RU2316349C2 - Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами - Google Patents

Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами Download PDF

Info

Publication number
RU2316349C2
RU2316349C2 RU2003134705/14A RU2003134705A RU2316349C2 RU 2316349 C2 RU2316349 C2 RU 2316349C2 RU 2003134705/14 A RU2003134705/14 A RU 2003134705/14A RU 2003134705 A RU2003134705 A RU 2003134705A RU 2316349 C2 RU2316349 C2 RU 2316349C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
group
macrophages
folate
pharmaceutical composition
activated macrophages
Prior art date
Application number
RU2003134705/14A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2003134705A (ru
Inventor
Филип Стюарт ЛОУ (US)
Филип Стюарт ЛОУ
Мэри Джо ТЕРК (US)
Мэри Джо ТЕРК
Original Assignee
Пердью Рисерч Фаундейшн
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Пердью Рисерч Фаундейшн filed Critical Пердью Рисерч Фаундейшн
Publication of RU2003134705A publication Critical patent/RU2003134705A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2316349C2 publication Critical patent/RU2316349C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/0474—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group
    • A61K51/0482—Organic compounds complexes or complex-forming compounds, i.e. wherein a radioactive metal (e.g. 111In3+) is complexed or chelated by, e.g. a N2S2, N3S, NS3, N4 chelating group chelates from cyclic ligands, e.g. DOTA
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/646—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent the entire peptide or protein drug conjugate elicits an immune response, e.g. conjugate vaccines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1027—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against receptors, cell-surface antigens or cell-surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине, лечению патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами. Предложены фармацевтическая композиция, содержащая конъюгат или комплекс общей формулы Аb-X, и ее применение при получении композиции для лечения пациента с болезненным состоянием, опосредованным активированными макрофагами. При этом группа Аb содержит лиганд, способный связываться с рецептором витамина, а группа Х содержит иммуноген, цитотоксин или соединение, способное понижать функцию макрофагов. Патологическое состояние, опосредованное активированными макрофагами, выбирают из группы, состоящей из ревматоидного артрита, язвенного колита, болезни Крона, воспаления, инфекций, остеомиелита, атеросклероза, отторжения трансплантата органа, пневмосклероза, саркоидоза, склеродермии. Изобретение позволяет связывать указанный комплекс или конъюгат с активированными макрофагами, подвергать его эндоцитозу и интернализации, что обеспечивает подавление специфической функции, непосредственный лизис активированных макрофагов, переориентацию иммунного ответа пациента на активированные макрофаги. 2 н. и 24 з.п. ф-лы, 15 ил.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Изобретение относится к способам лечения и мониторинга патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами. Конкретнее, лиганды, которые связываются с активированными макрофагами, образуют комплексное соединение с визуализирующим агентом или иммуногеном, цитотоксином или агентом для изменения функции макрофагов для введения больному хозяину с целью диагностики и/или лечения заболеваний, опосредованных макрофагами.
Описание уровня техники и краткое изложение сущности изобретения
Иммунная система млекопитающих обеспечивает средство для распознавания и уничтожения инородных болезнетворных организмов. Хотя иммунная система в норме обеспечивает линию защиты против инородных болезнетворных организмов, существует множество случаев, когда иммунный ответ как таковой участвует в прогрессировании заболевания. Примерами заболеваний, вызванных или усугубленных собственным иммунным ответом хозяина, являются аутоиммунные заболевания, такие как рассеянный склероз, системная красная волчанка, псориаз, пневмосклероз и ревматоидный артрит, и заболевания, при которых иммунный ответ принимает участие в патогенезе, такие как атеросклероз, воспалительные заболевания, остеомиелит, язвенный колит, болезнь Крона и реакция «трансплантат против хозяина», приводящая к отторжению трансплантата органа.
Макрофаги в целом представляют собой первые клетки, которые встречаются с инородными болезнетворными организмами, и, соответственно, они играют важную роль в иммунном ответе. Однако в некоторых случаях активированные макрофаги могут вносить вклад в патофизиологию заболевания. Активированные макрофаги неспецифично поглощают и уничтожают инородные болезнетворные организмы внутри макрофагов в результате гидролитической и окислительной атаки, приводящей к распаду болезнетворного организма. Пептиды из распавшихся белков проявляются на клеточной поверхности макрофагов, где их могут распознать Т-клетки, и они могут непосредственно взаимодействовать с антителами на поверхности В-клеток, приводя к активации Т- и В-клеток и к дальнейшей стимуляции иммунного ответа.
Ревматоидный артрит (РА) представляет собой системное заболевание, характеризующееся хроническим воспалительным синовитом, обычно охватывающим периферические суставы. Синовиальное воспаление вызывает разрушение хряща и эрозию кости с последующим разрушением целостности сустава. Ревматоидные факторы, которые представляют собой аутоантитела, реагирующие с Fc-областью IgG, обнаруживаются у более чем двух третей пациентов с РА, указывая на то, что РА имеет аутоиммунный компонент.
РА выявляется во всем мире в количестве, достигающем 2% населения, причем у 80% пациентов с РА заболевание развивается в возрасте от 35 до 50 лет.Клинические проявления РА связаны с болью, отеком и болезненностью при пальпации в суставах, приводящими к ограничению в движениях, слабости, усталости и потере массы тела. РА представляет собой системное заболевание и, следовательно, имеет внесуставные проявления, особенно у пациентов с высокими титрами ревматоидных факторов. Указанные симптомы включают в себя ревматоидные узелки с внутренней зоной некротического материала, средней зоной макрофагов и наружной зоной гранулированной ткани, мышечную атрофию, остеопороз, пневмосклероз и ревматоидный васкулит, который может привести к изъязвлению кожи, гангрене пальцев или нервно-сосудистому заболеванию.
Ревматодиный синовит, характерный для РА, приводит к увеличению количества синовиальных выстилающих клеток, гиперплазии и гипертрофии синовиальных выстилающих клеток, микрососудистому повреждению, отеку и инфильтрации клетками, такими как Т-клетки, макрофаги и дендритные клетки. Ревматоидная синовиальная оболочка характеризуется присутствием секретируемых продуктов иммунных клеток, таких как факторы, секретируемые Т-лимфоцитами, включая IL-2, IFN-δ, IL-6, IL-10, GM-CSF и TGFα и β, и факторы, секретируемые активированными макрофагами, включая IL-1, IL-6, IL-8, IL-10, GM-CSF, CSF макрофагов и TGFβ. Оказывается, что продукция указанных цитокинов ответственна за большое число патологических изменений при РА, включая воспаление синовиальной оболочки, пролиферацию синовиальных клеток, разрушение хряща и кости и системные симптомы заболевания.
РА можно лечить с использованием различных способов, включая физиотерапию, покой и наложение шины. Терапевтические средства также применяют для лечения РА, и они включают в себя аспирин и нестероидные противовоспалительные препараты для борьбы с местным воспалением. Однако указанные средства оказывают минимальный эффект на прогрессирование заболевания и связаны с токсическими побочными эффектами. Модифицирующие заболевание антиревматические препараты, такие как α-пеницилламин и сульфасалазин, также применяют для лечения РА, но польза от этих препаратов отсрочена на недели или месяцы, и указанные препараты оказывают токсические побочные эффекты. Иммуносупрессивные и цитотоксические препараты подавляют симптомы РА у некоторых пациентов, но связаны с токсичностью. Применяли также внутрисуставное введение глюкокортикоидов, но они обеспечивают лишь преходящее облегчение. Соответственно, существует потребность в разработке новых способов лечения при сниженной токсичности, которые эффективны при лечении РА и других заболеваний, вызываемых или усугубляемых активированными макрофагами.
Фолатный рецептор (FR) представляет собой белок массой 38 кД, прикрепленный к глюкозофосфатизомеразе (GPI), который с высоким сродством (<1 нмоль) связывается с витамином - фолиевой кислотой. После связывания с рецептором быстрый эндоцитоз доставляет витамин в клетку, где он разгружается в эндосомальном отсеке при низком рН. Важно, что ковалентное соединение мелких молекул, белков и даже липосом с фолиевой кислотой не изменяет способность витамина конъюгировать с фолатным рецептором, и поэтому конъюгаты фолат-препарат могут легко входить в клетки путем эндоцитоза, опосредованного рецептором.
Ввиду того, что большинство клеток использует несвязанный восстановленный носитель фолата (RFC) для получения необходимой фолиевой кислоты, экспрессия фолатного рецептора ограничена несколькими типами клеток. За исключением почек и плаценты нормальные ткани экспрессируют низкие или не выявляемые уровни RF. Однако многие злокачественные ткани, включая раковые опухоли яичников, молочных желез, бронхов и головного мозга, экспрессируют значимо повышенные уровни рецептора. Действительно, по оценкам, 95% всех карцином яичников избыточно экспрессируют фолатный рецептор. Недавно сообщалось, что FRβ, неэпителиальная изоформа фолатного рецептора, экспрессируется на активированных (но не покоящихся) синовиальных макрофагах. Таким образом, авторы предприняли попытку использовать связанные с фолатом соединения, потенциально способные изменить функцию активированных макрофагов, для лечения опосредованных макрофагами патологических состояний. Например, они обнаружили, что связанные с фолатом иммуногены можно применять для переориентации иммунного ответа хозяина у животных с артритом на активированные макрофаги на участке воспаления с целью истощения запаса макрофагов и уменьшения артритного воспаления.
Агенты для сцинтиграфической визуализации в миллион раз чувствительнее, чем контрастные агенты для магнитно-резонансной визуализации (MRI), и их избирательность можно усилить их нацеливанием на клеточные маркеры, специфичные для поражения. Действительно, радиоизотоп 99mTc можно доставить к артритным тканям с использованием неспецифичного IgG, антител против CD4, лигандов CD11b/CD14-гликолипопептида и пептидов, связывающих Е-селектин. Предклинические исследования с такими радиовизуализирующими агентами ясно продемонстрировали ценность визуализации артритных тканей in vivo, однако избирательность современных визуализирующих агентов еще не оптимальна, и ни одно из настоящих соединений не нацелено исключительно на активированные макрофаги. Имея в виду возникновение активности фолатных рецепторов во время активации макрофагов, заявители предприняли усилия для определения того, можно ли нацеленные на фолат визуализирующие агенты, меченные 99mTc, применять для визуализации артритных поражений in vivo.
Для определения того, можно ли указанный FR с высоким сродством использовать для избирательного нацеливания препаратов на активированные макрофаги на участках воспаления, фолиевую кислоту конъюгировали с соединением, образующим хелат с 99mTc, и его распределение оценивали и в здоровых, и в патологических тканях крыс с артритом, вызванным адъювантом. Было действительно обнаружено, что связанный с фолатом комплекс 99mTc-хелат, названный ЕС20, концентрируется в конечностях больных крыс, пораженных артритом, но не в суставах здоровых крыс. Было обнаружено, что интенсивность гамма-сцинтиграфических изображений пораженных тканей в значительной степени уменьшается в присутствии избытка конкурирующей фолиевой кислоты. Кроме того, печень и селезенка животных с артритом также проявили усиленный захват ЕС20 и возросшие уровни FR, подтверждая то, что системная активация макрофагов сопровождает артрит, вызванный адъювантом. Истощение запаса макрофагов у животных с артритом снижало содержание FR в ткани и одновременно устраняло захват ЕС20. Кроме того, купферовские клетки, выделенные у крыс с артритом, вызванным адъювантом, проявляли значимо более высокую способность связывания с фолатными конъюгатами, чем купферовские клетки, полученные у здоровых крыс. Таким образом, авторы обнаружили, что ЕС20 можно использовать для оценки участия активированных макрофагов при воспалительных патологических состояниях, таких как ревматоидный артрит.
