RU2090207C1 - Способ получения гиалуронидазы - Google Patents
Способ получения гиалуронидазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2090207C1 RU2090207C1 RU93039113A RU93039113A RU2090207C1 RU 2090207 C1 RU2090207 C1 RU 2090207C1 RU 93039113 A RU93039113 A RU 93039113A RU 93039113 A RU93039113 A RU 93039113A RU 2090207 C1 RU2090207 C1 RU 2090207C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hyaluronidase
- extract
- acetic acid
- aqueous solution
- extraction
- Prior art date
Links
Landscapes
- Medicinal Preparation (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к производству ферментных препаратов, применяемых в медицинской практике, а именно к способу получения гиалуронидазы, являющейся действующим веществом препарата "Лидаза" и "Ронидаза", применяемых при лечении рубцов, спаек, контрактур и тугоподвижности сустатов, длительно незаживающих ран. Сущность: поставленная техническая задача решается тем, что очистку и концентрирование проводят с применением ультрафильтрации экстракта через полисульфоновые или фторопластовые мембраны, задерживающие гиалуронидазу и пропускающие балластные вещества с меньшей молекулярной массой. Коэффициент пропускания мембраны не более 10 КД. Технический результат от использования способа состоит в упрощении способа производства гиалуронидазы, так как не применяются пожароопасные органические растворители, а также указанный способ позволяет получить фермент с более высокой удельной активностью 750 У.Е./100 мг, что снижает ущерб, наносимый здоровью людей, занятых в производстве.
Description
Изобретение относится к производству ферментных препаратов, применяемых в медицинской практике, а именно к способу получения гиалуронидазы, являющейся действующим веществом препаратов "Лидаза" и "Ронидаза", используемых при лечении рубцов, спаек, контрактур и тугоподвижности суставов, длительно незаживающих ран.
Известен способ получения ронидазы (авт. св. N1666534 Бюл. N 28 от 30.07.91 МКИ5 С 12 9/26. Авт. Л.И.Стекольников, В.В.Рыльцев, Т.В.Игнатюк и И.М.Кутукова), включающий экстракцию измельченных семенников крупного рогатого скота водным раствором уксусной кислоты в атмосфере инертного газа, очистку экстракта сорбцией белой глиной, десорбцию целевого продукта водным раствором уксусной кислоты.
Известен способ получения гиалуронидазы (авт. св. N 955932 Бюл. N 33 от 07.09.82, МКИ5 А 61 К 37/48. Авт. Л.И.Стекольников, Л.В.Алехина, М.И.Бабурина, Г. П. Горошко) из семенников крупного рогатого скота путем экстракции сырья водным раствором уксусной кислоты, экстракцию каждой последующей партии жмыха осуществляют экстрактом, полученным от предыдущего извлечения с добавлением 0,1н. водного раствора уксусной кислоты до насыщения извлечения ферментом, затем полученное извлечение объединяют с экстрактом, полученным после обработки сырья экстрагентом.
Однако известные способы сложны по выполнению, требуют использования дорогостоящих реактивов или органических растворителей, не обеспечивая при этом высокой удельной активности препарата.
Известен способ получения лидазы [1] Бюл. N 17 от 07.05.81 (Авт. И.В. Лазарева, Н.Д.Сидорова, О.В.Чайка, В.А.Иванова, Н.Ф.Говорова, Т.Е.Шестакова и В. Л. Константинов), выбранный нами в качестве прототипа, путем обработки семенников крупного рогатого скота в присутствии уксусной кислоты; при этом экстрагирование проводят 0,1н. водным раствором уксусной кислоты при температуре 5-10oC и после фильтрации осуществляют диализ при температуре 0-10oC в течение 12-16 ч.
Однако известный способ является пожароопасным и вредным производством в связи с использованием ацетана и не обеспечивает высокой удельной активности препарата, содержащего большое количество балластных веществ.
Решаемая техническая задача заключается в упрощении способа производства, в повышении удельной активности препарата и уменьшении содержания в нем балластных веществ.
