KR20170088861A

KR20170088861A - 조혈 면역요법제(hit)로서의 il-12의 용도

Info

Publication number: KR20170088861A
Application number: KR1020177014518A
Authority: KR
Inventors: 레나 에이. 바실리
Original assignee: 뉴메디슨즈, 인코포레이티드
Priority date: 2014-10-31
Filing date: 2015-10-30
Publication date: 2017-08-02
Also published as: HK1250653A1; AU2015338998A1; WO2016070075A1; SG10202103474YA; JP2017533279A; AU2021212068A1; CN107708724A; US20160120949A1; EP3212215A1; IL251956A0; CA2966218A1; SG11201703516XA; EP3212215A4

Abstract

본원의 양태 및 구현예는 화학요법제에 노출된 후 투약 감소 및/또는 투약 지연을 필요로 하는 화학요법-유발된 혈구감소증으로부터 암 환자를 치료 또는 예방하는데 유용한 조혈 면역요법제(HIT)로서 IL-12를 포함하는 치료학적 방법 및 조성물을 제공하며, 상기 방법은 실질적으로 분리된 IL-12를 포함하는 소정 용량의 치료학적 유효량의 약학적 조성물을 상기 개체에게 투여함으로써 혈구감소증을 감소시키고, 감소된 화학요법제에 대한 반응을 증가시키는 것을 포함한다.

Description

조혈 면역요법제(HIT)로서의 IL-12의 용도{USES OF IL-12 AS AN HEMATOPOIETIC IMMUNOTHERAPY(HIT)}

관련-출원에 대한 상호-참조

본 출원은 2014년 10월 31에 출원된 미국 임시 출원 62/073,220의 우선권을 주장하고, 그 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.

기술분야

본원은 일반적으로 이식을 위한 신규한 방법 및 조성물에 관한 것이다. 특히, IL-12를 포함하는 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 조혈 이식을 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 조혈 이식에 사용하기 위한 방법 및 조성물이다. 본 발명에서의 IL-12의 사용은 암 치료를 위한 화학요법의 사용에 있어서 두 가지 문제를 다룬다: 1) 투약 감소 및/또는 투약 지연을 이끄는 화학요법 처방에 의해 유발된 혈구감소증 및 기타 합병증을 감소, 및 2) 근본적인 암의 감소. 본 발명의 양 양태는 최소 잔여 질환(MRD)의 감소를 포함하는 화학요법으로 인한 반응 비율의 증가를 이끌어 처리된 환자에 대해 보다 긴 생존 시간을 이끈다. 화학요법 처리가 필요한 암 환자에서 IL-12의 이러한 이중 효과 때문에, IL-12는 조혈 면역요법제(HIT)로 간주된다.

다음은 본원의 다양한 양태 및 구현예를 이해하는데 유용한 정보를 포함한다. 본원에서 제공된 임의의 정보가 선행기술이거나, 또는 관련되거나, 현재 기술되거나 주장된 발명이거나, 또는 특정적으로 또는 암시적으로 언급된 임의의 출판물 또는 문헌이 선행 기술임을 인정하는 것은 아니다.

화학요법으로 유발된 혈소판감소증(CIT)을 포함하는 조혈 혈구감소증은 화학요법 처리로 인한 골수 억제의 일반적인 부작용이다. 백금-함유 요법은 특히 등급 3 및 등급 4의 혈소판감소증 뿐만 아니라, 등급 3 및 등급 4의 호중구감소증, 림프구감소증 및 빈혈의 발생과 관련이 있다. CIT와 관련된 위험은 증가된 출혈 발생; 화학 처리 용량 감소 및 일정 변경; 및 혈소판 수혈에 대한 증가된 필요성을 포함한다. 미국에서 매년 화학요법을 받는 140만 명의 환자 중 약 10%가 혈소판감소증을 앓고 있다(MGI 보도 자료 8/28/07). 새롭고, 공격적인 화학요법 제제가 시장에 진입하고 치료 처리의 표준이 지속적으로 변화하고 진화하기 때문에 CIT의 전반적인 발생은 매년 계속 증가할 것으로 예상된다.

현재 CIT와 관련된 합병증은 약 60%의 발생 수준에 도달한다. 혈소판감소증은 자극이 없는 타박상으로 이어질 수 있다. 50,000/ul 미만의 혈소판 수는 자연 출혈의 높은 위험과 관련 있다. 혈소판은 또한 수면, 기분 및 식욕을 조절하는 신경전달물질인, 세로토닌 및 그 전구체인 I-트립토판을 옮겨, 혈소판감소증은 종종 피로감과 때로는 우울증을 동반한다. 혈소판감소증은 또한 다양한 진단 및/또는 의학적 처리를 방해할 수 있다. 또한, 혈소판은 면역 조절 효과를 갖는 것으로 알려져 있다(Semple and Freedman Cell Mol Life Sci 67:499 2010). 혈소판감소증은 일반적으로 출혈과 관련이 있지만, 덜 알려진 문제는 면역계에 대한 저 혈소판의 영향입니다. 혈소판감소증은 일반적으로 블리딩 및 출혈과 관련이 있지만, 덜-알려진 문제는 면역계에 대한 저혈소판의 영향이다. 혈소판은 선천성 및 후천성 면역계의 핵심세포인 수지상 세포를 성숙시킬 수 있는 것으로 밝혀졌다[Hamzeh-Cognasse et al BMC Immunol 9:54 2008]. 또 다른 최근 보고서에 따르면 혈소판감소증은 암 환자의 이식 후 질병 재발로 인한 사망 위험 증가와 관련이 있음이 밝혀졌다[Ninan et al Biol Blood Marrow Transpl 13 : 895 2007].

CIT의 예방이나 처리에 사용할 수 있는 약물은 없다. 1997년 인터루킨-11(IL-11, oprelvekin)은 심한 혈소판감소증의 예방 및 중증 혈소판감소증에 대해 고위험인 비골수성 악성 종양을 가진 성인 환자에서 골수억제 화학요법 후 혈소판 수혈의 필요성 감소에 대한 미국 FDA의 승인을 받았다. 그러나 IL-11은 약물의 심각한 부작용 뿐만 아니라 제한된 효능으로 인하여 일반적으로 종양학에서 임상 실습에 사용되지 않는다. 의사는 약물의 안구 및 심혈관 부작용에 대해 우려하여 대다수의 환자에게 이것을 투여하지 않으려 한다. 대신 혈소판감소증은 화학요법의 투약 감소, 투약 연기, 및 심한 경우 혈소판 수혈로 관리된다. 더 중요한 것은 최근에 면역 혈소판감소성 자반병(ITP), Nplate(Romiplostim) 및 Promacta(eltrombopag)에 대해 승인된 새로운 혈소판 제제가 단계 Ⅱ 연구의 임상적 종점을 성공적으로 충족시키지 못했다는 사실이다.

발명의 요약

따라서, CIT 및 다른 혈구감소증의 효율적인 처리 또는 예방에 유용한 신규한 방법 및 조성물이 필요하고, 동시에 더 연장된 생존 시간을 이끌기 위해, 근원적인 암과 싸울 수 있는 항-종양 반응(종양 부담을 줄이고 MRD를 감소시킴)을 제공하는 것이다.

본 발명은 암을 가지고 있고 이식 전에 화학 요법을 받을 개체를, 화학요법제에 개체를 노출 시킨 후 다양한 혈구감소증, 특히 혈소판감소증으로부터 치료 또는 예방하는데 유용한 인터루킨 12(IL-12)를 포함하는 치료 방법 및 조성물을 제공한다. 일부 양태에서 방법은 실질적으로 분리된 IL-12를 포함하는 약학적 조성물의 치료학적으로 유효한 양을 화학요법제에 개체에게 노출될 수 있거나 개체에게 노출시킨 후, 혈구감소증을 예방, 감소 및/또는 처리하기 위해 개체에게 투여하는 것을 포함한다. 다중 혈구감소증에 대한 IL-12의 효과와 함께, 병용 효과는 종양 부담 및/또는 MRD 감소에 영향을 줄 것이다. 전반적으로 이러한 이중 효과는 화학요법 처리가 필요한 암 환자의 생존 기간을 연장시킨다.

일 구현예에서, 상기 방법은 개체의 필요에 따라 화학요법제의 1 이상의 용량을 투여하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 상기 방법은 개체의 필요에 따라 화학요법제의 투여 전, 투여 중 및/또는 투여 후 혈구감소증을 예방, 감소 및/또는 처리하기 위한 IL-12의 1 이상의 용량을 투여하는 것을 포함한다.

일 구현예에서, 상기 방법은 개체의 필요에 따라 다양한 유형의 화학요법제를 투여하는 것을 포함한다.

일 양태에서, IL-12의 1 이상의 유효 용량은 피하, 정맥 내, 복강 내, 근육 내, 경막 외, 비경구로 투여된다.

일 양태에서, 투여된 IL-12는 말초 혈액에서 혈소판, 자연살해 세포 및 CD8 세포, 적혈구 및 호중구를 포함하는 림프구의 생산을 유도한다. 일부 양태에서, 혈소판 및 적혈구 생성은 혈소판 재생 또는 재구성 및/또는 생존을 증가시키고, 및/또는 혈소판 또는 적혈구(또는 전혈) 수혈의 필요성, 브리딩 및/또는 출혈의 위험을 감소시킨다. 백혈구, 호중구 및 림프구의 증가는 감염 합병증을 감소시킨다.

본원에서 설명되고 청구된 본 발명은 이 요약서에 개시되거나 기술되거나 참조된 것들을 포함하는 많은 특성들 및 구현예들을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 모든 것을 포함하는 것은 아니며, 본원에 기술되고 청구된 발명은 설명의 목적으로만 포함되며 제한이 아니고, 본 요약서에서 식별된 특징 또는 구현예에 의해 제한되지 않는다. 추가적은 구현예는 상세한 설명에 개시될 수 있다.