Настоящее изобретение направлено на способ лечения и мониторинга патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами. В соответствии с одним вариантом реализации настоящего изобретения патологические состояния, опосредованные активированными макрофагами, лечат путем переориентации иммунных ответов хозяина на активированные макрофаги или изменения функции активированных макрофагов, или же непосредственным лизисом активированных макрофагов. В одном аспекте изобретения для содействия уничтожению активированных макрофагов лиганды, которые специфично связываются с активированными макрофагами, конъюгируют с иммуногеном для переориентации иммунных ответов хозяина на популяцию активированных макрофагов или их конъюгируют с цитотоксином для непосредственного лизиса макрофагов. Лиганды, которые можно применять в конъюгатах настоящего изобретения, включают в себя лиганды, которые связываются с рецепторами, специфично экспрессируемыми на активированных макрофагах, такими как фолатный рецептор, или лиганды, такие как моноклональные антитела, направленные на маркеры клеточной поверхности, специфично экспрессируемые на активированных макрофагах. В другом аспекте изобретения лиганды, которые специфично связываются с активированными макрофагами, конъюгируют с визуализирующим агентом, конъюгат вводят пациенту для диагностики и мониторинга прогрессирования заболеваний, опосредованных активированными макрофагами.
В одном варианте реализации предоставлен способ лечения или мониторинга/диагностики патологического состояния, опосредованного активированными макрофагами. Способ подразумевает этап введения пациенту, страдающему патологическим состоянием, опосредованным активированными макрофагами, эффективного количества композиции, содержащей конъюгат или комплекс общей формулы Ab-X, где группа Ab включает в себя лиганд, способный связываться с активированными макрофагами, и когда конъюгат используется для лечения патологического состояния, группа Х включает в себя иммуноген, цитотоксин или соединение, способное изменить функцию макрофага, а когда конъюгат используется для мониторинга/ диагностики патологического состояния, Х включает в себя визуализирующий агент.
Подробное описание изобретения
В соответствии с настоящим изобретением представлены способы лечения или мониторинга/диагностики патологического состояния, опосредованного активированными макрофагами. Примерами заболеваний, которые, как известно, опосредуются активированными макрофагами, являются ревматоидный артрит, язвенный колит, болезнь Крона, псориаз, остеомиелит, рассеянный склероз, атеросклероз, пневмосклероз, саркоидоз, склеродермия, отторжение трансплантата органа (GVHD) и хроническое воспаление. Мониторинг таких патологических состояний можно осуществить сначала путем введения пациенту, страдающему таким заболеванием, эффективного количества композиции, содержащей конъюгат общей формулы Ab-X, в которой группа Ab включает в себя лиганд, способный связываться с активированными макрофагами, а группа Х включает в себя визуализирующий агент, а затем путем сканирования пациента визуализирующим устройством, способным выявить визуализирующий агент. Патологические состояния, опосредованные макрофагами, можно лечить в соответствии с данным изобретением путем введения эффективного количества композиции указанной выше формулы, в которой Ab включает в себя лиганд, способный связываться с активированным макрофагом, а группа Х включает в себя иммуноген, цитотоксин или соединение, способное изменить функцию макрофага. Такие конъюгаты, нацеленные на макрофаг, при введении пациенту, страдающему патологическим состоянием, опосредованным макрофагами, работают для концентрации и ассоциации конъюгированного цитотоксина, иммуногена или цитокина с популяцией активированных макрофагов для лизиса активированных макрофагов или изменения функции макрофагов. Уничтожение или дезактивация популяции активированных макрофагов направлено на прекращение или уменьшение патогенеза, опосредованного активированными макрофагами, характерного для подвергаемого лечению патологического состояния. Конъюгат обычно вводят парентерально в виде композиции, включающей в себя конъюгат и его фармацевтически приемлемый носитель. Введение конъюгата обычно продолжают до тех пор, пока не уменьшатся или не устранятся симптомы заболевания.
В одном варианте реализации изобретения мониторинг или диагностику патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами, проводят у пациента путем введения конъюгата Ab-X, в котором Ab включает в себя лиганд, способный связываться с активированными макрофагами, а Х включает в себя визуализирующий агент, а затем путем сканирования пациента визуализирующим устройством, способным выявить локальную концентрацию визуализирующего агента. Визуализирующие или диагностические конъюгаты, подобно указанным выше терапевтическим конъюгатам, обычно вводят в виде диагностической композиции, включающей в себя конъюгат и фармацевтически приемлемый носитель. Композицию обычно составляют для парентерального введения и вводят пациенту в количестве, эффективном для обеспечения возможности визуализации скоплений популяции активированных макрофагов. Природа компонента конъюгата в виде визуализирующего агента определяется методологией визуализации. Так, например визуализирующий агент может включать в себя хелатообразующую составляющую часть и катион металла, например радионуклид или контрастный агент для ядерно-резонансной визуализации, такой как гадолиний. Обычно визуализирующий агент, нацеленный на активированные макрофаги, вводят пациенту, и после периода времени для обеспечения возможности доставки и концентрации визуализирующего агента в клеточной популяции активированных макрофагов пациента подвергают процедуре визуализации, и возможность визуализации обеспечивают нацеленным визуализирующим агентом.
Способ согласно изобретению можно использовать и для различных видов применения и в клинической медицине, и в ветеринарии. Таким образом, животные-хозяева, пораженные заболеванием, опосредованным активированными макрофагами, могут представлять собой человека, или, в случае различных видов применения в ветеринарии, они могут представлять собой лабораторных, сельскохозяйственных, домашних или диких животных. Конъюгаты, вводимые в соответствии со способами данного изобретения, предпочтительно вводят парентерально животному или пациенту, страдающему патологическим состоянием, например внутрикожно, подкожно, внутримышечно, внутрибрюшинно или внутривенно. Альтернативно, конъюгаты можно вводить животному или пациенту другими используемыми в медицине процедурами, и эффективные дозы можно вводить в стандартных лекарственных формах или в формах пролонгированного высвобождения, таких как медленно нагнетающий инфузионный насос. Способ лечения согласно изобретению можно использовать отдельно или в комбинации с другими способами лечения, признанными пригодными для лечения патологических состояний, опосредованных макрофагами.
В конъюгатах лиганда общей формулы Ab-X, в соответствии с настоящим изобретением, группа Ab представляет собой лиганд, способный связываться с активированными макрофагами. Можно использовать любую из широкого числа составляющих частей, связывающихся с макрофагами. Приемлемые лиганды включают в себя, в частности, лиганды, связывающиеся с фолатными рецепторами, и антитела или фрагменты антител, способные распознавать и специфично связываться с поверхностными фрагментами, уникально или предпочтительно экспрессируемыми или присутствующими в/на активированных макрофагах. В одном варианте реализации лиганд, связывающийся с активированными макрофагами, представляет собой фолиевую кислоту, аналог фолиевой кислоты или другие молекулы, связывающиеся с фолатными рецепторами. Активированные макрофаги экспрессируют фолатный рецептор, сцепленный с 38 LD GPI, который с субнаномолярным сродством (т.е. <1 нмоль) связывает фолат и соединения - производные фолата. В другом варианте реализации лиганд, связывающийся с активированными макрофагами, представляет собой специфическое моноклональное или поликлональное антитело или Fab-фрагменты или scFv (т.е. одноцепочечную вариабельную область) антител, способных специфически связываться с активированными макрофагами.
Нацеленные на активированные макрофаги конъюгаты, используемые для диагностики и мониторинга патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами, формируются для нацеливания и, следовательно, концентрирования визуализирующего агента на участке скопления активированных макрофагов у пораженного заболеванием пациента. В таких конъюгатах формулы Ab-X, Ab представляет собой лиганд, способный связываться с активированными макрофагами, а Х включает в себя визуализирующий агент. В одном варианте реализации визуализирующий агент содержит хелатообразующий агент и катион металла, обычно или радионуклид, или усилитель ядерно-магнитно-резонансной визуализации, или контрастный агент, такой как гадолиний. Такие конъюгаты, в которых группа Ab представляет собой фолиевую кислоту, аналоги фолиевой кислоты или другой лиганд, связывающийся с рецептором фолиевой кислоты, подробно описаны в патенте США №5688488, описание которого включено сюда в качестве ссылки. В каждом из указанных патентов, а также родственных патентов США №№5416016 и 5108921, включенных сюда в качестве ссылки, описаны способы и примеры получения конъюгатов хелатов, которые можно использовать в соответствии с настоящим изобретением. Настоящие визуализирующие агенты, нацеленные на макрофаги, можно получить и использовать, следуя общим последовательностям операций, описанным в указанных предшествующих патентах. Однако настоящий способ диагностики основан частично на открытии того, что конъюгаты, нацеленные на фолат, можно использовать для концентрирования конъюгированных визуализирующих агентов в местах скопления популяций активированных макрофагов и внутри их, обеспечивая возможность мониторинга и диагностики патологических состояний, характеризуемых концентрацией активированных макрофагов на участке поражения.
В соответствии с одним вариантом реализации настоящего изобретения предоставляется способ лечения патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами, введением пациенту, страдающему таким патологическим состоянием, эффективного количества композиции, содержащей конъюгат общей формулы Ab-X, в которой Ab представляет собой определенную выше группу, а группа Х включает в себя цитотоксин, иммуноген или соединение, способное изменить функцию макрофага. Иллюстративные цитотоксичекие составляющие, которые можно использовать для формирования конъюгатов для применения в соответствии с настоящим способом, включают в себя клодронат, антракс, экзотоксин Pseudomonas, обычно модифицированные таким образом, чтобы указанные цитотоксические составляющие не связывались с нормальными клетками и другими токсинами или цитотоксическими агентами, включая такие признанные в данной области химиотерапевтические агенты, как адренокортикоиды, алкилирующие агенты, антиандрогены, антиэстрогены, андрогены, эстрогены, антиметаболиты, такие как цитозин арабинозид, аналоги пурина, аналоги пиримидина и метотрексат, бусулфан, карбоплатин, хлорамбуцил, цисплатин и другие соединения платины, тамоксифен, таксол, циклофосфамид, растительные алкалоиды, преднизон, гидроксимочевина, тенипозид и блеомицин, азотистый иприт, нитросоединения мочевины, винкристин, винбластин, воспалительные и провоспалительные агенты и им подобные. Такие токсины или цитотоксические компоненты можно непосредственно конъюгировать с составляющей частью, связывающейся с активированными макрофагами, например фолатом или другими лигандами, связывающимися с фолатными рецепторами, или их можно составить в липосомы, которые сами являются мишенями как конъюгаты агентов, связывающихся с макрофагами, обычно ковалентными связями с составляющими фосфолипидами. Аналогичным образом, когда группа Х содержит соединение, способное изменять функцию макрофагов, например цитокин, такой как IL-10 или IL-11, цитокин может ковалентно связываться непосредственно с нацеливающей составляющей частью Ab, например лигандом, связывающимся с фолатными рецепторами, или антителом или фрагментом антитела, или изменяющий функцию макрофагов цитокин может инкапсулироваться в липосому, которая сама нацелена на активированные макрофаги свисающими нацеленными на макрофаги составляющими частями Ab, ковалентно связанными с одним или более фосфолипидными компонентами липосом.
В другом варианте реализации конъюгаты лиганд-иммуноген можно вводить в комбинации с цитотоксическим соединением. Соединения, перечисленные в предшествующем абзаце, относятся к соединениям, подходящим для указанной цели.
В другом варианте реализации способа лечения настоящего изобретения группа Х в конъюгате Ab-X, нацеленном на активированные макрофаги, включает в себя иммуноген, причем конъюгаты лиганд-иммуноген эффективны в качестве метки для популяции активированных макрофагов, ответственных за патогенез заболевания у пациента, страдающего данным заболеванием, для специфического устранения эндогенным иммунным ответом или совместно введенными антителами. Использование конъюгатов лиганд-иммуноген в способе лечения в соответствии с данным изобретением направлено на усиление опосредованного иммунным ответом устранения популяции активированных макрофагов. Это можно осуществить посредством эндогенного иммунного ответа или пассивного иммунного ответа, осуществляемого совместно вводимыми антителами. Эндогенный иммунный ответ может включать в себя гуморальный ответ, клеточно-опосредованный иммунный ответ и любой другой иммунный ответ, присущий животному-хозяину, включая опосредованный комплементом клеточный лизис, антителозависимую клеточно-опосредованную цитотоксичность (ADCC), опсонизацию антител, ведущую к фагоцитозу, образование рецепторных кластеров после связывания антител, приводящее к передаче сигналов апоптоза, антипролиферацию или дифференцировку и прямое распознавание иммунными клетками доставленного антигена/гаптена. Предусмотрено также, что эндогенный иммунный ответ будет использовать секрецию цитокинов, которые регулируют такие процессы, как размножение и миграция иммунных клеток. Эндогенный иммунный ответ может включать в себя участие таких типов иммунных клеток, как В-клетки, Т-клетки, включая Т-клетки-хелперы и цитотоксические Т-клетки, макрофаги, естественные клетки-киллеры, нейтрофилы, лимфокинактивированные клетки-киллеры (ЛАК) и им подобные.
