106-10, 1991.
Будет понятно, что для лечения или диагностики людей предпочтительно использовать гуманизированные антитела. Гуманизированные формы нечеловеческих (например, мышиных) антител являются химерные молекулы иммуноглобулинов, их иммуноглобулиновые цепи или фрагменты (такие как Fv, Fab, Fab', F(ab')2 или другие последовательности антител, создающие связи с антигенами), которые содержат минимальную последовательность, полученную из нечеловеческого иммуноглобулина. Гуманизированные антитела включают человеческие иммуноглобулины (антитело-получатель), в котором остатки, образующие комплементарную определяющую область (CDR) получателя заменяются остатками от CDR нечеловеческих видов (донорное антитело), таких как мыши, крысы или кролики, имеющими желательную специфичность, сродство и способность. В некоторых случаях, остатки каркаса Fv человеческого иммуноглобулина заменяются соответствующими нечеловеческими остатками. Гуманизированные антитела также могут содержать остатки, которые не содержатся ни в антителе-получателе, ни в импортированных последовательностях CDR или каркаса. Гуманизированное антитело обычно будет содержать в сущности все по меньшей мере одного и типично двух переменных доменов, в которых все или в сущности все области CDR соответствуют таковым в нечеловеческом иммуноглобулине, и все или в сущности все области FR являются таковыми из консенсусной последовательности человеческого иммуноглобулина. Оптимально, гуманизированное антитело также будет включать по меньшей мере часть иммуноглобулиновой постоянной области (Fc), обычно таковую из человеческого иммуноглобулина [Джоунс и др., Nature, 321:522-525 (1986); Рихманн и др., Nature, 332:323-329 (1988); Преста, Curr. Op.Struct. Biol., 2:593-596 (1992)].
Способы гуманизации нечеловеческих антител хорошо известны. Гуманизированное антитело обычно имеет один или несколько аминокислотных остатков, введенных в него из источника, который не является человеком. Эти нечеловеческие аминокислотные остатки часто называют импортными остатками, которые обычно берут из импортного переменного домена. Гуманизация может быть в основном выполнена по способу Винтера и его коллег [Джоунси др., Nature, 321:522-525 (1986); Рихманн и др., Nature 332:323-327 (1988); Верхоуйен и др., Science, 239:1534-1536 (1988)] путем подстановки CDR грызунов или последовательностей CDR вместо соответствующих последовательностей человеческого антитела. Соответственно, такие гуманизированные антитела являются химерными антителами (патент США 4,816,567), в которых значительно меньший чем интактный человеческий переменный домен заменен соответствующей последовательностью из нечеловеческих видов. На практике гуманизированными антителами обычно являются человеческие антитела, в которых некоторые остатки CDR и возможно некоторые остатки FR заменены остатками из аналогичных сайтов антител грызунов.
Человеческие антитела также могут быть произведены различными известными способами, включая библиотеки фагов [Хоогенбоом и Винтер, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Маркс и др., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]. Способы Коула и др., Бернера и др. также могут использоваться для подготовки человеческих моноклональных антител (Коул и др., «Моноклональные антитела и раковая терапия», Alan R. Liss, p.77 (1985) и Бернер и др., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]. Подобно этому, человеческие антитела могут быть изготовлены путем введения локусов человеческого иммуноглобулина в трансгенных животных, например, мышей, у которых эндогенные иммуноглобулиновые гены были частично или полностью деактивированы. После замены можно наблюдать производство человеческого антитела, которое очень напоминает во всех отношениях то, что происходит у человека, включая реаранжировку генов, сборку и спектр антител. Этот подход описан, например, в патентах США 5,545,807; 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016 и в следующих научных публикациях: Маркс и др., Bio/Technology 10, 779-783 (1992); Лонберг и др., Nature 368 856-859 (1994); Моррисон, Nature 368 812-13 (1994); Фишвайлд и др., Nature Biotechnology 14, 845-51 (1996); Нойбергер, Nature Biotechnology 14, 826 (1996); Лонберг и Хусцар, Intern. Rev. Immunol. 13 65-93 (1995).
После получения антител они могут быть испытаны на ингибирующую металлопротеины активность. Соответствующие условия описаны у Найта и др., FEBS Letters 296(3):263-266(1992), Коустона и др., Anal. Biochem, 99:340-345 (1979), Коустона и др., Methods in Enzymology 80:771 et seq. (1981); Коустона и др., Biochem. J., 195:159-165 (1981), Вайнгартена и др., Biochem. Biophys. Res. Comm., 139:1184-1187 (1984) и в патентах США 4,743,587 и 5,240,958.
Как было сказано, используя вышеуказанную методологию, авторы настоящего изобретения смогли произвести антитело-ингибитор матриксной металлопротеазы (ММП) для ММП-2 и ММП-9, названное 6С6, последовательность которой представлена в SEQ ID NO:1. Последовательности CDR представлены в SEQ ID NO.7, 8, 9, 10, 11 и 12.
Так, настоящее изобретение предусматривает любую (поли)пептидную последовательность, которая содержит по меньшей мере одну из вышеуказанных последовательностей CDR, а также ее гомологи и фрагменты при сохранении ее ингибирующей металлопротеины активности (специфическое ингибирование каталитической активности металлопротеина). Примером такого полипептида является антитело (см. выше).
Используемый здесь термин «полипептид» включает в себя природные пептиды (продукты разложения, синтезированные пептиды или рекомбинантные пептиды) и пептидоимитаторы (обычно синтезированные пептиды),а также пептоиды и полупептоиды, которые являются аналогами пептидов, которые могут иметь, например, модификации, делающие пептиды более стабильными в организме или более способными проникать в клетки. Такие модификации включают без ограничения модификацию N-конца, модификацию С-конца, модификацию пептидной связи, включая без ограничения модификации остовов CH2-NH, CH2-S, CH2-S=O, O=C-NH, CH2-O, СН2-СН2, S=C-NH, CH=CH или CF=CH и модификацию остатков. Способы подготовки пептидоимитирующих соединений хорошо известны и определены, например, в публикации «Количественная разработка лекарств», К.А.Рамсден Гд., Chapter 17.2, F. Choplin Pergamon Press (1992), которая включена в настоящий документ в полном объеме путем ссылки. Дальнейшие подробности в этом отношении приведены ниже.
Пептидные связи (-CO-NH-) в пептиде могут быть заменены, например, N-метилированными связями (-N(CH3)-CO-), эфирными связями (-C(R)H-C-O-O-C(R)-N-), кетометиленовыми связями (-СО-СН2-), алкило-азотными связями (-NH-N(R)-CO-), где R является любым алкилом, например, метилом, углеродными связями (-CH2-NH-), гидроксиэтиленовыми связями (-СН(ОН)-СН2-), тиоамидными связями (-CS-NH-), олефиновьми двойными связями (-СН=СН-), ретроамидными связями (-NH-CO-), пептидными производными (-N(R)-CH2-CO-), где R является «нормальной» боковой цепью, естественно представленной на атоме углерода.
Эти модификации могут происходить на любой из связей вдоль пептидной цепи и даже на нескольких (2-3) одновременно.
Природные ароматические аминокислоты, Trp, Tyr и Phe, могут быть заменены на синтетическую неприродную кислоту, такую как фенилглицин, тик, нафтилаланин (нал), фенилизосерин, треонинол, производными Phe с кольцевым метилированием, галогенированными производными Phe или о-метил-Tyr.
В дополнение, пептиды настоящего изобретения могут также включать одну или несколько модифицированных аминокислот или один или несколько неаминокислотных мономеров (например, жирные кислоты, комплексные углеводы и т.д.).
Используемый в настоящем описании и в формуле изобретения термин «аминокислота» или «аминокислоты» включает в себя встречающиеся в природе аминокислоты; аминокислоты, часто модифицируемые после трансляции in vivo, включая, например, гидроксипролин, фосфосерин и фосфотреонин; и другие необычные аминокислоты, включая без ограничения 2-аминоадипиновую кислоту, гидроксилизин, изодесмозин, норвалин, норлейцин и орнитин. Кроме того, термин «аминокислота» включает D- и L-аминокислоты.
В таблицах 1 и 2 ниже перечислены встречающиеся в природе аминокислоты (таблица 1) и нетрадиционные или модифицированные аминокислоты (например, синтетические, таблица 2), которые могут использоваться с настоящим изобретением.
Таблица 1 | ||
Аминокислота | Трехбуквенное сокращение | Однобуквенный символ |
Аланин | Ala | A |
Аргинин | Arg | R |
Аспарагин | Asn | N |
Аспарагиновая кислота | Asp | D |
Цистеин | Cys | С |
Глутамин | Gln | Q |
Глутаминовая кислота | Glu | E |
Глицин | Gly | G |
Гистидин | His | H |
Изолейцин | Ile | I |
Лейцин | Leu | L |
Лизин | Lys | К |
Метионин | Met | M |
Фенилаланин | Phe | F |
Пролин | Pro | P |
Серин | Ser | S |
Треонин | Thr | Т |
Триптофан | Trp | w |
Тирозин | Tyr | Y |
Валин | Val | V |
Любая аминокислота из вышеуказанных | Xaa | X |
Таблица 2 | |||
Нетрадиционная амино- | Код | Нетрадиционная амино- | Код |
α-аминомасляная кислота | Abu | L-N-метилаланин | Nmala |
α-амино-а-метилбутират | Vlgabu | L-N-метиларгинин | Nmarg |
иминоциклопропан- | Cpro | L-N-метиласпарагин | Nmasn |
карбоксилат | L-N-метиласпарагиновая | Nfmasp | |
аминоизомасляная кислота | Aib | L-N-метилцистеин | Nmcys |
аминонорборнил- | Norb | L-N-метилглутамин | Nmgin |
карбоксилат | L-N-метилглутаминовая ки- | Nmglu | |
циклогексилаланин | Chexa | L-N-vtnbkubcnblby | Nmhis |
циклопентилаланин | Cpen | L-N-метилизолейцин | Nmile |
D-аланин | Dal | L-N-метиллейцин | Nmleu |
D-арганин | Darg | L-N-метиллизин | Nmlys |
D-аспарагиновая кислота | Dasp | L-N-метилметионин | Nmmet |
D-цистеин | Dcys | L-N-метилнорлейцин | Nmnle |
D-глутамин | Dgln | L-N-метилнорвалин | Nmnva |
D-глутаминовая кислота | Dglu | L-N-метилорнитин | Nmorn |
D-гистидин | Dhis | L-N-метилфенилаланин | Nmphe |
D-изолейцин | Dile | L-N-метилпролин | Nmpro |
D-лейцин | Dleu | L-N-метилсерин | Nmser |
D-лизин | Dlys | L-N-метилтреонин | Nmthr |
D-метионин | Dmet | L-N-метилтриптофан | Nmtr |
D-орнитин | Dorn | L-N-метилтирозин | Nmtyr |
D-фенилаланин | Dphe | L-N-метилвалин | Nmval |
D-пролин | Dpro | L-N-метилэтилглицин | Nmetg |
D-серин | Dser | L-N-метил-t-бутилглицин | Nmtbug |
D-треонин | Dthr | L-норлейцин | Nle |
D-триптофан | Dtrp | L-норвалин | Nva |
D-тирозин | Dtyr | α-метил-аминоизобутират | Maib |
D-валин | Dval | α-метил-γ-аминобутират | Mgabu |
D-α-метилаланин | Dmala | α-метилциклогексилаланин | Mchexa |
D-α-метиларгинин | Dmarg | α-метилциклопентилаланин | Mcpen |
D-α-метиласпарагин | Dmasn | α-метил-α-нафтилаланин | Manap |
D-α-метиласпартат | Dmasp | α-метилпеницилламин | Mpen |
D-α-метилцистеин | Dmcys | N-(4-аминобутил)глицин | Nglu |
D-α-метилглутамин | Dmgln | N-(2-аминоэтил)глицин | Naeg |
D-α-метилгистидин | Dmhis | N-(3-аминопропил)глицин | Norn |
D-α-метилизолейцин | Dmile | N-амино-α-метилбутират | Nmaabu |
D-α-метиллейцин | Dmleu | α-нафтилаланин | Anap |
D-α-метиллизин | Dmlys | N-бензилглицин | Nphe |
D-α-метилметионин | Dmmet | N-(2-карбамилэтил)глицин | Ngln |
D-α-метилорнитрин | Dmorn | N-(карбамилметил)глицин | Nasn |
D-α-метилфенилаланин | Dmphe | N-(2-карбоксиэтил)глицин | Nglu |
D-α-метилпролин | Dmpro | N-(карбоксиметил)глицин | Nasp |
D-α-метилсерин | Dmser | N-циклобутилглицин | Ncbut |
D-α-метилтреонин | Dmthr | N-циклогептилглицин | Nchep |
D-α-метилтриптофан | Dmtrp | N-циклогексилглицин | Nchex |
D-α-метилтирозин | Dmty | М-циклодецилглицин | Ncdec |
D-α-метилвалин | Dmval | N-циклододецилглицин | Ncdod |
D-α-метилаланин | Dnmala | N-циклооктилглицин | Ncoct |
D-α-метиларгинин | Dntnarg | N-циклопропилглицин | Ncpro |
D-α-метиласпарагин | Dnmasn | N-циклоундецилглицин | Ncund |
D-α-метиласпартат | Dnmasp | N-(2,2-дифенилэтил)глицин | Nbhm |
D-α-метилцистеин | Dnmcys | N-(3,3- | Nbhe |
D-N-метиллейцин | Dnmleu | N-(3-индолилэтил) глицин | Nhtrp |
D-N-метиллизин | Dnmlys | N-метил-γ-аминобутират | Nmgabu |
N-метилциклогексилаланин | Nmchexa | D-N-метилметионин | Dnmmet |
D-N-метилорнитин | Dnmorn | N-метилциклопентилаланин | Nmcpen |
N-метилглицин | Nala | D-N-метилфенилаланин | Dnmphe |
N-метиламиноизобутират | Nmaib | D-N-метилпролин | Dnmpro |
N-(1-метилпропил)глицин | Nile | D-N-метилсерин | Dnmser |
N-(2-метилпропил)глицин | Nile | D-N-метилсерин | Dnmser |
N-(2-метилпропил)глицин | Nleu | D-N-метилтреонин | Dnmthr |
D-N-метилтриптофан | Dnmtrp | N-(1-метилэтил)глицин | Nva |
D-N-метилтирозин | Dnmtyr | N-метила-нафтилаланин | Nmanap |
D-N-метилвалин | Dnmval | N-метилпеницилламин | Nmpen |
γ-аминомасляная кислота | Gabu | N-(p-гвдроксифенил)глицин | Nhtyr |
L-t-бутилглицин | Tbug | N-(тиометил)глицин | Ncys |
L-этилглицин | Etg | пеницилламин | Pen |
L-гомофенилаланин | Hphe | L-α-метилаланин | Mala |
L-α-метиларгинин | Marg | L-α-метиласпарагин | Masn |
L-α-метиласпаотат | MasD | L-α-метил-t-бугилглицин | Mtbue |
L-α-метилцистеин | Mcys | L-метилэтилглицин | Metg |
L-α-метилглутамин | Mgln | L-α-метилглутамат | Mglu |
L-α-метилгистидин | Mhis | L-α-метилгомофенилаланин | Mhphe |
L-α-метилизолейцин | Mile | N-(2-метилтиоэтил)глицин | Nmet |
D-N-метилглутамин | Dnmgln | N-(3- | Narg |
D-N-метилглутамат | Dnmglu | N-(1-гидроксиэтил)глицин | Nfhr |
D-N-метилгистидин | Dnmhis | N-(гидроксиэтил)глицин | Nser |
D-N-метилизолейцин | Dnmile | N-(имидазолилэтил)глицин | Nhis |
D-N-метиллейцин | Dnmleu | N-(3-индолилэтил)глицин | Nhtro |
D-N-метиллизин | Dnmlys | N-метил-γ-аминобутират | Nmgabu |
N-метилциклогексилаланин | Nmchexa | D-N-метилметионин | DNmmet |
D-N-метилорнитин | Dnmorn | N-метилциклопентилаланин | Nmcpen |
N-метилглицин | Nala | D-N-метилфенилаланин | DNmphe |
N-метиламиноизобутират | Nmaib | D-N-метилпролин | DNmpro |
N-(1-метилпропил)глицин | Nile | D-N-метилсерин | DNmser |
N-(2-метилпропил)глицин | Nleu | D-N-метилтреонин | Dnmthr |
D-N-метилтриптофан | Dnmtrp | N-(1-метилэтил)глицин | Nval |
D-N-метилтирозин | Dnmtyr | N-метила-нафтилаланин | Nmanap |
D-N-метилвалин | Dnmval | N-метилпеницилламин | Nmpen |
γ-аминомасляная кислота | Gabu | N-(p-гидроксифенил)глицин | Nhtyr |
L-t-бутилглицин | Tbug | N-(тиометил)глицин | Ncys |
L-этилглицин | Etg | пеницилламин | Pen |
L-гомофенилаланин | Hphe | L-α-метилаланин | Mala |
L-α-метиларгинин | Marg | L-α-метиласпарагин | Masn |
L-α-метиласпартат | Masp | L-a-метил-t-бутилглицин | Mtbug |
L-α-метилцистеин | Mcys | L-метилэтилглицин | Metg |
L-α-метилглутамин | Mgln | L-α-метилглутамат | Mglu |
L-α-метилгистидин | Mhis | L-α-метилгомофенилаланин | Mhphe |
L-α-метилизолейцин | Mile | N-(2-метилтиоэтил)глицин | Nmet |
L-α-метиллейцин | Mleu | L-α-метиллизин | Mlys |
L-α-метилметионин | Mmet | L-α-метилпоглейцин | Mnle |
L-α-металнорвалин | Mnva | L-α-метилорнитин | Morn |
L-α-метилфенилаланин | Mphe | L-α-метилпролин | Mpro |
L-α-метилсерин | mser | L-α-метилтреонин | Mthr |
L-α-метилвалин | Mtrp | L-α-метилтирозин | Mtyr |
L-a-метиллейцин | Mval | L-N-метилгомофенилаланин | Nmhphe |
N-(N-(2,2-дифенилэтил) | N-(N-(3,3-дифенилпропил) | ||
карбамилметил-глицин | Nnbhm | карбамилметил(1)глицин | Nnbhe |
1-carboxy-1-(2,2-дифенилэтиламино)циклопропен | Nmbc |
Пептиды с улучшенным сродством к соответствующей металлопротеазе или с усиленной биологической активностью могут быть созданы хорошо известными способами, включая отображение фагов и вычислительную биологию.