도 1 A-B: 골수억제 방사선 전 및 후에 투여된 비히클 및 rMuIL-12의 혈액 회복 프로파일. 호중구, 적혈구 및 혈소판에 대한 혈액 세포 회복 프로파일은 EL4 림프종 종양 모델(A) 및 루이스 폐암 모델(B)에서 보여진다. 방사선 전 혈액 수치는 방사선 및 종양 접종 전에 두 그룹에서 모든 동물의 평균을 반영한다. 쥐 혈액 세포 수의 정상 한계 수치는 점선으로 나타낸다. 두 종양 모델 모두에서 14 내지 21일 동안, rMuIL-12-처리된 마우스는 비히클 대조군에 비해 통계적으로 유의하게 혈액 세포 수 향상을 보여줬다(14일 및 18일의 P < .001 및 21일의 P < .01; 터키(tukey) 테스트에 따르는 ANOVA).
도 2 A-B: 방사선 조사(625rad) 다음의 비히클 및 rMuIL-12 처리 군의 종양 부피의 상대적 변화. EL4 림프종 종양 모델(A) 및 루이스 폐암 종양 모델(B)에 대한 실험 과정 동안의 종양 부피 변화를 보여준다. 두 종양 모델의 마우스는 1일째에 625rad를 받았다. 두 종양 모델의 마우스는 초기 방사선 투약 후 22일째에 두 번째 방사선 투약을 받았다. EL4 림프종 모델에서, 모든 rMuIL-12 치료 그룹, 즉 전, 후 및 전-후의 방사선 투여군은, 종양 부피 평가의 종점에서의 대조군과 비교하여 종양 성장이 유의하게 감소되었다(%T/C <50%). 루이스 폐암 모델에서, rMuIL-12 후-처리는 종양 성장 평가의 종점에서 종양 성장이 유의하게 감소되었다(%T/C <50%).
도 3: HemaMax™로 처리된, 방사선 조사된(irradiated), 뒷받침되지 않은 원숭이의 Kaplan-Meier 생존 곡선. 풀링된 HemaMax™ 투약군을 보여준다. 연구 중에는 항생제를 사용하지 않았다. 부러진 치아를 가진 한 마리의 동물은 연구와 무관한 죽음으로 인해 연구에서 제외되었다. p < 0.05 풀링된 처리군.
도 4 A-B: HemaMax™로 처리된 방사선 조사되고, 뒷받침되지 않은 Rhesus 원숭이의 백혈구(a)와 혈소판(b)의 수. 연구기간 동안 혈액 세포 수의 차이를 평가하기 위해 세 가지 분석이 수행되었다. 1일부터 30일까지 혈액 세포 수를 분석한 첫 번째 분석에서, HemaMax™로 처리된 동물의 경우 100ng/kg 및 250ng/kg 용량의 HemaMax™에 대해 12일째 및 14일째에 백혈구와 혈소판 수가 비히클 처리 동물에 비해 유의하게 더 높았다. 특히, 이 연구에서 치사 방사선 NHP 연구에서, 비히클-처리된 원숭이의 80%는 혈소판 수혈을 필요로 하는 반면, HemaMax-처리된 원숭이의 단지 25%만이 혈소판 수혈을 필요로 했다(p <0.007, 카이 제곱 분석).
도 5: 인간 및 NHP 골수는 IL-12Rβ2를 발현한다. 인간(a) 및 NHP(b) 대퇴 골수의 조직을 IL-12Rβ2에 대해 면역조직화학으로 염색했다. IL-12Rβ2를 발현하는 전구 세포 및 거핵구를 보여준다. Plos One 논문 도 10a.
도 6: 쥐 IL-12는 방사선 조사된 마우스에서 조혈 회복을 촉진한다. IL-12Rβ2에 대해 염색된 방사선 비조사되고, 비처리된 마우스의 대퇴 골수의 대표적인 절편이 (A)에서 보여준다. 동물을 TBI(8.0Gy)에 노출시킨 후, 그 뒤에 방사선 조사 후 표시된 시간(B-F)에 비히클 또는 rMuIL-12(20ng/마우스)를 피하에 투여했다. 방사선 조사 후 12일째 대퇴 골수를 IL-12Rβ2(오렌지색)에 대해 면역 조직화학으로 염색했다. 비히클 처리된 마우스의 골수는 IL-12Rβ2-발현하는 세포가 부족하고 조혈 재생의 사인이 보여지지 않는 반면(B), rMuIL-12 처리된 마우스는 조혈 재구성 및 IL-12Rβ2를 발현하는 거핵구, 골수 전구체 및 골아 세포의 존재를 보여줬다(C-F). 배율=100x.
도 7: Lin-IL-12Rβ2-세포를 IL-12 유무에 관계없이 5000개의 세포/슬라이드에 메가컬트(megacult) 배지에 플레이팅했다. IL-12로 자극된 배양은 배지 단독의 배양과 비교하여 더 큰 콜로니를 나타냈다.
도 8: rMuIL-12로 처리된 CIT 마우스의 기준치와 비교한 개별 혈소판 수의 퍼센트. rMuIL-12로 처리군 중 33% 이상의 혈소판이 감소된 동물은 없었다(50마리 중 0마리). 반대로 rMuIL-12를 투여받지 않은 대조군은 20마리 중 6마리(30%)의 혈소판 수치가 기초 수치와 비교하여 33% 이하로 떨어졌다.
도 9: GC 리시빙 rMuIL-12의 요법 하에 마우스의 루이스 폐 종양 부피. 주의: 0시간은 화학요법 투여 시점을 나타낸다. 종양 접종은 화학요법 투여 11일 전에 실시했다.
도 10: 젬시타빈 리시빙 rMuIL-12의 단일요법 하에 마우스의 루이스 폐 종양 부피. 0일째는 최초 화학요법 시점이다. 두 번째 화학요법 투여는 7일째에 실시했다. 종양 접종은 8일째에 실시했다. 젬시타빈만을 화학요법제로 사용한 이 모델 시스템에서 rMuIL-12는 종양 성장률을 증가시키지 않았다. 군 사이의 성장의 차이는 통계적으로 유의하지 않다. 투여-전 군을 제외하고, rMuIL-12 투여로 종양 크기의 감소 경향이 관찰되었다.
상세한 설명
세포독성 화학요법은 무수히 많은 악성 종양 질병의 치료에 유용함이 입증되었지만, 다양한 정도의 골수 억제와 관련되어 있다. 호중구감소증, 빈혈 및 혈소판감소증은 종종 화학요법의 시기 적절하고 효과적인 용량을 제한할 수 있는 용량-제한적 독성이다. 상업적으로 이용가능한 조혈 성장 인자는 호중구감소증[뉴포젠(Neupogen), 뉴라스타(Neulasta), 류카인(Leukine)]의 치료/예방 및 화학요법-유발된 빈혈[프로크리트(Procrit), 아라네스프(Aranesp)]의 치료에 매우 효과적으로 사용되어 왔다. 화학요법-유발된 혈소판감소증에 대한 유일한 치료제 뉴메가(Neumega)는 부작용으로 인해 널리 사용되지 않았다. 화학요법-유발된 혈구감소증의 예방은 화학요법의 용량 강도를 유지시켜, 궁극적으로 더 나은 환자의 결과로 이어질 수 있다.
혈소판 수혈: 사용 가능한 약물이 부족하여, 급성 또는 만성 혈소판감소증에 대한 유일한 치료는 혈소판 수혈이다. 매년 약 2백만 건의 혈소판 수혈이 미국에서 실시된다(Heala and Blumberg Blood Reviews 18:149 2004). 수혈은 일시적으로 혈소판감소증을 바로잡고 합병증의 높은 비율(약 60%)과 관련이 있다. 혈소판 수혈은 심각한 부작용이 있을 수 있다. 혈소판 수혈을 받은 환자는 가벼운 알레르기 반응에서 생명을-위협하는 과민증에 이르기까지 여러 가지 반응의 위험이 있다. 발열 반응이 가장 흔하며, 수혈 100회마다 1회 발생한다. 임상적으로, 가장 중요한 합병증은 동종 면역, 면역억제 및 이식편대 숙주 질병(GVHD)의 면역 조절 효과이다. 또한 혈소판 수혈을 받은 환자는 박테리아, 기생충 및 바이러스 감염의 위험이 있다. 동종 이식을 받은 환자는 HIV로부터 보다 더 큰 간염 바이러스에 치명적인 감염위험이 있다.
따라서, 본원은 화학요법-유발된 혈소판감소증(CIT) 및 다른 혈구감소증을 치료/예방하기 위한 화학요법과 병용되는 보조 치료제로서의 HemaMax™(IL-12)를 지시하고, MRD를 감소시키는 항-종양 반응을 제공한다. 이 두 가지 효과는 함께 암 환자로 더 긴 무진행 생존 및 전반적인 생존기간을 갖게 한다.
HemaMax™ (rHuIL-12): 이황화 결합에 의해 연결된 두 개의 서브 유닛으로 구성된 이종이량체 단백질이다. 두 개의 서브 유닛은 각각 p35 및 p40으로 지칭되는 A 및 B 서브 유닛이다. 이종이량체 IL-12는 503개의 아미노산을 포함한다. 이 단백질은 전체 분자량이 약 75.0kDa으로 CHO(Chines Hamster Ovary) 세포에서 재조합 단백질 생산 기술로 생산될 수 있고, 내인성 IL-12와 같이, 최종 형태가 당단백질이다. HemaMax™의 당화 패턴은 내인성 IL-12와는 다르다. HemaMax™는 시험관내 및 생체내 모두에서 시험관내의 인간 면역 세포 및 비인간 영장류(rhesus 원숭이) 에서 약물동태학적 반응(인터페론-γ[IFN-γ])을 강력하게 유도한다.
HemaMax(rHuIL-12): HemaMax는 혈소판 회복을 포함하는 우수한 혈액 세포 회복, 쥐 모델에서 골수억제 또는 골수소멸성 요법 이후의 회복, 뿐만 아니라 비-인간 영장류 모델에서 골수소멸성 치료 이후의 회복을 입증했다(섹션 D 참조). 사실, 우리의 개념-증명인, 치사의 방사선 NHP 연구에서, 비히클-처리된 원숭이의 80%는 혈소판 수혈을 필요로 하는 반면, HemaMax-처리된 원숭이의 단지 25%만이 혈소판 수혈을 필요로 했다(p <0.007, 카이 제곱 분석). 이러한 결과는 CIT에서 HemaMax의 진보를 뒷받침하는 강력한 증거를 제시한다. HemaMax의 작용 메커니즘(MOA)은 조혈 모세포(HSC)의 수준에서 조혈을 재생하는 것을 포함한다. 이 MOA를 지지하기 위해, CD34, c-Kit 및 KDR과 같은 알려진 줄기세포 마커와 함께 발현되기 때문에 Neumedicines는 인간 HSC의 몇 가지 중요 하위집단에서 IL-12 수용체를 발견했다. 또한, 분화과정에서, IL-12 수용체는 미성숙 및 성숙한 거핵구 둘 다, 인간과 쥐의 거핵구 둘 다, 심지어 혈소판에서도 발견되었다. 따라서 HemaMax의 MOA는 CIT에서 혈소판감소증의 발병률 및 암 환자에서의 혈소판 수혈의 필요성을 줄이기 위한 약물에 대한 충족되지 못한 요구를 충족시키는 데 성공한 전조를 보인다.
화학요법이나 방사선에 대한 보조 요법으로 HemaMax는 다음과 같은 독특한 특성을 가지고 있다, 예를 들어: 1) 화학요법 또는 방사선 조사 후 혈소판 회복에 더하여, HemaMax의 MOA는 호중구 및 적혈구의 회복을 포함하는, 여러 단계의 혈액 재생을 초래한다; 2) HemaMax는 1차 요법, 즉 화학요법 또는 방사선 조사와 상승 작용할 수 있는 항-종양 반응으로 알려져 있다; 및 3) 다른 사이토카인은 보조제로 사용될 때 이 두 가지 독특한 특성을 나타낼 수 없다.
본원은 화학요법제에 대한 개체의 노출 후에 화학요법-유발된 혈구감소증으로부터 개체를 치료 및/또는 예방하기 위한 방법 및 조성물을 제공하며, 상기 방법은 실질적으로 분리된 IL-12를 포함하는 소정 용량의 치료학적 유효량의 약학적 조성물을 개체에게 투여함으로써 혈구감소증을 감소시키는 것을 포함한다.
본원에 사용된 IL-12는 p40 및 p35 서브 유닛을 모두 포함하는 이종이량체 사이토 카인이며, 이는 면역에서의 그의 역할에 대해 잘 알려져 있다. 약 20년에 걸친 수많은 보고서에서, IL-12는 염증 반응, 감염에 대한 선천성 내성, 및 후천성 면역을 조절하여 면역의 선천성 및 후천성 암(arm) 간의 상호 작용에 필수적인 역할을 하는 것으로 나타났다. 내인성 IL-12는 많은 병원균 및 이식 가능하고 화학적으로 유도된 종양에 대한 저항성에 필요하다. 면역에서 IL-12의 특징적인 효과는 자연살해 세포(NK), 대식세포 및 T 세포로부터 인터페론-감마(IFN-γ)의 생산을 자극하는 능력이다. 또한, 90년대 초반의 여러 시험관내 연구는 IL-12가 다른 사이토카인과 상승 작용으로 조혈을 자극할 수 있다고 보고했다. IL-12의 조혈-촉진 활성은 골수 줄기세포에 대한 직접 작용 때문인 것으로 보이는데, 그 이유는 이들 연구에서 고도로 정제된 전구체 또는 단일 세포를 사용했기 때문이다. IL-12의 조혈 활성에 있어서 IFN-감마의 역할은 명확하지 않지만, 여러 연구가 IFN-감마에 대한 조혈의 촉진 및 억제와 관련이 있다.
인터루킨-12(IL-12)는 전신 방사선에 노출되기 전 또는 직후에 사용되었을 때 방사선 보호 기능이 있는 것으로 나타났다[Neta et al. (1994) IL-12 protects bone marrow from and sensitizes intestinal tract to ionizing radiation. J Immunol 153: 4230-4237; Chen et al, (2007) IL-12 facilitates both the recovery of endogenous hematopoiesis and the engraftment of stem cells after ionizing radiation, Exp Hematol 35: 203-213; Basile et al. (2008) Multilineage hematopoietic recovery with concomitant antitumor effects using low dose Interleukin-12 in myelosuppressed tumor-bearing mice, J. Trans. Med. 6(26); Gluzman-Poltorak et al., (2014) Randomized comparison of single dose of recombinant human IL-12 versus placebo for restoration of hematopoiesis and improved survival in rhesus monkeys exposed to lethal radiation, J. Hematol. Oncol. 7(31); Gluzman-Poltorak et al., (2014) Recombinant interleukin-12, but not granulocyte-colony stimulating factor, improves survival in lethally irradiated nonhuman primates in the absence of supportive care: Evidence for the development of a frontline radiation medical countermeasure, Am. J. Hematol., 00(00); Gokhale et al., (2014) Single low-dose rHuIL-12 safely triggers multilineage hematopoietic and immune-mediated effects, Exp. Hematol. Oncol., 3(11); 및, US20110206635 및 US7939058의 전체 개시내용은 본원에 참조로 포함됨]. 이 연구에서, 마우스는 치사의 전신 방사선의 해로운 영향으로부터 구제되었다. 방사선 보호 효과는 골수에서 알 수 없는 세포 집단, 아마도 장기간의 재생 조혈 줄기세포 내에 존재하는 것으로 보고되었다. 또 다른 연구에서, IL-12는 종양-보유한 마우스의 준치사 방사선 조사 후 조기 회복 말초 혈액 세포 수를 제공하는 것을 보여준다(Basile et al. (2008) 골수억제 종양-보유한 마우스에서 저용량 인터루킨-12를 사용하여 항종양 효과를 동반한 다중 계통 조혈 회복, J Transl Med 6: 26). 이 후자의 연구에서, IL-12는 종양 부피를 줄이는데 방사선과 상승 작용을 하는 것으로 나타났다. 특히, IL-12는 방사선 노출 전 또는 후에 투여했을 때 종양 부피를 증가시키지 않았다.
따라서 IL-12는 전신 방사선에 이은 골수의 방사선 보호에 가능성이 있다. 그러나 초기 연구에서는 IL-12가 골수에서 방사선 보호효과가 있었지만, 위장(GI) 시스템은 방사선 손상에 민감해졌다고 보고했다(Neta et al.). 나중의 보고에서, IL-12의 GI 민감성 효과는 투여된 IL-12의 용량에 의존하는 것으로 밝혀졌다. 골수 이외의 다른 조직이나 장기에 대한 IL-12의 방사선 보호 효과에 대한 보고는 없었다.
본 발명은 쥐 재조합 IL-12(예, m-HemaMax) 및 인간 재조합 IL-12(예, HemaMax)가 이를 필요로 하는 개체에서, CIT를 포함하는 혈구감소증을 처리 또는 예방하는 능력을 가지고 있다는 놀랍고도 예상치 못한 발견에 근거가 있다.
선도적인 조혈 지지 치료 요법(EPO)은 종양 성장에 미치는 영향에 대응하여 블랙 박스 경고를 받았다. 조형 줄기 세포에 대한 HemaMax의 직접적인 작용 메커니즘은 이러한 EPO(프로크리트, 아라네스프, 및 에포젠(Epogen)으로 브랜드화된) 및 G-CSF(뉴라스타 및 뉴포젠으로 브랜드화된), 뿐만 아니라 TPO 유사제[엔플레이트(Nplate) 및 프로막타(Promacta)로 브랜드화된] 및 IL-11(뉴메가로 브랜드화된)와 같은, 잘-알려진 조혈 성장 인자와 대조될 수 있다. EPO-유사 분자는 적혈구 증가를 일으키는 적혈구 전구 세포의 수준에 작용한다. G-CSF-유사 분자는 호중구 증가를 일으키는 호중구 전구 세포의 수준에 작용한다. TPO-유사제 및 IL-11은 혈소판 증가를 유도하는 거핵구의 수준에 작용한다. 이 조혈 성장 인자의 표적 세포 집단은 모두 HemaMax의 표적 세포인 조혈 줄기 세포의 다운스트림에 있다.
HemaMax의 작용 메카니즘과 잘-알려진 조혈 성장 인자의 작용 메카니즘 사이에는 겹치는 부분이 없다. HemaMax의 작용 메커니즘은 다른 조혈 인자의 활성 업스트림에서 조혈 줄기세포의 활성화를 수반한다. 결과적으로, HemaMax는 제거 후에 조혈 및 면역계를 보충하고 재생할 수 있지만, 이들 다운스트림 작용 인자는 전구 세포를 표적으로 하여 단일 혈액 세포 유형을 생산할 수 없다. 이 초기-작용(업스트림) 메커니즘을 통해, HemaMax의 원시 조혈 줄기세포의 활성화는 모든 주요 혈액 세포 유형을 회복시킬 수 있다. 전-임상 연구에서, HemaMax는 면역 요법의 작용 메커니즘(INF-γ의 증가 및 T 세포 및 NK 세포의 상향조절)으로 인해 항-종양 효과를 갖는다.
일 양태에서, HemaMax(rMuIL-12)에 대한 쥐 대응물은 CIT를 포함하여, 혈구감소증을 예방 및/또는 치료하는데 예상치 못한 놀라운 효과를 보여준다.
일 양태에서, HemaMax(rMuIL-12)에 대한 쥐 대응물은 준치사 또는 치사인 전신 방사선 조사(TBI: Total Body Irradiation)에 노출된 정상 및 종양-보유한 마우스 모두에서 백혈구 및 적혈구 및 혈소판을 포함하는 모든 계통 혈구 회복을 촉진한다. HemaMax의 활성은 골수 구획에 존재하는 원시 세포(조혈 및 비-조혈 줄기 세포)의 수준에서 시작된다. 이러한 원시 세포의 활성화는 방사선 또는 화학요법으로 인한 골수 제거 또는 골수 억제 후 골수 구획의 재생을 유도한다.
현재 개시의 목적을 위해, 다음의 정의는 전체적으로 기술 용어를 정의하고 청구항에서 보호가 요구되는 사안의 구성의 범위를 정의하는데 사용된다.
본원에서 사용된, "개체"는 처리, 관찰 또는 실험의 대상인 동물을 의미한다. "동물"은 어류, 갑각류, 파충츄 및, 특히 포유류와 같은 냉혈 및 온혈 척추동물 및 무척추동물을 포함한다. "포유류"에는 제한 없이 마우스; 랫; 토끼; 기니피그; 개; 고양이; 양; 염소; 소; 말; 원숭이, 침팬지, 유인원, 및 태아, 소아 및 성인 인간과 같은 영장류를 포함한다.
본원에서 사용된, "예방(preventing)" 또는 "보호(protecting)"은 전체 또는 일부의 예방, 또는 개선 또는 조절을 의미한다.
본원에서 사용된, 용어 "치료(treating)"는 치료학적 처리 및 예방적(prophylactic 또는 preventative) 조치 모두를 의미하거나, 치료학적 잠재력을 가진 것으로 의심되는 제제를 투여하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 용어 "약학적 유효량"은 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의가 추구하는 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 처리된 질병의 증상의 경감 또는 완화를 포함하는 생물학적 또는 의료적 반응을 유도하는 활성 화합물 또는 약학적 제제의 양을 의미한다.
본원에서 사용된, 본 개시 내용의 약학적 조성물에 대한 "유효량"은 유용성을 가지고 계획된 치료학적 종점을 제공하기에 충분한 양을 의미한다.
본원에서 사용된 전신 방사선 조사(TBI)에 따른 방사선 유발된 손상은 다음과 관련된 장기, 조직, 시스템에 영향을 미칠 수 있다: 골수, 림프계, 면역계, 점막 조직, 점막 면역계, 소화계, 심혈관계, 신경계, 생식 기관, 전립선, 난소, 폐, 신장, 피부 및 뇌.
본원에서 사용된, 방사선 노출은 방사선-유발된 급성, 만성 및 전신 손상 영향과 관련될 수 있다. 일 양태에서, 본원은 방사선-유발된 급성 손상 효과를 처리하기 위한 치료학적 조성물 및 이의 사용 방법을 제공한다. 예시적인 손상 영향은 항상 조사 빔의 정상 조직에 대해 제한되지는 않는다. 예시적인 손상 영향은 처리된 영역을 넘어 연장될 수 있으며, 예를 들어, 식도염(삼킴 곤란); 폐에 폐렴(기침, 발열, 폐액 축적); 장의 방사선 조사에 의해 유발된 염증(설사, 경련, 복통); 메스꺼움 및 구토; 권태(tiredness), 피로, 설사, 두통, 조직 부종, 피부 홍반, 기침, 호흡 곤란 등이 있다. 예시적인 손상 효과는 피부 영역, 예로 홍반, 박리; 구강 점막, 예로 점막염, 비인두; 구인두; 성대; 편도선; 피부(편평 또는 상피암종)에 영향을 끼칠 수 있다. 특정 구현예에서, 예시적인 효과는 모세혈관 확장증, 섬유증, 척수 척수염 및 연골 섬유증을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 예시적인 방사선에 유발된 손상의 효과로는 가장 빠른 속도로 분열하는 세포 손상(예를 들어, 골수, 비장 및 림프 조직)을 특징으로 하는 혈액-형성 장기(골수)증후군을 포함할 수 있다. 예시적인 증상의 예로는 내부 출혈, 피로, 박테리아 감염, 및 열을 포함한다.
특정 구현예에서, 예시적인 방사선에 유발된 손상의 효과로는 덜 빠른 속도로 분열하는 세포 손상(예를 들어, 위 및 장의 라이닝)을 특징으로 하는 위장관 증후군을 포함할 수 있다. 예시적인 증상의 예로는 메스꺼움, 구토, 설사, 탈수, 전해질 불균형, 소화 능력 상실, 출혈성 궤양 및 혈액 생성 기관 증후군의 증상을 포함한다.
특정 구현예에서, 예시적인 방사선-유발된 손상의 효과로는 점막염을 포함할 수 있다. 일 구현예에서, 방사선-유발된 점막염은 구강 점막염이다.
특정 구현예에서, 예시적인 방사선 유발된 효과는 또한 신경세포와 같은 재생산되지 않는 세포에 대한 손상을 특징으로 하는 중추 신경계 증후군을 포함할 수 있다. 예시적인 증상으로는 조직화 상실, 혼란, 혼수 상태, 경련, 쇼크, 혈액 생성 장기 및 위장관 증후군의 증상 등이 있다.
특정 구현예에서, 예시적인 방사선 유발된 손상 효과는 출생 전 방사선 노출로 인한 태아에 대한 영향도 포함할 수 있다. 배아/태아, 특히 임신 첫 20주째에는 방사선에 특히 민감하다(배아/태아 세포가 빠르게 분열하고 있음).
특정 구현예에서, 예시적인 방사선 유발된 효과는 산소와 물에 전리 방사선 조사(irradiation)의 상호작용으로부터 과산화물, 히드록실라디칼, 산화질소 및 퍼옥시니트라이트를 포함하는 라디칼 산소종(ROS)의 전리 방사선-유발된 생성으로 인한 손상을 포함할 수 있다.
일 양태에서, 본원은 방사선 유발된 만성 손상 영향을 처리하기 위한 치료학적 조성물 및 이의 사용방법을 제공한다. 만성 방사선 조사 효과는 모든 환자에게 결정적으로 중요하지만, 특히 전신 방사선 조사(TBI)를 받은 환자에게서 중요하다. 전신 방사선 조사는 특히 골수 이식이 필요한 환자의 경우에 일부 암 요법에서 사용된다.
예시적인 방사선 유발된 만성 손상 효과는 예를 들어, 모발 노화, 피부 탈모 및 건조, 백내장 형성, 조기 심근 섬유증, 심근 경색, 신경퇴화, 골연화증/골감소증 및 신경인지 결함과 같은 조기 노화에 공통적인 특징을 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 예시적인 방사선 유발된 효과는 또한 섬유증(정상 조직이 흉터 조직으로 대체되어, 환부의 움직임이 제한된다); 설사 및 출혈을 일으키는 장의 손상; 기억 상실; 불임 및/또는 발암/백혈병 발생을 포함한다.
특정 구현예에서, 본원의 방법 및 조성물은 줄기세포 이식 이후의 조혈 향상에 유용하다. 예시적인 골수 제거 딜리버리 양식/처방은 예를 들어, 통상적인 분획화 요법, 과분획화, 저분획화 및 가속된 분획화를 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 치료학적 양식/처방은 과분획화 요법이다. 과분획화에서, 목표는 임상적으로 수용 가능한 수준의 장기간 조직 손상을 유지하면서 높은 종양 용량을 제공하는 것이다. 일일 용량은 변하지 않거나 약간 증가하지만 분획당 용량은 감소하고, 전체 처리 시간은 일정하게 유지된다.
일 구현예에서, 치료학적 양식/처방은 가속된 분획화 요법이다. 가속화된 분획화 요법에서, 일일 용량은 증가하는 반면, 분획 당 용량은 변하지 않고, 처리하는 전체 시간은 감소된다.
일 구현예에서, 치료학적 양식/처방은 지속적인 과분획화된 가속화된 방사선 요법(CHART) 요법이다. (CHART) 요법에서, 다수의 일별 분획의 처리의 치열한 일정이 단축된 기간 안에 투여된다.
일 구현예에서, 치료학적 양식/처방은 IMRT이다.
화학요법 양식(modality)
오늘날 사용되는 화학요법 약물의 투여에는 수많은 전략이 있다. 화학요법은 치료 목적으로 주어질 수도 있고, 생명을 연장 시키거나 증상을 완화시키는 것을 목표로 할 수도 있다.
양식 화학요법은 방사선 요법 또는 수술과 같은, 다른 암 처리와 함께 약물을 사용하는 것이다. 대부분의 암은 이제 이러한 방식으로 처리된다. 복합 화학요법은 수많은 다른 약물을 동시에 환자에게 처리하는 것과 유사한 실행이다. 약물들은 그들의 메커니즘 및 부작용이 다르다. 가장 큰 이점은 임의의 하나의 제제에 대한 저항성이 발생할 가능성을 최소화하는 것이다.
신보조 화학요법(수술 전 처리)에서 초기 화학요법은 원발 종양을 수축시켜 국부 요법(수술 또는 방사선 요법)을 덜 파괴적으로 또는 보다 효과적으로 수행하도록 설계되었다.
