RU2136698C1 - Комплексы включения n-морфолино-n-нитрозоаминоацетонитрила и циклодекстрина или производных циклодекстрина и способ их получения, фармацевтическая композиция, способ воздействия на живые клетки окисью азота - Google Patents
Комплексы включения n-морфолино-n-нитрозоаминоацетонитрила и циклодекстрина или производных циклодекстрина и способ их получения, фармацевтическая композиция, способ воздействия на живые клетки окисью азота Download PDFInfo
- Publication number
- RU2136698C1 RU2136698C1 RU96100760A RU96100760A RU2136698C1 RU 2136698 C1 RU2136698 C1 RU 2136698C1 RU 96100760 A RU96100760 A RU 96100760A RU 96100760 A RU96100760 A RU 96100760A RU 2136698 C1 RU2136698 C1 RU 2136698C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cyclodextrin
- sin
- inclusion complexes
- ions
- complexes
- Prior art date
Links
Images
Classifications
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B82—NANOTECHNOLOGY
- B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
- B82Y5/00—Nanobiotechnology or nanomedicine, e.g. protein engineering or drug delivery
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
- A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/69—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit
- A61K47/6949—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes
- A61K47/6951—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the conjugate being characterised by physical or galenical forms, e.g. emulsion, particle, inclusion complex, stent or kit inclusion complexes, e.g. clathrates, cavitates or fullerenes using cyclodextrin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0006—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid
- C08B37/0009—Homoglycans, i.e. polysaccharides having a main chain consisting of one single sugar, e.g. colominic acid alpha-D-Glucans, e.g. polydextrose, alternan, glycogen; (alpha-1,4)(alpha-1,6)-D-Glucans; (alpha-1,3)(alpha-1,4)-D-Glucans, e.g. isolichenan or nigeran; (alpha-1,4)-D-Glucans; (alpha-1,3)-D-Glucans, e.g. pseudonigeran; Derivatives thereof
- C08B37/0012—Cyclodextrin [CD], e.g. cycle with 6 units (alpha), with 7 units (beta) and with 8 units (gamma), large-ring cyclodextrin or cycloamylose with 9 units or more; Derivatives thereof
- C08B37/0015—Inclusion compounds, i.e. host-guest compounds, e.g. polyrotaxanes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nanotechnology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Detergent Compositions (AREA)
Abstract
Описываются новые комплексы включения N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрила и циклодекстрина, или гидроксипропилированного циклодекстрина, или метилированного циклодекстрина, содержащие 5-15% N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрила и дополнительно содержащие в качестве катализатора или стабилизатора ионы в виде аммонийной соли или соли щелочного металла, указанного комплекса, стабильные в твердом состоянии, и выделяют окись азота при комнатной температуре при растворении в воде или в водных системах. Описывается способ их получения, фармацевтическая композиция на основе вышеуказанных комплексов, обладающая свойством выделить окись азота, и способ воздействия на живые клетки окисью азота. Окись азота участвует во многих важных процессах биорегуляции. 4 с. и 12 з.п. ф-лы, 2 ил, 4 табл.
Description
Изобретение относится к физиологически активным агентам, выделяющим окись азота, способам их получения, содержащим их композициям, а также к способам их применения.
В частности, изобретение относится к новым комплексам включения SIN-1A, стабильным в твердом состоянии, образованным с циклодекстринами или производными циклодекстринов, которые выделяют окись азота при комнатной температуре при растворении в воде или в водных системах и которые могут содержать ионы катализатора или стабилизатора. Изобретение также относится к способам их получения, композициям, содержащим их, и способам их применения.
В данном описании изобретения использованы следующие сокращения:
SIN-1 - 3-морфолино-сиднонимин
SIN-1A - N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрил
SIN-1С - цианометиленаминоморфолин
CDPSI - ионный растворимый полимер β- циклодекстрина
DIMEB - гептакис-2,6-ди-O-метил β- циклодекстрин
EDRF - полученный из эндотелия фактор релаксации
HPBCD - гидроксипропил β- циклодекстрин
Молзидомин - N-этоксикарбонил-3-морфолиносиднонимин
RAMEB - слабо метилированный β- циклодекстрин, около 12 метоксигрупп на циклодекстриновую единицу (в среднем),
TRIMEB - гептакис-2,3,6-три-о-метил β- циклодекстрин.
SIN-1 - 3-морфолино-сиднонимин
SIN-1A - N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрил
SIN-1С - цианометиленаминоморфолин
CDPSI - ионный растворимый полимер β- циклодекстрина
DIMEB - гептакис-2,6-ди-O-метил β- циклодекстрин
EDRF - полученный из эндотелия фактор релаксации
HPBCD - гидроксипропил β- циклодекстрин
Молзидомин - N-этоксикарбонил-3-морфолиносиднонимин
RAMEB - слабо метилированный β- циклодекстрин, около 12 метоксигрупп на циклодекстриновую единицу (в среднем),
TRIMEB - гептакис-2,3,6-три-о-метил β- циклодекстрин.
Как известно, монооксид азота может иметь восстановленную форму (NO), которая называется окисью азота, и окисленную форму (NO+), которая называется нитрозилионом. Окись азота (NO) участвует во многих важных процессах биорегуляции.
Применение выделяющих NO доноров зависит как от глубины, так и от длительности действия средства, понижающего кровяное давление. Требуются доноры NO, имеющие более продолжительное действие, которые выделяют NO без метаболической трансформации донора, т.е. которые не зависят от функций печени. Более того, доноры NO должны обладать некоторыми липофильными свойствами, чтобы проникать через клеточные мембраны для оказания воздействия на нужные органы и ткани. Поэтому относительно простые неорганические соединения неприемлемы для этих целей.
Получение продукта можно вести тремя различными путями.
а. Предшественники донора NO содержат NO-группу, которая высвобождается либо непосредственно в процессе метаболизма, либо после удаления с помощью ферментативного гидролиза некоторых защитных групп. Эти процессы протекают главным образом в печени (например Молзидомин).
Предшественники сиднониминового типа (например Молзидомин) зависят от функций печени, для удаления защитных этоксикарбонильных групп с образованием сначала SIN-1, а затем (во второй, зависимой от pH стадии, катализируемой ОН - ионами) образуется очень нестабильный SIN-1A, который вне зависимости от pH самопроизвольно разлагается с выделением NO.
б. Получение аддуктов или комплексов окиси азота с различными нуклеофильными веществами. Обычно синтез комплексов вторичных аминов и окиси азота осуществляют следующим образом. Вторичный амин, например безводный диэтиламин растворяют в безводном эфире, кислород удаляется из системы на бане из ацетона и сухого льда и сухой NO пропускается через эфирный раствор при температуре -78oC в течение 3 часов, предпочтительно при высоком давлении (100 psi). Период полуразложения известного ранее аддукта диэтиламина и окиси азота формулы Et2-N-NH-(ONa)-N-O (DEANO) составляет приблизительно 2 минуты, тогда как аддукт окиси азота и полиаминоспермина (SPNO) имеет период полуразложения 39 минут.
с. Предшественник стабилизируется путем образования комплексов включения циклодекстрина, в то время как NO самопроизвольно выделяется при физиологических условиях. Известный комплекс циклодекстрина и предшественника стабилен в твердом состоянии,
Известно, что SIN-1 - стабильное в твердом состоянии вещество, однако его таутомерная форма с открытым кольцом - SIN-1A чрезвычайно нестабильна. Очень трудно выделить чистый желтый кристаллический продукт желтого цвета, этот продукт может храниться только при температуре -80oC в атмосфере азота. В твердом состоянии SIN-1A путем фотолиза быстро выделяет 1 моль NO, а в водных растворах даже в темноте он быстро превращается в цианометиленаминоморфолин (SIN-1С).
