RU2425871C1 - Nutrient medium for legionella cultivation - Google Patents
Nutrient medium for legionella cultivation Download PDFInfo
- Publication number
- RU2425871C1 RU2425871C1 RU2010124602/10A RU2010124602A RU2425871C1 RU 2425871 C1 RU2425871 C1 RU 2425871C1 RU 2010124602/10 A RU2010124602/10 A RU 2010124602/10A RU 2010124602 A RU2010124602 A RU 2010124602A RU 2425871 C1 RU2425871 C1 RU 2425871C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- potassium phosphate
- substituted
- legionella
- agar
- nutrient medium
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии, а именно к получению питательных сред для выращивания легионелл.The invention relates to biotechnology, namely, to obtain culture media for growing legionella.
Известна питательная среда для выращивания легионелл, основой которой является мясная вода до 1000,0 мл; пептон ферментативный 10 г; натрия хлорид 5,0 г; кровь 10 г; агар-агар 15,0-20,0 г, pH 7,3±0,2. Среду автоклавируют 30 мин при температуре 121°C (М.С.Поляк; В.И.Сухаревич; М.Э.Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С.64-65; С.269).Known nutrient medium for growing Legionella, the basis of which is meat water up to 1000.0 ml; peptone enzymatic 10 g; sodium chloride 5.0 g; blood 10 g; agar-agar 15.0-20.0 g, pH 7.3 ± 0.2. The medium is autoclaved for 30 minutes at a temperature of 121 ° C (M.S. Polyak; V.I. Sukharevich; M.E. Sukharevich. Nutrient media for medical and sanitary microbiology. St. Petersburg: ELBI-St. Petersburg. - 2008. - P.64 -65; p. 269).
Недостатком данной среды является недостаточная эффективность.The disadvantage of this environment is the lack of effectiveness.
Наиболее близкой к предлагаемой питательной среде является среда, содержащая г/л: экстракт дрожжей - 10,0 г; уголь активированный - 2,0 г; ACES буфер (амино-2-оксиэтил-аминоэтан сульфоновая кислота) - 10,0 г; a-кетоглуторат - 1,0 г; L-цистеин - 0,4 г; железа пирофосфат - 0,25 г; агар-агар 15,0 г; дистиллированная вода до 1 л; pH 6,9±0,2. (М.С.Поляк, В.И.Сухаревич, М.Э.Сухаревич. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. СПб.: ЭЛБИ-СПб. - 2008. - С.268-270).Closest to the proposed nutrient medium is a medium containing g / l: yeast extract - 10.0 g; activated carbon - 2.0 g; ACES buffer (amino-2-hydroxyethyl-aminoethane sulfonic acid) - 10.0 g; a-ketoglutorate - 1.0 g; L-cysteine - 0.4 g; iron pyrophosphate - 0.25 g; agar agar 15.0 g; distilled water up to 1 liter; pH 6.9 ± 0.2. (M.S. Polyak, V.I. Sukharevich, M.E. Sukharevich. Nutrient media for medical and sanitary microbiology. St. Petersburg: ELBI-St. Petersburg. - 2008. - P.268-270).
Недостатком данной среды является дороговизна не производимого в РФ препарата железа пирофосфата растворимого.The disadvantage of this environment is the high cost of soluble iron pyrophosphate, which is not produced in the Russian Federation.
Целью настоящего изобретения является конструирование качественной питательной среды животного происхождения, которая обеспечивает ростовые свойства легионелл.The aim of the present invention is the construction of a high-quality nutrient medium of animal origin, which provides the growth properties of legionella.