보조 화학요법(수술 후 처리)은 암의 흔적이 거의 없을 때 사용할 수 있지만, 재발의 위험이 있다. 이것은 재발의 가능성을 줄이는 것을 돕는다. 그것은 또한 신체의 다른 부분으로 퍼진 임의의 암세포를 죽이는 데 유용하다. 이것은 새롭게 성장하는 종양은 빠르게 분열되고, 따라서 매우 민감하기 때문에 종종 효과적이다. 완화 화학요법은 치료의 목적은 없지만, 단순히 종양 부하를 줄이고 기대 수명을 늘리기 위한 것이다. 이러한 처방에 대해, 일박적으로 더 나은 독성 프로파일이 기대된다.
본원에서 사용된, 화학요법 처방은 환자가 처리를 받을 수 있어야 한다. 수행도는 종종 환자가 화학요법을 받을 수 있는지, 또는 용량 감소가 필요한지 여부를 결정하는 수단으로 사용된다. 종양에서 각 처리에 의해 오직 세포의 부분만 죽기 때문에(부분적 죽임), 종양의 크기를 줄이기 위해 계속해서 반복된 용량이 투여되어야 한다. 현재의 화학요법 처방은 환자에게 독성에 의해 제한되는 치료의 빈도 및 기간과 함께, 주기적으로 약물 치료를 적용한다.
화학요법제의 유형
본원에서 사용된, 대부분의 화학요법제는 알킬화제, 항대사성물질, 안트라시클린, 식물 알카로이드, 토모아이소머라제 억제제, 및 다른 항종양제로 분류될 수 있다. 이 약물들은 모두 어떻게든 세포 분열 또는 DNA 합성 및 기능에 영향을 준다.
특정 구현예에서, 화학요법제는 DNA에 직접적으로 간섭하지 않는다. 이들은 특정 유형의 암(만성골수성 백혈병, 위장관 간질 종양)에서 분자적 이상을 직접적으로 표적으로 하는, 단일클론 항체 및 타이로신 키나아제 억제제, 예를 들어, 이매티닙메실산염(Gleevec 또는 Glivec)을 포함한다. 이들은 표적 요법의 예이다.
다른 구현예에서, 종양 세포를 직접 공격하지 않고 종양 세포 행동을 조절하는 특정 약물을 사용할 수 있다.
알킬화제
알킬화 항종양제
알킬화제는 세포 내에 존재하는 조건 하에서 많은 친핵성 작용기를 알킬화시키는 능력 때문에 명명된다. 시스플라틴 및 카보플라틴뿐만 아니라 옥살리플라틴은 알킬화제이다. 그들은 생물학적으로 중요한 분자에서 아미노, 카르복실, 설프하이드릴 및 포스페이트 기와 공유 결합을 형성함으로써 세포 기능을 손상시킨다.
다른 제제는 메클로레타민, 시클로포스파미드, 클로람부실, 아이포스파미드이다. 그들은 세포의 DNA를 화학적으로 변형시켜 작동한다.
항-대사성물질
항-대사성물질은 퓨린(아자티오프린, 메르캅토퓨린) 또는 피리미딘으로 가장한다 - DNA의 빌딩-블록이 된다. 그들은 이 물질들이 "S" 단계(세포 주기의) 동안 DNA에 포함되는 것을 막아, 정상 발달 및 분열을 멈춘다. 그들은 또한 RNA 합성에도 영향을 미친다. 그들의 효능으로 인해, 이 약물들은 가장 널리 사용되는 세포증식 억제제이다.
식물 알칼로이드 및 터페노이드
이 알칼로이드들은 식물에서 유래하고 미세소관 기능을 막아 세포 분열을 차단한다. 미세소관은 세포 분열에 필수적이며, 이들이 없다면, 세포분열이 발생할 수 없다. 주요 예로는 빈카 알칼로이드 및 탁산이 있다.
빈카(vinca) 알칼로이드
빈카 알칼로이드는 튜불린의 특정 부위에 결합하여 튜불린이 미세소관으로 조립하는 것을 억제한다(세포주기의 M단계). 그들은 마다가스카르 페리윙클, Catharanthus roseus(이전에는 일일초로 알려짐)에서 유래된다. 빈카 알칼로이드는 다음을 포함한다: 빈클리스틴; 빈블라스틴; 비노벨린; 및 빈데신.
포도필로톡신
포도필로톡신은 다른 두 가지 세포증식 억제제인 에토포시드 및 테니포시드를 생성하는 데 사용되는 것뿐만 아니라 소화에 도움이 되는 것으로 알려진 식물 유래 화합물이다. 그들은 세포가 GI 단계(DNA 복제의 시작) 및 DNA 복제(S 단계)에 진입하는 것을 막는다. 그 작용의 정확하나 메커니즘은 아직 알려지지 않았다.
이 물질은 주로 American Mayapple(Podophyllum peltatum)에서 얻었다. 최근에 이것은 드문 Himalayan Mayapple(Podophyllum hexandrum)가 훨씬 더 많은 양을 함유하고 있다고 알려졌지만, 식물이 멸종위기에 처함에 따라, 그 공급량이 제한적이다. 물질의 생산에 관여하는 유전자를 분리하여 재조합으로 얻을 수 있는 연구를 수행했다.
탁산
프로토타입 탁산은 원래 탁솔로 알려진, 천연물 파클리탁셀로 처음에는 태평양주목(Pacific Yew) 나무의 나무껍질에서 유래된다. 도세탁셀은 파클리탁셀의 준-합성 유사체이다. 탁산은 미세소관의 안정성을 향상시키고, 후기에서 염색체의 분리를 막는다.
토포아이소머라제 억제제
토포아이소머라제는 DNA의 위상을 유지하는데 필수적인 효소이다. 유형Ⅰ 또는 유형Ⅱ 토포아이소머라제 억제제는 적절한 DNA 슈퍼코일링을 틀어지게 하는 것에 의해 전사 및 복제 둘 다를 방해한다.
일부 유형Ⅰ 토포아이소머라제 억제제는 캄프토테신을 포함한다: 이리노테칸 및 토포테칸.
유형Ⅱ 토포아이소머라제 억제제의 예는 암사크린, 에토포시드, 에토포시드 포스페이트, 및 테니포사이드을 포함한다. 이들은 에피포도필로톡신의 준합성 유도체이며, American Mayapple(Podophyllum peltatum)의 뿌리에 자연적으로 발생하는 물질이다.
세포독성 항생제: 이들은 예를 들어, 토포아이소머라제 Ⅱ 억제하는, 악티노마이신; 안트라시클린; 독소루비신; 다우노루비심; 발루비신; 아이다루비신; 에피루시빈을 포함한다.
다른 세포독성 항생제는 예를 들어, 블레오마이신을 포함한다. 블레오마이신은 DNA-블레오마이신-Fe(II) 복합체의 산화와 자유 라디칼 형성을 통해 손상과 염색체 이상을 유도하는, 독특한 방식으로 작용한다. 다른 예는 플리카마이신 및 마이토마이신을 포함한다.
많은 화학요법제가 방사선 요법의 효과를 향상시킬 수 있다. 일 양태에서, 본원의 양태 및 구현예는 기존의 화학 요법 양식과 병용 요법으로서 이용될 수 있다. 상기 병용 요법(순차적 또는 병행)은 공동-투여 또는 공동-제형일 수 있다.
"인터루킨-12(IL-12)"는 천연 IL-12 분자, 변이체 11-12 분자 및 공유 결합으로 변형된 IL-12 분자를 포함하여, 본원에 개시된 조혈 성질 중 적어도 하나를 생성하는 IL-12 분자를 지칭하며, 지금 알려져 있거나 미래에 개발될 것, 당해 기술 분야 또는 미래에서 개발될 임의의 방법으로 생산되는 것이다.
IL-12 분자는 실질적으로 분리된 형태로 존재할 수 있다. 생성물은 의도된 목적을 방해하지 않고 실질적으로 분리된 것으로 간주되는 담체 또는 희석제와 혼합된 것임을 이해할 것이다. 본 발명의 생성물은 또한 실질적으로 정제된 형태일 수 있으며, 이 경우 일반적으로 약 80%, 85% 또는 90%를 포함하며, 예를 들어 적어도 약 95%, 적어도 약 98% 또는 적어도 약 99%의 펩타이드 또는 물질의 건조 중량을 갖는다.
일반적으로, 본 발명의 구현예에서 사용되는 IL-12 분자의 아미노산 서열은 본 발명의 방법에 의해 처리되는 특정 포유류부터 유래된다. 따라서, 설명을 위해, 인간의 경우, 일반적으로 인간 IL-12 또는 재조합 인간 IL-12가 본 발명의 방법에 따라 인간에게 투여될 것이며, 유사하게, 고양이에서는, 예를 들어, 고양이 IL-12, 또는 재조합 고양이 IL-12는 본 발명의 방법에 따라 고양이에게 투여될 것이다.
그러나, 본 발명에 포함되는 것은 IL-12 분자가 그의 아미노산 서열을 본 발명의 치료학적 방법의 개체인 포유류로부터 유래하지 않는 특정 구현예이다. 설명을 위해, 인간 IL-12 또는 재조합 인간 IL-12는 고양이 포유류에서 이용될 수 있다. 본 발명의 또 다른 구현예는 IL-12의 천연 아미노산 서열이 천연 서열로부터 변경되는 IL-12 분자를 포함하나, IL-12 분자는 본원에 개시된 IL-12의 조혈 특성을 내는 기능을 한다. IL-12의 천연, 종-특이적 아미노산 서열로부터의 변형은 IL-12의 일차 서열에서의 변화를 포함하고, 일차 아미노산 서열에 대한 결실 및 추가를 포함하여 변이 IL-12 분자를 생성한다. 고도로 유도체화된 IL-12 분자의 예는 Maxygen, Inc.에 의해 재설계된 IL-12 분자이고(Leong S R, et al., Proc Natl Acad Sci USA. 2003 Feb. 4; 100 (3): 1163-8.), 여기서 변이 IL-12 분자는 DNA 셔플링 방법에 의해 생산된다. 또한, 보존 수명, 반감기, 효능, 용해도, 전달 등을 증가시키는 IL-12 분자에 대한 공유 결합 변형, 폴리에틸렌 글리콜기, 폴리프로필렌 글리콜 등의 추가와 같은 변형된 IL-12 분자도 본 발명의 방법에 포함되며, 미국 특허 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192 또는 4,179,337에 기재되어 있다. IL-12 폴리펩티드의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C- 말단과 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 IL-12 폴리펩티드의 표적화된 아미노산 잔기를 반응시킴으로써 IL-12 분자의 공유 결합 변형의 한 유형이 분자 내로 도입된다. 천연 서열 IL-12 및 IL-12의 아미노산 서열 변이체는 공유 결합으로 변형될 수 있다. 또한 본원에서 언급된 바, IL-12 분자는 재조합 방법을 포함하여 당 업계에 공지된 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 본원에 포함된 다른 IL-12 변이체는 예를 들어, 글리코실화와 같이, 표준 서열이 번역 후 변형된 것이다. 특정 구현예에서, IL-12는 포유류 발현 시스템 또는 세포주에서 발현된다. 일 구현예에서, IL-12는 CHO(Chinese Hamster Ovary) 세포에서의 발현에 의해 생산된다.
변이 IL-12 폴리펩티드의 특성을 사전에 예측하는 것이 종종 어렵기 때문에, 최적 변이체를 선택하기 위해 회수된 변이체의 스크리닝이 필요할 것이라는 것을 이해할 것이다. 변이 IL-12 분자의 혈액학적 자극 또는 향상된 성질의 변화를 평가하는 바람직한 방법은 하기 개시된 치사 방사선 조사 구조 프로토콜을 사용하는 것이다. 산화 환원 또는 열 안정성, 소수성, 단백질 분해 감소에 대한 감수성, 또는 담체와 응집하는 경향 또는 응집하여 다량체가 되는 경향과 같은 단백질 또는 폴리펩티드 특성의 다른 잠재적 변형은 당 업계에 공지된 방법으로 어세이된다.
IL-12에 관한 일반적인 설명은 미국 특허 5,573,764, 5,648,072, 5,648,467, 5,744,132, 5,756,085, 5,853,714 및 6,683,046에 기재되어 있다. 인터루킨-12(IL-12)는 일반적으로 면역 반응에 관여하는 세포의 활성을 조절하는 전염증성 사이토카인으로 설명된 이종이량체 사이토카인이다(Fitz K M, et al., 1989, J. Exp. Med. 170:827-45). 일반적으로 IL-12는 NK 세포 및 T 세포로부터 인터페론-γ(INF-γ)의 생산을 자극하고(Lertmemongkolchai G, Cai et al., 2001, Journal of Immunology. 166:1097-105; Cui J, Shin T, et al., 1997, Science. 278:1623-6; Ohteki T, Fukao T, et alk., 1999, J. Exp. Med. 189:1981-6; Airoldi I, Gri G, et al., 2000, Journal of Immunology. 165:6880-8), T 헬퍼 1(TH1) 세포의 분화를 돕고(Hsieh C S, et al., 1993, Science. 260:547-9; Manetti R, et al., 1993, J. Exp. Med. 177:1199-1204), 선천성 저항 및 후천성 면역사이의 연결을 형성한다. IL-12는 또한 면역-조절 및 항-혈관형성 효과를 통해 암 성장을 억제하는 것으로 나타났다(Brunda M J, et al., 1993, J. Exp. Med. 178:1223-1230; Noguchi Y, et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:11798-11801; Giordano P N, et al., 2001, J. Exp. Med. 194:1195-1206; Colombo M P, et al, 2002, Cytokine Growth factor rev. 13:155-168; Yao L, et al., 2000, Blood 96:1900-1905). IL-12는 일단 병원성 박테리아, 곰팡이 또는 세포 내 기생충을 마주침에 의해 활성화되면 수지상 세포(DC) 및 식세포(대식세포 및 호중구)에 의해 주로 생산된다(Reis C, et al., 1997, J. Exp. Med. 186:1819-1829; Gazzinelli R T, et al., 1994, J. Immunol. 153:2533-2543; Dalod M, et al., 2002, J. Exp. Med. 195:517-528). IL-12 수용체(IL-12R)는 주로 활성화된 T 세포 및 NK 세포에 의해 발현된다(Presky D H, et al., 1996, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 93:14002-14007; Wu C Y, et al., 1996, Eur J. Immunol. 26:345-50).
일반적으로 IL-12의 생산은 INF-γ의 생산을 자극하여 차례로 IL-12 생산을 증가시켜, 양성 피드백 루프를 형성한다. 시험관내 시스템에서, IL-12는 초기 조혈 전구체의 증식 및 분화를 자극하기 위해 다른 사이토카인(예를 들어, IL-3 및 SCF)과 상승 작용할 수 있는 것으로 보고되었다(Jacobsen S E, et al., 1993, J. Exp Med 2: 413-8; Ploemacher R E, et al., 1993, Leukemia 7: 1381-8; Hirao A, et al., 1995, Stem Cells 13: 47-53).
IL-12의 생체내 투여는 말초혈액 세포 수 및 골수 조혈을 감소시키는 것으로 관찰되었다(Robertson M J, et al., 1999, Clinical Cancer Research 5: 9-16; Lenzi R, et al., 2002, Clinical Cancer Research 8:3686-95; Ryffel B. 1997, Clin Immunol Immunopathol. 83:18-20; Car B D, et al., 1999, The Toxicol Pathol. 27:58-63). INF-γ 수용체 녹아웃 마우스를 사용하여, Eng 등 및 Car 등은 고용량 IL-12가 일반적으로 보이는 독성 효과를 유도하지 않았음, 즉, 조혈 억제가 없음을 나타내었다(Eng V M, et al., 1995, J. Exp Med. 181:1893-8; Car B D, et al., 1995, American Journal of Pathology 147:1693-707). 이러한 관찰은, 이전에 보고된 바와 같이, 분화된 조혈 세포의 향상을 촉진하는 IL-12의 일반적인 현상이 우세한 골수억제 방식으로 작용하는, INF-γ의 생산에 의해 생체 내에서 균형을 이루고 있음을 시사한다.
현재의 증거는 예시적인 IL-12 제제, 재조합 인간 IL-12(예, HemaMax)가 신체에서 적어도 4가지 레벨의 반응을 유발한다는 것을 시사한다(도 14 참조). 레벨 1 반응에서 HemaMax는 잔존하는, 방사선 민감성 면역 세포, 즉 NK 세포, 대식세포 및 수지상 세포의 증식과 활성화를 촉진한다. HemaMax에 의해 유도된 IL-15 및 IL-18의 혈장 상승은 NK 세포의 성숙을 촉진하여 IFN-γ의 방출을 유도하며, 이것은 차례로 대식세포 및 수지상 세포, 및 NK 세포로부터의 내인성 IL-12 생산에 긍정적인 영향을 미친다. 이러한 사건은 HemaMax 투여를 따르는 초기에 선천성 면역 능력을 향상시킨다. 레벨 2 반응에서, HemaMax는 생존하는 조혈 줄기세포, 골아 세포 및 거핵구의 증식 및 분화를 촉진하여 최적의 조혈이 일어나는 특정 세포 배열로 유도한다. CD34+, IL-12Rβ2 양성 골수 세포로부터의 HemaMax-유도된 분비는 또한 골수 내 IFN-γ의 국소 과발현을 억제하여, 조혈 세포의 팽창을 촉진시키는 환경을 제공할 수 있다. 골수에서의 조혈 재생은 선천성 및 후천성 면역 능력 둘 다를 향상시킨다. 레벨 3 반응에서, HemaMax는 GI 줄기세포를 보존하여 병원균 유출량 감소, 음식 섭취 증가, 설사 감소를 이끈다. 레벨 4 반응에서, HemaMax는 다양한 장기/조직 세트에서 세포 생존력을 향상시키는 세포 보호인자인, EPO의 신장 방출을 직접적으로 증가시킬 가능성이 있다. 병원체 및/또는 EPO에 의해 활성화된 수지상 세포로부터의 내인성 IL-12의 계속적인 생산은 양성 피드백 루프 역할을 하고 아마도 방사선 후 몇 주 동안 외인성 HemaMax에 대한 초기 반응을 유지하는 데 중요한 역할을 한다.
IL-12 투여 방법
본원은 원하는 치료학적 효과를 달성하는 기간 동안 IL-12의 하나 이상의 유효 용량(들)을 개체에게 투여에 의한 치료 방법을 제공한다. 개체는 바람직하게는 소, 돼지, 말, 닭, 고양이, 개 등과 같은 동물을 포함하나, 이에 제한되지 않는 포유류이며, 가장 바람직하게는 인간이다.
다양한 전달 시스템이 공지되어 있고, 본 발명의 방법에 따라 IL-12의 투여에 사용될 수 있다. 예를 들어, 리포솜으로 캡슐화, 미세입자, 미세캡슐, IL-12를 발현할 수 있는 재조합 세포, 수용체-매게 세포내 섭취(Wu and Wu, 1987, J. Biol. Chem. 262:4429-4432), 레트로 바이러스 또는 다른 벡터의 일부로서 IL-12에 대한 유전자를 포함하는 핵산의 구성 등이 있다. 도입 방법은 피내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내, 피하, 비강 내, 경막 외 및 구강 경로를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
IL-12는 임의의 편리한 경로, 예를 들면, 주입 또는 식괴 주사, 상피 또는 점막피부 라이닝(예를 들어, 구강 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있고, 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전신 또는 국소적일 수 있다. 또한, 뇌실 내 및 척수강 내 주사를 포함하는 임의의 적합한 경로에 의해 IL-12를 포함하는 약학적 조성물을 중추 신경계에 도입하는 것이 바람직할 수 있으며; 뇌실 내 주사는, 예를 들어, 옴마야(Ommaya) 저장소와 같은 저장소에 부착된 뇌실 내 카테터에 의해 촉진될 수 있다. 폐 투여는 또한, 예를 들어 흡입기 또는 분무기의 사용 및 에어로졸화제와의 제형의 사용에 의해 이용될 수 있다. IL-12를 포함하는 약학적 조성물을 처리가 필요한 영역에 국소적으로 투여하는 것이 바람직할 수 있고; 이는 국소 적용, 주사, 카테터 방법, 좌약 방법 또는 임플란트 방법에 의해 달성될 수 있으며, 상기 임플란트는 다공성 비-다공성 또는 시알락스(sialastic)막과 같은 막 또는 섬유를 포함하는 젤라틴 물질이 될 수 있다.
IL-12 투여의 다른 방식은 소포, 특히 리포좀에서의 전달을 포함한다[Langer, Science 249:1527-1533 (1990): Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327; 일반적으로 ibid.].
IL-12의 또 다른 투여방식은 조절된 방출 시스템을 포함한다. 특정 구현에에서, 펌프가 사용될 수 있다[Langer, supra; Sefton, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201 (1987); Buchwald et al., Surgery 88:507 (1980); Saudek et al., N. Engl. J. Med. 321:574 (1989)]. 또한, 중합체 물질이 사용될 수 있고[Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres, Boca Raton, Fla. (1974) 참조; Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley. N.Y. (1984); Ranger and Peppas, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 (1983; Levy et al., Science 228:190 (1985) 참조; During et al., Ann. Neurol. 25:351 (1989); Howard et al., J. Neurosurg. 71:105 (1989)] 또는 조절된 방출 시스템은 치료학적 표적, 즉 뇌에 근접하여 배치될 수 있으며, 따라서 전신 용량의 단지 일부만을 필요로 한다[예를 들어, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)]. 기타 제어 방출 시스템은 Langer의 검토에서 논의된다(Science 249:1527-1533 (1990)).
일 양태에서, IL-12의 하나 이상의 유효 용량(들)은 화학요법 투여 전에 주어진다. 다른 양태에서, IL-12의 하나 이상의 유효 용량(들)은 화학요법 노출 전, 투여 중 및/또는 후에 주어진다. 또 다른 양태에서, IL-12의 하나 이상의 유효 용량(들)은 화학요법 노출 후에 주어진다.
특정 양태에서, IL-12의 하나 이상의 유효 용량(들)은 화학요법 노출 후 약 24시간, 약 48시간, 약 72시간, 약 96시간 또는 약 120시간 후에 주어진다.
일 양태에서, IL-12의 하나 이상의 유효 용량은 국소, 피하, 피내, 정맥 내, 복강 내, 근육 내, 경막 외, 비경구, 비강 내 및/또는 두개 내로 투여된다.
IL-12의 형태와 용량
본 발명의 구현예에서 사용하기 위한 IL-12의 적합한 투여 형태는 본질적으로 비-독성이고 비-치료학적인 생리학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 이러한 담체의 예는 이온 교환체, 알루미나, 스테아르산 알루미늄, 레시틴, 인간 혈청 알부민과 같은 혈청 단백질, 인산염, 글리신, 소르빈산, 소르빈산 칼륨과 같은 완충 물질, 포화 식물성 지방산의 부분 글리세라이드 혼합물, 물, 염, 또는 프로타민 황산염, 인산수소이나트륨, 인산수소칼륨, 염화나트륨, 아연 염, 콜로이드성 실리카, 마그네슘 트리실리케이트, 폴리비닐 피롤리돈, 셀룰로오스계 물질 및 PEG와 같은 전해질을 포함할 수 있다. IL-12 폴리펩티드의 국소적 또는 겔-기반한 형태의 담체는 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스 또는 메틸셀룰로오스와 같은 다당류, 폴리비닐피롤리돈, 폴리아크릴레이트, 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌-블록 중합체, PEG, 및 목재 왁스 알코올을 포함한다. 모든 투여에 대해, 통상적인 디폿 형태가 적합하게 사용된다. 이러한 형태는 예를 들어, 미세캡슐, 나노-캡슐, 리포좀, 플라스터, 흡입 형태, 코 스프레이, 설하 정제 및 지효성 제제를 포함한다.
지효성 제제의 적합한 예는 폴리펩티드를 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하며, 이 매트릭스는 예를 들어, 필름 또는 미세캡슐과 같이, 성형된 제품의 형태로 존재한다. 지효성 메트릭스의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, Langer et al. supra에 의해 기술된 폴리(2-히드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올), 폴리락티드(미국 특허 3,773,919), L-글루탐산 및 감마 에틸-L-글루탐산의 공중합체(Sidman et al, supra), 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트(Langer et al., supra), 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대 Lupron Depot™(젖산-글리콜산 공중합체 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사 가능한 미세구) 및 폴리-D-(-)-3-히드록시 부티르산을 포함한다. 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산과 같은 중합체는 100일 이상 분자를 방출할 수 있지만, 특정 하이드로겔은 보다 짧은 시간 동안 단백질을 방출한다. 캡슐화된 IL-12 폴리펩티드가 장시간 체내에 남아있을 때, 37℃에서 수분에 노출되면 변성되거나 응집되어 생물학적 활성이 상실되고, 면역원성이 변할 수 있다. 관련된 메커니즘에 따라 안정화를 위해 합리적인 전략을 고안할 수 있다. 예를 들어, 응집 메커니즘이 싸이오-이황화물 교환을 통한 분자간 S-S 결합 형성인 것으로 밝혀지면, 설싸이드릴(sulthydryl) 잔기를 변형시키고, 산성 용액으로부터 동결 건조하고, 수분 함량을 조절하고, 적절한 첨가제를 사용하고, 특정 중합체 매트릭스 조성물을 개발함으로써 안정화를 달성할 수 있다.
지효성 IL-12 함유 조성물은 또한 리포좀으로 포획된 폴리펩티드를 포함한다. IL-12 폴리펩티드를 함유하는 리포좀은 Eppstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:3688-3692 (1985); Hwang et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 77:4030 (1980); 및 미국 특허 4,485,045 및 4,544,545와 같이 당 업계에 공지된 방법에 의해 준비된다. 통상적으로, 리포좀은 지질 함량이 약 30mol 이상인 작은(약 200-800 옹스트롬) 단일라멜라 형이다. % 콜레스테롤, 선택된 비율은 최적의 Wnt 폴리펩티드 요법을 위해 조정된다. 향상된 순환 시간을 갖는 리포좀은 미국 특허 5,002,302 에 개시되어 있다.
