RU2068267C1 - Способ получения гиалуронидазы - Google Patents
Способ получения гиалуронидазы Download PDFInfo
- Publication number
- RU2068267C1 RU2068267C1 SU5067036A RU2068267C1 RU 2068267 C1 RU2068267 C1 RU 2068267C1 SU 5067036 A SU5067036 A SU 5067036A RU 2068267 C1 RU2068267 C1 RU 2068267C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- yield
- ultrafiltration
- thawing
- fold
- hyaluronidase
- Prior art date
Links
Images
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Изобретение относится к производству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения препаратов из животного сырья. Цель изобретения - повышение выхода целевого продукта. Для достижения этой цели проводят измельчение бычьих семенников с последующей экстракцией полученного гомогената 0,1 н. раствора уксусной кислоты, экстракт отделяют от жмыха на фильтровальной ткани и концентрируют ультрафильтрацией в тангенциальном потоке на мембранах с порогом задержания 5 - 15 кД. Концентрат подвергают двухкратному замораживанию - оттаиванию с удалением осадка гемопигментов и высокомолекулярных примесей. Выход целевого продукта по сравнению с прототипом повышается в два раза, процесс технологичен и не требует громоздкого оборудования и больших площадей. 2 табл.
Description
Изобретение относится к производству лекарственных препаратов, применяемых в медицинской практике, и касается способа получения препаратов из животного сырья.
Известные способы получения гиалуронидазных препаратов (1-5) основаны на выделении фермента из жидкого субстрата путем его денатурации с последующей ренатурацией (осаждение органическими растворителями, фракционирование сульфатом аммония, осаждение в изоэлектрической точке). Однако ферменты животного происхождения высоколабильны и изменение их агрегатного состояния приводит к частичной необратимой денатурации, что в итоге негативно влияет на выход целевого продукта и сроки хранения готового препарата.
Действующий регламент производства лидазы (1) предусматривает экстракцию гомогената бычьих семенников раствором уксусной кислоты, отделение экстракта от жмыха, выделение фермента путем осаждения 5-кратным объемом ацетона, растворение осадка и его переосаждение с последующей промывкой ацетоном, сушкой на воздухе, растворение и приготовление лекарственной формы препарата.
Указанное производство является взрывоопасным, многостадийным и нетехнологичным, требует больших объемов ацетона, громоздкого оборудования и огромных производственных площадей. Кроме того, выход целевого продукта с 1 л сырья недостаточно высок.
Цель изобретения повышение выхода целевого продукта.
Цель достигается тем, что экстракт бычьих семенников после отделения от жмыха концентрируют методом ультрафильтрации в тангенциальном потоке на мембранах с порогом задержания 5-15 кД, а затем подвергают процедуре 2-кратного замораживания-оттаивания для освобождения от гемопигмента и высокомолекулярных соединений.
Выбор мембран с указанной селективностью обусловлен молекулярной массой тестикулярной гиалуронидазы, которая, по данным различных источников, колеблется от 15 до 90 кД (1, 6). Необходимо отметить описанную в литературе способность гиалуронидазы образовывать ди- и тетрамеры, а также связываться в комплексы с альбумином и некоторыми полисахаридами (7, 8). Этими фактами можно объяснить безуспешность предпринятых нами попыток очистки нативного фермента от высокомолекулярных примесей ультрафильтрацией с порогом задержания 100 300 кД.
Сравнение предлагаемого способа с известным показывает, что общими признаками для них является получение экстракта бычьих семенников в присутствии уксусной кислоты, освобождение от жмыха, концентрирование и приготовление лекарственной формы. Однако в отличие от прототипа заявляемый способ предусматривает концентрирование экстракта более технологическим методом ультрафильтрации и очистку от гемопигмента и высокомолекулярных примесей замораживанием-оттаиванием концентрата.
Использование ультрафильтрации вместо ацетонового осаждения позволяет сконцентрировать целевой продукт более щадящим методом без изменения агрегатного состояния фермента и тем самым повысить его выход в два раза, а последующая очистка путем двухкратного замораживания-оттаивания обеспечивает удаление гемопигментов и высокомолекулярных примесей.
В литературе нет сведений об использовании ультрафильтрации и замораживания-оттаивания в производстве ферментных препаратов животного происхождения, следовательно, заявляемый способ соответствует критериям "новизна" и "изобретательский уровень".
Способ осуществляют следующим образом.
Пример 1.
75 кг замороженных бычьих семенников измельчают электромясорубкой, добавляют в фарш 100 л 0,1 н. раствора уксусной кислоты, охлажденной до температуры 6oC, экстрагируют при периодическом перемешивании в течение 4 ч, освобождают экстракт от жмыха на фильтровальной ткани и концентрируют до объема 40 л ультрафильтрацией в тангенциальном потоке на мембранах с порогом задержания 5 кД (ВПУ-5, аппарат АР-2Н, О КБ ТБМ, г. Кириши) при рабочем давлении 0,05 0,1 МПа. Полученный концентрат разливают в полиэтиленовые бачки по 5 10 л, подвергают процедуре последовательного замораживания (при минус 10 20oC) оттаивания (при комнатной температуре), после чего удаляют образовавшийся осадок и вновь замораживают. После повторного оттаивания и удаления осадка препарат контролируют на соответствие требованиям ФС.
