RU2282461C2 - Лечение инфекции, вызываемой вирусом папилломы человека - Google Patents
Лечение инфекции, вызываемой вирусом папилломы человека Download PDFInfo
- Publication number
- RU2282461C2 RU2282461C2 RU2003101965/14A RU2003101965A RU2282461C2 RU 2282461 C2 RU2282461 C2 RU 2282461C2 RU 2003101965/14 A RU2003101965/14 A RU 2003101965/14A RU 2003101965 A RU2003101965 A RU 2003101965A RU 2282461 C2 RU2282461 C2 RU 2282461C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hpv
- protein
- type
- patient
- hsp
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/162—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from virus
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
- A61P17/12—Keratolytics, e.g. wart or anti-corn preparations
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/53—DNA (RNA) vaccination
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6031—Proteins
- A61K2039/6043—Heat shock proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/70—Multivalent vaccine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/20011—Papillomaviridae
- C12N2710/20034—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
Abstract
Изобретение относится к медицине, в частности к вирусологии, и может быть использовано при лечении инфекции, вызываемой различными типами вируса папилломы человека. Для этого пациенту вводят терапевтически эффективное количество композиции, содержащей слитый белок, включающий белок теплового шока или его иммуностимуляторный фрагмент и белок Е7 вируса папилломы человека или его антигенный фрагмент; или эффективное количество композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, включающий Hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и белок HPV или его антигенный фрагмент. При этом, если заболевание вызвано инфекцией 1 типа HPV, белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент происходит от 2 типа HPV, отличающегося от первого типа HPV. Способ позволяет повысить эффективность лечения за счет перекрестной реактивности при индукции иммунной реакции у пациента. 6 н. и 27 з.п. ф-лы, 4 табл.
Description
Данное изобретение относится к способам терапии инфекций, вызываемых вирусом папилломы человека.
Предпосылки изобретения
Инфицирование вирусом папилломы человека (HPV) достаточно распространено. HPV может передаваться половым путем, и, согласно оценке, 20-80% активных в половом отношении взрослых людей были инфицированы этим вирусом. Хотя большинство инфицирований являются бессимптомными, инфицирование может приводить к развитию генитальных остроконечных бородавок (кондилом) (которые имеют частоту случаев заражения приблизительно 1-5% среди взрослых) и раку аногенитальных путей. Другой тип рака, рак шейки матки, в значительной степени связан с HPV (Frazer, Genitourin. Med. 72:398-403, 1996). Типы 6, 11, 16, 18, 31 и 33 HPV часто также связаны с повышенным риском развития рака (кондиломами), причем типы 16 и/или 18 определяются в более чем 90% карцином шейки матки (van Driel et al., Ann. Med. 28:471-477, 1996). Типы 6 и 11 также связаны с аногенитальными бородавками. В отношении обзоров по вирусам папиллом и связанным с ними патологиям см. Shah et al., "Chapter 66: Papillomaviruses," In: Virology, 3rd Edition, Fields et al., Eds., Raven Press, Philadelphia, pp.2077-2109, 1996 и zur Hausen, J. Natl. Cancer Inst. 92:690-698, 2000.
В настоящее время не существует безопасного и эффективного способа лечения или профилактики бородавок или описанных выше заболеваний путем нацеливания иммунной системы. Попытки развития таких терапий затруднялись в силу нескольких причин, одной из которых является догма, заключающаяся в том, что антигены из отдельного типа HPV индуцируют ограниченную, типоспецифическую иммунную реакцию. Таким образом, предполагалось, что коктейль (смесь), содержащий антигены из нескольких различных типов HPV, является необходимым для широко применимой эффективной терапии инфекций HPV (Caine et al., Science 288:1753, 2000).
Сущность изобретения
Данное изобретение основано, частично, на обнаружении того, что слитый белок, содержащий белок из одного типа HPV, может быть использован для лечения заболевания или состояния, которое вызывается инфекцией другим типом HPV. Например, антиген HPV типа 16, слитый с бактериальным белком теплового шока (hsp), был эффективным в лечении аногенитальных бородавок человека, вызванных типами HPV, другими, чем тип 16 (например, типами 6 и 11 HPV). Этот результат подтверждает два утверждения: (1) что бородавки могут лечиться белком HPV и (2) что терапевтические агенты, нацеленные на HPV, не должны обязательно содержать белковые антигены из различных типов HPV, чтобы быть в широком плане эффективными.
Таким образом, данное изобретение описывает способ лечения бородавок у субъекта посредством введения субъекту композиции, содержащей (1) hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок HPV (например, антигенный белок, такой как белок Е7, например, вируса HPV типа 16) или его антигенный фрагмент. Эти компоненты могут называться "компонентом (1)" и "компонентом (2)" соответственно. Hsp (или его иммуностимуляторный фрагмент) и белок HPV (или его антигенный фрагмент) могут быть либо просто скомбинированы в одном и том же препарате, либо связаны более прочно химической конъюгацией или слиянием (т.е. можно вводить слитый белок, имеющий описанные здесь компоненты, или молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует этот белок). При комбинировании, конъюгации или слиянии компонент (1) и компонент (2) вводятся одновременно. Однако каждый компонент может быть также введен отдельно (например, последовательно), и компонент (2) может быть введен без компонента (1). Способ, описанный выше, может включать стадию, в которой производят идентификацию субъекта, который имеет бородавку или, у которого предполагается наличие бородавки (в контексте лечения субъекта эта идентификация должна проводиться перед началом введения терапевтического агента). Врачи и другие специалисты в данной области вполне способны идентифицировать таких субъектов.
Способы данного изобретения могут использоваться также для профилактики бородавок, и в этом случае идентифицируют субъекта, которому желательна или полезна профилактика бородавок (а не субъекта, у которого уже есть бородавки).
Данное изобретение описывает также способы лечения субъекта, который страдает заболеванием или состоянием, вызванным инфекцией HPV первого типа (например, типа 5, 6, 11, 18, 31, 33, 35, 45, 54, 60 или 70), посредством введения этому субъекту композиции, содержащей (1) hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок HPV второго типа (например, типа 16) или его антигенный фрагмент. То есть HPV "первого типа" и HPV "второго типа" являются отличающимися друг от друга, они являются двумя различными типами HPV. Hsp (или его иммуностимуляторный фрагмент) и белок HPV (или его антигенный фрагмент) могут быть либо просто скомбинированы в одном и том же препарате, либо необратимо связаны химической конъюгацией или слиянием (т.е. можно вводить слитый белок, имеющий описанные компоненты, или молекулу нуклеиновой кислоты, которая кодирует этот белок). При комбинировании, конъюгации или слиянии компонент (1) и компонент (2) вводятся одновременно. Однако каждый компонент может быть также введен отдельно (например, последовательно), и компонент (2) может быть введен без компонента (1). В этом случае опять этот способ может включать стадию, в которой производят идентификацию субъекта, который инфицирован HPV (или связанное с HPV заболевание или состояние) или у которого предполагается наличие инфекции HPV (или связанного с HPV заболевания или состояния).
Когда субъект, который инфицирован первым типом HPV, получает композицию, которая включает второй тип HPV, способ может проводиться перед типированием инфекции HPV, перед обнаружением или проявлением инфекции HPV (т.е. не требуется знать конкретный тип HPV, которым был или будет инфицирован данный субъект, перед началом лечения или профилактики). В случае, когда эти способы являются профилактическими, они могут включать стадию, в которой идентифицируют субъекта, которому желательна или полезна профилактика инфекции HPV.
Описанные композиции могут вводиться в количествах, которые являются достаточными для лечения бородавок (например, посредством уменьшения размера или изменения формы бородавки или посредством ослабления симптома, связанного с бородавкой (например, боли, часто связанной с подошвенной (роговой) бородавкой); когда субъект имеет более чем одну бородавку, лечение может включать в себя уменьшение числа бородавок). Подобным образом, описанные композиции могут вводиться в количествах, которые являются достаточными для лечения заболевания (например, рака (такого как рак шейки матки или рак прямой кишки)), или другого состояния (например, дисплазии (такой как дисплазия шейки матки или прямой кишки)), которое вызвано инфекцией HPV или связано с инфекцией HPV. Хотя бородавки упоминаются отдельно выше, бородавки составляют также состояние, обусловленное или связанное с HPV. Врачам и специалистам в данной области понятно, что эффективное "лечение" бородавки или заболевания, связанного с HPV, будет иметь место при снижении нежелательного физиологического эффекта, связанного с бородавкой или заболеванием, или состоянием. Клинические и физиологические проявления бородавки, а также проявление заболевания или состояния, связанного с HPV-инфекцией, обсуждаются, например, в Fauci et al., Harrisson's Principles of Internal Medicine, 14th Edition, McGraw-Hill Press, New York, pp 302-303 и 1098-1100, 1998.
"Субъектами", для которых будет полезным применение описанных способов, являются субъекты, которые могут быть инфицированы вирусами папилломы (например, млекопитающие, такие как люди, домашний скот (например, коровы, лошади, свиньи, овцы и козы) и домашние животные (например, кошки и собаки)). Бородавкой может быть бородавка, которая встречается на гениталиях, коже или внутренних органах субъекта (например, бородавки, которые возникают на голосовых связках в случае рецидивирующего респираторного папилломатоза (RRP; также известного как юношеский папилломатоз гортани (JLP), или возникающего у взрослых RRP)).
Кроме того, данное изобретение включает применение описанных одной или более композиций (в том числе композиций, которые содержат белки, белковые конъюгаты или слитые белки или молекулы нуклеиновых кислот, которые их кодируют), для лечения субъекта, имеющего бородавки или стадающего заболеванием или состоянием, связанным (или вызываемым) HPV-инфекцией, в соответствии с описанными способами. Дополнительно данное изобретение включает применение одной или более таких композиций для производства лекарственного средства для лечения субъекта, который имеет бородавки или страдает заболеванием или состоянием, связанным с (или вызываемым) HPV-инфекцией, в соответствии с описанными способами.
"Антигенный фрагмент" белка (например, белка HPV) является любой частью этого белка, которая при введении в соответствии с описанными способами индуцирует в субъекте иммунную реакцию, которая является специфической либо в отношении фрагмента, либо в отношении белка, из которого этот фрагмент получен. Иммунная реакция может быть либо гуморальной, либо клеточной. Например, антигенным фрагментом может быть пептидный антиген HLA (главного комплекса гистосовместимости человека) класса I, такого как описанный ниже. Специалисту в данной области будет понятно, что иммунная реакция, желаемая в контексте данного изобретения, может быть вызвана не только интактными белками и их фрагментами, но также мутантными белками (например, белками, которые содержат одно или более добавлений, замен (например, консервативных аминокислотных замен) или делеций в своей аминокислотной последовательности). Мутантные антигены HPV могут быть легко изготовлены и тестированы на их способность работать в контексте данного изобретения.
"Иммуностимуляторный фрагмент" белка (например, hsp) является любой частью белка, которая при введении в соответствии с описанными способами способствует иммунной реакции, вызываемой антигеном. Например, если иммунная реакция на белок HPV облегчается при введении белка HPV с фрагментом hsp (например, HPV, слитого с hsp), этот фрагмент является иммуностимуляторным фрагментом hsp. Специалисту в данной области будет понятно, что иммунная реакция может также облегчаться мутантными hsp (например, hsp, которые содержат одно или более добавлений, замен (например, консервативных аминокислотных замен) или делеций в аминокислотной последовательности. Мутантные hsp могут быть легко получены и тестированы на их способность по облегчению иммунной реакции на антиген HPV.
Способы данного изобретения обеспечивают эффективные средства (1) лечения или профилактики бородавок и (2) лечения или профилактики заболевания или состояния, обусловленного инфекцией (или связанного с инфекцией) одним типом HPV, с использованием композиции, содержащей HPV другого типа. Таким образом композиция, содержащая антиген HPV единственного типа HPV, может быть использована у многих, если не у большинства субъектов, независимо от типа HPV, которым они инфицированы (или которыми они могут быть инфицированы). Неожиданным является то, что композиции HPV являются эффективными в этих обстоятельствах (т.е. обстоятельствах, требующих перекрестной реактивности). Считалось, что антигены HPV одного типа не могут вызывать эффективную иммунную реакцию против другого типа. Другие признаки или преимущества данного изобретения будут очевидными из нижеследующего подробного описания, а также из формулы изобретения.
Подробное описание
Данное изобретение относится к широко применимым эффективным терапевтическим агентам на основе HPV, содержащим hsp и белок HPV (например, белковый антиген). Без ограничения данного изобретения способами, в которых терапевтические агенты на основе HPV проявляют их действие посредством конкретного механизма, считается, что эти агенты вызывают иммунную реакцию, которая лечит бородавки и улучшает другие состояния (например, дисплазию) и заболевания (например, рак), связанные с HPV-инфекцией. Примечательно, что, хотя композиции данного изобретения могут содержать белок HPV из более чем одного типа HPV, они могут содержать белок HPV только из единственного типа. Кроме того, композиции, которые содержат белок HPV из единственного типа HPV, могут быть использованы при лечении или профилактике бородавок или других связанных с HPV заболеваний или состояний, которые вызываются HPV-инфекцией другого (т.е. отличающегося) типа. Ниже описаны различные материалы и процедуры, пригодные для применения в связи с данным изобретением.
Получение слитых белков
Последовательности нуклеиновых кислот, кодирующие hsp и белки HPV, известны и доступны специалистам в данной области. Таким образом, конструкции нуклеиновых кислот, кодирующие слитые (гибридные) полипептиды, применимые в способах данного изобретения, могут быть легко получены с использованием рутинных способов (подобным образом такие молекулы нуклеиновых кислот могут быть использованы для получения отдельно hsp и белков HPV; затем эти отдельные hsp и белки HPV могут быть скомбинированы физически (например, простым смешиванием друг с другом) или объединяться химической конъюгацией (см. ниже) или посредством дисульфидных связей). Примеры последовательностей нуклеиновых кислот, которые кодируют hsp, необязательно слитые с антигеном (например, антигеном HPV) были представлены в Международных патентных публикациях WO 89/12455, WO 94/29459, WO 98/23735 и WO 99/07860 и цитируемых в них ссылках. Способы, при помощи которых могут быть экспрессированы и очищены белки, в том числе слитые белки, описаны дополнительно ниже.