질병의 치료를 위해, IL-12 폴리펩티드의 적절한 투여량은, 상기 정의된 바와 같이, 처리된 질병의 종류, 질병의 중증도 및 경과, 이전의 요법, 환자의 임상 병력 및 본원에 개시된 IL-12의 치료학적 방법에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 의존한다. 본 발명에 따르면, IL-12는 한 번 또는 일련의 처리에 걸쳐 환자에게 적절하게 투여된다.
질병의 종류 및 중증도에 따라, 예를 들어, 하나 또는 그 이상의 별개의 투여, 또는 계속적인 투입인지 아닌지, 약 10ng/kg 내지 2000ng/kg의 IL-12가 환자에게 투여되는 초기 후보 투여량이다. 인간은 약 500ng/kg의 반복 투여량을 안전하게 견딜 수 있지만, 약 200ng/kg까지의 단일 투여량은 독성 부작용을 일으키지 않아야 한다. 예를 들어, 용량은 G-CSF, GM-CSF 및 EPO와 같은 다른 사이토카인의 용량과 동일할 수 있다. 몇 일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 증상에 따라, 바람직한 질병 증상의 억제가 나타날 때까지 치료가 지속된다. 그러나, 다른 투여량 처방이 유용할 수 있다. 이 요법의 진행은 통상적인 기술 및 어세이로 쉽게 모니터링 할 수 있다.
IL-12는 직접 공동-투여 또는 순차 투여에 의해 다른 사이토카인과 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 사이토카인이 IL-12와 함께 투여되는 경우, IL-12의 용량보다 적은 용량이 사용될 수 있다. 즉 IL-12 이외의, 다른 사이토카인의 적절한 용량은 약 1㎍/kg 내지 약 15mg/kg 사이토카인이다. 예를 들어, 용량은 G-CSF, GM-CSF 및 EPO와 같은 다른 사이토카인의 용량과 동일할 수 있다. 다른 사이토카인(들)은 IL-12의 투여 전, 투여와 동시에, 또는 투여 후에 투여될 수 있다. 사이토카인 및 IL-12는 조합되어 포유류에 동시 투여하기 위한 약학적 조성물을 형성 할 수 있다. 특정 구현예에서, IL-12 및 사이토카인의 양은 IL-12 및 다른 사이토카인의 투여에 따라 포유류에서 그러한 혈액 세포의 상승적인 재증식(또는 조혈 세포의 증식 및/또는 분화의 상승적 증가)이 발생하도록 한다. 다시 말해, 혈액 세포의 재증식(또는 조혈 세포의 증식/분화)과 관련하여 둘 이상의 제제(즉, IL-12 및 하나 이상의 사이토카인(들))의 협동된 작용은 이러한 분자의 개별 효과의 합 이상이다.
IL-12의 치료학적 제형은 동결건조된 케이크 또는 수용액 형태로 선택적인 생리학적 허용가능한 담체, 부형체, 또는 안정제(Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A., Ed., (1980))와 함께 원하는 정도의 순도를 갖는 IL-12 혼합에 의해 저장되어 준비된다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제는 사용된 용량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 인삼염, 구연산염, 및 다른 유기산과 같은 완충제; 아스코르브산을 포함하는 항산화제; 저분자량(약 10 잔기 미만) 폴리펩티드; 혈청 알부민. 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 글라이신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌, 또는 라이신과 같은 아미노산; 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 만니톨 또는 소르비톨과 같은 당알콜; 나트륨과 같은 염-형성 카운터 이온; 및/또는 Tween®, Pluronics™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비-이온성 계면활성제를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "완충제"는 약학적 제제의 pH를 안정화시키는 약학적으로 허용가능한 부형제를 의미한다. 적합한 완충제는 당 업계에 공지되있고 문헌에서 찾을 수 있다. 약학적으로 허용가능한 완충제는 히스티딘-완충제, 구연산염-완충제, 숙신산-완충제, 아세트산염-완충제, 인산염-완충제, 아르기닌-완충제 또는 이들의 혼합물을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 상기 언급된 완충제는 일반적으로 약 1mM 내지 약 100mM, 약 5mM 내지 약 50mM 및 약 10-20mM의 양으로 사용된다. 완충된 용액의 pH는 적어도 4.0, 적어도 4.5, 적어도 5.0, 적어도 5.5 또는 적어도 6.0이 될 수 있다. 완충된 용액의 pH는 7.5 미만, 7.0 미만, 또는 6.5 미만이 될 수 있다. 완충된 용액의 pH는 당 업계에 공지된 산 또는 염기, 예를 들어, 염산, 아세트산, 인산, 황산 및 구연산, 수산화나트륨 및 수산화칼륨으로서 약 4.0 내지 약 7.5, 약 5.5 내지 약 7.5, 약 5.0 내지 약 6.5 및 약 5.5 내지 약 6.5일 수 있다. 본원에서 pH를 기술할 때, "약"은 ±0.2 pH 단위를 의미한다.
본원에서 사용된, 용어 "계면활성제"는 교반 및 전단과 같은 기계적 스트레스로부터 단백질 제형을 보호하기 위해 사용되는 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용가능한 계면활성제의 예로는 폴리옥시에틀렌소르빈탄 지방산 에스테르(Tween), 폴리옥시에틀렌 알킬 에테르(Brij), 알킬페닐폴리옥시에틸렌 에터(Triton-X), 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체(Poloxamer, Pluronic), 및 나트륨 도데실 설페이트(SDS)를 포함한다. 적합한 계면활성제는 폴리소르베이트 20(상표 Tween 20®으로 시판됨) 및 폴리소르베이트 80 (상표 Tween 80®으로 시판됨)과 같은 폴리옥시에틸렌소르비탄-지방산 에스테르를 포함한다. 적합한 폴리에틸렌-폴리 프로필렌 공중합체는 Pluronic® F68 또는 Poloxamer 188®이라는 이름으로 판매되는 것이다. 적합한 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르는 Brij®라는 상표로 시판되는 것이다. 적합한 알킬페놀폴리옥시에틸렌 에스테르는 Triton-X라는 상표명으로 시판된다. 폴리소르베이트 20(Tween 20®) 및 폴리소르베이트 80 (Tween 80®)을 사용하는 경우, 이들은 일반적으로 약 0.001 내지 약 1%, 약 0.005 내지 약 0.2% 및 약 0.01% 내지 약 0.1% w/v(중량/부피)의 농도 범위에서 사용된다.
본원에서 사용된, 용어 "안정제"는 제조, 저장 및 적용 중에 화학적 및/또는 물리적 분해로부터 활성 약학적 성분 및/또는 제형을 보호하는 약학적으로 허용가능한 부형제를 포함할 수 있다. 단백질 의악품의 화학적 및 물리적 분해 경로는 문헌[Cleland et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 70(4):307-77 (1993); Wang, Int. J. Pharm., 7S5(2): 129-88 (1999); Wang, Int. J. Pharm., 203(1-2): 1-60 (2000); and Chi et al, Pharm. Res., 20(9): 1325-36 (2003)]에서 검토된다. 안정제는 당류, 아미노산, 폴리올, 예를 들어, 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린, 설퍼부틸에틸-베타-사이클로덱스트린, 베타-사이클로덱스트린와 같은 사이클로덱스트린, 예를 들어, PEG 3000, PEG 3350, PEG 4000, PEG 6000과 같은 폴리에틸렌글리콜, 알부민, 인간 혈청 알부민(HAS), 소 혈청 알부민(BSA), 예를 들어, 염화나트륨, 염화마그네슘, 염화칼슘과 같은 염, 예를 들어, EDTA와 같은 킬레이트제로 이후 내용에서 정의된다. 전술한 바와 같이, 안정제는 약 10 내지 약 500Mm의 양, 약 10 내지 약 300mM의 양 또는 약 100mM 내지 약 300mM의 양으로 제형에 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, 예시적인 IL-12 안정한 적절한 약학적 제형으로 용해될 수 있다.
IL-12는 또한 예를 들어, 코아세르베이션 기술 또는 콜로이드 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포좀, 알부민 미세구, 미세에멀젼, 나노-입자, 및 나노캡슐) 또는 마크로에멀젼(macroemulsion)에서 계면 중합(예를 들어, 하이드록시메틸셀룰로오스 또는 젤라틴-미세캡슐 및 폴리-(메틸메타아실레이트)미세켑슐, 각각)에 의해 준비된 미세캡슐에 갇힐 수 있다. 이러한 기술은 전술한 Remington 's Pharmaceutical Sciences에 개시되어 있다.
생체 내 투여에 사용되는 IL-12는 살균되어야 한다. 이는 동결건조 및 재구성 전 또는 후에 살균 여과 막을 통한 여과에 의해 용이하게 달성된다. IL-12는 동결 건조된 형태 또는 용액으로 저장된다. 치료학적 IL-12 조성물은 일반적으로 피하 주사 바늘에 의해 관통할 수 있는 마개를 갖는 정맥 내 용액 백 또는 바이알과 같은 살균 접근 포트를 갖는 용기에 배치된다.
IL-12는 국소적으로 투여될 때, 담체 및/또는 보조제와 같은 다른 성분과 적절히 조합된다. 이러한 다른 성분의 성질에는 제한이 없지만, 이들은 의도된 투여를 위해 생리학적으로 허용가능하고 효과적이어야 하며, 조성물의 활성 성분의 활성을 저하 시킬 수 없다. 적합한 비히클의 예는 정제된 콜라겐이 있거나 없는 연고, 크림, 겔 또는 현탁액을 포함한다. 상기 조성물은 또한 경피 패치, 플라스터 및 붕대, 바람직하게는 액체 또는 반-액체 형태로 함침될 수 있다.
겔 제형을 얻기 위해, 국부적으로 도포되는 적절한 점도의 겔을 형성하기 위해 액체 조성물로 제형화된 IL-12를 유효량의 수용성 다당류 또는 PEG와 같은 합성 중합체와 혼합한다. 사용될 수 있는 다당류는 예를 들어, 알킬 셀룰로오스, 하이드록시알킬 셀룰로오스, 및 예를 들어, 메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스, 카복시메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 및 하이드록시프로필 셀룰로오스와 같은 알킬하이드록시알킬 셀룰로오스를 포함하는 에테르화된 셀룰로오스 유도체와 같은 셀룰로오스 유도체; 녹말 및 분획된 녹말; 한천; 알긴산 및 알긴산염; 아라비아 검; 풀루란; 아가로오스; 카라기닌; 덱스트란; 덱스트린; 프락탄; 이눌린; 매넌; 자일란; 아라비난; 키토산; 글리코겐; 글루칸; 및 합성 생체고분자; 뿐만 아니라 잔탄 검과 같은 검; 구아 검; 및 카라야 검; 및 이들의 유도체 및 혼합물을 포함한다. 본원에서 바람직한 겔화 제제는 생물학적 시스템에 대해 비활성이고, 비독성이고, 제조가 간단하고, 너무 흐르거나 끈적이지 않으며, 그 안에 보유된 IL-12 분자를 불안정하게 하지 않는다.
바람직하게는 다당류는 에테르화 셀룰로오스 유도체, 보다 바람직하게는 USP에서 잘 정의되고 정제되고 목록화된 것, 예를 들어, 메틸셀룰로스 및 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시에틸 셀룰로오스 및 하이드록시프로필 메틸셀룰로스와 같은 하이드록시알킬 셀룰로오스 유도체이다. 본원에서 가장 바람직한 것은 메틸셀룰로오스이다.
겔화에 유용한 폴리에틸렌 글리콜은 전형적으로 적절한 점도를 얻기 위해 저분자량 및 고분자량 PEG의 혼합물이다. 예를 들어, 분자량 400-600의 PEG와 분자량 1500의 PEG의 혼합물은 페이스트를 얻기 위해 적절한 비율로 혼합될 때 이러한 목적에 효과적이다.
다당류 및 PEG에 적용되는 용어 "수용성"은 콜로이드성 용액 및 분산액을 포함하는 것을 의미한다. 일반적으로, 셀룰로오스 유도체의 용해도는 에테르기의 치환 정도에 의해 결정되고, 본원에서 유용한 안정화 유도체는 유도체가 수용성이 되도록 셀룰로오스 사슬에서 안하이드로글루코스 단위 당 충분한 양의 그러한 에테르기를 가져야 한다. 안하이드로글루코스 단위 당 적어도 0,35 에테르기의 에티르 치환 정도가 일반적으로 충분하다. 또한, 셀룰로오스 유도체는 알칼리 금속 염, 예를 들어 Li, Na, K 또는 Cs 염의 형태 일 수 있다.
메틸 셀룰로오스가 겔에서 사용되는 경우, 바람직하게는 겔의 약 2 내지 5%, 보다 바람직하게는 약 3%를 구성하고 IL-12는 겔의 ml 당 약 300 내지 1000mg의 양으로 존재한다.
치료학적으로 사용되는 IL-12의 유효량은, 예를 들어, 치료 목적, 투여 경로 및 환자의 상태에 의존한다. 따라서, 치료사는 최적의 치료 효과를 얻기 위해 투여량을 적정하고 투여 경로를 수정하는 것이 필요하다. 전형적으로, 임상의는 원하는 효과를 달성하는 투여량에 도달할 때까지 IL-12를 투여할 것이다. 전신 처리를 위한 전형적인 투여량은 위에서 언급한 요인에 따라 약 10ng/kg에서 2000ng/kg 이상까지 다양하다. 일부 구현예에서, 용량 범위는 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 내지 약 20; 내지 약 30; 내지 약 50; 내지 약 100; 내지 약 200; 내지 약 300 또는 내지 약 500ng/kg 이다. 일 양태에서, 용량은 500ng/kg 미만이고, 또 다른 양태에서, 용량은 300ng/kg 미만이다. 또 다른 양태에서, 용량은 200ng/kg 미만이다. 또 다른 양태에서, 용량은 100ng/kg 미만이다. 또 다른 양태에서, 용량은 50ng/kg 미만이다. 다른 양태에서, 용량은 약 10 내지 300ng/kg, 20 내지 40ng/kg, 25 내지 35ng/kg, 50 내지 100ng/kg의 범위일 수 있다.
일 양태에서, 본원에 기술된 예시적인 치료학적 조성물은 분획화된 용량으로 투여될 수 있다. 일 구현예에서, 치료학적 유효 용량은 각 분획 전에 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효 용량은 각각의 화학요법 용량 또는 용량 분획의 투여와 거의 동시에 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효 용량은 각각의 분획 전, 각각의 분획 전 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 또는 60분의 범위에 주어지며; 또는 각 분획 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12시간; 또는 각 분획 전 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7일에 투여된다. 일 구현예에서, 치료학적 유효 용량은 각 분획 후에 제공되며, 각 분획 후 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50 또는 60분; 또는 각 분획 후 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12시간; 또는 각 분획 후 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7일; 또는 화학 요법 및/또는 화학 요법/방사선 치료의 조합 동안 또는 후에, 일주일에 1회, 2회, 3회, 4회, 5회, 6회, 7회, 격주 또는 격월의 범위로부터 투여될 수 있다. 또 다른 구현예에서, IL-12의 일 이상의 예시적인 투약(1 내지 100ng/kg)은 각각의 화학요법 투약 전 및 후 둘 다의 약 5, 10, 15, 20, 30, 40, 50, 60분, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24시간, 1일, 2일, 3일, 4일, 5일, 6일, 7일에 투여된다.
대안의 일반적인 제안으로서, IL-12 수용체는 효과적이나 과도하게 유독하지는 않은 약 0.1ng/cc 이상에서 최대 용량까지의 IL-12 수준이 조직 내에서 확립할 수 있는 투여량으로 제형화되어 표적 부위 또는 조직에 전달된다. 이 내부-조직 농도는 가능한 경우 계속적 주입, 지속적 방출, 국소 도포 또는 경험적으로 결정된 빈도로 주사를 포함하는 투여 처방에 의해 유지되어야 한다. 이 요법의 진행은 통상적인 어세이로로 쉽게 모니터링 할 수 있다.
"치료제의 투여 시간 근처"는 치료제의 투여 전 및/또는 후의 약 1달, 약 3주, 약 2주, 약 1주, 몇 일, 약 120시간, 약 96시간, 약 72시간, 약 48시간, 약 24시간, 약 20시간, 몇 시간, 약 1시간 또는 수분과 같은 임의의 합리적인 시간 기간에 IL-12의 투여를 의미한다. 치료제의 투여 시간 근처는 또한 치료제 및 IL-12의 투여가 동시이거나 거의 동시, 즉 수분 내 또는 1일 이내일 수도 있다.
"화학요법"은 현재 의학분야에서 알려진 또는 개발되는 천연 또는 합성 제제를 포함하는 임의의 요법을 의미한다. 화학요법의 예는 현재 이용가능한 수많은 항암제를 포함한다. 그러나, 화학요법 또한 질병 상태를 처리하기 위한 임의의 천연 또는 합성 약물을 포함한다. 본 발명의 특정 구현예에서, 화학요법은 질병 상태를 처리하기 위한 몇몇 최첨단 약물의 투여를 포함할 수 있다. 예는 머리에 국소적으로 진행된 편평상피 세포 암종을 가진 환자에 도세탁셀, 시스플라틴, 및 5-플루오로우라실과 병용된 화학요법(Tsukuda, M. et al., Int J Clin Oncol. 2004 June; 9 (3): 161-6) 및 불치성 및 재발성 무통성의 림프종에 플루다라빈 및 벤다머스틴과 병용된 화학요법(Konigsmann M, et al., Leuk Lymphoma. 2004; 45 (9): 1821-1827)을 포함한다.
본원에서 사용된, 치료학적 또는 돌발적인 전리 방사선의 예시적인 근원은, 예를 들어, 알파, 베타, 감마, x-선, 및 중성자원을 포함할 수 있다.
"방사선 요법"은 임의의 형태의 방사선이 질병 상태를 치료하는데 사용되는 임의의 요법을 의미한다. 방사선 요법을 위한 방사선을 생산하는 도구는 현재 이용 가능하거나 미래에 이용할 수 있는 도구이다.
"고용량 치료 양식"은 고치사적에 가깝거나 거의 치사적인 처리를 의미한다. 고용량 치료 양식은 치료학적 종점을 달성하기 위한 증가된 능력을 가지려고 의도되지만, 일반적으로 증가된 관련된 독성을 가지고 있다. 또한, 일반적으로 고용량 치료 양식은 종래의 치료 양식과 비교하여, 증가된 조혈 손상을 보여준다. 고용량 치료 양식의 프로토콜은 현재 사용되거나 미래에 사용될 프로토콜이다.
본원에서 사용된, 방사선 요법 "치료 양식"은 전리 및 비-전리 방사선 근원 둘 다를 포함할 수 있다. 예시적인 전리 방사선 치료 양식은, 예를 들어, 외부 빔 방사선 요법; 강도 변조 방사선 요법(IMRT); 영상 안내 방사선 치료(IGRT); X선 조사(예를 들어, 양성자 빔 요법); 전자 빔(예를 들어, 베타선 조사); 양성자 조사; 고선형 에너지 전달(LET) 입자; 정위방사선수술; 감마선 칼; 선형 가속 장치-매게된 틀없는 정위방사선수술; 로봇 팔 조작된 X선 조사 전달 시스템; 장기 특이적 또는 암 세포 특이적 흡수를 통한 방사선 동위원소 방사선요법; 방사선 동위원소가 결합된 단일클론 항체의 종양 표적화 방사선요법(또는 방사선면역요법, RIT); 근접치료(간질 또는 공동 내) 고용량률 방사선원 주입; 장기 특이적 용량 전달을 위한 영구적인 방사선 종자 주입을 포함할 수 있다.
"용량 고밀도 치료 처방"은 일반적으로 종래의 치료 처방과 비교하여 원하는 치료 결과를 달성하기 위해 촉진된 방식으로 순차적으로 치료가 반복되는 치료 처방이다. 본 발명의 방법은 치료의 관련 조혈 독성을 감소시키거나 개선시킴으로써 용량 고밀도 치료 처방의 사용을 용이하게 하여, 이로써 용량 고밀도 치료 처방을 이용할 수 있게 하고 특정 질병 상태의 치료 성공률을 증가시킬 수 있다(Hudis C A, Schmits N, Semin Oncol. 2004 June; 31 (3 Suppl 8): 19-26; Keith B et al., J Clin Oncol. 2004 Feb. 15; 22 (4): 749; author reply 751-3; Maurel J et al, Cancer. 2004 Apr. 1; 100 (7): 1498-506; Atkins C D, J Clin Oncol. 2004 Feb. 15; 22 (4): 749-50).
"화학 보호 또는 방사선 보호"는 질병 상태를 표적으로 하는 의도의 치료의 관련 조혈 독성으로부터의 보호 또는 관련 조혈 독성의 명백한 감소를 의미한다.
본원에서 사용된, "급성 방사선 증후군"(ARS)(방사선 독성 또는 방사선 질환으로 알려짐)은, 매우 짧은 기간(예를 들어, 몇 분만에)에 고용량의 투과성 방사선에 의해 전신(또는 신체 대부분)의 치사의 또는 치사에 가까운 방사선 조사를 받음에 의해 유발되는 급성 질환을 특징으로 한다. ARS로 고통받는 사람들의 예로 히로시마 및 나가사키 원자 폭탄의 생존자, 1986년의 체르노빌 원자력 발전소 사건 이후 처음으로 대응한 소방관, 및 살균 방사기에 대한 의도하지 않은 노출이 있다. 특정 구현예에서, 급성 방사선 증후군과 관련된 방사선 용량은 일반적으로 크다(즉, 0.7 Gray(Gy) 또는 70rads 이상). 특정 구현예에서, 0.3Gy 또는 30rads만큼 낮은 용량으로 경미한 증상이 관찰될 수 있다.
본원에서 사용된, "급성 손상 효과" 및 "손상 효과"는 급성 치사인 및 치사에 가까운 방사선 용량으로 인한 방사선 유발된 손상을 포함할 수 있다.
"고형 종양"은 일반적으로 혈액, 골수, 또는 림프계 이외의 다른 신체 조직의 암의 존재를 의미한다.
"조혈 이상(암)"은 일반적으로 조혈계로부터 유래된 암세포의 존재를 의미한다.
"결핍의 개선"은 조혈 결핍의 감소, 즉, 현재 의학적 관행에 의해 정의된 정상 상태의 결핍의, 부분적 또는 완전한, 개선, 또는 복구를 의미한다. 따라서, 조혈 결핍의 개선은 일반적으로 또는 구체적으로 조혈의 증가, 자극, 증진 또는 촉진을 의미한다. 조혈 결핍의 개선은 일반적으로, 즉 2개 이상의 조혈 세포 유형 또는 계통을 증가시키거나 특이적으로, 즉 하나의 조혈 세포 유형 또는 계통을 증가시키는 것으로 관찰될 수 있다.
"골수 세포"는 일반석으로 포유류의 골수 구획에 있거나 및/또는 기원으로 하는 세포를 의미한다. "골수 세포"라는 용어에는 조혈 재생 세포, 조혈 줄기세포, 및/또는 전구 세포를 포함하지만 이제 제한되지 않는 조혈에 기원하는 세포뿐만 아니라, 내피 세포, 간엽 세포, 골 세포, 신경 세포, 이에 제한되지 않지만 이들 및 다른 세포 유형 및 계통과 관련된 줄기세포 및/또는 전구 세포를 포함하는, 지지 세포(기질 세포)와 같은 골수에서 유래될 수 있는 임의의 세포를 포함한다.
"조혈 세포 유형"은 일반적으로 다양한 유형에서 분화된 조혈 세포를 의미하지만, 또한 줄기세포, 전구 세포, 및 골수 세포, 임파상 세포 등과 같은, 다양한 계통 세포를 포함하는 혈액 세포 생산과 관련 있는 모든 세포 유형에서 언급되는 다양한 미분화 세포와 같은 특정한 조혈 세포 유형이 유래하는 것으로부터의 조혈 전구 세포를 포함할 수 있다.
"조혈 세포 계통"은 일반적으로 골수 또는 림프를 포함하는 분화된 조혈 세포의 특정한 계통을 의미하지만, 수지상, 적혈구, 등과 같은 더 분화된 계통 또한 의미할 수 있다.
세포의 "IL-12 촉진된 증식"은 조혈 전구 및/또는 줄기세포와 같은, 포유류의 골수에 일반적으로 살거나 또는 기원하는 세포에서 적어도 부분적으로 팽창, 또는 증가에 기인하는 조혈의 증가, 자극, 또는 증진을 의미하지만, 골수 틈새의 미세환경을 구성하는 다른 세포를 포함한다.
"조혈의 자극 또는 증진"은 일반적으로 일 이상의 조혈 세포 유형 또는 계통의 증가를 의미하고, 특히 포유류가 일 이상의 조혈 세포 유형 또는 계통에서 결핍을 갖는 경우에 일 이상의 조혈 세포 유형 또는 계통의 자극 또는 증진과 관련이 있다.
"조혈 장기간 재생 세포"는 일반적으로 골수에서 가장 원시적인 혈액 세포이고; 그들은 다양한 혈액 세포 유형 및 계통의 평생 생산을 제공하는 책임이 있는 혈액 줄기세포이다.
"조혈 줄기세포"는 일반적으로 혈액 줄기세포이고; 2가지 유형; 위에서 정의한 "장기간 재생", 및 단기간에(포유류에 따라 수주, 수개월 또는 심지어 수년간) "전구 세포"를 생산할 수 있는 "단기간 재생"이 있다.
"조혈 전구 세포"는 일반적으로 혈액 줄기세포로부터 분화되는(즉, 성숙된) 첫번째 세포이고; 그들은 다양한 혈액 세포 및 계통으로 분화(성숙)한다.
"조혈 지지 세포"는 골수의 비-혈액 세포이고; 이 세포들은 혈액 세포 생산의 "지지"를 제공한다. 이 세포들은 골수 기질 세포라고도 한다.
"골수 보전"은 방사선, 화학요법, 질병 또는 독소에 의해 손상된 골수가 정상 상태 또는 정상 상태 가까이에서 유지되는 과정을 의미하고; "골수 회복"이란 방사선, 화학요법, 질병 또는 독소에 의해 손상된 골수가 정상, 가까운 정상 상태로 회복되거나, 또는 골수 기능의 측정 가능한 개선이 얻어진 과정을 의미하고; 골수 기능은 조혈(혈액) 줄기세포로부터 다양한 혈액 세포 유형 또는 계통의 적절한 수준을 생산하는 과정이다.
"골수 실패"는 방사선, 화학요법, 질병 또는 독소에 의해 손상된 골수가 정상으로 회복될 수 없으므로, 포유류에서 적절한 조혈을 유지하기에 충분한 혈액 세포를 생성하지 못하는 병리학적 과정이다.