Пептиды настоящего изобретения могут быть синтезированы любыми способами, известными специалистам в области синтеза пептидов. Для синтеза твердофазных пептидов краткое описание многих способов можно найти в публикации: Стюарт, Дж. М. и Янг, Дж. Д. (1963), «Синтез твердофазных пептидов», W.H.Freeman Co. (Сан-Франциско); и Майенхофер, И. (1973). «Гормональные белки и пептиды», Т.2, стр.46, Academic Press (Нью-Йорк). Обзор классического синтеза в растворе смотрите в публикации: Шредер, Г. и Лупке, К. (1965). «Пептиды», Т.1, Academic Press (Нью-Йорк).
Рекомбинантные способы смотрите в справочных материалах, ниже.
Также рассматриваются последовательности нуклеиновых кислот, которые кодируют вышеописанные полипептидные последовательности (см. SEQ ID NO. 13, 14, 15,16,17 и 18).
Как сказано выше, одним конкретным видом использования антител настоящего изобретения является профилактика или лечение заболеваний, связанных с несбалансированной или аномальной активностью металлопротеинов, таких как металлопротеазы.
Примеры таких заболеваний включают без ограничения артриты, такие как остеоартрит (ОА), ревматоидный артрит (РА), спетический артрит, ревматизм мягких тканей, полихондрит и тендинит; метастатические опухоли, заболевания периодонта; изъязвление роговицы, вызванное, например, щелочью или другими ожогами, радиацией, витамином Е или ретиноидной недостаточностью; гломерулярные заболевания, такие как протеинурия, пузырчатый эпидермолиз; заболевания, связанные с резорбцией костей, такие как остеопороз, болезнь Педжета, гиперпаратироидизм и холестеатома; противозачаточные меры, препятствующие овуляции, или имплантация; ангиогенез, относящийся к росту опухоли или к неоваскуляризации, связанной с диабетической ретинопатией и дегенерацией желтого пятна; коронарный тромбоз, связанный с разрывом атеросклеротической бляшки; эмфизема легких, лечение ран и ВИЧ-инфекция.
Как проиллюстрировано в Примере 10, авторы настоящего изобретения показали, что антитела настоящего изобретения могут использоваться для лечения раздражения толстой кишки.
Воспалительные заболевания кишечника (ВЗК) являются серьезными нарушениями желудочно-кишечного тракта, характеризующимися воспалением кишечника и ремоделированием тканей, частота которых увеличивается и может привести к потере трудоспособности пациентов. Основные формы ВЗК, язвенный колит (ЯК) и болезнь Крона, являются хроническими возвратными состояниями, которые клинически характеризуются болями в животе, диареей, ректальным кровотечением и лихорадкой.
Так, согласно другому аспекту настоящего изобретения предложен способ ингибирования активности матриксной металлопротеазы у нуждающегося в этом объекта.
Предпочтительными индивидуальными объектами согласно настоящему изобретению являются животные, такие как млекопитающие (например, собаки, кошки, овцы, свиньи, лошади, коровы, приматы), предпочтительно, люди.
Способ включает предоставление объекту терапевтически эффективного количества ингибитора ММП настоящего изобретения (т.е., антитела или фрагментов антител, описанных выше).
Как более подробно сказано ниже, ингибитор ММП может быть предоставлен путем прямого введения (например, перорального или инъекцией) или может быть выражен из полинуклеотидной конструкции, доставляемой к целевым клеткам индивидуума.
Ингибиторы ММП настоящего изобретения могут быть предоставлены индивидууму как таковые или как часть фармацевтической композиции, в которой они смешаны с фармацевтически приемлемым носителем.
Используемый здесь термин «фармацевтическая композиция» относится к препарату из одного или нескольких активных ингредиентов, описанных здесь, с другими химическими компонентами, такими как физиологически подходящие носители и наполнители. Целью фармацевтической композиции является облегчение введения соединения в организм.
Используемый здесь термин «активный ингредиент» относится к препарату антитела, который отвечает за биологический эффект.
Используемые здесь фразы «физиологически приемлемый носитель» и «фармацевтически приемлемый носитель», которые могут использоваться одна вместо другой, относятся к носителю или разбавителю, который не вызывает значительного раздражения организма и не аннулирует биологическую активность и свойства вводимого соединения. В смысл этих фраз включен адъювант. Одним из ингредиентов, включаемых в фармацевтически приемлемый носитель, может быть, например, полиэтиленгликоль (ПЭГ), биосовместимый полимер с широким диапазоном растворимости в органических и водных средах (Муттер и др. (1979).
Используемый здесь термин «наполнитель» относится к инертному веществу, добавляемому в фармацевтическую композицию для дальнейшего облегчения введения активного ингредиента. Примеры, без ограничения, наполнителей включают карбонат кальция, фосфат кальция, различные сахара и крахмалы, производные целлюлозы, желатин, растительные масла и полиэтиленгликоли.
Приемы составления и введения лекарств можно найти в публикации «Фармацевтические науки Ремингтона», Mack Publishing Co., Истон, Пенсильвания, новейшее издание, которая включена в настоящий документ путем ссылки.
Подходящими путями введения могут быть, например, пероральный, ректальный, чрезслизистый, особенно трансназальный, кишечная или парэнтенальная доставка, включая внутримышечные, подкожные и интрамедуллярные инъекции, а также интратекальные, прямые интравентрикулярные, внутривенные, интраперитонеальные, интраназальные или интраокулярные инъекции.
Альтернативно, можно вводить препарат локально, а не системно, например, путем инъекции препарата непосредственно в конкретную область организма пациента.
Фармацевтические композиции настоящего изобретения могут быть изготовлены хорошо известными способами, например, посредством традиционного смешивания, растворения, гранулирования, изготовления драже, растирания в порошок, эмульгирования, инкапсулирования, захвата или лиофилизации.
Фармацевтические композиции для использования в соответствии с настоящим изобретением могут быть составлены традиционно с использованием одного или нескольких физиологически приемлемых носителей, содержащих наполнители и вспомогательные вещества, которые облегчают переработку активных ингредиентов в препараты, которые можно использовать в фармацевтических целях. Правильное составление зависит от выбранного пути введения.
Для инъекции активные ингредиенты изобретения могут быть приготовлены в водных растворах, предпочтительно в физиологически совместимых буферных растворах, таких как раствор Хэнка, раствор Рингера, или физиологический солевой раствор. Для чрезслизистого введения при составлении используются смачивающие реагенты, подходящие для прохождения через соответствующий барьер. Такие реагенты широко известны.
Для перорального введения соединения могут быть легко подготовлены путем объединения активных соединений с фармацевтически приемлемыми носителями, хорошо известными в этой области. Такие носители позволяют изготавливать соединения изобретения в форме таблеток, пилюль, драже, капсул, жидкостей, гелей, сиропов, кашиц, суспензий и т.д. для перорального использования пациентом. Фармацевтические препараты для перорального приема могут быть изготовлены с использованием твердого наполнителя, по выбору размалывания полученной смеси и обработки смеси гранул после добавления подходящих вспомогательных веществ, если они желательны, для получения таблеток или оболочек драже. Подходящими наполнителями в частности являются сахара, включая лактозу, сахарозу, маннитол или сорбитол; целлюлозные препараты, например, кукурузный крахмал, пшеничный крахмал, рисовый крахмал, картофельный крахмал, желатин, трагакантовая камедь, метилцеллюлоза, гидрокси-пропилметилцеллюлоза, натрийкарбоксиметилцеллюлоза; и/или физиологически приемлемые полимеры, такие как поливинилпирролидон (ПВП). По желанию, могут быть добавлены разрушающие вещества, такие как сшитый поливинилпирролидон, агар или альгиновая кислота или ее соль, например альгинат натрия.
Оболочки драже снабжают подходящими покрытиями. Для этой цели можно использовать концентрированные сахарные растворы, которые могут дополнительно содержать гуммиарабик, тальк, поливинилпирролидон, гель карбопола, полиэтиленгликоль, диоксид титана, растворы лаков и подходящие органические растворители или смеси растворителей. Красители или пигменты могут быть добавлены в таблетки или покрытия драже для идентификации или различения различных комбинаций доз активных соединений.
Фармацевтические композиции, которые можно использовать перорально, включают составные капсулы, изготовленные из желатина, а также мягкие герметичные капсулы, изготовленные из желатина и пластификатора, например глицерина или сорбитола. Составные капсулы могут содержать активные ингредиенты в смеси с наполнителем, например лактозой, связующими, например крахмалами, смазывающими веществами, например тальком или стеаратом магния, и, дополнительно, стабилизаторами. В мягких капсулах активные ингредиенты могут быть растворены или суспендированы в подходящих жидкостях, таких как жирными маслами, жидким парафином или жидкими полиэтиленгликолями. Кроме того, могут быть добавлены стабилизаторы. Все препараты для перорального приема должны иметь дозировку, подходящую для выбранного пути введения.
Для трансбуккального введения композиции могут иметь форму таблеток или пастилок, изготовленных традиционным способом.
Для введения путем назальной ингаляции активные ингредиенты согласно настоящему изобретению удобно изготавливать в форме аэрозольного спрея в герметичном контейнере или распылителе с использованием подходящего газа-вытеснителя, например, дихлордифторметана, трихлорфторметана, дихлортетрафторэтана или диоксида углерода. В случае аэрозоля единицу дозировки можно определять с помощью клапана, отмеряющего требуемое количество. Капсулы и их упаковки, например желатин для использования в автомате-дозаторе, могут быть изготовлены с порошковой смесью соединения и подходящей основы, например лактозы или крахмала.
Описанные здесь препараты могут быть изготовлены для парэнтерального введения, например, путем введения шарика или непрерывной инфузии. Составы для инъекции могут быть представлены в форме единицы дозировки, например, в ампулах или контейнерах, содержащих несколько доз, по желанию с добавлением консерванта. Композиции могут иметь форму суспензий, растворов или эмульсий в масляном или водном носителе и могут содержать суспендирующие, стабилизирующие и/или диспергирующие вещества.
Фармацевтические композиции для парэнтерального введения включают водные растворы активного препарата в водорастворимой форме. Кроме того, суспензии активных ингредиентов могут быть изготовлены в форме масляных или водных суспензий для инъекций. Подходящие липофильные растворители или носители включают жирные масла, такие как кунжутное масло, или синтетические эфиры жирных кислот, такие как этилолеат, триглицериды или липосомы.
Водные суспензии для инъекций могут содержать вещества, которые повышают вязкость суспензии, такие как натрийкарбоксиметилцеллюлоза, сорбитол или декстран. Дополнительно, суспензия может также содержать подходящие стабилизаторы или агенты, которые повышают растворимость активных ингредиентов, позволяя изготавливать растворы высокой концентрации.