В другом варианте реализации конъюгат лиганд-иммуноген может быть интернализирован, и иммуноген может быть разрушен и представлен на клеточной поверхности макрофагов иммунными клетками с тем, чтобы вызвать иммунный ответ, направленный против макрофагов, представляющих разрушенный иммуноген.
Гуморальный ответ может представлять собой ответ, вызванный такими процессами, как проводимая по обычной схеме вакцинация или активная иммунизация природным антигеном или неприродным антигеном или гаптеном, например флюоресцеином изотиоцианатом (FITC), причем неприродный антиген вызывает новый иммунитет. Активная иммунизация включает в себя множественные инъекции неприродного антигена или гаптена по схеме вне планируемой схемы обычной вакцинации с тем, чтобы вызвать новый иммунитет. Гуморальный ответ может также быть результатом врожденного иммунитета, когда животное-хозяин имеет природный ранее существующий иммунитет, такой как иммунитет к группам α-галактозила. Альтернативно, пассивный иммунитет можно создать путем введения животному-хозяину антител, таких как природные антитела, взятые из сыворотки, или моноклональные антитела, которые могут представлять или не представлять собой антитела, созданные методами генной инженерии, включая гуманизированные антитела. Использование определенного количества реагента антитела для развития пассивного иммунитета и применение конъюгата лиганд-иммуноген, при котором пассивно введенные антитела направлены на иммуноген, обеспечило бы преимущество стандартного набора реагентов для использования в случаях, когда титр ранее существовавших антител пациента к другим потенциальным антигенам нельзя использовать для лечения. Пассивно введенные антитела можно «совместно вводить» с конъюгатом лиганд-иммуноген, и совместное введение определяется как введение антител во время, предшествующее введению конъюгата лиганд-иммуноген, в одно и то же время с указанным введением или после указанного введения. Предусмотрено, что ранее существовавшие антитела, индуцированные антитела или пассивно введенные антитела будут переориентированы на активированные макрофаги предпочтительным связыванием конъюгатов лиганда-иммуногена с клеточными популяциями активированных макрофагов, и такие патогенные клетки уничтожаются под действием комплемент-опосредованного лизиса, ADCC, антителозависимого фагоцитоза или кластеризации рецепторов антителами. В цитотоксическом процессе могут также участвовать другие типы иммуных ответов, такие как клеточноопосредованный иммунитет, а также вторичные ответы, которые возникают, когда привлеченные представляющие антиген клетки фагоцитируют активированные макрофаги и представляют антигены таких клеток иммунной системе для элиминации других активированных макрофагов, представляющих такие антигены.
Приемлемые иммуногены для использования при получении конъюгатов, применяемых в способе лечения настоящего изобретения, представляют собой иммуногены, которые способны вызвать продукцию антител у животного-хозяина или которые ранее вызвали продукцию антител у животного-хозяина, приводящую к ранее существовавшему иммунитету, или которые составляют часть врожденной иммунной системы. Альтернативно, антитела, направленные против иммуногена, можно вводить животному-хозяину для создания пассивного иммунитета. Подходящие иммуногены для использования в изобретении включают в себя антигены или антигенные пептиды, против которых развился ранее существующий иммунитет посредством проводимых по схеме вакцинаций или предшествующего врожденного контакта с таким агентами, как вирус полиомиелита, антигены столбняка, тифа, краснухи, кори, эпидемического паротита, коклюша, туберкулеза и групп α-галактозила. В таких случаях конъюгаты лиганд-иммуноген будут использоваться для переориентации ранее приобретенного гуморального или клеточного иммунитета на популяцию активированных макрофагов у животного-хозяина для элиминации таких клеток. Другие подходящие иммуногены включают в себя антигены или антигенные пептиды, в отношении которых у животного-хозяина развился новый иммунитет посредством иммунизации против неприродного антигена или гаптена, например флуоресцеина изотиоцианата (FITC) или динитрофенила, и антигенов, против которых существует врожденный иммунитет, например суперантигенов и мурамилдипептида. Предусмотрено также, что пептиды, ограниченные главным комплексом гистосовместимости I (MHC I), могут быть связаны с лигандом для использования в переориентации клеточного иммунитета на макрофаги и в лизисе макрофагов под действием Т-клеток.
Связывающиеся с макрофагами лиганды и иммуногены, цитотоксические агенты, цитокины или визуализирующие агенты, что может иметь место при формировании конъюгатов для использования в соответствии с настоящим изобретением, можно конъюгировать с использованием любого способа формирования комплекса, признанного в данной области. Это может включать в себя ковалентную, ионную или водородную связь лиганда с иммуногеном либо непосредственно, либо косвенно, посредством связывающей группы, такой как двухвалентный линкер. Конъюгат обычно формируется ковалентной связью лиганда с прицельным объектом посредством формирования амидных, сложноэфирных или имино-связей между кислотой, альдегидом, гидрокси, амино или гидразогруппами на соответствующих компонентах комплекса. Альтернативно, как указано выше, комплекс лиганда может представлять собой комплекс, включающий в себя липосому, в котором прицельный объект (то есть, визуализирующий агент или иммуноген, цитотоксический агент или агент, изменяющий функцию макрофагов) содержится внутри липосомы, которая сама ковалентно связана с лигандом, связывающимся с активированными макрофагами.
В одном варианте реализации изобретения лиганд представляет собой фолиевую кислоту, аналог фолиевой кислоты или любую другую молекулу, связывающуюся с фолатными рецепторами, и лиганд фолата конъюгируется с прицельным объектом в результате процедуры, в которой используется трифторуксусный ангидрид для получения γ-сложных эфиров фолиевой кислоты посредством птероилазидного промежуточного соединения. Данная процедура приводит к синтезу лиганда фолата, конъюгированного с прицельным объектом только посредством γ-карбокси-группы групп глутаминовой кислоты фолата. Альтернативно, аналоги фолиевой кислоты можно соединить посредством α-карбокси-фрагмента группы глутаминовой кислоты или групп как α, так и γ-карбоновой кислоты.
Конъюгаты, используемые в соответствии с данным изобретением и имеющие формулу Ab-X, используются в одном аспекте данного изобретения для составления терапевтических или диагностических композиций, включающих в себя эффективные количества конъюгата и его приемлемого носителя. Обычно такие композиции составляют для парентерального применения. Количество конъюгата, эффективное для применения в соответствии с изобретением, зависит от многих параметров, включая природу подвергаемого лечению или диагностике заболевания, молекулярную массу конъюгата, путь его введения и его тканевого распределения и возможность совместного применения других терапевтических или диагностических агентов. Эффективное количество, которое предстоит ввести пациенту, обычно определяется площадью поверхности тела, массой тела пациента и оценкой врачом состояния пациента. Эффективное количество может колебаться в пределах примерно от 1 нг/кг до 1 мг/кг, чаще примерно от 1 до 500 мкг/кг, а наиболее часто - примерно от 1 до 100 мкг/кг.
При использовании для мониторинга или диагностики процедуры визуализации обычно проводят приблизительно через 1-6 ч после введения визуализирующего агента, нацеленного на активированные макрофаги.
Можно использовать любые схемы введения конъюгатов лиганда. Например, конъюгаты лиганда можно вводить в виде однократных доз. Или их можно разделить и ввести по схеме многократного суточного введения. Кроме того, можно применять скользящую схему, например от 1 до 3 д/нед, в качестве альтернативы ежедневному лечению, и с целью уточнения, такую прерывистую или скользящую схему считают эквивалентной ежедневному лечению и входящей в объем притязаний данного изобретения. В одном варианте реализации изобретения пациента лечат множественными инъекциями конъюгата лиганда, в котором прицельный объект представляет собой иммуноген или цитотоксический агент для элиминации популяции патогенных активированных макрофагов. В одном варианте реализации пациента лечат, например, многократными инъекциями конъюгата лиганда через интервалы, например 12-72 ч или через интервалы 48-72 ч. Дополнительные инъекции конъюгата лиганда можно вводить пациенту через интервалы, длящиеся дни и месяцы после первоначальных инъекций, и дополнительные инъекции предотвращают рецидив заболевания. Альтернативно, конъюгаты лиганда можно вводить профилактически для предотвращения возникновения заболевания у пациентов, которые, как известно, предрасположены к развитию патологических состояний, опосредованных активированными макрофагами. В одном варианте реализации можно использовать более чем один тип конъюгата лиганда, например животного-хозяина можно предварительно иммунизировать флуоресцеин-изотиоцианатом и динитрофенилом, а затем лечить флуоресцеин-изотиоцианатом и динитрофенилом, связанными с одними и теми же или другими лигандами, нацеленными на активированные макрофаги, в протоколе совместного введения.
Конъюгаты лиганда вводят в соответствии с данным изобретением парентерально, а чаще - путем внурибрюшинных инъекций, подкожных инъекций, внутримышечных инъекций, внутривенных инъекций или внутриоболочечных инъекций. Конъюгаты лиганда можно также доставлять пациенту с помощью осмотического насоса. Примеры лекарственных форм для парентерального введения включают в себя водные растворы конъюгата, например раствор в изотоническом солевом растворе, 5% глюкозе или других хорошо известных фармацевтически приемлемых жидких носителях, таких как спирты, гликоли, сложные эфиры и амиды. Композиции для парентерального введения для применения в соответствии с данным изобретением могут быть в форме растворимого лиофилизата, содержащего одну или более доз конъюгата лиганда. В другом аспекте изобретения конъюгаты лиганда можно составлять в виде одной из любого количества лекарственных форм пролонгированного высвобождения, известных в данной области, таких, например, как биодеградируемые углеводородные матриксы, описанные в патентах США №№4713249, 5266333 и 5417982, описания которых включены сюда в качестве ссылки.
Пример 1
Материалы
ЕС20 (связанный с фолатом комплекс 99mTc хелата), ЕС28 (такой же комплекс 99mTc хелата без фолата) и фолат-флуоресцеино-изотиоцианат (фолат-FITC) были переданы в дар компанией Endocyte, Inc. (West Lafayette, IN). Подвергнутые термическому лизису Mycoplasma butericum закупали в компании BD Biosciences (Sparks, MD). Фолиевую кислоту, легкое минеральное масло, клодронат, коллагеназу-А и стрептавидин-R-фикоэритрин получали в компании Sigma Chemical Co. (St. Louis, MO), и модифицированную Дульбекко среду Игла (DMEM) получали у Gibco-BRL (Gathersberg, MD). 3Н-фолиевую кислоту получали от American Radiolebeled Chemicals, Inc. (St. Louis, MO), и мембраны Microcon®-30 закупали у компании Millipore Corp. (Bedford, MA). RK-4-биотиновые и ED2-R-фикоэритриновые антитела приобретали, соответственно, у компаний Bachem Biosciences, Inc. (Philadelphia, PA) и Accurate Chemical and Scientific Corp. (Westbury, NY).
Пример 2
Экспериментальная модель артрита
Артрит вызывали у самок крыс линии Lewis (Charles River Laboratories, Inc., Wilmington, MA) с массой тела 150-200 г, n=4/группу дозы. Вкратце, 0,5 мг подвергнутых термическому лизису Mycoplasma butericum, суспендированных в минеральном масле (5 мг/мл), инъецировали в 0 д в стопу левой задней лапы крыс после анестезии кетамином и ксилазином. В процессе прогрессирования заболевания в течение 21 дня животных ежедневно взвешивали для оценки состояния их здоровья. У всех обработанных животных развился артрит, о чем свидетельствовал выраженный отек лапы, в которую производили инъекцию, прогрессирующий отек во всех не инъецированных конечностях вследствие системного прогрессирования артрита и рентгенографического анализа пораженных конечностей. Всех крыс содержали на рационе с дефицитом фолата (DYETS, Inc., Bethlehem, PA) в течение 3 недель перед введением фолата-FITC для снижения уровней фолата в сыворотке до сходных с физиологическими концентраций. Контрольных крыс также содержали на рационе с дефицитом фолата, но у них не вызывали развитие артрита.
Пример 3
Элиминация эндогенных макрофагов
