JP2010508265A - Ｇ−ｃｓｆを含有する、糖尿性末梢神経病予防および治療剤 - Google Patents

Abstract

【課題】
Ｇ−ＣＳＦ（Ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む糖尿性末梢神経病予防および治療剤と末梢神経再生剤を提供することを課題とする。
【解決手段】
末梢神経組織から血管を再生し破壊された神経組織を修復することによって、神経伝達速度および痛みの敏感度を好転させる顆粒球コロニー刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ， Ｇ−ＣＳＦ）を有効成分として含む糖尿性末梢神経病の予防および治療剤を開示する。
【選択図】図１

Description

本発明は、顆粒球コロニー刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ， Ｇ−ＣＳＦ）を有効成分として含む糖尿性末梢神経病予防および治療剤に関するものである。

糖尿病は、全世界的に重要な生活習慣病の中の一つで、最近は韓国でも急速な経済成長とともに糖尿病有病率が７〜１０％に達し６０〜７０歳代の場合重要な死亡原因となっている。糖尿病は葡萄糖を体内細胞へ運ぶインシュリン（ホルモン）の分泌が正常になされない、あるいは作用しないことにより、葡萄糖が細胞内に移動されなくなることによって発生する病気である。この時細胞の中まで運搬されなかった葡萄糖はそのまま血液中に残っており、血液は糖の多い高血糖状態となり、葡萄糖は小便として排出される。このような高血糖の持続は体内の蛋白質、脂質代謝に異常を起こし、体内組織の生理学的、生化学的異常反応を招き合併症を誘発する。

糖尿性末梢神経病は、網膜病症、腎臓病症とともに糖尿病の三大合併症の一つである。この病気は症状がないこともあるが、下肢に深刻な痛みや感覚消失、筋力低下、自律神経障害を起こしうる非常に治療が難しい神経障害である。

このような糖尿性末梢神経病の有病率は５−６０％であり、報告者によって非常に差が大きく、糖尿病との診断を受けた際、約１２％がこのような状態にあり、発病から２５年後には約６０％の患者に生じる可能性があるという。

糖尿性末梢神経病症の症状としては主に感覚異常が現われるが、手と足、主に足にひどくびりびりする感じ、かっかとほてる痛み、刺すような痛み、砂を踏んだような、あるいは足の底が何かで覆われているような感じ、感覚がなくなる、足が冷えて夏でも掛け布団をかけて寝なければならないなどの異常感覚を訴える場合が多い。

発病の初期には皮膚感覚の変化はなく、感覚神経刺激現象による異常感覚症状だけを示すが、病気の進行にしたがってさらに感覚神経が損傷すれば、感覚神経支配領域の皮膚での温度覚、痛覚、振動覚、位置覚、触覚などが同時に現われる。

糖尿性末梢神経病症の原因としては、血糖が高くなることによる神経細胞内での生化学的変化と形態的変化（軸索萎縮、結節浮腫、微細血管変化など）が指摘されているが、詳しいことはまだ確実ではない。

このような糖尿性末梢神経病症の治療方法として神経遮断療法、代謝調節療法、薬物療法などがあるが、薬物療法ではどの薬品も根本的な治療を施せないことはもちろんのこと、症状に優れた好転をもたらす治療法が存在しないことが今の状況である。
したがって、糖尿性末梢神経病の病因機転研究およびこれに基づいた根本的な薬剤開発が切実に求められている状況である。

一方、Ｇ−ＣＳＦ（ｇｌａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ， 顆粒球コロニー刺激因子）は、好中球先祖細胞（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｐｒｏｇｅｎｉｔｏｒ ｃｅｌｌ）に特異的に作用し、好中球の増殖と分化を促進し、好中球の抗体依存性細胞殺生能力を増加させる。また、ＩｇＡ−媒介性食作用（ｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ）を促進してスーパーオキサイド（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ）生成能力を増加させる作用がある。

したがって、Ｇ−ＣＳＦは走化性ペプチド（ｃｈｅｍｏｔａｃｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ）に対する反応能力を向上させ、感染症発生を抑制し発熱頻度を下げる役割をなすと知られている。また、Ｇ−ＣＳＦはＧＭ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ−ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ ＣＳＦ）等の他のＣＳＦに比べより分化した骨髄細胞に作用するので、生体内で白血病母細胞に対する影響が少ないと期待されている。

