RU2265050C1 - Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов - Google Patents
Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов Download PDFInfo
- Publication number
- RU2265050C1 RU2265050C1 RU2004112855/13A RU2004112855A RU2265050C1 RU 2265050 C1 RU2265050 C1 RU 2265050C1 RU 2004112855/13 A RU2004112855/13 A RU 2004112855/13A RU 2004112855 A RU2004112855 A RU 2004112855A RU 2265050 C1 RU2265050 C1 RU 2265050C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- macrophages
- cells
- stimulation
- effect
- phagocytic
- Prior art date
Links
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 230000000242 pagocytic effect Effects 0.000 title claims description 26
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 title abstract description 3
- 239000001307 helium Substances 0.000 claims abstract description 14
- 229910052734 helium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N helium atom Chemical compound [He] SWQJXJOGLNCZEY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 239000007789 gas Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 16
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 abstract description 10
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- 238000004157 plasmatron Methods 0.000 abstract description 2
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 abstract 1
- 230000002900 effect on cell Effects 0.000 abstract 1
- 230000016919 positive regulation of biological process Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 9
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 8
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 7
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 6
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 2
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 2
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 2
- 241000191967 Staphylococcus aureus Species 0.000 description 1
- 210000003815 abdominal wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000019621 digestibility Nutrition 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Plasma Technology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано в клинической практике для стимулирования биологических процессов в клетках и тканях. Перитонеальные макрофаги помещают в среду 199. Подвергают воздействию гелиевой плазмы, полученной при силе тока 30 А, напряжении 20 В и расходе газа 2 л/мин. Облучение клеток проводят в течение 30 секунд с расстояния 20 см от сопла плазмотрона. Способ обеспечивает сокращение времени действия физического фактора на клетки и позволяет локально воздействовать на функции макрофагов как в культуре клеток, так и в пределах целостного организма. 1 табл.
Description
Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии и патологической физиологии, и может быть использована в клинической практике как метод стимулирующего воздействия на биологические процессы, протекающие в клетках и тканях.
Известен способ стимуляции фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов мышей in vitro высокой внешней температурой (40°С), действующей на перитонеальные макрофаги мышей в течение 3х часов (Yoshioka M., Koga S., Maeta M. et al. Jpn. J.Surg. 1990, Vol.20, №1, P.119-122).
Сущность способа стимуляции фагоцитарной активности макрофагов заключается в том, что перитонеальные макрофаги помещают в среду 199 и подвергают воздействию гелиевой плазмы, полученной при силе тока 30А, напряжении 20В и расходе газа 2 л/мин, воздействие осуществляют 30 секунд с расстояния 20 см от сопла плазмотрона.
Такие параметры и являются оптимальными. Другие параметры расхода газа, силы тока и напряжения, а также расстояние от сопла плазмотрона до объекта либо не изменяло фагоцитарной активности макрофагов, либо оказывало подавляющее действие.
Способ осуществляется следующим образом. В качестве источника макрофагов используют перитонеальный экссудат мышей-гибридов первого поколения (СВА×С57В1/6) F1, полученных из питомника АМН "Столбовая". Мышей забивают цервикальной дислокацией позвоночника, освобождают доступ к брюшной стенке, срезая на ней участок кожного покрова. В брюшную полость вводят охлажденную среду 199 в объеме 2-2,5 мл. Тщательно массируют в течение 1 мин, затем отсасывают содержимое брюшной полости пастеровской пипеткой. Экссудат наносят в пластиковые чашки Петри однократного пользования диаметром 5 см. Чашки помещают на 1 час в термостат при температуре 37°С с 5% содержанием СО2. После инкубации экссудата пятикратно смывают неприлипшие клетки 0,9% раствором NaCl. После этого в чашки вносят по 1 мл среды 199 и аккуратно снимают монослой прилипающих клеток (макрофагов) при помощи «poliesman» (стеклянная палочка с резиновым наконечником). Суспензию макрофагов переносят в центрифужные пробирки и ставят на лед. Количество живых и мертвых клеток определяют в камере Горяева в смеси 0,1% раствора трипанового синего, с использованием светового микроскопа МБИ-3. Количество погибших клеток не превышает 8-10%.