Получение белковых конъюгатов
Компонент (1) и компонент (2) могут быть также соединены посттрансляционной конъюгацией индивидуальных hsp и индивидуальных антигенов HPV. Способы химической конъюгации двух белков (или их частей) известны в данной области (см., например, способы, описанные Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, San Diego, CA, 1996; Lussow et al., Eur. J. Immun. 21:2297-2302, 1991; и Barrios et al., Eur. J. Immun. 22:1365-1372, 1992). Конъюгаты могут быть получены способами, которые используют сшивающие агенты, такие как глутаральдегид (который становится частью полученного конъюгата), или которые соединяют компонент (1) и компонент (2) дисульфидными связями. Можно использовать цистеиновые остатки, которые либо природно присутствуют, либо рекомбинантно встраиваются в hsp, антиген HPV или в оба для облегчения образования межмолекулярных дисульфидных связей. Композиции, содержащие hsp или их иммуностимуляторные фрагменты (т.е. компонент (1)), которые нековалентно связаны с антигенами HPV, могут быть получены, как описано в Патентах США №6048530; 6017544; 6017540; 6007821; 5985270; 5948646; 5935576; 5837251; 5837251; 5830464 или 5750119. См. также Патенты США №5997873; 5961979; 6030618; 6139841; 6156302; 6168793 и Международную патентную публикацию WO 97/06821.
Независимо от конечной конфигурации вводимой композиции компонент (1) и компонент (2) могут включать в себя следующее.
Белковые антигены HPV
Любой антиген HPV может быть использован в композициях (например, в описанных смесях, конъюгатах и слитых белках) данного изобретения. Однако особенно полезными должны быть антигены HPV, которые экспрессируют узнаваемые эпитопы на поверхности инфицированной HPV клетки. HPV экспрессирует шесть или семь неструктурных белков и два структурных белка, и каждый из них может служить в качестве мишени в иммунопрофилактическом или иммунотерапевтическом подходах, описанных здесь.
Вирусные капсидные белки L1 и L2 являются поздними структурными белками. L1 является основным капсидным белком, аминокислотная последовательность которого является высококонсервативной среди различных типов HPV. Имеются семь ранних неструктурных белков. Белки Е1, Е2 и Е4 играют важную роль в репликации вируса. Белок Е4 также играет роль в созревании вируса. Роль Е5 является менее хорошо известной. Белки Е6 и Е7 являются онкобелками, которые являются критическими для репликации вируса, а также для иммортализации и трансформации клетки-хозяина.
Белки теплового шока (hsp)
Были выделены, клонированы и охарактеризованы разнообразные hsp из множества различных организмов (Mizzen, Biotherapy 10:173-189, 1998; в данном описании изобретения термин "белок (белки) теплового шока" или его аббревиатура (hsp)) является синонимом с белками, называемыми "индуцируемыми стрессом белками"). Иммуностимуляторные hsp или их иммуностимуляторные фрагменты пригодны для применения в описанных композициях (например, в виде слитого полипептида). Hsp70, hsp60, hsp20-30 и hsp10 находятся среди основных детерминант, распознаваемых иммунными реакциями хозяина на инфекцию Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium leprae. Кроме того, было обнаружено, что hsp65 Bacille Calmette Guerin (BCG), штамма Mycobacterium bovis, является эффективным иммуностимуляторным агентом, как описано в примере ниже.
Семейства генов hsp и белков hsp, любые из которых могут быть использованы, как описано, в качестве компонента (1), хорошо известны в данной области. Они включают, например, Hsp100-200, Hsp100, Hsp90, Lon, Hsp70, Hsp60, TF55, Hsp40, FKBP, циклофилины, Hsp20-30, ClpP, GrpE, Hsp10, убиквитин, кальнексин и протеиндисульфидизомеразы. См., например, Macario, Cold Spring Harbor Laboratory Res. 25:59-70, 1995; Parsell et al., Rev. Genet. 27:437-496, 1993; и Патент США №5232833. Hsp могут происходить из hsp млекопитающих, бактерий или микобактерий, но не только из них.
Grp170 (регулируемый глюкозой белок) является примером hsp семейства hsp100-200. Grp170 находится в просвете эндоплазматического ретикулума, в пред-компартменте Гольджи и может играть роль в укладке и сборке иммуноглобулина.
Примеры hsp в семействе hsp100 включают Hsp110 млекопитающих, Hsp104 дрожжей и hsp ClpA, ClpB, ClpC, ClpX и ClpY E. coli.
Примеры hsp в семействе hsp90 включают HtpG в E. coli, Hsp83 и Hsс83 в дрожжах и Hsp90α, Hspβ и Grp94 у людей. Hsp90 связывает группы белков, которые являются обычно клеточными регуляторными молекулами, такими как рецепторы стероидных гормонов (например, рецепторы глюкокортикоида, эстрогена, прогестерона и тестостерона), факторы транскрипции и протеинкиназы, которые играют роль в механизмах передачи сигналов. Белки Hsp90 также участвуют в образовании больших, обильных белковых комплексов, которые включают другие стрессовые белки.
Lon является тетрамерной АТФ-зависимой протеазой, которая разрушает неприродные белки в E. coli.
Примеры hsp семейства hsp70 включают Hsp72 и Hsc73 клеток млекопитающих, DnaK бактерий или микобактерий, таких как Mycobacterium leprae, Mycobacterium tuberculosis и Mycobacterium bovis (например, Bacille-Calmette Guerin; называемый здесь hsp71), DnaK из E. coli, дрожжей и других прокариот и BiP и Grp78. Hsp70 способен специфически связывать АТФ, а также не уложенные полипептиды и пептиды; hsp70 участвует в укладке и разложении, а также в сборке и нарушении сборки белковых комплексов.
Примером hsp семейства Hsp60 является Hsp65 микобактерий. Бактериальный Hsp60 обычно известен также как GroEL. Hsp60 образует большие гомоолигомерные комплексы и, по-видимому, играет ключевую роль в укладке белков. Гомологи hsp60 присутствуют в эукариотических митохондриях и хлоропластах.
Примеры hsp в семействе TF55 включают Tcpl, TRiC и термосому. Эти белки обычно встречаются в цитоплазме эукариот и некоторых архебактерий и они образуют мультимерные кольца, стимулируя укладку белка. Они являются также слабо гомологичными Hsp60.
Примеры hsp семейства Hsp40 включают DnaJ прокариот, таких как E. coli и микобактерии, и HSJ1, HDJ1 и Hsp40. Hsp40 играет роль "молекулярного наставника" в укладке белка, термоустойчивости и репликации ДНК, среди других клеточных активностей.
Примеры FKBP включают в себя FKBP12, FKBP13, FKBP25 и FKBP59, Fprl и Nepl. Эти белки обычно имеют пептидилпролилизомеразную активность и взаимодействуют с иммуносупрессорами, такими как FK506 и рапамицин. Эти белки обычно обнаруживаются в цитоплазме и эндоплазматическом ретикулуме.
Примеры циклофилинов включают циклофилины А, В и С. Эти белки обладают пептидилпролилизомеразной активностью и взаимодействуют с иммуносупрессором циклоспорином А.
Hsp20-30 называют также малым Hsp. Hsp20-30 обычно обнаруживается в больших гомоолигомерных комплексах или, возможно, гетероолигомерных комплексах. Организм или тип клетки может экспрессировать несколько различных типов малых Hsp. Hsp20-30 взаимодействует со структурами цитоскелета и может играть регуляторную роль в полимеризации/деполимеризации актина. Hsp20-30 быстро фосфорилируется при стрессе или под действием покоящихся клеток факторами роста. Гомологи Hsp20-30 включают альфа-кристаллин.
ClpP является протеазой E. coli, участвующей в разрушении дефектных белков. Гомологи ClpP обнаружены в хлоропластах. ClpP образует гетероолигомерный комплекс с ClpA.
GrpE является белком приблизительно 20 кДа E. coli, который участвует в спасении поврежденных стрессом белков, а также в разрушении поврежденных белков. GrpE играет роль в регуляции стрессовой экспрессии генов в E. coli.
Примеры Hsp10 включают GroES и Cpn10. Hsp10 обнаружен в E. coli и в митохондриях и хлоропластах эукариотических клеток. Hsp10 образует семичленное кольцо, которое связывается с олигомерами Hsp60. Hsp10 участвует также в укладке белка.
Было обнаружено, что убиквитин связывает белки в координации с протеолитическим удалением белков АТФ-завивисимыми цитозольными протеазами.
Стрессовые белки, применимые в данном изобретении, могут быть получены из энтеробактерий (например, E. coli), микобактерий (в частности, M. leprae, M. tuberculosis, M. vaccae, M. smegmatis и M. bovis), дрожжей, Drosophila, позвоночных (например, птиц и/или млекопитающих, таких как грызуны или приматы, включая людей).
Экспрессия и очистка белков
Белки могут быть получены рекомбинантными способами. Более конкретно, hsp (или их фрагменты) и антигены HPV (или их фрагменты), которые могут вводиться раздельно, в комбинации или после конъюгации, а также в виде слитых (гибридных) белков, содержащих компонент (1) и компонент (2), могут быть получены рекомбинантно в бактериях, дрожжах, растениях или клетках растений или животных или клетках животных. Например, hsp, антигены HPV и слитые белки, содержащие их, могут быть получены трансформацией (т.е. трансфекцией, трансдукцией или инфицированием) клетки-хозяина последовательностью нуклеиновой кислоты в подходящем экспрессионном носителе. Подходящие экспрессионные носители включают плазмиды, вирусные частицы и фаги. Для клеток насекомых подходящими являются бакуловирусные векторы. Весь экспрессионный носитель или его часть могут быть интегрированы в геном клетки-хозяина. В некоторых случаях желательно использовать индуцируемый экспрессирующий вектор, например систему индуцируемой экспрессии LACSWITCH® (Stratagene; La Jolla, CA).
Специалистам в области молекулярной биологии будет понятно, что любая из большого разнообразия систем экспрессии может быть использована для получения рекомбинантных белков (например, слитых белков), применимых в описанных способах. Конкретные клетка-хозяин и вектор, используемые в данном изобретении, не являются существенными для изобретения.
Как отмечалось выше, компонент (1), компонент (2) и слитые белки, содержащие их, могут продуцироваться клетками растений. Для клеток растений подходящими являются вирусные экспрессирующие векторы (например, вирус мозаики цветной капусты и вирус мозаики табака) и плазмидные экспрессирующие векторы (например, Ti-плазмида). Такие клетки доступны из большого диапазона источников (например, American Type Culture Collection, Manassas, VA; см. также, например, Ausubel et al. Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley and Sons, New York, 1994). Способы трансформации и выбор экспрессирующего носителя будут зависеть от выбранной системы-хозяина. Способы трансформации описаны, например, в Ausubel (выше). Экспрессирующие носители могут быть выбраны из описанных, например, в Pouwels et al., Cloning Vectors: A Laboratory Manual, 1985, Supp. 1987.
Клетки-хозяева, несущие экспрессирующий носитель, могут культивироваться в общепринятой питательной среде, адаптированной, как это необходимо, для активации или репрессии выбранного гена, отбора трансформантов или амплификации выбранного гена.
Когда это приемлемо или полезно, нуклеиновая кислота, кодирующая слитый белок, может включать сигнальную последовательность для экскреции слитого белка, например, для облегчения выделения белка из культуры клеток. Могут также требоваться специфические сигналы инициации для эффективной трансляции встроенных последовательностей нуклеиновых кислот. Эти сигналы включают инициирующий кодон ATG и смежные с ним последовательности. В некоторых случаях должны быть обеспечены экзогенные сигналы регуляции трансляции, в том числе, возможно, инициирующий кодон ATG. Кроме того, инициирующий кодон должен находиться в фазе с рамкой считывания желаемой кодирующей последовательности для обеспечения трансляции всей вставки. Эти экзогенные сигналы регуляции трансляции и инициирующие кодоны могут быть различного происхождения, как природные, так и синтетические. Эффективность экспрессии может быть усилена включением подходящих энхансерных элементов транскрипции и трансляции (например, энхансерных элементов, описанных в Bittner et al., Methods in Enzymol. 153:516, 1987).
Компонент (1), компонент (2) и слитые белки, содержащие их, могут быть растворимыми в нормальных физиологических условиях. Кроме того, такие слитые белки могут включать один или более посторонних (т.е. не являющихся hsp или HPV) белков (целых белков или их части) для получения по крайней мере тройного (состоящего из трех частей) слитого белка. "Третий" белок может быть белком, который способствует очистке, обнаружению или солюбилизации слитых белков или который обеспечивает некую другую функцию. Например, экспрессирующий вектор pUR278 (Ruther et al., EMBO J. 2:1791, 1983) может быть использован для создания lacZ-слитых белков, а векторы pGEX могут быть использованы для экспрессии чужеродных полипептидов в виде слитых белков, содержащих глутатион-S-трансферазу (GST). Обычно такие слитые белки являются растворимыми и могут быть легко очищены из лизированных клеток адсорбцией на содержащих глутатион агарозных гранулах с последующей элюцией в присутствии свободного глутатиона. Векторы pGEX сконструированы таким образом, что они содержат сайты расщепления тромбином или фактором Ха, так что клонированный генный продукт-мишень может высовобождаться из GST-части молекулы. "Третьим" белком может быть также Fc-домен иммуноглобулина. Такой слитый белок может быть легко очищен с использованием аффинной колонки. Конечно, слитые белки, используемые в способах данного изобретения, могут включать в себя более чем один компонент (1) и/или более чем один компонент (2), и компоненты (1) и (2) могут быть прямо или опосредованно связаны (например, между ними могут присутствовать один или более аминокислотных остатков).
