RU2448726C2

RU2448726C2 - Содержащий g-csf агент для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии

Info

Publication number: RU2448726C2
Application number: RU2009116833/15A
Authority: RU
Inventors: Кьянг-Соо КИМ (KR); Кьянг-Соо КИМ; Ги-Йонг ГИН (KR); Ги-Йонг ГИН
Original assignee: Донг- А Фарм.Ко., Лтд.
Priority date: 2006-10-30
Filing date: 2007-10-29
Publication date: 2012-04-27
Also published as: US20110076247A1; BRPI0718099A2; CA2667178C; US20100048869A1; KR100812274B1; WO2008054098A1; AU2007314854B2; JP2010508265A; CA2667178A1; PT2077852E; ES2448837T3; EP2077852A4; JP5416589B2; AU2007314854A1; NZ576498A; EP2077852A1; CN101528251A; CN101528251B; HK1132461A1; EP2077852B1

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается агента для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии, включающего в качестве активного ингредиента гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF). Изобретение обеспечивает повышение скорости нервной проводимости, улучшение болевой чувствительности, регенерацию кровеносных сосудов в периферических тканях и реабилитацию пораженных нервных тканей. 2 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 пр., 7 ил., 7 табл.

Description

Область, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к агенту для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии, включающему в качестве активного ингредиента гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF, Г-КСФ).

Предпосылки создания изобретения

Диабет является основным заболеванием взрослых в мире, а в последнее время в Корее его распространенность достигла с 7 до 10% при быстром росте экономических затрат. Кроме того, заболевание стало основной причиной смерти людей в возрасте 60-70 лет.

Диабет представляет собой синдром, вызванный неспособностью секретировать инсулин, функция которого заключается в переносе глюкозы в клетки, или инсулин неспособен хорошо функционировать, так что глюкоза не переносится в клетки. В этом случае глюкоза, не перенесенная в клетки, остается в крови. Поэтому наблюдается гипергликемия, повышенный уровень глюкозы в крови, и глюкоза выводится из организма с мочой. Продолжающаяся гипергликемия приводит в результате к нарушению обмена белков и липидов и служит причиной физиологических и биохимических проблем в организме, тем самым вызывая осложнения.

Диабетическая периферическая нейропатия является одним из трех главных осложнений диабета наряду с диабетической ретинопатией и диабетической нефропатией. Болезнь может не иметь никаких симптомов, а может проявляться сильной болью или потерей чувствительности в ногах, мышечной слабостью или автономной нейропатией. А лечить ее очень трудно.

Распространенность диабетической периферической нейропатии составляет 5-60%, что говорит о большой разнице в зависимости от исследователей, а больные диабетом составляют около 12%. Сообщают, что через 25 лет распространенность диабета будет составлять около 25%.

Обычные симптомы диабетической периферической нейропатии выражаются параэстезией, такой как онемение кистей рук и ступней ног, обычно ступней, жгучая боль, колющая боль, ощущение, как будто ступаешь по песку или покрытому чем-то полу, потеря чувствительности, холодные ступни даже летом.

На ранней стадии заболевания могут наблюдаться только симптомы параэстезии при стимуляции сенсорного нерва, без изменения кожной чувствительности. Однако, если при прогрессировании заболевания происходит дальнейшее поражение сенсорного нерва, на участке кожи, контролируемом сенсорным нервом, может развиться чувствительность к температуре, боли, вибрации или прикосновению.

Причиной диабетической периферической нейропатии является высокое содержание сахара в крови, так что внутри нервных клеток происходят биохимические и конформационные изменения (атрофия аксонов, припухлость узлов, изменения капилляров и т.п.). Однако, подробности не являются определенными.

В качестве метода лечения такой диабетической периферической нейропатии упоминают терапию нервного блока, регуляцию обмена веществ, фармакотерапию и т.п. Однако, что касается фармакотерапии, то нет ни одного лекарства для эффективного значительного ослабления симптома, а также для реального лечения.

Поэтому совершенно необходимы изучение механизма диабетической периферической нейропатии и серьезная разработка лекарств на основании этого изучения.