Как вариант, активный ингредиент может быть в форме порошка для соединения перед использованием с подходящим носителем, например, стерильным раствором на основе непирогенной воды.
Препарат настоящего изобретения также может быть изготовлен в ректальных композициях, таких как свечи или клизмы, с использованием, например, традиционных основ свечей, таких как какао-масло или другие глицериды.
Фармацевтические композиции, подходящие для использования в контексте настоящего изобретения, включают композиции, в которых активные ингредиенты содержатся в количествах, эффективных для достижения намеченной цели. Более конкретно, терапевтически эффективное количество означает количество активных ингредиентов, эффективно предотвращающее, уменьшающее или устраняющее симптомы заболевания или способствующее выздоровлению пациента. Определение терапевтически эффективного количества хорошо известно специалистам в данной области.
Для любого препарата, используемого в способах изобретения, терапевтически эффективное количество или дозу можно первоначально определить анализами in vitro. Например, доза может быть опробована на моделях животных, и такую информацию можно использовать для более точного определения доз, подходящих для людей.
Токсичность и терапевтическая эффективность описанных здесь активных ингредиентов, могут быть определены стандартными фармацевтическими процедурами in vitro, на культурах клеток или экспериментальных животных. Данные, полученные от анализов in vitro на культурах клеток и при исследованиях на животных, могут быть использованы для разработки диапазона доз для использования людьми.
Дозировка может изменяться в зависимости от применяемой формы и пути введения. Точная композиция, путь введения и дозировка могут быть подобраны врачом с учетом состояния пациента. (См. например, Фингль и др., (1975) «Фармакологические основы клинической медицины», Г.1 стр.1).
В зависимости от сложности и реагирования состояния пациента доза может быть единичной или множественной, причем курс лечения длится от нескольких дней до нескольких недель до излечения или минимизации болезненного состояния.
Количество композиции для введения будет, конечно, зависеть от пациента, серьезности болезни, способа введения, мнения назначающего врача и т.д.
Композиции, включающие препарат настоящего изобретения, изготовленные с совместимым фармацевтическим носителем, также могут быть изготовлены, помещены в подходящий контейнер и помечены для лечения определенного состояния.
Композиции настоящего изобретения могут, по желанию, содержаться в упаковке или раздаточном устройстве, таком как набор, одобренный Управлением США по контролю за продуктами и лекарствами, который может содержать одну или несколько доз с активным ингредиентом. Упаковка может, например, содержать металлическую или пластиковую фольгу, т.е. иметь форму блистера. К упаковке или раздаточному устройству могут прилагаться инструкции по применению. К упаковке или раздаточному устройству также может прилагаться уведомление по форме, установленной государственным органом, регулирующим производство, использование или продажу фармацевтических средств, на котором должно быть указано, что государственный орган одобрил эту форму композиции для назначения людям или животным. Такое уведомление может иметь форму, одобренную Управлением США по контролю за продуктами и лекарствами для лекарств, отпускаемых по рецепту, или утвержденную форму для помещения в продукт.
Как сказано выше, ингибиторы-антитела настоящего изобретения могут быть выделены из конструкции нуклеиновой кислоты.
Будет понятно, что полинуклеотиды, кодирующие антитела настоящего изобретения предпочтительно кроме того кодируют сигнальный пептид, который допускает секрецию или прохождение антител в представляющее интерес субклеточное или внеклеточное место.
Например, когда целевым металлопротеином является ММП, секреторный сигнальный пептид предпочтительно связан в каркасе с сегментом антитела, кодирующим полинуклеотид.
Кроме того, станет понятно, что рекомбинантные однонитевые фрагменты Fv (ScFv) предпочтительно могут быть выделены из-за их значительно менее сложной структуры по сравнению с полными молекулами антител. Как сказано выше, ScFv являются белками, состоящими из полипептидных цепей VL и VH антител, синтезированных как одиночная цепь с карбоксильным концом VL, связанным пептидным ответвлением с N-концом VH. Способы рекомбинантного производства этих пептидов хорошо известны в данной области (см. Берд и др., Science 242:423-426 (1988); Хастон и др., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 85:5879-5883 (1988); и де-Круиф и др., J. Mol. Biol. 248:97-105 (1995)). Согласно вариантам осуществления данного аспекта настоящего изобретения, после иммунизации соединениями настоящего изобретения селезеночную мРНК берут у иммунизированного животного и используют для производства библиотеки кДНК в бактериофаге, который имеет фрагменты ScFv. Частицы фага затем просматривают для определения тех, которые специфически взаимодействуют и предпочтительно с активированной формой представляющего интерес металлопротеина. Из этих частиц фага выделяют сегменты ScFv и клонируют в экспрессионную конструкцию (см. патент США 5,800,814).
Конструкции нуклеиновой кислоты данного аспекта настоящего изобретения могут вводиться в целевые клетки индивидуального объекта (т.е., генная терапия in vivo).
Как вариант, конструкцию нуклеиновой кислоты вводят в подходящую клетку путем подходящего способа/средства доставки генов (трансфекцией, трансдукцией, гомологенной рекомбинацией и т.д.) и системой экспрессии при необходимости, и затем модифицированные клетки расширяют в культуре и возвращают пациенту (т.е., генная терапия ех vivo).
Для клеточной экспрессии антител или фрагментов антител настоящего изобретения, конструкция нуклеиновой кислоты настоящего изобретения кроме того включает по меньшей мере один действующий в цис-положении регуляторный элемент. Используемая здесь фраза «действующий в цис-положении регуляторный элемент» относится к полинуклеотидной последовательности, предпочтительно промотору, который связывает действующий извне регулятор и регулирует транскрипцию кодирующей последовательности, расположенной после него.
По данной методологии можно использовать любой доступный промотор. В предпочтительном варианте осуществления настоящего изобретения промотор, используемый конструкцией нуклеиновой кислоты настоящего изобретения, активный в трансформируемой специфической клеточной популяции. Примеры промоторов, специфических к типам клеток и/или специфических к тканям, включают такие как альбумин, который специфический к печени [Пинкерт и др., (1987) Genes Dev. 1:268-277], промоторы, специфические к лимфоидам [Калам и др., (1988) Adv. Immunol. 43:235-275]; в частности промоторы рецепторов Т-лимфоцитов [Уиното и др., (1989) EMBO J. 8:729-733] и иммуноглобулинов; [Банерий и др. (1983) Cell 33729-740], нейрон-специфические промоторы, такие как промотор нейрофиламентов [Бирн и др. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86:5473-5477], промоторы, специфические к поджелудочной железе [Эдлунх и др. (1985) Science 230:912-916] или промоторы, специфические к молочной железе, такие как промотор молочной сыворотки (Патент США 4,873,316 и опубликованная европейская заявка №264,166). Конструкция нуклеиновой кислоты настоящего изобретения может кроме того включать ген-усилитель, который может быть расположен рядом или на удалении от последовательности промотора и может функционировать для регулирования ее транскрипции.
Конструкции данной методологии предпочтительно кроме того включают подходящий выбираемый маркер и/или репликатор. Предпочтительно, используемая конструкция является челночным вектором, который может размножаться в Е.coli (когда конструкция содержит подходящий выбираемый маркер и репликатор) и является совместимым для размножения в клетках или интеграции в гене и выбранной ткани.
Конструкция согласно настоящему изобретению может быть, например, плазмидой, бакмидой, фагмидой, космидой, фагом, вирусом или искусственной хромосомой.
Предпочтительные в настоящее время способы переноса нуклеиновых кислот in vivo включают трансфекцию с вирусными или невирусными конструкциями, такими как аденовирус, лентивирус, вирус I простого герпеса или аденоассоциированный вирус (ААВ) и системы на базе липидов. Подходящими липидами для липидного переноса гена являются, например, DOTMA, DOPE и DC-Choi [Тонкинсон и др, Cancer Investigation, 14(1):54-65 (1996)]. Наиболее предпочтительными конструкциями для использования в генной терапии являются вирусы, наиболее предпочтительно аденовирусы, ААВ, лентивирусы или ретровирусы. Вирусная конструкция, такая как ретровирусная конструкция, включает по меньшей мере один промотор/усилитель транскрипции или элемент определения локуса или другие элементы, которые регулируют экспрессию генов другими средствами, такими как альтернативный сплайсинг, экспорт ядерной РНК или пост-трансляционная модификация мессенджера. Такие векторные конструкции также включают упаковочный сигнал, длинные концевые повторы (LTR-последовательности) или их части, а также сайты связывания праймеров положительных и отрицательных цепей, соответствующие используемому вирусу, если он уже не представлен в вирусной конструкции. Кроме того, такая конструкция обычно включает сигнальную последовательности для секреции пептида или антитела из клетки-хозяина, в которую она помещена. Предпочтительно, сигнальная последовательности для этой цели является сигнальной последовательностью млекопитающего. Дополнительно, конструкция также может включать сигнал, который направляет полиаденилирование, а также один или несколько сайтов рестрикции и последовательность конца трансляции. Для примера, такие конструкции будут обычно включать 5' LTR, сайт связывания тРНК, упаковочный сигнал, начало синтеза второй нити ДНК и 3' LTR или ее часть. Могут быть использованы и другие векторы, которые являются невирусными, такие как катионные липиды, полилизин и дендримеры.
Предпочтительные режимы для осуществления протоколов генной терапии представлены в публикациях Сомиа и Верма [(2000) Nature Reviews 1:91-99], Иснер (2002) «Генная терапия миокарда». Nature 415:234-239; Хай (2001) «Генная терапия: Перспектива-2001». Haemophilia 7:23-27; и Хаммонд и Маккирнан (2001) «Ангиогенная генная терапия при болезни сердца: обзор исследований на животных и клинических испытаний». 49:561-567.
Из-за способности антител настоящего изобретения дифференциально распознавать активированную форму металлопротеина (см. Пример 3), их можно использовать как мощные диагностические и прогнозные средства, например путем мониторинга активности ММП в биологической пробе [т.е., любой пробе из организма (сыворотки или плазмы), слюны, асцитных жидкостей, плевральных эффузий, мочи, образцов биопсии, изолированных клеток и/или препарата клеточных мембран]. Это имеет особое значение при оценке метастатических признаков раковых клеток, когда несбалансированная активация ММП облегчает проникновение опухоли. Подобно этому, антитела настоящего изобретения могут быть использованы при мониторинге терапевтической дозировки ингибиторов ММП. Для таких применений антитела настоящего изобретения предпочтительно метят каждой из любых радиоактивных, флуоресцентных, биологических или ферментативных меток, которые стандартно используют в данной области. Использование таких меток рассматривается в патентах США 3,817,837; 3,850,752; 3,939,350; 3,996,345; 4,277,437; 4,275,149 и 4,366,241.
Будет понятно, что такие способы детектирования также могут использоваться для быстрого скрининга новых ММП. Коротко, многочисленные биологические пробы можно вводить в контакт с антителами настоящего изобретения, где активированные ММП могут связываться с ними. Предпринимаются меры по использованию биологических проб, которые включают активированные ММП, такие как полученные из линий опухолевых клеток. Обычно радиоактивную метку используют для уменьшения объема пробы для анализа.
Как вариант, антитела настоящего изобретения могут использоваться для очистки активных металлоферментов от биологических проб.
В данной области известны многочисленные способы очистки белков. Например, антитела или фрагменты антител настоящего изобретения могут использоваться в аффинной хроматографии для изоляции металлоферментов. Можно подготовить колонки, где антитела связаны с твердым субстратом, например, частицами, такими как агароза, Сефадекс и т.п., и биологическая проба, такая как клеточный лизат, может быть пропущена через колонку, затем колонку промывают, после чего повышают концентрацию мягкого денатурирующего средства, посредством чего высвобождается очищенный металлофермент.
Антитела или их фрагменты, созданные согласно настоящему изобретению, могут быть включены в диагностический или терапевтический набор. Антитела или фрагменты антител могут быть упакованы в один или несколько контейнеров с соответствующими буферными растворами и консервантами и использоваться для диагностики или для направления лечения.
Так, антитела или их фрагменты могут быть смешаны в одном контейнере или помещены в индивидуальные контейнеры. Предпочтительно, контейнеры имеют этикетку. Подходящими контейнерами являются, например, бутыли, колбы, шприцы и пробирки. Контейнеры могут быть выполнены из разных материалов, таких как стекло или пластик.
Кроме того, также могут быть добавлены и другие добавки, такие как стабилизаторы, буферные растворы, блокаторы и т.д. Антитела в таких наборах могут также быть прикреплены к твердой основе, такой как шарики, матричному субстрату (например, чипам) и т.д. и использоваться для диагностических целей. Набор также может включать инструкции по определению, страдает ли проверяемый объект от, или имеет риск развития, некоторого состояния, нарушения или заболевания, связанного с экспрессией соответствующей ММП.
Другие цели, преимущества и новые признаки настоящего изобретения станут понятны среднему специалисту в данной области после изучения следующих Примеров, которые не должны восприниматься как ограничивающие. В дополнение, каждый из вариантов осуществления и аспектов настоящего изобретения, которые описаны выше и включены в формулу изобретения, имеет экспериментальную поддержку в последующих Примерах.
ПРИМЕРЫ
Теперь будут рассмотрены примеры, которые вместе с вышеприведенным описанием иллюстрируют изобретение неограничивающим образом.