В опытах используют плазменную установку СУПР-М и физиотерапевтический плазмотрон. 1×106 исследуемых клеток в объеме 1 мл среды 199 вносят в пластиковые чашки Петри однократного пользования диаметром 5 см. Облучение макрофагов проводят гелиевой плазмой при силе тока 30 А, напряжении 20 В с расстояния 20 см от сопла плазмотрона. Расход гелия составляет 2 л/мин. Макрофаги подвергают воздействию плазменного потока в течение 30 секунд. Все манипуляции проводят на льду для исключения теплового эффекта.
Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов определяли по способности поглощать и переваривать бактерии Staph. aureus, штамм №209, в концентрации 2 млн/мл. К 1 мл клеточной суспензии с концентрацией макрофагов млн/мл добавляют 1 мл раствора бактерий, ресуспензируют и разливают содержимое на 2 пробирки. Суспензию одной пробирки используют для определения поглотительной способности макрофагов, второй - для определения завершенности фагоцитарного процесса. Пробирки закрывают и помещают в термостат при температуре 37°С. Для определения поглотительной способности макрофагов пробирки инкубируют 30 мин, переваривательной - 90 мин. Через 30 мин инкубации из суспензии первой пробирки приготавливают микропрепараты. На предметное стекло наносят мазок суспензии клеток, мазки высушивают на воздухе, фиксируют метиловым спиртом 10 секунд и окрашивают по Романовскому-Гимзе в течение 8 мин. Те же манипуляции проводят с суспензией, которую инкубируют 90 мин. Используя бинокулярный микроскоп «Биолам» с увеличением на х40, подсчитывают 100 макрофагальных клеток и рассчитывают следующие показатели:
фагоцитарное число (ФЧ) -% клеток, участвующих в фагоцитозе;
фагоцитарный индекс (ФИ) - число бактерий, поглощенных одним макрофагом; индекс завершенности фагоцитоза (ИЗФ), который учитывали по убыли внутриклеточных бактерий и выражали в процентах:
N - число поглощенных бактерий на 100 макрофагов;
N00 - число непереваренных бактерий на 100 макрофагов.
Для статистической обработки полученных результатов применяли параметрический метод определения достоверности с вычислением t -критерия Стьюдента.
Пример 1.
В опыт были взяты 6 самцов (CBA×C57Bl/6)F1. Мыши забиты путем цервикальной дислокации.
Извлекали перитонеальный экссудат и наносили в пластиковые чашки. После инкубации экссудата смывали неприлипшие клетки 0,9% раствором NaCl. После этого средой 199 в объеме 1 мл снимали монослой прилипающих клеток (макрофагов). Суспензию макрофагов переносили в центрифужные пробирки и ставили на лед. Жизнеспособность макрофагов определяли в камере Горяева в 0,1% растворе трипанового синего. 1х106 макрофагальных клеток в объеме 1 мл среды 199 вносили в пластиковые чашки Петри диаметром 5 см. Макрофаги подвергали воздействию гелиевой плазмы, полученной при силе тока 30 А, напряжении 20 В и расходе газа 2 л/мин. Облучение клеток проводили в течение 30 секунд с расстояния 20 см от сопла плазмотрона. Контролем явились макрофаги, не подвергавшиеся воздействию гелиевой плазмы. Все манипуляции проводили на льду для исключения теплового эффекта. К 1 мл клеточной суспензии опытных и контрольных проб с концентрацией макрофагов млн/мл добавляли 1 мл раствора бактерий Staph. aureus, штамм №209, в концентрации 2 млн/мл. Содержимое пробирки ресуспензировали и разливали на 2 пробирки. Суспензию одной пробирки для определения поглотительной способности инкубировали 30 минут, второй 90 минут для определения переваривательной способности макрофагов. После инкубации из суспензии макрофагов готовили микропрепараты, используя окраску по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом подсчитывали 100 макрофагов и рассчитывали фагоцитарное число, фагоцитарный индекс и индекс завершенности фагоцитоза.
Эксперимент показал, что облучение клеток гелиевой плазмой в течение 30 секунд приводило к повышению фагоцитарной способности макрофагов, что проявилось увеличением фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса и индекса завершенности фагоцитоза.
Пример 2.