Между тем гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF) осуществляет специфические функции в отношении клеток-предшественников нейтрофилов, он промотирует пролиферацию и дифференцировку нейтрофилов и повышает антителозависимую клеточную цитотоксичность нейтрофилов. Кроме того, G-CSF также индуцирует опосредованный IgA фагоцитоз и повышает способность продуцирования супероксида.

Следовательно, G-CSF усиливает реакцию на хемотаксический пептид, который, как известно, принимает участие в ингибировании инфекции и ослаблении лихорадки. Помимо этого, G-CSF действует на более дифференцированные миелоидные клетки по сравнению с другими CSF, такими как гранулоцитарно-макрофагальный CSF (GM-CSF). Поэтому предполагалось, что он оказывает меньшее воздействие на бластные клетки больных лейкозом in vivo.

Соответственно, G-CSF широко используется в качестве лекарства для индукции нейтрофилов в химиотерапии рака, терапии рака с помощью мегадоз лекарства, комбинированной терапии с лучевой терапией и после трансплантации костного мозга (Julie V. Vores et al., Clinical Applications of Hematopoietic Growth Factors, Journal of Clinical Oncology, 13: 1023-1035, 1995).

G-CSF используется, главным образом, как гемопоэтический агент, который в основном функционирует при пролиферации и дифференцировке нейтрофилов, при нейтропении, вызванной трансплантацией костного мозга и введением противоракового лекарства. Его также используют для увеличения нейтрофилов у пациентов с серьезной хронической нейтропенией, такой как миелодиспластические синдромы, апластическая анемия или врожденная, циклическая, идиопатическая нейтропения, и ВИЧ инфекция, и для предупреждения инфекций, вызванных нейтропенией.

Нейтрофилы представляют собой фагоцитарные клетки, играющие важную роль в механизме защиты хозяина. В случае нормальной иммунной функции и нормального гемопоэтического статуса число нейтрофилов повышается при инфекции. Состояние, при котором число нейтрофилов понижается до 1500 клеток/мм² или менее, носит название нейтропения. Когда число нейтрофилов равно 500 клеток/мм² или менее, нормальный механизм защиты хозяина в значительной мере поврежден, так что значительно повышается опасность бактериальной инфекции.

В настоящее время, помимо клинического применения вышеуказанного G-CSF при нейтропении с предположением, что G-CSF позволяет эффективно предупреждать и лечить различные инфекционные заболевания, такие как пневмония и сепсис, усиливая функции, индуцирующие продуцирование нейтрофилов, проводятся исследования по самостоятельному применению G-CSF или по совместному его применению с антибиотиками при инфекционных заболеваниях.

Зрелый белок G-CSF состоит из 4 альфа-спиралей и содержит 2 дисульфидные связи с молекулярной массой около 20000, треониновый заместитель в положении 133 является единственным, в котором добавлен O-связанный углеводный остаток. Рецепторы G-CSF на поверхности гранулоцитов имеют молекулярную массу около 150000, состоят из единственной пептидной цепи и являются N-гликозилированными. По мере созревания клеток число рецепторов увеличивается, достигая нескольких сотен на клетку.

В качестве лекарства с применением G-CSF в корейской патентной заявке No. 10-2005-7019543 (No. публикации 2005-0114275) раскрывается агент, содержащий в качестве активного ингредиента для лечения диабета, по меньшей мере, один фактор рекрутмента стволовых клеток, такой как G-CSF.

В корейской патентной заявке No. 10-2004-7007275 (No. публикации 2005-0044444) раскрывается лекарство, содержащее цитокин, выбранный из группы, состоящей из цитокина для активации моноцита или макрофага, цитокина, секретируемого при использовании активированного моноцита или макрофага, и цитокина, секретируемого при использовании гемопоэтических клеток, которые экспрессируют рецепторы G-CSF, в качестве активного ингредиента для мобилизации плюрипотентных стволовых клеток из ткани в периферическую кровь.

Однако исследования по поиску нового применения G-CSF в качестве лекарственного средства для диабетической периферической нейропатии еще продолжаются.

Сущность изобретения

Целью настоящего изобретения является создание агента для регенерации периферических нервов, содержащего в качестве активного ингредиента гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF).

Достижение вышеуказанной цели возможно достичь с помощью агента для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии, содержащего в качестве активного ингредиента гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF).