В общем, используемая здесь номенклатура и лабораторные процедуры в настоящем изобретении включают молекулярные, биохимические, микробиологические и ДНК-рекомбинантные способы. Такие способы подробно объяснены в литературе. Смотрите, например, «Молекулярное клонирование: лабораторный справочник» Сэм-брук и др., (1989); «Текущие протоколы в молекулярной биологии», Тома I-III под ред. Осубела, Р. М., (1994); Осубел и др., «Текущие протоколы в молекулярной биологии», John Wiley & Sons, Балтимор, штат Мэриленд (1989); Пербал, «Практическое руководство по молекулярному клонированию», John Wiley & Sons, New York (1988); Уотсон и др., «Рекомбинантная ДНК», Scientific American Books, New York; Биррен и др. «Анализ генома: Серия лабораторных руководств», Т.1-4, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (1998); методологии из патентов США 4,666,828; 4,683,202; 4,801,531; 5,192,659 и 5,272,057; «Клеточная биология: лабораторный справочник», Т I-III под ред. Целлиса, Дж. Э., (1994); «Текущие протоколы в иммунологии» Т. I-III под ред. Колиган Дж. Э., (1994); Стайте и др., «Базовая и клиническая иммунология» (8-е издание), Appleton & Lange, Hopwalk, CT (1994); Мишелл и Шииги, «Избранные методы в клеточной иммунологии», W. H. Freeman & Co., New York (1980); доступные иммуноанализы широко описаны в патентной и научной литературе, смотрите, например, патенты США 3,791,932; 3,839,153; 3,850,752; 3.850,578; 3,853,987; 3,867,517; 3,879,262; 3,901,654; 3,935,074; 3,984,533; 3,996,345; 4,034,074; 4,098,876; 4,879,219; 5,011,771 и 5,281,521; «Синтез олигонуклеотидов» под ред. Гейта, М. Дж., (1984);
«Гибридизация нуклеиновой кислоты» Хеймс, Б.Д. и Хиггинс С. Дж. (1985); «Транскрипция и трансляция» Хеймс, Б.Д. и Хиггинс С. Дж. (1984); «Культура клеток животных», под ред. Фрешни, Р.И., (1986); «Иммобилизованные клетки и ферменты», IRL Press, (1986); «Практическое руководство по молекулярному клонированною», Пербал, Б., (1984) и "Методы ферментологии», Т.1-317, Academic Press; «Протоколы ПЦР: Справочник по методам и применениям», Academic Press, San Diego, CA (1990); Маршак и др., «Стратегии очистки и определения характеристик белков - Лабораторный курс», CSHL Press (1996); которые все включены по ссылке, как если бы они были раскрыты здесь в полном объеме. Настоящий документ содержит и другие общие ссылки. Считается, что указанные в них процедуры хорошо известны в данной области и представлены для удобства читателя. Вся содержащаяся в них информация включена в настоящий документ путем ссылки.
Материалы и способы
Рекомбинантные ферменты - Каталитический домен ММП-2 (аминокислоты 110-467 из банка генов с номером доступа NP032636.1) был экспрессирован с промотором Т7 в клетках BL-21. Эти клетки были индуцированы 1 ммоль изопропил-П-Д-тиогалактопиранозида в течение 5 часов. Клеточный осадок был повторно суспендирована в 50 ммоль буферного раствора Трис, рН 8,0, 0,5 ммоль ЭДТК, 50 ммоль NaCl, 5% глицерина и 1% Тритон Х-100 в соотношении 1:25 с буферным раствором до первоначального объема культуры. Суспензию центрифугировали в течение 10 мин при 15000 об/мин и осадок растворили в 50 ммоль Трис, рН 8,0, 0,5 ммоль ЭДТК, 50 ммоль NaCI, 5% глицерина и 0,2% Саркосил, после чего провели инкубацию на льду в течение 30 мин. Надосадочную жидкость загрузили в колонку 5 мл с желатином-сефарозой (готовая, компания Amersham Biosciences), предварительно уравновесили и промыли диализным буферным раствором (50 ммоль Трис, рН 8,0, 50 ммоль NaCl, 5 ммоль CaCl2, 10 мкмоль ZnCl2, 0,02% Brij). Белок элюировали с помощью 50 ммоль Трис, рН 8,0, 1 моль NaCl, 5 ммоль CaCl2, 10 мкмоль ZnCl2, 0,02% Brij и 15% Me2SO [Розен, О., «Ингибирование ММП моноклональными антителами», 2001] и анализировали с использованием программы SDS-PAGE, и его каталитическую активность измерили по деградации флурогенного пептида [Найт, К. Дж., Ф. Уилленброк и Дж. Мерфи, «Новый пептид, помеченный кумарином, для чувствительных непрерывных анализов матриксных металлопротеиназ». FEBS Lett, 1992. 296(3): р.263-6].
Про-ММП-9 [с отсутствием шарнирной области и домена геморексина, прекурсор матриксной металлопротеиназы-9 (ММП-9) Alal-Gly424 |P14780|ММП9_HUMAN (ЕС 3.4.24.35)] был экспрессирован в Escherichia coli ER2566 в векторе экспрессии pTWIN и очищен до однородности от включений, как сказано выше [Бьорклунд, М., П. Хейккила и Э. Койвунен, «Пептидное ингибирование каталитической и некаталитической активности матриксной металлопротеиназы-9 блокирует миграцию и инвазию опухолевых клеток». J Biol Chem, 2004. 279(28): p.29589-97]. Прекурсор ММП-9 активировали 1 ммоль ацетата п-аминофенилртути (АРМА, компания ICN Biomedicals Inc., Огайо, США) и растворяли в 200 ммоль Трис в течение 30 мин при 37°C.
Человеческие рекомбинантные про-ММП-2 и про-ММП-9 экспрессировали в клетках HeLa S3, инфицированных соответствующими рекомбинантными вирусами коровьей оспы, и очистили до однородности, как сказано выше [Ольсон, М.В., Герваси, Д.К, Мобашери, С. и Фридман, Р. (1997) J. Biol. Chem. 272, 29975-29983; Фридман, Р., Фуерст, Т.Р., Берд, Р.Э., Хойхтя, М., Элкукт, Т.М., Краус, С., Комарек, Д., Лиотта, Л.А., Берман, М.Л. и Стетлер-Стивенсон, У. Дж. (1992) J. Biol. Chem. 267, 15398-15405].
Тетракарбоксифенилпорфирин Co(II)/Zn(II) (CoTCPP/ZnTCPP) - ZnTCPP синтезировали путем реакции ZnCl2 и ТСРР в N,N-диметилформамиде (ДМФ) как описано в публикации [Харада, А. и др., «Контроль фотоиндуцированного переноса электронов от цинка-порфирина к метилвиологену путем надмолекулярной формации между моноклональным антителом и цинком-порфирином». Photochem Photobiol, 1999. 70(3): p.298-302]. СоТСРР синтезировали путем реакции Со(ОАс)2-4H2O и ТСРР в ДМФ, как описано в публикации [Харада, А. и др., «Контроль фотоиндуцированного переноса электронов от цинка-порфирина к метилвиологену путем надмолекулярной формации между моноклональным антителом и цинком-порфирином»] и очистили.
Синтез Imisdp - Описан в Примере 7, ниже.
Соединение гаптена с белком - Гаптены (4 мг) активировали для соединения путем добавления 1,1'-карбонилдиимидазола в ДМФ (при молярном отношении 1:1) и инкубировали в течение 1 ч. Активированный гаптен в количестве 1-50 мкмоль добавили к 20 мг/мл БСА или моллюсковому гемоцианину (KLH) в 0,1-молярном карбонатном буферном растворе с рН 8. Раствор перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч и затем экстенсивно диализировали относительно фосфатно-солевого буферного раствора (PBS).
Иммунизация и слияние - каждый из адъювантов (KLH), соединенный с СоТСРР, ZnTCPP или Imisdp, использовали для иммунизации мышей BALB/c. Иммунизацию и последующее слияние с клеточной линией миеломы NSO выполняли по стандартным процедурам [Харлоу, Э. и Лейн, Д., «Использование антител: Лабораторное руководство - Мобильный протокол №I». 1998].
Скрининг антител
ИФА - Надосадочные жидкости растущих гибридом анализировали на антитела, реагирующие с ZnTCPP, CoTCPP или Imisdp, используя прямой ИФА, в котором соответствующие гаптен-БСА (3 мкг/мл фосфатно-солевого буферного раствора) нанесли на планшеты Nunc Maxisorp. Нанесенный слой выдержали при 4°C в течение ночи и инкубировали с антителами при 20°C в течение 1 ч. Связанное пероксидазой из корней хрена моноклональное антитело (mAb) для мышей (Sigma) использовали в качестве вторичного антитела, и 2,2'-азино-бис (3-этилбензтиазолин-6-сульфоновую кислоту, ABTS, Sigma) использовали в качестве субстрата. Фосфатно-солевой буферный раствор (PBS), содержащий 0,005 объ. % Tween 20 (PBST), использовали в качестве промывочного реагента. Буфером для растворения служил PBS. А602 регистрировали планшет-ридером SPECTRAFluor Plus (компания Tecan, Австрия). Для контроля надосадочные жидкости инкубировали с планшетами, покрытыми БСА, по такой же процедуре. Значения поглощательной способности выше 0,5 миллиоптической плотности считались положительными.
Конкурентный ИФА - Разбавленную в разной степени надосадочную жидкость гибридомы инкубировали с планшетами, покрытыми гаптеном-БСА, согласно вышеуказанным этапам.
Была подготовлена кривая титрации, и разбавление титра было определено на 50% от связывания.
Надосадочные жидкости, разбавленные до концентрации титра, предварительно инкубировали растворимыми соединениями ZnTCPP, CoTCPP или Imisdp в течение 30 мин и затем переносили на покрытые гаптеном микротитровальные планшеты после этапов, описанных выше. Оцененная константа диссоциации являлась концентрацией растворимого гаптена, требующейся для достижения 50% связывания.
Производство и очистка - Выбранные гибридомы были субклонированы дважды ограниченными разбавлениями, за чем последовало крупномасштабное производство асцитами опухолей, затравкой которых служил пристин (2,6,10,14 тетраметилпентадекан), вводимый мышам BALB/c. Моноклональные антитела очистили аффинной хроматографией на белке G сефарозы 4 (Amersham Biosciences). Асциты центрифугировали при 12000 g в течение 15 мин для удаления нерастворимых частиц и липида. Асциты в количестве 1 мл разбавили в 5 раз по объему, используя PBS, затем загрузили в колонку объемом 5 мл с белком G сефарозы. Пик элюирования анализировали SDS-PAGE.
Определение изотипа - Надосадочные жидкости культуры, полученные из клонированных гибридом, выраженных в колбах с культурой, использовали в качестве источника антитела. Изотип каждого антитела определяли с помощью набора для определения изотипа моноклонального антитела мыши (компания HyCult biotechnology b.v., Нидерланды).
Иммуноблоттинг очищенных антител - Очищенные антитела сепарировали в 8% SDS-полиакриламидном геле, перенесли на мембраны NC (Bio-Rad) и впоследствии подвергли иммуноблоттингу с использованием антитела к ММП-9 (Sigma). Козий IgG антимыши, конъюгированный пероксидазой корня хрена (Sigma), использовали в качестве вторичного антитела. Сигналы детектировали с использованием ECL (Pierce).
Анализ связывания с использованием очищенных белков - антитела (10 мкг) инкубировали гранулами агарозы IgG антимыши (Sigma) в течение ночи при 4°C в PBS. После промывки несвязанного антитела добавляли очищенную Про-ММП-2, Про-ММП-9, каталитический домен ММП-2, каталитический домен МТ1 или ТАСЕ (2 мкг), после чего инкубировали в течение 2 ч при комнатной температуре. Гранулы собрали центрифугированием и промыли 3 раза PBS. Белки, которые остались связанными с гранулами, элюировали буферным раствором SDS, фракционировали SDS-PAGE и детектировали путем окрашивания голубым кумасси.
Иммунопреципитация и вестерн блоттинг - Клетки НТ1080 посеяли в чашки Петри. После 80% слияния среда (DMEM, дополненная 10% FCS, заменимыми аминокислотами, пенициллином, стрептомицином, пируватом натрия и L-глутамином) была заменена на не содержащую сыворотки среду (без FCS). После еще 24 ч инкубации кондиционированную среду (КС) собрали со сросшихся клеток и сконцентрировали, используя Millipore Cemricon-10 (Бедфорд, Массачусетс). Концентрированные надосадочные жидкости использовали для иммунопреципитаций. КС инкубировали с анти-1 (СоТСРР) моноклональным антителом (mAb) (15 мкг/мл) в течение ночи при 4°С. Белок А Сефароза (CL-4B, Amersham Biosciences) добавили к пробам и перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре. Гранулы промыли 3 раза PBS, суспендировали в буферном растворе SDS и нагрели до 95°C за 3 мин. Иммунопреципитаты отобрали центрифугированием и подвергли SDS/PAGE. После отделения белки перенесли на нитроцеллюлозные (НЦ) мембраны и проверили антителом анти-ММП-2.
Для активации Про-ММП-2, произведенной клетками НТ1080, 1 ммоль 4-аминофенилртутьацетат (АРМА) добавили к концентрированной КС и инкубировали в течение 6 ч при 37°C. После активации КС диализовали (х3) против PBS при 4°C для удаления АРМА. Иммунопреципитацию с активированной средой выполнили так, как сказано выше.
Связывание с активной ММП-9, используя прямой ИФА - Каталитический домен ММП-9 (2 мкг/мл) иммобилизировали в лунках на микротитровальном планшете. Моноклональные антитела (1 мг/мл) добавили в лунки после процедуры, описанной для скрининга ИФА, антитело против ММП-9 (Sigma) служило в качестве положительного контроля и сродство IgG неродственной мыши, очищенное от асцитов, служило в качестве отрицательного контроля.
Кинетический анализ - Ферментативную активность ММП измеряли, как было описано раньше (Соломон, А. и др., «Выраженное отличие в электронных и химических свойствах между сайтами каталитического цинка фермента, преобразующего альфа-фактор некроза опухолей, и матриксных металлопротеиназ несмотря на их высокое структурное подобие». J Biol Chem, 2004. 279(30): стр.31646-54). Активность ММП-9, ММП-2 и МТ1-ММП измеряли путем мониторинга деградации флуорогенного пептида Mca-Pro-Leu-Gly-Leu-Dpa-Ala-Arg-NH2 при γех=340 нм и γem=390 нм, как описано Найтом и др. (FEBS Lett, 1992. 296(3): р.263-6), купленного в компании Calbiochem-Novabiochem AG. Стандартная смесь для анализов содержала 50 ммоль буферного раствора Трис, рН 7,5, 200 ммоль NaCl, 5 ммоль CaCl2, 20 мкмоль ZnCl2 и 0,05% Brij. Ферментативную активность ТАСЕ измеряли путем мониторинга деградации флуорогенного пептида QF-45 (Mca-Ser-Pro-Leu-Ala-Gln-Ala-Val-Arg-Ser-Ser-Ser-Arg-Lys(динитрофенил)-NH2), купленного в компании Calbiochem-Novabiochem AG.