Оценку независимого от макрофагов захвата, связанного с фолатом визуализирующего агента, осуществляли путем лизиса эндогенных макрофагов липосомальным клодронатом. Липосомы формировали регидратацией тонкой пленки яичного фосфатидилхолина (60 мол.%) и холестерина (40 мол.%) в изотоническом растворе клодроната (250 мг/мл). Затем генерировали маленькие однопластинчатые пузырьки путем 10-кратной экструзии липосом через 100 нм поликарбонатную мембрану с использованием 10 мл термоцилиндрического экструдера (Lipex Biomembranes, Vancouver, Canada). Не инкапсулированный клодронат удаляли путем диализа через отсекающую мембрану из ацетата целлюлозы Spectrapor 300000 M1 (Spectrum Laboratories, Rancho Domingues, CA), и концентрацию клодроната в задержанных липосомах определяли, как описано в публикации J. Microencapsul. 3(2) 109-14 (1986). Через 17 дней после индукции артрита и за 3 дня до введения визуализирующего агента (ЕС20) крысы, предназначенные для истощения запасов макрофагов, получали однократную внутрибрюшинную инъекцию липосом клодроната, содержащую 20 мг клодроната.
Пример 4
Сцинтиграфия и анализ биологического распределения
За 12 ч до введения визуализирующего агента все животные получали подкожно 5 мл физиологического солевого раствора для обеспечения надлежащего выделения несвязанного визуализирующего агента. Через 21 день после индукции артрита крысам (n=3 на группу) внутрибрюшинно инъецировали 500 мкКи (2,3 ммоль/крысу) или с ЕС20 (фолат+хелатобразующее соединение), или с ЕС20+500-кратным молярным избытком фолиевой кислоты, или с ЕС28 (без фолатной составляющей части). Через 4 ч крыс подвергали либо ядерной сцинтиграфической визуализации, либо анализу биологического распределения.
Для сцинтиграфии крыс анестезировали кетамином и ксилазином и помещали в положении лежа на животе на поверхность для получения изображения. Получение изображения осуществляли в течение 1 мин при частоте одиночных импульсов 50-75000 импульсов/мин с использованием радиоизотопной гамма-камеры Technicare Omega 500 Sigma 410. После получения изображений всего тела облучение верхней части тела (выше коленных суставов) блокировали с использованием свинцовых пластин размером 1/8 дюйма и получали изображения задних конечностей. Все данные анализировали с использованием компьютера на базе MedasysTM MS-DOS, оборудованного программным обеспечением MedasysTM Pinnacle.
Для анализа биологического распределения крыс повергали эвтаназии с помощью внутрибрюшинной инъекции небутала или пентобарбитала натрия. Затем брали печень, селезенку, сердце, легкие, кишечник и почки, и излучение в каждой ткани определяли подсчетом в гамма-счетчике (Packard BioScience Co., Meridian, CT).
Пример 5
Оценка уровней фолатных рецепторов в тканях
Уровни фолатных рецепторов в каждой ткани определяли следующим образом. Вкратце, ткани гомогенизировали и клеточные мембраны выделяли путем центрифугирования. Мембранные белки солюбилизировали в течение ночи, переносили на фильтровальное устройство Microcon®-30 и инкубировали с 50 нмоль 3Н-фолиевой кислоты. Второй экземпляр каждого образца, использовавшегося для определения неспецифичного связывания, также подвергали воздействию 3Н-фолиевой кислоты, но в присутствии 1000-кратного избытка немеченой фолиевой кислоты. После промывания несвязанной 3Н-фолиевой кислоты через мембрану выделяли мембранный белок со связанной 3Н-фолиевой кислотой и подсчитывали в сцинтилляционной камере (Packard BioScience Co.) для определения количества активных фолатных рецепторов на грамм ткани.
Пример 6
Идентификация типа клеток, экспрессирующих фолатные рецепторы, в печени
Сначала страдающих артритом и здоровых крыс анестезировали кетамином и ксилазином, а затем производили разрез по средней линии, начинающийся в нижней части живота и проходящий через грудную полость. Катетер 24 калибра вводили в печеночную вену, и иглу 24 калибра вводили в левый желудочек сердца в качестве выпускного канала для перфузионной жидкости. Затем крыс перфузировали подачей через катетер физиологического солевого раствора с последующей перфузией раствора коллагеназы А (0,05% в сбалансированном солевом растворе Gey). Каждый раствор перфузировали в течение 2 мин со скоростью 20 мл/мин. Непосредственно после перфузии печень удаляли и отсекали наружную мембранозную ткань. Оставшуюся желатиновую ткань суспендировали в растворе А-коллагеназы (0,025% в DMEM) и инкубировали при 37°С в течение 2 ч в присутствии 1 мкмоль фолата-FITC или 1 мкмоль фолата-FITC+1 ммоль фолиевой кислоты. Затем клетки промывали 3 раза для удаления несвязанного фолата-FITC и немедленно готовили для проточной цитометрии.
Пример 7
Подготовка образца для проточной цитометрии и анализ
Препараты печеночных клеток, которые были подвергнуты контакту с фолатом-FITC, обрабатывали в течение 10 мин при 4°С литическим буфером хлорида аммония (150 ммоль NH4Cl, 10 ммоль KHCO3, 1 ммоль EDTA, рН 7,4) для лизиса эритроцитов. После трех промываний солевым раствором с фосфатным буфером оставшиеся клетки инкубировали в течение 1 ч при 4°С либо с меченным ED2 R-фикоэритрином мышиным антителом против крысиных макрофагов, либо с меченным RK-4 биотином мышиным антителом против крысиных гранулоцитов. Клетки снова промывали 2 раза, и те, которые получили биотинилированное первичное антитело, подвергали дальнейшей инкубации со стрептавидин-R-фикоэритрином в течение 30 мин. После двух конечных промываний клетки исследовали на предмет наличия FITC и двойного цветного окрашивания фикоэритрина в проточном цитометре FACScan Coulter XL.
Пример 8
Опосредованная иммунотерапией защита против артрита, вызванного адъювантом
Использовали последовательность операций, описанных в примере 2, для индукции артрита. Исследовали эффективность конъюгата фолата-FITC (конъюгата фолат-флюоресцеинизотиоцианат) против артрита, вызванного адъювантом у крыс. Каждую крысу, использованную в эксперименте, иммунизировали у основания хвоста FITC-KLH (150 мкг) для индукции антител против FITC на - 38-й и - 10-й день перед введением Mycoplasma butericum (адъювант) для индукции артрита. Иммунизацию FITC-KLH проводили в комбинации с адъювантом (т.е. таким как TiterMax Gold (150 мкг), Alum (150 мкг) или GPI-100 (150 мкг), все из которых представляют собой адъюванты для индукции антител против FITC, в противовес адъюванту, использовавшемуся для индукции артрита). Иммунизированным животным затем инъецировали в 0 д в подушечку левой стопы 0,5 мг подвергнутых термическому лизису Mycoplasma butericum (адъювант) для инициации развития артрита. Затем на 1, 2, 3, 9, 11 и 14 день после инъекции адъюванта (Mycoplasma m butericum) крысам внутрибрюшинно инъецировали либо солевой раствор (контрольные крысы), либо 2000 нмоль/кг фолата-FITC (FF). Штангенциркули использовали для ежедневного измерения левой и правой стопы. На фиг.9 указанные измерения нанесены на график и для стоп после инъекции адъюванта (верхние две кривые), и для не подвергнутых обработке стоп (нижние две кривые). Внезапное увеличение отека стоп после инъекции адъюванта вызвано входящим током нейтрофилов, которые не имеют фолатных рецепторов. Следовательно, иммунотерапия не оказывает воздействия на данную фазу отека лапы. Однако приблизительно через 10 дней активированные макрофаги внедряются и в стопы, подвергнутые инъекции, и в стопы, не подвергнутые инъекции, вызывая разрушение кости и дальнейшее воспаление. Данные активированные макрофаги имеют функциональные фолатные рецепторы, и, как показано, они элиминируются или уменьшаются связыванием фолат-гаптеновых конъюгатов, таких как фолат-FITC.
Пример 9
Нацеленная на фолат визуализация у крыс с артритом
Выполняли последовательности операций, описанные в примерах 2 и 4. Как отмечено выше, активированные макрофаги, в отличие от покоящихся, экспрессируют рецептор витамина фолиевой кислоты. Для определения того, можно ли использовать фолат для нацеливания 99mTc на участки артритного воспаления, ЕС20, связанное с фолатом соединение, образующее хелат с 99mTc (см. фиг.8), вводили внутрибрюшинно крысам (n=5/группу), и сцинтиграфические изображения получали с помощью гамма-камеры. Благодаря быстрому выведению ЕС20 получали отличный контраст по меньшей мере через 4 ч после введения (фиг.1). Важно, что захват всем телом был значимо интенсивнее у крыс с артритом, по сравнению со здоровыми крысами, и указанный захват в значительной степени снижался, когда ЕС20 вводили вместе с насыщающей дозой свободной фолиевой кислоты. Это свидетельствует о том, что захват всеми тканями определяется, в первую очередь, рецептором, специфичным в отношении фолиевой кислоты.
Интенсивный захват ЕС20 органами предотвращал визуализацию конечностей на изображениях всего тела крыс с артритом. Однако изображения задних конечностей можно было легко получить, когда экранировали облучение средней и верхней части тела. При таком экранировании конечности, пораженные артритом, проявляли гораздо больший захват ЕС20, чем здоровые конечности, и указанный захват полностью устранялся в присутствии избытка свободной фолиевой кислоты (фиг.1). Кроме того, в стопе левой задней конечности животных с артритом, где воспаление было наиболее тяжелым, проявлялся больший захват, чем в менее тяжело пораженной стопе правой задней конечности (фиг.1).
По изображениям всего тела можно было сделать вывод, что органы брюшной полости были ответственны за большую часть захвата ЕС20 у животных с артритом. Для подтверждения данной оценки печень, селезенку и почки удаляли и визуализировали отдельно (фиг.2). Печень крыс с артритом продемонстрировала самый высокий захват ЕС20, в то время как печень здоровых крыс проявляла минимальный захват. Можно было визуализировать только селезенку, взятую у крыс с артритом. Свободная фолиевая кислота полностью блокировала захват ЕС20 в печени и селезенке, однако свободный витамин лишь частично уменьшал захват почками.
Пример 10
Воздействия на истощение запаса макрофагов
Выполняли последовательность операций, описанную в примерах 2, 3 и 4, за исключением того, что вводили 0,25 мКи ЕС20. Для определения того, могут ли макрофаги быть ответственны за захват ЕС20, осуществляли системную элиминацию резидентных макрофагов у крыс с артритом с использованием препарата липосомного клодроната (n=3 крысы/группу). Через 4 дня после лечения клодронатом оценка размера подушечек лап выявила, что у крыс, получавших лечение клодронатом, воспаление было значимо меньше, чем у крыс, не получавших лечение (данные не показаны). Для определения того, повлияла ли бы элиминация макрофагов на захват связанного с фолатом визуализирующего агента, затем проводили анализ биологического распределения ЕС20 у крыс, получавших лечение клодронатом, и сравнивали с аналогичным анализом как у здоровых крыс, так и у крыс с артритом, не получавших лечение клодронатом. Как показано на фиг.3 (черные столбики соответствуют крысам с артритом, светло-серые столбики - здоровым крысам, и темно-серые столбики - крысам с артритом после истощения запаса макрофагов лечением клодронатом), истощение запаса макрофагов у крыс с артритом уменьшало захват ЕС20 печенью приблизительно в 20 раз, в то время как удерживание в селезенке и кишечнике уменьшалось в 3 раза. В большинстве тканей лечение клодронатом подавляло захват ЕС20 даже ниже тех уровней, которые наблюдались у здоровых крыс, подтверждая гипотезу о том, что активированные макрофаги определяют большую часть удерживания ЕС20 в здоровых тканях. Напротив, захват ЕС20 почками возрастал у крыс с истощением запаса макрофагов, наиболее вероятно потому, что уменьшенная интернализация ЕС20 активированными макрофагами давала больше ЕС20, доступного для связывания с фолатными рецепторами почек.
Пример 11
Захват ЕС20 в артритных тканях, опосредованный фолатными рецепторами
Выполняли последовательность операций, описанных в примерах 2 и 4. Проводили 2 дополнительных исследования биологического распределения для подтверждения того, что захват ЕС20 тканями крыс с артритом опосредован фолатным рецептором (n=3 крысы/группу). Сначала биологическое распределение ЕС20 исследовали в присутствии (светло-серые столбики) и в отсутствие (черные столбики) 500-кратного избытка свободной фолиевой кислоты. Как видно на фиг.4, почти полное устранение захвата ЕС20 наблюдали во всех тканях, кроме почек, указывающее на то, что связывание действительно было опосредовано фолатным рецептором. Действительно, избыток фолиевой кислоты конкурентно уменьшал удерживание ЕС20 в печени, селезенке, сердце, легких, кишечнике и крови почти до фоновых уровней (фиг.4). Во-вторых, для подтверждения роли фолата в опосредованном ЕС20 нацеливании хелатного 99mTc также исследовали биологическое распределение того же комплекса, лишенного фолатной составляющей (ЕС28) (темно-серые столбики). Как также представлено на фиг.4, захватом ЕС28 можно было пренебречь во всех тканях, за исключением почек, где удерживание не нацеленного комплекса было аналогичным удерживанию ЕС20 в присутствии конкурирующей фолиевой кислоты.
Пример 12
Экспрессия фолатных рецепторов в различных тканях крыс с артритом