Согласно другому аспекту настоящего изобретения предусматривается агент для регенерации периферических нервов, содержащий в качестве активного ингредиента гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF).

По настоящему изобретению G-CSF восстанавливает (регенерирует) кровеносные сосуды в тканях периферических нервов и реабилитирует пораженные нервные ткани, тем самым воздействуя на повышение скорости нервной проводимости и улучшение чувствительности к боли. Поэтому агент по настоящему изобретению может быть полезным агентом для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии.

Описание фигур

Вышеприведенные и другие цели, признаки и другие преимущества настоящего изобретения можно легче понять из нижеприведенного подробного описания в сочетании с прилагаемыми фигурами, в которых:

на Фиг.1 представлена диаграмма, иллюстрирующая скорость нервной проводимости, измеряемую до и после введения G-CSF (группа, получающая G-CSF) и физиологического раствора (контрольная группа);

на Фиг.2 представлена диаграмма, иллюстрирующая чувствительность к боли, измеряемую до и после введения G-CSF (группа, получающая G-CSF) и физиологического раствора (контрольная группа);

на Фиг.3 представлен снимок окрашивания толуидиновым синим хвостовых нервов крыс в Контрольной Группе (получающей физиологический раствор);

на Фиг.4 представлен снимок окрашивания толуидиновым синим хвостовых нервов крыс в группе, получающей G-CSF;

на Фиг.5 представлена сделанная с помощью трансмиссионного электронного микроскопа (ТЕМ) микрофотография хвостовых нервов крыс в Контрольной Группе (получающей физиологический раствор);

на Фиг.6 представлена сделанная с помощью трансмиссионного электронного микроскопа (ТЕМ) микрофотография хвостовых нервов крыс в группе, получающей G-CSF; и

на Фиг 7 представлен график, иллюстрирующий результаты клинической оценки (по Торонтской шкале (системе оценки) нейропатии (предложенной в Университете Торонто)) степени диабетической периферической нейропатии пациентов через 1 неделю, 15 дней, 1 месяц, 2 месяца и 3 месяца после введения G-CSF.

Подробное описание изобретения

Авторы настоящего изобретения проводили исследования различной физиологической активности с применением гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (далее в данном описании называемого 'G-CSF'), и в результате было найдено, что G-CSF восстанавливает кровеносные сосуды в тканях периферических нервов и реабилитирует пораженные нервные ткани, тем самым повышая скорость нервной проводимости и улучшая чувствительность к боли (болевую чувствительность). Поэтому G-CSF по настоящему изобретению может являться полезным агентом для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии. Настоящее изобретение выполнено на основании этих данных.

Лекарственный агент (препарат) по настоящему изобретению содержит G-CSF в качестве активного ингредиента. Кроме того, агент характеризуется способностью восстанавливать (регенерировать) периферические нервы.

Когда агент по настоящему изобретению вводят животной модели диабета типа II, страдающей ожирением крысе Отсука Лонг-Эванс Токусима (OLETF), повышается скорость нервной проводимости и улучшается болевая чувствительность. Далее, когда агент по настоящему изобретению вводят пациенту в клиническом тесте и оценивают диабетическую периферическую нейропатию по Торонтской шкале клинической оценки нейропатии, улучшается степень диабетической периферической нейропатии и повышается скорость нервной проводимости.

В тесте на животных с применением в качестве животной модели диабета типа II крысы OLETF в качестве доказательства регенерации периферических нервов можно наблюдать регенерированные нервные волокна и ремиелинизированные аксоны хвостового нерва в группе, получающей G-CSF (см. Фиг.3, 4, 5 и 6).

Полагают, что G-CSF регенерирует периферические нервы и лечит диабетическую периферическую нейропатию, направляя (выделяя) функциональные стволовые клетки из костного мозга в периферическую кровь и индуцируя дифференцировку выделенных клеток для регенерации нервных клеток и кровеносных сосудов в ткани периферических нервов и восстановления пораженных нервных тканей, и нормально подавая кровь к нервам.

Обычно G-CSF, который можно применять в настоящем изобретении, предпочтительно, представляет собой природный (натуральный) G-CSF или рекомбинантный G-CSF. Более того, G-CSF, который можно применять в настоящем изобретении, представляет собой G-CSF, который имеет такую же аминокислотную последовательность, что и природный G-CSF.