Зимография in situ - Для локализации чистой желатинолитической активности ММП зимографией in situ DQ-желатин, помеченный флуоресцеина изотиоцианатом, который был интрамолекулярно блокирован (молекулярные пробники), использовали в качестве субстрата для деградации гелатиназами. Протеолиз гелатиназами дает расщепленные пептиды желатина - флуоресцеина изотиоцианата, и локализации этой флуоресценции оказывает сайты чистой желатинолитической активности. Коротко, клетки НТ1080 человеческой фибросаркомы (которые производят ММП-2, ММП-9 и МТ1-ММП) помещали на покровные стекла 12-ммоль. После инкубации в течение 24 ч клетки обработали 1 мкмоль антитела 13Е11 в течение 30 мин при 37°C. Необработанные клетки в этом эксперименте использовали в качестве отрицательного контроля. Клетки промыли PBS и затем инкубировали с буферным раствором для зимографии (0,05 моль Трис-HCl, 0,15 моль NaCl, 5 ммоль CaCl2 и 0,2 ммоль NaN3, рН 7,6, высокая концентрация азида фагоцитацию желатина и позволила получить желатинолитическую активности на поверхности клеток), содержащим 60 мкг/мл DQ-желатина при 37°C в течение ночи. Буферный раствор для зимографии содержал 1 мкмоль антитела против СоТСРР для обработанных клеток. В конце периода инкубации без фиксации или дальнейших промывок желатинолитическую активность ММП локализовали и сфотографировали с помощью флуоресцентного микроскопа, получая изображения цифровой камерой Spot.
ПРИМЕР 1
Конфирмационная мимикрия активного сайта цинка небольшими органометаллическими соединениями
Ион цинка в активном сайте ММП равномерно координируется тремя консервативными остатками гистидина. Во время активации зимогена и протеолиза субстрата координация цинка меняется с 4-координатной, четырехугольной геометрии, на некаталитических стадиях на 5-координатную, треугольную бипирамидальную [Олд, Д.С., «Сфера координации цинка в биохимических сайтах цинка». Biometals, 2001. 14(3-4); р.271-313] на каталитических стадиях. Консервативные гистидины поэтому могут принимать различные геометрии по отношению к иону цинка. Для выборки этих конформаций выбрали два соединения в качестве моделей для мимикрии среды цинка - Imisdp и Co/ZnTCPP (ФИГ.1). Соединение Imisdp (синтез изложен в Примере 7, ниже) может имитировать 4-координатную геометрию. В этом случае почти четырехугольная конформация формируется тремя имидазольными основаниями и молекулой воды в качестве четвертого лиганда.
На ФИГ.2А показано наложение сконструированной 3D-модели молекулы Imisdp на каталитический сайт ММП-9 (PDB 1GKC) [Роуселл, С. и др., «Структура кристалла человеческой ММП9 в комплексе с обратным ингибитором гидроксамата», J Mol Biol, 2002. 319(1): р.173-81], который был модифицирован для представления четырехугольной геометрии лигандов цинка. Модификации включали замену лиганда, присутствующего в рентгеновской структуре (ингибитора гидроксамата), на молекулу воды и оптимизацию всего фермента к локальному минимуму путем многослойного подхода QM/UM (см. материалы и способы). Существует высокое сходство между вычисленным фрагментом цинка гистидина в ММП-9 и Imisdp в смысле расстояний 6-азота гистидинов от иона цинка (2,04±0,06 и 2,02, соответственно) и относительной ориентацией трех гистидинов к металлу. Вторая молекула, -Zn/CoTCPP, имеет четыре имидазольных основания в координации с цинком или его аналогичным металлом кобальтом в копланарной конформации по отношению к иону металла [Стивене, Э.Д., «Электронная структура металлопорфиринов. 1. Экспериментальное распределение плотности электронов (мезо-тетрафенилпорфинато)кобальт (II)». J. Am. Chem. SOC, 1981. 103(17): p.5087-5095]. Эта конфигурация имитирует конформацию двух из трех гистидинов в 5-координатной, треугольной бипирамидальной геометрии, где металл почти копланарен двум гистидинам, которые формируют основание пирамиды. На ФИГ.2В показана структура кристалла ММП-9 (PDB 1GKC), где цинк координируется 5 лигандами (два дополнительных лиганда вносит ингибитор гидроксамата), ориентация двух гистидинов в основании пирамиды и их расстояния от иона цинка (2,2±0,02, 2,03±0,04 и 1,95 для ММП-9, ZnTCPP и СоТСРР, соответственно) сравнимы с молекулой Co/ZnTCPP.
ПРИМЕР 2
Создание и селекция моноклинальных антител
Моноклональные антитела против СоТСРР, ZnTCPP и Imisdp (ФИГ.1) были получены путем иммунизации мышей и селекции специфических антител скринингом ИФА с соответствующим соединением в качестве покрытого антигена. Три антитела были отобраны для широких исследований. Эти клоны были выбраны потому, что они обладали наилучшим сродством к иммунизирующему их гаптену на основании конкурентного ИФА-скрининга. Константы их связывания, в диапазоне 0,01-0,09 мкмоль, (таблица 3, ниже), характерны для mAbs с высоким сродством. Моноклональные антитела размножали как асциты в мышах и очищали гранулами белка G.
Таблица 3 | |||
Изотипы и результаты конкурентного ИФА моноклональных антител против СоТСРР, ZnTCPP и Imisdp. | |||
Иммунизирующий гаптен | Изотип антитела | Kd [мкмоль] * Название | |
СоТСРР | IgG2b | 0,09 | 13Е11 |
ZnTCPP | IgG2a | 0,01 | 15Е12 |
Imisdp | IgG2a | 0,09 | 6С6 |
* - Сродство связывания (Kd) антител с иммунизирующим их гаптеном определяли конкурентным ИФА (подробности см. в «Материалы и способы»). |
ПРИМЕР 3
Моноклональные антитела перекрестно реагируют с ММП-2 и ММП-9
Для определения, могут ли антитела против синтетических соединений, которые имитируют конформацию гистидина цинка в каталитическом сайте ММП, перекрестно реагируют с открытым фрагментом гистидина цинка в активных сайтах ММП-2 и ММП-9, моноклональные антитела сначала проверили на связывание ММП-9, используя прямой ИФА.
Три антитела связали каталитический домен ММП-9, прямо адсорбированный в лунки микротитровального планшета (коммерческое антитело против ММП-9 служило в качестве положительного контроля, и неродственное IgG служило в качестве отрицательного контроля). Интересно, что антитела, которые размножались как асциты в мышах и были очищены совместно с активной ММП-9, присутствовали в асцитной жидкости мышей. Вестерн иммуноблоттинг только очищенных антител с антителом против ММП-9 как первичным антителом показал чистый диапазон, соответствующий ожидаемой молекулярной массе приблизительно 82 а.е.м. для активной ММП-9. Так, антитела образовали комплекс in vivo с нативным ферментом.
Моноклональные антитела далее проанализировали на связывание ММП-2, используя иммуноаффинный анализ. Антитела инкубировали с каталитическим доменом ММП-2 (ММП-2cat) in vitro, после чего вытягивали с помощью гранул агарозы IgG анти-мышь. Как показано на ФИГ.3А, все антитела связали ММП-2cat.
Для установления того, что связывание происходит путем прямого взаимодействия с активным сайтом, антитела анализировали на их способность связывать Про-ММП-2 и Про-ММП-9. В латентных ферментах продоменная структура защищает каталитическое углубление. Поэтому блокирование активного сайта продоменной структурой должно предотвращать связывание антитела, при условии, что она распознает фрагмент цинка гистидина в активном сайте. В тех же условиях не было выявлено связывание с проферментами (ФИГ.3В). Этот режим связывания с активной ММП-2, но не с Про-ММП-2 был далее проверен среде in vivo на нативной ММП-2 полной длины, секретированной культурами клеток (НТ1080) человеческой фибросаркомы. Иммуно-преципитация среды, кондиционированной клетками НТ1080 с антителом против СоТСРР, после которой был выполнен вестерн иммуноблоттинг, показал связывание с активной ММП-2, но не с Про-ММП-2 (ФИГ.3С). Эти результаты демонстрируют, что все три антитела перекрестно реагируют с ММП-2 и ММП-9. Открытие углубления активного сайта имеет большое значение для связывания антител, подтверждая, что моноклональные антитела прямо взаимодействуют с активными сайтами ММП-2 и 9.
ПРИМЕР 4
Антитела против СоТСРР и Imisdp ингибируют ММП-2 и ММП-9 in-vitro
Антитела против Imisdp и СоТСРР ингибировали протеолитическую активность ММП-2 и ММП-9 в микромолярном диапазоне (ФИГ.5). Кинетический анализ ингибирования ММП антителами был выполнен в постоянном флуорометрическом анализе с гашеным флуоресцентным пептидным субстратом. Что удивительно, антитело против ZnTCPP не показало ингибирующего эффекта.
Для определения природы ингибирования антителами против СоТСРР провели эксперименты с использованием ферментов в присутствии или отсутствии антитела при различных концентрациях флуоресцентного пептидного субстрата. Данные, представленные на графике Лайнвивера-Берка, показанного на ФИГ.4А-В, характеризуют профиль конкурентного ингибирования при значениях Ki 13 мкмоль и 24 мкмоль для ММП-9 и ММП-2, соответственно. Профиль конкурентного ингибирования показал, что антитело связано с тем же сайтом, что и пептидный субстрат. Этот режим ингибирования далее подтверждает прямое взаимодействие с активным сайтом. Стоит отметить, что антитело против Imisdp показало зависящий от концентрации ингибирующий эффект, направленный на ММП-2 и ММП-9, предполагая конкурентное ингибирование, вычисленные значения Ki составили 5,8 мкмоль и 3 мкмоль для ММП-9 и ММП-2, соответственно (ФИГ.5). Поскольку антитела распознают сайт связывания ММП-2 и ММП-9, дальнейшая оптимизация интерфейсных комплементарностей между антителами и ММП, как структурная, так и электростатическая, достижима методами аффинного созревания (Поль Ж. Картье, Nature Reviews Immun. Vol.6 2006 343-357). Использование этого подхода может привести к высоко специфическим ингибиторам, которые будут пользоваться признаками специфичности, находящимися внутри или снаружи активного сайта.
ПРИМЕР 3
Зимография in situ
Для подтверждения ингибирующей активности антитела против СоТСРР на клеточном уровне, действие антитела исследовали на желатинолитической активности клеток НТ1080 человеческой фибросаркомы, которые конститутивно секретируют ММП-2 и 9, методом зимографии in situ. Для локализации желатинолитической активности ММП методом зимографии in situ желатин, помеченный флуоресцеином изотиоцианатом, который был погашен внутримолекулярно (DQ-желатин), использовали в качестве субстрата. Протеолиз гелатиназами дал отщепленные пептиды флуоресцеина изотиоцианата - желатина, и локализация этой флуоресценции указывает сайты чистой желатинолитической активности. Необработанные клетки НТ1080 человеческой фибросаркомы (ФИГ.7А) показали значительную желатинолитическую активность поверхности клеток. В присутствии 1 мкмоля антитела (ФИГ.7В), гелатиназа activity was reduced as compared to that observed in control cells. These results demonstrate that anti CoTCPP mAb inhibited ММП-2 nd ММП-9 at the cellular level.
ПРИМЕР 6
Селективность моноклональных антител настоящего изобретения
Селективность антител была проверена путем исследования связывающего и ингибирующего действия моноклональных антител против CoTCPP и Imisdp по отношению к ММП-14 (МТ1-ММП) и TNF-α-преобразующему ферменту (ТАСЕ), зависящей от цинка металлопротеиназы, относящейся к родственному семейству ADAM (дисинтегрин и металлопротеиназа) (ADAM-17). Ингибирующее действие по отношению к МТ1-ММП и ТАСЕ было проверено путем in-vitro анализа ферментативной активности флуоресценции с соответствующими пептидными субстратами. Моноклональное антитело против CoTCPP не показало ингибирующего действия по отношению к МТ1-ММП или ТАСЕ. Для определения того, связывает ли оно ТАСЕ и МТ1-ММП без последующего ингибирования, были выполнены иммуноаффинные эксперименты с очищенными ферментами, но связывания выявлено не было. В противоположность моноклональному антителу против CoTCPP, моноклональное антитело против Imisdp ингибировало МТ1-ММП при значении Ki 10 мкмоль, но не показало ингибирующего действия по отношению к ТАСЕ. Результаты представлены в таблице 4, ниже.
Таблица 4 | |||
ММП | 6С6 (IC50 мкмоль) | 13Е11 (IC50 мкмоль) | 15Е12 (IC50 мкмоль) |
ММП-2 | 3±0,2 | 24±1 | НИ* |
ММП-9 | 4,5±0,2 | 15±0,8 | НИ* |
МТ1-ММП | 14,4±0,7 | НИ* | НИ* |
ТАСЕ | НИ* | НИ* | НИ* |
*НИ - Не ингибирует при концентрациях до… (далее неразборчиво} |
Среди членов семейства ММП и ТАСЕ существует высокое структурное сходство в активном сайте, конкретно, трехмерные структурные элементы, окружающие сайт связывания цинка, почти идентичны, вследствие необходимости вмещать каркас пептида субстратов и присутствия консервативного фрагмента EXXHXXGXXH связывания цинка [Соломон, А. и др., «Выраженное разнообразие электронных и химических свойств у сайтов каталитического цинка в ферменте, преобразующем альфа-фактор некроза опухоли, и матриксных металлопротеиназ, несмотря на их высокое структурное сходство». J Biol Chem, 2004. 279(30): p.31646-54; Лукацова, В. и др., «Сравнение сайтов связывания матриксных металлопротеиназ и фермента, преобразующего альфа-фактор некроза опухоли: последствия для селективности». J Med Chem, 2005. 48(7): р.2361-70]. Поэтому не ожидается, что селективность моноклональных антител к ММП основана исключительно на распознании консервативного фрагмента цинка гистидина. Однако, в отличие от синтетических ингибиторов с небольшой молекулярной массой, антитело, являющееся крупной молекулой белка, должно иметь ограниченный доступ к углублению в активном сайте, которое скрыто в каркасе белка. В частности, поскольку моноклональные антитела специфически взаимодействуют с ионом каталитического цинка, степень открытости иона цинка для раствора должна быть критической для связывания антителом. МТ1-ММП и в большей степени ТАСЕ отличаются глубоким SI-карманом, коррелированным с относительно скрытым ионом каталитического цинка, что показывают структуры их кристаллов. Различие в глубине активного сайта может являться причиной отсутствия ингибирующего действия антител по отношению к ТАСЕ. Эти результаты предполагают, что селективность может быть достигнута на основании степени открытости иона каталитического цинка. Еще одним важным фактором, который должен учитываться при сравнении ММП и ТАСЕ, являются различия в кармане активного сайта в смысле химии, такие как гидрофобность и полярность (см. ФИГ.8). Активный сайт ТАСЕ, например, значительно более полярный чем активные сайты большинства ММП. Соломон и др. продемонстрировали, что такое изменение полярности активного сайта прямо влияет на ориентацию имидазольных колец гистидина активного сайта по отношению к иону каталитического цинка [Соломон, А. и др., «Выраженное разнообразие электронных и химических свойств у сайтов каталитического цинка в ферменте, преобразующем альфа-фактор некроза опухоли, и матриксных металлопротеиназ, несмотря на их высокое структурное сходство». J Biol Chem, 2004. 279(30): р.31646-54].