Указанная техническая задача решена тем, что проводят очистку и концентрирование после фильтрации через сукно с применением ультрафильтрации экстракта через мембрану из полисульфона или фторопласта с пределом пропускания не более 10 килодальтон /КД/.
Технический результат, полученный при реализации предложенного способа, заключается в промышленном получении ферментного препарата из животного сырья гиелуренидазы, являющейся действующим веществом медицинских препаратов "Лидаза" и "Ронидаза". Эти препараты широко применяются в медицинской практике в качестве лекарственных средств при лечении рубцов, контрактур и тугоподвижности суставов, при подготовке к кожепластическим операциям по поводу рубцовых стяжений, при длительно незаживающих ранах.
При этом при производстве способа не используются пожароопасные органические растворители, а очистка и концентрирование препарата тиалуронидазы позволяет получить фермент с более высокой удельной активностью и снизить аллергическую нагрузку на организм пациента.
Проведенный автором поиск по патентным и научно-техническим источникам не выявил аналогов предложенного способа, характеризуемых признаками, идентичными по своим свойствам и полученному результату в своей совокупности признаками предложенного способа, что позволяет считать предложение заявителя соответствующим критерию изобретения "изобретательский уровень", так как для специалиста данный способ в области производства ферментных препаратов явным образом не следует из уровня техники.
Примеры получения и использования гиалуронидазы позволяют считать предложение заявителя соответствующим критерию изобретения "промышленная применимость".
При сравнении предложенного способа с прототипом выявлено, что предложенный способ отличается от известного одновременно проводимой операцией концентрации и очистки препарата ультрафильтрации на мембране с коэффициентом пропускания не более 10 килодальтон, что позволяет получить более чистый и активный препарат, что позволяет считать предложенное техническое решение соответствующим критерию изобретения "новизна".
Суть изобретения заключается в том, что после обработки измельченных семенников 1%-ным водным раствором уксусной кислоты и фильтрования через сукно при незначительно повышенной температуре в течение 4-8 ч, что обеспечивает получение прозрачного фильтра экстракта гиалуронидаз, концентрацию и очистку производят ультрафильтрацией на мембране с коэффициентом пропускания не более 10 КД. Такая операция в получении фермента гиалуронидазы неизвестна. Мембрана с коэффициентом пропускания не более 10 КД, например из полисульфона или фторопласта, задерживает гиалуронидазу и пропускает балластные вещества, например полисахариды, пептиды, с молекулярной массой меньше, чем у гиалуронидазы. В результате этого получается концентрированный чистый продукт, легко подвергающийся лиофилизации, с активностью конечного продукта /1000-750/уд.ед./100 мг. Чистый препарат не вызывает аллергических реакций у пациента, а исключение из производства токсичного и взрывоопасного ацетона позволяет упростить технологию получения и технику безопасности производства гиалуронидазы. Время 4-8 ч первичной фильтрации обусловлено пропусканием экстракта в диапазоне температур 20-40oС через поры сукна.
Пример 1. 100 кг замороженных семенников крупного рогатого скота дважды измельчают на волчке, добавляют 100 литров 1%-ного водного раствора уксусной кислоты (жидкостный коэффициент 1:1) и проводят экстракцию при постоянном перемешивании в течение двух часов, постепенно поднимая температуру до 40oC. Экстракт фильтруют в течение 6-8 ч через мешки из фильтровального сукна и прозрачный фильтрат передают на ультрафильтрацию. Ультрафильтрацию проводят через мембраны с пределом пропускания 10 КД (например, УПМ-10 производства НПО "Владипор"), при этом экстракт концентрируют до объема 15-20 л и затем лиофилизируют. Выход порошка гиалуронидазы 920 г (0,92% от исходной массы сырья), а его удельная активность 1020 уд.ед./100 мг.
Пример 2. 100 кг замороженных семенников баранов дважды измельчают на волчке, добавляют 100 л (жидкостный коэффициент 1:1) 1%-ного водного раствора уксусной кислоты и проводят экстракцию при постоянном перемешивании в течение 4-6 ч при температуре 20oC. Экстракт фильтруют на фильтрационной установке "Орион" /США/. Прозрачный фильтрат подвергают ультрафильтрации через мембраны типа УПМ-10 и концентрируют до объема 17-20 литров. Затем проводят сублимационную сушку. Выход порошка гиалуронидазы 1200 г (1,2% от исходной массы сырья), а его удельная активность 750 уд.ед./100 мг.