G-CSF по настоящему изобретению можно получать, выделяя из организма млекопитающего, синтезируя химическими методами или используя генетические методы, экспрессировать последовательность экзогенной ДНК, полученной клонированием геномной или кДНК, или синтезом ДНК в прокариотической или эукариотической клетке-хозяине.

В настоящее время подходящий прокариотический хозяин включает различные бактерии (например, Е.coli), а подходящий эукариотический хозяин включает дрожжи (например, S.Serevisiae) и клетки млекопитающих (например, клетки яичника китайского хомячка, клетки обезьян).

Хотя рекомбинантный G-CSF, в особенности G-CSF, полученный при использовании Е.coli, является предпочтительным с точки зрения промышленного получения, настоящее изобретение включает применение любой из вышеуказанных форм G-CSF или всех G-CSF. В данной работе можно использовать получаемый от различных производителей и очищаемый G-CSF и его аналоги. Наиболее предпочтительно применять рекомбинантный человеческий гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (rhG-CSF).

Терапевтический агент по настоящему изобретению, включающий G-CSF в качестве активного ингредиента, может содержать активный ингредиент в количестве от 0.0001 до 50% вес. от общего веса композиции терапевтического агента.

Помимо этого активного ингредиента, терапевтический агент по настоящему изобретению может далее включать, по меньшей мере, один активный ингредиент, имеющий такую же, как у указанного выше активного ингредиента, или аналогичную ей.

Терапевтический агент по настоящему изобретению, содержащий в качестве активного ингредиента G-CSF, для приготовления предпочтительной фармацевтической композиции, может, помимо этого активного ингредиента, включать, по меньшей мере, один фармацевтически приемлемый носитель.

Для приготовления композиции в жидком растворе жидкий раствор, предпочтительный в качестве фармацевтически приемлемого носителя, пригодного для стерилизации и для применения in vivo, можно выбирать из группы, состоящей из физиологического раствора, стерилизованной воды, раствора Рингера, буферного солевого раствора, раствора альбумина для инъекций, раствора декстрозы, раствора мальтодекстрина, глицерина, этанола или их смеси. При необходимости композиция может включать другие типичные добавки, такие как антиоксидант, буфер или бактериостатический агент.

Кроме того, для приготовления композиции в форме, пригодной для инъекций, такой как раствор, суспензия или эмульсия, в форме пилюль, капсул, гранул или таблеток можно добавлять разбавитель, диспергирующий агент, поверхностно- активное вещество, связующее или смазку. Композицию можно использовать, связывая сайт-специфическое антитело или другой лиганд с носителем таким образом, чтобы композиция имела сайт-специфическую функцию. Далее, предпочтительно, композицию можно готовить в соответствии от каждого заболевания или в зависимости от компонента соответствующим методом, известным в данной области техники, раскрываемым в Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA.

Фармацевтическая форма терапевтического агента по настоящему изобретению, содержащего G-CSF в качестве активного ингредиента, может представлять собой гранулы, порошки, покрытые оболочкой таблетки, капсулы, суппозитории, сиропы, экстракты, суспензии, эмульсии, капли, растворы для инъекций, а также препараты с пролонгированным высвобождением активного соединения.

Терапевтический агент по настоящему изобретению, содержащий G-CSF в качестве активного ингредиента, можно вводить обычным способом: внутривенно, внутриартериально, интраперитонеально, надчревно, интрадермально, назально, в виде ингаляций, топически, ректально, перорально, внутриглазным или подкожным способом. Способ введения особенно не ограничивается, но предпочтителен непероральный способ, а более предпочтительным является подкожное введение.

Дозы терапевтического агента по настоящему изобретению можно корректировать в зависимости от различных факторов, таких как тип заболевания, степень заболевания, тип и содержание активного ингредиента и других компонентов в композиции, характер фармацевтической формы, возраст, вес, общее состояние здоровья, пол и рацион пациента, время введения, способ введения скорость тока композиции, длительность лечения и другие одновременно применяемые лекарства. Когда G-CSF вводят взрослым один раз в сутки от 1 дня до 1 недели, его можно вводить в дозе от 0.01 мкг/кг/день до 100 мкг/кг/день и, предпочтительно, от 0.01 мкг/кг/день до 10 мкг/кг/день.