したがって、Ｇ−ＣＳＦは坑癌化学療法、抗癌剤の大量療法、放射線療法との併合療法、骨髓移植後の好中球の回復を促進させる薬品として広く使われている（Ｊｕｌｉｅ Ｍ． Ｖｏｒｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ Ｇｒｏｕｔｈ Ｆａｃｔｏｒｓ， Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ， １３：１０２３−１０３５， １９９５）。

Ｇ−ＣＳＦは好中球の増殖と分化に主に作用する造血剤（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ａｇｅｎｔ）であり、主に骨髄移植（ｂｏｎｅ−ｍａｒｒｏｗ ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ）と抗癌剤投与による好中球減少症（Ｎｅｕｒｏｔｒｏｐｅｎｉａ）に使う。また脊髄異形性症候群（Ｍｙｅｌｏｄｙｓｐｌａｓｔｉｃ ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ）、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ ａｎｅｍｉａ）や先天性、周期性、特発性好中球減少症（ｃｏｎｇｅｎｉｔｉａｌ． ｃｙｃｌｉｃ， ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ）のような激しい慢性好中球減少症およびＨＩＶ感染患者において，好中球を増加させることにより好中球減少による感染を予防するために使われている。

好中球は、防御機転（ｈｏｓｔ ｄｉｆｆｅｎｃｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ）に重要な役割をする食細胞（ｐｈａｇｏｃｙｔｉｃ ｃｅｌｌｓ）で、正常な免疫機能と造血機能（ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ ｓｔａｔｕｓ）を持っている場合は、感染時好中球の数が増加する。好中球の数（ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｃｏｕｎｔ）が１５００ｃｅｌｌｓ／ｍｍ³以下に減少した状態を好中球減少症（ｎｅｕｔｒｏｐｅｎｉａ）といい、好中球数が５００ｃｅｌｌｓ／ｍｍ³以下の場合は、正常な防御機転が大きく損傷した状態で菌感染の危険性が非常に増すと知られている。

最近ではＧ−ＣＳＦを前記のような好中球減少症に臨床的に使用する以外にも，Ｇ−ＣＳＦが好中球の生成を促進して機能を強化させることが肺炎、敗血症などの色々な感染疾患の予防と治療に有効である、という期待とともに、感染疾患にＧ−ＣＳＦの単独投与または抗生剤との併用投与に関する研究が進行中である。

成熟したＧ−ＣＳＦ蛋白質は、４個のアルファ-へリックス（ａｌｐｈａ−ｈｅｌｉｘ）で構成され、分子量約２０，０００程度の２個の二硫化結合を有するが、この結合中、位置番号１３３のトレオニン置換基は、O-リンクされた（Ｏ−ｌｉｎｋｅｄ）炭水化物が付加される唯一の位置である。顆粒球（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ）の表面に存在するＧ−ＣＳＦ受容体の分子量は概略１５０，０００程度で、一つのペプチド鎖で構成されておりＮ−糖化（Ｎ−ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｅｄ）となっている。これらは細胞が成熟して受用体の数字が増加し細胞当たり数百個に達すると知られている。

Ｇ−ＣＳＦを利用した薬品として、韓国特許出願第１０−２００５−７０１９５４３号（公開第２００５−０１１４２７５号）は、Ｇ−ＣＳＦのような１種または２種以上の幹細胞動員因子を有効成分とする糖尿病治療剤を開示している。

韓国特許出願第１０−２００４−７００７２７５号（公開第２００５−００４４４４４号）は、単球またはマクロファージを活性化するサイトカイン、活性化した単球またはマクロファージから分泌されるサイトカインおよびＧ−ＣＳＦ受用体を発現している造血界細胞から分泌されるサイトカインからなる群より選択されるサイトカインを有効成分として含有する多分化能幹細胞を組織から末梢血に動員する薬剤を開示している。しかし、Ｇ−ＣＳＦの新しい用途として糖尿性末梢神経病症の治療を明らかにした研究はまだない。

本発明の目的は、Ｇ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む糖尿性末梢神経病予防および治療剤を提供することにある。
本発明の他の目的はＧ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む末梢神経再生剤を提供することにある。