본 발명을 이제 하기 실시예를 참조하여 설명한다. 이들 실시예는 설명의 목적으로만 제공되며, 본 발명은 이들 실시예에 제한되지 않고 본원에서 제공된 교시의 결과로서 명백한 모든 변형을 포함한다.

본원에서 기술된 실험 전에, 화학요법을 받는 암 환자에게 상당한 항-종양 효과를 제공함과 동시에, CIT를 비롯한 광범위한 혈구감소증의 효과적인 치료를 위한 재조합 인간 인터루킨-12(IL-12) 제제를 포함하는 IL-12를 포함하는 조성물 및 방법을 가능하게 하는 공개된 프로토콜이 없었다.

본원의 양태 및 실시 양태는 화학요법 치료를 필요로 하는 개체에게 투여될 때 놀랍고 예기치 않은 유용성 및 효능을 갖는 특정 IL-12 제형 및 투여 처방이 예상치 못하게 발견된 것으로부터 유래한다. 특히, 본 발명에서 IL-12의 최적 투약은 CIT를 포함한 혈구 감소증의 감소 및 종양 부담 및/또는 MRD의 감소와 관련된 이중 효과를 유도한다.

예로서, HIT 요법을 위한 치료학적 유효한 IL-12 제형을 투여하기 위한 방법 및 조성물을 개발했다. CIT에서 HemaMax™의 효능과 관련된 보충 데이터는 도 1 내지 13 및 다음의 실시예를 포함하여 다음과 같이 제시된다; 골수 억제된, 암을 가지고 있는 마우스의 연구; 골수제거된, 치사의 방사선 조사된 비인간 영장류(NHP)에서의 방사선경감 연구; 거핵수생성에서의 IL-12 수용체의 역할; IL-12의 직접적 및 간접적 항암 효과; CIT의 쥐 모델에서 rMuIL-12의 항-혈소판감소 효과.

실시예 1:

골수 억제된, 암을 가지는 마우스에서의 연구는 쥐 IL-12가 골수 억제된 마우스에서 항-종양 반응을 수반하는 초기 조혈 회복을 촉진한다는 것을 입증했다.

도 1 A-B는 골수억제 방사선(625rad) 전후에 투여된 비히클 및 rMuIL-12의 혈액 회복 프로파일을 보여줬다. 혈소판 회복 프로파일은 EL4 림프종 종양 모델(A) 및 루이스 폐암 모델(B)에 대해 보여준다. 두 개의 종양 모델에서 14 내지 21일 동안, rMuIL-12로 치료된 마우스는 비히클 대조군에 비해 혈소판 수가 통계적으로 유의하게 향상되었다.

실시예 2:

도 2 A-B는 방사선(625rad)에 따라 비히클 및 rMuIL-12 처리군에 대한 종양 부피의 상대적 변화를 묘사한다. EL4 림프종 종양 모델(A) 및 루이스 폐암 종양 모델(B)에 대한 실험 과정 동안의 종양 부피 변화를 보여준다. 두 종양 모델의 마우스는 1일째에 625rad를 받았다. 두 종양 모델의 마우스에 초기 방사선 투약 후 22일째에 두 번째 방사선 투약을 주었다. EL4 림프종 모델에서 모든 rMuIL-12 치료군, 즉 전, 후 및 전-후 방사선 투여군은 종양 부피 측정의 종료시에 대조군과 비교하여 종양 성장이 현저히 감소 되었다(% T/C<50%). 루이스 폐암 모델에서, rMuIL-12 후-처리는 종양 성장 측정의 종료시에 종양 성장을 현저히 감소시켰다(% T/C<50%).

실시예 3:

골수 제거된, 치사의 방사선 조사를 받은 비인간 영장류(NHP)의 방사선완화 연구는 HemaMax(rHuIL-12)가 생존율을 높이고, 혈소판 및 WBC 나디(nadir)를 약화시키고, 및 NHP에서 혈소판 수혈의 필요성을 줄이는 것으로 나타냈다. 예를 들어, 도 3은 HemaMax™로 처리된 방사선 조사된, 지지되지 않은(unsupported) 원숭이의 Kaplan-Meier 생존율 곡선을 묘사한다. 혼합된 HemaMax™ 투여군이 보여진다. 연구 중에는 항생제를 사용하지 않았다.

실시예 4:

도 4는 HemaMax™로 처리된 방사선 조사된, 지원되지 않는 Rhesus 원숭이에서 혈소판(A) 및 백혈구(B)의 수를 묘사한다. 연구 기간동안 혈액 세포 수의 차이를 평가하기 위해 세 가지 분석을 수행했다. 1일부터 30일까지 혈액 세포 수를 분석한 첫 번째 분석에서, HemaMax™로 치료된 동물의 경우 100ng/kg 및 250ng/kg 투약의 경우 12일 및 14일에 백혈구와 혈소판 수가 비히클 처리된 동물에 비해 유의하게 높았다. 특히, 치사의 방사선 NHP 연구에서, 비히클 처리된 원숭이의 80%가 혈소판 수혈을 필요로 하는 반면, HemaMax 치료된 원숭이의 단지 25%만이 혈소판 수혈을 필요로 했다.

실시예 5:

거핵구 형성에서 IL-12 수용체의 역할: IL-12 수용체는 인간 NHP 및 마우스 골수 전구 세포 및 거핵구에서 발견된다. 도 5에서 나타낸 바와 같이, 인간(A) 및 NHP(B) 대퇴 골수 조직은 IL-12Rβ2에 대해 면역조직화학적으로 염색되었다. IL-12Rβ2를 발현하는 전구세포 및 거핵구가 나타났다.

실시예 6:

예를 들어, 도 6은 쥐 IL-12가 방사선 조사된 마우스에서 조혈 회복을 촉진하는 것을 묘사한다. IL-12Rβ2(오렌지색)에 대해 염색된 비-조사된, 치료되지 않은 마우스의 대퇴 골수의 대표적인 절편이 (A)에 나타난다. 동물을 TBI(8.0Gy)에 노출시키고, 그 뒤에 방사선 조사 후 표시된 시간(B-F)에 피하에 비히클 또는 rMuIL-12(20ng/마우스)를 투여하였다. 방사선 조사 12일 후에 대퇴 골수를 IL-12Rβ2(오렌지색)에 대해 면역조직화학적으로 염색했다. 비히클 처리된 마우스의 골수는 IL-12Rβ2를 발현하는 세포가 결핍되고 조혈 재생의 징후가 나타나지 않는 반면, rMuIL-12로 치료된 마우스는 조혈 재구성 및 IL-12Rβ2-발현하는 거핵구, 골수 전구 세포 및 골아 세포의 존재(C-F)를 보여줬다.

실시예 7:

예를 들어, 도 7은 5000개/슬라이드의 Lin-IL-12RB2-세포를 IL-12 있을 때 및 없을 때 메가컬트(megacult) 배지에 플레이트 한 것을 묘사한다. IL-12로 자극된 배양물은 배지 단독의 배양과 비교하여 더 큰 콜로니를 보여줬다.

실시예 8:

IL-12의 직접적 및 간접적 항종양 효과

HemaMax는 항암제일 수 있지만, 암 화학요법에서 조혈 보조제로 작용할 수도 있다. HemaMax가 항암제로 작용할 수 있는 능력은 HemaMax를 암 치료에 의해 유발된 혈구 감소증을 다루기 위해 선호되는 보조 치료제로 만들 수 있는 추가적인 이점이다.

HemaMax는 화학 요법 단독 이상으로 종양의 크기와 재발을 줄이기 위해 모범적인 화학요법 처방과 함께 추가적으로 또는 상승 작용으로 작용한다.

방사선이나 화학요법을 받는 암 환자의 조혈 회복을 돕기 위해 사용될 때 종양 성장의 증식의 역효과가 없는 약물을 갖는 것이 중요하다. 우리는 rMuIL-12가 방사선이나 화학요법 후 림프종과 폐암 쥐 모델에서 종양 성장을 자극하지 않는다는 것을 이미 입증했다. 사실, 우리는 쥐 IL-12가 두 종양 모델 모두에서 상승적인 항-종양 반응을 제공한다는 것을 보여줬다(Basile et al, 2008). 우리의 연구에서, 1차 치료만을 단독으로 사용했을 때와 비교하여 쥐 IL-12로 종양 성장의 유의한 감소를 얻는 데 성공했다(Basile et al, 2008). 많은 연구에서 다발성 생물학적 활성으로 인해 다양한 악성 종양에서 IL-12의 항-종양 역할을 평가했다(Cocco et al, 2009; Pistoia et al, 2009; Trinchieri, 2003). IL-12 항-종양 활성의 메커니즘은 적어도 i) 면역 자극, ii) 항혈관 형성 및 iii) 직접적인 항-종양 효과를 포함한다.