Claims (1)
- Способ получения гиалуронидазы, включающий экстракцию измельченных семенников водным раствором уксусной кислоты, фильтрацию экстракта с последующим концентрированием и очисткой целевого продукта и его сублимационной сушкой, отличающийся тем, что фильтрацию экстракта осуществляют в течение 4-8 ч через сукно и путем ультрафильтрации через полисульфоновые или фторопластовые мембраны с пределом пропускания не более 10 килодальтон.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93039113A RU2090207C1 (ru) | 1993-07-30 | 1993-07-30 | Способ получения гиалуронидазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
RU93039113A RU2090207C1 (ru) | 1993-07-30 | 1993-07-30 | Способ получения гиалуронидазы |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU93039113A RU93039113A (ru) | 1997-01-10 |
RU2090207C1 true RU2090207C1 (ru) | 1997-09-20 |
Family
ID=20145922
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
RU93039113A RU2090207C1 (ru) | 1993-07-30 | 1993-07-30 | Способ получения гиалуронидазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2090207C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2671537C2 (ru) * | 2016-09-01 | 2018-11-02 | Общество с ограниченной ответственностью "Самсон-Мед" | Препарат гиалуронидазы и способ его получения |
RU2703108C1 (ru) * | 2018-10-25 | 2019-10-15 | Яна Викторовна Мельникова | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы |
-
1993
- 1993-07-30 RU RU93039113A patent/RU2090207C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 827068, кл. A 61 K 37/48, 1981. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
RU2671537C2 (ru) * | 2016-09-01 | 2018-11-02 | Общество с ограниченной ответственностью "Самсон-Мед" | Препарат гиалуронидазы и способ его получения |
RU2703108C1 (ru) * | 2018-10-25 | 2019-10-15 | Яна Викторовна Мельникова | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US4529590A (en) | Production of angiogenetic factor | |
DE1915970B2 (de) | Verfahren zur Herstellung von durch Brückenbildner an inaktive Proteine gebundenen aktiven Proteinsubstanzen durch Polymerisation | |
CN108610274B (zh) | 一组环γ-聚谷氨酸系列分子及其制备方法和应用 | |
EP0621044A2 (en) | Collagen membranes | |
RU2090207C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы | |
DE3421789C2 (ru) | ||
CN1183149C (zh) | 含有低聚糖的药物组合物及其制备方法 | |
US4861761A (en) | Aloeferon isolation, manufacturing and its applications | |
JPH11228837A (ja) | 絹蛋白質/コラーゲン複合体およびその製造方法 | |
DE1966428C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von wasserunlöslicher Penicillinacylase | |
KR20100122477A (ko) | 알지네이트의 초 정제를 위한 방법 | |
EP0127025A2 (de) | Verfahren zur Herstellung eines Antihämophiliefaktor-Konzentrats | |
RU2671537C2 (ru) | Препарат гиалуронидазы и способ его получения | |
CN111569143A (zh) | 一种蛇毒凝血酶原激活物及基于蛇毒凝血酶原激活物的快速止血材料 | |
RU2071779C1 (ru) | Способ получения пантокрина для инъекций | |
CN116987181B (zh) | 高生物学活性的天然水蛭素和高收率制备它们的方法 | |
RU1748324C (ru) | Способ получения препарата стрептодеказы | |
DE19609479A1 (de) | Endotoxin-spezifische Membranen | |
WO2000016897A1 (de) | Mikrofiltrationsfilterschicht zur abtrennung von endotoxinen und deren verwendung | |
RU2703108C1 (ru) | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы | |
RU2067866C1 (ru) | Способ получения ингибитора клеточной пролиферации | |
RU2116075C1 (ru) | Способ получения медицинского очищенного пектина | |
RU92012910A (ru) | Способ получения препарата "церебролизат" | |
RU2068267C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы | |
RU93039113A (ru) | Способ получения гиалуронидазы |