前記目的を達成するために本発明は、Ｇ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む糖尿性末梢神経病予防および治療剤を提供する。また、Ｇ−ＣＳＦ（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む末梢神経再生剤を提供する。

本発明では、Ｇ−ＣＳＦが末梢神経組織で血管を再生し破壊された神経組織を修復することによって、神経伝達速度を向上させ、痛みの敏感度を改善する効果があるため、本発明は糖尿性末梢神経病予防および治療に有用に使用することができる。

以下、本発明を詳しく説明する。
本発明者らは顆粒球コロニー刺激因子（ｇｒａｎｕｌｏｃｙｔｅ ｃｏｌｏｎｙ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｆａｃｔｏｒ， 以下‘Ｇ−ＣＳＦ’という。）の多様な生理活性を研究しているなかで、Ｇ−ＣＳＦが末梢神経組織で血管を再生し破壊された神経組織を修復することによって神経伝達速度および痛みの敏感度を改善することにより、糖尿性末梢神経病の予防および治療剤として有用に使用できる可能性があることを発見し、これを基に本発明を完成することとなった。

本発明に伴う治療剤はＧ−ＣＳＦを有効成分として含有する。また、末梢神経を再生することを特徴とする。

本発明の治療剤を第二型糖尿モデル動物のＯＬＥＴＦ（Ｏｔｓｕｋａ Ｌｏｎｇ Ｅｖａｎｓ Ｔｏｋｕｓｈｉｍａ Ｆａｔｔｙ）ラットに投与した際、神経伝達速度が向上して痛みの敏感度が好転した。臨床実験で対象患者に本発明の治療剤を投与し、糖尿性末梢神経症の評価方法であるＴｏｒｏｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍで評価した際、糖尿性末梢神経症の程度が全て改善されて神経伝達速度が向上した。

また、第二型糖尿モデル動物のＯＬＥＴＦラットを利用した動物実験で、Ｇ−ＣＳＦ投与群の尻尾神経から末梢神経再生の証拠となる再生した神経繊維（ｎｅｒｖｅ ｆｉｂｅｒ）および再髄鞘化（ｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｏｎ）された軸索（ａｘｏｎ）を観察することができた（図３および図４、図５および図６参照）。

が骨髄中にある機能性幹細胞を末梢血液に放出し放出された細胞を分化誘導することによって、末梢神経組織で神経細胞と血管を再生し破壊された神経組織を修復して神経の血液供給を円滑にすることで末梢神経を再生して糖尿性末梢神経病症を治療することと思われる。

一般的に、本発明に使用できるＧ−ＣＳＦは好ましくは、天然型Ｇ−ＣＳＦまたは再調合Ｇ−ＣＳＦである。また本発明に使用できるＧ−ＣＳＦは天然型のようなアミノ酸序列を有するＧ−ＣＳＦである。

本発明のＧ−ＣＳＦは、哺乳動物の有機体から分離したり、化学合成したり、ゲノムまたはｃＤＮＡクローニングによってのみＤＮＡ合成によって収得した外因性ＤＮＡ序列を原核または真核宿主細胞から遺伝工学的な方法で発現させ製造することができる。

この時、適合した原核宿主は多様なバクテリア（例えばＥ． ｃｏｌｉ）を含み、適合した真核宿主は酵母（例えばＳ． Ｓｅｒｅｖｉｓｉａｅ）および哺乳動物細胞（例えば、中国ハムスター卵巣細胞、猿細胞）を含む。

再調合Ｇ−ＣＳＦ、特にイー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）から誘導されたＧ−ＣＳＦが商業的な面で最大に望ましいとはいえ、本発明は前記Ｇ−ＣＳＦ形態の中で任意のＧ−ＣＳＦおよびすべてのＧ−ＣＳＦの使用を含む。この時Ｇ−ＣＳＦおよびその類似体は多様な供給源から得られ精製されて使用することができる。最も好ましくは再調合ヒト顆粒球コロニー刺激因子（ｒｈＧ−ＣＳＦ）を使う。

本発明のＧ−ＣＳＦを有効成分として含む治療剤は治療剤組成物の総重量に対し前記有効成分を０．０００１ないし５０重量％で含むことができる。また、本発明の治療剤は前記有効成分の他に追加で同一または類似した機能を示す有効成分を１種以上含有することができる。