CIT의 쥐 모델에서 rMuIL-12의 항-혈소판감소 효과

CIT에 대한 rMuIL-12의 효과

젬시타빈(gemcitabine) / 카보플라틴(carboplatin) 화학요법(GC)(6.6mg 젬시타빈 투약 + 2mg 카보플라틴)과 rMuIL-12 함께 투여의 효과를 조사했다. 0일째에 마우스에 정맥 내로 GC를 투여했다. 피하 쥐 IL-12 투여는 다음 세 가지 계획 중 하나로 실시되었으며 쥐 IL-12를 투여받지 않은 대조군과 비교되었다:

투여-전: 화학요법 치료 24시간 전에 rMuIL-12를 투여했다(n=18).

투여-후: 화학요법 치료 48시간 후에 rMuIL-12를 투여했다(n=19) 투여 전/후: 화학요법 24시간 전 및 화학요법 48시간 후에 rMuIL-12를 투여했다(n=13).

rMuIL-12 미투여 (n=20).

8일째 각 군의 기준선 및 표준 편차에서 혈소판 수의 %의 평균은 다음과 같다.

투여-전 군 : 79 ± 34%

투여-후 군 : 110 ± 37%

투여 전/후 군 : 111 ± 33%

rMuIL-12 미투여 군 : 71 ± 41%

예를 들어, 도 8은 rMuIL-12이 치료된 CIT 마우스에서 기준선과 비교한 개별 혈소판 수의 퍼센트를 보여줬다. rMuIL-12로 치료된 군 중 33% 이상(50마리 중 0마리) 혈소판이 감소한 동물은 없었다. 반대로 rMuIL-12를 투여하지 않은 대조군은 20마리 중 6마리(30%)가 혈소판 수준이 기초 수준과 비교하여 33% 이하로 떨어졌다.

실시예 9:

동반된 GC 화학요법을 갖는 루이스 폐 마우스 종양 모델에서 종양 성장에 대한 rMuIL-12 효과

마우스 종양 화학요법 모델에서 rMuIL-12 투여가 종양 성장에 미치는 영향을 평가하였다. 종양 모델은 루이스 폐 종양 세포를 각 마우스에 피하 주사(100,000개의 세포)하여 사용했다. 종양 접종 후 주어진 시간에, 마우스를 화학요법으로 치료하였다. 상기에서 기술된 젬시타빈/카보플라틴 화학요법 처방을 사용하여 IP를 투여하였다. 하기에 기술된 대로 화학요법 전, 후, 또는 전/후에 rMuIL-12를 피하투여(20ng) 하였다.

투여-전(n=16): 화학요법 치료 24시간 전에 rMuIL-12를 투여했다.

투여-후(n=16): 화학요법 치료 48시간 후에 rMuIL-12를 투여했다.

투여 전/후(n=16): 화학요법 24시간 전 및 화학요법 48시간 후에 rMuIL-12를 투여했다. 대조군(n=16).

종양 부피를 rMuIL-12 치료된 마우스와 비교하여 대조군의 종양 성장을 비교하기 위해 시간에 따라 모니터링 하였다. 도 9에서 보여주듯이, rMuIL-12는 GC 치료시 성장하는 루이스 폐 종양 세포를 가진 마우스에서 종양 성장을 증가시키지 않았다. 종양 성장에서 군 간의 차이는 통계적으로 유의하지 않았다. 그 결과는 어느 계획에서든 rMuIL-12의 추가는 종양 성장을 감소시키는 경향이 있음을 나타낸다.

예를 들어, 도 9는 GC 리시빙(Receiving) rMuIL-12를 이용하여 치료 중인 마우스의 루이스 폐 종양의 부피를 보여주었다. 노트: 0시간은 화학요법 투여의 시간을 나타낸다. 종양 접종은 화학요법 투여 11일 전에 실시되었다.

실시예 10:

종양 성장에 대한 2회의 젬시타빈 단일요법과 함께한 rMuIL-12의 효과

이 연구는 마우스 화학요법 모델에서 종양 성장에 대한 rMuIL-12의 효과를 젬시타빈을 단독요법으로 사용하고 1주 간격으로 2회 투여했을 때 동일한 루이스 폐 모델에서 성장을 조사하기 위한 두 번째 연구와 함께 추적 조사했다. 전술한 바와 같이, rMuIL-12는 화학요법 투약-전 및 투약-후 및 투약 후 24시간 및 화학요법 투여와 동일한 날로 투여되었다. rMuIL-12는 화학요법한 주 또는 첫 주에만 투여되었다. 각 군에 n=5인 5개의 군이 있다. 이들 군은 아래에 설명되어 있다: 주1회 화학요법: 젬시타빈만, IP 투여된, 주당 6.6mg rMuIL-12 투여, 3개의 일정: 24시간 전-화학요법(Pre); 화학요법과 동일한 날(SD); 화학요법 24시간 후(Post1 = 24시간-후; Post2 = 48시간-후).

예를 들어, 도 10은 젬시타빈 리시빙 rMuIL-12를 이용한 단일요법 중인 마우스의 루이스 폐 종양의 부피를 묘사한다. 0일째는 처음 화학요법한 시간이다. 두 번째 화학요법 투여가 7일째에 발생했다. 종양 접종은 8일째에 발생했다. rMuIL-12는 젬시타빈만을 화학요법제로 사용하는 이 모델 시스템에서 종양 성장률을 증가시키지 않았다. 군 간 성장의 차이는 통계적으로 유의하지 않았다. 투여-전 군을 제외하고, rMuIL-12 투여로 종양 크기가 감소 되는 경향이 관찰되었다.

실시예 11:

쥐 데이터의 요약

임상적으로 의미있는, 계량적으로 결정된 젬시타빈과 카보플라틴의 투약량은 화학요법의 정맥 투여 후 8일째에, 용량 감소 가이드라인에 따라 투약 감소 또는 지연을 필요로 하는 인간의 수준과 일치하는 마우스의 30%에서 혈소판 수준의 감소를 유발했다. 화학요법 투여 전, 후 또는 전 및 후에 rMuIL-12의 투여는 기준치의 1/3 또는 그 이상 떨어진 혈소판 수준을 가진 마우스가 0%가 되도록 혈소판 수준의 감소가 사라졌다. 쥐 IL-12는 화학요법과 관련된(전, 후, 또는 같은 날 < 6시간 후) rMuIL-12 투여의 임의의 일정에서든 쥐 폐암/젬시타빈 처방 모델에서 종양 성장을 증가시키지 않았다. 쥐 IL-12 처리가 화학요법과 관련된 임의의 투여 일정에서 이 모델에 종양 성장을 감소시키는 통계적으로 유의하지 않은 경향이 관찰되었다.

실시예 12:

예시적인 FIH(First-in-Human) 임상 연구의 요약 및 설계

A Phase 1, Double Blind, Placebo-Controlled, Single Ascending Dose Study of the Safety, Tolerability, Pharmacokinetics , and Pharmacodynamics of HemaMax ^Tm ( rHuIL -12) in Healthy Adult Volunteers (IND 104,091)란 제목의 연구는, 건강한 성인 개체에서 HemaMax™의 일 회의 상승 피하(SC) 투약의 약물동력학 및 면역원성을 평가하기 위한 2차 목표와의 안전성 및 내약성을 결정하기 위해 설계되었다.

18 내지 45세의 건강한 남성 및 여성 성인 개체를 최대 30명까지 6명씩 4개의 연속적인 집단을 등록하고, 각 감시 개체를 각 용량(dose) 수준에 사용한다. 시험용 제품(HemaMax™ 또는 위약)의 단일 SC 주사를 2, 5, 10, 및 20㎍의 용량(dose) 수준을 복부에 투여했다. 6명 개체의 집단을 이중-맹검 방식으로 용량(dose) 수준(위약의 경우 n=2, HemaMax™의 경우 n=4) 당 평가한다. 연구의 상승 복용량 부분에 투여된 최고 용량(또는 위약)을 받기 위해 n=6(위약 2명 및 HemaMax™ 4명)의 추가 확장 집단을 등록할 수 있다.

각 투약 집단의 처음 2명은 무작위로 위약 또는 HemaMax™를 1:1의 비율로 복부 내 단일 SC 주사로 투여한다. 집단의 첫 번째 2명의 감시 개체(첫 번째 군, a군)가 7일간의 관찰 기간 후에 조사자 및/또는 데이터 안전위원회(DSC)에 의해 평가한 DLT를 제시하지 않은 경우, 다음 4명(두 번째 군; b군)가 무작위로 위약 또는 HemaMax™(1:3 위약 및 HemaMax™)를 투여받는다. DLT가 관찰되면(조사자 및/또는 DSC가 평가한 대로) 해당 개체는 DSC에 블라인드되지 않는다. 만약 개체가 HemaMax™를 투여받은 경우, 모든 투여가 중단되고 모든 처리된 대상이 적절하게 추적된다. 만약 블라인드되지 않은 개체에게 위약이 투여된 경우, 계획대로 투여가 계속된다. 집단의 마지막 개체를 투약한 때로부터 적어도 28일의 입원 환자 관찰기간 후에, 모든 이용가능한 데이터(예를 들어, 부작용 사건, 생체 신호, 심전도, 항원성 및 실험실 결과를 포함하는, 노출 및 안전성)가 DSC에 의해 검토되고, DSC는 만약 다음 투여 수준의 상승이 안전한지 결정한다. 항원성 검사를 위한 혈액 샘플은 연구 28일째뿐만 아니라 기준에서 수집되고, 항원성 검사 결과는 단계적 확대 결정 전에 검토된다.

1단계 프로젝트의 목표는 효능을 최대화하고 환자의 순응도를 높이기 위해 다양한 화학요법 처방과 병행하여 투여할 때 HemaMax 치료 일정을 조사하고 최적화하는 것이다. 화학요법 투여와 관련된 HemaMax의 투여 일정을 최적화하는 것이 임상적 성공을 달성하는 데 중요하다.

1단계 접근방식 / 1단계 목표

투여-시점(Time-of-Administration: ToA) - 조사 연구(1단계, 목표 1&2)

1단계 프로젝트는 화학요법-유발된 혈소판 감소증(CIT)의 상태에 적용할 때 안전성과 효능을 최대화하기 위해 최적의 IL-12 치료 처방을 조사하고 궁극적으로 결정하기 위한 것이다. 1단계 연구는 8주 동안 젬시타빈(GCB)의 주간 정맥 주사(IVB) 또는 젬시타빈/카보플라틴(GCB/CPL) 병용 요법을 받은 건강한 수컷 및 암컷 쥐 모델을 사용한다. 동물을 1일째(d1), d2, d3, 및/또는 d4에 IL-12로 치료한다. 유효성(조혈 효과)과 최적 치료법을 평가하기 위해, 분석 방법으로는 완전한 혈액 세포 수(CBC), 콜로니-형성 단위-거핵구(CFU-Meg) 어세이 및 면역조직화학법(IHC)이 포함된다. 성공적인 연구 결과는 다음을 포함한다: 비히클 군에 비해 치료군에서 말초혈액 세포 수, 특히 혈소판, 호중구 및 적혈구의 증가(분석법: CBC); 비히클 군에 비해 치료군에서 혈소판 효과(분석법: CBC; CFU-Meg 어세이 및 IHC); 비히클 군에 비해 치료군에서 골수-보호 효과(분석법: CFU-Meg 어세이 및 IHC); 및 화학요법-유발된 혈소판 감소증(CIT)의 상태에 적용된 안전성과 효능을 최대화하는 최적의 IL-12 치료 처방(들)의 결정.

실시예 13:

예를 들어, 도 11은 투여-시점(ToA) - 조사 연구(1단계 목표 1)에 대한 치료 일정을 묘사한다. 정맥 내 젬시타빈(GCB)을 투여받은 쥐 모델(n=108)에서 최적의 안전성 및 효능(혈소판형성 시뮬레이션)을 달성하기 위한 IL-12 치료 일정의 평가 및 결정.

실시예 14:

예를 들어, 도 12은 투여-시점(ToA) - 조사 연구(1단계 목표 2) 및 치료 일정을 보여준다. 정맥 내 젬시타빈(GCB)을 투여받은 쥐 모델(n=108)에서 최적의 안전성 및 효능(혈소판형성 시뮬레이션)을 달성하기 위한 IL-12 치료 일정의 평가 및 결정.

(1단계, 목표 3)

1단계 연구의 목표 3은 1단계 연구의 목표 1 및 2에서 결정된 최적 치료 처방을 이용한다. 따라서 목표 3에서 사용되는 구체적인 치료 일정은 아직 결정되지 않았다. 이 연구는 젬시타빈(GCB) 또는 젬시타빈/카보플라틴(GCB/CPL)의 병용 요법의 주간 정맥 투약을 14 내지 30일간 투여받은 쥐 종양 모델을 이용한다. 이용된 상기 종양 모델은 루이스 폐 암 고형 종양 모델이다. 다시, 동물은 목적 1과 2에서 결정된 최적의 치료 일정에 따라 IL-12로 치료한다. 유효성(조혈 및 항종양 효과)및 최적 치료법을 평가하기 위해, 분석 방법에는 완전한 혈액 세포 수(CBC)와 종양 부피 측정을 포함한다. 성공적인 연구 결과는 다음을 포함한다: 비히클 군에 비해 치료군에서 말초혈액 세포 수, 특히 혈소판, 호중구 및 적혈구의 증가(분석법: CBC); 관찰된 항종양 반응(분석법: 종양 부피); 및 화학요법-유발된 혈소판 감소증(CIT)의 상태에 적용된 안전성과 효능을 최대화하는 최적의 IL-12 치료 처방(들)의 결정.

실시예 15:

예를 들어, 도 13은 POC 연구의 치료 일정을 보여준다(1단계 목표 3). GCB 단독 또는 GCB/CPL (n = 30)을 투여한 쥐 종양 모델에서 최적의 IL-12 일정의 안전성 및 유효성 평가.

실시예 16: 2단계

2단계 목표

HemaMax-혈소판형성 컴퓨터 모델(2단계, 목표 1)

컴퓨터 모델은 줄기세포의 수준에서 혈액의 혈소판 수준까지 혈소판형성에 대한 포괄적이고 매우 상세한 수학적 설명으로 구성된다. 모델의 많은 방정식에 대한 정확한 설명은 이 제안의 범위를 벗어나지만, 일반적인 구조는 Skomorovski 외(PMID 14616973)의 작업을 기반으로 한다. 상기 모델은 골수 세포 진행, 성숙한 혈소판, 말초 혈액의 호중구 및 적혈구, 혈액의 IL-12 및 TPO 농도의 9개의 다른 단계를 포함하여 혈전 형성을 포괄적으로 설명하는 구획으로 구성된다. 각 구획은 그 안에 있는 세포의 성숙 단계(나이)에 따라 더 세분화된다. 또한, 상기 모델은 화학 치료제와 함께 모델링 할 수 있고 조정할 수 있다. 이 모델링 노력은 인간 투약 일정을 위한 예측 모델을 제공하고 1단계 프로젝트의 전임상 쥐 작업에서 개발된 일정 모델링을 검증한다.

1b 단계 연구는 고형 종양이 있는 개체(2단계, 목표 2)에서 젬시타빈과 병용된 HemaMax의 안전성, 내약성, PK, 및 효능을 평가한다.

목표

이 연구의 1차 목적은 고형 종양을 가진 환자를 위한 젬시타빈과 병용된 HemaMax의 안전성과 내약성을 평가하고, 젬시타빈과 변용된 HemaMax의 권장된 2단계 투여를 확립하는 것이다. 2차 목표는 1) 젬시타빈과 병용 투여된 첫 번째 및 두 번째 투여 후 HemaMax의 PK 매개변수를 특성화하고, 2) 젬시타빈을 투여받은 환자에서 HemaMax의 혈액학적 영향, 특히 혈구 수 및 수혈 요구사항을 특성화하고, 3) 젬시타빈과 병용된 HemaMax의 임상적 활성을 탐구하는 것이다.

방법론

이것은 고형 종양이 있는 개체에서 정맥 내 젬시타빈과 병용 투여된 HemaMax™의 안전성 및 내약성을 평가하기 위해 설계된 1b 단계 공개-라벨, 단일-암, 용량-확대, 비-무작위 연구이다. HemaMax는 젬시타빈을 투여받는 환자에서 (CIT를 위한) 보조적인 보조 치료제로 평가되고 있으므로, HemaMax에 대한 MTD는 결정되지 않을 예정이다. 오히려, 네 가지 사전-정의된 용량 수준이 탐구되며, 그 중 가장 높은 용량은 추가 독성 없이 CIT에 대한 보호 이점을 제공할 것으로 기대된다. 이 연구에서는 표준 '3 + 3' 용량 확대 설계를 사용한다. 각 집단에서 최소 3명의 환자가 치료되고, DLT의 유무에 따라 6명의 환자까지 치료된다. 젬시타빈의 용량은(독성으로 인해 용량 감축이 필요하지 않는 한) 1000mg/m²로 일정하게 유지될 것이며 확대되지 않을 것이다. 각 집단의 처음 3명의 환자는 용량 확대 전에 21일 동안 (젬시타빈 3회 투약 및 HemaMax 3회 투약) 치료된다. 용량 확대는 다음과 같이 진행된다. 만약 용량 수준의 0/3 환자가 DLT를 경험하게 되면, 용량 확대가 다음 용량 수준까지 계속된다. 만약 1/3 환자가 DLT를 경험하면, 집단은 6명의 환자로 확장된다. 6명 환자 집단에서, 만약 1/6 이하의 환자가 DLT를 경험하면, 용량 확대가 다음 용량 수준까지 계속된다. 만약 1/6 초과의 환자가 DLT를 경험하면, 만약 6명의 환자가 이전의 용량 수준에서 이미 치료되지 않았다면, 용량 수준은 MTD보다 높게 간주되고, 이전 용량 수준은 6명의 환자로 확대된다. 만약 관찰된 DLT가 없다면, 6명의 환자는 HemaMax의 가장 높은 계획된 용량으로 치료되어 그 용량의 내약성을 확인한다. 첫번째 주기 동안 1, 8, 15, 22, 29, 36 및 43일에 30분 이상 정맥내 젬시타빈이 주입된다. 이후 사이클에서 젬시타빈은 각 28일 사이클의 1일, 8일 및 15일에 30분 이상 주입된다. HemaMax을 잠재적인 약물-약물 상호작용을 최소화하기 위해 젬시타빈 주입 종료 후 3시간 후 첫 번째 주기 동안 1, 8, 15, 22, 29, 36 및 43일에 피하 투여한다. 사이클 # 2 및 그 이후에, HemaMax을 각각의 젬시타빈 주입 종료 후 3시간 후 1, 8 및 15일에 피하 투여한다. 젬시타빈 주입이 어떤 이유로든(독성, 질병 진행, 연구자 재량 또는 다른 이유로) 계속되는 경우 HemaMax™도 해당 날짜/용량으로 계속된다. 따라서, HemaMax™는 개체가 젬시타빈 주입을 받는 날에만 투여될 것이다. 젬시타빈 주입이 지연되거나 미리-예정된 연구 일정과 다른 날에 주입된다면, Hemaxax™도 그날 젬시타빈 주입 종료 후 3시간 후에 투여될 것이다. 특히 HemaMax에 기인한 심각한 부작용 사례(SAEs)는 예상되지 않지만, HemaMax의 시험에 등록된 개체는 발생할 수 있는 AEs를 관리할 수 있는 장비를 갖춘 시설에서 계획적이고 신중한 방법으로 투약된다. 환자는 투약 당일에 면밀히 관찰되며, 독성을 모니터링하는 경우가 빈번하다. 각 용량 수준에서 치료된 처음 3명의 환자를 그 집단 내에서 후속 환자를 투여하기 전 21일 동안 관찰한다. HegMax™가 적어도 부분적으로 기인한 처리의 첫 21일 후에 등급 3 내지 4 독성이 발생하면, 기술적으로 DLT로 간주되지는 않지만, 이 정보는 연구자의 재량에 따라 1) 향후 환자/집단에서 HemaMax™의 용량 확대를 중지, 및/또는 2) 이미 치료를 시작한 다른 환자에서 용량을 수정하거나 HemaMax를 중단하는 데 사용될 수 있다. Institutional Review Board(IRB)는 HemaMax 투여의 잠재적인 위험에 대해 공정하고 균형 잡힌 시각을 제공하는 Subject informed Consent Form을 승인했다.