Поставленная цель достигается тем, что питательная среда в качестве питательной основы содержит ферментативный гидролизат легкого свиньи; 0,01 М калийфосфатный буфер (состав калийфосфатного буфера: калий фосфорнокислый 1 - замещенный; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный); а также активированный уголь; L-цистеин гидрохлорид; дистиллированную воду; агар микробиологический с добавлением в среду стимулятора ферментативного гидролизата арахиса при следующем соотношении ингредиентов, г/л:This goal is achieved in that the nutrient medium as a nutrient base contains an enzymatic hydrolyzate of pig lungs; 0.01 M potassium phosphate buffer (composition of the potassium phosphate buffer: potassium phosphate 1 - substituted; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous); as well as activated carbon; L-cysteine hydrochloride; distilled water; microbiological agar with the addition of peanut enzymatic hydrolyzate to the stimulator medium in the following ratio of ingredients, g / l:
Легкое свиньи ТУ-8-5344-113607. Биологическая ценность легкого свиньи, относящейся к субпродуктам II категории, состоит в наличии в среднем 13,6% белка, минеральные вещества легкого, состоящего из солей натрия, калия, кальция, фосфора и высокого содержания железа; общее их количество достигает 1%, 0,5-1,4% золы. Легкое содержит также витамины, микроэлементы экстрактивные вещества. Из белковых веществ в легком свиньи при ферментативном гидролизе образуются следующие аминокислоты: лизин, метионин, триптофан, цистин, цистеин, треонин, серин, фенилаланин, пролин, аланин, глицин, валин, лейцин, тирозин, гистидин. (И.В.Петрухин. Корма и кормовые добавки. Москва: Росагропромиздат.1989. С.-104-108).Pig lung TU-8-5344-113607. The biological value of a pig’s lung belonging to category II offal consists in an average of 13.6% protein, minerals of the lung, consisting of sodium, potassium, calcium, phosphorus and high iron; their total amount reaches 1%, 0.5-1.4% of ash. The lung also contains vitamins, trace elements extractive substances. The following amino acids are formed from protein substances in a pig’s lung during enzymatic hydrolysis: lysine, methionine, tryptophan, cystine, cysteine, threonine, serine, phenylalanine, proline, alanine, glycine, valine, leucine, tyrosine, histidine. (I.V. Petrukhin. Feed and feed additives. Moscow: Rosagropromizdat. 1989. S.-104-108).
Включение в состав среды 0,01 М калийфосфатного буфера (состав калийфосфатного буфера: калий фосфорно-кислый 1 замещенный; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный); обосновано широким использованием фосфатов при приготовлении питательных сред, т.к. это единственные неорганические соединения, обладающие буферным действием в физиологически важном диапазоне pH, они малотоксичны. Кроме того, HPO4 - компонент нуклеиновых кислот, фосфолипидов, нуклеотидов (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов - М., 1989).The inclusion of 0.01 M potassium phosphate buffer in the medium (composition of the potassium phosphate buffer: potassium phosphate 1 substituted; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous); justified by the widespread use of phosphates in the preparation of culture media, because these are the only inorganic compounds that have a buffering effect in the physiologically important pH range, they are low toxic. In addition, HPO 4 is a component of nucleic acids, phospholipids, nucleotides (Guidelines for the manufacture and use of culture media and solutions for microbiological purposes, the cultivation of cells and viruses - M., 1989).
Ферментативный гидролизат арахиса является стимулятором питательной среды ввиду присутствия в нем L-цистеина. Определение L-цистеина и в том числе других аминокислот - лизина солянокислого, аргинина, глутамина, аспарагина, фенилаланина, валина, илейцина, содержащихся в арахисе, осуществляют с помощью метода тонкослойной фроматографии на пластинках силуфол. (А.П.Корешков Основы аналитической химии. Физико-химические (инструментальные) методы анализа. Изд. «Химия». 1970. - 472 с.)Peanut enzymatic hydrolyzate is a nutrient stimulant due to the presence of L-cysteine in it. Determination of L-cysteine, including other amino acids - hydrochloric acid lysine, arginine, glutamine, asparagine, phenylalanine, valine, ileucine contained in peanuts, is carried out using the method of thin-layer chromatography on silofol plates. (A.P. Koreshkov, Fundamentals of Analytical Chemistry. Physicochemical (Instrumental) Methods of Analysis. Published by Chemistry. 1970. - 472 p.)
При приготовлении питательной среды используют только дистиллированную воду, без применения растворов, содержащих ионы натрия, ввиду их губительного действия на легионеллы.When preparing the nutrient medium, only distilled water is used, without the use of solutions containing sodium ions, due to their destructive effect on legionella.