本発明のＧ−ＣＳＦを有効成分として含む治療剤は、投与のために前記記載した有効成分以外に追加で薬剤学的に許容可能な担体を１種以上含み、薬剤学的組成物として好ましく製剤化することができる。

液状溶液として製剤化される組成物において、許容可能な薬剤学的担体としては、滅菌および生体に適合したものとして食塩水、滅菌数、点滴液、緩衝食塩水、アルブミン注射溶液、デキストロース溶液、マルトデキストリン溶液、グリセロール、エタノールおよびこれら成分を混合して使用でき、必要によって抗酸化剤、緩衝液、静菌剤など、他の通常の添加剤を添加することができる。

また希釈剤、分散剤、界面活性剤、結合剤および潤滑剤を付加的に添加し、水溶液、懸濁液、乳濁液などのような注射用液剤、丸薬、カプセル、顆粒または錠剤として製剤化することができ、標的器官に特異的に作用できるよう、標的器官特異的抗体またはその他リガンドを前記担体と結合させて使うことができる。さらに、該当分野の適切な方法でＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ， Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｅａｓｔｏｎ ＰＡ．に開示されている方法を利用して各疾患によりまたは成分により好ましく製剤化することができる。

本発明のＧ−ＣＳＦを有効成分として含む治療剤の薬剤の製剤形態は顆粒剤、散剤、被覆錠、錠剤、カプセル剤、座薬、シロップ、液剤、懸濁剤、乳剤、点滴剤または注射可能な液剤および活性化合物の徐放出型製剤などがある。

本発明のＧ−ＣＳＦを有効成分として含む治療剤は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、胸骨内、硬皮、鼻側内、吸入、局所、直腸、経口、眼球内または皮下内経路を通じて、通常の方式で投与することができる。投与方法は特別にこれに制限されないが、非経口投与が好ましく、皮下内投与がより好ましい。

本発明治療剤の投与量は、疾患の種類、疾患の重症度、組成物に含まれた有効成分および他の成分の種類および含有量、剤形の種類および患者の年齢、体重、一般健康状態、性別および食餌、投与時間、投与経路および組成物の分泌率、治療期間、同時に使われる薬品をはじめとする多様な因子により調節されることができる。成人の場合、Ｇ−ＣＳＦを１日１回１日乃至一週間連続で投与する時、０．０１μｇ／ｋｇ／ｄａｙ〜１００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ、好ましくは０．０１μｇ／ｋｇ／ｄａｙ〜１０μｇ／ｋｇ／ｄａｙの容量で投与することができる。

本発明の治療剤は単独で、または神経遮断治療療法、代謝調節療法などの方法と並行して使用することができる。本発明の治療剤は、末梢神経組織から神経細胞と血管を再生し破壊された神経組織を修復して神経組織に血液供給を円滑にすることで神経伝達速度および痛みの敏感度を好転させる。

このように、本発明の治療剤は末梢神経組織から神経細胞と血管を再生し破壊された神経組織を修復して神経組織の血液供給を円滑にすることで神経伝達速度および痛みの敏感度を向上させることができるので、糖尿性末梢神経病の予防または治療に有用に使用することができる。

以下本発明の好ましい実施例および比較例を記載する。下記実施例および比較例は、本発明をより明確に表現するための目的で記載するだけであり、本発明の内容が下記実施例および比較例に限定されるものではない。

［実施例］
実施例１：Ｇ−ＣＳＦの糖尿性末梢神経病の治療効果を確認するための動物実験
文献［Ｎａｋａｍｕｒａ Ｊなど，Ｄｉａｂｅｔｅｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｒａｃｔｉｃｅ， ２００１ Ｊａｎ；５１（１）：９−２０］に記述されたものと類似の方法を使い、糖尿性末梢神経症動物モデルを作った。

つまり、遺伝子操作で第二型糖尿モデル動物のＯＬＥＴＦラットを２０ないし２４℃と湿度４０〜７０％が維持され、採光と通風の良いところで飼育した。飼育期間中、ｐｌａｉｎ ｓｏｌｉｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｃｈｏｗと水道水を自由給与させた。１０週頃から水道水の代わりに３０ｗ／ｖ％の砂糖が含まれた砂糖水を投与した。砂糖水の総投与期間は２４週で、５週間隔で体重と血糖を測定した。３４週頃のＧ−ＣＳＦ投与群と対照群の体重および血糖を測定して下記の表１に示した。