포함 및 제외 기준과 같은 자세한 정보는 인간 개체 섹션을 참조한다.

실시예 17 : 효능 평가를 위한 예시적인 일반 임상 시험 설계

목표 및 종점

표 3

연구 설계/개요

이것은 고형 종양을 가진 개체에서 정맥내 젬시타빈과 병용 투약된 HemaMax™의 안전성과 유효성을 평가하기 위해 설계된 Ⅰ 단계 공개-라벨, 단일-암, 용량 량-확대, 비-무작위 연구이다. HemaMax는 젬시타빈을 투여받는 환자에서 보조적인 보조 치료제로 평가되고 있으므로, HemaMax에 대한 MTD는 결정되지 않았다. 오히려, 사전-정의된 4가지 용량 수준이 탐구되며, 전-임상 및 FIH 데이터에 근거한 추가 독성 없이 CIT에 대한 보호이점을 제공할 것으로 기대된다. DLTs의 유무에 따라 3 내지 6명의 환자가 용량 수준으로 치료된다(3.4 섹션 참조). 관찰된 DLT가 없다면, 6명의 환자가 HemaMax™의 가장 높은 계획된 용량으로 치료되어 그 용량의 내약성을 확인한다.

예시적 처리 일정

첫번째 사이클 동안 1, 8, 15, 22, 29, 36 및 43일에 30분 이상 정맥내 젬시타빈이 주입된다. 이후 사이클에서 젬시타빈은 28일마다 1, 8, 15일에 30분 이상 주입된다. Hememax™는 젬시타빈 주입이 끝난 후 3시간 후 첫 번째 사이클 동안 1, 8, 15, 22, 29, 36 및 43일에 피하 투여될 것이다. 사이클 #2에서 HemaMax™은 각 젬시타빈 주입이 끝난 후 3시간 후 1, 8, 15일에 피하 투여된다. HemaMax™는 사이클 #3 및 그 이후에 투여되지 않는다. 젬시타빈 주입이 어떤 이유로든 (독성, 질병 진행, 연구자 재량 또는 다른 이유로) 계속되는 경우 HemaMax™도 해당 날짜/용량으로 계속된다. 따라서, HemaMax™는 대상이 젬시타빈 주입을 받는 날에만 투여될 것이다. 젬시타빈 주입이 지연되거나 미리-예정된 연구 일정과 다른 날에 주입된다면, 사이클 1 또는 2 동안이라도, Hemaxax™도 그날 젬시타빈 주입 종료 후 3시간 후에 투여될 것이다.

젬시타빈의 표시된 용량(1000mg/m²) 및 일정을 초과하지 않는다. 젬시타빈의 용량과 일정은 나타나는 내약성 데이터에 근거하여 감소될 수 있다. 목표는 내성이 좋은 용량 및 처방을 정하고 적절한 약물동태학을 제공하는 것이다. 이 투약량 및 처방은 권장되는 2단계 용량(R2PD)이다.

용량 확대의 과정

이 연구에서는 표준 '3 + 3' 용량 확대 설계를 사용한다. 각 집단에서 최소 3명의 환자가 치료되고, DLT의 유무에 따라 6명의 환자까지 치료된다. 젬시타빈의 용량은(독성으로 인해 용량 감축이 필요하지 않는 한) 1000mg/m²로 일정하게 유지 될 것이며 확대되지 않을 것이다. 따라서 "용량 확대"는 특히 HemaMax™를 의미한다.

각 집단에서 첫 번째 환자는 다음 환자가 동일한 용량 수준으로 치료되기 전에 21일 동안(젬시 타빈 3회 투약 및 HemaMax 3회 투약) 치료된다.

이 연구에서 HemaMax™의 계획된 용량 수준은 다음과 같다:

표 4

용량 확대는 아래 표에 명시된 DLT의 유무에 따라 계산된다. 용량 수준의 0/3 환자가 DLT를 경험하면, 용량 확대가 다음 용량 수준까지 계속된다. 만약 1/3 환자가 DLT를 경험하면, 집단은 6명의 환자로 확장된다. 6명 환자 집단에서, 만약 1/6 이하의 환자가 DLT를 경험하면, 용량 확대가 다음 용량 수준까지 계속된다. 만약 1/6 초과의 환자가 DLT를 경험하면, 만약 6명의 환자가 이전의 용량 수준에서 이미 치료되지 않았다면, 용량 수준은 MTD보다 높게 간주 되고, 이전 용량 수준은 6명의 환자로 확대된다. 권장되는 Ⅱ 단계 용량(R2PD)은 본 연구에서 1/6 이하의 환자가 DLT를 경험하는 가장 높은 용량 수준이다.

표 5

DLT

용량 제한 독성은 다음 기준 중 하나를 충족시키는 젬시타빈 및 HemaMax™의 첫번째 용량의 투여 후 첫 21일 동안 발생하는 독성으로 정의된다. 4등급 호중구감소증 지속이 5일 이상; 3-4등급 열성 호중구감소증; 4등급 혈소판 감소증; 3등급 또는 4등급 비-혈핵학적 독성(24시간의 수정에 반응하는 전해질 장애; 또는 표준 의료에 반응하는 설사/메스꺼움 및 구토를 제외하고); 미해결 독성으로 인한 14일 이상의 처리 지연; 조사자와 의료 모니터의 판단에서 용량 제한이 되는 2등급 이상의 비-혈액학적 독성; 기본 AST 또는 ALT가 상승한 환자의 AST 또는 ALT에서 2등급 증가(1 등급에서 3등급 또는 2등급에서 4등급).

MTD 및 R2PD

DLT의 빈도에 따라, MTD는, 임의의 집단의 두 명 이상의 개체가 DLT를 경험하면 MTD의 정의에 따라, MTD가 초과되었다. 이 경우, MTD는 젬시타빈 및 HemaMax™를 처음 투여한 후 처음 21일 동안 6명 중 1명 이하의 개체가 DLT를 경험한 최고 용량이다.

< 1/6의 환자가 HemaMax™의 300ng/kg/용량에서 DLT를 경험한다면, 비-MTD로 정의되고, 우수한 내약성과 안전성 프로파일로 충분한 활성을 제공하는 저용량이 아닌 한, 300ng/kg/용량은 R2PD로 간주된다.

첫번째 사이클 뒤에 개체의 계속적인 치료

치료 중단 기준이 충족될 때까지 개체는 사이클 2를 통해 HemaMax™ 및 젬시타빈으로 치료를 계속할 수 있고 그 이후에는 젬시타빈을 단독으로 투여할 수 있다(섹션 3.8 참조).

개체-내 용량 확대

이 연구에서는 HemaMax™의 개체-내 용량 확대가 허용되지 않을 것이다. 환자가 젬시타빈의 용량 감소을 요구하는 경우, 의료 모니터와의 논의와 함께 조사자의 재량에 따라 용량을 1000mg/m²의 표준 용량으로 다시 확대할 수 있다.

치료 중단 기준

각 개체는 다음 중 하나가 발생할 때까지 사이클 #2 동안 HemaMax™ 및 젬시타빈, 및 젬시타빈 단독을 계속 투여받을 수 있다.

RECIST 1.1에 근거한 질병 진행. 조사자는 의료 모니터와 이익을 받고 있으나 질병 진행 기준을 충족시킨 개체에게 계속적인 치료를 논의할 수 있다.

연구 약물(들)의 추가 투여를 막는 병발 질환.

연구 약물(들)의 영구적인 중단을 보증하기 위해 조사자 또는 의료 모니터가 고려한 부정적 반응.

14일 이상 치료를 중단시키는 임상적으로 중요한 부정적 반응. 개체는 투약에 대한 독성을 분석하거나 일정관리의 어려움에 대해 최대 14일의 지연을 허용한다. 조사자와 의료 모니터는 14일 초과의 치료 지연이 있는 개체에게 지속적인 치료가 유익하다고 결론을 내리는 경우, 개체는 의료 모니터의 승인을 받아 치료를 계속할 수 있다.

개체는 추가 치료 또는 데이터 수집에 대한 동의를 철회한다.

개체가 추가 치료를 위해 동의를 철회하면 후속 방문을 계속해야 한다.

개체가 추가 치료 및 데이터 수집에 대한 동의를 철회하는 경우 추가 연구 방문이나 데이터 수집이 발생하지 않아야 한다.

시험용 제품 용량/투여

표 6. HemaMax ™의 조사 제품 용량/투여

표 7. 젬시타빈의 조사 제품 용량/투여

젬시타빈의 용량 변경

젬시타빈의 용량 변경은 독성에 대한 반응 또는 완전한-용량의 젬시타빈을 견딜 수 없는 개체에게 요구된다. 모든 독성은 NCI CTCAE 버전 4.02에 따라 등급이 매겨진다. ANC와 혈소판 수치를 제외한 모든 독성에 대해, 젬시타빈의 투약 중지 또는 중단은 개체가 2등급 이상의 독성을 앓을 때 고려될 수 있다. 독성이 1등급 또는 그 이하로 개선된 때 젬시타빈은 현재 용량 수준으로 다시 시작할 수 있다. 독성이 재발하면 적어도 25% 용량 감소된 젬시타빈으로 다시 시작하는 것이 좋다. 규정된 젬시타빈 용량을 견딜 수 없는 개체의 경우, 조사자의 임삼적 판단 및 관행으로 용량 변경이 허용될 것이다.

ANC 및/또는 혈소판 수의 감소에 기초한 용량 변경에 대한 권장사항은 표 9에 있다.

표 9. ANC 및/또는 혈소판 수의 감소에 기초한 젬시타빈의 용량 변경

스크리닝 중 절차

치료 28일 전:

종양 측정(RECIST): 해당되는 경우, 종양 마커

기준선에서 사용된 동일한 평가 방법은 연구 전반에 걸친 모든 평가에 대해 일관되게 사용되어야 한다.

사전 동의

기본 인구통계

병력

약물 복용 내역

치료 72시간 전:

신장 및 체중

신체 검사

ECOG 수행도

가임 여성의 혈청 임신 테스트

음성 혈청 임신 테스트가 문서로 기록되어야 한다.

포함/제외 기준 검토

소변 검사

12-리드 ECG

혈액학

화학

해당되는 경우, 종양 마커

치료 중 절차

사이클 1, 1일째

젬시타빈 주입 직전, HemaMax™ 투여 직전, HemaMax™ 투여 후 2시간 및 4시간 후의 바이탈 사인

HemaMax™ 투여 직전, HemaMax™ 투여 후 8시간 후의 12-리드 ECG

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

PK 연구(PK 시점에 관한 세부사항은 표 12 참조)를 위한 혈액 샘플

항원성 및 NAB 테스트

필요하다면 부정적 반응 평가

사이클 1, 2일째

바이탈 사인

혈액학

화학

PK 연구 위한 혈액 샘플

12-리드 ECG

사이클 1, 8일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

소변검사

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

PK 연구를 위한 혈액 샘플

부정적 반응 평가

HemaMax™ 투여 직전 12-리드 ECG

사이클 1, 15일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

소변검사

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 1, 22일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

소변검사

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 1, 29일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

소변검사

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 1, 36일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

소변검사

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 1, 43일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

소변검사

항원성 및 NAB 테스트

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 1, 50일째

이 날에는 평가 또는 절차가 없음

사이클 2, 1일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 2, 8일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 2, 15일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

정맥내 젬시타빈 투여

피하내 HemaMax™ 투여

부정적 반응 평가

사이클 2, 22일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

부정적 반응 평가

사이클 3 및 그 이후, 1일째

중간 병력

해당되는 경우, 종양 마커

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

정맥내 젬시타빈 투여

부정적 반응 평가

RECIST를 이용한 질병 평가(이후 홀수 번째 사이클, 즉 사이클 5, 7, 9 등의 1일째에 수행됨)

사이클 3 및 그 이후, 8일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

정맥내 젬시타빈 투여

부정적 반응 평가

사이클 3 및 그 이후, 15일째

중간 병력

약물 복용 내역

체중

신체 검사

바이탈 사인

ECOG 수행도

혈액학

화학

정맥내 젬시타빈 투여

부정적 반응 평가

치료의 종료

환자가 벗어날 때(take off)(유연한 연구, 다음과 같은 활동을 해야한다:

바이탈 사인

중간 병력

신체 검사

부정적 반응 평가

항원성 및 NAB 테스트

혈액학

화학

환자가 입원 중이거나 연구 방문을 끝내기 위해 치료 센터에 올 수 없는 경우, 최종 항원성 테스트를 위해 환자가 어느 시점에서 돌아오도록 모든 노력을 기울여야 한다.

약물동태학 샘플링 일정표

표 12

상기 표의 PK 샘플링은 지정된 시간의 10분 이내에 수행되어야 한다. 임의의 예상하지 못한 상황으로 인해 이것이 가능하지 않은 경우, PK 샘플은 실제 시간이 명확하게 문서화된 채로 얻어질 수 있다.

데이터 분석 및 통계적 고려사항

가설 및 치료 비교

이 연구의 주요 목적은 젬시타빈과 병용 투여시 HemaMax™의 이용 가능한 안전성, PK 및 모든 임상 활동 데이터에 근거하여 권장되는 2단계 용량을 결정하는 것이다; 따라서, 공식적인 통계적 가설을 테스트하지 않을 것이다. 분석은 용량 수준 간의 비교에 초점을 맞추고 설명적이고 탐구적일 것이다.

샘플 크기 가정

샘플 크기는 통계적 고려 사항에 의해 결정되지 않는다. 개체의 총 수는 DLTS의 유무에 의해 결정된다. 그러나 최대 예상 개체 수는 약 24명이다.

연구 종점의 분석

1차 종점

1단계 연구의 1차 종점은 고형 종양을 가진 개체에 주 1회 젬시타빈과 병용되는 HemaMax™의 안전성, 내약성 및 권장 2단계 용량을 평가하는 것이다.

임의의 양의 HemaMax™를 투여받은 모든 환자는 안전성 평가가 가능하다. 젬시타빈 및 HemaMax™ 둘 다의 4가지 계획된 용량을 사이클 1 동안 받은 환자는 용량 확대 평가에서 평가할 수 있는 것으로 간주된다. 환자가 사이클 1 동안 DLT를 경험했지만 사이클 1 계획된 용량 모두를 받지 못하면, 그 정보는 용량 확대 결정에 사용된다; 상기 환자는 교체할 수 없다.

2차 종점

이 연구의 2차 종점은 AUC₀ _-tau, AUC₀ _-∞, C_max, t_max, 및 t_1/2 (허용되는 데이터)를 포함하는, 약물통태학적 매개변수를 포함한다; RECIST 1.1을 사용한 응답 속도; 뿐만 아니라 수혈 빈도, 혈구감소증으로 인한 투약 지연 비율, 및 Gr 3-4 혈구감소증의 비율 등이 있다.

예비적 종점

혈청 합토글로빈 수준이 젬시타빈의 혈액학적 독성에 대한 민감도를 예측할 수 있다는 증거가 있다. 혈청 합토글로빈 수준은 이 개념을 연구하기 위해 본 연구의 기준선에서 수집되지만, 환자를 선택하는 데 사용되지 않으며, 환자가 임의의 치료 결정(합토글로빈이 용혈을 배제하는 것과 같은 또 다른 이유로 보여지지 않는 한)에 영향을 미치기 시작한 치료 후에는 측정되지 않는다.

본원 발명은 또한, 예를 들어 부정적 반응의 발생을 포함하는, 다음의 예시적인 1차 및/또는 2차 종점 및 평가 기준의 사용을 고려한다; 등급 3 또는 4 혈소판감소증의 지속 기간; 치료 그룹에 의한 연구 화학요법 사이클의 처음으로 경험한 등급 3 또는 4 혈소판감소증(예. 혈소판 수 < 50 x 10⁹/L)의 지속 기간; 첫번째 치료 사이클 동안 등급 3 또는 4 혈소판감소증(50 x 10⁹/L)을 경험한 참가자의 발생률; 혈소판 수혈의 참가자 발생률; 연구 처리 주기 동안 처음으로 혈소판 수혈을 받은 참가자의 발생률; 혈소판 수.

신체 검사

신체 검사는 현지 관행에 따라 자격을 갖춘 의사 또는 피지명자가 수행한다.

바이탈 사인

바이탈 사인 측정에는 온도, 수축기 혈압 및 이완기 혈압 및 맥박이 포함된다. 신장(기준선에만) 및 체중도 측정되고 기록된다.

심전도(ECG)

12-리드 ECG는 심박수를 자동으로 계산하고 PR, QRS, QT 및 QTc 간격을 측정하는 ECG 기계(Mortara system)를 사용하여 연구 중에 얻을 수 있다. 각 평가에서 12-리드 ECG는 개체가 반-누운 자세 또는 누운 자세로 적어도 5분 쉰 후에 자격을 갖춘 직원이 현장에서 수행한다.

QTcF이 450? msec 초과 등에 국한되지 않는 임상적으로 유의한 이상이 있는 경우, 적어도 5분 간격으로 2번의 추가적인 ECG를 통해 결과가 확인됩니다.

임상적 실험실 평가

위에 열거된 혈액학, 화학, 소변 검사 및 혈청 임신 테스트가 현장 실험실에서 분석될 것이다. 합토글로빈은 자격을 갖춘 실험실로 보내질 수 있으며 현장에서 치료되지 않을 수 있다.

수행도

수행도 평가는 ECOG 스케일[Oken, 1982]에 기초한다:

0 - 제한없이 모든 사전의-질병 수행을 실행할 수 있는, 완전 활성.

1 - 신체적으로 격렬한 활동은 제한되지만 보행가능하고 가벼우면서도 앉아서하는 일(예 : 가벼운 집안일, 사무 업무)을 수행할 수 있음.

2 - 보행 가능하고 모든 자기-부양이 가능하지만 어떤 업 활동도 수행할 수 없음. 깨어있는 시간의 약 50% 이상 설 수 있다.

3 - 오직 제한된 자기-부양을 할 수 있고, 깨어있는 시간의 약 50% 이상을 침대 또는 의자에 국한된다.

4 - 완전히 장애를 가짐. 어떠한 자기-부양도 할 수 없음. 전적으로 침대 또는 의자에 국한됨.

항암 활성

질병 평가에는 이미징(예 : 컴퓨터 단층 촬영, 자기 공명 영상, 뼈 스캔, 일반 방사선 사진) 및 신체 검사(촉지가능한/표면 병변에 대해 표시)가 포함된다.

잘-특성화되어있는 종양 마커가 뒤따를 수 있는 질병을 가진 개체를 위해, 질병 평가는 종양 마커 측정 결과를 포함해야 한다. 질병 평가는 젬시타빈의 첫 번째 투약 4주 전에 완료한 후, 그 이후 8주마다(±5일) 및 최종 연구 방문 시점에 완료된다.

질병 진행으로 개체가 철회된 경우 최종 연구 방문에서 방사선학적 평가를 반복할 필요는 없다. 질병에 반응하는 환자(완전한 반응 또는 부분 반응)는 반응이 입증된 평가 날짜로부터 4주(±5일) 후에 확인된 질병 평가를 받아야 한다. 조사자의 재량에 따라 보다 빈번한 질병 평가가 수행될 수 있다. 기준선과 후속 평가 간의 비교 가능성을 확실히 하기 위해, 반응을 평가할 때 동일한 평가 방법 및 동일한 기술이 사용된다.

