RU2756601C1 - Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass - Google Patents
Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass Download PDFInfo
- Publication number
- RU2756601C1 RU2756601C1 RU2020131237A RU2020131237A RU2756601C1 RU 2756601 C1 RU2756601 C1 RU 2756601C1 RU 2020131237 A RU2020131237 A RU 2020131237A RU 2020131237 A RU2020131237 A RU 2020131237A RU 2756601 C1 RU2756601 C1 RU 2756601C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- biomass
- brucella
- chlorophytum
- nutrient medium
- enzymatic
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/30—Nerves; Brain; Eyes; Corneal cells; Cerebrospinal fluid; Neuronal stem cells; Neuronal precursor cells; Glial cells; Oligodendrocytes; Schwann cells; Astroglia; Astrocytes; Choroid plexus; Spinal cord tissue
Abstract
Description
Изобретение относится к биотехнологии и микробиологии, а именно к разработке питательных сред, которые создают оптимальные условия для выращивания биомассы бруцелл.The invention relates to biotechnology and microbiology, namely to the development of nutrient media that create optimal conditions for the growth of biomass of Brucella.
Известен биостимулятор роста микроорганизмов, - липоевая кислота, представляющая собой коферментный препарат невитаминного происхождения, который является важным окислительно-восстановительным переносчиком водорода. Липоевая кислота - это один из препаратов пируватдегидрогеназы, играет весьма ответственную роль в биологическом окислении. Обеспечивает клетку необходимой для ее жизнедеятельности энергией, принимает участие в биосинтезе углеводов, липидов и других соединений. Используется порошкообразная липоевая кислота, разработанная во ВНИСВМ, которая предварительно перед добавлением в питательную среду растворяется в спирте ректифицированном 96%-ном (Катунина Л.С. Использование липоевой кислоты с целью усовершенствования питательных сред для культивирования чумного микроба: Дисс. канд. биол. наук. - Ставрополь, 2002. - С. 164).Known biostimulator of the growth of microorganisms - lipoic acid, which is a coenzyme preparation of non-vitamin origin, which is an important redox carrier of hydrogen. Lipoic acid is one of the drugs of pyruvate dehydrogenase, plays a very important role in biological oxidation. Provides the cell with the energy necessary for its vital activity, takes part in the biosynthesis of carbohydrates, lipids and other compounds. Powdered lipoic acid is used, developed at VNISVM, which is previously dissolved in 96% rectified alcohol before being added to the nutrient medium (Katunina L.S.Use of lipoic acid to improve nutrient media for the cultivation of the plague microbe: Diss. Candidate of Biological Sciences . - Stavropol, 2002. - S. 164).
Недостатком данного биостимулятора является то, что препарат не выдерживает установленного срока хранения, при применении не дает стабильного эффекта повышения объема бактериальной массы.The disadvantage of this biostimulant is that the drug does not withstand the established shelf life, when applied, it does not give a stable effect of increasing the volume of the bacterial mass.
Наиболее близкой к заявляемому изобретению является питательная среда-заменитель агара «Альбими» для культивирования бруцелл, содержащая, на 1 л среды: 20,0 г сухого пептона, 20 мл дрожжевой воды, 5,0 г химически чистого хлористого натрия, 20,0 г агара, дистиллированной воды - до 1 литра. Ингредиенты растворяют в автоклаве под текучим паром, фильтруют через ватно-марлевый фильтр (предварительно смоченный теплой водой и хорошо отжатый), добавляют 1,0 г глюкозы и 0,1 г метабисульфита натрия, устанавливают рН 7,2-7,3. Разливают в необходимую посуду и стерилизуют 40 минут под текучим паром, затем при 110°С в течение 20 минут. Дрожжевая вода: 1 кг хлебных дрожжей и 1 л дистиллированной воды кипятят до растворения. Затем фильтруют через полотно. Хранят под хлороформом в темноте не более двух недель. (Методические указания МУ 3.1.7.3402-16. Издание официальное. Минздрав России Москва 2016 г., с. 58).Closest to the claimed invention is a nutrient medium-substitute for agar "Albimi" for the cultivation of brucella, containing, per 1 liter of medium: 20.0 g of dry peptone, 20 ml of yeast water, 5.0 g of chemically pure sodium chloride, 20.0 g agar, distilled water - up to 1 liter. The ingredients are dissolved in an autoclave under flowing steam, filtered through a cotton-gauze filter (pre-moistened with warm water and well wrung out), 1.0 g of glucose and 0.1 g of sodium metabisulfite are added, the pH is adjusted to 7.2-7.3. Poured into the necessary dishes and sterilized for 40 minutes under flowing steam, then at 110 ° C for 20 minutes. Yeast water: 1 kg of bread yeast and 1 liter of distilled water are boiled until dissolved. Then filtered through a web. Store under chloroform in the dark for no more than two weeks. (Guidelines MU 3.1.7.3402-16. Official edition. Ministry of Health of Russia Moscow 2016, p. 58).