Использовали последовательности операций, описанные в примерах 2, 4 и 5. Представленные выше результаты свидетельствуют о том, что фолатный рецептор ответствен за захват тканью ЕС20. Для подтверждения этого заявители предприняли попытку прямого количественного определения связывающего фолат белка в различных тканях крыс. Активный рецептор фолата можно выявить в каждом из основных исследованных органов, и уровни рецептора фолата (FR) были значимо увеличены у крыс с артритом (фиг.5, черные столбики=крысы с артритом; светло-серые столбики=здоровые крысы). Далее, содержание FR хорошо коррелировало с захватом ЕС20, наблюдавшимся в исследованиях биологического распределения. Действительно, анализ FR выявил приблизительно эквивалентные уровни рецептора в печени и селезенке при артрите, в соответствии с аналогичным захватом ЕС20 теми же органами (фиг.4). Существенно, что системная элиминация макрофагов при лечении клодронатом (темно-серые столбики) снижала уровни рецепторов фолата во всех артритных тканях (фиг.5), что также хорошо согласуется с анализом биологического распределения ЕС20. Наконец, анализ FR подтвердил, что ни индукция артрита, ни лечение клодронатом не изменяет уровни FR в почках или сердце, где, как считают, FR не связан с активированными макрофагами.
Пример 13
Экспрессия функционального рецептора фолата на макрофагах печени крыс с артритом
Использовали последовательность операций, описанных в примерах 2, 4, 6 и 7. Для дополнительного подтверждения того, что возросший захват ЕС20 в печени крыс с артритом происходит благодаря популяции макрофагов, печень иссекали у крыс, подвергнутых перфузии коллагеназой, и изолированные клетки печени исследовали для выявления захвата фолатного конъюгата с использованием фолата-FITC в качестве флуоресцентного маркера экспрессии FR. Путем мечения суспензии тех же клеток печени антителом, специфичным для макрофагов печени крыс, можно было продемонстрировать, что макрофаги действительно представляют собой тип клеток, который экспрессирует возросшие уровни фолатного рецептора у животных с артритом (фиг.6). Так, анализ с помощью проточной цитометрии выявил, что 70% макрофагов печени крыс с артритом связывали фолат-FITC, по сравнению лишь с 30% макрофагов печени здоровых крыс (фиг.6). Кроме того, интенсивность FITC макрофагов при артрите была выше, чем таковая макрофагов из печени здоровых крыс. Поскольку связывание фолат-FITC подавлялось в присутствии избытка свободной фолиевой кислоты (1 ммоль), авторы пришли к выводу, что захват фолатного конъюгата макрофагами печени опосредован фолатным рецептором.
С использованием антитела, специфичного для гранулоцитов, авторы также исследовали вопрос, могут ли нейтрофилы, инфильтрирующие ткань, захватывать фолатные конъюгаты. Хотя в печени было обнаружено очень немного нейтрофилов, нейтрофилы, которые были выявлены, не проявляли способность связывания фолат-FITC (данные не показаны). Клетки периферической крови Мас-1+ также тестировали и аналогичным образом обнаружили, что они не обладают сродством связывания в отношении фолатного конъюгата (данные не показаны). Действительно, среди отобранных клеток периферической крови не были выявлены клетки, положительные в отношении флуоресценции FITC, что свидетельствует о том, что только резидентные тканевые макрофаги (и отчетливо только их субпопуляция) экспрессируют FR в печени.
Наконец, для начала исследования того, можно ли нацелить лекарственные препараты, связанные с фолатом, на активированные макрофаги у людей-пациентов, авторы получили разрешение исследовать изображения всего тела 28 пациенток с подозрением на рак яичников, включенных в недавно завершенное клиническое испытание гамма-визуализирующего агента, 111In-DTPA-фолата. Как показано на фиг.7, у одной пациентки проявился значимый захват визуализирующего агента в правом коленном суставе, но не в левом коленном суставе. Важно, что ни у одной другой пациентки не был продемонстрирован никакой измеряемый захват визуализирующего агента в суставе. По просьбе лечащий врач связался с анонимной пациенткой и спросил, испытывала ли она какой-либо хронический дискомфорт в суставе. Врач ответил, что пациентка сообщила о имеющемся у нее артрите правого коленного сустава.
Обсуждение
Считают, что активированные макрофаги тесно вовлечены в патогенез ревматоидного артрита. Активированные макрофаги непосредственно разрушают суставную ткань в результате секреции металлопротеиназ и привлечения/активации других иммунных клеток путем высвобождения цитокинов. Количественная характеристика активированных макрофагов в тканях суставов может иметь диагностическую ценность, поскольку содержание активированных макрофагов хорошо коррелирует с разрушением сустава и неблагоприятным прогнозом заболевания у людей.
Сцинтиграфия в гамма-камере крыс, получавших ЕС20, показала, что артритные отростки действительно освещаются 99mTc, нацеленным на фолат. В противовес этому, лапы и стопы здоровых крыс невозможно было визуализировать, что демонстрирует избирательность визуализирующего агента для применения при артрите. Хотя интенсивность сцинтилляций внутренних органов также возрастала при артрите, вызванном адъювантом, представляется, что помехи со стороны таких тканей не нарушали методологию, поскольку гамма-излучение от внутренних органов можно было легко экранировать. Тот факт, что отличный контраст можно получить в пределах 1-2 ч после инъекции ЕС20, дополнительно показывает, что введение визуализирующего агента, сцинтиграфию в гамма-камере и анализ изображения можно завершить в течение того же исследования.
Системная активация макрофагов была доказана у крыс с артритом, вызванным адъювантом. Таким образом, было важно установить специфическое участие макрофагов в возросшем захвате ЕС20, поскольку нацеленный на фолат визуализирующий агент никогда ранее не исследовали у животных с артритом. 3 эксперимента провели для этой цели. Во-первых, нагруженные клодронатом липосомы использовали для системного истощения запасов макрофагов у крыс, получавших лечение. Произошло не только значительное снижение полученных в результате уровней FR в ткани, но также почти полностью был устранен захват ЕС20 в органах, богатых макрофагами, свидетельствуя о том, что резидентные макрофаги могут быть действительно ответственны и за экспрессию FR, и за задержку ЕС20 в органах ретикуло-эндотелиальной системы (RES). Во-вторых, клетки печени разделяли в результате обработки коллагеназой, и отдельные клетки оценивали в плане наличия захвата фолатного конъюгата. Как отмечено на фиг.6, подавляющее большинство клеток, давших положительный результат тестирования на захват фолатного конъюгата, также сортировались как положительные в отношении наличия маркера макрофагов, ED2, подтверждая то, что FR действительно присутствует в макрофагах. Наконец, ввиду того, что, как известно, содержание иммунных и миелоцитарных клеток возрастает в тканях крыс с артритом, вызванным адъювантом, можно было предположить, что еще один тип экстравазирующих клеток крови может участвовать в захвате ЕС20. Однако ни инфильтрирующие печень гранулоциты, ни какие-либо другие клетки крови в циркуляции не проявляли никакой способности связывать фолат-FITC. Таким образом, по-видимому, активированные макрофаги являются преобладающим типом клеток, интернализирующим фолатные конъюгаты в органах крыс с артритом.
Было удивительно обнаружить, что до 30% макрофагов печени у здоровых крыс также экспрессировали фолатный рецептор (фиг.6). Поскольку функциональный фолатный рецептор не обнаружен на покоящихся синовиальных макрофагах, интересно было предположить, что связывающая фолат-FITC фракция у здоровых крыс может также составлять активированную популяцию. Два наблюдения могут подтвердить указанное предположение. Во-первых, активированные макрофаги также обнаруживаются в здоровых тканях после контакта с иммунными стимуляторами, такими как инородные антигены. Если учесть роль печени в очищении организма от инородных веществ, низкий уровень активации резидентных макрофагов не представляется нецелесообразным. Во-вторых, популяция клеток печени, связывающих фолат-FITC (и ЕС20), значимо увеличилась после индукции локализованного воспаления и системной активации макрофагов.
При установленной в настоящее время способности использовать фолат для доставки прикрепленных молекул, связанные с фолатом визуализирующие агенты обеспечат возможность оценки раннего развития или продолжающегося прогрессирования ревматоидного артрита. Поскольку реакция «трансплантат против хозяина», рассеянный склероз, болезнь Крона, язвенный колит, псориаз, остеомиелит и даже атеросклероз могут быть также вызваны/усугублены активированными макрофагами, возможно, что диагностике/оценке указанных заболеваний может способствовать визуализирующий/контрастный агент, связанный с фолатом. Обильное поглощение фолатного конъюгата активированными макрофагами как в артритных суставах, так и в печени указывает на то, что макрофаги можно эффективно сделать мишенями независимо от их анатомической локализации.
Пример 14
Опосредованная иммунотерапией защита против артрита, вызванного адъювантом
Для анализа, показанного на фиг.10, использовали последовательность операций, описанную в примере 8, за исключением того, что вводили 3000 нмоль/кг фолат-FITC/д (3 дозы в 1-й, 2-й и 3-й день), и фолат-FITC доставляли с использованием осмотического насоса, имплантированного в брюшную полость крысы. Метотрексат (МТХ) вводили в дозе 0,15 мг путем внутрибрюшинной инъекции 1 раз/д на 1-й, 8-й и 15-й день после введения адъюванта. МТХ использовали вместо фолата-FITC для животных, получавших лечение МТХ. Показаны результаты и для левой (при инъекции), и для правой (без инъекции) лапы. Результаты показывают, что фолат-FITC (FF), также как и МТХ, ингибирует артрит, вызванный адъювантом.
Пример 15
Опосредованная иммунотерапией защита против артрита, вызванного адъювантом
Использовали последовательность операций, описанную в примере 14, за исключением того, что измеряли только объем правой лапы, и фолат-FITC (FF) вводили в дозах 3000, 600 и 120 нмоль/кг (фиг.11). FF также вводили в дозе 3000 нмоль/кг или в трех дозах, как в примере 14 (показанных в виде обозначения «3 дозы» на фиг.11), или в 1-й, 2-й, 3-й, 9-й, 11-й и 14-й день, как описано в примере 8 (показанных в виде обозначения «FF3000» на фиг.11). Результаты показывают, что FF ингибирует артрит, вызванный адъювантом, в правой лапе крыс с артритом (воспаление предположительно появляется в не получавшей инъекции правой лапе вследствие системного прогрессирования артрита), и что продолжительное лечение FF более эффективно, чем 3 начальные дозы, для лечения артрита, вызванного адъювантом.
Пример 16
Опосредованная иммунотерапией защита против артрита, вызванного адъювантом
Использовали последовательность операций, описанную в примере 8, за исключением того, что МТХ применяли в дозе 0,15 мг (FF+низкая доза рано вводимого МТХ, поздно вводимого МТХ и поздно вводимые FF и МТХ) для лечения некоторых животных вместо FF (см. фиг.12). Других животных лечили 0,75 мг МТХ (FF+средняя доза) или 1,5 мг МТХ (FF+высокая доза). Для схем лечения «рано вводимого МТХ» инъекцию МТХ производили крысам на 1-й, 8-й и 15-й день после индукции артрита). Для схем лечения «поздно вводимого МТХ» инъекцию МТХ производили крысам на 8-й и 15-й день после введения адъюванта. Все измерения проводили на не получавшей инъекцию правой лапе. Результаты показывают, что фолат-FITC (FF) в комбинации с МТХ (схемы раннего или позднего лечения и низкая, высокая или средняя доза МТХ) ингибирует артрит, вызванный адъювантом, лучше, чем один только FF.
Пример 17
Опосредованная иммунотерапией защита против артрита, вызванного адъювантом
Для результатов, показанных на фиг.13, использовали последовательность операций, описанную в примере 8, за исключением того, что некоторых животных лечили одним только МТХ (0,15 мг) на 1-й, 8-й и 15-й день после инъекции артрита, или лечили МТХ (0,15 мг; на 1-й, 8-й и 15-й день) в комбинации с FF, как описано в примере 14. Результаты показывают, что комбинация FF и МТХ ингибирует артрит, вызванный адъювантом, в большей степени, чем МТХ или FF, по отдельности.
Пример 18
Опосредованная иммунотерапией защита против артрита, вызванного адъювантом
Использовали последовательность операций, описанную в примере 8, за исключением того, что вводили IL-10 (10000 ЕД; FF10) или IL-2 (3 мкг/кг; FF2) наряду со схемами лечения с FF (т.е. цитокины вводили путем внутрибрюшинных инъекций на 1-й, 2-й, 3-й, 9-й, 11-й и 14-й день после введения адъюванта; см. фиг.14). Проводившиеся измерения представляли собой измерения правой, не получавшей инъекцию лапы. Результаты показывают, что или IL-10, или IL-2 предотвращают ингибирование артрита, вызванного адъювантом, в результате лечения FF. Все представленные выше результаты иммунотерапии, взятые вместе, указывают на то, что связанные с фолатом агенты, которые являются цитотоксичными для макрофагов, можно применять для лечения патологических состояний, опосредованных макрофагами.
Пример 19
Нацеленная на фолат визуализация крыс с артритом
Для анализа, показанного на фиг.15, последовательности операций были такими же, как описано в примерах 2 и 4, за исключением того, что некоторых животных лечили FF (2000 нмоль/кг; 1-й, 2-й, 3-й, 9-й, 11-й и 14-й день) или МТХ (0,15 мг; на 1-й, 8-й и 15-й день), как описано соответственно в примерах 8 и 14. Результаты показывают, что FF и МТХ предотвращают захват ЕС20 во всех исследованных органах, за исключением почек. Вероятно, захват ЕС20 снижается в большинстве органов, делая большее количество ЕС20 доступным для экскреции через почки, что объясняет причину увеличения уровня ЕС20, выявленного в тканях почек.