Терапевтический агент по настоящему изобретению можно использовать самостоятельно (индивидуально) или в комбинации с терапией нервного блока, регуляцией обмена веществ и т.п.

Терапевтический агент по настоящему изобретению восстанавливает пораженные нервные ткани за счет регенерации нервных клеток и кровеносных сосудов в тканях периферических нервов и равномерно снабжает кровью нервные ткани, тем самым повышая скорость нервной проводимости и улучшая болевую чувствительность.

Соответственно, терапевтический агент по настоящему изобретению восстанавливает пораженные нервные ткани за счет регенерации нервных клеток и кровеносных сосудов в тканях периферических нервов и равномерно снабжает кровью нервные ткани, тем самым повышая скорость нервной проводимости и улучшая болевую чувствительность. Поэтому этот агент может применяться для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии.

Далее описываются Примеры по настоящему изобретению и Сравнительные Примеры. Нижеприведенные Примеры и Сравнительные Примеры даются только с целью иллюстрации и никоим образом не претендуют на ограничение объема настоящего изобретения.

Пример 1: Тест на животных для подтверждения терапевтического действия G-CSF на диабетическую периферическую нейропатию

Животную модель диабетической периферической нейропатии получают, используя метод, аналогичный методу, описанному в литературе [Nakamura J et al., Diabetes Research Clinical Practice, 2001 Jan; 51(1): 9-20].

А именно, полученных генетическими манипуляциями животных моделей диабета типа II крыс OLETF разводят (выращивают) в хорошо освещенном и проветриваемом месте, поддерживая температуру 20-24°С и влажность 40-70%. Во время разведения (выращивания) животные имеют свободный доступ к обычной твердой лабораторной пище и водопроводной воде. Примерно, через 10 недель вместо водопроводной воды вводят 30% вес./об. раствор сахара в воде. Общее время введения сахарной воды составляет 24 недели, и через каждые 5 недель проверяют вес и содержание сахара в крови. Примерно, через 34 недели определяют вес и содержание сахара в крови в группе, получающей G-CSF и в контрольной группе. Результаты представлены в Таблице 1.

Крыс OLETF в возрасте, примерно, 34 недели делят на группу, получающую G-CSF, и контрольную группу. В группе, получающей G-CSF, животным в течение 5 дней подряд подкожно в область живота инъецируют по 100 мкг/кг/день G-CSF (Лейкостим (Leucostim), производимый Dong-A PHARM. Co., LTD). В то же время животным контрольной группы в течение 5 дней подряд подкожно в область живота инъецируют по 0.2 мл физиологического раствора.

Перед введением G-CSF измеряют разницу между скоростями нервной проводимости хвостовых нервов двух групп животных. Затем, через 4 недели после введения G-CSF, измеряют скорость нервной проводимости и болевую чувствительность.

Результаты представлены в нижеприведенных Таблицах 2 и 3 и на Фиг.1 и 2. Через 4 недели после введения лекарства удаляют хвостовые нервы крыс в группе, получавшей G-CSF, и в контрольной группе. Нервы окрашивают толуидиновым синим и наблюдают под микроскопом, как показано на Фиг.3 и 4. Извлекают нервные ткани хвостовых нервов крыс в группе, получавшей G-CSF, и в контрольной группе. Поводят иммуноокрашивание тканей и под электронным микроскопом наблюдают тонкие структурные изменения, показанные на Фиг.5 и 6.

Таблица 1
Вес и содержание сахара в крови 34-недельных крыс OLETF
Классификация	n (число животных)	Вес (г)	Содержание сахара в крови (мг/дл)
	n (число животных)

Тест-группа (получающая G-CSF)	8	407	589
		492	500
		461	422
		436	411
		543	504
		503	482
		475	448
		355	469
Контрольная группа (получающая физиологический раствор)	8	460	429
		452	445
		418	463
		480	538
		449	456
		440	426
		438	560
		479	528

Таблица 2
Скорость нервной проводимости (м/сек)
Классификация	День 0	День 28
Контрольная группа (получающая физиологический раствор)	32.63±1.6 м/сек	35.58±0.9 м/сек
Тест-группа (получающая G-CSF)	31.93±1.5 м/сек	40.68±1.9 м/сек

Таблица 3
Болевая чувствительность (s)
Классификация	День 0	День 28
Контрольная группа (получающая физиологический раствор)	3.6±0.8 s	5.3±0.4 s
Тест-группа (получающая G-CSF)	3.8±0.5 s	10.5±2.9 s

Как показано в Таблице 2 и на Фиг.1, подтверждается, что в группе, получающей G-CSF, повышается скорость нервной проводимости после введения G-CSF, а также подтверждается, что в группе, получающей G-CSF, скорость нервной проводимости повышена по сравнению с контрольной группой, получающей физиологический раствор.