Белок (например, hsp, антиген HPV или hsp-содержащий слитый белок) может быть очищен с использованием антитела, с которым этот белок специфически связывается. Специалист в данной области сможет использовать способы очистки на основе аффинности для очистки белков. Например, см. Janknecht et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:8972, 1981 для очистки неденатурированных слитых белков, экспрессируемых клеточными линиями человека. В этой системе представляющий интерес ген субклонируют в плазмиду рекомбинации вируса коровьей оспы, так что открытая рамка считывания гена является трансляционно связанной с аминоконцевой меткой, состоящей из шести остатков гистидина. Экстракты из клеток, инфицированных рекомбинантным вирусом коровьей оспы, наносили на колонки с Ni2+-содержащей связанной с нитрилоуксусной кислотой агарозой и меченые гистидином белки избирательно элюировали имидазолсодержащими буферами. Такую же процедуру использовали для бактериальной культуры.
Белки, в том числе слитые белки (в частности, белки, содержащие короткие антигенные фрагменты) могут быть также получены химическим синтезом (например, способами, описанными в Solid Phase Peptide Synthesis, 2nd ed., 1984 The Pierce Chemical Co., Rockford, IL).
После выделения, если желательно, белки могут дополнительно очищаться и/или концентрироваться до тех пор, пока дальнейший процессинг не будет нарушать их способность индуцировать иммунную реакцию, достаточную, чтобы быть эффективной в способах данного изобретения. Многочисленные способы для очистки и концентрирования белков хорошо известны в данной области (см., например, Fisher, Laboratory Techniques In Biochemistry And Molecular Biology, Work and Burdon, Eds., Elsevier, 1980), в том числе ультрацентрифугирование и/или осаждение (например, сульфатом аммония), микрофильтрация (например, через целлюлоза-ацетатные фильтры 0,45 мкм), ультрафильтрация (например, с использованием фракционирующих по размеру мембран и рециркуляционной фильтрации), гель-фильтрация (например, колонки, наполненные Сефарозой CL-6B, CL-4B, CL-2B, 6B, 4B или 2В, Сефакрилом S-400 или S-300, Суперозой 6 или Ультрагелем А2, А4 или А6; все из которых доступны из Pharmacia Corp.), жидкостная экспресс-хроматография белков (FPLC) и высокоэффективная жидкостная хроматография (HPLC).
Перекрестно-реагирующие последовательности HPV
Специалист в данной области способен определить, может ли композиция, содержащая антиген HPV первого типа, быть использована для лечения субъекта, который был инфицирован вторым типом HPV. Анализы, на которых может быть основано такое определение, включают предполагаемые анализы (например, анализы, использующие компьютерные модели) и биологические анализы (в которых проводят тестирование на перекрестную реактивность). Могут быть использованы один тип или оба типа анализа (неудивительно, что результаты, полученные в предполагаемом анализе, было бы желательно дополнительно испытать в биологическом анализе). Далее следуют примеры каждого из анализов.
Может быть испытана перекрестная реактивность (т.е. способность композиции, содержащей антиген HPV одного типа, эффективно лечить субъекта, который инфицирован HPV другого типа или который страдает заболеванием или состоянием, связанным с HPV другого типа) с использованием хорошо установившихся иммунологических способов. Например, для демонстрации иммунной перекрестной реактивности могут быть использованы битрансгенные мыши, сконструированные для экспрессии антигенсвязывающего района молекулы МНС класса I человека и гена CD8 человека (Lustgarten et al., Human Immunol. 52:109, 1997; Vitiello et al., J. Exp. Med. 173:1007, 1991).
Более конкретно, битрансгенная мышь HLA-А2/CD8 (Lustgarten et al., выше) может быть использована для демонстрации перекрестной реактивности цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), индуцированных в ответ на Е7 HPV16, против пептидов, полученных из белка Е7 HPV6 и 11, с использованием стандартных иммунологических способов (см., например, Coligan et al. Eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley and Sons, 1999). Вкратце, мышей иммунизируют один-три раза с интервалами 7-21 день слитым белком HspЕ7 (на основе молекул Hsp65 BCG и Е7 HPV16). HspЕ7 суспендируют в забуференном фосфатом солевом растворе (ЗФР) и вводят подкожно в дозе от 1 мкг до 1000 мкг на мышь. Спустя семь дней после последнего введения HspЕ7 мышей умерщвляют, их селезенки извлекают и эту ткань диссоциируют в суспензию отдельных клеток. CTL, которые являются специфическими в отношении Е7 HPV, повторно стимулируют добавлением HLA-А2-связывающих пептидов, полученных из Е7 HPV16, Е7 HPV6 и Е7 HPV11, в культуральную среду в концентрации 1 мкМ. Эти клетки могут быть повторно стимулированы, например, в 6-луночных планшетах, имеющих различные пептиды в каждой из лунок. Эти пептиды (например, десять пептидов) с наивысшей предсказанной HLA-А2-связывающей аффинностью, определенной с использованием компьютерного алгоритма, могут быть использованы для каждого из HPV16, HPV6 и HPV11 (или другого типа HPV; см. Parker et al., J. Immunol. 152:163, 1994; этот алгоритм доступен также в интернете через веб-сайт BIMAS (Bioinformatics and Molecular Analysis Section) Национального института здравоохранения (доступного 26 июня 2001 на http://bimas.dcrt.nih.gov/). Кроме того, в другом случае могут также использоваться соответствующие пептиды из двух других генотипов HPV (т.е. пептид 11-20 Е7 HPV16 и пептиды 11-20 HPV6 и HPV11).
После некоторого периода времени (например, одной недели) после повторной стимуляции in vitro активность CTL может быть измерена с использованием лизиса клеток-мишеней Т2, кратковременно обработанных HLA-А2-связывающими пептидами, полученными из Е7 HPV16, Е7 HPV6 и Е7 HPV11. Кроме того, антигенспецифические Т-лимфоциты, которые распознают HLA-А2-связывающие пептиды, полученные из Е7 HPV16, Е7 HPV6 и Е7 HPV11, могут быть измерены при помощи анализа ELISPOT секретирующих IFN-γ клеток с использованием ранее описанных способов (Asal et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:145, 2000). Эти анализы могли бы выполняться в мышах, трансгенных в отношении других аллелей HLA.
Альтернативно может быть измерена способность CTL, которые индуцируются иммунизацией с использованием HspЕ7, перекрестно реагировать с пептидами, полученными из белков Е7 HPV6 или HPV11 в HLA-А2-положительных субъектах, подвергающихся курсу терапии для лечения генитальных бородавок (остроконечных кондилом) с использованием HspЕ7. Мононуклеарные клетки периферической крови (PBMC) могут быть выделены из субъектов (например, пациентов-людей) перед лечением и спустя несколько дней (например, 7 дней) после каждой обработки HspЕ7. Эти клетки могут быть подвергнуты анализу с использованием флуорогенных МНС-пептидных комплексов (тетрамеров, Altman et al., Science 274:94, 1996) или с использованием анализа ELISPOT (Asal et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:145, 2000). Клетки могут анализироваться непосредственно из периферической крови и после повторной стимуляции in vitro, как описано Youde et al. (Cancer Res. 60:365, 2000). Для повторной стимуляции in vitro 2 х 106/мл PBMC культивируют в среде RPMI1640 с 10% сывороткой АВ человека (RAB) и пептидом в концентрации 10 мкг/мл. Пептиды для повторной стимуляции могут быть получены из Е7 HPV16 и содержать пептиды (например, десять пептидов) с наивысшей предсказанной HLA-А2-связывающей аффинностью, как определено с использованием компьютерного алгоритма (Parker et al., выше). В день 4 в каждую лунку добавляют 1 мл RAB, содержащей 25 единиц/мл IL-2. В день 6 1 мл среды заменяют на 1 мл среды, содержащей 10 единиц/мл IL-2. В день 7 облученные аутологичные PBMC (свежие или замороженные и затем оттаявшие) ресуспендируют при 3х106 клеток/мл в RAB, содержащей 10 мкг/мл пептида и 3 мкг/мл β2-микроглобулина. Антигенпредставляющим клеткам дают прикрепляться в течение двух часов и затем промывают для удаления непрекрепленных клеток перед добавлением 1-2×106 эффекторных клеток/мл. В день 9 в каждую лунку добавляют один мл RAB, содержащей 25 единиц/мл IL-2. В день 13 содержимое лунок разделяют во множественные планшеты и среду (содержащую 10 единиц/мл IL-2) восстанавливают до исходного объема. Эти клетки используют в день 14. Для FACS-анализа получают тетрамеры, как описано ранее (Altman et al., Science 274:94, 1996). Пептидами, используемыми для загрузки тетрамеров, являются HLA-А2-связывающие пептиды, полученные из молекулы Е7 HPV16, HPV6 и HPV11. Пептиды (например, десять пептидов) с наивысшей предсказанной HLA-А2-связывающей активностью, определенной с использованием компьютерного алгоритма (Parker et al., выше), используют для каждого из HPV16, HPV6 и HPV11. Кроме того, альтернативно, используют также соответствующие пептиды из двух других генотипов HPV (т.е. пептид 11-20 Е7 HPV16 и пептиды 11-20 Е7 HPV6 и HPV11). Свежие или повторно стимулированные PBMC окрашивают РЕ-мечеными тетрамерами пептида Е7 HPV и FITC-меченым антителом против CD8 и анализируют проточной цитометрией, как было описано. Анализ ELISPOT антигенспецифических Т-лимфоцитов, которые распознают HLA-А2-связывающие пептиды, происходящие из Е7 HPV16, Е7 HPV6 и Е7 HPV11, присутствующие в свежих и повторно стимулированных РВМС, выполняют с использованием ранее описанных способов (Asal et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:145, 2000). Подобным образом эти способы могут быть применены к субъектам с другими гаплотипами HLA.
Кроме того, можно тестировать способность РВМС человека, полученных из HLA-А2-положительных здоровых добровольцев, на лечившихся ранее HspЕ7, стимулированных in vitro белком или пептидами HspЕ7, полученными из Е7 HPV типа 16, перекрестно реагировать с клетками, кратковременно обработанными соответствующими пептидами из двух других генотипов HPV (6 и 11). Клетки стимулируют и анализируют с использованием процедур, общепринятых в данной области. Вкратце, РВМС выделяют из периферической крови, прикрепленные клетки отделяют от неприкрепленных клеток и прикрепленные клетки культивируют с получением дендритных клеток (DC), как описано в Current Protocols in Immunology (Coligan et al., Eds., John Wiley and Sons, pp.7.32.7-8, 1999). Неприкрепленные клетки криосохраняют в 90% ФТС/10% ДМСО для использования в более поздней временной точке в этом анализе.
Для стимуляции дендритные клетки (DC) кратковременно обрабатывают 50 мкг/мл HspЕ7 или 40 мкг/мл подходящего пептида и 3 мкг/мл β2-микроглуболина в течение 24 часов при 37оС, 5% СО2 (Kawashima et al., Human Immunol. 59:1, 1998). Используемыми пептидами являются HLA-А2-связывающие пептиды, полученные из молекулы Е7 HPV16, HPV6 и HPV11. Пептиды (например, десять пептидов) с наивысшей предсказанной HLA-А2-связывающей активностью, определенной с использованием компьютерного алгоритма (Parker et al., выше), используют для каждого из HPV16, HPV6 и HPV11. Кроме того, альтернативно, используют также соответствующие пептиды из двух других генотипов HPV (т.е. пептид 11-20 Е7 HPV16 и пептиды 11-20 Е7 HPV6 и HPV11). CD8+-клетки выделяют из криосохраняемых, аутологичных неприкрепленных клеток с использованием позитивного отбора с применением иммуномагнитных гранул (Miltenyi Biotec). Нагруженные пептидом/белком DC облучают при 4200 рад и смешивают с аутологичными CD8+-клетками в соотношении 1:20, например, в 48-луночных планшетах, содержащих 0,25×105 дендритных клеток (DC) и 5×105 CD8+-клеток и 10 нг/мл IL-7 в 0,5 мл RAB. В дни 7 и 14 эти клетки повторно стимулируют кратковременно обработанными пептидом аутологичными антигенпредставляющими клетками (АРС) (Kawashima et al., Human Immunol. 59:1, 1998). Каждые 2-3 дня в культуры подают 10 единиц/мл hIL-2. Е7-пептид HPV-специфические Т-лимфоциты анализируют с использованием флуорогенных МНС-пептидных комплексов (тетрамеров, Altman et al., Science 274:94, 1996) или при помощи ELISPOT-анализа (Asal et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:145, 2000) после 7 и 14 дней стимуляции in vitro. Для FACS-анализа тетрамеры получают, как описано ранее (Altman et al., Science 274:94, 1996). Пептидами, используемыми для загрузки тетрамеров, являются HLA-А2-связывающие пептиды, полученные из молекулы Е7 HPV16, HPV6 и HPV11, как описано выше. Пептид-специфические Т-лимфоциты окрашивают РЕ-мечеными тетрамерами пептида Е7 HPV и FITC-меченым антителом против CD8 и анализируют проточной цитометрией (Youde et al., Cancer Res. 60:365, 2000). Анализ ELISPOT антигенспецифических Т-лимфоцитов, которые распознают HLA-А2-связывающие пептиды, происходящие из Е7 HPV16, Е7 HPV6 и Е7 HPV11, выполняют с использованием ранее описанных способов (Asal et al., Clin. Diagn. Lab. Immunol. 7:145, 2000). Подобным образом эти способы могут быть применены к субъектам с другими гаплотипами HLA.