Селективность антител против СоТСРР и Imisdp была далее проверена по их перекрестной реакционной способности с неродственными ферментами, зависящими от цинка - карбоновой ангидразой (КА) и спиртовой дегидрогеназой из brockii (TbADH). Подобно активной ММП, КА содержит ион цинка, который четырехугольно координирован с тремя остатками гистидина и молекулой воды, TbADH содержит ион каталитического цинка, который четырехугольно координирован с четырьмя разными аминокислотными остатками, гистидином, цистеином, аспартатом и глутаматом. Соответствующие эксперименты функционального ингибирования in vitro, а также сходные им-муноаффинные эксперименты были выполнены для исследования перекрестной реакционной способности с этими ферментами, но ни связывания, ни ингибирования не наблюдалось. Моноклональное антитело против СоТСРР также было проверено на его перекрестную реакционную способность с родственными физиологическими порфиринами, такими как группа Heme в миоглобине и гемоглобине и витамине. При конкурентном ИФА и иммуноаффинном анализе перекрестной реакционной способности выявлено не было.
Карбоновая ангидраза и спиртовая дегидрогеназа имеют достаточно скрытые активные сайты, подобно этому порфириновый компонент в миоглобине и гемоглобине не открыт.
Витамин В12 содержит металл в центре планерной имидазольной структуры, но осевые лиганды могут мешать связыванию моноклонального антитела. Все вместе эти результаты подтверждают, что моноклональное антитело против СоТСРР распознает относительно открытую конфигурацию металла-имидазола без вмешательства остатков, координирующих осевой металл.
ПРИМЕР 7
Синтез [2-(2-миноэтилкарбомоил)-этоксиметил]-трис-[2-(N-(3-имидазол-1-ил-пропил))-этоксиметил]метанцинка (II) (3), ФИГ.9
(i) Синтез тетра (2-пентахлоро-феноксикарбонил-этоксиметил)метана
Синтез пентахлорофено-замещенного тетра-активного сложного эфира проводили по процедуре Хайма Вейцманна и др., JACS 1996, 118, 12368-12375.
(а) Приготовление монозамещенного три-активного эфира: тетра-активный эфир (1) (1 г, 0,69 ммоль) и BocNHCH2CH2NH2 (100 мг, 0,62 ммоль) растворили в 20 мл сухого дихлорметана. Раствор перемешивали в течение ночи, поддерживая рН ~8 с помощью триэтиламина. Раствор сконцентрировали и очистили флеш-хроматографией с CHCl3 и этилацетатом (90:10) для получения (152 мг, выход 15%). 1H ЯМР 250 МГц (CDCl3) δ: 1,4 (s, 9Н, Boc); 2,4 (t, 2Н, J=6 Hz, -CH2-CH2-CONH); 2,9 (t, 6H, 3=6 Hz, -CH2-CHrCOOPCP); 3,2 (q, 2Н, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-NHBoc); 3,31 (t, 2Н, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-NHBOC); 3,38 (s, 2Н, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-); 3,42 (s, 6H, -C-CH2-O-CH2-CH2-COOPCP); 3,61 (t, 2Н, J=6 Hz, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-); 3,78 (t, 6H, J=6 Hz, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-); 5,03 (t, 1H, NH); 6,7 (t, 1H, NH).
(b) Приготовление трис(имидазола): монозамещенный триактивный эфир (150 мг, 0,11 ммоль) и 1-(3-аминопропил)-имидазол (33 мкл, 0,39 ммоль) растворили в сухом ТГФ (20 мл) и перемешивали в течение ночи при комнатной температуре. Раствор белого цвета концентрировали и очистили колоночной хроматографией, используя диоксид кремния (0,063-0,200 ммоль) с CHCl3:метанолом (50-90%) для получения (45 мг, выход 44%). *Н ЯМР 250 МГц (CDCl3/MeOD) δ: 1,45 (s, 9H, Boc); 2,0 (m, 6H, J=6 Hz, -CONH-СН2-СН2-СН2-ими); 2,4 (t, 6H, J=6 Hz, -O-CHz-CHz-CONH-); 2,5 (t, 2H, J=6 Hz, -CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NHBoc); 3,0 (m, 8H, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-CH2-ими, -CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NHBoc); 3,1 (t, 2H, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-NHBoc); 3,4 (b, 8H, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH- CH2-CH2-NHBoc, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-); 3,6 (m, 8H, J=6 Hz, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH- CH2-CH2-NHBoc,); 4,0 (t, 6H, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-CH2-ими); 5,5 (t, 1H, NH); 6,98 (s, 3Н, Ими); 7,06 (s, 3Н, Ими); 7,32 (t, 3Н, NH); 7,57 (s, 3Н, Ими). ESI-PC: 910.87[M+Na]+, 925.98 [M+K]+.
(c) Приготовление трис(имидазола) со свободным амином (2): Трис (имидазол) (40 мг, 0,045 ммоль) растворили в 6 мл смеси дихлорметана и трифторуксусной кислоты (2:1) и перемешивали в течение часа. Реакционную смесь концентрировали и испаряли несколько раз с четыреххлористым углеродом и сушили под высоким вакуумом для удаления трифторуксусной кислоты из смеси, чтобы получить (30 мг, выход 85%, b). 'H ЯМР 250 МГц (CDCl3/MeOD) δ: 1,9 (m, 6H, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-CH2-ими); 2,3 (m, 8H, J=6 Hz, -O-CH2-CH2-CONH-, -CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2); 2,9 (t, 2H, J=6 Hz, - CONH-CH2-CH2-CH2-ими); 3,0 (t, 2H, J=14 Hz, -CONH-CH2-CH2-NH2); 3,31 (t, 2H, J-6 Hz, -CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2); 3,4 (b, 8H, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-); 3,6 (m, 8H, J=6 Hz, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH- CH2-CH2-NH2); 4,0 (t, 6H, J=6 Hz, -CONH-CH2-СН2-СН2-ими); 7,26 (s, 3Н, Ими); 7,32 (s, 3Н, Ими); 8,82 (s, 3Н, Ими).
3. Приготовление комплекса трис(имидазол)-Zn(II) (3): Соединение 2 (30 мг, 0,038 ммоль) растворили в 1 мл метанола. К нему добавили 2-3 капли 1-нормального раствора NaOH и ZnCl2 (5 мг, 0,04 ммоль) и перемешивали в течение получаса. Осадок белого увета отфильтровали для получения (12 мг, выход 37%). *Н ЯМР 250 МГц (MeOD/D2O) δ: 1,8 (m, 6H, J=6 Hz, -CONH-СН2-СН2-СН2-ими); 2,4 (m, 8H, J=6 Hz, -O-CH2-CH2-CONH-, -CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2); 3,0 (t, 2H, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-СН2-ими); 3,0 (t, 2H, J=6 Hz, -CONH-CH2-CH2-NH2); 3,31 (b, 2H, -CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2); 3,4 (b, 8H, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2, -C-CH2-O-CH2-CH2- CONH-); 3,6 (m, 8H, -C-CH2-O-CH2-CH2-CONH-, -С-CH2-О-CH2-СН2-CONH-CH2-CH2-NH2); 4,2 (b, 6H, -CONH-СН2-СН2-СН2-ими); 7,19 (s, 3Н, Ими); 7,28 (s, 3H, Ими); 8,55(s, 3Н, Ими). ESI-PC:852.09[M+1]+.
R=O-CH2-CH2-CONH-CH2-CH2-NH2
[2-(2-миноэтилкарбомоил)-этоксиметил]-трис-[2-(N-(3-имидазол-1-ил-пропил))-этоксиметил]метан.
ПРИМЕР 8
Перекрестная реакция 6С6 с каталитическими сайтами гелатиназ
Было выявлено, что некоторое количество 6С6 совместно с активной ММП-9 очистилось от асцитной жидкости. Присутствие детектируемых количеств ММП9 в асцитной опухоли, индуцированной в мышах для размножения моноклональных антител было выявлено вестерн иимуноблоттингом и зимографией желатина (данные не показаны). Комплекс ММП9-антитело был очищен от асцитной жидкости мышей с использованием аффинной хроматографии белка G (белок G связывается с постоянным доменом антитела, давая переменному домену свободу взаимодействия с антигеном). Как показано на ФИГ.11А, совместно очищенная ММП9 была выявлена вестерн иммуноблоттингом очищенного комплекса 6С6-ММП9 с использованием имеющегося в продаже антитела против ММП9. Был определен диапазон с молекулярной массой ~82 а.е.м., соответствующий активной ММП9 без продомена. Этот диапазон не был обнаружен в нерелевантном контроле моноклонального тела мыши, который был очищен и проанализирован таким же способом. Эти результаты показали, что 6С6 сформировал специфический комплекс in vivo с эндогенной активной ММП-9 мыши.
Для дальнейшей проверки на связывание с активной формой высоко гомологичного фермента ММП2 аналогичные эксперименты по иммунопреципитации были выполнены in vitro. 6C6 инкубировали с очищенным фрагментом ММП2 в молярном отношении 3:1. Анализ SDS-PAGE иммунопреципитатов сефарозы белка А выявил образование специфического комплекса 6С6 с активным каталитическим фрагментом ММП2 (ФИГ.11В). Только гранулы белка А не могли привести к иммунопреципитации ММП2. Далее, было проверено связывание с неактивными зимогенными (латентными) формами ММП2 и 9. Поскольку все ММП были произведены как неактивные зимогены, они имеют пропептиды N-конца приблизительно 80-90 аминокислоты, которые блокируют активные сайты [Боде, В. и К. Маскос, Biol Chem, 2003. 384(6): p.863-72] (ФИГ.11D). Эксперименты по иммунопреципитации про-ММП2 и 9 были выполнены таким же образом. Что важно, антитело не связывалось с латентным ферментом (ФИГ.11С). Антитело 6С6 связывалось только с активной конформацией фермента, в которой комплекс белка и цинка в активном сайте открыт раствору.
Эти результаты подтвердили, что антитело 6С6 полученной и проанализированное относительно бионеорганического гаптена, имитирующего активный сайт, перекрестно реагировало с активными сайтами белка ММП2 и 9. Очевидно, что гаптен треугольника цинка способен имитировать трехмерную структуру соответствующего эпитопа цинка-гистидина в нативном белке. Стоит отметить, что распознание этого минимального структурного эпитопа металла-белка достаточно для выявления способности к перекрестной реакции с нативным ферментом. Связывание только с активированными ферментами, но не с их латентной формой, в которой продомен блокировал доступ к белковому эпитопу каталитического цинка (ФИГ.11D), показали прямое взаимодействие 6С6 с сайтом каталитического цинка. Нативный ММП-9, связанный in vivo с 6С6 продемонстрировал, что это антитело может образовывать специфический комплекс с этим ферментом в комплексной белковой среде.
Отличие активированных видов ферментов от латентной формы является уникальным и ценным функциональным свойством 6С6. Эта активность уникальна для 6С6 в противоположность другим антителам против ММП9. Это происходит потому, что иммунизация белками обычно дает эпитопы, направленные к поверхностным петлям, тогда как каталитические аминокислоты главным образом скрыты внутри расщелины на поверхности фермента. Эта часть молекулы считается как имеющая низкую иммуногенность. Следовательно, нейтрализация моноклональных антител, полученных традиционными способами (относительно нативных белков или фрагментов белков) обычно взаимодействует с областями, смежными с активным сайтом, а не с каталитическими остатками активного сайта, и ингибирует по механизму стерического препятствия. Такте антитела обычно связываются с неактивным прекурсором, а также с активной формой. Данный подход к иммунизации имитирующего активный сайт гаптена может позволить производить антитела, которые распознают белковые остатки каталитического металла в ММП, что не может быть достигнуто традиционными подходами к иммунизации белков.
ПРИМЕР 9
6С6 селективно ингибирует гелатиназы in vitro и in situ
Для определения способности 6С6 ингибировать ферменты в отношении ММП9 и ММП2 были выполнены анализы ингибирования с использованием небольших флуорогенных пептидных субстратов (7 аминокислот), которые охватывают углубление гелатиназ в активном сайте. Начальные скорости реакций измерили для нескольких концентраций моноклонального антитела. 6С6 ингибировало каталитическую активность обоих ферментов (ФИГ.12А-В). Конкурентный механизм ингибирования определили путем анализа активности ММП9 в присутствии различных концентраций ингибирующего антитела как функцию концентрации субстрата. Данные, показанные на ФИГ.12А в форме двойного обратного графика Линвивера-Берка, демонстрируют профиль конкурентного ингибирования. Была получена подгонка данных ингибирования к уравнению конкурентных систем ингибирования, Ki 1±0,1 мкмоль и 1,4±0,16 мкмоль для ММП9 и 2, соответственно. Также определили, что 6С6 не расщеплялся ММП-9 после инкубации в течение ночи с ММП-9 в высокой концентрации (30 мкмоль), демонстрируя, что наблюдавшееся ингибирование ММП9 антителом 6С6 происходило не из-за расщепления конкурентного субстрата. Кинетический анализ ММП9 был взят как представительный механизм ингибирования антителом 6С6, так как он, по замыслу, должен распознавать тот же эпитоп в разных ММП. Ингибирующее действие было одинаковым для видов каталитических фрагментов ММП2 и 9, а также для форм ферментов полной длины гелатиназ. Более конкретно, каталитические фрагменты рекомбинантных ММП9 и ММП2, содержащие каталитический домен, а также домен фибронектина, но не домен гемопексина, а также рекомбинантное минимальное каталитическое звено ММП9, содержащее только каталитический домен и не содержащее домены фибронектина и гемопексина, были ингибированы сходным образом по всей длине (активированной р-аминофенилртутьацетатом (АРМА)) гелатиназ, очищенных от сред клеток HeLa S3, инфицированных рекомбинантным вирусом коровьей оспы, кодирующим кДНК полной длины человеческих про-ММП2 и 9, как сказано выше [Ольсон, М.У. и др., J Biol Chem, 2000. 275(4): p.2661-8]. Эти результаты подтвердили, что ингибирование опосредовано прямым взаимодействием с каталитическим доменом и не зависит от взаимодействия с доменами гемопексина или фибронектина. Профиль конкурентного ингибирования предоставил дальнейшее указание на прямое взаимодействие с сайтом каталитического цинка. Нерелевантное моноклональное антитело, приготовленное сходным образом, не мешало фотолитической активности фермента.