약물동태학

HemaMax™ 및 젬시타빈 둘 다의 약물동태학 분석을 위한 혈액 샘플이 표 12에 표시된 시점에 수집된다. 각 혈액 샘플 수집의 실제 날짜 및 시간이 기록될 것이다. 철저한 PK 모니터링을 보장하기 위해 PK 샘플의 타이밍을 변경하거나 추가적인 시점에서 PK 샘플을 얻을 수 있다.

PK 샘플 - HemaMax™

PK 시점에 대해서는 표 12를 참조한다. 분무-건조된 디포타슘 에틸렌 디아민 테트라-아세트산(K₂EDTA)을 함유하는 Vacutainer® 수집 튜브에 혈액 샘플을 수집한다. 수집 후, 항응고제와 혼합하기 위해 샘플을 8 내지 10회 뒤집는다. 원심분리될 때까지 얼음/물 배스에서 튜브를 유지한다. 수집 60분 이내에, 샘플을 4℃에서 10분 동안 약 1500G에서 원심분리시킨다. 적절한 분액 튜브에 약 2mL의 혈장을 분주한다. 동결될 때까지 얼음/물 배스에서 튜브를 유지한다. 원심분리 후 60분 이내에 약 -70℃에서 샘플을 동결시킨다.

PK 샘플 - 젬시타빈

PK 시점에 대해서는 표 12를 참조한다. 나트륨 헤파린(Na Hep)를 함유하는 Vacutainer® 수집 튜브에 혈액 샘플을 수집하고 젬시타빈을 dFdU로 물질대사시키는 시티딘 디아미나제를 억제하기 위해 테트라히드로우리딘(THU)(혈장에 0.1mg/mL)를 처리했다. 수집 60분 이내에, 샘플을 4℃에서 10분 동안 약 1500G에서 원심분리시킨다. 적절한 분액 튜브에 약 0.5mL의 혈장을 분주한다. 동결될 때까지 얼음/물 배스에서 튜브를 유지한다. 원심분리 후 60분 이내에 약 -70℃에서 샘플을 동결시킨다.

항원성 및 중화 항체 테스트

이 샘플들은 사이클 1, 1일째(투약-전), 사이클 1, 43일째, 및 연구 방문 마지막에 수집된다.

분무-건조된 디포타슘 에틸렌 디아민 테트라-아세트산(K₂EDTA)을 함유하는 Vacutainer® 수집 튜브에 혈액 샘플을 수집한다. 수집 후, 항응고제와 혼합하기 위해 샘플을 8 내지 10회 뒤집고, 원심분리될 때까지 얼음/물 배스에서 튜브를 유지한다. 수집 60분 이내에, 샘플을 4℃에서 10분 동안 약 1500G에서 원심분리시킨다. 혈장을 4개의 적절하게 표지된 분액에, 각각 약 0.5mL의 부피로 분주한다. 동결될 때까지 얼음/물 배스에서 튜브를 유지한다. 원심분리 후 60분 이내에 약 -70℃에서 샘플을 동결시킨다.

수반되는 의약품 및 비-약물 요법

허가된 의약품

질병-관련 증상의 완화되고 보조적인 치료는 연구의 모든 환자에게 제공될 것이다. 따라서 환자는 적절한 것으로 판단되고 기관 지침에 따라 항생제, 항-구토제, 항-설사제, 진통제 및 기타 치료를 받을 수 있다. 환자는 연구 중에 임의의 다른 항암제를 투여 받을 수 없다; 그러나 호르몬-민감성 유방암의 공존 진단(환자가 현재 연구중인 악성 종양이 아닌)에 대한 보조 항-에스트로겐 요법을 받는 환자는 그러한 요법을 계속 할 수 있다. 연구 중 환자는 골 전이를 위해 비스포스포네이트 처리 또는 데노수맙을 투약 받을 수 있다.

첫 번째 21일을 완료한 후 조사자의 재량에서 ASCO 지침에 따라 에리스로포이에틴 자극제(ESA) 및 콜로니 자극 인자와 같은 보조 치료 보조요법을 투여할 수 있다. 의학적으로 필요한 것으로 간주되면 더 일찍 주어질 수 있다.

환자가 HemaMax™에 알레르기성 또는 사이토카인-매개 반응(발열, 오한, 가려움증, 두드러기 등)을 경험하면, HemaMax™의 후속 용량 투여하기 전에 사전약물투여 할 수 있다. 한 명 이상의 환자가 유사한 반응을 경험한다면, 모든 후속 환자는 모든 용량의 HemaMax™를 복용하기 전에 동일한 사전약물투여 처방을 받게 된다. 제안된 처방은:

덱사메타손 10mg IV

라니티딘 50mg IV

디펜히드라민 50mg IV

아세트아미노펜 650mg PO

비-약물 요법

개체들은 최종 연구 방문 때까지 연구 내내 생약 제조물/의약품 사용을 삼가한다. 이 생약 의약품에는 세인트 존스워트, 카바, 에페드라(마황), 은행 빌로바, 데히드로에피안드로스테론(DHEA), 요힘베, 팔메토 및 인삼이 포함되지만, 이에 제한되지는 않는다. 개별비타민 또는 종합비타민의 표준 용량은 허용된다.

시험용 제품

준비/취급/보관/책임

젬시타빈

젬자주(Gemzar)를 조제할 때 권장되는 희석제는 방부제가 없는 0.9% 염화나트륨 주사제이다. 용해도 고려 사항으로 인해, 조제시 젬자주의 최대 농도는 40mg/mL 이다. 40mg/mL 보다 높은 농도의 조제는 불완전한 용해를 초래할 수 있으므로, 피해야 한다. 조제하기 위해 1g 바이알에 0.9% 염화나트륨 주사제 5mL을 넣거나 또는 200mL 바이알에 0.9mL 염화나트륨 주사제 25mL를 넣는다. 흔들어 용해한다.

이 희석액은 각각 동결 건조된 분말의 배출 부피(200mg 바이알의 경우 0.26mL 또는 1g 바이알의 경우 1.3mL)을 포함하는 38mg/mL의 젬시타빈 농도를 산출한다. 조제시 총 부피는 각각 5.26mL 또는 26.3mL가 된다. 바이알 내용물을 완전히 회수하면 각각 젬시타빈 200mg 또는 1g이 각각 제공된다. 적절한 양의 약물을 준비된 상태로 투여하거나 0.9% 염화나트륨 주사제로 0.1mg/mL만큼 낮은 농도로 더 희석하여 투여할 수 있다. 조제된 젬자주는 투명하고, 무색의 밝은 짚색 용액이다. 0.9% 염화나트륨 주사액으로 조제한 후, 생성된 용액의 pH는 2.7 내지 3.3의 범위 내에 있다. 용액이나 용기가 허용할 때마다, 용액은 투여 전에 미립자 물질과 변색 여부를 육안으로 검사해야 한다. 미립자 물질과 변색이 발견되면, 투여하지 않아야 한다. 지시대로 조제된 때, 젬자주 용액은 20℃ 내지 25℃(68℉ 내지 77℉)의 관리된 실내 온도에서 24시간 동안 안정하게 있는다[USP 참조]. 사용하지 않은 부분은 폐기한다. 조제된 젬자주 용액은 결정화가 일어날 수 있으므로, 냉장보관하면 안된다. 젬자주와 다른 약물의 호환성은 연구되지 않았다. 주입병 또는 염화폴리비닐 백 및 투여 세트와의 비호환성은 관찰되지 않았다. 개봉하지 않은 젬자주 바이알은 20℃ 내지 25℃(68℉ 내지 77℉)의 관리된 실내 온도[USP 참조]에서 보관했을 때 패키지에 표시된 만료일까지 안정적이다. 젬자주 용액을 취급하고 준비할 때 주의해야 한다. 장갑의 사용이 권장된다. 젬자주 용액이 피부 또는 점막에 접촉하면, 즉시 비누와 물로 피부를 완전히 씻어 내고 다량의 물로 점막을 헹군다. 동물 연구에서 급성 진피 염증은 관찰되지 않았지만 3마리 토끼 중 2마리는 피부 흡수로 인한 약물-관련된 전신 독성(사망, 활동저하, 콧물, 얕은 호흡)을 나타냈다. 항암제의 올바른 취급 및 처분 절차를 따라야 한다.

HemaMax™

약사는 개체에게 주입하기 위한 채워진 주사기의 형태로 투약 용액을 준비한다. 이 임상시험에서 시험용 제품(IP)은 2mL 투명한 바이알에 HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품으로 구성된다. HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 바이알은 0.1 %(w/v) 폴록사머 188(회수 부피 0.50ml)을 함유한 10mM 인산나트륨, 150mM 염화나트륨, pH 6.0에서 20μg/mL rHuIL-12 단백질 0.65mL를 함유하고 있다. 이 용액들은 투명하고 무색이다. 냉장고에서 바이알을 꺼내 투약 준비 전 적어도 15분 동안 실온에 있게 해야 한다. 분리된 25G 5/8 바늘이 있는 폴리프로필렌 배럴이 있는 BD 주사기 또는 BD Tuberculin 주사기(카탈로그 # 305553, 27g 1/2 바늘 부착)는 호환 가능함이 나타났다. 준비된 용액이 담긴 주사기는 실온에서 6시간 동안 보관할 수 있다. 더 긴 보관 시간이 필요할 경우 주사기를 2 내지 8℃ 에서 24시간 동안 보관할 수 있다. 별도의 바늘이 있는 주사기를 사용하는 경우, 약 0.1mL 용량만큼 주사기를 과도하게 채운 다음, 바늘을 제거하고 새 바늘로 교체하고 적절한 용량에 도달할 때까지 부드럽게 뺀다.

5㎍ HemaMax ( rHuIL12 )

약물 제품 투약 준비

준비물: HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 1 바이알, HemaMax 위약 1 바이알, BD 주사기 2개 및 BD 25G 5/8 바늘 3개.

i. HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 바이알에서 0.65mL를 빼십시오.

ii. 바이알의 여러번 뒤집어 용액을 3 내지 4번 혼합한 다음 뒤집는 동안 바이알의 바닥을 부드럽게 3 내지 4 번 가볍게 두드리십시오.

iii. 주입용 주사기를 새로 사용하여, HemaMax 약물 제품 바이알에서 약 0.6 mL를 빼내십시오.

iv. 바늘을 교체하십시오.

v. 0.5mL 표시에 도달할 때까지 주사기에서 부드럽게 여분의 액체를 배출하십시오.

vi. 개체 정보를 주입을 위한 주사기에 표시하십시오.

10㎍ HemaMax ( rHuIL12 )

약물 제품 투약 준비

준비물: HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 1 바이알, BD 주사기 1개 및 BD 25G 5/8 바늘 2개.

i. HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 바이알에서 0.6mL를 빼십시오.

ii. 바늘을 교체하십시오.

iii. 0.5mL 표시에 도달할 때까지 주사기에서 부드럽게 여분의 액체를 배출하십시오.

iv. 개체 정보를 주입을 위한 주사기에 표시하십시오.

20㎍ HemaMax ( rHuIL12 )

약물 제품 투약 준비

준비물: HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 2 바이알, BD 주사기 2개 및 BD 25G 5/8 바늘 3개.

i. HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 바이알에서 내용물 전체를(최대한 많이) 빼십시오.

ii. 전체 양을 두번째 HemaMax (rHuIL-12) 약물 제품 바이알로 옮기시오.

iii. 바이알의 여러번 뒤집어 용액을 3 내지 4번 혼합한 다음 뒤집는 동안 바이알의 바닥을 부드럽게 3 내지 4번 가볍게 두드리십시오.

iv. 주입용 주사기를 새로 사용하여, 두번째 HemaMax(rHuIL-12) 약물 제품 바이알에서 약 1.1mL를 빼십시오.

v. 바늘을 교체하십시오.

vi. 1mL 표시에 도달할 때까지 주사기에서 부드럽게 여분의 액체를 배출하십시오.

vii. 개체 정보를 주입을 위한 주사기에 표시하십시오.

본 발명은 특정 구현예를 참조하여 개시되었지만, 본 발명의 진정한 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 본 발명의 다른 구현예 및 변형이 당업자에 의해 고안될 수 있음이 명백하다. 첨부된 청구 범위는 그러한 모든 구현예 및 동등한 변형을 포함한다.

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본원에 언급되거나 참조된 모든 특허, 출판물, 과학논문, 웹 사이트 및 다른 문헌 및 자료는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자의 기술 수준을 나타내며, 그러한 각각의 참조 문헌 및 자료는 그 전체가 개별적으로 또는 본원에 전체적으로 참고 문헌으로 인용된 것과 동일한 정도로 참고 문헌으로 포함된다. 출원인은 특허, 출판물, 과학 논문, 웹 사이트, 전자적으로 이용 가능한 정보 및 기타 참조 자료나 문서와 같은 모든 자료와 정보를 이 명세서에 물리적으로 포함시킬 권리를 보유한다.

본원에 기술된 특정 방법 및 조성물은 바람직한 구현예의 대표적인 것이고 예시적인 것이며 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다. 다른 목적, 양태 및 구현예는 본 명세서를 고려할 때 당업자에게 주어질 것이며 청구 범위의 범위에 의해 정의된 본 발명의 사상 내에 포함된다. 본 발명의 범위 및 사상을 벗어나지 않으면서 본원에 개시된 발명에 대한 다양한 대체 및 변형이 이루어질 수 있다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 본원에 예시적으로 기술된 본 발명은 본질적으로 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소 또는 제한 또는 제한이 없는 상태에서 적절하게 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 본원 각각의 예에서, 본 발명의 구현예들 또는 실시예들에서, "포함한다", "필수적으로 이루어진다" 및 "이루어진 것으로서"와 같은 용어들 중 어느 하나는 명세서의 다른 두 용어 중 하나로 대체될 수 있다. 또한, "포함하는", "함유하는" 등의 용어는 광범위하게 제한 없이 읽혀야 한다. 본원에 예시적으로 기술된 방법 및 과정은 상이한 순서의 단계로 실시될 수 있으며, 본원 또는 청구 범위에서 지시된 단계의 순서에 반드시 제한되는 것은 아니다. 본원 및 첨부된 청구 범위에서 사용된 단수 형태는 문맥상 명확하게 다르게 지시하지 않는 한 복수를 포함한다. 어떠한 경우에도 특허는 본원에 구체적으로 개시된 구현예 또는 실시예 또는 방법으로 제한되는 것으로 해석될 수 없다. 어떠한 경우에도 출원인의 응답성 있는 서면으로 명시적으로 그리고 자격 또는 예약이 명시적으로 채택되지 않는 한, 특허 및 상표 관청의 모든 공무원 또는 직원이 작성한 진술로 인해 특허가 제한될 수 없다.

채용된 용어 및 표현은 제한이 아닌 설명의 용어로서 사용되는 것으로서, 이러한 용어 및 표현의 사용은 설명되거나 보여준 특징 또는 그 일부의 어떤 등가물을 배제하는 의도는 없으며, 청구된 본 발명의 범위 내에서 다양한 변형이 가능하다는 것이 인정된다. 따라서, 본 발명이 바람직한 구현예들 및 선택적 특징들에 의해 구체적으로 개시되었지만, 본원에 개시된 개념들의 변경 및 변화가 당업자에 의해 의지될 수 있고, 그러한 변경들 및 변화들이 첨부된 청구 범위에 의해 정의된 본 발명의 범위 내에서 고려된다.

본 발명은 본원에서 광범위하고 일반적으로 기술되었다. 일반적인 개시 내용에 속하는 더 좁은 종 및 하위속 군도 각각 본 발명의 일부를 형성한다. 삭제된 자료가 본원에서 구체적으로 인용되는지를 불문하고, 여기에는 속으로부터 임의의 대상을 제거하는 단서 또는 부정적 제한을 갖는 본 발명의 일반적인 설명을 포함한다.

다른 구현예들은 다음의 청구 범위 내에 있다. 또한, 본 발명의 특징 또는 양태가 마쿠시 군으로 설명되는 경우, 당업자는 또한 본 발명이 마쿠시 군의 개별 구성 또는 하위 군 구성의 관해서 기술됨을 인식할 것이다.

Claims

암을 가진 개체의 생존을 증가시키기 위한 약학적 조성물로서,
상기 조성물은 치료학적 유효량의 IL-12를 포함하고, 암을 가진 개체의 생존을 증가시키기 위한 방법은 미리 결정된 화학요법 및/또는 화학방사선요법 처방을 받는 개체에게 상기 약학적 조성물의 치료학적 유효량을 투여하는 단계를 포함하고, IL-12의 투여는 화학요법 및/또는 화학방사선요법에 의해 유도 가능한 적어도 2개의 혈구 감소증의 발생 가능성 및/또는 중증도를 감소시키고, 혈구 감소증의 유도로 인한 화학요법 및/또는 화학방사선요법 투약 처방의 후속 조절에 대한 필요성이 경감되는 것인, 약학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 화학요법 및/또는 화학방사선요법 투약 처방 조절은 투약 분량 / 투약 적정 및/또는 투약 감소를 포함하는 투약량 및 투여 빈도의 변경을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, IL-12의 투여는 항-종양 반응을 유도하는 것인, 약학적 조성물.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12 투여와 화학요법 및/또는 화학방사선요법의 조합된 방식은 개체의 생존을 증가시키는 것인, 약학적 조성물.
제4항에 있어서, 생존은 무진행 생존인, 약학적 조성물.
제4항에 있어서, 생존은 개체의 전반적인 생존인, 약학적 조성물.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 한에 있어서, 혈구 감소증은 림프구 감소증을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 한에 있어서, 혈구 감소증은 호중구 감소증, 백혈구 감소증, 빈혈증, 혈소판 감소증, 및 림프구 감소증 중 적어도 2개로부터 선택되는 것인, 약학적 조성물.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 한에 있어서, 혈구 감소증은 중성구 감소증을 포함하는 것인, 약학적 조성물.
제7항 또는 제8항에 있어서, CD4+, CD8+, CD8+ 기억 세포, 및 NK 세포를 포함하는 림프구 서브세트 중 적어도 1개를 포함하는 것인, 약학적 조성물.
개체가 화학요법제에 노출된 후 개체의 화학요법-유도된 혈구 감소증의 치료 또는 예방을 위한, 실질적으로 분리된 IL-12를 포함하는, 약학적 조성물로서, 치료학적 유효량의 상기 약학적 조성물의 투여는 화학요법-유도된 혈구 감소증을 감소시키는 것인, 약학적 조성물.
제11항에 있어서, 화학요법제는 소정 용량의 방사선에 대한 노출과 함께 조합된 방식으로 개체에게 투여되는 것인, 약학적 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, IL-12의 약학적 유효 용량은 약 300ng/kg 미만인, 약학적 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, IL-12의 약학적 유효 용량은 각 용량 당 약 300ng/kg 미만의 2 이상의 용량인, 약학적 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, IL-12의 1 이상의 약학적 유효 용량은 약 200ng/kg 미만인, 약학적 조성물.
제11항 또는 제12항에 있어서, IL-12의 1 이상의 약학적 유효 용량은 약 100ng/kg 미만인, 약학적 조성물.
제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12의 1 이상의 약학적 유효 용량은 화학요법제 노출 전에 제공되는 것인, 약학적 조성물.
제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12의 1 이상의 약학적 유효 용량은 화학요법제 노출 전 및 후에 제공되는 것인, 약학적 조성물.
제11항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12의 1 이상의 약학적 유효 용량은 화학요법제 노출 후에 제공되는 것인, 약학적 조성물.
제11항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, IL-12는 rHuIL-12인, 약학적 조성물.
제11항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 화학요법제는 백금계 화학요법인, 약학적 조성물.