Введение композиций
Данное изобретение включает композиции, содержащие по меньшей мере один белковый антиген HPV (например, белковый антиген HPV (или его антигенный фрагмент), белковый антиген HPV, смешанный или конъюгированный с белком теплового шока (hsp) (или его иммуностимуляторным фрагментом), или слитый белок, содержащий белковый антиген HPV (или его антигенный фрагмент) и hsp (или его иммуностимуляторный фрагмент). Необязательно, эти белки могут быть суспендированы в фармацевтически приемлемом носителе, таком как разбавитель (например, ЗФР) или раствор бикарбоната (например, 0,24 М NaHCO3). Применимые носители выбирают на основании схемы и пути введения и в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Подходящие фармацевтические носители и разбавители, а также фармацевтические требования для их применения, описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences. Может быть также включен адъювант, например, холерный токсин, термолабильный энтеротоксин (LT) Escherichia coli, липосома или иммуностимулирующий комплекс (ISCOM).
Белок (белки) (например, слитый белок) не должен обязательно вводиться субъекту непосредственно. Вместо этого может быть введена нуклеиновая кислота, кодирующая данный белок; причем белок экспрессируется в субъекте in vivo. Нуклеиновая кислота может быть частью вектора (такого как вирусный вектор, например, частью генома вирусного вектора) или может быть инкапсулирована, например, в липосомах. Альтернативно нуклеиновая кислота может доставляться в виде "голой" нуклеиновой кислоты.
Композиции могут быть приготовлены в виде раствора, суспензии, суппозитория, таблетки, гранул, порошка, капсулы, мази или крема. Как отмечалось выше, в приготовлении этих композиций могут быть использованы один или более фармацевтических носителей. Дополнительные примеры фармацевтически приемлемых носителей или других добавок включают растворители (например, воду или физиологический раствор), солюбилизирующие агенты (например, этанол, полисорбаты или Кремофор EL®), агенты для придания изотоничности, консерванты, антиоксиданты, наполнители (например, лактозу, крахмал, кристаллическую целлюлозу, маннит, мальтозу, гидрофосфат кальция, рыхлый ангидрид кремниевой кислоты или карбонат кальция), связывающие вещества (например, крахмал, поливинилпирролидон, гидроксипропилцеллюлозу, этилцеллюлозу, карбоксиметилцеллюлозу или аравийскую камедь), смазывающие вещества (например, стеарат магния, тальк или отверждаемые масла) или стабилизаторы (например, лактозу, маннит, мальтозу, полисорбаты, макрогели или полиоксиэтиленовые отверждаемые касторовые масла). Если необходимо (или желательно), могут добавляться глицерин, диметилацетамид, лактат натрия, поверхностно-активное вещество, гидроксид натрия, этилендиамин, этаноламин, бикарбонат натрия, аргинин, меглумин или трисаминометан. Биодеградируемые полимеры, такие как сополимеры D,L-лактида и гликолида или полигликолиды, могут быть использованы в качестве объемного матрикса в том случае, когда желательным является получение композиции с пролонгированным действием (см., например, Патенты США 5417986, 4675381 и 4450150). Фармацевтические препараты, такие как растворы, таблетки, гранулы или капсулы, могут быть образованы с этими компонентами. Если композиция вводится перорально, могут быть добавлены улучшающие вкус и запах агенты и красители.
Терапевтические композиции могут вводиться любым подходящим путем, например, внутривенно, внутриартериально, местно, внутрибрюшинно, внутриплеврально, перорально, подкожно, внутримышечно, внутрикожно, подъязычно, интраэпидермально, через нос, внутрилегочно (например, ингаляцией), вагинально или ректально.
Количество вводимой композиции будет зависеть, например, от конкретной композиции, от того, вводится ли вместе с композицией адъювант, типа вводимого адъюванта, способа и частоты введения и желательного эффекта (например, защиты или лечения). Дозы обычно определяются специалистом в данной области в ходе разработки лекарственных средств или профилактических агентов. Обычно композиции данного изобретения вводят в количествах в диапазоне между 1 мкг и 100 мг на одну дозу для взрослого человека. Если с данными композициями вводятся адъюванты, используются количества в диапазоне между 1 нг и 1 мг на дозу для взрослого человека. Введение повторяют по мере необходимости, как может быть определено специалистом в данной области. Например, за прайминг-дозой могут следовать три бустер-дозы с недельными или месячными интервалами. Бустер-доза может быть назначена через 3-12 недели после первого введения, а вторая бустер-доза может быть назначена спустя 3-12 недели с использованием той же самой композиции. Могут быть взяты сыворотка или Т-клетки из субъекта для тестирования иммунной реакции, индуцируемой композицией против антигена HPV, включенного, например, в слитый белок или белковый конъюгат. Способы анализа антител или токсических Т-клеток против специфического антигена хорошо известны в данной области. Если необходимо, могут вводиться дополнительные бустер-дозы. Посредством варьирования количества, например, слитого белка в композиции протокол иммунизации может быть оптимизирован для индукции максимальной иммунной реакции.
Конечно, описанные здесь белки могут также доставляться введением нуклеиновой кислоты, такой как вирусный вектор (например, ретровирусный или аденовирусный вектор).
Авторы изобретения считают, что без дополнительного объяснения, на основании приведенного выше описания и приведенного ниже примера специалист в данной области сможет использовать данное изобретение в его самой полной степени. Следующий далее пример должен рассматриваться лишь как иллюстрирующий, каким образом специалист в данной области может выделить и использовать слитые полипептиды, и не является ограничивающим каким-либо образом данное изобретение.
ПРИМЕР
Слитый полипептид, содержащий Hsp65 BCG M. bovis, связанный с белком Е7 HPV типа 16, был рекомбинантно получен и приготовлен, как описано в WO 99/07860. Hsp65 является членом Hsp60-семейства индуцированных стрессом белков. В ходе клинического испытания человека для тестирования эффективности этого слитого полипептида в лечении анальных сквамозных внутриэпителиальных повреждений высокой степени (HSIL) было сделано следующее наблюдение.
Двадцать два пациента участвовали в рандомизированном, двойном слепом, контролируемом плацебо мультицентровом испытании HspЕ7 в лечении анальных HSIL. Подходящие пациенты имели подтвержденные при помощи биопсии анальные HSIL и были отрицательными в отношении вируса иммунодефицита человека (ВИЧ). Пациентов типировали в отношении HPV с использованием клеток, полученных из анального мазка, но не требовалось, чтобы они имели HPV-16. Индивидуальные повреждения не типировали в отношении HPV. Пациенты получали три подкожные инъекции 100 мкг либо HspЕ7, либо плацебо с месячными интервалами. Их оценивали в отношении реакции на лечение взятием анальных мазков на Pap, аноскопией с высоким разрешением (HRA) с биопсией и общей оценкой врача. Пациентов, не поддающихся лечению (т.е. пациентов со стойкими анальными HSIL), через 12-24 недель в этом контролируемом испытании переводили на открытое испытание, где они получали три инъекции 500 мкг HspЕ7 с месячными интервалами. Лечение представляло собой двойное слепое, контролируемое плацебо клиническое испытание и "слепота" не нарушалась.
Для определения типа (типов) HPV, инфицирующего пациентов, использовали тампон Dacron для сбора образцов из ануса пациентов во время процедуры скрининга (обследования) рандомизированного, контролируемого плацебо испытания, непосредственно перед биопсией. После переноса в среду для транспортировки проб (Digene) выделяли ДНК и использовали ее для определения типа HPV. Вкратце, использовали набор консенсусных праймеров MY09/MY11 для амплификации ДНК HPV полимеразной цепной реакцией (ПЦР). После стадии амплификации пробы блотировали (промакали) на найлоновую мембрану и зондировали мечеными биотином олигонуклеотидами, специфическими в отношении 29 различных типов HPV (6, 11, 16, 18, 26, 31, 32, 33, 35, 39, 40, 45, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 58, 59, 61, 66, 68, 69, 70, 73, АЕ2, Рар155 и Рар291), плюс объединенным зондом, содержащим праймеры для 10 типов HPV (2, 13, 34, 42, 57, 62, 64, 67, 72 и W13B). Пробы, которые давали "дот-блот", оценивали в баллах как положительные или негативные в отношении типа HPV сравнением со стандартизованными контролями с использованием 5-балльной шкалы; бал 1 или более был положительным.
Для подтверждения, что ПЦР была успешной, для каждой пробы выполняли контрольную амплификацию с бета-глобином и детектирование при помощи зонда. Если проба не была положительной в присутствии бета-глобина, эту стадию считали технической ошибкой. Если консенсусный зонд не давал оценку 2 или более высокую оценку, пробу считали "HPV-отрицательной".
В момент их вступления в открытое испытание 14 из 22 пациентов (64%) имели аногенитальные бородавки, которые сохранялись стойко во время всего предыдущего двойного слепого испытания, в котором они получали три ежемесячные инъекции 100 мкг либо HspЕ7, либо плацебо. Из этих 14 пациентов 8 пациентов (57%) показали ухудшение, 4 пациента (29%) не имели изменений и 2 пациента (14%) имели улучшение (одно сильное, а другое минимальное) в тот момент, когда их переводили в открытое испытание. Дополнительный пациент имел кондилому, присутствующую в начале двойного слепого испытания, которая исчезла перед началом открытого испытания, и он был исключен из этого анализа, как и семь других пациентов, которые не имели детектируемых кондилом во время каждого из испытаний. Кондиломы присутствовали в аноректальном канале у всех 14 пациентов (100%) и кроме того на околоанальной коже у 6 из 14 пациентов (43%). Из 14 пациентов с бородавками в начале открытого испытания исследователь этого участка испытаний определил, что хирургическое удаление требовалось для 11 пациентов (79%), локальное удаление (например, жидким азотом, электрокаутеризацией) требовалось для 2 пациентов (14%) и местная обработка (т.е. imiquimod) требовалась для одного пациента (7%). Эти пациенты предпочли отложить рекомендуемое этим исследователем лечение и дали вместо этого согласие получить три инъекции по 500 мкг HspЕ7 с месячными интервалами в открытом испытании.
Спустя один месяц после последнего назначения 500 мкг HspЕ7 2 пациента (14%) не имели детектируемых кондилом, 11 пациентов (79%) имели уменьшение размеров или числа бородавок в сравнении с их состоянием при вступлении в открытое испытание и 1 пациент (7%) имел увеличение размера бородавки (таблица 1). В момент первичной оценки открытого испытания (спустя 4 месяца после последней дозы) один дополнительный пациент испытывал улучшение от частичной до полной реакции (т.е. отсутствие видимых кондилом), что составило в целом три полностью реагирующих на лечение (21%) пациента (таблица 1). Ни у одного из этих реагирующих на лечение пациентов в открытом испытании не было рецидива в течение последующих шести месяцев. Десять пациентов (71%) продолжали проявлять улучшение в виде частичной реакции (т.е. бородавки уменьшались дополнительно в размере значимо с продолжающимся уменьшением степени лечения, необходимым для удаления остальных бородавок). Один не реагирующий на это лечение пациент (7%) не обнаружил улучшения в конце открытого испытания.
ТАБЛИЦА 1 | ||
Суммирование реакции аногенитальных бородавок при лечении HspЕ7 | ||
Результат |
Число (%) пациентов | |
Неделя 12* | Неделя 24** | |
(n=14) | (n=14) | |
Пациенты с полной реакцией | 2 (14) | 3 (21) |
Пациенты с частичной реакцией | 11 (79) | 10 (71) |
Пациенты без реакции | 1 (7) | 1 (7) |
* Спустя один месяц после последнего лечения 500 мкг HspЕ7. ** Спустя 4 месяца после последнего лечения 500 мкг HspЕ7. |
В конце этого испытания исследователь этого участка испытаний не рекомендовал дальнейшее лечение для трех пациентов с полной реакцией. Как указано в таблице 2, рекомендуемой исследователем этого участка испытаний обработкой для пациентов с частичной реакцией была удаляющая терапия (6 из 14,43%) или обработка агентом для местного применения (4 из 14,29%); дополнительная хирургия была рекомендована для пациентов, не реагирующих на лечение (1 из 14,7%). Все 22 пациента вошли в регистрационный протокол для долгосрочного доведения до конца их ответной реакции, и они согласились отложить рекомендуемое этим исследователем лечение.
ТАБЛИЦА 2 | |||||
Оценки реакции аногенитальных бородавок и рекомендуемая клиницистом терапия | |||||
Фон* | Неделя 12** | Неделя 24*** | |||
Число пациентов | Рекомендованное лечение | Реакция бородавок | Рекомендованное лечение | Реакция бородавок | Рекомендованное лечение |
003 | Хирургия | CR | Местная | CR | Никакого лечения |
004 | Хирургия | PR | Удаление | PR | Удаление |
005 | Местная | PR | Местная | CR | Никакого лечения |
006 | Хирургия | PR | Хирургия | PR | Удаление |
008 | Удаление | PR | Местная | PR | Местная |
009 | Хирургия | PR | Удаление | PR | Местная |
010 | Хирургия | PR | Удаление | PR | Удаление |
011 | Хирургия | CR | Местная | CR | Никакого лечения |
014 | Хирургия | PR | Местная | PR | Местная |
016 | Хирургия | Ухудшение | Хирургия | Ухудшение | Хирургия |
017 | Удаление | PR | Местная | PR | Местная |
020 | Хирургия | PR | Удаление | PR | Удаление |
021 | Хирургия | PR | Удаление | PR | Удаление |
022 | Хирургия | PR | Удаление | PR | Удаление |
* Базовая линия (Фон) относится к началу открытого испытания. ** Спустя один месяц после последнего лечения 500 мкг HspЕ7. *** Спустя 4 месяца после последнего лечения 500 мкг HspЕ7. Аббревиатуры: CR=полная реакция; PR=частичная реакция. |
У всех 14 пациентах с аногенитальными бородавками (кондиломами) в пробах анальных мазков во время первого, рандомизированного, контролируемого плацебо испытания детектировали ДНК HPV множественных типов HPV (таблица 3). HPV-6 и/или HPV-11 присутствовали в 12 пациентах (86%). Один пациент имел только HPV-16 и родственные типы, а другого пациента не удалось типировать. Три из 14 пациентов (21%) были положительными в отношении HPV-16. Большинство пациентов, которые имели улучшение в размере или числе бородавок (11 из 13, 85%) не имели HPV-16. Не рагирующие на лечение пациенты не имели HPV-16 (см. таблицу 3).