Известно, что SIN-1 - стабильное в твердом состоянии вещество, однако его таутомерная форма с открытым кольцом - SIN-1A чрезвычайно нестабильна. Очень трудно выделить чистый желтый кристаллический продукт желтого цвета, этот продукт может храниться только при температуре -80oC в атмосфере азота. В твердом состоянии SIN-1A путем фотолиза быстро выделяет 1 моль NO, а в водных растворах даже в темноте он быстро превращается в цианометиленаминоморфолин (SIN-1С).
Таким образом SIN-1 может рассматриваться как предшественник, a SIN-1C как биологически неактивный продукт распада. Равновесие между стабильным SIN-1 и активным SIN-1A (который в действительности является лекарственным средством) зависит от факторов окружающей среды (pH, температуры). Однако вследствие чрезвычайной нестабильности SIN-1A, особенно по отношению к кислороду, он является практически только короткоживущим промежуточным продуктом в процессе разложения SIN-1.
В настоящее время SIN-1 реализуется на рынке только для внутривенного применения, в виде ампул с порошком, который нужно растворять перед инъекцией. Назначенный перорально предшественник SIN-1 неэффективен, так как стадия гидролиза, которая требуется для образования генерирующей NO формы SIN-1A, не может протекать при щелочных значениях pH, и до его абсорбции он быстро и полностью разлагается до SIN-1C при более высоких значениях pH в желудочно-кишечном тракте.
Также опубликованы данные о том, что SIN-1 может быть стабилизирован путем образования циклодекстриновых комплексов, и равновесие SIN-1 ---> SIN-1A ---> SIN-1C может быть сдвинуто путем комплексообразования с производными циклодекстрина (WO 91/14681). Сообщалось, что комплексообразование с определенными производными CD ингибирует образование SIN-1C. Т.о. более стабильные комплексы SIN-1/CDPSI, включая содержащие повышенное количество SIN-1A (проявляющие биологическую активность, основанную на выделении NO) были получены путем нагревания в течении короткого времени комплекса SIN-1/CDPSI, полученного путем лиофилизации. Подобным же образом был получен комплекс SIN-1/DIMEB. Предлагалось использовать эти производные циклодекстрина для фармацевтических целей.
В данной заявке описываются комплексы SIN-1/циклодекстрин или смесь SIN-1/лактоза с 4,5% (по весу) содержанием SIN-1, со следующим содержанием SIN-1A в полученных продуктах:
в комплексе CDPSI - 1,27%
BCD - 0,08%
DIMEB - 0,06%
HPBCD - 0,115%
в смеси с лактозой - 0,00%
Практически полное превращение SIN-1 в SIN-1A не описывается даже в случае, когда комплексообразование осуществляется с CDPSI, который, как установлено, является наиболее эффективным комплексообразующим агентом для этих целей. Более того, CDPSI и DIMEB еще не одобрены в качестве фармацевтических препаратов. Т.о. получение стабильной, пригодной к реализации на рынке формы чистого SIN-1A является нерешенной проблемой.
в комплексе CDPSI - 1,27%
BCD - 0,08%
DIMEB - 0,06%
HPBCD - 0,115%
в смеси с лактозой - 0,00%
Практически полное превращение SIN-1 в SIN-1A не описывается даже в случае, когда комплексообразование осуществляется с CDPSI, который, как установлено, является наиболее эффективным комплексообразующим агентом для этих целей. Более того, CDPSI и DIMEB еще не одобрены в качестве фармацевтических препаратов. Т.о. получение стабильной, пригодной к реализации на рынке формы чистого SIN-1A является нерешенной проблемой.
Т. к. SIN-1 может применяться только внутривенно, его предшественник Молзидомин используется перорально для лечения сердечной недостаточности: Молзидомин ферментативно гидролизуется в печени до SIN-1,
Основной целью настоящего изобретения является стабилизация SIN-1, являющегося донором NO, таким образом, чтобы обеспечить получение такой лекарственной формы, которая может быть назначена как орально, так и парентерально, безвредность которой подтверждается полной (даже в случае внутривенного введения) токсикологической документацией. В настоящее время 2 типа циклодекстринов удовлетворяют этим фундаментальным требованиям: γ- циклодекстрин и HPBCD.
Основной целью настоящего изобретения является стабилизация SIN-1, являющегося донором NO, таким образом, чтобы обеспечить получение такой лекарственной формы, которая может быть назначена как орально, так и парентерально, безвредность которой подтверждается полной (даже в случае внутривенного введения) токсикологической документацией. В настоящее время 2 типа циклодекстринов удовлетворяют этим фундаментальным требованиям: γ- циклодекстрин и HPBCD.
Хотя известно стабилизирующее воздействие CDPSI и DIMEB на SIN-1A в водных растворах, однако из этого не следует, что неионный γ- циклодекстрин также эффективен в этом отношении, в частности вследствие того, что он имеет значительно больший диаметр полости. Великолепный стабилизирующий эффект CDPSI был сопоставлен с его полимерной структурой, а именно с кооперативными действиями различных циклодекстриновых колец, размещенных в стерической близости.
Объектом настоящего изобретения является создание новых комплексов включения SIN-1A, стабильных в твердом состоянии, полученных из SIN-1A и циклодекстринов или производных циклодекстрина, которые выделяют окись азота при комнатной температуре при растворении в воде или в водных системах и которые могут также содержать ион катализатора или стабилизатора.
В соответствии с предпочтительным вариантом выполнения изобретения они содержат в качестве стабилизатора или катализатора физиологически приемлемый анион, которым может быть анион карбоновой кислоты, например ацетат, формиат, пропионат, аскорбинат, тартрат и/или лактат, и/или анионы неорганических кислот, такие как фосфат, фосфит, борат, карбонат, гидрокарбонат, сульфат и/или сульфит. Было установлено, что ацетат-ион лучше всего подходит для этих целей. Анионы могут присутствовать в виде солей, при этом соответствующими катионами могут быть предпочтительно ионы аммония или щелочных металлов, однако также могут быть использованы другие ионы.
В качестве циклодекстринового компонента они содержат β- циклодекстрин, γ- циклодекстрин или α- циклодекстрин, в особенности для фармакологического применения. Они также могут содержать производные циклодекстринов, а именно, гидроксипропилированные или метилированные циклодекстрины, такие как HPBCD, DIMEB, RAMEB, TRIMEB или CDPSI.
Другим объектом настоящего изобретения являются биологически активные композиции, содержащие в качестве активного ингредиента новые комплексы SIN-1A/циклодекстрин наряду со вспомогательными и дополнительными ингредиентами, облегчающими их использование. Они включают, но не ограничиваются фармацевтическими композициями, содержащими в качестве активного ингредиента комплексы включения SIN-1A, возможно с обычными вспомогательными и дополнительными веществами, используемыми в фармацевтике для орального, парентерального или другого применения. Лекарственные формы предпочтительно представляют собой порошки, растворяемые непосредственно перед приемом. Так, лекарства для парентерального введения представляют собой предпочтительно порошки, растворяемые перед инъекцией.
Предпочтительными являются фармацевтические композиции, содержащий в качестве активного компонента стабильные в твердом состоянии комплексы включения SIN-1A, образованные с β- циклодекстрином, γ- циклодекстрином, α- циклодекстрином и содержащие физиологически приемлемый анион, такой как ион карбоновой кислоты, включая ацетат, формиат, пропионат, аскорбинат, тартрат, и/или лактат и/или анион неорганической кислоты, включая фосфат, фосфит, борат, карбонат, гидрокарбонат, сульфат и/или сульфит, в качестве стабилизатора или катализатора. Анионы могут быть в форме солей, например солей аммония или щелочных металлов. Ацетат аммония является самой подходящей солью для этих целей.
Другим объектом настоящего изобретения являются наборы, которые могут быть использованы в качестве стандартных веществ, выделяющих NO, для того, чтобы высвобождать NO в заданных количествах и с заданной скоростью при растворении в водных средах, и содержащие в качестве активного ингредиента комплексы включения SIN-1A согласно данному изобретению. Это возможно, т.к. настоящее изобретение относится к получению и стабилизации чрезвычайно лабильного SIN-1A, который при высвобождении из полости циклодекстрина, даже после простого растворения в дистиллированной воде сразу же начинает генерировать NO в заданном количестве и с заданной скоростью без необходимости добавления какого-либо дополнительного энзима или реагента.