Недостатком данной среды является недостаточная эффективность, ввиду нестабильного и длительного роста возбудителя бруцеллеза.The disadvantage of this environment is the lack of efficiency, due to the unstable and long-term growth of the pathogen of brucellosis.
Целью поставленной задачи явилась разработка питательной среды плотной для выращивания биомассы бруцелл, которая обеспечивала бы достаточный сбор биомассы через 48 ч в перспективе получения диагностических препаратов.The purpose of this task was to develop a dense nutrient medium for growing brucella biomass, which would ensure sufficient biomass collection in 48 hours in the future for obtaining diagnostic preparations.
Достигаемый технический результат заключается в том, что питательная среда в качестве питательной основы и источника азота содержит ферментативный сухой пептон, дрожжевой экстракт, а также включает: натрий хлористый, агар микробиологический, дистиллированную воду и ростостимулирующие добавки: глюкозу, натрия метабисульфит, глицерин, витамин B1, ферментативный гидролизат хлорофитума хохлатого листьев (ФГХЛ), а также нормальную лошадиную сыворотку.The achieved technical result is that the nutrient medium as a nutrient base and a source of nitrogen contains enzymatic dry peptone, yeast extract, and also includes: sodium chloride, microbiological agar, distilled water and growth-stimulating additives: glucose, sodium metabisulfite, glycerin, vitamin B 1 , Enzymatic Hydrolyzate of Crested Leaf Chlorophytum (FHHL) as well as normal horse serum.
Сущность изобретения заключается в том, что введение в состав питательной среды плотной разработанного стимулятора - ферментативного гидролизата хлорофитума хохлатого листьев (ФГХЛ), а также нормальной лошадиной сыворотки, обеспечивает достаточное количество биомассы бруцелл для получения диагностических препаратов через 48 ч культивирования во флаконах на среде, содержащей следующие ингредиенты:The essence of the invention lies in the fact that the introduction into the nutrient medium of a dense developed stimulant - an enzymatic hydrolyzate of crested leaf chlorophytum (FGHL), as well as normal horse serum, provides a sufficient amount of Brucella biomass to obtain diagnostic preparations after 48 hours of cultivation in flasks on a medium containing the following ingredients:
В качестве исходного сырья для получения стимулятора роста микроорганизмов - ферментативного гидролизата хлорофитума хохлатого, листьев (ФГХЛ), используют комнатное растение Chlorophytum comosum. Ферментативный гидролиз проводят с помощью раствора панкреатина (2 мг/мл). Панкреатин, субстанция - порошок, ЛСП - 005754/9 серия №181213 от 12.2018. Производитель «Хубей Максфарм Инд Ко ЛТД», Китай.The houseplant Chlorophytum comosum is used as a raw material for obtaining a growth stimulator of microorganisms - an enzymatic hydrolyzate of chlorophytum crested leaves (FGHL). Enzymatic hydrolysis is carried out using a pancreatin solution (2 mg / ml). Pancreatin, substance - powder, LSP - 005754/9 series No. 181213 dated 12.2018. Manufacturer "Hubei Maxpharm Ind Co LTD", China.
Для изготовления стимулятора роста микроорганизмов на основе хлорофитума растение выращивают в условиях лаборатории. Надземную часть хлорофитума срезают ножом, промывают под проточной водопроводной водой, нарезают ножом на кусочки длиной 2,0 см, замораживают в морозильном ларе VT -147 («Vestfrost», Дания) при температуре минус 40°С в течение 72 ч и подвергают сублимационной сушке в течение 30 ч при температуре сублиматора минус 35°С (Лиофильная сушилка ЛС-500 («Проинтех», Россия). Полученную массу измельчают до однородного порошка.For the manufacture of a chlorophytum-based microorganism growth stimulator, the plant is grown under laboratory conditions. The aboveground part of chlorophytum is cut with a knife, washed under running tap water, cut with a knife into pieces 2.0 cm long, frozen in a VT-147 chest freezer ("Vestfrost", Denmark) at a temperature of minus 40 ° C for 72 hours and subjected to freeze drying for 30 hours at a sublimator temperature of minus 35 ° C (Lyophilic dryer LS-500 ("Prointech", Russia). The resulting mass is ground to a homogeneous powder.