В опыт были взяты 5 самцов-гибридов (CBA×C57Bl/6)F1. Мыши забивались путем цервикальной дислокации. Перитонеальные макрофаги получали по общепринятой методике. 1×106 макрофагов в объеме 1 мл среды 199 внесли в пластиковые чашки Петри диаметром 5 см. Клетки подвергали воздействию гелиевой плазмы, полученной при силе тока 30 А, напряжении 20 В и расходе газа 2 л/мин. Воздействие плазмы на макрофаги осуществлялось в течение 30 секунд с расстояния 20 см от сопла плазмотрона. Контролем явились макрофаги, находившиеся в тех же условиях, но без воздействия плазмы. Все манипуляции проводили на льду для исключения теплового эффекта. Фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов определяли по отношению к золотистому стафилококку штамм №209. С этой целью к 1 мл суспензии макрофагов опытных и контрольных проб с концентрацией клеток млн/мл добавляли 2 млн бактерий в объеме 1 мл. Содержимое пробирки ресуспензировали и разливали на 2 пробирки. Пробирки помещали в термостат при 37°С. Для определения поглотительной способности макрофагов пробирки инкубировали 30 минут, переваривательной - 90 минут. После инкубации из суспензии готовили микропрепараты, используя окраску по Романовскому-Гимзе. Используя бинокулярный микроскопом подсчитывали 100 макрофагальных клеток и рассчитывают фагоцитарное число, фагоцитарный индекс и индекс завершенности фагоцитоза.
Эксперимент показал, что облучение клеток гелиевой плазмой в течение 30 секунд приводило к повышению фагоцитарной активности макрофагов.
Испытание способа проводили на 36 самцах-гибридах (CBA×C57Bl/6)F1. Для каждой пробы макрофаги перитонеального экссудата пулировали от двух мышей.
Выделяли следующие группы экспериментальных животных:
1. Контрольная группа - перитонеальные макрофаги животных не подвергали воздействию гелиевой плазмы.
2. Подопытная группа - перитонеальные макрофаги животных подвергали воздействию гелиевой плазмы в течение 30 секунд.
После облучения фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов определяли по способности поглощать и переваривать бактерии Staph. aureus, штамм №209. Проведенные эксперименты показали, что воздействие гелиевой плазмы на макрофаги усиливает их фагоцитарную активность, что проявлялось увеличением фагоцитарного числа, фагоцитарного индекса и индекса завершенности фагоцитоза. Результаты опытов представлены в таблице.
Использование предлагаемого способа стимуляции фагоцитарной активности макрофагов обеспечивает следующие преимущества:
1. По сравнению с другими способами стимуляции фагоцитарной активности макрофагов эффект достигается в результате очень короткого времени действия фактора (30 секунд).
2. Способ позволяет локально воздействовать на функции макрофагов как в культуре клеток, так и в пределах целостного организма.
| Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов | ||
| Показатель | Контроль | Действие гелиевой плазмы |
| ФЧ | 83,11±1,56 | 95,11±,1,41* |
| ФИ | 2,31±0,11 | 3,32±0,17* |
| ИЗФ | 33,8±1,28 | 47,34±1,05* |
| Число животных в группе | 18 | 18 |
| Примечание: ФЧ - фагоцитарное число ФИ - фагоцитарный индекс ИЗФ - индекс завершенности фагоцитоза * - Р< 0,0005 по сравнению с контролем |
||
Claims (1)
- Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов, включающий инкубирование в среде 199 с последующей обработкой физическим фактором, отличающийся тем, что в качестве физического фактора используют гелиевую плазму, полученную при силе тока 30А, напряжении 20В и расходе газа 2 л/мин, и осуществляют воздействие плазмы на макрофаги в течение 30 с с расстояния 20 см от сопла плазмотрона.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004112855/13A RU2265050C1 (ru) | 2004-04-26 | 2004-04-26 | Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2004112855/13A RU2265050C1 (ru) | 2004-04-26 | 2004-04-26 | Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2004112855A RU2004112855A (ru) | 2005-10-10 |