Настоящее изобретение также включает способы получения новых комплексов включения SIN-1A, стабильных в твердом состоянии, образованных с циклодекстринами или производными циклодекстринов путем каталитического действия ионов при соответствующих значениях pH на SIN-1 с целью сдвига равновесия в сторону образования SIN-1A, в присутствии циклодекстринов или производных циклодекстринов, способных к образованию комплексов включения, посредством чего образованный SIN-1A сразу же комплексуется и стабилизируется путем образования комплексов включения SIN-1A/циклодекстрин. Способ включает выделение в твердом состоянии полученных комплексов SIN-1/циклодекстрин, которые могут включать ионы. Ионы могут содержаться в форме их солей. Предпочтительным способом в соответствии с настоящим изобретением является проведение реакции SIN-1 и циклодекстрина или производного циклодекстрина в твердом состоянии в присутствии иона, предпочтительно в форме его соли в качестве катализатора, путем тщательного перемешивания или перемалывания компонентов. Другим способом в соответствии с изобретением является сушка вымораживанием водных, не содержащих кислорода растворов, содержащих упомянутые компоненты, предпочтительно с последующей "повторной сушкой" в вакууме.
В качестве катализаторов процесса предпочтительно использовать соли аммония или щелочных металлов с анионами карбоновых кислот, такими как ацетат, формиат, пропионат, аскорбинат, тартрат и/или лактат и/или с анионами неорганических кислот, такими как борат, карбонат, гидрокарбонат, фосфат, фосфит, сульфат и/или сульфит. Используемые соли могут содержать летучие анионы или катионы, такие как карбонат-ион или ион аммония, которые частично или полностью удаляются в течение процесса. Для проведения вышеупомянутого процесса благоприятными условиями проведения реакции являются значения pH=6-10 в случае, когда вода используется в качестве реакционной среды, а в случае "повторной сушки" температура должна быть 40-100oC, предпочтительно 50-70oC. Как видно по тестам на высвобождение NO, комплексы SIN-1A/циклодекстрин сразу же выделяют окись азота после растворения твердых комплексов в водных системах. Т. о. единственный путь получения комплексов SIN-1A и циклодекстрина контролируемого состава (имеющих самое низкое содержание SIN-1C) заключается в таутомеризации SIN-1 и в одновременном комплексовании образовавшегося SIN-1A в твердом состоянии. Аналогичная ситуация имеет место, когда образование комплекса осуществляется путем сушки вымораживанием. В этом случае стадия повторной сушки (последующая лиофилизация) обеспечивает условия для каталитического комплексообразования в твердой фазе.
Другими объектами изобретения являются способы воздействия окиси азота на живые клетки. Они включают, но не ограничиваются лечением симптомов, зависимых от NO, у человека и животных, таких как стенокардическая и ишемическая сердечная недостаточность, физиологический контроль кровяного давления, агрегация тромбоцитов, медиация релаксации перистальтики, эрекция и др. Эта цель достигается назначением предпочтительно перорально или парентерально пациентам, нуждающимся в таком лечении, эффективных доз новых комплексов включения SIN-1A, стабильных в твердом состоянии, образованных с циклодекстринами или производными циклодекстринов, которые содержат по меньшей мере один ион в качестве катализатора или стабилизатора и которые при растворении в воде или в водных системах при комнатной температуре выделяют окись азота.
Предпочтительное выполнение изобретения основано на применении комплексов SIN-1A и β- циклодекстрина, γ- циклодекстрина или α- циклодекстрина, которые могут содержать в форме аммонийных или щелочных солей карбоновых кислот такие анионы, как ацетат, формиат, пропионат, аскорбинат, тартрат и/или лактат и/или анионы неорганических кислот, такие как фосфат, фосфит, борат, карбонат, гидрокарбонат, сульфат и/или сульфит.
Изобретение включает также способы лечения NO-зависимых симптомов у человека и животных посредством назначения пациентам продукта количественного превращения SIN-1 в SIN-1A, полученного путем катализируемого ионами и стабилизированного циклодекстрином превращения в твердом состоянии в присутствии циклодекстрина или производного циклодекстрина, способного незамедлительно образовывать комплексы включения.
Основными преимуществами комплексов SIN-1A/циклодекстрин по сравнению с SIN-1 и другими известными до сих пор донорами NO являются следующие:
- стабильность в течение длительного периода времени;
- быстрота действия;
- увеличенный период полуразложения;
- независимость от печени;
- независимость от pH;
- и, наконец, более высокая способность достигать целей (тканей)
Наличие в нашем распоряжении стабильной композиции открывает новую фазу в лечении с помощью окиси азота, которая называется некоторыми авторами "неожиданной новой суперзвездой биохимии" (Chem. Ing. News Dec. 1993. page 26-30).
- стабильность в течение длительного периода времени;
- быстрота действия;
- увеличенный период полуразложения;
- независимость от печени;
- независимость от pH;
- и, наконец, более высокая способность достигать целей (тканей)
Наличие в нашем распоряжении стабильной композиции открывает новую фазу в лечении с помощью окиси азота, которая называется некоторыми авторами "неожиданной новой суперзвездой биохимии" (Chem. Ing. News Dec. 1993. page 26-30).
Приведенные ниже примеры служат иллюстрацией, но не ограничением настоящего изобретения.
I. Химические примеры
Пример 1.1.
Пример 1.1.
Получение комплекса SIN-1/ γ- циклодекстрин
2 г γ- циклодекстрина и 0,8 г ацетата аммония растворяли в 25 мл дистиллированной воды при воздействии ультразвука. Раствор дезоксигенировали барботажем газообразного гелия, после чего растворяли 200 мг SIN-1. Раствор сразу же сушили вымораживанием для выделения твердого комплекса. Для практически полного удаления воды из комплекса применялась повторная сушка при температуре 40-50oC в течение 2 часов. Как раствор, так и вещество защищали от света. Комплекс имеет вид легкого желтого порошка. Выход - 2.61±0.1 г. Потери при сушке менее 1%.
2 г γ- циклодекстрина и 0,8 г ацетата аммония растворяли в 25 мл дистиллированной воды при воздействии ультразвука. Раствор дезоксигенировали барботажем газообразного гелия, после чего растворяли 200 мг SIN-1. Раствор сразу же сушили вымораживанием для выделения твердого комплекса. Для практически полного удаления воды из комплекса применялась повторная сушка при температуре 40-50oC в течение 2 часов. Как раствор, так и вещество защищали от света. Комплекс имеет вид легкого желтого порошка. Выход - 2.61±0.1 г. Потери при сушке менее 1%.
Данные ВЭЖХ: содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 11,7±0.2%
содержание SIN-1C - 0,36±0.1%
Во всех примерах в настоящем описании изобретения использовался следующий метод одновременного определения SIN-1, SIN-1A и SIN-1C с помощь ВЭЖХ:
Колонка: аналитическая колонка Ultrasphere I. P. фирмы Beckman-Astec, 4,6±250 мм, диаметр частиц 5 мкм.
содержание SIN-1A - 11,7±0.2%
содержание SIN-1C - 0,36±0.1%
Во всех примерах в настоящем описании изобретения использовался следующий метод одновременного определения SIN-1, SIN-1A и SIN-1C с помощь ВЭЖХ:
Колонка: аналитическая колонка Ultrasphere I. P. фирмы Beckman-Astec, 4,6±250 мм, диаметр частиц 5 мкм.
Подвижная фаза:
0,01М фосфатный буфер pH=6,0 - 800 мл
тетрагидрофуран - 200 мл
натрий-1-додекансульфонат - 0,405 г/дм3
Ионная сила: 0,05 г ион/дм3 (откорректировано с сульфатом натрия)
Скорость потока: 1 мл/мин, давление - 190 бар.