Сочетанное применение указанных компонентов обеспечивает получение чистых культур через 48 ч.The combined use of these components provides pure crops after 48 hours
Легионеллы являются факультативными внутриклеточными паразитами, поэтому растут в желточном мешке куриных эмбрионов, в культуре клеток животных и человека (фибробласты легкого). (Медицинская микробиология, вирусология и иммунология: Учебник для студентов медицинских вузов / Под редакцией А.А.Воробьева. - 2-е изд., испр. и доп. - М.: ООО «Медицинское информационное агенство», 2008. - С.400).Legionella are facultative intracellular parasites; therefore, they grow in the yolk sac of chicken embryos, in animal and human cell culture (lung fibroblasts). (Medical Microbiology, Virology, and Immunology: A Textbook for Students of Medical Universities / Edited by A. A. Vorobyov. - 2nd ed., Rev. And add. - M.: Medical Information Agency LLC, 2008. - P. 400).
В отличие от прототипа предлагаемая среда экономична, выгодна и обеспечивает оптимальные условия для размножения легионелл за 48 ч.In contrast to the prototype, the proposed environment is economical, profitable and provides optimal conditions for the reproduction of legionella in 48 hours.
Приготовление ферментативного гидролизата легкого свиньиPreparation of Pig Lung Enzymatic Hydrolyzate
Легкое свиньи в количестве 1 кг режут на кусочки размером 2×2 см, ссыпают в эмалированную кастрюлю, заливают водопроводной водой в количестве 1,5 л, варят в течение 10 мин, остужают до 46°C. Отвар сливают в 3 л стеклянный баллон. Остывшие кусочки легкого пропускают через мясорубку, затем помещают в баллон с отваром. Фермент панкреатин в количестве 9,5 г/л (или поджелудочную железу крупного рогатого скота, дважды пропущенную через мясорубку из расчета 150 г/кг) помещают в баллон с фаршем легкого и отваром его. Доводят pH до 8,2±0,1 с помощью калия гидроокиси по фенолфталеину. В качестве консерванта добавляют хлороформ в количестве 1% к объему жидкости. Баллон закрывают ватно-марлевой пробкой, тщательно перемешивают и помещают в термокамеру при температуре 37±1°C. Содержимое баллона в течение первых суток перемешивают через 20±1 мин по 5 мин, в последующие через 1,5-2,0 ч по 5 мин. Динамику процесса гидролиза контролируют путем определения аминного азота. Об окончании гидролиза судят по достижению аминного азота 0,5%-0,6%. После этого подогрев и перемешивание прекращают, гидролизат отстаивают. Отстоявшийся верхний слой гидролизата декантируют с помощью резинового шланга и фильтруют через полотняный фильтр. Сбор фильтрата ведут в стеклянный баллон емкостью 3 л, для консервации добавляют хлороформ в количестве 1% к объему содержимого баллона, закрывают резиновой пробкой и транспортируют в холодовую камеру, где хранят при температуре от +2 до +8°C.The pig’s lung in the amount of 1 kg is cut into pieces 2 × 2 cm in size, poured into an enameled pan, poured with tap water in an amount of 1.5 l, boiled for 10 minutes, cooled to 46 ° C. The broth is poured into a 3 liter glass bottle. The cooled pieces of the lung are passed through a meat grinder, then placed in a container with a decoction. The enzyme pancreatin in an amount of 9.5 g / l (or the pancreas of cattle, twice passed through a meat grinder at the rate of 150 g / kg) is placed in a balloon with minced lung and decoction of it. The pH was adjusted to 8.2 ± 0.1 with potassium hydroxide over phenolphthalein. Chloroform is added as a preservative in an amount of 1% to the volume of liquid. The cylinder is closed with a cotton-gauze plug, mixed thoroughly and placed in a heat chamber at a temperature of 37 ± 1 ° C. The contents of the balloon during the first day are mixed after 20 ± 1 min for 5 minutes, and after 1.5-2.0 hours for 5 minutes. The dynamics of the hydrolysis process is controlled by determining amine nitrogen. The end of hydrolysis is judged by the achievement of amino nitrogen of 0.5% -0.6%. After that, heating and stirring are stopped, the hydrolyzate is defended. The settled upper layer of the hydrolyzate is decanted with a rubber hose and filtered through a linen filter. The filtrate is collected in a glass container with a capacity of 3 l, chloroform is added in an amount of 1% to the volume of the contents of the container for preservation, closed with a rubber stopper and transported to a cold chamber, where it is stored at a temperature of +2 to + 8 ° C.