Claims (26)

1. Применение композиции, содержащей конъюгат или комплекс общей формулы Аb-X, при получении композиции для лечения пациента с болезненным состоянием, опосредованным активированными макрофагами, где группа Аb содержит лиганд, способный связываться с рецептором витамина, а группа Х содержит иммуноген, цитотоксин или соединение, способное понижать функцию макрофагов.
2. Применение по п.1, где Аb содержит лиганд, связывающийся с фолатным рецептором.
3. Применение по п.1, где группа Х содержит иммуноген.
4. Применение по п.2, где группа Х содержит иммуноген.
5. Применение по п.1, где группа Х содержит цитотоксин.
6. Применение по п.5, где группа Х дополнительно содержит липосому.
7. Применение по п.2, где группа Х содержит цитотоксин.
8. Применение по п.7, где группа Х дополнительно содержит липосому.
9. Применение по п.1 или 2, где группа Х содержит соединение, способное понижать функцию активированных макрофагов.
10. Применение по п.1, где пациент страдает от болезненного состояния, выбранного из группы, состоящей из ревматоидного артрита, язвенного колита, болезни Крона, воспалительных поражений, инфекций кожи, остеомиелита, атеросклероза, отторжения трансплантата органа, пневмосклероза, саркоидоза, склеродермии и любого хронического воспаления.
11. Применение по п.3 или 4, дополнительно включающее в себя стадию введения пациенту адъюванта, выбранного из группы, состоящей из TiterMax Gold, Alum и GPI-100.
12. Применение по п.3 или 4, где иммуноген выбран из группы, состоящей из флуоресцеин-изотиоцианата и динитрофенила.
13. Применение по п.9, где соединение, способное понижать функцию активированных макрофагов, обладает стероидной активностью.
14. Фармацевтическая композиция для лечения болезненного состояния, опосредованного активированными макрофагами, содержащая конъюгат или комплекс общей формулы Аb-Х, где группа Аb содержит витамин, способный связываться с активированными макрофагами, а группа Х содержит цитотоксин, иммуноген или соединение, способное понижать функцию макрофагов.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, где Аb содержит лиганд, связывающийся с фолатным рецептором.
16. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, где группа Х представляет собой цитотоксин, и где цитотоксин содержит цитотоксин макрофага.
17. Фармацевтическая композиция по п.16, где цитотоксин макрофага включает в себя клодронат.
18. Фармацевтическая композиция по пп.14-16, где цитотоксин является белковым токсином.
19. Фармацевтическая композиция по п.18, где белковый токсин представляет собой экзотоксин Pseudomonas.
20. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, где группа Х представляет собой соединение, способное понижать функцию макрофагов, и где соединение, способное понижать функцию макрофагов, включает в себя соединение со стероидной активностью.
21. Фармацевтическая композиция по п.20, где соединением со стероидной активностью является преднизон.
22. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, где группа Х представляет собой соединение, способное понижать функцию макрофагов, и где соединение, способное изменять функцию макрофагов, представляет собой анти-фолат.
23. Фармацевтическая композиция по п.22, где анти-фолат представляет собой метотрексат.
24. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, где группа Х представляет собой соединение, способное понижать функцию макрофагов, и где соединение, способное изменять функцию макрофагов, представляет собой антиметаболит.
25. Фармацевтическая композиция по п.14 или 15, где группа Х содержит иммуноген.
26. Фармацевтическая композиция по п.25, где иммуноген выбран из группы, состоящей из флуоресцеин-изотиоцианата и динитрофенила.
RU2003134705/14A 2001-05-02 2002-05-02 Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами RU2316349C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US28820801P 2001-05-02 2001-05-02
US60/288,208 2001-05-02