0,01М фосфатный буфер pH=6,0 - 800 мл
тетрагидрофуран - 200 мл
натрий-1-додекансульфонат - 0,405 г/дм3
Ионная сила: 0,05 г ион/дм3 (откорректировано с сульфатом натрия)
Скорость потока: 1 мл/мин, давление - 190 бар.
Объем пробы: 20 мл.
Длина волны:
-230 нм BW: 6(ref. 350 nm BW:80) для SIN-1A и SIN-1C в промежутке 0-8 мин.
-230 нм BW: 6(ref. 350 nm BW:80) для SIN-1A и SIN-1C в промежутке 0-8 мин.
-292 нм BW: 6(ref. 400 nm BW:80) для SIN-1 после 8 мин.
Время удерживания: SIN-1 9,6 мин
SIN-1C 4,5 мин
SIN-1A 4,8 мин
Калибровка осуществлялась со свежеприготовленными растворами SIN-1 и SIN-1C, содержание SIN-1A выражено в эквиваленте SIN-1C.
SIN-1C 4,5 мин
SIN-1A 4,8 мин
Калибровка осуществлялась со свежеприготовленными растворами SIN-1 и SIN-1C, содержание SIN-1A выражено в эквиваленте SIN-1C.
Пример 1.2
Получение комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрин
16 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%) и 7 г ацетата аммония растворяли в 1000 мл дистиллированной воды при воздействии ультразвука. Раствор дезоксигенировали барботажем газообразного гелия, после чего растворяли 3 г SIN-1. Раствор сразу же сушили вымораживанием для выделения твердого комплекса. Для практически полного удаления воды из комплекса применялась повторная сушка при температуре 40-50oC. Как раствор, так и вещество защищали от света. Комплекс имеет вид очень легкого желтоватого порошка. Выход - 20±1 г. Потери при сушке менее 1%.
Получение комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрин
16 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%) и 7 г ацетата аммония растворяли в 1000 мл дистиллированной воды при воздействии ультразвука. Раствор дезоксигенировали барботажем газообразного гелия, после чего растворяли 3 г SIN-1. Раствор сразу же сушили вымораживанием для выделения твердого комплекса. Для практически полного удаления воды из комплекса применялась повторная сушка при температуре 40-50oC. Как раствор, так и вещество защищали от света. Комплекс имеет вид очень легкого желтоватого порошка. Выход - 20±1 г. Потери при сушке менее 1%.
Данные ВЭЖХ: содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 12±1%
содержание SIN-1C - 0,30±0.2%
Пример 1.3
Получение комплекса SIN-1A/HPBCD
6 г HPBCD (DS=2,8) и 0,8 г ацетата аммония растворяли в 25 мл дистиллированной воды при воздействии ультразвука. При дезоксигенировании барботажем газообразного гелия растворяли 200 мг SIN-1. Раствор твердого комплекса выделяли сушкой вымораживанием. Вода удалялась при 40-50oC. Как раствор, так и вещество защищали от света. Получали 2,8±0,1 г комплекса SIN-1A/HPBCD в виде желтого легкого порошка. Потери при сушке менее 1%.
содержание SIN-1A - 12±1%
содержание SIN-1C - 0,30±0.2%
Пример 1.3
Получение комплекса SIN-1A/HPBCD
6 г HPBCD (DS=2,8) и 0,8 г ацетата аммония растворяли в 25 мл дистиллированной воды при воздействии ультразвука. При дезоксигенировании барботажем газообразного гелия растворяли 200 мг SIN-1. Раствор твердого комплекса выделяли сушкой вымораживанием. Вода удалялась при 40-50oC. Как раствор, так и вещество защищали от света. Получали 2,8±0,1 г комплекса SIN-1A/HPBCD в виде желтого легкого порошка. Потери при сушке менее 1%.
Данные ВЭЖХ: содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 11,6±0,2%
содержание SIN-1C - 0,36±0.1%
Пример 1.4
Получение комплекса SIN-1A/RAMEB
2 г RAMEB (DS=1,8) и 0,8 г ацетата аммония растворяли в 25 мл дистиллированной воды при воздействием ультразвука. При дезоксигенировании барботажем газообразного гелия растворяли 200 мг SIN-1. Раствор сушили вымораживанием и выделенный твердый комплекс сушили при 40-50oC в течение 2 часов. Как раствор, так и вещество защищали от света. Получали 2,8±0,1 г комплекса SIN-1A/RAMEB в виде желтого легкого порошка. Потери при сушке менее 1%.
содержание SIN-1A - 11,6±0,2%
содержание SIN-1C - 0,36±0.1%
Пример 1.4
Получение комплекса SIN-1A/RAMEB
2 г RAMEB (DS=1,8) и 0,8 г ацетата аммония растворяли в 25 мл дистиллированной воды при воздействием ультразвука. При дезоксигенировании барботажем газообразного гелия растворяли 200 мг SIN-1. Раствор сушили вымораживанием и выделенный твердый комплекс сушили при 40-50oC в течение 2 часов. Как раствор, так и вещество защищали от света. Получали 2,8±0,1 г комплекса SIN-1A/RAMEB в виде желтого легкого порошка. Потери при сушке менее 1%.
Данные ВЭЖХ: содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 12,0±0,2%
содержание SIN-1C - 0,6±0.1%
Пример 1.5
Получение комплекса SIN-1A/ β-циклодекстрина в фосфатном буферном растворе
1 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%) растворяли в 55 мл фосфатного буфера с pH=8,0 в соответствии с USP XXLI при воздействии ультразвука. При дезоксигенировании барботажем газообразного гелия растворяли 100 мг SIN-1. Раствор сразу же сушили вымораживанием. Как раствор, так и вещество защищали от света. Получали 1±0,1 г комплекса SIN-1A/ BCD в виде желтоватого легкого порошка. Потери при сушке менее 1%.
содержание SIN-1A - 12,0±0,2%
содержание SIN-1C - 0,6±0.1%
Пример 1.5
Получение комплекса SIN-1A/ β-циклодекстрина в фосфатном буферном растворе
1 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%) растворяли в 55 мл фосфатного буфера с pH=8,0 в соответствии с USP XXLI при воздействии ультразвука. При дезоксигенировании барботажем газообразного гелия растворяли 100 мг SIN-1. Раствор сразу же сушили вымораживанием. Как раствор, так и вещество защищали от света. Получали 1±0,1 г комплекса SIN-1A/ BCD в виде желтоватого легкого порошка. Потери при сушке менее 1%.
Данные ВЭЖХ: содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 8,3
содержание SIN-1C - 0,24
Пример 1.6
1 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%), 100 мг гидрохлорида SIN-1 и 100 мг ацетата аммония тщательно перемешивали в ступке в течение 15 мин. После недолгого перетирания смесь заметно желтела. После 2 дней хранения в закрытом контейнере, защищенном от света, проведенный в соответствии с примером 1 анализ с помощью ВЭЖХ дал следующие результаты:
содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 7,9±0,2%
содержание SIN-1C - 0,41±0.1%
Пример 1.7
Аналогичен примеру 1.6, но для 50 мг ацетата аммония видимое образование SIN-1A (желтое окрашивание) происходит медленнее, для этого требуется несколько часов.
содержание SIN-1A - 8,3
содержание SIN-1C - 0,24
Пример 1.6
1 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%), 100 мг гидрохлорида SIN-1 и 100 мг ацетата аммония тщательно перемешивали в ступке в течение 15 мин. После недолгого перетирания смесь заметно желтела. После 2 дней хранения в закрытом контейнере, защищенном от света, проведенный в соответствии с примером 1 анализ с помощью ВЭЖХ дал следующие результаты:
содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 7,9±0,2%
содержание SIN-1C - 0,41±0.1%
Пример 1.7
Аналогичен примеру 1.6, но для 50 мг ацетата аммония видимое образование SIN-1A (желтое окрашивание) происходит медленнее, для этого требуется несколько часов.