ТАБЛИЦА 3 | ||
Типы HPV у пациентов с аногенитальными бородавками | ||
Число пациентов | Тип HPV в образцах анальных мазков при обследовании* | Реакция бородавок (неделя 24**) |
003 | 6, 11, 16 | CR |
004 | 6, 54 | PR |
005 | 6, 70 | CR |
006 | 6, 11, 45 | PR |
008 | 16, 31, 55 | PR |
009 | 6, 11, 59 | PR |
010 | 6, 11, 45, 54 | PR |
011 | HPV-положительный, тип неизвестен | CR |
014 | 6, 11 | PR |
016 | 11, 61 | Ухудшение |
017 | HPV-отрицательный | PR |
020 | 6, 11, 16 | PR |
021 | 6, 31, 53, 58, 59, 61, 66 | PR |
022 | 6 | PR |
* Процедура обследования рандомизированного, контролируемого плацебо испытания. ** Спустя четыре месяца после последнего лечения 500 мкг HspЕ7. Аббревиаторы: HPV=вирус папилломы человека; CR=полная реакция; PR=частичная реакция. |
В этом открытом перекрестном испытании HspЕ7 (500 мкг с 3-месячными интервалами), в котором участвовали пациенты со стойкими анальными HSIL и сопутствующими аногенитальными кондиломами, 3 из 14 пациентов (17%), которые имели бородавки при фоне (базовой линии), уже не имели бородавок спустя 4 месяца после последней дозы. Другие 10 пациентов (71%) испытывали улучшение в их симптомах (т.е. бородавки уменьшались значимо в размере и продолжалось уменьшение степени обработки, необходимое для удаления оставшихся бородавок). Один пациент (7%) не имел улучшения на протяжении всего испытания и исследователем этого участка испытаний была рекомендована хирургия.
Перед включением в открытое испытание большинство пациентов этого участка испытаний были подвергнуты хирургическому вмешательству для удаления их бородавок (11 из 14,79%). В конце этого испытания хирургическое удаление было рекомендовано только для одного пациента. Местная удаляющая терапия (например, жидким азотом, электрокаутеризацией) была рекомендована для шести пациентов (43%) и лечение лекарственным средством для местного применения (например, imiquimod) была рекомендована для четырех пациентов (29%). Три пациента не нуждались в дополнительной терапии.
Реакции оказались прогрессирующими на протяжении 6 месяцев, и ни один из реагирующих на эту терапию пациентов не дал рецидивов на протяжении этого периода. Постепенное и прогрессирующее исчезновение кондилом находится в соответствии с тем, что можно было бы ожидать от иммунологической реакции хозяина после индукции клеточно-опосредованного иммунитета с использованием HspЕ7.
Два пациента в двойном слепом испытании имели некоторое улучшение в их кондиломах перед вступлением в открытое испытание. До сих пор авторы изобретения не нарушали "слепоты" испытания и не знали, получали эти пациенты 100 мкг HspЕ7 или плацебо. Однако на основании реакции, наблюдаемой в открытом испытании трехмесячных инъекций 500 мкг HspЕ7, оказалось, что более высокая доза является более активной, чем доза 100 мкг.
ДНК HPV-16 обнаруживалась в пробах анальных мазков только у 3 из 13 пациентов (23%), состояние бородавок которых улучшилось в результате лечения HspE7. ДНК HPV-6 и/или HPV-11 была обнаружена у большинства пациентов, бородавки которых реагировали на лечение HspE7. Эти данные свидетельствуют об иммунологической перекрестной реактивности этих типов HPV при их реакции с HspE7.
В целом, представленные здесь результаты свидетельствуют, что HspЕ7 являются активным в широком применении для лечения аногенитальных бородавок. Оказалось, что активность не ограничивается только HPV-16-положительными пациентами, но проявляется перекрестно со множественными типами HPV. Предсказывается, что HspЕ7 будет активным в лечении индуцируемых HPV заболеваниях аногенитальной области и что эта активность не будет ограничиваться только HPV-16-положительными пациентами.
Сообщенные здесь наблюдения предполагают, что терапевтическая обработка HspЕ7 может представлять новый, простой и не требующий хирургического вмешательства способ лечения для аногенитальных бородавок, который, как минимум, мог бы ослаблять тяжесть заболевания, снижая тем самым объем лечения и, как следствие, болезненность. Внутреннее аноректальное заболевание часто требует дополнительного лечения, которое может быть очень болезненным и изнуряющим. Любое лечение, которое обеспечивает даже частичную реакцию, которая уменьшает или исключает количество или степень "хирургического" или абляционного лечения, приводит к уменьшению болезненности, меньшей потере времени, требующей прекращения активной работы, и улучшению качества жизни.
Эти результаты показывают, что композиция, содержащая комплекс белок теплового шока/антиген HPV типа 16, является эффективной в устранении или уменьшении бородавок, которые, как считается, обусловлены преимущественно HPV типов 6 и 11. Важными являются наблюдения, что (1) бородавки вообще могут лечиться композицией на основе HPV и (2) композиция HPV типа 16 была эффективной в лечении состояния, предположительно вызываемого HPV другого типа, чем тип 16. Последний перекрестно-реактивный результат был полностью неожиданным, так как обычно существует мнение, что только типоспецифическая композиция индуцирует типоспецифическую иммунную реакцию.
Для выяснения возможного механизма наблюдаемой перекрестной реактивности этого слитого полипептида рассчитывали теоретическое связывание для различных молекул HLA класса I и пептидов Е7 типов 16, 6 и 11 HPV. Т1/2 диссоциации рассчитывали с использованием алгоритма, описанного в Parker et al., J. Immunol. 152:163, 1994 (см. также указанный выше веб-сайт). Эти данные суммированы в таблице 4.
Таблица 4 | ||||||||||
Тип HLA | HPV типа 16 | HPV типа 6 | HPV типа 11 | |||||||
старт | Последовательность | T1/2 | Старт | Последовательность | T1/2 | Старт | Последовательность | T1/2 | ||
A1 | 44 | QAEPDRAHY | 900 | 44 | DSQPLKQHY | 8 | 44 | DAQPLTQHY | 5 | |
16 | QPETTDLYCY | 23 | 17 | PPDPVGLHCY | 6 | 17 | PPDPVGLHCY | 6 | ||
68 | VVECTDGDIR | 9 | ||||||||
A_0201 | 11 | YMLDLQPET | 375 | |||||||
7 | TLHEYMLDL | 201 | 7 | TLKDIVLDL | 7 | 7 | TLKDIVLDL | 7 | ||
82 | LLMGTLGIV | 54 | 82 | LLLGTLNIV | 412 | 82 | LLLGTLNIV | 412 | ||
28 | QLVDSSEDEV | 140 | 28 | QLEDSSEDEV | 9 | |||||
78 | TLEDLLMGT | 5 | 79 | VQQLLLGTL | 1 | 78 | QLQDLLLGT | 70 | ||
A_0205 | 7 | TLHEYMLDL | 50 | 7 | TLKDIVLDL | 4 | 7 | TLKDIVLDL | 4 | |
11 | YMLDLQPET | 27 | 12 | VLDLQPPDPV | 1 | 12 | VLDLQPPDPV | 1 | ||
82 | LLMGTLGIV | 20 | 82 | LLLGTLNIV | 20 | 82 | LLLGTLNIV | 20 | ||
78 | TLEDLLMGT | 2 | 79 | VQQLLLGTL | 19 | 78 | QLQDLLLGT | 42 | ||
5 | TPTLHEYML | 0 | 5 | HVTLKDIVL | 14 | 5 | LVTLKDIVL | 24 | ||
A24 | 56 | TFCCKCDSTL | 20 | |||||||
51 | HYNIVTFCC | 11 | 51 | HYQIVTCCC | 11 | 51 | HYQILTCCC | 9 | ||
24 | CYEQLNDSS | 9 | 25 | CYEQLVDSS | 9 | 25 | CYEQLEDSS | 9 | ||
4 | DTPTLHEYML | 6 | 5 | HVTLKDIVL | 4 | 4 | RLVTLKDIVL | 12 | ||
39 | EVDGQDSQPL | 5 | 39 | KVDKQDAQPL | 10 | |||||
A3 | 88 | GIVCPICSQK | 14 | 88 | NIVCPICAPK | 5 | 88 | NIVCPICAPK | 5 | |
7 | TLHEYMLDL | 8 | 7 | TLKDIVLDL | 5 | 7 | TLKDIVLDL | 5 | ||
A68.1 | 68 | CVQSTHVDIR | 200 | 68 | VVQCTETDIR | 200 | 68 | VVECTDGDIR | 200 | |
89 | IVCPICSQK | 180 | 89 | IVCPICAPK | 180 | 89 | IVCPICAPK | 180 | ||
A_1101 | 89 | IVCPICSQK | 2,0 | 89 | IVCPICAPK | 2 | 89 | IVCPICAPK | 2,0 | |
68 | CVQSTHVDIR | 1,8 | 68 | VVQCTETDIR | 1 | 68 | VVQCTETDIR | 0,6 | ||
A_3101 | 69 | VQSTHVDIR | 4,0 | 69 | VQCTETDIR | 2 | 68 | VVECTDGDIR | 2,0 | |
88 | GIVCPICSQK | 0,4 | 88 | NIVCPICAPK | 0 | 88 | NIVCPICAPK | 0,4 | ||
A_3302 | 68 | CVQSTHVDIR | 15 | 68 | VVQCTETDtR | 15 | 68 | VVECTDGDIR | 15 | |
58 | CCKCDSTLR | 3 | 58 | CCGCDSNVR | 3 | 58 | CCGCDSNVR | 3 | ||
B14 | 65 | LRLCVQSTHV | 30 | 65 | VRLVVQCTE | 1 | 65 | VRLVVECTD | 1 | |
4 | DTPTLHEYML | 18 | 3 | GRHVTLKDI | 12 | 3 | GRLVTLKDI | 60 | ||
5 | TPTLHEYML | 3 | 6 | VTLKDIVLDL | 10 | 6 | VTLKDIVLDL | 15 | ||
76 | RTLEDLLMGT | 1 | 76 | IREVQQLLL | 4 | 76 | IRQLQDLLL | 20 | ||
B40 | 36 | DEIDGPAGQA | 120 | 35 | DEVDEVDGQ | 2 | 35 | DEVDKVDKQ | 2 | |
74 | VDIRTLEDL | 10 | 74 | TDIREVQQL | 10 | 74 | GDIRQLQDL | 20 | ||
77 | RTLEDLLMGT | 0 | 77 | REVQQLLLGT | 16 | |||||
87 | LGIVCPICS | 0 | 87 | LNIVCPICA | 2 | 87 | LNIVCPICA | 2 | ||
B60 | 79 | LEDLLMGTL | 176 | 79 | VQQLLLGTL | 2 | 79 | LQDLLLGTL | 2 | |
20 | TDLYCYEQL | 44 | 21 | VGLHCYEQL | 9 | 21 | VGLHCYEQL | 9 | ||
74 | VDIRTLEDL | 40 | 74 | TDIREVQQL | 44 | 74 | GDIRQVQDL | 44 | ||
40 | VDGQDSQPL | 20 | 40 | VDKQDAQPL | 20 | |||||
B61 | 36 | DEIDGPAGQA | 40 | 35 | DEVDEVDG | 1 | 35 | DEVDKVDKQ | 1 | |
34 | EEDEIDGPA | 20 | 33 | SEDEVDEV | 40 | 33 | SEDEVDKV | 40 | ||
72 | TETDIREV | 80 | 72 | TDGDIRQL | 1 | |||||
29 | NDSSEEEDEI | 1 | 29 | LEDSSEDEV | 40 | |||||
B62 | 15 | LQPETTDLY | 88 | 15 | LQPPDPVGL | 6 | 15 | LQPPDPVGL | 6 | |
43 | GQAEPDRAHY | 44 | 44 | DSQPLKQHY | 1 | 44 | DAQPLTQHY | 5 | ||
7 | TLHEYMLDL | 3 | 7 | TLKDIVLDL | 16 | 7 | TLKDIVLDL | 16 | ||
82 | LLMGTLGIV | 2 | 83 | LLGTLNIVC | 11 | 83 | LLGTLNIVC | 11 | ||
B7 | 5 | TPTLHEYML | 80 | 5 | HVTLKDIVL | 20 | 5 | LVTLKDIVL | 20 | |
75 | DIRTLEDLL | 40 | 75 | DIREVQQLL | 40 | 75 | DIRQLQDLL | 40 | ||
46 | EPDRAHYNI | 2 | 46 | QPLKQHYQI | 8 | 46 | QPLTQHYQIL | 80 | ||
В8 | 58 | CCKCDSTLRL | 16 | 58 | CCGCDSNVRL | 1 | 58 | CCGCDSNVRL | 1 | |
75 | DIRTLEDL | 8 | 75 | DIREVQQL | 12 | 75 | DIRQLQDLL | 8 | ||
7 | TLKDIVLDL | 12 | 7 | TLKDIVLDL | 12 | |||||
В_2702 | 48 | DRAHYNIVTF | 60 | 49 | KQHYQIVTC | 6 | 49 | TQHYQILTC | 2 | |
76 | IRTLEDLLM | 20 | 76 | IREVQQLLL | 60 | 76 | IRQLQDLLL | 60 | ||
65 | LRLCVQSTH | 20 | 65 | VRLVVQCTET | 20 | 65 | VRLVVECTD | 2 | ||
2 | HGDTPTLHEY | 1 | 3 | GRHVTLKDIV | 20 | 3 | GRLVTLKDIV | 20 | ||
В_2705 | 76 | IRTLEDLLM | 600 | 76 | IREVQQLLL | 2000 | 76 | IRQLQDLLL | 2000 | |
65 | LRLCVQSTHV | 600 | 65 | VRLVVQCTET | 200 | 65 | VRLVVECTD | 20 | ||
3 | GRHVTLKDIV | 600 | 3 | GRLVTLKDIV | 600 | |||||