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007131930/15A Division RU2480241C2 (ru) 2001-05-02 2007-08-22 Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU2003134705A RU2003134705A (ru) 2005-03-20
RU2316349C2 true RU2316349C2 (ru) 2008-02-10

Family

ID=23106203

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2003134705/14A RU2316349C2 (ru) 2001-05-02 2002-05-02 Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами
RU2007131930/15A RU2480241C2 (ru) 2001-05-02 2007-08-22 Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2007131930/15A RU2480241C2 (ru) 2001-05-02 2007-08-22 Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами

Country Status (15)

Country Link
US (6) US7740854B2 (ru)
EP (1) EP1390077B1 (ru)
JP (2) JP4868698B2 (ru)
KR (1) KR20040015234A (ru)
CN (2) CN101979095A (ru)
CA (1) CA2445826C (ru)
HU (1) HUP0401127A3 (ru)
IL (1) IL158532A0 (ru)
MX (1) MXPA03010035A (ru)
NO (1) NO20034855L (ru)
NZ (1) NZ529808A (ru)
PL (1) PL367102A1 (ru)
RU (2) RU2316349C2 (ru)
WO (1) WO2002087424A2 (ru)
ZA (1) ZA200308489B (ru)

Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6984400B2 (en) * 1998-07-14 2006-01-10 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method of treating restenosis using bisphosphonate nanoparticles
US7008645B2 (en) * 1998-07-14 2006-03-07 Yissum Research Development Company Of The Hebrew University Of Jerusalem Method of inhibiting restenosis using bisphosphonates
RU2316349C2 (ru) * 2001-05-02 2008-02-10 Пердью Рисерч Фаундейшн Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами
EP1458416A1 (en) * 2001-12-13 2004-09-22 Dow Global Technologies Inc. Treatment of osteomyelitis with radiopharmaceuticals
US8043603B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
US8043602B2 (en) * 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
NZ536467A (en) * 2002-05-06 2006-11-30 Endocyte Inc Vitamin-targeted imaging agents
SI1592457T1 (sl) * 2003-01-27 2012-12-31 Endocyte, Inc. Konjugat folat-vinblastin kot zdravilo
EP2529758A3 (en) * 2003-01-27 2013-01-02 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
US20060204565A1 (en) * 2003-05-06 2006-09-14 Low Philip S Conjugates and use thereof
JP4680185B2 (ja) * 2003-05-30 2011-05-11 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション アテローム性動脈硬化症の診断法
CA2530460C (en) 2003-06-27 2012-08-14 Biorest Ltd. Method of treating acute coronary syndromes
US20060051407A1 (en) * 2003-06-27 2006-03-09 Yoram Richter Method of treating ischemia-reperfusion injury
US10517883B2 (en) * 2003-06-27 2019-12-31 Zuli Holdings Ltd. Method of treating acute myocardial infarction
EP1716179A2 (en) 2004-02-12 2006-11-02 Morphotek, Inc. Monoclonal antibodies that specifically bind to folate receptor alpha
JP4943144B2 (ja) * 2004-04-26 2012-05-30 松山 隆美 葉酸リセプターベータ（ＦＲ−β）に対する単クローン抗体を含有する治療薬
EP1789391B1 (en) 2004-07-23 2017-06-28 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
WO2006071754A2 (en) 2004-12-23 2006-07-06 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
JP2009521206A (ja) 2005-04-22 2009-06-04 モルフォテック、インク． 免疫エフェクター活性を有する葉酸受容体アルファ陽性細胞に内部移行する抗体
US20070009434A1 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Low Philip S Imaging and therapeutic method using monocytes
US8795633B2 (en) 2005-09-23 2014-08-05 Purdue Research Foundation Multiphoton in vivo flow cytometry method and device
WO2008093166A2 (en) * 2006-05-11 2008-08-07 Ghent University Sialoadhesin-related compositions and methods
US20100226967A1 (en) * 2006-05-23 2010-09-09 Purdue Research Foundation Imaging and therapeutic method using progenitor cells
CA2668197A1 (en) 2006-11-03 2008-05-15 Philip S. Low Ex vivo flow cytometry method and device
EP2567711A3 (en) 2007-02-07 2013-05-01 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
WO2008101231A2 (en) * 2007-02-16 2008-08-21 Endocyte, Inc. Methods and compositions for treating and diagnosing kidney disease
CN103948937A (zh) 2007-03-14 2014-07-30 恩多塞特公司 结合配体连接的微管溶素递药缀合物
WO2008148001A2 (en) * 2007-05-25 2008-12-04 Purdue Research Foundation Method of imaging localized infections
US9877965B2 (en) 2007-06-25 2018-01-30 Endocyte, Inc. Vitamin receptor drug delivery conjugates for treating inflammation
BRPI0812970A2 (pt) 2007-06-25 2019-09-24 Endocyte Inc conjugados contendo espaçadores hidrofílicos
PL2187965T3 (pl) 2007-08-17 2020-05-18 Purdue Research Foundation Koniugaty wiążący psma ligand-łącznik i sposoby ich zastosowania
JP2011500835A (ja) 2007-10-25 2011-01-06 エンドサイト，インコーポレイテッド チューブリシン類および調製プロセス
US20110021484A1 (en) * 2008-03-07 2011-01-27 Lawrence Richard Bernstein Gallium compounds and methods of use to treat inflammatory bowel disease
CA2754492A1 (en) * 2009-03-05 2010-09-10 Purdue Research Foundation Method for early imaging of atherosclerosis
WO2011037913A2 (en) * 2009-09-24 2011-03-31 Emory University Methods for preventing oxidative stress injury of a tissue by a folate-tempol conjugate
WO2011044545A2 (en) 2009-10-09 2011-04-14 Sigalov Alexander B Methods and compositions for targeted imaging
US10894098B2 (en) 2012-04-09 2021-01-19 Signablok, Inc. Methods and compositions for targeted imaging
EP3345998A1 (en) 2010-02-18 2018-07-11 Osiris Therapeutics, Inc. Immunocompatible chorionic membrane products
KR101637138B1 (ko) 2010-02-24 2016-07-06 이뮤노젠 아이엔씨 엽산염 수용체 1 항체와 면역접합체 및 이들의 용도
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
US9770414B2 (en) * 2010-05-13 2017-09-26 Pacira Pharmaceuticals, Inc. Sustained release formulation of methotrexate as a disease-modifying antirheumatic drug (DMARD) and an anti-cancer agent
US20130071321A1 (en) 2010-05-28 2013-03-21 Purdue Research Foundation Delivery of agents to inflamed tissues using folate-targeted liposomes
CN102008732B (zh) * 2010-11-08 2012-10-24 武汉华耀生物医药有限公司 一种叶酸偶联抗体药物及其制备方法与应用
JP5896568B2 (ja) * 2010-11-08 2016-03-30 国立大学法人 鹿児島大学 動脈硬化又は動脈硬化性疾患の治療剤、及び動脈硬化又は動脈硬化性疾患の診断薬
MY180894A (en) 2011-04-01 2020-12-11 Immunogen Inc Methods for incresing efficacy of folr1 cancer therapy
WO2013126797A1 (en) 2012-02-24 2013-08-29 Purdue Research Foundation Cholecystokinin b receptor targeting for imaging and therapy
US20140080175A1 (en) 2012-03-29 2014-03-20 Endocyte, Inc. Processes for preparing tubulysin derivatives and conjugates thereof
NZ726258A (en) 2012-08-31 2019-07-26 Immunogen Inc Antibodies and uses thereof to detect folate receptor 1
SG11201502896XA (en) 2012-10-16 2015-05-28 Endocyte Inc Drug delivery conjugates containing unnatural amino acids and methods for using
JP2014091687A (ja) * 2012-11-01 2014-05-19 Kagoshima Univ 軟骨又は骨の破壊の診断薬
CN108042811A (zh) 2012-11-15 2018-05-18 恩多塞特公司 用于治疗由psma表达细胞引起的疾病的共轭物
US9993427B2 (en) 2013-03-14 2018-06-12 Biorest Ltd. Liposome formulation and manufacture
WO2014150943A1 (en) * 2013-03-15 2014-09-25 Purdue Research Foundation Asthma imaging and therapy
BR112015022810B1 (pt) * 2013-03-15 2021-11-30 Purdue Research Foundation Composto, composição e método para identificar tipo de célula alvo em amostra biológica
WO2014142356A1 (ja) * 2013-03-15 2014-09-18 国立大学法人鹿児島大学 強皮症治療剤
AU2014312086B2 (en) 2013-08-30 2020-03-12 Immunogen, Inc. Antibodies and assays for detection of folate receptor 1
WO2015055318A1 (en) 2013-10-18 2015-04-23 Deutsches Krebsforschungszentrum Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer
EP3865153A1 (en) * 2013-11-19 2021-08-18 Purdue Research Foundation Patient selection method for inflammation
US9850183B2 (en) 2014-06-27 2017-12-26 Reiley Pharmaceuticals, Inc. Conjugates derived from non-steroidal anti-inflammatory drugs and methods of use thereof in imaging
EP3203995A4 (en) 2014-10-09 2019-05-15 Board of Regents of the University of Nebraska COMPOSITIONS AND METHODS FOR DELIVERY OF THERAPEUTIC AGENTS
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
US10053478B2 (en) 2015-01-09 2018-08-21 Reiley Pharmaceuticals, Inc. COX-2-targeting, platinum-containing conjugates and their use in the treatment of tumors and cancers
US10420850B2 (en) 2015-08-14 2019-09-24 Endocyte, Inc. Method of imaging with a chelating agent
EP3349796A4 (en) 2015-09-17 2019-05-29 ImmunoGen, Inc. THERAPEUTIC COMBINATIONS COMPRISING ANTI-FOLR1 IMMUNOCONJUGATES
KR20220101204A (ko) 2016-03-02 2022-07-19 에자이 알앤드디 매니지먼트 가부시키가이샤 에리불린-기반 항체-약물 콘주게이트 및 사용 방법
RU2651091C1 (ru) * 2016-12-22 2018-04-18 Федеральное Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Санкт-Петербургский государственный педиатрический медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ФГБОУ ВО СПбГПМУ Минздрава России) Способ диагностики остеомиелита у детей
EP3737359A4 (en) 2018-01-12 2021-11-03 Board of Regents of the University of Nebraska ANTIVIRAL PRODRUGS AND THEIR FORMULATIONS
US11458136B2 (en) 2018-04-09 2022-10-04 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Antiviral prodrugs and formulations thereof
EP3836951A1 (en) 2018-08-13 2021-06-23 Signablok, Inc. Peptides and compositions for targeted treatment and imaging
CN111084889A (zh) * 2020-01-15 2020-05-01 华中科技大学同济医学院附属协和医院 一种靶向cd4受体的核素分子探针的制备方法及其作为心脏移植排斥反应显像剂的应用
KR102341044B1 (ko) * 2021-05-08 2021-12-21 동국대학교 산학협력단 엽산 접합 아미노클레이를 기반으로 하는 표적 선택적 나노복합체, 이의 제조 방법 및 이의 용도
KR102596237B1 (ko) 2021-11-16 2023-10-31 고려대학교 산학협력단 나노배리어 및 이를 이용한 대식세포의 부착 및 분극화 조절방법