３４週頃ＯＬＥＴＦラットをＧ−ＣＳＦ投与群と対照群に分けて、Ｇ−ＣＳＦ投与群の場合腹部皮下にＧ−ＣＳＦ（東亜製薬、Ｌｅｕｃｏｓｔｉｍ）を１００μｇ／ｋｇ／ｄａｙ１日１回皮下に５日間連続投与し、対照群の場合、生理食塩水（Ｓａｌｉｎｅ）０．２ｍｌを１日１回５日間連続皮下投与した。

Ｇ−ＣＳＦ投与前に尻尾神経を通じて、二つのグループの神経伝導速度の差異を測定し、痛みの敏感度を測定した。そしてＧ−ＣＳＦを投与した４週後に神経伝達速度（Ｎｅｒｖｅ Ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ Ｖｅｌｏｃｉｔｙ）と痛みの敏感度を測定した。

その結果は、下記の表２および表３と図１および図２に示した。薬品投与後４週目にＧ−ＣＳＦ投与群と対照群ラット尻尾神経組織を摘出した後、トルイジンブルーに染めて顕微鏡で観察し図３および図４で示し、Ｇ−ＣＳＦ投与群と対照群ラット尻尾神経組織を摘出した後免疫染色をして電子顕微鏡で微細構造変化を観察して図５および図６に示した。

［表１］ ３４週頃ＯＬＥＴＦラットの体重および血糖

[表２]
神経伝達速度（ｍ／ｓ）

[表３]
痛みの敏感度（ｓ）

表２および図１からわかるように、Ｇ−ＣＳＦ投与群の場合、投与前よりも神経伝達速度が向上しｓａｌｉｎｅ投与群の対照群に比べ神経伝達速度が向上することを確認した。表３および図２からわかるように、Ｇ−ＣＳＦ投与群の場合、投与前よりも痛みの敏感度が好転しｓａｌｉｎｅ投与群の対照群に比べ痛みの敏感度が好転することを確認した。

また、図３および図４からわかるように、対照群ラット尻尾神経のトルイジンブルー染色写真の図３の場合、再生した神経繊維（ｎｅｒｖｅ ｆｉｂｅｒ）に比べ破壊された神経繊維が多いが、Ｇ−ＣＳＦ投与群ラットのトルイジンブルー染色写真の図４の場合、破壊された神経繊維に比べ再生した神経繊維がはるかに多くあることを観察することができた。

図５および図６からわかるように、対照群ラットの尻尾神経ＴＥＭ写真の図５の場合、髄鞘脱落（ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｅ）された軸索（ａｘｏｎ）および破壊されたミエリン（Ｍｙｅｌｉｎ）が観察される反面、Ｇ−ＣＳＦ投与群ラットの尻尾神経ＴＥＭ写真の図６の場合、神経再生の証拠の再髄鞘化（ｒｅｍｙｅｌｉｎａｔｅ）された軸索（ａｘｏｎ）が観察された。

実施例２：Ｇ−ＣＳＦの糖尿性末梢神経病治療効果確認のための臨床実験
本発明の糖尿性末梢神経病の治療効果を把握するために、糖尿性末梢神経病患者を対象として臨床実験を実施した。

内分泌内科で対象患者５人を選定し糖尿病に関する基本検査など（ＨＯＭＡ，ＨｇＡ１Ｃ，Ｃ−ｐｅｐｔｉｄｅ，網膜病症（Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ），２４時間微細蛋白尿（ｍｉｃｒｏａｌｂｕｍｉｎｕｒｉａ），ｃｙｓｔａｔｉｎｅ Ｃおよび内分泌器系の検査）を実施した。対象患者５人の性別、年齢、背、体重、血糖および診断病名は下記の表４に示した。

［表４］

また、すべての実験群で特殊検査神経学的なｓｃｏｒｉｎｇ検査およびＮＣＶ（Ｎｅｒｖｅ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｖｅｌｏｃｉｔｙ、神経伝達速度）を測定した。

Ｇ−ＣＳＦ投与３日前に入院してｍａｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｉｏｎ（ＣＡＧ，ＩＭＴ，ＥＣＨＯ）およびその他の血管と関連した検査などを施行した。引き続き、Ｇ−ＣＳＦ投与１日前に血腫内科に転科した後、血液学的な検査を実施した。