ВЭЖХ анализ SIN-1A/BCD после 2 дней хранения:
SIN-1 - 0,5±0,1%
SIN-1A - 6,9±0,2%
SIN-1C - 0,6±0.1%
Пример 1.8
Процедура аналогична описанной в примере 1.6, но при использовании 300 мг ацетата аммония желтое окрашивание возникает практически сразу же после смешивания компонентов.
SIN-1 - 0,5±0,1%
SIN-1A - 6,9±0,2%
SIN-1C - 0,6±0.1%
Пример 1.8
Процедура аналогична описанной в примере 1.6, но при использовании 300 мг ацетата аммония желтое окрашивание возникает практически сразу же после смешивания компонентов.
ВЭЖХ анализ комплекса BCD через несколько дней после получения:
SIN-1 - не определимо
SIN-1A - 6,9±0,2%
SIN-1C - 0,5±0.1%
Пример 1.9
1 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%), 100 мг гидрохлорида SIN-1 и 100 мг трехводного ацетата аммония тщательно перемешивали в ступке в течение 15 мин, затем подвергали тепловой обработке при 70oC в течение 1 часа. Данные ВЭЖХ анализа термообработанной пробы:
содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 7,1±0,2%
содержание SIN-1C - 0,8±0.1%
II. Сравнительные примеры
Пример II.1
Была предпринята попытка приготовления комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрина с уксусной кислотой. Приготовление вели как в примере 1.2, но вместо воды и ацетата аммония β- циклодекстрин растворяли в 0,1 М растворе уксусной кислоты.
SIN-1 - не определимо
SIN-1A - 6,9±0,2%
SIN-1C - 0,5±0.1%
Пример 1.9
1 г β- циклодекстрина (содержание воды 14%), 100 мг гидрохлорида SIN-1 и 100 мг трехводного ацетата аммония тщательно перемешивали в ступке в течение 15 мин, затем подвергали тепловой обработке при 70oC в течение 1 часа. Данные ВЭЖХ анализа термообработанной пробы:
содержание SIN-1 - не определимо
содержание SIN-1A - 7,1±0,2%
содержание SIN-1C - 0,8±0.1%
II. Сравнительные примеры
Пример II.1
Была предпринята попытка приготовления комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрина с уксусной кислотой. Приготовление вели как в примере 1.2, но вместо воды и ацетата аммония β- циклодекстрин растворяли в 0,1 М растворе уксусной кислоты.
Данные ВЭЖХ: SIN-1 - 8,4%
SIN-1A - 0,28%
SIN-1С - не определимо
Т.о. твердый комплекс SIN-1A/BCD не был выделен.
SIN-1A - 0,28%
SIN-1С - не определимо
Т.о. твердый комплекс SIN-1A/BCD не был выделен.
Пример II.2
Была предпринята попытка приготовления комплекса SIN-1A/BCD с гидроксидом натрия. Комплексообразование осуществляли как в примере 1.5, но вместо ацетата аммония β- циклодекстрин был растворен в 55 мл водного раствора гидроксида натрия с pH=8.4.
Была предпринята попытка приготовления комплекса SIN-1A/BCD с гидроксидом натрия. Комплексообразование осуществляли как в примере 1.5, но вместо ацетата аммония β- циклодекстрин был растворен в 55 мл водного раствора гидроксида натрия с pH=8.4.
Данные ВЭЖХ для полученного твердого продукта:
SIN-1 - 10,5%
SIN-1A - 0,40%
SIN-1С - не определимо
Твердый комплекс SIN-1A/BCD не был выделен.
SIN-1 - 10,5%
SIN-1A - 0,40%
SIN-1С - не определимо
Твердый комплекс SIN-1A/BCD не был выделен.
III. Аналитические и биологические примеры
Пример III.1
Эффективность превращения и стабильность комплексов SIN-1A иллюстрируется таблицей 1 (табл. 1-4 см. в конце описания). Пробы хранились при комнатной температуре в течение 11 месяцев в стеклянных контейнерах, защищенных от света, под атмосферным воздухом. Содержание SIN-1A приводится в SIN-1C эквиваленте.
Пример III.1
Эффективность превращения и стабильность комплексов SIN-1A иллюстрируется таблицей 1 (табл. 1-4 см. в конце описания). Пробы хранились при комнатной температуре в течение 11 месяцев в стеклянных контейнерах, защищенных от света, под атмосферным воздухом. Содержание SIN-1A приводится в SIN-1C эквиваленте.
Пример III.2
Проба SIN-1/ β- циклодекстрина содержала сразу же после получения 11,47% SIN-1A. После хранения при комнатной температуре в течение 12 месяцев она содержала 8,36% SIN-1A, а после 23 месяцев она содержала 6,59% SIN-1A. Содержание SIN-1C было 0,18, 1,31 и 1,57% соответственно.
Проба SIN-1/ β- циклодекстрина содержала сразу же после получения 11,47% SIN-1A. После хранения при комнатной температуре в течение 12 месяцев она содержала 8,36% SIN-1A, а после 23 месяцев она содержала 6,59% SIN-1A. Содержание SIN-1C было 0,18, 1,31 и 1,57% соответственно.
Комплекс содержал приблизительно 5-8% воды, связанной главным образом в полости циклодекстрина.
Пример III.3
Эффект повышения стабильности при термообработке ("повторной сушке") после сушки вымораживанием иллюстрируется таблицей 2.
Эффект повышения стабильности при термообработке ("повторной сушке") после сушки вымораживанием иллюстрируется таблицей 2.
Пример III.4
Скорость и степень выделения NO из комплексов SIN-1A/ β- циклодекстрин.
Скорость и степень выделения NO из комплексов SIN-1A/ β- циклодекстрин.
Выделение NO в растворах изучалось химическими и биологическими методами.
250 мг комплекса (соответствует приблизительно 25 мг SIN-1A) растворяли в 100 мл дистиллированной воды. Сразу после растворения высвобождение NO опосредованно измерялось путем одновременного измерения с помощью ВЭЖХ уменьшения содержания SIN-1 и образования метаболита SIN-1C в зависимости от времени. Измерения повторялись через различные промежутки времени в условиях светозащищенности.
Таблица 3 иллюстрирует кинетику разложения SIN-1A в дистиллированной воде при комнатной температуре в присутствии β- циклодекстрина, γ- циклодекстрина и HPBCD.
Расчетное значение периода полуразложения Т1/2 комплексов, вычисленное исходя из уменьшения содержания SIN-1A составляет 53 мин для β- циклодекстрина, 24 мин для γ- циклодекстрина и 70 мин для HPBCD.
Пример III.5
Выделение NO из более разбавленных растворов SIN-1А/ β- циклодекстрин (100 мкг/мл комплекса SIN-1А/ β- циклодекстрин соответствует 10 мкг/мл SIN-1A) определялось УФ-спектрофотометрическим измерением образования метаболита SIN-1С в зависимости от времени. Переход SIN-1A ---> SIN-1C сопровождается очень характерным изменением УФ-спектра, т.к. SIN-1A имеет максимум при 230±1 нм и не имеет поглощения при λmax для SIN-1C, равном 277±1 нм.
Выделение NO из более разбавленных растворов SIN-1А/ β- циклодекстрин (100 мкг/мл комплекса SIN-1А/ β- циклодекстрин соответствует 10 мкг/мл SIN-1A) определялось УФ-спектрофотометрическим измерением образования метаболита SIN-1С в зависимости от времени. Переход SIN-1A ---> SIN-1C сопровождается очень характерным изменением УФ-спектра, т.к. SIN-1A имеет максимум при 230±1 нм и не имеет поглощения при λmax для SIN-1C, равном 277±1 нм.