Family Cites Families (111)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2816110A (en) 1956-11-23 1957-12-10 Merck & Co Inc Methods for the production of substituted pteridines
US4713249A (en) 1981-11-12 1987-12-15 Schroeder Ulf Crystallized carbohydrate matrix for biologically active substances, a process of preparing said matrix, and the use thereof
US5140104A (en) * 1982-03-09 1992-08-18 Cytogen Corporation Amine derivatives of folic acid analogs
US4577636A (en) * 1982-11-23 1986-03-25 The Beth Israel Hospital Association Method for diagnosis of atherosclerosis
JPS61123624A (ja) * 1984-11-20 1986-06-11 Mitsubishi Rayon Co Ltd ポリエステルの製法
US4817601A (en) * 1985-03-06 1989-04-04 C. R. Bard, Inc. Catheter system for controlled removal by radiant energy of biological obstructions
US5266333A (en) 1985-03-06 1993-11-30 American Cyanamid Company Water dispersible and water soluble carbohydrate polymer compositions for parenteral administration of growth hormone
US4641650A (en) 1985-03-11 1987-02-10 Mcm Laboratories, Inc. Probe-and-fire lasers
US4718417A (en) * 1985-03-22 1988-01-12 Massachusetts Institute Of Technology Visible fluorescence spectral diagnostic for laser angiosurgery
US4850351A (en) * 1985-05-22 1989-07-25 C. R. Bard, Inc. Wire guided laser catheter
US4917084A (en) * 1985-07-31 1990-04-17 C. R. Bard, Inc. Infrared laser catheter system
NZ217821A (en) 1985-10-10 1989-07-27 Biotech Australia Pty Ltd Oral delivery system; complex of active agent and vitamin b12 or analogue thereof
US5336506A (en) 1986-07-03 1994-08-09 Advanced Magnetics Inc. Targeting of therapeutic agents using polysaccharides
EP0273085A1 (en) 1986-12-29 1988-07-06 IntraCel Corporation A method for internalizing nucleic acids into eukaryotic cells
US4785806A (en) * 1987-01-08 1988-11-22 Yale University Laser ablation process and apparatus
US5057540A (en) 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
US5583112A (en) 1987-05-29 1996-12-10 Cambridge Biotech Corporation Saponin-antigen conjugates and the use thereof
CA1340527C (en) 1988-05-31 1999-05-04 Lidia Vallarino Macrocyclic complexes of yttrium, the lanthanides and the actinides having peripheral coupling functionalities
EP0449883B1 (en) * 1988-12-21 1996-01-31 Massachusetts Institute Of Technology A method for laser induced fluorescence of tissue
US5108921A (en) 1989-04-03 1992-04-28 Purdue Research Foundation Method for enhanced transmembrane transport of exogenous molecules
US5688488A (en) 1989-04-03 1997-11-18 Purdue Research Foundation Composition and method for tumor imaging
US5094848A (en) 1989-06-30 1992-03-10 Neorx Corporation Cleavable diphosphate and amidated diphosphate linkers
RU2123338C1 (ru) 1990-06-15 1998-12-20 Сайтел Корпорейшн Фармацевтическая композиция на основе медиатора межклеточной адгезии (варианты), способ ингибирования межклеточной адгезии, способ лечения воспалительного заболевания, способ анализа тестируемого соединения на способность ингибировать клеточную адгезию, способ получения соединения
WO1991019501A1 (en) 1990-06-15 1991-12-26 Cytel Corporation Intercellular adhesion mediators
US5576305A (en) * 1990-06-15 1996-11-19 Cytel Corporation Intercellular adhesion mediators
US5753631A (en) * 1990-06-15 1998-05-19 Cytel Corporation Intercellular adhesion mediators
US5219548A (en) * 1990-10-01 1993-06-15 Board Of Regents, The University Of Texas System High affinity halogenated-tamoxifen derivatives and uses thereof
US5275594A (en) * 1990-11-09 1994-01-04 C. R. Bard, Inc. Angioplasty system having means for identification of atherosclerotic plaque
WO1992013572A1 (en) 1991-02-08 1992-08-20 Diatech, Inc. TECHNETIUM-99m LABELED POLYPEPTIDES FOR IMAGING
JP2820329B2 (ja) * 1991-04-01 1998-11-05 株式会社資生堂 毛髪化粧料
US5399338A (en) 1991-05-01 1995-03-21 University Of New Mexico Enhancement of abnormal tissue uptake of antibodies, tumor-specific agents or conjugates thereof for diagnostic imaging or therapy
US6335434B1 (en) 1998-06-16 2002-01-01 Isis Pharmaceuticals, Inc., Nucleosidic and non-nucleosidic folate conjugates
US5159079A (en) 1991-12-20 1992-10-27 Eli Lilly And Company 2-piperidones as intermediates for 5-deaza-10-oxo- and 5-deaza-10-thio-5,6,7,8-tetrahydrofolic acids
US5217456A (en) * 1992-02-24 1993-06-08 Pdt Cardiovascular, Inc. Device and method for intra-vascular optical radial imaging
US6096289A (en) * 1992-05-06 2000-08-01 Immunomedics, Inc. Intraoperative, intravascular, and endoscopic tumor and lesion detection, biopsy and therapy
US5650398A (en) 1992-07-02 1997-07-22 Cambridge Biotech Corporation Drug delivery enhancement via modified saponins
US5273965A (en) 1992-07-02 1993-12-28 Cambridge Biotech Corporation Methods for enhancing drug delivery with modified saponins
ATE146075T1 (de) 1992-10-01 1996-12-15 Wellcome Found Tucaresol als mittel zur immunopotentierung
US5413778A (en) 1992-10-05 1995-05-09 The Regents Of The University Of Michigan Labelled monocyte chemoattractant protein material and medical uses thereof
US6270766B1 (en) 1992-10-08 2001-08-07 The Kennedy Institute Of Rheumatology Anti-TNF antibodies and methotrexate in the treatment of arthritis and crohn's disease
US5759546A (en) 1994-02-04 1998-06-02 Weinberg; Andrew D. Treatment of CD4 T-cell mediated conditions
US5417982A (en) 1994-02-17 1995-05-23 Modi; Pankaj Controlled release of drugs or hormones in biodegradable polymer microspheres
US6217847B1 (en) * 1994-07-01 2001-04-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Non-invasive localization of a light-emitting conjugate in a mammal
AUPM891094A0 (en) 1994-10-18 1994-11-10 Beare, Malcolm J. Internal combustion engine
FI98765C (fi) 1995-01-16 1997-08-11 Erkki Soini Virtaussytometrinen menetelmä ja laite
US6066322A (en) 1995-03-03 2000-05-23 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Methods for the treatment of immune disorders
US5547668A (en) * 1995-05-05 1996-08-20 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Conjugates of folate anti-effector cell antibodies
ES2210514T3 (es) 1996-04-10 2004-07-01 Sangstat Medical Corporation Conjugados citomoduladores de miembros de pares de union especificos.
RU2101703C1 (ru) * 1996-05-29 1998-01-10 Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии Способ определения наличия активности воспалительного процесса при ревматоидном артрите
US6231859B1 (en) 1996-12-02 2001-05-15 Aquila Biopharmaceuticals, Inc. Saponin adjuvant compositions
US6083480A (en) 1997-05-01 2000-07-04 Diatide, Inc. Calcitonin receptor binding reagents
US6080725A (en) 1997-05-20 2000-06-27 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Immunostimulating and vaccine compositions employing saponin analog adjuvants and uses thereof
PT996451E (pt) 1997-05-20 2005-04-29 Galenica Pharmaceuticals Inc Analogos de saponina triterpenica com actividade adjuvante e imunoestimulante
US6645494B1 (en) 1997-06-20 2003-11-11 Tanox Pharma B.V. Anti-CD40L immunotoxins for the treatment of diseases
AU760560B2 (en) * 1998-02-12 2003-05-15 Board Of Regents, The University Of Texas System Methods and reagents for the rapid and efficient isolation of circulating cancer cells
CA2321136A1 (en) * 1998-02-17 1999-08-19 Medarex, Inc. Treating and diagnosing macrophage-mediated diseases using fc receptor ligands
US6093382A (en) * 1998-05-16 2000-07-25 Bracco Research Usa Inc. Metal complexes derivatized with folate for use in diagnostic and therapeutic applications
US6589503B1 (en) * 1998-06-20 2003-07-08 Washington University Membrane-permeant peptide complexes for medical imaging, diagnostics, and pharmaceutical therapy
US6262029B1 (en) 1998-08-14 2001-07-17 Galenica Pharmaceuticals, Inc. Chemically modified saponins and the use thereof as adjuvants
US6507747B1 (en) * 1998-12-02 2003-01-14 Board Of Regents, The University Of Texas System Method and apparatus for concomitant structural and biochemical characterization of tissue
US6960449B2 (en) * 1999-02-10 2005-11-01 Cell Works Diagnostics, Inc. Class characterization of circulating cancer cells isolated from body fluids and methods of use
US6167297A (en) * 1999-05-05 2000-12-26 Benaron; David A. Detecting, localizing, and targeting internal sites in vivo using optical contrast agents
US6323313B1 (en) 1999-06-01 2001-11-27 The University Of Washington Annexin derivative with endogenous chelation sites
AU7123500A (en) 1999-09-08 2001-07-09 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Polysialic acid-klh conjugate vaccine
IL131887A0 (en) * 1999-09-14 2001-03-19 Dpharm Ltd Phospholipid prodrugs of anti-proliferative drugs
US6782289B1 (en) * 1999-10-08 2004-08-24 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods and apparatus for characterizing lesions in blood vessels and other body lumens
US7067111B1 (en) 1999-10-25 2006-06-27 Board Of Regents, University Of Texas System Ethylenedicysteine (EC)-drug conjugates, compositions and methods for tissue specific disease imaging
NO314537B1 (no) * 1999-12-06 2003-04-07 Anticancer Therapeutic Inv Sa Reseptorbindende konjugater
US6780987B1 (en) * 1999-12-10 2004-08-24 Trustees Of The Tufts College β-cap73 control of normal and abnormal cell migration
MXPA02009454A (es) 2000-03-31 2003-04-10 Purdue Research Foundation Metodo de tratamiento usando conjugados ligando-inmunogeno.
BRPI0111220B8 (pt) 2000-06-02 2021-07-27 Univ Texas conjugados de fármacos com etilenodicisteína (ec)
US6780984B2 (en) 2000-07-17 2004-08-24 Northwestern University Method for prognosing cancer and the proteins involved
HUP0400027A3 (en) * 2001-02-23 2006-01-30 Bristol Myers Squibb Pharma Co Labeled macrophage scavenger receptor antagonosts for imaging atherosclerosis and vulnerable plaque
ATE427948T1 (de) 2001-04-24 2009-04-15 Purdue Research Foundation Folat-mimetika und deren folatrezeptorbindende konjugate
RU2316349C2 (ru) 2001-05-02 2008-02-10 Пердью Рисерч Фаундейшн Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами
US7381535B2 (en) 2002-07-10 2008-06-03 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior Methods and compositions for detecting receptor-ligand interactions in single cells
ATE451935T1 (de) 2001-09-28 2010-01-15 Purdue Research Foundation Behandlungsverfahren mit liganden- immunogenkonjugaten
ATE413453T1 (de) 2001-12-21 2008-11-15 Serono Lab Raf/ras-bindende verbindungen
US8043602B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
US8043603B2 (en) 2002-02-07 2011-10-25 Endocyte, Inc. Folate targeted enhanced tumor and folate receptor positive tissue optical imaging technology
JP2005519078A (ja) 2002-02-27 2005-06-30 ザ オハイオ ステート ユニバーシティー リサーチ ファウンデーション 急性骨髄性白血病の治療方法
CN1662251B (zh) 2002-04-19 2012-10-10 恩多塞特公司 佐剂增强的免疫应用
NZ536467A (en) 2002-05-06 2006-11-30 Endocyte Inc Vitamin-targeted imaging agents
US20050026866A1 (en) * 2002-08-02 2005-02-03 Pawelek John M. Agents and methods for treatment of disease by oligosaccharide targeting agents
US7220827B2 (en) 2002-09-27 2007-05-22 Nihon Medi-Physics Co., Ltd. Compound binding to leukocytes and medicinal composition containing the compound in labeled state as the active ingredient
EP2316493A3 (en) 2002-11-07 2011-08-10 Board of Regents, The University of Texas System Ethylenedicysteine (EC)-drug conjugates, compositions and methods for tissue specific disease imaging
EP2529758A3 (en) 2003-01-27 2013-01-02 Endocyte, Inc. Vitamin receptor binding drug delivery conjugates
JP2006524242A (ja) 2003-03-27 2006-10-26 エモリー ユニバーシティー Ｃｘｃｒ４アンタゴニストおよびそれらの使用方法
US20060204565A1 (en) 2003-05-06 2006-09-14 Low Philip S Conjugates and use thereof
JP4680185B2 (ja) 2003-05-30 2011-05-11 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション アテローム性動脈硬化症の診断法
JP2007511514A (ja) 2003-11-13 2007-05-10 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ 生体分子標的同定用の固定化ｎ置換三環状３−アミノピラゾール
EP1711825A4 (en) 2004-01-07 2008-01-23 Ambit Biosciences Corp SMALL MOLECULES CONJUGATED
JP2007524412A (ja) 2004-01-22 2007-08-30 イムノメディクス， インコーポレイテッド 葉酸コンジュゲートおよびコンプレックス
WO2005087275A2 (en) 2004-03-11 2005-09-22 Board Of Regents, The University Of Texas System Metal radiolabeled pet imaging agents
EP1789391B1 (en) 2004-07-23 2017-06-28 Endocyte, Inc. Bivalent linkers and conjugates thereof
WO2006034046A2 (en) 2004-09-17 2006-03-30 The Regents Of The University Of Michigan Quantitative two-photon flow cytometry
US7491502B2 (en) * 2004-12-17 2009-02-17 The General Hospital Corporation In vivo flow cytometry system and method
WO2006071754A2 (en) 2004-12-23 2006-07-06 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
WO2006074272A2 (en) 2005-01-05 2006-07-13 Board Of Regents, The University Of Texas System Conjugates for dual imaging and radiochemotherapy: composition, manufacturing, and applications
CN101175757B (zh) 2005-03-16 2012-11-14 恩多塞特公司 蝶酸及其缀合物的合成和纯化
WO2007001466A2 (en) 2005-06-14 2007-01-04 Kung, Hank, F. Peptidomimetic somatostatin receptor subtype 2 ligands and pet imaging agents
US20070009434A1 (en) 2005-07-05 2007-01-11 Low Philip S Imaging and therapeutic method using monocytes
US8795633B2 (en) 2005-09-23 2014-08-05 Purdue Research Foundation Multiphoton in vivo flow cytometry method and device
ES2493166T3 (es) 2006-11-01 2014-09-11 Ventana Medical Systems, Inc. Haptenos, conjugados de haptenos, composiciones de los mismos y método para su preparación y uso
CA2668197A1 (en) * 2006-11-03 2008-05-15 Philip S. Low Ex vivo flow cytometry method and device
EP2567711A3 (en) 2007-02-07 2013-05-01 Purdue Research Foundation Positron emission tomography imaging method
WO2008148001A2 (en) 2007-05-25 2008-12-04 Purdue Research Foundation Method of imaging localized infections
US20090012009A1 (en) 2007-06-01 2009-01-08 Low Philip S Composition and Method for Treating Inflammatory Disease
BRPI0812970A2 (pt) 2007-06-25 2019-09-24 Endocyte Inc conjugados contendo espaçadores hidrofílicos
PL2187965T3 (pl) 2007-08-17 2020-05-18 Purdue Research Foundation Koniugaty wiążący psma ligand-łącznik i sposoby ich zastosowania
CA2754492A1 (en) 2009-03-05 2010-09-10 Purdue Research Foundation Method for early imaging of atherosclerosis

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
NAKASHIMA-MATSUSHITA N. et al. Selective expression of folate receptor beta and its possible role in methotrexate transport in synovial macrophages from patients with rheumatoid arthritis. - Arthritis Rheum. 1999 Aug;42(8):1609-16, abstract. *
с.1-3 описания. SUDIMACK J. et al. Targeted drug delivery via the folate receptor. - Adv Drug Deliv Rev. 2000 Mar 30;41(2): 147-62, abstract. REDDY J.A. et al. Folate-mediated targeting of therapeutic and imaging agents to cancers. - Crit Rev Ther Drug Carrier Syst. 1998;15(6):587-627, abstract. *

Also Published As

Publication number Publication date
US20080138396A1 (en) 2008-06-12
JP4868698B2 (ja) 2012-02-01
WO2002087424A2 (en) 2002-11-07
NZ529808A (en) 2007-02-23
US20020192157A1 (en) 2002-12-19
US20070231266A1 (en) 2007-10-04
US20120276191A1 (en) 2012-11-01
IL158532A0 (en) 2004-05-12
ZA200308489B (en) 2005-04-26
RU2003134705A (ru) 2005-03-20
RU2007131930A (ru) 2009-02-27
EP1390077A4 (en) 2004-08-11
HUP0401127A3 (en) 2006-03-28
CN101979095A (zh) 2011-02-23
EP1390077B1 (en) 2014-07-16
US7740854B2 (en) 2010-06-22
US20140056809A1 (en) 2014-02-27
EP1390077A2 (en) 2004-02-25
PL367102A1 (en) 2005-02-21
NO20034855L (no) 2003-12-19
CA2445826C (en) 2014-03-25
RU2480241C2 (ru) 2013-04-27
JP2004530678A (ja) 2004-10-07
HUP0401127A2 (hu) 2004-09-28
NO20034855D0 (no) 2003-10-30
US8388977B2 (en) 2013-03-05
JP2011256186A (ja) 2011-12-22
KR20040015234A (ko) 2004-02-18
MXPA03010035A (es) 2004-06-30
CN1635910A (zh) 2005-07-06
US8916167B2 (en) 2014-12-23
US20120301397A1 (en) 2012-11-29
CA2445826A1 (en) 2002-11-07
WO2002087424A3 (en) 2003-03-20

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2316349C2 (ru) Лечение и диагностика заболеваний, опосредованных макрофагами
JP2009501731A (ja) 癌を治療する方法
US20240066144A1 (en) Bone marrow-, reticuloendothelial system-, and/or lymph node-targeted radiolabeled liposomes and methods of their diagnostic and therapeutic use
US20150343100A1 (en) Bimodal fluorophore-labeled liposomes and associated methods and systems
JP2002534378A (ja) ヒスタミンによって誘導される相乗的殺腫瘍応答
US20200206369A1 (en) Imaging of tumor-associated macrophages
AU2007229371C1 (en) Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease
AU2002305327A1 (en) Treatment and diagnosis of macrophage mediated disease
Lu Exploring the potential of folate targeting in anticancer therapies

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20150503