Полученный сублимат хлорофитума растворяют в дистиллированной воде в соотношении (1:25), перемешивают, доводят рН до 8,0-8,3 1М NaOH, вносят панкреатин (2 мг/мл), выдерживают 48 ч при температуре 37°С и перемешивают в шейкер-термостате ES 20/60 («Biosan», Латвия). Ферментацию останавливают нагревом до температуры 90°С в течение 10 мин, затем фильтруют через фильтрационную систему с применением ПЭС кассет (размеры пор 0,2 мкм, 30 Ша и 10 kDa Vivaflow 50), («Sartorius», Франция), центрифугаруют в центрифуге с охлаждением SL 40R («Thermo fisher scientific», США), автоклавируют при температуре 120°С в течение 10 мин в стерилизаторе паровом СПВА-75-1НН («Транс-сигнал», Россия).The resulting chlorophytum sublimate is dissolved in distilled water in a ratio (1:25), stirred, adjusted to pH 8.0-8.3 with 1M NaOH, pancreatin (2 mg / ml) is added, kept for 48 h at 37 ° C and stirred in shaker thermostat ES 20/60 ("Biosan", Latvia). Fermentation is stopped by heating to 90 ° C for 10 min, then filtered through a filtration system using PES cassettes (pore sizes 0.2 μm, 30 Sha and 10 kDa Vivaflow 50), (Sartorius, France), centrifuged in a centrifuge with cooling SL 40R (Thermo fisher scientific, USA), autoclave at 120 ° С for 10 min in a steam sterilizer SPVA-75-1NN (Trans-signal, Russia).
Характеристика получаемого ферментативного гидролизата: стерильная, прозрачная жидкость коричневого цвета, без консервантов; содержание сухого вещества (35,0±3,0) г/л, рН 6,8, реакция с сульфосалициловой кислотой на протеины - отрицательная, аминный азот 63,0 мг %, общие фенолы 0,21 мг/мл галловой кислоты, количество моносахаридов в пересчете на глюкозу 0,06%.Characteristics of the obtained enzymatic hydrolyzate: sterile, transparent brown liquid, without preservatives; dry matter content (35.0 ± 3.0) g / l, pH 6.8, reaction with sulfosalicylic acid for proteins - negative, amine nitrogen 63.0 mg%, total phenols 0.21 mg / ml gallic acid, amount monosaccharides in terms of glucose 0.06%.
Хлорофитум хохлатый содержит широкий перечень аминокислот в высоких концентрациях: цистин, лейцин, валин, фенилаланин, гистидин и гистамин. Кроме того, хлорофитум хохлатый обладает свойствами биофильтра. Это растение активно поглощает из воздуха и нейтрализует опасные для человека соединения, такие как: фенолы, угарный газ, формальдегид, соединения ксилола, бензола и толуола, что подтверждается в работах современных ученых (Серая А.С, 2008, Чувашева Е.С., 2009, Жученко А.А., Учаева О.С., 2011, Haagen-Smit A.J., 1954, Giese М., 1994, Wood R.A, 2000, Xu Z.J., 2010).Chlorophytum crested contains a wide range of amino acids in high concentrations: cystine, leucine, valine, phenylalanine, histidine and histamine. In addition, chlorophytum crested has biofilter properties. This plant actively absorbs from the air and neutralizes compounds dangerous to humans, such as: phenols, carbon monoxide, formaldehyde, xylene, benzene and toluene compounds, which is confirmed in the works of modern scientists (Seraya A.S., 2008, Chuvasheva E.S., 2009, Zhuchenko A.A., Uchaeva O.S., 2011, Haagen-Smit AJ, 1954, Giese M., 1994, Wood RA, 2000, Xu ZJ, 2010).
Пептон сухой ферментативный для бактериологических целей, ГОСТ 13805-76. Пептон представляет собой смесь разнообразных частиц распада белка, не свертывающихся при нагревании (пептоны, пептиды, аминокислоты и т.д.). Пептон ферментативный в своем составе содержит 16 аминокислот, мг %: аспарагиновая кислота 0,40±0,03; треонин 0,30±0,01; серии 0,40±0,03; глутаминовая кислота 0,50±0,03; глицин 0,50±0,01; аланин 1,0±0,02; валин 0,80±0,02; метионин 0,40±0,02; изолейцин 0,70±0,01; лейцин 2,40±0,06; тирозин 0,40±0,01; фенилаланин 1,30±0,01; лизин 1,30±0,05; гистидин 0,32±0,02; триптофан 0,06±0,01 (Шепелин А.П., Дятлов И.А. Питательные среды для энтеробактерий. Оболенск, 2017. - С. 41-43).Enzymatic dry peptone for bacteriological purposes, GOST 13805-76. Peptone is a mixture of various protein degradation particles that do not coagulate when heated (peptones, peptides, amino acids, etc.). Enzymatic peptone contains 16 amino acids, mg%: aspartic acid 0.40 ± 0.03; threonine 0.30 ± 0.01; series 0.40 ± 0.03; glutamic acid 0.50 ± 0.03; glycine 0.50 ± 0.01; alanine 1.0 ± 0.02; valine 0.80 ± 0.02; methionine 0.40 ± 0.02; isoleucine 0.70 ± 0.01; leucine 2.40 ± 0.06; tyrosine 0.40 ± 0.01; phenylalanine 1.30 ± 0.01; lysine 1.30 ± 0.05; histidine 0.32 ± 0.02; tryptophan 0.06 ± 0.01 (Shepelin A.P., Dyatlov I.A. Nutrient media for enterobacteria. Obolensk, 2017. - pp. 41-43).