Так, наблюдавшееся ингибирование не происходило из-за микроколичеств совместно очищенных загрязнителей. Антитела для этих экспериментов были очищены от культуры ткани и не содержали детектируемые количества активной ММП9 в доле очищенного антитела.
Для изучения селективности 6С6 ее реакционную способность проверили в отношении различных подгрупп матриксных металлопротеиназ, включая матрилизин (ММП7), ММП мембранного типа (МТ1-ММП) и родственный дисинтегрин (ADAM) фермент преобразующий α-фактор некроза опухоли (ТАСЕ). Структуры ядер этих ферментов в высокой степени сходны, изменяясь главным образом в периферийных петлях. Более конкретно, клеточный каркас цинка-гистидина хорошо консервативен, показывая типичную спираль, за которой следует петля, которая служит в качестве клеточного каркаса для трех гистидинных остатков, которые координируют ион каталитического цинка (ФИГ.13).
Подобные анализы ингибирования были выполнены с подходящими флуорогенными пептидными субстратами. Интересно, что ни ММП-7, ни ТАСЕ не были ингибированы в любой измеримой степени после инкубации с 6С6 в концентрациях до 30 мкмоль, указывая на значительный уровень селективности в отношении гелатиназ. МТ1-ММП была ингибирована 6С6, в меньшей степени, с Ki 14,4±0,75 мкмоль. Интересно, что источник этой селективности нельзя объяснить на базе только конструкции антитела для распознания консервативного клеточного каркаса цинка-гистидина, поскольку структуры ядер, особенно в активном сайте, в высокой степени сходны. Изменения в последовательностях, главным образом в периферийных петлях, диктуют различия в степени открытости фрагмента цинка-гистидина, в форме активного сайта, и электростатика его поверхности может отвечать за эту селективную модель ингибирования.
6С6 также проверили на перекрестную реакционную способность с различными, зависящими от цинка металлопротеазами, карбоновой ангидразой и спиртовой дегидрогеназой. Аналогично ММП, карбоновая ангидраза (КА) имеет ион каталитического цинка, четырехугольно координированный с тремя лигандами гистидина и молекулой воды. Следовательно, несколько мощных ингибиторов небольшой молекулы ММП (типа сульфонированного гидроксамата аминокислоты) действуют также как эффективные ингибиторы КА и наоборот. Некоторые JV-гидроксисульфонамиды, изученные ранее как ингибиторы КА, также проявляют ингибирующие свойства к ММП [Скоццафава, А. и К.Т. Супуран, J Med Chem, 2000. 43(20): p.3677-87]. Активный сайт спиртовой дегидрогеназы от термофильных бактерий (TbADH) включает другой компонент цинка-белка, в котором цинк связан с гистидином, цистеином, аспартатом и глутаматом, расположенными в расщелине. Соответствующие эксперименты по функциональному ингибированию в присутствии антитела в концентрации до 30 мкмоль не показали ингибирующего действия в отношении обоих ферментов. Стоит отметить, что активный сайт КА, расположенный в центральной области 10-нитевого, перекрученного р-листа, состоит из расщелины конусной формы глубиной 15 ангстрем с четырехугольным ионом Zn2+ на дне расщелины. В отличие от ингибиторов малых молекул, ион цинка должен быть слишком глубоко скрыт для взаимодействия с антителом. Важно, что эти эксперименты далее демонстрируют селективный ингибирующий профиль 6С6.
В клеточной среде ингибирующее действие 6С6 в отношении гелатиназ было проверено зимографией in situ с использованием природного субстрата гелатиназ - желатина.
Клетки человеческой фибросаркомы, НТ1080, выращенные мембране, экспрессирующей культуру, связанные с МТ1-ММП и секретирующие ММП-2 и 9 [Джиамбернарди, Т.А. и др., Matrix Biol, 1998. 16(8): p.483-96] были наложены на желатин, сопряженный с флуоресцеином (DQ-желатин). Как показано на ФИГ.14А-С, необработанные клетки НТ1080 проявляли значительную желатинолитическую активность на поверхности клеток. Обработка моноклональным антителом в количестве 5 мкмоль значительно уменьшила поверхностную желатинолитическую активность, аналогично ингибированию, наблюдавшемуся у ингибитора гелатиназы на основе механизма, SB-3СТ. SB-3CT имеет аналогичный ингибирующий профиль, так как он ингибирует и гелатиназы, и МТ1-ММП (значения Ki - 28, 400, и 110 нм для ММП2, ММП9 и МТ1-ММП, соответственно).
Вкратце, 6С6 ингибировало и расщелину синтетического пептида in vitro, и природный макромолекулярный субстрат in situ. 6C6 показало конкурентный режим ингибирования в отношении ММП9, аналогично механизму ингибирования ТИМП. Конкурентный ингибирующий профиль является дальнейшим указанием прямого взаимодействия с компонентом каталитического цинка. Важно, что 6C6 показало селективный ингибирующий профиль в отношении гелатиназ. Источник этой селективности нельзя объяснить нацеленностью антитела на консервативный фрагмент цинка-гистидина. Эти результаты предполагают, что это антитело взаимодействует с дополнительными детерминантами на поверхности фермента, которые отвечают за наблюдавшуюся специфичность.
ПРИМЕР 10
Воздействие обработки моноклинальным антителом 6C6 на DSS-индуцированный колит у мышей
Растет количество доказательств того, что ММП вовлечены в ремоделирование и деструкцию тканей, связанные с несколькими воспалительными состояниями, включая воспалительное заболевание кишечника (ВЗК) [Баф, М.Д. и др., Gastroenterology, 1999. 117(4): р. 814-22; Хойшкель, Р.Б. и др., Gut, 2000. 47(1): р.57-62; Фон Лямпе, Б. и др., Gut, 2000. 47(1): р.63-73; Киркегаард, Т. и др., Gut, 2004. 53(5): р.701-9].
Поэтому авторы настоящего изобретения исследовали игибирующее действие 6C6 против гелатиназы in vivo на мышах с экспериментальной моделью воспалительного заболевания кишечника.
Для исследования ингибирующей активности 6C6 была изучена способность обработки моноклональным антителом улучшать состояние DSS-индуцированного острого колита. Конкретно, 2% DSS были введены высоко восприимчивому штамму мышей C57BL/6 на пять дней. Лечение с помощью 6C6 проводили ежедневно путем внутри-брюшинных инъекций в дозе 1,5 или 5 мг/мышь, начиная с дня индуцирования. У мышей, подвергнутых индуцированию 2% DSS, развились симптомы острого колита с диареей, ректальным кровотечением и серьезной потерей веса.
Влияние лечения моноклональным антителом на контролируемый ежедневно индекс активности заболевания (DAI) (объединенная оценка массы тела, кровотечения и консистенции стула) показано на ФИГ.15А. У мышей, получавших моноклональное антитело, активность заболевания была меньше чем у контрольной группы (значаще с дня 6). Дополнительным макроскопическим проявлением DSS-индуцированного колита является сокращение длины толстой кишки (ФИГ.15В). Так, 30% сокращение длины толстой кишки было обнаружено у необработанных мышей по сравнению с животными, ранее не использованными в экспериментах, через 11 дней после введения DSS. Напротив, только среднее сокращение на 22% или 16% было получено у мышей, получавших 6С6 в дозах 1,5 и 5 мг/мышь, соответственно. Защитные эффекты 6С6 также были также подтверждены коэффициентом смертности от заболевания. Коэффициент смертности 60% был выявлен у необработанных мышей через 11 дней после индуцирования, тогда как коэффициент смертности только 33% наблюдали у мышей, получавших 6С6 (ФИГ.15С). Так, лечение мышей C57BL/6 антителом 6С6 привело к повышению коэффициента выживаемости в дополнение к уменьшенным проявлениям DSS-индуцированного колита.
В общем, эти результаты продемонстрировали терапевтический потенциал 6С6 как ингибитора гелатиназы.
ПРИМЕР 11
Определение характеристик комплекса ММП9-6С6 рентгеновской абсорбционной спектроскопией
Для дальнейшего исследования различий между активной ММП9 и ингибированным комплексом ММП9-6С6 была выполнена рентгеновская абсорбционная спектроскопия. На ФИГ.16 показаны собранные данные по флуоресценции. Эти данные представлены в форме спектров преобразования Фурье для представления радиального распределения различных атомов в первой и второй координационных оболочках иона каталитического цинка в ММП9. Явное изменение в спектрах радиального распределения для свободного и ингибированного фермента можно наблюдать выше уровня шума. Эти спектральные изменения указывают, что локальная среда иона каталитического цинка претерпевает структурные изменения после связывания с 6С6. Наблюдавшееся отклонение в пространственном распределении и интенсивностях пиков спектральных признаков преобразования Фурье между активным и ингибированным ферментом недвусмысленно указывает, что локальная структура иона каталитического цинка изменяется после формирования комплекса антитела.
Понятно, что определенные признаки изобретения, которые для ясности описаны в контексте отдельных вариантов осуществления, могут также быть представлены в сочетании в одном варианте осуществления. И наоборот, различные признаки изобретения, которые для краткости описаны в контексте одного варианта осуществления, могут быть представлены по отдельности или в любом подходящем сочетании.
Хотя изобретение описано в связи с его конкретными вариантами осуществления, очевидно, что специалистам в данном области будут очевидны многие альтернативы, модификации и изменения. Соответственно, предполагается охватить все такие альтернативы, модификации и изменения, которые подпадают под смысл и широкий объем прилагаемой формулы изобретения. Все публикации, патенты и патентные заявки, упомянутые в данном описании, включены в него в полном объеме путем ссылки в том же объеме, как если бы каждая отдельная публикация, патент или патентная заявка была конкретно и индивидуально указана как включенная в настоящий документ путем ссылки. Дополнительно, цитирование или идентификация любой ссылки в настоящей заявке не должно истолковываться как допущение, что такая ссылка является уровнем техники по отношению к настоящему изобретению.
СПРАВОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ (дополнительные материалы указаны в тексте)
1. Nagase, Н. и Woessner, J.F.Jr. (1999). Matrix metalloproteinases. Minireview. J. Biol. Chem. 274:21491-21494.
2. Bode, W., Fernandez-Catalan, C, Nagase, Н., and Maskos, K. (1999). Endoproteinase-protein inhibitor interactions. APMIS 107, 3-10.
3. Bode, W., Fernandez-Catalan, C, Tschesche, Н., Grams, F., Nagase, Н., and Maskos, K. (1999). Structural properties of matrix metalloproteinases. Cell. Mol. Life. Sci. 55, 639-652.
4. Borkakoti, N. (1998). Matrix metalloproteinases: variations on a theme. Prog. Biophys. Mol. Biol. 70, 73-94.
5. Brown, S., Bernardo, M.M., Li, Z.H., Kotra, L.P., Tanaka, Y., Fridman, R., and Mobashery, S. (2000). Potent и Selective Mechanism-Based Inhibition of Gelatinases. J. Am. Chem. Soc, 122, 6799-6800.
6. Fridman, R., Fuerst, Т.K., Bird, R.E., Hoyhtya, M., Oelkuct, M., Kraus, S., Komarek, D., Liotta, L.A., Berman, M.L., и Stetler-Stevenson, W.G. (1992). Domain structure of human 72-kDa гелатиназа/type IV collagenase. Characterization of proteolytic activity and identification of the tissue inhibitor of metalloproteinase-2 (TIMP-2) binding regions. J Biol. Chem. 267, 15398-405.
7. Gogly, В., Groult, N., Hornebeck, W., Godeau, G., и Pellat, B. (1998). Collagen Zymography as a Sensitive and Specific Technique for the Determination of Subpicogram Levels of Interstitial Collagenase. Anal. Biochem. 255, 211-216.
8. Gomez, D.E., Alonso, D.F., Yoshiji, Н., and Thorgeirsson, U.P. (1997). Tissue inhibitors of metalloproteinases: structure, regulation and biological functions. Eur. J. Cell. Biol. 74, 111-122.
9. Henriet, P., Blavier, L., и Declerck, Y.A. (1999). Tissue inhibitors of metalloproteinases (ТИМП) in invasion and proliferation. APMIS 107, 111-119.
10. Kleifeld, O., Kotra, L.P., Gervasi, D.C., Brown, S., Bernardo, M.M., Fridman, R., Mobashery, S., and Sagi, I. (2001). X-ray Absorption Studies of Human Matrix Metallo-proteinase-2 (MMP-2) Bound to a Highly Selective Mechanism-based Inhibitor. Comparison with the latent and active forms of the enzyme. J. Biol. Chem. 276, 17125-17131.
11. Korkhin, Y., Kalb (Gilboa), A.J., Peretz, M., Bogin, O., Burstein, Y., and Frolow, F. (1998). NADP-dependent Bacterial Alcohol Dehydrogenases: Crystal Structure, Co-factor-binding and Cofactor Specificity of the ADHs of Clostridium beijerinckii и Thermoanaerobacter brockii. J. Mol. Biol. 278, 967-981.
12. Morgunova, E., Tuuttila, A., Bergmann, U., Isupov, M., Lindqvist, Y., Schneider, G., and Tryggvason, K. (1999). Structure of Human Pro-Matrix Metalloproteinase-2: Activation Mechanism Revealed. Science 284, 1667-1670.
13. Bode, W., Femandez-Catalan, С, Tschesche, H., Grams, F., Nagase, H., and Maskos, K. (1999). Structural properties of matrix metalloproteinases. Cell. Mol. Life. Sci. 55, 639-652.
14. Netzel-Arnett, S., Mallya, S.K., Nagase, H., Birkedal-Hansen, H., and Van Wart, H.E. (1991). Continuously recording fluorescent assays optimized for five human matrix metalloproteinases. Anal. Biochem. 195, 86-92.
15. Rehr, J.J., Mustre de leon, J., Zabinsky, S.I., and Albers, R.C. (1991). J. Am. Chem. Soc. USA 113, 5135-5138.
16. Reponen, P., Sahlberg, C, Huhtala, P., Hurskainen, Т., Theslef F, L, and Tryggvason, K. (1992). Molecular cloning of murine 72-kDa type IV collagenase and its expression during mouse development. J. Biol. Chem. 267, 7856-7862.
17. Stem, E.A., Newville, M., Ravel, В., Yacoby, Y., and Haskel, D. (1995). The UWXAFS analysis package: philosophy и details. Physica В 208/209, 117-122.
18. Van Wart, H., and Birkedal-Hansen, H. (1990). The Cisteine Switch: A Principle of Regulation of Activity with Potential Applicability to the Entire Matrix Metalloproteinase Gene Family. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 5578-5582.