В_3501 | 5 | TPTLHEYML | 20 | 5 | HVTLKDIVL | 1 | 5 | LVTLKDIVL | 1 | |
16 | QPETTDLYCY | 18 | 15 | LQPPDPVGL | 2 | 15 | LQPPDPVGL | 2 | ||
43 | GQAEPDRAHY | 6 | 44 | DSQPLKQHY | 10 | 44 | DAQPLTQHY | 6 | ||
46 | EPDRAHYNIV | 1 | 46 | QPLKQHYQI | 8 | 46 | QPLTQHYQIL | 20 | ||
В_3701 | 74 | VDIRTLEDLL | 200 | 74 | TDIREVQQLL | 300 | 74 | GDIRQLQDLL | 200 | |
20 | TDLYCYEQL | 40 | 21 | VGLHCYEQLV | 1 | 21 | VGLHCYEQL | 1 | ||
40 | VDGQDSQPL | 40 | 40 | VDKQDAQPL | 40 | |||||
80 | EDLLMGTLGI | 40 | 80 | QQLLLGTLNI | 1 | 80 | QDLLLGTLNI | 40 | ||
В_3801 | 78 | TLEDLLLMGTL | 8 | 78 | EVQQLLLGTL | 1 | 79 | LQDLLLGTL | 4 | |
50 | AHYNIVTFC | 4 | 50 | QHYQIVTCC | 4 | 50 | QHYQILTCC | 4 | ||
5 | TPTLHEYML | 2 | 4 | RHVTLKDIVL | 30 | 4 | RLVTLKD1VL | 1 | ||
39 | EVDGQDSQPL | 6 | 39 | KVDKQDAQPL | 3 | |||||
71 | STHVDIRTL | 1 | 71 | CTETDIREV | 1 | 71 | CTDGDIRQL | 6 | ||
В_3901 | 78 | TLEDLLMGTL | 27 | 79 | VQQLLLGTL | 5 | 79 | LQDLLLGTL | 14 | |
73 | HVDIRTLEDL | 14 | 73 | ETDIREVQQL | 14 | 74 | GDIRQLQDL | 1 | ||
77 | RTLEDLLMGT | 1 | 76 | IREVQQLLL | 45 | 75 | DIRQLQDLL | 1 | ||
4 | DTPTLHEYML | 2 | 4 | RHVTLKDIVL | 90 | 3 | GRLVTLKDI | 15 | ||
В_3902 | 59 | CKCDSTLRL | 20 | 59 | CGCDSNVRL | 2 | 59 | CGCDSNVRLV | 3 | |
7 | TLHEYMLDL | 2 | 7 | TLKDIVLDL | 1 | 6 | VTLKDIVLDL | 9 | ||
79 | LEDLLMGTL | 1 | 79 | VQQLLLGTL | 24 | 79 | LQLQDLLLGT | 24 | ||
15 | LQPETTDLY | 1 | 15 | LQPPDVGL | 20 | 15 | LQPPDPVGL | 20 | ||
В_4403 | 36 | DEIDGPAQQA | 90 | 35 | DEVDEVDGQ | 7 | 35 | DEVDKVDKQ | 16 | |
3 | GDTPTLHEY | 45 | ||||||||
44 | QAEPDRAHY | 6 | 44 | DSQPLKQHY | 18 | 44 | DAQPLTQHY | 27 | ||
77 | REVQQLLLGT | 12 | ||||||||
В_5101 | 46 | EPDRAHYNI | 880 | 46 | QPLKQHYQI | 440 | 46 | QPLTQHYQI | 400 | |
84 | MGTLGIVCPI | 114 | 84 | LGTLNIVCPI | 114 | 84 | LGTLNIVCPI | 114 | ||
В_5102 | 46 | EPDRAHYNI | 220 | 46 | QPLKQHYQI | 1452 | 46 | QPLTQHYQI | 1452 | |
84 | MGTLGIVCPI | 88 | 84 | LGTLNIVCPI | 88 | 84 | LGTLNIVCPI | 88 | ||
21 | VGLHCYEQLV | 145 | 21 | VGLHCYEQL | 73 | |||||
В_5103 | 46 | EPDRAHYNI | 58 | 46 | QPLKQHYQI | 83 | 46 | QPLTQHYQI | 58 | |
84 | MGTLGIVCPI | 44 | 84 | LGTLNIVCPI | 44 | 84 | LGTLNIVCPI | 44 | ||
21 | VGLHCYEQLV | 53 | ||||||||
В_5201 | 46 | EPDRAHYNIV | 100 | 46 | QPLKQHYQIV | 132 | 46 | QPLTQHYQIL | 22 | |
81 | DLLMGTLGIV | 33 | 82 | LLLGTLNIV | 50 | 82 | LLLGTLNIV | 50 | ||
60 | GCDSNVRLVV | 40 | 60 | GCDSNVRLVV | 40 | |||||
В_5801 | 49 | RAHYNIVTF | 79,00 | 49 | KQHYQIVTCC | 0 | 48 | LTQHYQILTC | 3,0 | |
77 | RTLEDLLMGT | 24 | 77 | REVQQLLLGT | 0 | 77 | RQLQDLLLGT | 0,1 | ||
6 | PTLHEYMLDL | 0,2 | 6 | VTLKDIVLDL | 8 | 6 | VTLKDIVLDL | 8,0 | ||
44 | QAEPDRAHY | 6,0 | 44 | DSQPLKQHY | 5 | 44 | DAQPLTQHY | 3,0 | ||
85 | GTLGIVCPI | 4,0 | 85 | GTLNIVCPI | 4 | 85 | GTLNIVCPI | 4,0 | ||
Cw_0301 | 20 | TDLYCYEQL | 100 | 21 | VGLHCYEQL | 100 | 21 | VGLHCYEQL | 100 | |
74 | VDIRTLEDL | 30 | 74 | TDIREVQQL | 36 | 74 | GDIRQLQDL | 36 | ||
46 | QPLKQHYQIV | 6 | 46 | QPLTQHYQIL | 120 | |||||
Cw_0401 | 56 | TFCCKCDSTL | 200 | 57 | CCCGCDSNV | 1 | ||||
5 | TPTLHEYML | 88 | ||||||||
73 | HVDIRTLEDL | 14 | 73 | ETDIREVQQL | 12 | 73 | DGDIRQLQDL | 12 | ||
46 | EPDRAHYNI | 17 | 46 | QPLKQHYQIV | 11 | 46 | QPLTQHYQIL | 88 | ||
Cw_0602 | 79 | LEDLLMGTL | 6 | 79 | VQQLLLCTL | 13 | 79 | LQDLLLGTL | 13 | |
85 | GTLGIVCPI | 6 | 85 | GTLNIVCPI | 6 | 85 | GTLNIVCPI | 6 | ||
7 | TLHEYMLDL | 2 | 7 | TLKDIVLDL | 12 | 7 | TLKDIVLDL | 12 | ||
Cw_0702 | 3 | GDTPTLHEY | 27 | 3 | GRHVTLKDI | 1 | 3 | GRLVTLKDI | 1 | |
15 | LQPETTDLY | 8 | 16 | QPPDPVGLHC | 3 | 16 | QPPDPVGLHC | 3 | ||
43 | GQAEPDRAHY | 2 | 43 | QDSQPLKQHY | 11 | 43 | QDAQPLTQHY | 32 | ||
7 | TLHEYMLDL | 1 | 7 | TLKDIVLDL | 4 | 7 | TLKDIVLDL | 4 |
Пептидные последовательности, напечатанные жирным шрифтом, показывают верхние два связывающих сайта для каждой молекулы HLA и для каждого белка Е7 из каждого типа HPV.
Результаты в таблице 4 предполагают, что, в зависимости от конкретной испытанной молекулы HLA антиген Е7 типа 16 HPV может запускать клеточную иммунную реакцию против антигена Е7 других типов HPV. Например, для HLA В 2705 высокий уровень связывания был предсказан в отношении пептидов, начинающихся от положения аминокислоты 76 Е7, для всех трех типов HPV. Таким образом, возможно, что, для пациентов, экспрессирующих эту молекулу HLA, композиция Е7 типа 16 HPV могла бы быть перекрестно-реактивной и применимой для лечения или профилактики инфекции типами 6 и 11 HPV. Каждый из напечатанных жирным шрифтом пептидных фрагментов в таблице 4 представляет возможный антигенный фрагмент, который может быть включен в эти композиции (например, описанные здесь слитые белки) в качестве замены полного вирусного антигена Е7. Конечно, могут быть также использованы два или более таких предполагаемых эпитопов HLA или более длинный фрагмент, содержащий много предполагаемых эпитопов HLA.
Claims (33)
1. Способ лечения рецидивирующего респираторного папилломатоза, включающий введение пациенту, у которого выявлен рецидивирующий респираторный папилломатоз, терапевтически эффективного количества композиции, содержащей слитый белок, включающий (1) белок теплового шока (Hsp) или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок Е7 вируса папилломы человека (HPV) или его антигенный фрагмент.
2. Способ лечения рецидивирующего респираторного папилломатоза, включающий введение пациенту, у которого выявлен рецидивирующий респираторный папилломатоз, терапевтически эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, включающий (1) Hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент.
3. Способ по п.1 или 2, в котором рецидивирующий респираторный папилломатоз представляет собой юношеский рецидивирующий респираторный папилломатоз.
4. Способ по п.3, в котором юношеский рецидивирующий респираторный папилломатоз представляет собой юношеский ларингеальный папилломатоз.
5. Способ по п.1 или 2, в котором рецидивирующий респираторный папилломатоз представляет собой рецидивирующий респираторный папилломатоз взрослых.
6. Способ по одному из пп.1-5, в котором у пациента имеет место рецидивирующий респираторный папилломатоз, связанный с инфекцией HPV типа 6.
7. Способ по одному из пп.1-5, в котором у пациента имеет место рецидивирующий респираторный папилломатоз, связанный с инфекцией HPV типа 11.
8. Способ лечения аногенитальной бородавки у пациента, включающий введение пациенту, у которого выявлена аногенитальная бородавка, терапевтически эффективного количества композиции, содержащей слитый белок, включающий (1) Hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент, причем аногенитальная бородавка вызвана инфекцией первого типа HPV и где белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент происходит от второго типа HPV, отличающегося от первого типа HPV.
9. Способ лечения аногенитальной бородавки у пациента, включающий введение пациенту, у которого выявлена аногенитальная бородавка, терапевтически эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, включающий (1) Hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент, причем аногенитальная бородавка вызвана инфекцией первого типа HPV и где белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент происходит от второго типа HPV, отличающегося от первого типа HPV.
10. Способ лечения у пациента заболевания или состояния, вызванного инфекцией HPV, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей слитый белок, включающий (1) Hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент, причем указанное заболевание или состояние вызвано инфекцией HPV, тип которого отличается от типа HPV, от которого происходит белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент.
11. Способ лечения у пациента заболевания или состояния, вызванного инфекцией HPV, включающий введение пациенту терапевтически эффективного количества композиции, содержащей нуклеиновую кислоту, кодирующую слитый белок, включающий (1) Hsp или его иммуностимуляторный фрагмент и (2) белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент, причем указанное заболевание или состояние вызвано инфекцией HPV, тип которого отличается от типа HPV, от которого происходит белок Е7 HPV или его антигенный фрагмент.
12. Способ по п.10 или 11, в котором у пациента имеет место заболевание или состояние, связанное с инфекцией HPV типа 6 или HPV типа 11.
13. Способ по п.10 или 11, в котором у пациента имеется бородавка одного из внутренних органов.
14. Способ по п.10 или 11, в котором у пациента имеется бородавка на голосовых связках.
15. Способ по одному из пп.1-14, в котором слитый белок включает Hsp.
16. Способ по одному из пп.1-14, в котором слитый белок включает белок Е7 HPV.
17. Способ по одному из пп.1-14, в котором слитый белок включает Hsp и белок Е7 HPV.
18. Способ по одному из пп.1-17, в котором белок Е7 HPV представляет собой белок Е7 HPV типа 16.
19. Способ по одному из пп.1-18, в котором Hsp представляет собой белок Hsp70.
20. Способ по одному из пп.1-18, в котором Hsp представляет собой микобактериальный Hsp.
21. Способ по одному из пп.1-18, в котором Hsp представляет собой белок Hsp60.
22. Способ по п.21, в котором белок Hsp60 представляет собой микобактериальный белок Hsp60.
23. Способ по п.22, в котором микобактериальный белок Hsp60 представляет собой белок Hsp60 Micobacterium bovis.
24. Способ по п.23, в котором белок Hsp60 Micobacterium bovis представляет собой BCG Hsp65 Micobacterium bovis.
25. Способ по одному из пп.1-14, в котором слитый белок включает белок Hsp60 и белок Е7 типа 16 HPV.
26. Способ по одному из пп.1-14, в котором слитый белок включает BCG Hsp65 Micobacterium bovis и белок Е7 типа 16 HPV.
27. Способ по одному из пп.1-26, в котором фармацевтическая композиция содержит по меньшей мере 500 мкг слитого белка.