Дрожжевой экстракт. Партия О60-АД18А00160. Используется в качестве полноценного и дешевого источника факторов роста микроорганизмов для повышения ростовых свойств предлагаемой питательной среды (Методические рекомендации по изготовлению и использованию питательных сред и растворов для микробиологических целей, культивирования клеток и вирусов. - М., 1986). По химическому составу дрожжевые среды представляют высокоценный питательный субстрат, весьма близкий к мясу, содержащий до 53% белка. Богатство дрожжей белками и витаминами позволяет получать из них высококачественные питательные среды (Козлов М.Ю., 1950).Yeast extract. Party O60-AD18A00160. It is used as a full-fledged and cheap source of growth factors for microorganisms to increase the growth properties of the proposed nutrient medium (Guidelines for the manufacture and use of nutrient media and solutions for microbiological purposes, cultivation of cells and viruses. - M., 1986). In terms of chemical composition, yeast media are a highly valuable nutrient substrate, very close to meat, containing up to 53% protein. The richness of yeast in proteins and vitamins makes it possible to obtain high-quality nutrient media from them (Kozlov M.Yu., 1950).
Натрий хлористый - ГОСТ 4233-77. Бактерии нуждаются в минимальном количестве солей. Будучи растворены в питательной среде и находясь в состоянии электролитического распада, ионизируемые минеральные соединения являются одновременно катализаторами различных химических процессов, происходящих в микробной клетке. Натрий хлористый необходим для поддержания изотоничности среды и окислительно-восстановительного потенциала.Sodium chloride - GOST 4233-77. Bacteria require a minimum amount of salt. Dissolved in a nutrient medium and being in a state of electrolytic decomposition, ionizable mineral compounds are simultaneously catalysts for various chemical processes occurring in the microbial cell. Sodium chloride is necessary to maintain the isotonicity of the medium and the redox potential.
Агар микробиологический - агар бактериологический (европейский тип). Порошок светло-кремового цвета, сероватого оттенка, запах без постороннего, свойственный студню с массовой долей сухого агара 0,85%. Температура плавления студня с массовой долей сухого агара 0,85% не ниже 80°С, температура застудневания - 30-37°С, прочность студня - не менее 350±40 г. Главная особенность агара - его желирующая способность при 90°С.Microbiological agar - bacteriological agar (European type). Powder of light cream color, grayish tint, odor without foreign, characteristic of jelly with a mass fraction of dry agar of 0.85%. The melting temperature of the jelly with a mass fraction of dry agar of 0.85% is not lower than 80 ° С, the gelation temperature is 30-37 ° С, the strength of the jelly is not less than 350 ± 40 g. The main feature of agar is its gelling ability at 90 ° С.
Глюкоза кристаллическая, чда. С внесением в питательную среду глюкозы в концентрации 1% улучшаются ее ростовые свойства.Crystalline glucose, analytical grade. With the introduction of glucose into the nutrient medium at a concentration of 1%, its growth properties are improved.
Глицерин, ГОСТ 6259-75. С внесением в питательную среду глицерина в концентрации 2% улучшаются ее ростовые свойства.Glycerin, GOST 6259-75. With the introduction of glycerin into the nutrient medium at a concentration of 2%, its growth properties are improved.
Натрия метабисульфит, партия 20190118. В средах переходит в гидросульфит натрия, при нагревании происходит термическое разложение с выделением двуокиси серы (SO2), что способствует нейтрализации продуктов жизнедеятельности культивируемых микроорганизмов.Sodium metabisulfite, batch 20190118. In media, it turns into sodium hydrosulfite, when heated, thermal decomposition occurs with the release of sulfur dioxide (SO 2 ), which helps to neutralize the waste products of cultured microorganisms.
Витамин B1, LOT: 7 Q014239. Многие бактерии лишены способности синтезировать все органические соединения, необходимые для роста, и зависят от наличия в среде определенных факторов роста. Общим свойством всех микроорганизмов является потребность в витаминах. Чаще наблюдается потребность в таких витаминах, как тиамин (витамин B1), биотин, и витамин B12.Vitamin B 1 , LOT: 7 Q014239. Many bacteria lack the ability to synthesize all organic compounds necessary for growth and depend on the presence of certain growth factors in the environment. A common property of all microorganisms is the need for vitamins. More often, there is a need for vitamins such as thiamine (vitamin B 1 ), biotin, and vitamin B 12 .