10 мг комплекса SIN-1A/ β- циклoдeкcтpин (соответствует приблизительно 1 мг SIN-1A) растворяли в 100 мл дистиллированной воды. УФ-спектр раствора регистрировался в диапазоне 200-250 нм без разбавления сразу же после растворения и измерения проводили через различные промежутки времени в условиях светозащищенности. Количество образовавшегося SIN-1C было рассчитано по величинам поглощения при 277±1 нм с использованием калибровочной кривой, построенной по стандарту SIN-1C. Концентрация SIN-1C была менее 0,7 мкг/мл непосредственно после растворения и около 7,8 мкг/мл через 270 минут. Предположительно выделилось эквивалентное количество NO. Расчетный период полуразложения составляет 90-100 минут.
Фиг. 1 изображает изменение УФ-спектра в зависимости от времени: показаны УФ-спектры комплекса SIN-1/ β- циклодекстрин через десятиминутные отрезки времени в течение 160 минут после растворения 10 мг комплекса в 100 мл дистиллированной воды. Изображена зависимость величины поглощения от длины волны.
Пример III.6
Образование NO определялось непосредственно с использованием специфического порфиринового микросенсорного датчика. Этот метод (Naturo, Vol. 358 р. 675, 1992) способен отследить выделение NO в концентрациях до 10-20 моль в отдельной клетке биологической микросистемы в амперометрическом или вольтметрическом режиме.
Образование NO определялось непосредственно с использованием специфического порфиринового микросенсорного датчика. Этот метод (Naturo, Vol. 358 р. 675, 1992) способен отследить выделение NO в концентрациях до 10-20 моль в отдельной клетке биологической микросистемы в амперометрическом или вольтметрическом режиме.
В фосфатном буфере с pH=7,4 при 37oC 1 mM комплекса SIN-1A/ β- циклoдeкcтpин выделяет NO со скоростью 2,37 мкM/мин в течение первых 5 минут, а в интервале 10-30 минут со скоростью 0,17 мкM/мин. При растворении 0,1 mM вещества соответствующие значения будут 0,42 и 0,07 мкM.
Пример III.7
Ингибирование агрегации тромбоцитов комплексом SIN-1A/BCD. Установлено, что окись азота является природной молекулой-мессенджером для ингибирования агрегации тромбоцитов через гуанилат-циклазо/циклические ГМФ системы (Blood, 57, 946, 1981). Мы изучали биологические эффекты SIN-1 и комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрин путем сравнения их ингибирующего действия на агрегацию тромбоцитов. Агрегация тромбоцитов была исследована на кроличьей и человеческой плазме, богатой тромбоцитами (J.Cardiovasc. Pharmacol. 14 suppl. 11, page 120, 1989). В каждой серии кроличьей плазмы 8 кривых отклика регистрировались с тромбоксаномиметиком U 46619 (0,25-4,0 мкM) в присутствии 0, 10-7, 10-6, 10-5 моль комплекса SIN-1A/BCD. Кривые отклика проводились в произвольном порядке. После этого для получения полных кривых концентрация-ингибирование для SIN-1 и SIN-1А/ β- циклодекстрин использовалась фиксированная концентрация U 46619 (4 мкM). U 46619 индуцировал зависимую от концентрации агрегацию. Ингибирующее действие SIN-1А/ β- циклодекстрин комплекса при равных молярных концентрациях во всех случаях было значительно выше, чем у SIN-1. Значения pD2 (отрицательный логарифм концентрации, вызывающей 50%-ное ингибирование) были 5,57±0,11 (n=7) для SIN-1 и 6,36±0,07 (n=7) для комплекса SIN-1А β- циклодекстрин, показывая тем самым, что комплекс оказывает в данном тесте воздействие в 6 раз активнее.
Ингибирование агрегации тромбоцитов комплексом SIN-1A/BCD. Установлено, что окись азота является природной молекулой-мессенджером для ингибирования агрегации тромбоцитов через гуанилат-циклазо/циклические ГМФ системы (Blood, 57, 946, 1981). Мы изучали биологические эффекты SIN-1 и комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрин путем сравнения их ингибирующего действия на агрегацию тромбоцитов. Агрегация тромбоцитов была исследована на кроличьей и человеческой плазме, богатой тромбоцитами (J.Cardiovasc. Pharmacol. 14 suppl. 11, page 120, 1989). В каждой серии кроличьей плазмы 8 кривых отклика регистрировались с тромбоксаномиметиком U 46619 (0,25-4,0 мкM) в присутствии 0, 10-7, 10-6, 10-5 моль комплекса SIN-1A/BCD. Кривые отклика проводились в произвольном порядке. После этого для получения полных кривых концентрация-ингибирование для SIN-1 и SIN-1А/ β- циклодекстрин использовалась фиксированная концентрация U 46619 (4 мкM). U 46619 индуцировал зависимую от концентрации агрегацию. Ингибирующее действие SIN-1А/ β- циклодекстрин комплекса при равных молярных концентрациях во всех случаях было значительно выше, чем у SIN-1. Значения pD2 (отрицательный логарифм концентрации, вызывающей 50%-ное ингибирование) были 5,57±0,11 (n=7) для SIN-1 и 6,36±0,07 (n=7) для комплекса SIN-1А β- циклодекстрин, показывая тем самым, что комплекс оказывает в данном тесте воздействие в 6 раз активнее.
В других аналогичных экспериментах было установлено, что комплекс SIN-1A/ β- циклодекстрин в 10 раз активнее по сравнению с SIN-1.
Пример III.8
Эксперимент, описанный в примере 7, был повторен с использованием человеческой цитратной богатой тромбоцитами плазмы, а также с SIN-1, свежеприготовленным комплексом SIN-1A/ β- циклодекстрин (содержание SIN-1A 14,8%) и с комплексом SIN-1A/ β- циклодекстрин, который хранился при комнатной температуре в течение 23 месяцев (содержание SIN-1 первоначально было 11,47%, после 23 месяцев - 6,59%). Результаты приведены в таблице 4, содержащей отрицательные логарифмы концентраций (pD2) SIN-1 и комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрин, вызывающих 50% ингибирование индуцированной U 46619 агрегации тромбоцитов в человеческой плазме.
Эксперимент, описанный в примере 7, был повторен с использованием человеческой цитратной богатой тромбоцитами плазмы, а также с SIN-1, свежеприготовленным комплексом SIN-1A/ β- циклодекстрин (содержание SIN-1A 14,8%) и с комплексом SIN-1A/ β- циклодекстрин, который хранился при комнатной температуре в течение 23 месяцев (содержание SIN-1 первоначально было 11,47%, после 23 месяцев - 6,59%). Результаты приведены в таблице 4, содержащей отрицательные логарифмы концентраций (pD2) SIN-1 и комплекса SIN-1A/ β- циклодекстрин, вызывающих 50% ингибирование индуцированной U 46619 агрегации тромбоцитов в человеческой плазме.
Оценивались как амплитуда, так и наклон кривой агрегации. Разница в значениях pD2 показывает, что свежеприготовленный комплекс SIN-1A/BCD в 8 раз активнее, чем SIN-1. Было установлено, что комплекс, хранившийся в течение 23 месяцев, в 3 раза менее активен, чем свежеприготовленный комплекс, но в 3 раза активнее, чем SIN-1.
Результаты тестов in vivo подтверждают, что описанные здесь комплексы SlN-1A/ β- циклодекстрин являются действенными ингибиторами агрегации тромбоцитов in vivo.
Как видно из величин периодов полуразложения, комплексы SIN-1A и циклодекстрина способны непрерывно образовывать NO с практически постоянной скоростью в течение долгого времени после их приема.
Пример III.9
Имеющийся в продаже SIN-1 (CORVASAL) сравнивался с комплексом SIN-1А/ β- циклодекстрин на сонной артерии кроликов. Сонная артерия кроликов, анестезированных нембуталом, была иссечена, кольца длиной 3 мм были закреплены в зажиме и помещены в сосуды для органов. Сокращение было индуцировано трехкратным применением фенилефрина в концентрации 3•10-7 М с последующим промыванием. Кривые дозы отклика регистрировались для 3•10-9 - 3•10-5 М CORVASAL 'а (в пересчете на содержание SIN-1) и для 3•10-9 - 3•10-5 М (в пересчете на содержание SIN-1A).