28. Способ по одному из пп.1-27, в котором фармацевтическую композицию вводят без адъюванта.
29. Способ по одному из пп.1-28, в котором по меньшей мере одну бустер-дозу фармацевтической композиции вводят пациенту после введения первой прайминг-дозы.
30. Способ по одному из пп.1-29, в котором фармацевтическую композицию вводят пациенту подкожно.
31. Способ по одному из пп.1-30, в котором пациент является млекопитающим.
32. Способ по п.31, в котором млекопитающее является человеком.
33. Способ по п.10 или 11, в котором заболевание или состояние, вызванное инфекцией HPV, представляет собой бородавку, подошвенные бородавки, рак шейки матки, дисплазию шейки матки, рак прямой кишки, дисплазию прямой кишки или рецидивирующий респираторный папилломатоз.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US21420200P | 2000-06-26 | 2000-06-26 | |
US60/214,202 | 2000-06-26 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2003101965A RU2003101965A (ru) | 2004-07-27 |
RU2282461C2 true RU2282461C2 (ru) | 2006-08-27 |
Family
ID=22798190
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU2003101965/14A RU2282461C2 (ru) | 2000-06-26 | 2001-06-26 | Лечение инфекции, вызываемой вирусом папилломы человека |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (4) | US20020110566A1 (ru) |
EP (1) | EP1296711B1 (ru) |
JP (1) | JP2004512264A (ru) |
KR (2) | KR20080075560A (ru) |
CN (1) | CN100441223C (ru) |
AT (1) | ATE326236T1 (ru) |
AU (3) | AU7144901A (ru) |
BR (1) | BR0111956A (ru) |
CA (1) | CA2413543A1 (ru) |
CY (1) | CY1105389T1 (ru) |
CZ (1) | CZ20024154A3 (ru) |
DE (1) | DE60119734T2 (ru) |
DK (1) | DK1296711T3 (ru) |
EE (1) | EE200200709A (ru) |
ES (1) | ES2263637T3 (ru) |
HR (1) | HRP20021015A2 (ru) |
HU (1) | HUP0301308A3 (ru) |
IL (1) | IL153474A0 (ru) |
MX (1) | MXPA02012858A (ru) |
NO (1) | NO20026044L (ru) |
NZ (1) | NZ523408A (ru) |
PL (1) | PL359930A1 (ru) |
PT (1) | PT1296711E (ru) |
RU (1) | RU2282461C2 (ru) |
SK (1) | SK18362002A3 (ru) |
WO (1) | WO2002000242A2 (ru) |
ZA (1) | ZA200210211B (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2519673C2 (ru) * | 2008-11-28 | 2014-06-20 | Новартис Аг | Комбинации ингибитора hsp90 |
RU2538683C2 (ru) * | 2008-10-31 | 2015-01-10 | Новартис Аг | КОМБИНАЦИЯ ИНГИБИТОРА ФОСФАТИДИЛИНОЗИТОЛ-3-КИНАЗЫ (Р13К) И ИНГИБИТОРА mTOR |
Families Citing this family (50)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
IL105554A (en) * | 1992-05-05 | 1999-08-17 | Univ Leiden | Peptides of human papillomavirus for use in preparations elicit a human T cell response |
US6495347B1 (en) | 1999-07-08 | 2002-12-17 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Induction of a Th1-like response in vitro |
US20050244434A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-11-03 | Cohen David I | Tat-based tolerogen compositions and methods of making and using same |
US20050226890A1 (en) * | 1999-08-12 | 2005-10-13 | Cohen David I | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
US20050100928A1 (en) * | 1999-09-16 | 2005-05-12 | Zycos Inc., A Delaware Corporation | Nucleic acids encoding polyepitope polypeptides |
US8128922B2 (en) | 1999-10-20 | 2012-03-06 | Johns Hopkins University | Superior molecular vaccine linking the translocation domain of a bacterial toxin to an antigen |
IL153474A0 (en) * | 2000-06-26 | 2003-07-06 | Stressgen Biotechnologies Corp | Human papilloma virus treatment |
AU2001278117A1 (en) | 2000-08-03 | 2002-02-18 | Johns Hopkins University | Molecular vaccine linking an endoplasmic reticulum chaperone polypeptide to an antigen |
WO2006033665A1 (en) * | 2004-03-16 | 2006-03-30 | Inist Inc. | Tat-based vaccine compositions and methods of making and using same |
WO2002062959A2 (en) | 2001-02-05 | 2002-08-15 | Stressgen Biotechnologies Corp. | Hepatitis b virus treatment |
US6649402B2 (en) * | 2001-06-22 | 2003-11-18 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Microfabricated microbial growth assay method and apparatus |
AU2003284239B2 (en) * | 2002-10-21 | 2008-08-21 | Eisai Inc. | Compositions and methods for treating human papillomavirus-mediated disease |
WO2004056389A1 (en) * | 2002-12-20 | 2004-07-08 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hpv-16 and -18 l1 vlp vaccine |
EP1644048B1 (en) | 2003-05-05 | 2015-04-29 | Johns Hopkins University | Anti-cancer dna vaccine employing plasmids encoding signal sequence, mutant oncoprotein antigen, and heat shock protein |
WO2005026375A2 (en) | 2003-05-22 | 2005-03-24 | Fraunhofer Usa, Inc. | Recombinant carrier molecule for expression, delivery and purification of target polypeptides |
DE10347710B4 (de) | 2003-10-14 | 2006-03-30 | Johannes-Gutenberg-Universität Mainz | Rekombinante Impfstoffe und deren Verwendung |
US7285386B2 (en) * | 2003-10-29 | 2007-10-23 | University Of New Mexico, And Educational Institution Of The State Of New Mexico | RhPV as a model for HPV-induced cancers |
DE10357677A1 (de) * | 2003-12-10 | 2005-07-14 | Greiner Bio-One Gmbh | Primer und Sonden zum Nachweis genitaler HPV-Genotypen |
CA2594040A1 (en) | 2005-01-06 | 2006-07-13 | The Johns Hopkins University | Rna interference that blocks expression of pro-apoptotic proteins potentiates immunity induced by dna and transfected dendritic cell vaccines |
US8252893B2 (en) * | 2005-01-31 | 2012-08-28 | Board Of Trustees Of The University Of Arkansas | CD8 T cell epitopes in HPV 16 E6 and E7 proteins and uses thereof |
ES2363247T3 (es) * | 2005-04-27 | 2011-07-28 | Leiden University Medical Center | Tratamiento para neoplasias intraepiteliales anogenitales inducidas por vph. |
WO2007117264A2 (en) * | 2005-08-03 | 2007-10-18 | Fraunhofer Usa, Inc. | Compositions and methods for production of immunoglobulins |
US7622121B2 (en) * | 2005-09-21 | 2009-11-24 | New York University | Heat shock proteins from Mycobacterium leprae and uses thereof |
WO2008048344A2 (en) * | 2006-02-13 | 2008-04-24 | Fraunhofer Usa, Inc. | Bacillus anthracis antigens, vaccine compositions, and related methods |
US8124103B2 (en) * | 2006-02-13 | 2012-02-28 | Fraunhofer Usa, Inc | Influenza antigens, vaccine compositions, and related methods |
WO2007095320A2 (en) * | 2006-02-13 | 2007-08-23 | Fraunhofer Usa, Inc. | Hpv antigens, vaccine compositions, and related methods |
JP2009538836A (ja) * | 2006-05-31 | 2009-11-12 | ヌベンタ バイオファーマシューティカルズ コーポレイション | 生物活性の精製HspE7組成物 |
US9085638B2 (en) | 2007-03-07 | 2015-07-21 | The Johns Hopkins University | DNA vaccine enhancement with MHC class II activators |
WO2008124483A1 (en) * | 2007-04-04 | 2008-10-16 | Specigen, Inc. | Protein cage immunotherapeutics |
WO2008134643A2 (en) * | 2007-04-28 | 2008-11-06 | Fraunhofer Usa, Inc. | Trypanosoma antigens, vaccine compositions, and related methods |
CA2692933C (en) | 2007-07-11 | 2016-10-18 | Fraunhofer Usa, Inc. | Yersinia pestis antigens, vaccine compositions, and related methods |
CN101820903A (zh) * | 2007-08-20 | 2010-09-01 | 美国弗劳恩霍夫股份有限公司 | 预防性和治疗性流感疫苗、抗原、组合物和方法 |
US20090117140A1 (en) * | 2007-09-26 | 2009-05-07 | Mayumi Nakagawa | Human papilloma virus dominant CD4 T cell epitopes and uses thereof |
US8877201B2 (en) * | 2007-10-25 | 2014-11-04 | Wake Forest University Health Sciences | Bordetella outer-membrane protein antigens and methods of making and using the same |
JP2011513399A (ja) | 2008-03-03 | 2011-04-28 | ザ ユニバーシティー オブ マイアミ | 同種癌細胞による免疫療法 |
AU2009226077B2 (en) | 2008-03-20 | 2012-04-19 | University Of Miami | Heat shock protein gp96 vaccination and methods of using same |
US8734803B2 (en) | 2008-09-28 | 2014-05-27 | Ibio Inc. | Humanized neuraminidase antibody and methods of use thereof |
ES2432863T3 (es) | 2009-03-23 | 2013-12-05 | Pin Pharma, Inc. | Tratamiento del cáncer con polipéptidos inmunoestimuladores derivados de Tat del VIH |
WO2011041391A1 (en) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | Fraunhofer Usa, Inc. | Influenza hemagglutinin antibodies, compositions, and related methods |
US11963716B2 (en) | 2010-07-19 | 2024-04-23 | Emblation Limited | Apparatus and method for the treatment of dermatological diseases or conditions |
US9662510B2 (en) | 2010-07-19 | 2017-05-30 | Emblation Limited | Apparatus and method for the treatment of dermatological diseases or conditions |
CA2828443A1 (en) * | 2011-02-23 | 2012-08-30 | University Of Miami | Combined cell based gp96-ig-siv/hiv, recombinant gp120 protein vaccination for protection from siv/hiv |
US9028884B2 (en) | 2013-08-13 | 2015-05-12 | Preventamedics LLC | Medical delivery devices and methods for applying a barrier composition to a targeted skin surface |
CA2926221A1 (en) | 2013-10-04 | 2015-04-09 | Pin Pharma, Inc. | Immunostimulatory hiv tat derivative polypeptides for use in cancer treatment |
GB2541749B (en) | 2015-08-31 | 2020-12-09 | Emblation Ltd | An interference suppression apparatus and method |
US11497926B2 (en) | 2016-08-08 | 2022-11-15 | Emblation Limited | Method and apparatus for the treatment, management and/or control of pain |
EP3606550A2 (en) * | 2017-04-03 | 2020-02-12 | Neon Therapeutics, Inc. | Protein antigens and uses thereof |
CN108409866A (zh) * | 2018-01-23 | 2018-08-17 | 合肥瑞城生生物科技有限公司 | 一种用于治疗和预防人乳头瘤病毒感染及相关疾病的多表位组合肽 |
KR20210044805A (ko) * | 2018-08-06 | 2021-04-23 | 닐슨 바이오사이언스, 아이엔씨. | 사마귀의 치료 |
CN114478712B (zh) * | 2022-03-29 | 2022-09-23 | 深圳吉诺因生物科技有限公司 | Hpv抗原表位及其鉴定方法、应用 |
Family Cites Families (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4666847A (en) | 1981-01-16 | 1987-05-19 | Collaborative Research, Inc. | Recombinant DNA means and method |
NO172595C (no) | 1983-02-07 | 1993-08-11 | Battelle Memorial Institute | Fremgangsmaate og ekspresjonsplasmid for fremstilling av hemagglutinin under kontroll av drosophila hsp-promoter |
US4797359A (en) | 1983-05-10 | 1989-01-10 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Heat shock regulated production of selected and fused proteins in yeast |
GB8404280D0 (en) | 1984-02-17 | 1984-03-21 | Stanford J L | Biological preparations |
IL71683A0 (en) | 1984-04-27 | 1984-09-30 | Yeda Res & Dev | Pharmaceutical compositions for treating arthritis type diseases comprising fractions obtained from mycobacteria |
US4918164A (en) | 1987-09-10 | 1990-04-17 | Oncogen | Tumor immunotherapy using anti-idiotypic antibodies |
US4784941A (en) | 1985-04-08 | 1988-11-15 | Genetic Systems Corporation | Expression and diagnostic use of pENV-3 encoded peptides which are immunologically reactive with antibodies to LAV |
DK3687A (da) | 1986-01-06 | 1987-07-07 | Hoffmann La Roche | Polypeptider og fremgangsmaade til fremstilling deraf |
US4734362A (en) | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
US4906742A (en) | 1986-07-31 | 1990-03-06 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Encoding antigens of M. Leprae |
US6007806A (en) | 1986-08-13 | 1999-12-28 | Transgene S.A. | Expression of a tumor-specific antigen by a recombinant vector virus and use thereof in preventive or curative treatment of the corresponding tumor |
NL8701163A (nl) | 1986-09-09 | 1988-04-05 | Nederlanden Staat | Gebruik van een peptide voor de bereiding van preparaten voor het verlichten, het behandelen en de diagnose van autoimmuunziekten, in het bijzonder arthritische toestanden, verbindingen die met dit peptide verwant zijn, alsmede farmaceutische en diagnostische preparaten en testkits. |
WO1988005823A2 (en) | 1987-02-02 | 1988-08-11 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Mycobacterium tuberculosis genes encoding protein antigens |
US4952395A (en) | 1987-02-26 | 1990-08-28 | Scripps Clinic And Research Foundation | Mycobacterial recombinants and peptides |
US5504005A (en) | 1987-03-02 | 1996-04-02 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Recombinant mycobacterial vaccine |
US4918166A (en) | 1987-04-10 | 1990-04-17 | Oxford Gene Systems Limited | Particulate hybrid HIV antigens |
US5256767A (en) | 1987-06-10 | 1993-10-26 | The Immune Response Corporation | Retroviral antigens |
NL8703107A (nl) | 1987-12-22 | 1989-07-17 | Nederlanden Staat | Polypeptiden en derivaten daarvan, alsmede de toepassing daarvan in farmaceutische en diagnostische preparaten. |
US5204259A (en) | 1988-05-06 | 1993-04-20 | Pharmacia Genetic Engineering, Inc. | Methods and systems for producing HIV antigens |