Нормальная лошадиная сыворотка, серия 08. Для интенсивного роста бруцеллезных микробов к питательным средам необходимо добавление 10-20% нормальной лошадиной, бычьей или сыворотки крупного рогатого скота. (Таран И.Ф., Лямкин Г.И. «Бруцеллез: микробиология, иммунология, эпидемиология, профилактика» с. 24-27, Ставрополь. - 1996 г.).Normal horse serum, series 08. For intensive growth of brucellosis microbes, 10-20% of normal horse, bovine or bovine serum must be added to the culture media. (Taran IF, Lyamkin GI "Brucellosis: microbiology, immunology, epidemiology, prevention" p. 24-27, Stavropol. - 1996).
Дистиллированная вода, ГОСТ 6709-72. Отвечает всем санитарно-гигиеническим требованиям. Внешний вид - прозрачная жидкость, хлориды, мг/дм3 - нет, нитраты, мг/дм3 - нет. Удельная электропроводимость при 20°С, См/м - 0,38, рН - 6,5. Вода составляет 80-90% от клеточной массы микроорганизмов и играет важнейшую роль в их физиологических функциях, а также входит состав структурных элементов клетки, служит средой для биохимических реакций, источником кислорода в процессах метаболизма, непосредственно участвует в метаболических реакциях, например, в реакциях гидролиза.Distilled water, GOST 6709-72. Meets all sanitary and hygienic requirements. Appearance - transparent liquid, chlorides, mg / dm 3 - no, nitrates, mg / dm 3 - no. Specific electrical conductivity at 20 ° C, S / m - 0.38, pH - 6.5. Water makes up 80-90% of the cell mass of microorganisms and plays an important role in their physiological functions, as well as a part of the structural elements of the cell, serves as a medium for biochemical reactions, a source of oxygen in metabolic processes, directly participates in metabolic reactions, for example, in hydrolysis reactions ...
Приготовление питательной среды плотнойPreparation of a dense nutrient medium
Для приготовления питательной среды плотной смешивают пептон сухой ферментативный - 20,0 г; дрожжевой экстракт - 20,0 г; натрий хлористый - 5,0 г; добавляют ферментативный гидролизат хлорофитума хохлатого листьев (ФГХЛ) - 89,4 мл, агар микробиологический - 11,0 г; натрия метабисульфит - 0,5 г; дистиллированную воду - до 1 л. Нагревают до кипения и кипятят в течение двух минут до полного расплавления агара. рН корректируют раствором соляной кислоты (1:1) до 7,2±0,1, фильтруют через ватно-марлевый фильтр, вносят глюкозу - 1,0 г; глицерин - 2,0 мл; витамин В1 - 0,5 г, тщательно размешивают, затем разливают в градуированные стеклянные флаконы объемом 250,0 мл, по (50±1,0) мл. Закрывают ватно-марлевыми пробками и бумагой Крафт, закрепляют резиновыми кольцами, стерилизуют при температуре 121°С в течение 20 минут. После стерилизации и охлаждения до температуры 56°С в каждый флакон стерильно вносят по 5,0 мл нормальной лошадиной сыворотки, затем скашивают.To prepare a dense nutrient medium, mix dry enzymatic peptone - 20.0 g; yeast extract - 20.0 g; sodium chloride - 5.0 g; add enzymatic hydrolyzate of chlorophytum of crested leaves (FGHL) - 89.4 ml, microbiological agar - 11.0 g; sodium metabisulfite - 0.5 g; distilled water - up to 1 liter. Heat to a boil and boil for two minutes until the agar is completely melted. The pH is adjusted with a solution of hydrochloric acid (1: 1) to 7.2 ± 0.1, filtered through a cotton-gauze filter, glucose is added - 1.0 g; glycerin - 2.0 ml; vitamin B1 - 0.5 g, stir thoroughly, then poured into graduated glass vials with a volume of 250.0 ml, (50 ± 1.0) ml each. Close with cotton-gauze plugs and Kraft paper, secure with rubber rings, sterilize at 121 ° C for 20 minutes. After sterilization and cooling to a temperature of 56 ° C, 5.0 ml of normal horse serum is sterilely added to each vial, then mowed.