19. Will, H., Atkinson, SJ, Butler, G.S., Smith, В., and Murphy G. (1996). The soluble catalytic domain of membrane type 1 matrix metalloproteinase cleaves the pro-peptide of progelatinase A and initiates autoproteolytic activation. J. Biol. Chem. 271, 17119-17123.
20. Zabinsky, S.I., Rehr, J.J., Ankudinov, A., Albers, R.C., and Eller, M. J. (1995). Multiple-scattering calculations of x-ray-absorption spectra. Phys. Rev. В 52, 2995-3009.
Claims (11)
1. Соединение, имеющее общую формулу (I):
где m и n являются независимо целыми числами от 1 до 6;
каждый из X1-X3 и Y1-Y3 является О;
R1-R3 каждый независимо выбирают из группы, состоящей из водорода или алкила; и
R является O-(CH2)x-C(=O)NR'-(CH2)y-NHR',
причем x и y каждый являются независимо целыми числами от 1 до 6; и
R' выбирают из группы, состоящей из водорода и алкила.
где m и n являются независимо целыми числами от 1 до 6;
каждый из X1-X3 и Y1-Y3 является О;
R1-R3 каждый независимо выбирают из группы, состоящей из водорода или алкила; и
R является O-(CH2)x-C(=O)NR'-(CH2)y-NHR',
причем x и y каждый являются независимо целыми числами от 1 до 6; и
R' выбирают из группы, состоящей из водорода и алкила.
3. Антитело, содержащее область распознавания антигена, способную специфически связывать соединение по п.1 или 2 и получаемое с использованием соединения по п.2, причем соединение способно ингибировать активность ММП-2 и ММП-9 с константой ингибирования Ki менее 5 мкМ.
4. Антитело по п.3, которое содержит аминокислотные последовательности гипервариабельных областей, указанные в SEQ ID NO:7, 8, 9, 10, 11 и 12.
5. Использование соединения по п.1 или 2 для получения антитела, которое распознает ММП-2 и ММП-9.
6. Фармацевтическая композиция, содержащая терапевтическое количество антитела по п.3 или 4 и фармацевтически приемлемый носитель для лечения заболевания, связанной с несбалансированной и аномальной активностью ММП-2 или ММП-9.
7. Применение антитела по п.3 или 4 для приготовления медикамента для лечения заболевания, связанного с несбалансированной или аномальной активностью металлопротеинов.
8. Применение по п.7, где заболеванием является воспалительное заболевание кишечника.
9. Способ ингибирования активности ММП-2 или ММП-9 в пробе, причем способ включает контакт клетки in vitro с любым одним из антител по п.3 или 4, этим ингибируя активность матриксной активности ММП-2 или ММП-9 в пробе.
10. Антитела по п.3 или 4, прикрепленные к твердой подложке.
11. Композиция для определения ММП-2 или ММП-9, содержащая эффективное количество антитела по п.3 и буферный раствор.
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US90285407P | 2007-02-23 | 2007-02-23 | |
US60/902,854 | 2007-02-23 | ||
PCT/IL2008/000230 WO2008102359A1 (en) | 2007-02-23 | 2008-02-21 | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2009132006A RU2009132006A (ru) | 2011-02-27 |
RU2503682C2 true RU2503682C2 (ru) | 2014-01-10 |
Family
ID=39534848
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2009132006/04A RU2503682C2 (ru) | 2007-02-23 | 2008-02-21 | Антитела и содержащие их фармацевтические композиции, подходящие для ингибирования активности металлопротеинов |
Country Status (11)
Country | Link |
---|---|
US (5) | US8324355B2 (ru) |
EP (1) | EP2155691B1 (ru) |
JP (2) | JP5513130B2 (ru) |
KR (1) | KR20090113908A (ru) |
CN (1) | CN101702906B (ru) |
BR (1) | BRPI0807256A2 (ru) |
CA (1) | CA2678304A1 (ru) |
IL (2) | IL224121A (ru) |
MX (1) | MX2009008914A (ru) |
RU (1) | RU2503682C2 (ru) |
WO (1) | WO2008102359A1 (ru) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2714043C2 (ru) * | 2014-08-13 | 2020-02-11 | Эа Фарма Ко., Лтд. | Антитела, специфичные к ммр9 |
Families Citing this family (19)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA2678304A1 (en) | 2007-02-23 | 2008-08-28 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
CA2707637A1 (en) | 2007-12-17 | 2009-06-25 | Dyax Corp. | Compositions and methods for treating osteolytic disorders comprising mmp-14 binding proteins |
CA2717803A1 (en) * | 2008-03-03 | 2009-09-11 | Dyax Corp. | Metalloproteinase 9 and metalloproteinase 2 binding proteins |
EP2403964B1 (en) * | 2009-03-02 | 2021-09-08 | Massachusetts Institute of Technology | Methods and products for in vivo enzyme profiling |
CA2787311C (en) | 2010-01-27 | 2017-08-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies that inhibit metalloproteins |
NZ606880A (en) | 2010-08-27 | 2015-01-30 | Gilead Biologics Inc | Antibodies to matrix metalloproteinase 9 |
CN103370337B (zh) * | 2010-10-28 | 2015-12-09 | 耶达研究及发展有限公司 | 用于产生针对金属酶的抗体的方法 |
US10314909B2 (en) | 2011-10-21 | 2019-06-11 | Dyax Corp. | Combination therapy comprising an MMP-14 binding protein |
EA201491599A1 (ru) | 2012-02-29 | 2015-05-29 | Джилид Байолоджикс, Инк. | Антитела к матриксной металлопротеиназе 9 |
CN118010994A (zh) | 2013-06-07 | 2024-05-10 | 麻省理工学院 | 基于亲和力检测配体编码的合成性生物标记物 |
CN106132398A (zh) | 2014-04-03 | 2016-11-16 | 瑞士杰特贝林生物制品有限公司 | 免疫球蛋白的雾化 |
US11019620B2 (en) | 2014-05-19 | 2021-05-25 | Qualcomm Incorporated | Apparatus and method for inter-band pairing of carriers for time division duplex transmit- and receive-switching and its application to multiplexing of different transmission time intervals |
US11432305B2 (en) * | 2014-05-19 | 2022-08-30 | Qualcomm Incorporated | Apparatus and method for synchronous multiplexing and multiple access for different latency targets utilizing thin control |
EP3424168B1 (en) * | 2016-04-04 | 2022-06-01 | Samsung Electronics Co., Ltd. | Method and apparatus for transmitting and receiving feedback in wireless communication system |
US11352436B2 (en) * | 2017-02-10 | 2022-06-07 | Washington University | Antibodies to TIP1 and methods of use thereof |
WO2019017338A1 (ja) | 2017-07-18 | 2019-01-24 | 第一三共株式会社 | 活性型mmp-9結合ペプチド |
WO2020150560A1 (en) | 2019-01-17 | 2020-07-23 | Massachusetts Institute Of Technology | Sensors for detecting and imaging of cancer metastasis |
IL264768A (en) | 2019-02-10 | 2020-08-31 | Sagi Irit | ANTI-MATRIX METALLOPROTEINASE 7 (MMP-7) inhibitory antibody and its use |
US11332546B2 (en) | 2019-05-21 | 2022-05-17 | The Regents Of The University Of California | Protease inhibitory antibodies and methods of use thereof |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2193038C2 (ru) * | 1995-11-24 | 2002-11-20 | Йеда Рисерч Энд Дивелопмент Ко., Лтд. | Способ получения металлсодержащих производных бактериохлорофилла, новые металлированные производные бактериохлорофилла, фармацевтическая композиция |
WO2004087042A2 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
EA007273B1 (ru) * | 1998-12-24 | 2006-08-25 | Йеда Рисерч Энд Дивелопмент Ко.Лтд. | Выделенный полипептид, связывающийся с каспазой -8, и способы его применения |
Family Cites Families (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4595700A (en) * | 1984-12-21 | 1986-06-17 | G. D. Searle & Co. | Thiol based collagenase inhibitors |
GB8827305D0 (en) | 1988-11-23 | 1988-12-29 | British Bio Technology | Compounds |
DE69309047T2 (de) | 1992-04-07 | 1997-09-11 | British Biotech Pharm | Hydroxamsäure enthaltende collagenase-inhibitoren und cytokinaktivitätsinhibitoren |
GB9320660D0 (en) | 1993-10-07 | 1993-11-24 | British Bio Technology | Inhibition of cytokine production |
WO1995029689A1 (en) | 1994-04-28 | 1995-11-09 | Merck & Co., Inc. | N-carboxyalkyl derivatives as antidegenerative active agents |
AU2394795A (en) | 1994-04-28 | 1995-11-29 | Du Pont Merck Pharmaceutical Company, The | Hydroxamic acid and amino acid derivatives and their use as anti-arthritic agents |
GB9416897D0 (en) | 1994-08-20 | 1994-10-12 | British Biotech Pharm | Metalloproteinase inhibitors |
DK0757984T3 (da) | 1995-08-08 | 2003-03-03 | Ono Pharmaceutical Co | Hydroxamsyrederivater, der kan anvendes til inhibering af gelatinase |
ATE225343T1 (de) | 1995-12-20 | 2002-10-15 | Hoffmann La Roche | Matrix-metalloprotease inhibitoren |
ES2217386T3 (es) | 1996-01-02 | 2004-11-01 | Aventis Pharmaceuticals Inc. | Compuestos de acido(aril, heteroaril, arilmetil o heteroarilmetil) hidroxamico sustituido. |
KR20000022532A (ko) | 1996-06-27 | 2000-04-25 | 오노 야꾸힝 고교 가부시키가이샤 | 아릴(설파이드, 설폭시드 및 설폰)유도체 및 이를 활성 성분으로 함유하는 약물 |
US6174915B1 (en) * | 1997-03-25 | 2001-01-16 | Agouron Pharmaceuticals, Inc. | Metalloproteinase inhibitors, pharmaceutical compositions containing them and their pharmaceutical uses |
ES2216614T3 (es) * | 1998-07-30 | 2004-10-16 | Warner-Lambert Company Llc | Sulfonamidas triciclicas y sus derivados como inhibidores de metaloproteinasas de matriz. |
CA2678304A1 (en) | 2007-02-23 | 2008-08-28 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
CA2787311C (en) | 2010-01-27 | 2017-08-15 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies that inhibit metalloproteins |
-
2008
- 2008-02-21 CA CA002678304A patent/CA2678304A1/en not_active Abandoned
- 2008-02-21 WO PCT/IL2008/000230 patent/WO2008102359A1/en active Application Filing
- 2008-02-21 BR BRPI0807256-6A2A patent/BRPI0807256A2/pt not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 JP JP2009550773A patent/JP5513130B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2008-02-21 CN CN200880012673.1A patent/CN101702906B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2008-02-21 MX MX2009008914A patent/MX2009008914A/es not_active Application Discontinuation
- 2008-02-21 KR KR1020097019866A patent/KR20090113908A/ko not_active Application Discontinuation
- 2008-02-21 EP EP08710230.7A patent/EP2155691B1/en active Active
- 2008-02-21 RU RU2009132006/04A patent/RU2503682C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2008-02-21 US US12/449,728 patent/US8324355B2/en active Active
-
2012
- 2012-08-28 US US13/596,090 patent/US8486653B2/en active Active
-
2013
- 2013-01-06 IL IL224121A patent/IL224121A/en active IP Right Grant
- 2013-01-06 IL IL224120A patent/IL224120A/en active IP Right Grant
- 2013-04-29 US US13/872,265 patent/US9416195B2/en active Active
- 2013-07-19 JP JP2013150040A patent/JP5792231B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
2016
- 2016-05-23 US US15/161,375 patent/US9902783B2/en active Active
-
2018
- 2018-01-09 US US15/865,479 patent/US20180134808A1/en not_active Abandoned
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2193038C2 (ru) * | 1995-11-24 | 2002-11-20 | Йеда Рисерч Энд Дивелопмент Ко., Лтд. | Способ получения металлсодержащих производных бактериохлорофилла, новые металлированные производные бактериохлорофилла, фармацевтическая композиция |
EA007273B1 (ru) * | 1998-12-24 | 2006-08-25 | Йеда Рисерч Энд Дивелопмент Ко.Лтд. | Выделенный полипептид, связывающийся с каспазой -8, и способы его применения |
WO2004087042A2 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
MILER G.P. et al, Expanding the 43C9 class of catalytic antibodies using chain-shuffmg approach, Bioorg. Med. Chem., 1997, v.5(3), p.581-590. * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2714043C2 (ru) * | 2014-08-13 | 2020-02-11 | Эа Фарма Ко., Лтд. | Антитела, специфичные к ммр9 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
KR20090113908A (ko) | 2009-11-02 |
EP2155691A1 (en) | 2010-02-24 |
JP5792231B2 (ja) | 2015-10-07 |
AU2008218525A1 (en) | 2008-08-28 |
US8486653B2 (en) | 2013-07-16 |
WO2008102359A9 (en) | 2009-05-22 |
US20180134808A1 (en) | 2018-05-17 |
JP2013241435A (ja) | 2013-12-05 |
US20130030158A1 (en) | 2013-01-31 |
IL224120A (en) | 2016-05-31 |
CA2678304A1 (en) | 2008-08-28 |
EP2155691B1 (en) | 2016-01-13 |
US9416195B2 (en) | 2016-08-16 |
CN101702906B (zh) | 2014-02-12 |
JP2010519289A (ja) | 2010-06-03 |
CN101702906A (zh) | 2010-05-05 |
MX2009008914A (es) | 2009-08-28 |
US20160257765A1 (en) | 2016-09-08 |
WO2008102359A1 (en) | 2008-08-28 |
IL224121A (en) | 2016-05-31 |
RU2009132006A (ru) | 2011-02-27 |
US8324355B2 (en) | 2012-12-04 |
BRPI0807256A2 (pt) | 2014-07-22 |
US20130224225A1 (en) | 2013-08-29 |
US20100233188A1 (en) | 2010-09-16 |
JP5513130B2 (ja) | 2014-06-04 |
US9902783B2 (en) | 2018-02-27 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2503682C2 (ru) | Антитела и содержащие их фармацевтические композиции, подходящие для ингибирования активности металлопротеинов | |
US8841108B2 (en) | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins | |
US9217041B2 (en) | Antibodies that inhibit metalloproteins | |
EP2632956B1 (en) | Methods of generating antibodies to metalloenzymes | |
AU2008218525B2 (en) | Antibodies and pharmaceutical compositions containing same useful for inhibiting activity of metalloproteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20210222 |