Ферментативный гидролизат арахиса готовят следующим образом:Peanut enzymatic hydrolyzate is prepared as follows:
семена арахиса в количестве 0,5 кг тщательно промывают в проточной питьевой воде (предварительно поместив их в марлю). Промытые семена арахиса измельчают в мясорубке, перекладывают в стеклянную емкость и добавляют 1,5 л питьевой воды в соотношении (1:3), подогретой до температуры 45±1°C. Доводят pH до 8,2±0,3 с помощью калия гидроокиси в количестве 3,0±0,1 г/л по фенолфталеину. Затем загружают 0,27 кг дважды пропущенную через мясорубку поджелудочную железу крупного рогатого скота. К объему содержимого баллона добавляют 1% хлороформа. Баллон закрывают ватно-марлевой пробкой с пергаментом, тщательно перемешивают и помещают в термокамеру при температуре 45±1°C. Содержимое баллона в течение первых суток перемешивают через 15±1 мин по 5 мин, а в последующие через 2,0 ч по 5 мин. Динамику ферментативного процесса контролируют по нарастанию аминного азота. Об окончании гидролиза судят по достижению аминного азота 0,4%-0,5%. Показатель сухого остатка равен 7%. На 9-10 сутки увеличение данного показателя прекращается, термокамеру отключают, гидролизат отстаивают в течение 2 суток. Затем фильтруют через фильтровальное полотно. Фильтрат добавляют 1% хлороформа, пробкуют резиновой пробкой, хранят при температуре от 2 до 8°C в холодовой камере. Используют по мере необходимости.0.5 kg peanut seeds are thoroughly washed in running drinking water (after placing them in gauze). The washed peanut seeds are crushed in a meat grinder, transferred to a glass container and 1.5 l of drinking water is added in the ratio (1: 3), heated to a temperature of 45 ± 1 ° C. The pH was adjusted to 8.2 ± 0.3 with potassium hydroxide in an amount of 3.0 ± 0.1 g / l by phenolphthalein. Then load 0.27 kg of cattle pancreas twice passed through a meat grinder. To the volume of the contents of the balloon add 1% chloroform. The cylinder is closed with a cotton-gauze stopper with parchment, mixed thoroughly and placed in a heat chamber at a temperature of 45 ± 1 ° C. The contents of the balloon during the first day are stirred after 15 ± 1 min for 5 minutes, and in the subsequent after 2.0 hours for 5 minutes. The dynamics of the enzymatic process is controlled by the increase in amine nitrogen. The end of hydrolysis is judged by the achievement of amino nitrogen of 0.4% -0.5%. The dry residue ratio is 7%. On 9-10 days, the increase in this indicator stops, the heat chamber is turned off, the hydrolyzate is defended for 2 days. Then filtered through a filter cloth. The filtrate is added with 1% chloroform, plugged with a rubber stopper, stored at a temperature of 2 to 8 ° C in a cold chamber. Use as needed.