Эффективность полученной среды оценивают в соответствии с методическими указаниями МУК «Контроль диагностических питательных сред по биологическим показателям для возбудителей чумы, холеры, сибирской язвы, туляремии, бруцеллеза, легионеллеза», Москва, 2008 г., с использованием среды сравнения - агара без добавления нормальной лошадиной сыворотки. В качестве испытуемых культур используют тест-штаммы бруцелл В. melitensis Rev 1 и В. abortus 19 ВА. Испытуемые культуры бруцелл предварительно выращивают на скошенном агаре Альбими, рН (7,3±0,1), при температуре 37°С в течение 48 ч. Затем культуры смывают с поверхности агара 0,9%-ным раствором натрия хлорида, доводят концентрацию микробной взвеси до 10 единиц по оптическому стандарту мутности ОСО 42-28-85П ФГБУ НЦЭСМП МЗ России, эквивалентную 1,0×109 м.к./мл. Разводят взвесь до концентрации в 1 мл 500 млн. м.к. (1:1), из данного разведения высевают по 1,0 мл в 3 флакона (матраца). Посевная доза тест-штаммов В. melitensis Rev 1 и В. abortus 19 ВА на каждый мл среды составляет 10 млн м.к. Покачиванием распределяют взвесь по поверхности питательной среды, оставляют на специально смонтированных подставках в скошенном состоянии для впитывания, после чего помещают в термостат. Выращивают в течение (48±2) ч при (37±1)°С.The effectiveness of the resulting medium is assessed in accordance with the methodological guidelines of the MUK "Control of diagnostic nutrient media for biological indicators for causative agents of plague, cholera, anthrax, tularemia, brucellosis, legionellosis", Moscow, 2008, using a reference medium - agar without adding normal horse serum. The test strains of brucella B. melitensis Rev 1 and B. abortus 19 BA were used as test cultures. The test cultures of brucella are preliminarily grown on slant Albimi agar, pH (7.3 ± 0.1), at a temperature of 37 ° C for 48 hours. Then the cultures are washed off the agar surface with 0.9% sodium chloride solution, suspensions up to 10 units according to the optical turbidity standard OSO 42-28-85P FGBU NTsESMP MH of Russia, equivalent to 1.0 × 10 9 m.c. / ml. The suspension is diluted to a concentration of 1 ml of 500 million mc. (1: 1), from this dilution, 1.0 ml is sown in 3 vials (mattress). The inoculation dose of the test strains B. melitensis Rev 1 and B. abortus 19 VA for each ml of medium is 10 million m.k. By shaking, the suspension is distributed over the surface of the nutrient medium, left on specially mounted supports in a canted state for absorption, and then placed in a thermostat. Grow for (48 ± 2) h at (37 ± 1) ° C.
Учет результатов проводят через (48±2) ч. Производят смыв выращенной культуры 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлористого из каждого флакона (матраца) путем отбора выращенной биомассы в градуированную пробирку объемом 25 мл стерильной бактериологической пипеткой объемом 5 мл и устанавливают концентрацию микробов в 1 мл суспензии по ОСО мутности.The results are recorded after (48 ± 2) hours. The cultured culture is washed off with 5 ml of 0.9% sodium chloride solution from each bottle (mattress) by taking the grown biomass into a 25 ml graduated tube with a sterile bacteriological pipette with a volume of 5 ml and set concentration of microbes in 1 ml of suspension according to the TOC of turbidity.
Оценку количества выращенной биомассы бруцелл осуществляют отдельно для каждого штамма путем визуального осмотра, смыва ее и определения млрд м.к. с 1 мл питательной среды.Estimation of the amount of grown brucella biomass is carried out separately for each strain by visual inspection, washing it off and determining billion m.c. with 1 ml of culture medium.
Пример 1Example 1
Культуры бруцелл В. melitensis Rev I и В. abortus 19 ВА выращивали на питательной среде плотной для выращивания биомассы, содержащей следующие ингредиенты: пептон сухой ферментативный - 18,0 г; дрожжевой эстракт - 18,0 г; натрий хлористый - 4,0 г; ферментативный гидролизат хлорофитума (ФГХЛ) - 79,4 мл; агар микробиологический - 10,0 г; глюкозу - 0,8 г; натрия метабисульфит - 0,4 г; глицерин - 0,8 мл; витамин B1 - 3 мг; нормальную лошадиную сыворотку - 5,0 мл на 50,0 мл питательной среды; дистиллированную юлу - до 1 л.Cultures of brucella B. melitensis Rev I and B. abortus 19 VA were grown on a dense nutrient medium for growing biomass containing the following ingredients: dry enzymatic peptone - 18.0 g; yeast extract - 18.0 g; sodium chloride - 4.0 g; chlorophytum enzymatic hydrolyzate (FHHL) - 79.4 ml; microbiological agar - 10.0 g; glucose - 0.8 g; sodium metabisulfite - 0.4 g; glycerin - 0.8 ml; vitamin B 1 - 3 mg; normal horse serum - 5.0 ml per 50.0 ml of culture medium; distilled whirligig - up to 1 liter.
При таком соотношении ингредиентов в испытуемой среде при выращивании бруцелл сбор биомассы через 48 ч составил для В. melitensis Rev 1-50 млрд м.к., для В. abortus 19 ВА - 56 млрд м.к., соответственно. На контрольной питательной среде, приготовленной на ферментативном гидролизате хлорофитума, листьев (ФГХЛ), но без добавления нормальной лошадиной сыворотки, сбор биомассы при выращивании биомассы бруцелл составил для В. melitensis Rev I - 51 млрд м.к., для В. abortus 19 ВА - 57 млрд м.к.With such a ratio of ingredients in the test medium during the cultivation of brucella, the biomass harvest after 48 h was 50 billion mc for B. melitensis Rev and 56 billion mc for B. abortus 19 VA, respectively. On a control nutrient medium prepared on an enzymatic hydrolyzate of chlorophytum leaves (FHHL), but without the addition of normal horse serum, the biomass collection during the cultivation of Brucella biomass was 51 billion m.c. for B. melitensis Rev I, and 19 VA for B. abortus - 57 billion m.c.