Как показано в Таблице 3 и на Фиг.2, подтверждается, что в группе, получающей G-CSF, улучшается болевая чувствительность после введения G-CSF, а также подтверждается, что в группе, получающей G-CSF, болевая чувствительность улучшена по сравнению с контрольной группой, получающей физиологический раствор.

Далее (Фиг.3 и 4), на снимке окрашенных толуидиновым синим хвостовых нервов крыс контрольной группы, Фиг.3, видно, что нервные волокна поражены больше по сравнению с восстановленными нервными волокнами, тогда как на снимке окрашенных толуидиновым синим хвостовых нервов крыс группы, получающей G-CSF, Фиг.4, видны значительно в большей степени восстановленные нервные волокна по сравнению с пораженными нервными волокнами.

Далее (Фиг.5 и 6) на микрофотографиях хвостовых нервов, сделанных с помощью трансмиссионного электронного микроскопа (ТЕМ), у крыс контрольной группы (Фиг.5) наблюдаются демиелинизированные аксоны и разрушенный миелин, тогда как на ТЕМ хвостовых нервов крыс в группе, получающей G-CSF (Фиг.6), видны ремиелинизированные аксоны, которые свидетельствуют о регенерации нервов.

Пример 2: Клиническое испытание для подтверждения терапевтического действия G-CSF на диабетическую периферическую нейропатию

Чтобы выяснить терапевтическое действие агента по настоящему изобретению на диабетическую периферическую нейропатию, проводят клинические испытания на больных диабетической периферической нейропатией.

1. Отбирают пять пациентов из отделения внутренних болезней (эндокринология) и проводят основные тесты на диабет (НОМА, HgAlC, С-пептид, ретинопатия, микроальбуминурия в течение 24 часов, цистатин С и эндокринные тесты).

Соответствующие пол, возраст, рост, вес (кг), содержание сахара в крови и диагностированное заболевание этих пяти пациентов представлены в Таблице 4.

Таблица 4
Классификация	Пол	Возраст	Рост	Вес	Сахар в крови	Диагностированное заболевание
Пациент 1	М	78	165	60	132	Диабетическая периферическая нейропатия, ишемическая болезнь сердца (ИБС, CAD)
Пациент 2	Ж	59	168	79	102	Диабетическая периферическая нейропатия, острый инфаркт миокарда (AMI)
Пациент 3	М	65	166	66	78	Диабетическая периферическая нейропатия, острый инфаркт миокарда (AMI)
Пациент 4	Ж	61	160	65	161	Диабетическая периферическая нейропатия, острый инфаркт миокарда (AMI)
Пациент 5	М	65	164	64	141	Диабетическая периферическая нейропатия, острый инфаркт миокарда (AMI)

Далее проводят специальные тесты, такие как неврологическая оценка и определение скорости нервной проводимости (NCV) во всех тест-группах.

Пациентов госпитализируют за 3 дня до введения G-CSF и проверяют наличие у пациентов макрососудистых осложнений (CAD, IMT и ECHO) и проводят другие тесты для проверки сосудов пациентов. Далее, за 1 день до введения G-CSF пациентов переводят в отделение гематоонкологии для проведения гематологических тестов.

Затем ежедневно, в течение 4 дней пациентам, подлежащим лечению, ежедневно подкожно инъецируют 10 мкг/кг G-CSF (Лейкостим (Leucostim), производимый Dong-A PHARM. Co., LTD). После введения G-CSF проводят гематологические наблюдения. Если побочные эффекты отсутствуют, пациентов выписывают из больницы, проведя только неврологические тесты.