Питательную среду на ферментативной основе легкого свиньи для выращивания легионелл готовят следующим способом. Берут ферментативный гидролизат из легкого свиньи, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,12% - 260,0 мл, другие ингредиенты в соотношении, г/л: калий фосфорнокислый 1 замещенный - 0,9; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 2,2; активированный уголь - 2,0; агар микробиологический - 8,5; дистиллированную воду до 1 л. Смесь доводят до кипения и кипятят до полного расплавления агара в течение 2 мин, pH корректируют раствором соляной кислоты (1:1) в количестве 5 мл до pH 6,8±0,1. Приготовленную питательную среду разливают в градуированные флаконы по 200±0,5 мл, которые герметично укупоривают ватно-марлевыми пробками и бумагой Крафт. Стерилизуют при 1 атм в течение 15 мин. В расплавленный в кипящей водяной бане и остуженный до 56°C агар добавляют L-цистеин гидрохлорид 0,35 г, ферментативный гидролизат арахиса 10,0 мл, затем разливают в стерильные чашки Петри. Просушивают в течение 30 минут и используют для посева.An enzymatic medium on the basis of light pigs for growing legionella is prepared in the following way. Take the enzymatic hydrolyzate from the lungs of a pig diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.12% - 260.0 ml, other ingredients in the ratio, g / l: potassium phosphate 1 substituted - 0.9; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous - 2.2; activated carbon - 2.0; microbiological agar - 8.5; distilled water up to 1 liter. The mixture is brought to a boil and boiled until the agar is completely melted for 2 minutes, the pH is adjusted with a solution of hydrochloric acid (1: 1) in an amount of 5 ml to a pH of 6.8 ± 0.1. The prepared nutrient medium is poured into graduated bottles of 200 ± 0.5 ml, which are hermetically sealed with cotton gauze plugs and Kraft paper. Sterilized at 1 atm for 15 minutes. 0.35 g L-cysteine hydrochloride, peanut enzymatic hydrolyzate 10.0 ml are added to the agar melted in a boiling water bath and cooled to 56 ° C, then poured into sterile Petri dishes. Dry for 30 minutes and use for sowing.
Эффективность полученной питательной среды оценивали в соответствии с методическими указаниями «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза» (Москва, 2007), с использованием в качестве тест-культур легионелл Legionella pneumophilla АТСС 33155 Bloomington, Legionella pneumophilla ATCC 33152 Philadelphia.The effectiveness of the obtained nutrient medium was evaluated in accordance with the guidelines “Control of diagnostic nutrient media according to biological indicators for plague, cholera, anthrax, tularemia, brucellosis, legionellosis” (Moscow, 2007), using Legionella pneumophilla ATCC 33155 as test cultures Bloomington, Legionella pneumophilla ATCC 33152 Philadelphia.
Испытуемые культуры выращивали на пластинках плотного агара контрольной среды СЭЛ pH 6,8 при температуре 37°C 24 ч. Из суточных культур готовили 1 млрд взвесь м.т. тест-штаммов, равной 10 ед. по оптическому стандарту мутности ОСО ГИСК им. Л.А. Тарасовича, затем серийными десятикратными разведениями в физиологическом растворе в объеме 4,5 мл доводили до содержания в 1 мл 1000 (10-6) и 100 м.к. (10-7). Из данных разведении взвесей культур высевали по 0,1 мл на 3 чашки Петри разлитого подсушенного испытуемого агара, на среду СЭЛ и агар Хоттингера. Посевы инкубировали при 37°C в течение 5 суток. Через 24-120 ч учитывали результаты путем подсчета выросших колоний.The test cultures were grown on plates of solid agar of a control SEL medium of pH 6.8 at a temperature of 37 ° C for 24 hours. 1 billion bw suspension was prepared from daily cultures. test strains equal to 10 units according to the optical turbidity standard OSO GISK im. L.A. Tarasovich, then serial ten-fold dilutions in physiological saline in a volume of 4.5 ml were adjusted to a content of 1 ml of 1000 (10 -6 ) and 100 mk (10 -7 ). From the dilutions of the culture suspensions, 0.1 ml was sown in 3 Petri dishes of the spilled dried test agar, on SEL medium and Hottinger agar. Crops were incubated at 37 ° C for 5 days. After 24-120 hours, the results were taken into account by counting the grown colonies.