Пример 2Example 2
Культуры бруцелл В. melitensis Rev I и В. abortus 19 ВА выращивали на питательной среде плотной для выращивания биомассы, содержащей следующие ингредиенты: пептон сухой ферментативный - 20,0 г; дрожжевой эстракт - 20,0 г; натрий хлористый - 5,0 г; ферментативный гидролизат хлорофитума (ФГХЛ) - 89,4 мл; агар микробиологический - 11,0 г; глюкозу - 1,0 г; натрия метабисульфит - 0,5 г; глицерин - 1,0 мл; витамин B1 - 0,5 мг; нормальную лошадиную сыворотку - 5,0 мл на 50,0 мл питательной среды; дистиллированную воду - до 1 л.Cultures of brucella B. melitensis Rev I and B. abortus 19 VA were grown on a dense nutrient medium for growing biomass containing the following ingredients: dry enzymatic peptone - 20.0 g; yeast extract - 20.0 g; sodium chloride - 5.0 g; chlorophytum enzymatic hydrolyzate (FHHL) - 89.4 ml; microbiological agar - 11.0 g; glucose - 1.0 g; sodium metabisulfite - 0.5 g; glycerin - 1.0 ml; vitamin B 1 - 0.5 mg; normal horse serum - 5.0 ml per 50.0 ml of culture medium; distilled water - up to 1 liter.
При таком соотношении ингредиентов в испытуемой среде при выращивании бруцелл сбор биомассы через 48 ч составил для В. melitensis Rev 1-75 млрд м.к., для В. abortus 19 ВА - 85 млрд м.к., соответственно. На контрольной питательной среде, приготовленной на ферментативном гидролизате хлорофитума, листьев (ФГХЛ), но без добавления нормальной лошадиной сыворотки, сбор биомассы при выращивании биомассы бруцелл составил для В. melitensis Rev 1-60 млрд м.к., для В. abortus 19 ВА - 65 млрд м.к.With such a ratio of ingredients in the test medium during the cultivation of brucella, the biomass collection after 48 hours was 75 billion mc for B. melitensis Rev 1 and 85 billion mc for B. abortus 19 VA, respectively. On a control nutrient medium prepared on an enzymatic hydrolyzate of chlorophytum leaves (FHHL), but without the addition of normal horse serum, the biomass harvest during the cultivation of Brucella biomass was 1-60 billion m.c for B. melitensis Rev, and 19 VA for B. abortus - 65 billion m.k.
Пример 3Example 3
Культуры бруцелл В. melitensis Rev I и В. abortus 19 ВА выращивали на питательной среде плотной для выращивания биомассы, содержащей следующие ингредиенты: пептон сухой ферментативный - 22,0 г; дрожжевой эстракт - 22,0 г; натрий хлористый - 6,0 г; ферментативный гидролизат хлорофитума, листьев (ФГХЛ) - 99,4 мл; агар микробиологический - 12,0 г; глюкозу - 1,2 г; натрия метабисульфит - 0,6 г; глицерин - 1,2 мл; витамин B1 - 0,6 мг; нормальную лошадиную сыворотку - 5,0 мл на 50,0 мл питательной среды; дистиллированную воду - до 1 л.Cultures of brucella B. melitensis Rev I and B. abortus 19 VA were grown on a dense nutrient medium for growing biomass containing the following ingredients: dry enzymatic peptone - 22.0 g; yeast extract - 22.0 g; sodium chloride - 6.0 g; enzymatic hydrolyzate of chlorophytum, leaves (FGHL) - 99.4 ml; microbiological agar - 12.0 g; glucose - 1.2 g; sodium metabisulfite - 0.6 g; glycerin - 1.2 ml; vitamin B 1 - 0.6 mg; normal horse serum - 5.0 ml per 50.0 ml of culture medium; distilled water - up to 1 liter.
При таком соотношении ингредиентов в испытуемой среде при выращивании бруцелл сбор биомассы через 48 ч составил для В. melitensis Rev 1-55 млрд м.к., для В. abortus 19 ВА - 53 млрд м.к., соответственно. На контрольной питательной среде, приготовленной на ферментативном гидролизате хлорофитума, листьев (ФГХЛ), но без добавления нормальной лошадиной сыворотки, сбор биомассы при выращивании биомассы бруцелл составил для В. melitensis Rev I - 52 млрд м.к., для В. abortus 19 ВА - 51 млрд м.к.With such a ratio of ingredients in the test medium during the cultivation of brucella, the biomass collection after 48 h was 55 billion mc for B. melitensis Rev 1 and 53 billion mc for B. abortus 19 VA, respectively. On a control nutrient medium prepared on an enzymatic hydrolyzate of chlorophytum leaves (FHHL), but without the addition of normal horse serum, the biomass collection during the cultivation of Brucella biomass was 52 billion m.c. for B. melitensis Rev I, and 19 VA for B. abortus - 51 billion m.k.