| RU2265050C1 true RU2265050C1 (ru) | 2005-11-27 |
Family
ID=35851005
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2004112855/13A RU2265050C1 (ru) | 2004-04-26 | 2004-04-26 | Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2265050C1 (ru) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2067010C1 (ru) * | 1993-02-08 | 1996-09-27 | Смоленский государственный медицинский институт | Способ лечения трофических язв |
| RU2134134C1 (ru) * | 1996-02-29 | 1999-08-10 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ подготовки трансплантата для свободной аутодермопластики ожоговой раны |
| RU2174398C2 (ru) * | 1998-04-02 | 2001-10-10 | Кабисов Руслан Казбекович | Способ лечения и/или профилактики поражений мягких тканей организма |
| RU2182597C1 (ru) * | 2000-12-09 | 2002-05-20 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ повышения функциональной активности лимфоцитов |
-
2004
- 2004-04-26 RU RU2004112855/13A patent/RU2265050C1/ru not_active IP Right Cessation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2067010C1 (ru) * | 1993-02-08 | 1996-09-27 | Смоленский государственный медицинский институт | Способ лечения трофических язв |
| RU2134134C1 (ru) * | 1996-02-29 | 1999-08-10 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ подготовки трансплантата для свободной аутодермопластики ожоговой раны |
| RU2174398C2 (ru) * | 1998-04-02 | 2001-10-10 | Кабисов Руслан Казбекович | Способ лечения и/или профилактики поражений мягких тканей организма |
| RU2182597C1 (ru) * | 2000-12-09 | 2002-05-20 | Смоленская государственная медицинская академия | Способ повышения функциональной активности лимфоцитов |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| YOSHIOKA H. et al., The influence of hyperthermia in vitro on the functions of peritoneal macrophages in mice, Jpn. J. Surg., 1990, v.20, n.1, p.119-122. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2004112855A (ru) | 2005-10-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN111903603B (zh) | 用于构建胆管癌异种移植模型的移植体及其制备方法和用途 | |
| CN104622709B (zh) | 人干细胞因子皮肤修复液及其制备方法 | |
| CN107022525A (zh) | 用于肿瘤治疗的nk细胞培养方法 | |
| CN102492623B (zh) | 海水盾纤毛虫体外活体培养培养基的制备及培养方法 | |
| WO2011150726A1 (zh) | 一种干细胞过滤筛选富集并快速复合装置 | |
| Shinkafi et al. | Antibacterial activity of citrus limonon acnevulgaris (pimples) | |
| RU2265050C1 (ru) | Способ стимуляции фагоцитарной активности макрофагов | |
| CN102978154A (zh) | 一种同时分离内蒙古白绒山羊皮肤成纤维细胞和表皮细胞的原代培养方法 | |
| CN110292629B (zh) | 己糖激酶1在延缓衰老中的应用 | |
| CN108184890A (zh) | 一种用于动物原代细胞培养的消毒液及其制备方法 | |
| CN102907356A (zh) | 一种斑马鱼细菌感染模型的构建方法及其应用 | |
| CN114557336B (zh) | 可提高组织原代分离数量及活性的组织处理液及其制备方法和应用 | |
| Hermankova et al. | The identification of interferon-γ as a key supportive factor for retinal differentiation of murine mesenchymal stem cells | |
| CN106491652A (zh) | 鹅胚胎素制备方法及应用 | |
| CN107460208A (zh) | 哺乳动物体细胞克隆方法和使用的培养液 | |
| RU2398377C1 (ru) | Способ консервирования лейкозных клеток, выделенных из селезенки мышей инбредной линии akr/jy | |
| CN118356498B (zh) | Reps2的表达抑制剂在制备防治1,2-二氯乙烷引起的大脑中毒性神经炎症的药物中的应用 | |
| CN106562995A (zh) | 天鹅胚胎素制备方法及应用 | |
| CN113293192A (zh) | 中性粒细胞趋化检测试剂盒 | |
| RU2167196C1 (ru) | Способ стимуляции пролиферативной активности лимфоцитов | |
| RU2709720C1 (ru) | Способ обработки культуры staphylococcus aureus кислородосодержащим газом из портативного озонатора | |
| RU2814268C1 (ru) | Способ озонирования физиологического раствора | |
| Tedeschi et al. | Cocci and diphtheroids in blood cultures from patients in various pathological situations | |
| RU2802662C1 (ru) | Способ деструкции биоплёнок pseudomonas aeruginosa комбинацией озона с пероксидом водорода | |
| CN119530153A (zh) | β-葡聚糖诱导巨噬细胞分泌的非炎性微囊泡在治疗炎症中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | The patent is invalid due to non-payment of fees |
Effective date: 20060427 |