Контрольная среда СЭЛ (Питательная среда для культивирования и выделения возбудителя легионеллеза элективная) - состав г/л: питательная основа животного происхождения - ферментолизат селезенки жидкий крупного рогатого скота в расчете на сухое вещество - 7,0; активированный уголь ОУ-А 4,0; агар микробиологический 17,0; калий фосфорнокислый однозамещенный 1,6; калий фосфорнокислый двузамещенный трехводный 3,4; pH среды 7,1 (Производитель ФГУЗ Рост НИПЧИ Роспотребнадзора. 344002, Ростов-на-Дону, ул. М. Горького, 117).SEL control medium (Nutrient medium for cultivation and isolation of the causative agent of Legionellosis selective) - g / l composition: nutrient base of animal origin - liquid spleen fermentolizate of cattle per dry matter - 7.0; activated carbon OU-A 4.0; microbiological agar 17.0; potassium phosphate monosubstituted 1.6; potassium phosphate disubstituted three-water 3.4; pH of 7.1 (Manufacturer FGUZ NIPSCH Rost Rospotrebnadzor. 344002, Rostov-on-Don, 117 M. Gorky St.).
Контрольный агар Хоттингера. Промышленный регламент №1707-05 на производство питательного агара для культивирования микроорганизмов, готового к применению (агара Хоттингера). Регистрационное удостоверение № ФСР 2009/05571 от 20 августа 2009 г. Срок действия не ограничен.Hottinger control agar. Industrial regulation No. 1707-05 for the production of nutrient agar for the cultivation of microorganisms, ready for use (Hottinger agar). Registration certificate No. ФСР 2009/05571 dated August 20, 2009. The validity period is unlimited.
Пример 1. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из легкого свиньи, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,100 мг% - 240,0 мл; калий фосфорнокислый 1 - замещенный - 0,7; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 2,0; активированный уголь - 1,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,25; ферментативный гидролизат арахиса - 8,0; агар микробиологический - 8,0; дистиллированная вода - до 1 л. При таком соотношении ингредиентов вырастало в среднем 22 и 2 плосковыпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,5 мм через 48 ч для обоих штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 19 и 2 соответственно, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.Example 1. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate from light pigs diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.100 mg% - 240.0 ml; potassium phosphate 1 - substituted - 0.7; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous - 2.0; activated carbon - 1.0; L-cysteine hydrochloride 0.25; peanut enzymatic hydrolyzate - 8.0; microbiological agar - 8.0; distilled water - up to 1 liter. With this ratio of ingredients, an average of 22 and 2 flat-convex, bluish-grayish colonies with a diameter of 1.5 mm grew after 48 hours for both strains taken in the experiment, whereas growth on the SEL control medium was observed only after 72 hours in the amount of 19 and 2, respectively , and there was no growth on the Hottinger agar.
Пример 2. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из легкого свиньи, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,120 мг% - 260,0 мл; калий фосфорнокислый 1- замещенный - 0,9; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 2,2; активированный уголь - 2,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,35; ферментативный гидролизат арахиса - 10, агар микробиологический - 10,0; дистиллированная вода - до 1 л. При таком соотношении ингредиентов вырастало 86 и 8 плосковыпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,5 мм через 48 ч для обоих тест-штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 60 и 6 соответственно, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.Example 2. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate from a light pig, diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.120 mg% - 260.0 ml; potassium phosphate 1-substituted - 0.9; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous - 2.2; activated carbon - 2.0; L-cysteine hydrochloride - 0.35; peanut enzymatic hydrolyzate - 10, microbiological agar - 10.0; distilled water - up to 1 liter. With this ratio of ingredients, 86 and 8 flat-convex, bluish-grayish colonies with a diameter of 1.5 mm grew after 48 hours for both test strains taken in the experiment, while growth on the SEL control medium was observed only after 72 hours in the amount of 60 and 6, respectively , and there was no growth on the Hottinger agar.