Таким образом, питательная среда плотная для выращивания биомассы бруцелл, содержащая ферментативный гидролизат хлорофитума, листьев (ФГХЛ) обеспечивает высокий накопительный эффект для испытуемых тест-штаммов В. melitensis Rev 1 и В. abortus 19 ВА через 48 ч.Thus, a dense nutrient medium for growing brucella biomass containing enzymatic hydrolyzate of chlorophytum leaves (FHHL) provides a high cumulative effect for the tested test strains B. melitensis Rev 1 and B. abortus 19 VA after 48 h.
Claims (2)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020131237A RU2756601C1 (en) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2020131237A RU2756601C1 (en) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2756601C1 true RU2756601C1 (en) | 2021-10-04 |
Family
ID=78000096
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020131237A RU2756601C1 (en) | 2020-09-21 | 2020-09-21 | Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2756601C1 (en) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2681285C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-03-05 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation |
-
2020
- 2020-09-21 RU RU2020131237A patent/RU2756601C1/en active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2681285C1 (en) * | 2017-12-04 | 2019-03-05 | Федеральное казённое учреждение здравоохранения "Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека" | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| FARELL I.D. The development of a new selective medium for the isolation of Brucella abortus from contaminated sources. Res. Vet. Sci. 1974; 16(3):280-6. DOI: 10.1016/S0034-5288(18)33726-3. * |
| КОВТУН Ю.С., и др., Питательные среды для диагностики бруцеллеза, Проблемы особо опасных инфекции, N4, 2019, с.17-25. * |
| КОВТУН Ю.С., и др., Питательные среды для диагностики бруцеллеза, Проблемы особо опасных инфекции, N4, 2019, с.17-25. FARELL I.D. The development of a new selective medium for the isolation of Brucella abortus from contaminated sources. Res. Vet. Sci. 1974; 16(3):280-6. DOI: 10.1016/S0034-5288(18)33726-3. * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2433170C1 (en) | Nutrient liquid medium for culturing plague microbe of vaccine strain eb | |
| AU2017271491A1 (en) | Composition and methods for microbiota therapy | |
| RU2412240C1 (en) | Culture medium for growing legionella | |
| RU2580028C1 (en) | Heavy nutrient medium for the cultivation of brucella | |
| RU2626568C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of plague microbe of ypestis ev vaccine strain | |
| RU2756601C1 (en) | Enriched solid nutrient medium for cultivating brucella biomass | |
| RU2441907C1 (en) | Method for preparation of therapeutic product out of living microbial strains of lactic bacteria and bifidus bacteria lb-complex l | |
| RU2681285C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of brucella neotomae species cultivation | |
| CN102676407A (en) | Microzyme for degrading residual lincomycin in fermented leaves and application thereof | |
| RU2728379C1 (en) | Nutrient medium dense for brucella cultivation | |
| RU2518304C2 (en) | TWO-PHASE NUTRITIONAL MEDIUM FOR THIN LAYER CULTIVATION OF Helicobacter pylori AND METHOD OF ITS REALISATION | |
| RU2702174C1 (en) | Dense nutrient medium for cultivation and collection of biomass of vaccine strain of plague microbe yersinia pestis ev | |
| KR20090085202A (en) | Culture or transport media for campylobacter strain | |
| WO2022204759A1 (en) | Single vessel multi-zone bioreactor for simultaneous culture of multiple microbial strains | |
| RU2460774C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2680702C1 (en) | Nutritional environment for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 | |
| RU2745504C1 (en) | Liquid nutritional medium for cultivation and discharge of biomass of vaccine strain of plague microbe (yersinia pestis ev) | |
| RU2410424C1 (en) | Culture medium for growing microorganism | |
| RU2764139C1 (en) | Dense nutrient medium with kombucha hydrolysate, stimulating the accumulation of bacterial mass of brucella | |
| RU2425871C1 (en) | Nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2247775C1 (en) | Liquid nutrient transporting medium for collection, culturing and transportation of patient blood with suspicion for brucellosis | |
| KR20210100153A (en) | Bacterial growth in non-animal media | |
| RU2725733C1 (en) | Transport liquid nutrient medium for maintaining the viability of the brucellous microbe | |
| RU2460768C1 (en) | Solid nutrient medium for legionella cultivation | |
| RU2722071C1 (en) | Nutrient medium for cultivation of bacillus subtilis vkpm b-12079 |