Имеющийся в продаже SIN-1 (CORVASAL) сравнивался с комплексом SIN-1А/ β- циклодекстрин на сонной артерии кроликов. Сонная артерия кроликов, анестезированных нембуталом, была иссечена, кольца длиной 3 мм были закреплены в зажиме и помещены в сосуды для органов. Сокращение было индуцировано трехкратным применением фенилефрина в концентрации 3•10-7 М с последующим промыванием. Кривые дозы отклика регистрировались для 3•10-9 - 3•10-5 М CORVASAL 'а (в пересчете на содержание SIN-1) и для 3•10-9 - 3•10-5 М (в пересчете на содержание SIN-1A).
На фиг.2 показана кривая зависимости сокращений от концентрации вещества. Как видно, комплекс SIN-1A оказался приблизительно в 6 раз активнее, чем просто SIN-1. Изображенные точки являются средними для 6 измерений.
Claims (15)
1. Комплексы включения N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрила и циклодекстрина, или гидроксипропилированного циклодекстрина, или метилированного циклодекстрина, содержащие 5 - 15% N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрила и дополнительно содержащие в качестве катализатора или стабилизатора ионы в виде аммонийной соли или соли щелочного металла, указанные комплексы стабильны в твердом состоянии и выделяют окись азота при комнатной температуре при растворении в воде или в водных системах.
2. Комплексы по п.1, отличающиеся тем, что содержат в качестве катализатора или стабилизатора физиологически приемлемые ионы.
3. Комплексы включения по пп.1 и 2, отличающиеся тем, что содержат ионы в виде аммонийных солей или солей щелочных металлов, включающих в качестве анионов анионы карбоновых кислот, такие, как ацетат, формиат, пропионат, аскорбинат, тартрат, и/или анионы неорганических кислот, такие, как фосфат, фосфит, борат, карбонат, гидрокарбонат, сульфат или сульфит.
4. Комплексы включения по пп.1 - 3, отличающиеся тем, что в качестве аммонийной соли содержат CH3COONH4, (NH4)2CO3, NH4HCO3 или (NH4)2HPO4. 5. Комплексы включения по пп.1 - 3, отличающиеся тем, что в качестве соли щелочного металла содержат CH3COONa, NaHPO4 или NaH2PO4.
6. Комплексы включения по пп.1 - 5, содержащие в качестве циклодекстрина β-циклодекстрин, γ-циклодекстрин или α-циклодекстрин.
7. Комплексы включения по пп.1 - 5, содержащие в качестве гидроксипропилированных или метилированных циклодекстринов соединение, выбранное из группы: гидроксипропил-β-циклодекстрин (HPBCD), гептакис-2,6-ди-о-метил-β-циклодекстрин (DIMEB), слабо метилированный β-циклодекстрин (RAMEB), гептакис-2,3,6-три-о-метил-β-циклодекстрин (TRIMEB).
8. Способ получения комплексов включения N-морфолино-N-нитрозоаминоацетонитрила (SINIA) по п.1, заключающийся в каталитическом воздействии ионов при pH 6 - 10 на 3-морфолиносиднонимингидрохлорид (SIN 1) в присутствии циклодекстрина, или гидроксипропилированного циклодекcтрина, или метилированного циклодекcтрина с использованием в качестве катализатора или стабилизатора ионов в виде аммонийной соли или соли щелочного металла.
9. Способ по п. 8, отличающийся тем, что в качестве стабилизатора или катализатора используют ионы в виде аммонийных солей или солей щелочных металлов, включающих в качестве анионов анионы карбоновых кислот, такие, как ацетат, формиат, пропионат, аскорбинат, тартрат и/или лактат, и/или анионы неорганических кислот, такие, как борат, карбонат, гидрокарбонат, фосфат, фосфит, сульфат и/или сульфит.
10. Способ по п.8, отличающийся тем, что в качестве аммонийной соли используют CH3COONH4, (NH4)2CO3, NH4HCO3 или (NH4)2HPO4.
11. Способ по п.8, отличающийся тем, что в качестве соли щелочного металла используют CH3COONa, NaHPO4 или NaH2PO4.
12. Способ по пп.8 - 11, отличающийся тем, что каталитическое воздействие ионов на 3-морфолиносиднонимингидрохлорид (SIN 1) в присутствии циклодекстрина, или гидроксипропилированного циклодекстрина, или метилированного циклодекстрина и ионов в виде аммонийной соли или соли щелочного металла проводят путем тщательного перемешивания или перемалывания компонентов или путем сушки вымораживанием в водном, не содержащем кислорода растворе компонентов с последующей "повторной сушкой" в вакууме.
13. Способ по п.12, отличающийся тем, что при применении "повторной сушки" взаимодействие проводят при 40 - 100oC, предпочтительно при 50 - 70oC.
14. Фармацевтическая композиция, обладающая свойством выделять окись азота, отличающаяся тем, что содержит в качестве активного ингредиента комплексы включения по пп. 1 - 7 в эффективном количестве и фармакологически приемлемые вспомогательные вещества.
15. Фармацевтическая композиция по п.14, отличающаяся тем, что ее используют в форме порошка, растворяемого непосредственно перед оральным, парентеральным или другим применением.
16. Способ воздействия на живые клетки окисью азота, отличающийся тем, что используют эффективное количество комплекса по пп.1 - 7, которое при растворении в воде или в водной системе при комнатной температуре выделяет окись азота.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HUP9401183 | 1994-04-26 | ||
| HU9401183A HU218280B (en) | 1994-04-26 | 1994-04-26 | Cyclodextrin inclusion complexes containing sin-1a which are stable intheir solid state, process for their preparation and pharmaceutical compositions containing the comlexes |
| PCT/HU1995/000011 WO1995029172A1 (en) | 1994-04-26 | 1995-04-25 | N-morpholino-n-nitrosaminoacetonitril cyclodextrin inclusion complexes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU96100760A RU96100760A (ru) | 1998-03-27 |
| RU2136698C1 true RU2136698C1 (ru) | 1999-09-10 |
Family
ID=10985114
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU96100760A RU2136698C1 (ru) | 1994-04-26 | 1995-04-25 | Комплексы включения n-морфолино-n-нитрозоаминоацетонитрила и циклодекстрина или производных циклодекстрина и способ их получения, фармацевтическая композиция, способ воздействия на живые клетки окисью азота |
Country Status (32)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5698535A (ru) |
| EP (1) | EP0705255B1 (ru) |
| JP (1) | JP3434828B2 (ru) |
| KR (1) | KR960703404A (ru) |
| CN (1) | CN1060164C (ru) |
| AT (1) | ATE197708T1 (ru) |
| AU (1) | AU694219B2 (ru) |
| BG (1) | BG61974B1 (ru) |
| BR (1) | BR9506155A (ru) |
| CA (1) | CA2163539C (ru) |
| CZ (1) | CZ316395A3 (ru) |
| DE (1) | DE69519463T2 (ru) |
| DK (1) | DK0705255T3 (ru) |
| ES (1) | ES2153897T3 (ru) |
| FI (1) | FI956156A (ru) |
| GR (1) | GR3035356T3 (ru) |
| HR (1) | HRP950249A2 (ru) |
| HU (1) | HU218280B (ru) |
| IL (1) | IL113491A (ru) |
| LT (1) | LT4167B (ru) |
| LV (1) | LV11543B (ru) |
| MD (1) | MD1419G2 (ru) |
| NO (1) | NO311030B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ285149A (ru) |
| PL (1) | PL312183A1 (ru) |
| PT (1) | PT705255E (ru) |
| RO (1) | RO114449B1 (ru) |
| RU (1) | RU2136698C1 (ru) |
| SI (1) | SI0705255T1 (ru) |
| SK (1) | SK155195A3 (ru) |
| WO (1) | WO1995029172A1 (ru) |