続いて、対象患者にＧ−ＣＳＦ（東亜製薬、Ｌｅｕｃｏｓｔｉｍ）を１日１回、連続４日間１０μｇ／ｋｇ皮下注射した。Ｇ−ＣＳＦ投与後、血液学的な検査確認後副作用がないと神経学的な検査だけを施行して退院するようにした。

Ｇ−ＣＳＦ投与１週、１５日、１ヶ月、２ヶ月、３ケ月ごとに外来訪問して血液検査と神経学的な検査を施行し、ＮＣＶ（Ｎｅｒｖｅ ｃｏｎｄｕｃｔｉｏｎ ｖｅｌｏｃｉｔｙ、神経伝達速度）を測定した。

A：神経伝達速度
［表５］
神経伝達速度（ｍ／ｓ）

前記の表５からわかるように、Ｇ−ＣＳＦ投与によって投与後９０日目まで神経伝達速度が向上することを確認した。

B：糖尿性末梢神経症の程度評価
本評価は、下記の表６に示したＴｏｒｏｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍに記載された項目などを測定し評価した。この時各項目に対して点数を合算し示すことによって、最高の点数は１９点、最低の点数は０点であって、この時点数が高いほど糖尿性末梢神経症の程度が激しいことを意味する。得られた結果は下記の表７および図７に示した。

［表６］
Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍの評価方法

［表７］
Ｔｏｒｏｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍ評価結果

前記の表７および図７からわかるように、Ｇ−ＣＳＦ投与によってＴｏｒｏｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍの評価点数が投与後９０日目まで改善され、本発明の治療剤の糖尿性末梢神経病の治療効果を臨床的に確認した。前記の結果から、Ｇ−ＣＳＦが糖尿性末梢神経病予防および治療に有用に使われることが分かる。

Ｇ−ＣＳＦ投与群と対照群（ｓａｌｉｎｅ投与群）の投与前後の神経伝達速度を測定して示すグラフである。 Ｇ−ＣＳＦ投与群と対照群（ｓａｌｉｎｅ投与群）の投与前後の痛みの敏感度を測定して示すグラフである。 対照群（ｓａｌｉｎｅ投与群）ラット尻尾神経のトルイジンブルー染色（ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ）の写真である。 Ｇ−ＣＳＦ投与群ラット尻尾神経のトルイジンブルー染色（ｔｏｌｕｉｄｉｎｅ ｂｌｕｅ ｓｔａｉｎｉｎｇ）の写真である。 対照群（ｓａｌｉｎｅ投与群）ラット尻尾神経の透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）の写真である。 Ｇ−ＣＳＦ投与群ラット尻尾神経の透過電子顕微鏡（ＴＥＭ）の写真である。 Ｇ−ＣＳＦ投与１週、１５日、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月目の対象患者の糖尿性末梢神経症程度をＴｏｒｏｎｔｏ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ Ｓｃｏｒｉｎｇ Ｓｙｓｔｅｍで評価しその結果を示すグラフである。

Claims (6)

1. Ｇ−ＣＳＦ（Ｇｌａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む糖尿性末梢神経病予防および治療剤。
2. 前記Ｇ−ＣＳＦが天然または再調合起源から収得し分離されることを特徴とする請求項１に記載の糖尿性末梢神経病予防および治療剤。
3. 前記Ｇ−ＣＳＦは再調合ヒト顆粒球コロニー刺激因子（ｒｈＧ−ＣＳＦ）であることを特徴とする請求項１に記載の糖尿性末梢神経病予防および治療剤。
4. Ｇ−ＣＳＦ（Ｇｌａｎｕｌｏｃｙｔｅ−Ｃｏｌｏｎｙ Ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ Ｆａｃｔｏｒ）を有効成分として含む末梢神経再生剤。
5. 前記Ｇ−ＣＳＦが天然または再調合起源から収得し分離されることを特徴とする請求項４に記載の末梢神経再生剤。
6. 前記Ｇ−ＣＳＦは再調合ヒト顆粒球コロニー刺激因子（ｒｈＧ−ＣＳＦ）であることを特徴とする請求項に４記載の末梢神経再生剤。

Images