Пример 3. Тест-штаммы выращивали на питательной среде, содержащей, г/л: ферментативный гидролизат из легкого свиньи, разбавленного дистиллированной водой до показания аминного азота 0,140 мг% - 280,0 мл; калий фосфорнокислый 1-замещенный - 1,1; калий фосфорнокислый 2-замещенный 3-водный - 2,4; активированный - 3,0; L-цистеин гидрохлорид - 0,45; ферментативный гидролизат арахиса - 12,0; агар микробиологический - 12,0; дистиллированная вода до 1 л. При таком соотношении ингредиентов вырастало 15 и 5 плосковыпуклых, синевато-сероватых колоний диаметром 1,5 мм через 48 ч для обоих тест-штаммов, взятых в опыт, тогда как на контрольной среде СЭЛ рост наблюдался только через 72 ч в количестве 11 и 1, а на агаре Хоттингера рост отсутствовал.Example 3. Test strains were grown on a nutrient medium containing, g / l: enzymatic hydrolyzate from light pigs diluted with distilled water to an amine nitrogen reading of 0.140 mg% - 280.0 ml; potassium phosphate 1-substituted - 1.1; potassium phosphate 2-substituted 3-aqueous - 2.4; activated - 3.0; L-cysteine hydrochloride - 0.45; peanut enzymatic hydrolyzate - 12.0; microbiological agar - 12.0; distilled water up to 1 liter. With this ratio of ingredients, 15 and 5 flat-convex, bluish-grayish colonies with a diameter of 1.5 mm grew after 48 hours for both test strains taken in the experiment, whereas growth on the SEL control medium was observed only after 72 hours in the amount of 11 and 1, and there was no growth on the Hottinger agar.
Полученные результаты позволили определить оптимальный вариант питательной среды на основе ферментативного гидролизата легкого свиньи (пример 2).The results obtained allowed us to determine the optimal version of the nutrient medium based on the enzymatic hydrolyzate of the lung of a pig (example 2).
Claims (1)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010124602/10A RU2425871C1 (en) | 2010-06-15 | 2010-06-15 | Nutrient medium for legionella cultivation |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010124602/10A RU2425871C1 (en) | 2010-06-15 | 2010-06-15 | Nutrient medium for legionella cultivation |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2425871C1 true RU2425871C1 (en) | 2011-08-10 |
Family
ID=44754542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2010124602/10A RU2425871C1 (en) | 2010-06-15 | 2010-06-15 | Nutrient medium for legionella cultivation |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2425871C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2510828C1 (en) * | 2013-01-09 | 2014-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient medium for growing legionella |
-
2010
- 2010-06-15 RU RU2010124602/10A patent/RU2425871C1/en not_active IP Right Cessation
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| ПОЛЯК М.С., СУХАРЕВИЧ В.И., СУХАРЕВИЧ М.Э. Питательные среды для медицинской и санитарной микробиологии. - СПб.: ЭЛБИ-СПб, 2008, с.268-270. * |
| Частная медицинская микробиология с техникой микробиологических исследований. /Под ред. ЛАБИНСКОЙ А.С. - М.: Медицина, 2005, с.563-565. * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2510828C1 (en) * | 2013-01-09 | 2014-04-10 | Федеральное казенное учреждение здравоохранения Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека | Nutrient medium for growing legionella |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2412240C1 (en) | Culture medium for growing legionella | |
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| CN109055264A (en) | A kind of microbial bacterial agent and preparation method thereof for holothruian cultures | |
| RU2681285C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation | |
| RU2425871C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2415923C1 (en) | Method for production of fermentative hydrolysate of fresh white cabbage and nutritive medium for cultivation lactobacteria based thereon | |
| RU2460774C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2460768C1 (en) | Solid nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2415922C1 (en) | Nutrient medium for lactic acid bacilli cultivation | |
| RU2702174C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev | |
| RU2728379C1 (en) | Nutrient medium dense for brucella cultivation | |
| RU2394905C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of plague microbe | |
| RU2460775C1 (en) | Enriched nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2528101C2 (en) | Nutrient medium for legionella culture | |
| RU2688335C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation of brucellosis agent | |
| RU2680702C1 (en) | Nutritional environment for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 | |
| RU2245362C2 (en) | Nutrient medium for culturing plague microorganism vaccine strain | |
| RU2510828C1 (en) | Nutrient medium for growing legionella | |
| RU2410424C1 (en) | Culture medium for growing microorganism | |
| RU2756601C1 (en) | Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass | |
| RU2348686C2 (en) | Nutrient medium for microorganism cultivation | |
| RU2644248C2 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and growing of tularemic microbe | |
| RU2380409C1 (en) | Nutrient medium for pestilential microbe cultivation | |
| RU2333948C2 (en) | Nutritional medium for growing causative agent of tularemia |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20150616 |