Через 1 неделю, 15 дней, 1 месяц, 2 месяца и 3 месяца после введения G-CSF гематологические и неврологические тесты проводят при посещении пациентом госпиталя для измерения скорости нервной проводимости (NCV), и степень диабетической периферической нейропатии пациентов измеряют по торонтской шкале клинической оценки нейропатии, а общие результаты тестирования показаны в Таблицах 5, 7 и на Фиг.7

А: Скорость нервной проводимости

Таблица 5
Скорость нервной проводимости (м/сек)
Классификация	День 0	День 7	День 15	День 30	День 60	День 90
Пациент 1	32.4	34.1	36.7	38.3	40.1	40.8
Пациент 2	31.6	32.5	34.1	40.1	41.3	42.6
Пациент 3	34.3	34.2	35.8	39.1	39.7	39.9
Пациент 4	30.8	32.9	33.7	39.2	41.6	41.2
Пациент 5	35.2	34.8	36.3	42.8	42.7	41.2

Как видно из Таблицы 5, данные в ней подтверждают, что скорость нервной проводимости увеличивается в течение 90 дней после введения G-CSF.

Б: Оценка степени диабетической периферической нейропатии

Настоящее изобретение осуществляют, определяя характеристики по торонтской шкале клинической оценки нейропатии, показанные в Таблице 6. В настоящее время результаты оценки представлены суммарной оценкой в баллах каждой характеристики (параметра), причем максимальной является оценка 19 баллов, а минимальной оценкой является 0 баллов. В данной работе чем выше баллы, тем более тяжелой является степень диабетической периферической нейропатии. Полученные результаты представлены в Таблице 7 и на Фиг.7.

Таблица 6
Оценка по торонтской шкале клинической оценки нейропатии
Классификация	Торонтская шкала
Нога (Всего шесть баллов, 1 балл для каждого показателя)	Боль
	Онемение
	Покалывание
	Слабость
	Атаксия
	Симптомы в верхних конечностях
Оценка рефлексов (Всего 8 баллов, по 2 балла для каждого показателя)	Правое колено
	Левое колено
	Правая лодыжка
	Левая лодыжка
Оценки в сенсорном тесте (Всего 5 баллов, по одному баллу для каждого показателя)	Мелкий укол
	Температура
	Легкое прикосновение
	Вибрация
	Позиция
Общая оценка	19 баллов

Таблица 7
Результаты оценки по торонтской шкале клинической оценки нейропатии
Классификация	Баллы
Классификация	День 0	День 7	День 15	День 30	День 60	День 90
Пациент 1	15	6	8	8	10	9
Пациент 2	14	7	9	9	9	10
Пациент 3	16	8	10	10	9	10
Пациент 4	12	6	7	8	7	8
Пациент 5	15	8	9	8	9	10

Как следует из Таблицы 7 и Фиг.7, оценки по торонтской шкале клинической оценки нейропатии улучшаются за период до 90 дней после введения G-CSF. Таким образом, терапевтические воздействия терапевтического агента по настоящему изобретению на диабетическую периферическую нейропатию подтверждены клинически.

Соответственно, установлено, что G-CSF может применяться для предупреждения и лечения диабетической периферической нейропатии.

Хотя с целью иллюстрации раскрываются предпочтительные варианты настоящего изобретения, специалисты в данной области техники понимают, что можно сделать различные модификации, добавления и замены, не отступая от объема и сущности изобретения, раскрываемых в Формуле изобретения.

Claims

1. Агент для предупреждения и лечения диабетической периферической
нейропатии, содержащий в качестве активного ингредиента гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (G-CSF, Г-КСФ).

2. Агент по п.1, отличающийся тем, что G-CSF получен и выделен из источника природного или рекомбинантного происхождения.

3. Агент по п.1, отличающийся тем, что G-CSF представляет собой рекомбинантный человеческий гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (rhG-CSF).

4. Агент для регенерации периферического нерва, содержащий в качестве активного ингредиента G-CSF (гранулоцитарный колониестимулирующий фактор).

5. Агент по п.4, отличающийся тем, что G-CSF получен и выделен из источника природного или рекомбинантного происхождения.

6. Агент по п.4, отличающийся тем, что G-CSF представляет собой рекомбинантный человеческий гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (rhG-CSF).