| YU (1) | YU25995A (ru) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6143746A (en) * | 1994-01-21 | 2000-11-07 | Icos Corporation | Tetracyclic cyclic GMP-specific phosphodiesterase inhibitors, process of preparation and use |
| WO2001036490A2 (en) * | 1999-11-12 | 2001-05-25 | Pitha & Pitha Llc | Crystalline mixtures of partial methyl ethers of beta-cyclodextrin and related compounds |
| FR2805462B1 (fr) * | 2000-02-24 | 2003-08-15 | Therabel Res | Nouvelle forme galenique orale a liberation prolongee de la molsidomine |
| TWI321054B (en) | 2000-12-19 | 2010-03-01 | California Inst Of Techn | Compositions containing inclusion complexes |
| EP1219306A1 (en) * | 2000-12-29 | 2002-07-03 | Nicox S.A. | Compositions comprising cyclodextrins and NO- releasing drugs |
| PT2277551E (pt) | 2002-09-06 | 2013-08-22 | Cerulean Pharma Inc | Polímeros à base de ciclodextrina para a administração de medicamentos ligados por ligação covalente |
| AU2003295344B2 (en) * | 2002-10-09 | 2008-01-31 | Insert Therapeutics, Inc. | Cyclodextrin-based materials, compositions and uses related thereto |
| JP2010516625A (ja) | 2007-01-24 | 2010-05-20 | インサート セラピューティクス， インコーポレイテッド | 制御された薬物送達のためのテザー基を有するポリマー−薬物コンジュゲート |
| AU2010321533A1 (en) * | 2009-11-23 | 2012-05-31 | Cerulean Pharma Inc. | Cyclodextrin-based polymers for therapeutic delivery |
| WO2014055493A1 (en) | 2012-10-02 | 2014-04-10 | Cerulean Pharma Inc. | Methods and systems for polymer precipitation and generation of particles |
| WO2019074886A1 (en) | 2017-10-09 | 2019-04-18 | Terumo Bct Biotechnologies, Llc | LYOPHILIZATION CONTAINER AND METHOD OF USE |
| EP3937878A2 (en) | 2019-03-14 | 2022-01-19 | Terumo BCT Biotechnologies, LLC | Lyophilization loading tray assembly and system |
| CN116249522A (zh) * | 2020-07-20 | 2023-06-09 | 深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司 | 一种组合物的血小板解聚用途、解聚试剂及解聚方法 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5208233A (en) * | 1989-09-15 | 1993-05-04 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Anti-hypertensive compositions of secondary amine-nitric oxide adducts and use thereof |
| US5039705A (en) * | 1989-09-15 | 1991-08-13 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Anti-hypertensive compositions of secondary amine-nitric oxide adducts and use thereof |
| US5212204A (en) * | 1989-10-18 | 1993-05-18 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Antihypertensive compositions and use thereof |
| HU212730B (en) * | 1990-03-28 | 1996-10-28 | Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet | Process for producing inclusion complexes of cyclodextrine or its derivative and 3-morpholino-sydnonimine or its salt or its tautomer and pharmaceutical compositions containing them |
| ES2112332T3 (es) * | 1991-09-24 | 1998-04-01 | Us Health | Derivados de substitucion de oxigeno de productos de adicion de nucleofilo-oxido nitrico utilizados como promedicamentos donadores de oxido nitrico. |
| US5389675A (en) * | 1992-03-27 | 1995-02-14 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Mixed ligand metal complexes of nitric oxide-nucleophile adducts useful as cardiovascular agents |
-
1994
- 1994-04-26 HU HU9401183A patent/HU218280B/hu not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-04-25 HR HRP9401183A patent/HRP950249A2/hr not_active Application Discontinuation
- 1995-04-25 ES ES95918104T patent/ES2153897T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 SI SI9530435T patent/SI0705255T1/xx unknown
- 1995-04-25 RU RU96100760A patent/RU2136698C1/ru active
- 1995-04-25 MD MD95-0440A patent/MD1419G2/ru unknown
- 1995-04-25 SK SK1551-95A patent/SK155195A3/sk unknown
- 1995-04-25 RO RO95-02248A patent/RO114449B1/ro unknown
- 1995-04-25 CZ CZ953163A patent/CZ316395A3/cs unknown
- 1995-04-25 IL IL11349195A patent/IL113491A/en not_active IP Right Cessation
- 1995-04-25 WO PCT/HU1995/000011 patent/WO1995029172A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-04-25 BR BR9506155A patent/BR9506155A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-04-25 US US08/571,853 patent/US5698535A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 CA CA002163539A patent/CA2163539C/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 JP JP52720795A patent/JP3434828B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 YU YU25995A patent/YU25995A/sh unknown
- 1995-04-25 AT AT95918104T patent/ATE197708T1/de active
- 1995-04-25 CN CN95190353A patent/CN1060164C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-04-25 PL PL95312183A patent/PL312183A1/xx unknown
- 1995-04-25 EP EP95918104A patent/EP0705255B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 KR KR1019950705912A patent/KR960703404A/ko not_active Application Discontinuation
- 1995-04-25 DE DE69519463T patent/DE69519463T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-04-25 NZ NZ285149A patent/NZ285149A/en unknown
- 1995-04-25 AU AU24159/95A patent/AU694219B2/en not_active Expired
- 1995-04-25 PT PT95918104T patent/PT705255E/pt unknown
- 1995-04-25 DK DK95918104T patent/DK0705255T3/da active
- 1995-12-20 FI FI956156A patent/FI956156A/fi not_active Application Discontinuation
- 1995-12-22 NO NO19955283A patent/NO311030B1/no not_active IP Right Cessation
- 1995-12-22 LT LT95-133A patent/LT4167B/lt not_active IP Right Cessation
- 1995-12-22 LV LVP-95-383A patent/LV11543B/en unknown
-
1996
- 1996-01-26 BG BG100313A patent/BG61974B1/bg unknown
-
2001
- 2001-02-02 GR GR20010400181T patent/GR3035356T3/el unknown
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Машковский М.Д. Лекарственные средства. - М.: Медицина, 1986, с. 445. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2136698C1 (ru) | Комплексы включения n-морфолино-n-нитрозоаминоацетонитрила и циклодекстрина или производных циклодекстрина и способ их получения, фармацевтическая композиция, способ воздействия на живые клетки окисью азота | |
| OA10678A (fr) | Nouvelles formulations liquides stables à base de paracétamol et leur mode de préparation | |
| JP5021318B2 (ja) | β−シクロデキストリンを液体投薬形態に用いて多用量製剤を達成するための抗菌性防腐剤 | |
| Uekama et al. | O-carboxymethyl-O-ethylcyclomalthoheptaose as a delayed-release-type drug carrier: improvement of the oral bioavailability of diltiazem in the dog | |
| RU96100760A (ru) | Новые комплексы включения sin-1a и циклодекстрина | |
| EP0478732B1 (en) | Inclusion complexes of 3-morpholino-sydnonimine or its salts or its tautomer isomer, process for the preparation thereof, and pharmaceutical compositions containing the same | |
| RU2111216C1 (ru) | Комплекс включения n-этоксикарбонил-3-морфолинсиднонимина или его соли с циклодекстрином или производным циклодекстрина, способ получения этого комплекса включения, фармацевтические композиции и способ их получения, способ лечения | |
| KR960004018B1 (ko) | L-글루타민과 수용성아줄렌 복합 항궤양용 제제의 안정화 방법 | |
| SK278809B6 (sk) | Inklúzny komplex 3-morfolinosydnonimínu alebo jeho | |
| MXPA06008032A (en) | Antimicrobial preservatives to achieve multi-dose formulation using beta-cyclodextrins for liquid dosage forms |