Пример 2.
Выделение фермента проводят согласно примеру 1, но с использованием мембран с порогом задержания 15 кД (ВПУ-15, аппарат АР-2Н). Характеристика полученных по примерам 1, 2 препаратов приведена в табл. 1.
Сравнительная характеристика способов получения лидазы приведена в табл. 2.
Таким образом, предлагаемый способ позволяет исключить из технологии производства лидазы ацетон, повысить технологичность процесса, сократить производственные площади, повысить выход целевого продукта в два раза.
Использованные источники информации
1. Технологический регламент производства лидазы. Ленинград, 1982.
1. Технологический регламент производства лидазы. Ленинград, 1982.
2. Авторское свидетельство СССР N 302123, А 61 K 19/00, 1971.
3. Авторское свидетельство СССР N 566875, C 12 D 13/00, 1977.
4. Авторское свидетельство СССР N 827068, А 61 К 37/48, 1981.
5. Авторское свидетельство СССР N 632703, C 07 G 7/02, 1978.
6. Harrison R.A. "Biochem. J." 1988, 252 875 882.
7. Стекольников Л.И. и соавт. Сб. научн. тр. 1-го Московского медицинского института, М. 1977.
8. Максименко А.В. и соавт. "Бюлл. экспер. биол. и мед.", 1986, 11 567 569.
Claims (1)
- Способ получения гиалуронидазы, включающий измельчение семенников крупного рогатого скота, экстракцию уксусной кислотой в течение 4 ч, фильтрацию с последующей очисткой целевого продукта, отличающийся тем, что фильтрат подвергают ультрафильтрации в тангенциальном потоке на мембранах с порогом задержания 5 15 кД, затем осуществляют двукратное замораживание и оттаивание, отделяют осадок и собирают надосадочную жидкость, содержащую целевой продукт.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5067036 RU2068267C1 (ru) | 1992-09-01 | 1992-09-01 | Способ получения гиалуронидазы |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
SU5067036 RU2068267C1 (ru) | 1992-09-01 | 1992-09-01 | Способ получения гиалуронидазы |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
RU2068267C1 true RU2068267C1 (ru) | 1996-10-27 |
Family
ID=21615524
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
SU5067036 RU2068267C1 (ru) | 1992-09-01 | 1992-09-01 | Способ получения гиалуронидазы |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
RU (1) | RU2068267C1 (ru) |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108192886A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-06-22 | 上海上药第生化药业有限公司 | 一种玻璃酸酶精品的提取方法 |
RU2703108C1 (ru) * | 2018-10-25 | 2019-10-15 | Яна Викторовна Мельникова | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы |
-
1992
- 1992-09-01 RU SU5067036 patent/RU2068267C1/ru active
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
Авторское свидетельство СССР N 827068, 1981. A 61K 37/48. * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108192886A (zh) * | 2018-03-14 | 2018-06-22 | 上海上药第生化药业有限公司 | 一种玻璃酸酶精品的提取方法 |
RU2703108C1 (ru) * | 2018-10-25 | 2019-10-15 | Яна Викторовна Мельникова | Способ получения фармацевтической субстанции гиалуронидазы |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
UA5996A1 (uk) | Спосіб одержання панкреотину з підшлункової залози | |
GB1473548A (en) | Bovine immunoglobulin isolation process | |
JP2622686B2 (ja) | k−カゼイングリコマクロペプチドの製造法 | |
RU2068267C1 (ru) | Способ получения гиалуронидазы | |
JPS5855432A (ja) | 静脈注射用免疫グロブリンの製法 | |
WO2022060235A1 (en) | Method of obtaining hyaluronidase from bovine testes | |
US4128637A (en) | Process for producing thymosin | |
EP1557472A1 (en) | Sodium chondroitin sulfate, chondroitin sulfate-containing material and processes for producing the same | |
US3936351A (en) | Method for preparing glucoronyl-glucosamino-glycan sulphates exhibiting antilipasaemic activity | |
US3140984A (en) | Production of high activity fibrinolytic agents | |
DE1966428C3 (de) | Verfahren zur Herstellung von wasserunlöslicher Penicillinacylase | |
US3706660A (en) | Process for removal of particle-forming proteins from blood sera | |
US3627642A (en) | Lysozyme salts | |
RU1417244C (ru) | Способ получения вещества, восстанавливающего функцию предстательной железы | |
RU2049471C1 (ru) | Способ получения гидролизата мозговой ткани "церебролизат" | |
RU2089204C1 (ru) | Способ получения пептидов, восстанавливающих функцию предстательной железы | |
US3368940A (en) | Process for the isolation and purification of thyroglobulin | |
RU2091073C1 (ru) | Способ получения иммуностимулятора | |
SU1113127A1 (ru) | Способ получени средства дл диагностики заболеваний поджелудочной железы | |
SU1666457A1 (ru) | Способ получени пектина | |
RU2074726C1 (ru) | Способ получения биологически активного вещества, обладающего антиандрогенной и антиэстрогенной активностью | |
JPH05310799A (ja) | ムチンの精製方法 | |
RU2059411C1 (ru) | Способ получения биологически активных веществ из пантов | |
JPH04225001A (ja) | ポルフィランの製造法 | |
US2872319A (en) | Preparation of mixtures of amino acids |