CA1338778C (en) | 1988-06-15 | 1996-12-10 | Richard A. Young | Stress proteins and uses therefor |
WO1990010230A1 (en) | 1989-02-23 | 1990-09-07 | University Of Ottawa | Polypeptide having immunological activity for use as diagnostic reagent and/or vaccine |
US5114844A (en) | 1989-03-14 | 1992-05-19 | Yeda Research And Development Co., Ltd. | Diagnosis and treatment of insulin dependent diabetes mellitus |
CA2063414A1 (en) | 1989-06-19 | 1990-12-20 | Richard A. Young | Vector-mediated genomic insertion and expression of dna in bcg |
GB8919321D0 (en) | 1989-08-25 | 1989-10-11 | Univ London | Treatment of chronic inflammatory conditions |
GB9007194D0 (en) | 1990-03-30 | 1990-05-30 | Wellcome Found | Live vaccines |
US5348945A (en) | 1990-04-06 | 1994-09-20 | Wake Forest University | Method of treatment with hsp70 |
DK0556248T3 (da) | 1990-11-08 | 1997-10-27 | Univ London | Mycobacterium som adjuvans til antigener |
GB9024320D0 (en) | 1990-11-08 | 1990-12-19 | Univ London | Treatment of uveitis |
GB2251186A (en) | 1990-12-04 | 1992-07-01 | Randall Neal Gatz | Polypeptide for use in treatment of autoimmune disease |
EP0521220A1 (en) | 1991-06-14 | 1993-01-07 | Institut Pasteur | Recombinant immunogenic actinomycetale |
GB9113809D0 (en) | 1991-06-26 | 1991-08-14 | Cancer Res Campaign Tech | Papillomavirus l2 protein |
IT1262896B (it) | 1992-03-06 | 1996-07-22 | Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini. | |
US5580563A (en) | 1992-05-01 | 1996-12-03 | Tam; James P. | Multiple antigen peptide system having adjuvant properties, vaccines prepared therefrom and methods of use thereof |
GB9211736D0 (en) | 1992-06-03 | 1992-07-15 | Univ Cardiff | Allergic treatment |
IL102687A (en) | 1992-07-30 | 1997-06-10 | Yeda Res & Dev | Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them |
US5736146A (en) | 1992-07-30 | 1998-04-07 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic peptide carriers and vaccines comprising them |
ATE212378T1 (de) | 1993-06-04 | 2002-02-15 | Whitehead Biomedical Inst | Stressproteine und ihre verwendung |
US5404142A (en) | 1993-08-05 | 1995-04-04 | Analog Devices, Incorporated | Data-directed scrambler for multi-bit noise shaping D/A converters |
DE69434475T2 (de) | 1993-08-11 | 2006-05-18 | Jenner Technologies, Tiburon | Impfstoff gegen prostatakrebs |
US5762939A (en) | 1993-09-13 | 1998-06-09 | Mg-Pmc, Llc | Method for producing influenza hemagglutinin multivalent vaccines using baculovirus |
US5750119A (en) | 1994-01-13 | 1998-05-12 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Immunotherapeutic stress protein-peptide complexes against cancer |
US5997873A (en) | 1994-01-13 | 1999-12-07 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Method of preparation of heat shock protein 70-peptide complexes |
US5961979A (en) | 1994-03-16 | 1999-10-05 | Mount Sinai School Of Medicine Of The City University Of New York | Stress protein-peptide complexes as prophylactic and therapeutic vaccines against intracellular pathogens |
IL109790A0 (en) | 1994-05-25 | 1994-08-26 | Yeda Res & Dev | Peptides used as carriers in immunogenic constructs suitable for development of synthetic vaccines |
GB9419979D0 (en) | 1994-10-04 | 1994-11-16 | Medeva Holdings Bv | Vaccine compositions |
AUPN015794A0 (en) | 1994-12-20 | 1995-01-19 | Csl Limited | Variants of human papilloma virus antigens |
JP3958360B2 (ja) | 1995-02-24 | 2007-08-15 | キャンタブ ファーマシューティカルズ リサーチ リミティド | 免疫治療剤として役立つポリペプチド及びポリペプチド調製の方法 |
HUP9802819A2 (hu) | 1995-08-18 | 1999-03-29 | Sloan-Kettering Institute For Cancer Research | Hősokkfehérje-alapú oltóanyagok és immunterápiák |
US5837251A (en) | 1995-09-13 | 1998-11-17 | Fordham University | Compositions and methods using complexes of heat shock proteins and antigenic molecules for the treatment and prevention of neoplastic diseases |
US5985270A (en) | 1995-09-13 | 1999-11-16 | Fordham University | Adoptive immunotherapy using macrophages sensitized with heat shock protein-epitope complexes |
US5935576A (en) | 1995-09-13 | 1999-08-10 | Fordham University | Compositions and methods for the treatment and prevention of neoplastic diseases using heat shock proteins complexed with exogenous antigens |
WO1997026910A2 (de) | 1996-01-27 | 1997-07-31 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Tumorimpfstoff für die immuntherapie von malignen tumoren |
CZ28899A3 (cs) * | 1996-07-29 | 1999-07-14 | Cantab Pharmaceuticals Research Limited | Polypeptidy použitelné jako imunoterapeutická činidla a způsoby přípravy polypeptidů |
US6130087A (en) | 1996-10-07 | 2000-10-10 | Fordham University | Methods for generating cytotoxic T cells in vitro |
EP0941315B1 (en) | 1996-11-26 | 2006-03-01 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Fusion proteins containing stress proteins for inducing immune responses |
US5830464A (en) | 1997-02-07 | 1998-11-03 | Fordham University | Compositions and methods for the treatment and growth inhibition of cancer using heat shock/stress protein-peptide complexes in combination with adoptive immunotherapy |
US6017540A (en) | 1997-02-07 | 2000-01-25 | Fordham University | Prevention and treatment of primary and metastatic neoplastic diseases and infectious diseases with heat shock/stress protein-peptide complexes |
EP1047451A1 (en) | 1997-02-18 | 2000-11-02 | Whitehead Institute For Biomedical Research | Use of heat shock proteins to deliver moieties into cells |
ES2191929T3 (es) * | 1997-08-05 | 2003-09-16 | Stressgen Biotechnologies Corp | Respuestas inmunologicas contra los antigenos pvh estimuladas por composiciones que comprenden un antigeno pvh y una proteina de estres o un vector de expresion capaz de expresar dichas proteinas. |
US6007821A (en) | 1997-10-16 | 1999-12-28 | Fordham University | Method and compositions for the treatment of autoimmune disease using heat shock proteins |
US5948646A (en) | 1997-12-11 | 1999-09-07 | Fordham University | Methods for preparation of vaccines against cancer comprising heat shock protein-peptide complexes |
GB9727262D0 (en) | 1997-12-24 | 1998-02-25 | Smithkline Beecham Biolog | Vaccine |
CN1248631A (zh) * | 1998-09-24 | 2000-03-29 | 周国庆 | 一种免疫预防和免疫治疗性病和癌症的融合蛋白 |
US6451316B1 (en) | 1998-10-05 | 2002-09-17 | University Of Conneticut Health Center | Methods for generating antigen-reactive T cells in vitro |
US6475490B1 (en) | 1998-10-19 | 2002-11-05 | Fordham University | Compositions and methods for promoting tissue repair using heat shock proteins |
US6497880B1 (en) | 1998-12-08 | 2002-12-24 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Heat shock genes and proteins from Neisseria meningitidis, Candida glabrata and Aspergillus fumigatus |
US6495347B1 (en) | 1999-07-08 | 2002-12-17 | Stressgen Biotechnologies Corporation | Induction of a Th1-like response in vitro |
CA2383213A1 (en) | 1999-09-10 | 2001-03-15 | Fordham University | Methods and compositions for the treatment and prevention of graft rejection using heat shock proteins |
US20010034042A1 (en) | 2000-01-20 | 2001-10-25 | Srivastava Pramod K. | Complexes of peptide-binding fragments of heat shock proteins and their use as immunotherapeutic agents |
WO2001052890A1 (en) | 2000-01-21 | 2001-07-26 | University Of Connecticut Health Center | Heat shock/stress protein complexes as vaccines against neurodegenerative disorders |
WO2001052877A1 (en) | 2000-01-21 | 2001-07-26 | University Of Connecticut Health Center | Compositions and methods to treat neurodegenerative disorders |
AU2001229592A1 (en) | 2000-01-21 | 2001-07-31 | University Of Connecticut Health Center | Vaccines against neurodegenerative disorders |
IL153474A0 (en) * | 2000-06-26 | 2003-07-06 | Stressgen Biotechnologies Corp | Human papilloma virus treatment |
-
2001
- 2001-06-26 IL IL15347401A patent/IL153474A0/xx unknown
- 2001-06-26 EP EP01950461A patent/EP1296711B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-26 CZ CZ20024154A patent/CZ20024154A3/cs unknown
- 2001-06-26 KR KR1020087018500A patent/KR20080075560A/ko not_active Application Discontinuation
- 2001-06-26 KR KR1020027017697A patent/KR100919266B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2001-06-26 BR BR0111956-7A patent/BR0111956A/pt not_active IP Right Cessation
- 2001-06-26 DE DE60119734T patent/DE60119734T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2001-06-26 HU HU0301308A patent/HUP0301308A3/hu unknown
- 2001-06-26 PL PL35993001A patent/PL359930A1/xx not_active Application Discontinuation
- 2001-06-26 AU AU7144901A patent/AU7144901A/xx active Pending
- 2001-06-26 PT PT01950461T patent/PT1296711E/pt unknown
- 2001-06-26 CA CA002413543A patent/CA2413543A1/en not_active Abandoned
- 2001-06-26 WO PCT/US2001/020240 patent/WO2002000242A2/en active IP Right Grant
- 2001-06-26 AT AT01950461T patent/ATE326236T1/de not_active IP Right Cessation
- 2001-06-26 ES ES01950461T patent/ES2263637T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-06-26 SK SK1836-2002A patent/SK18362002A3/sk not_active Application Discontinuation
- 2001-06-26 NZ NZ523408A patent/NZ523408A/en unknown
- 2001-06-26 MX MXPA02012858A patent/MXPA02012858A/es active IP Right Grant
- 2001-06-26 AU AU2001271449A patent/AU2001271449B2/en not_active Ceased
- 2001-06-26 US US09/891,823 patent/US20020110566A1/en not_active Abandoned
- 2001-06-26 EE EEP200200709A patent/EE200200709A/xx unknown
- 2001-06-26 RU RU2003101965/14A patent/RU2282461C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2001-06-26 DK DK01950461T patent/DK1296711T3/da active
- 2001-06-26 JP JP2002505023A patent/JP2004512264A/ja not_active Withdrawn
- 2001-06-26 CN CNB018117724A patent/CN100441223C/zh not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-12-16 NO NO20026044A patent/NO20026044L/no not_active Application Discontinuation
- 2002-12-17 ZA ZA200210211A patent/ZA200210211B/en unknown
- 2002-12-19 HR HR20021015A patent/HRP20021015A2/hr not_active Application Discontinuation
-
2003
- 2003-02-13 US US10/365,908 patent/US6797491B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2004
- 2004-06-18 US US10/871,138 patent/US7211411B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2006
- 2006-08-03 CY CY20061101090T patent/CY1105389T1/el unknown
- 2006-08-09 AU AU2006203436A patent/AU2006203436A1/en not_active Abandoned
-
2007
- 2007-04-26 US US11/796,144 patent/US7754449B2/en not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
LIU DW et al. "Recombinant adeno-associated virus expressing human papillomavirus type 16 E7 peptide DNA fused with heat shock protein DNA as a proteintial vaccine for cervical cancer" J Virol. 2000 Mar; 74(6):2888-94. B.M.Моисеенко и др. «Вакцинотерапия злокачественных опухолей»// Вопросы онкологии, 1999, т.45, с.327-332. * |
НК 1001309, 20.04.2000. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2538683C2 (ru) * | 2008-10-31 | 2015-01-10 | Новартис Аг | КОМБИНАЦИЯ ИНГИБИТОРА ФОСФАТИДИЛИНОЗИТОЛ-3-КИНАЗЫ (Р13К) И ИНГИБИТОРА mTOR |
RU2519673C2 (ru) * | 2008-11-28 | 2014-06-20 | Новартис Аг | Комбинации ингибитора hsp90 |
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
RU2282461C2 (ru) | Лечение инфекции, вызываемой вирусом папилломы человека | |
AU2001271449A1 (en) | Human papilloma virus treatment | |
US6524825B1 (en) | Immune responses against HPV antigens elicited by compositions comprising an HPV antigen and a stress protein or an expression vector capable of expression of these proteins | |
EP1336621B1 (en) | Immune responses against HPV antigens elicited by compositions comprising an HPV antigen and a stress protein or an expression vector capable of expression of these proteins | |
AU779770B2 (en) | Immune responses against HPV antigens elicited by compositions comprising an HPV antigen and a stress protein or an expression vector capable of expression of these proteins | |
AU2005201826B2 (en) | Immune responses against HPV antigens elicited by compositions comprising an HPV antigen and a stress protein or an expression vector capable of expression of these proteins |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PC4A | Invention patent assignment |
Effective date: 20071126 |
|
MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20110627 |