RU2020122888A - Полипептиды карбоксиэстеразы для образования амидов в результате реакций сочетания - Google Patents
Полипептиды карбоксиэстеразы для образования амидов в результате реакций сочетания Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020122888A RU2020122888A RU2020122888A RU2020122888A RU2020122888A RU 2020122888 A RU2020122888 A RU 2020122888A RU 2020122888 A RU2020122888 A RU 2020122888A RU 2020122888 A RU2020122888 A RU 2020122888A RU 2020122888 A RU2020122888 A RU 2020122888A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- carboxyesterase
- seq
- polypeptide sequence
- engineered
- substitution
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
- C12N9/18—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y301/00—Hydrolases acting on ester bonds (3.1)
- C12Y301/01—Carboxylic ester hydrolases (3.1.1)
- C12Y301/01001—Carboxylesterase (3.1.1.1)
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Claims (37)
1. Сконструированная карбоксиэстераза, включающая полипептидную последовательность, которая по крайней мере на 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или более идентична SEQ ID NO: 2, или ее функциональный фрагмент, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности, и причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 2.
2. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 1, в которой указанная по крайней мере одна замена или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности включает замены в положениях, выбранных из 39, 39/323, 62, 62/117, 63, 64, 65, 66, 68, 69, 70, 71, 71/263, 77, 77/184, 103, 103/147, 104, 104/429, 105, 107, 107/185, 108, 109, 109/117, 110, 111, 113, 114, 115, 117, 118, 118/269, 118/349, 119, 126, 147, 153, 153/215, 164, 164/271, 174, 174/282, 183, 184, 184/249, 185, 186, 187, 188, 190, 209, 210, 211, 212, 213, 213/271, 213/345, 214, 215, 215/271, 216, 217, 217/231, 224, 224/268/372, 231, 249, 249/284, 263, 268, 269, 270, 270/470, 271, 271/416, 276, 277, 278, 279, 279/280/282, 280, 281, 281/374, 282, 283, 283/429, 284, 284/438, 285, 286, 311, 317, 320, 320/323, 320/323/372, 320/372/376, 320/376/377, 321, 323, 324, 345, 349, 372, 372/376, 373, 374, 376, 377, 405, 416, 420, 427, 428, 429, 438 и 470, причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 2.
3. Сконструированная карбоксиэстераза, включающая полипептидную последовательность, которая по крайней мере на 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или более идентична SEQ ID NO: 8, или ее функциональный фрагмент, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности и причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 8.
4. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 3, в которой указанная по крайней мере одна замена или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности включает замены в положениях, выбранных из 63, 63/65/108, 63/65/108/189, 63/65/108/377, 63/65/282/285/320/323, 63/65/320/323, 63/108, 63/108/282/285/377, 63/108/285/377, 63/108/320/323, 63/189, 63/212/215, 63/212/215/268/269/343, 63/215, 63/215/269, 63/215/270/271, 63/215/343, 63/268/269/270/429, 63/377, 65/69/70/281/372, 65/69/70/372, 65/69/372, 65/70/372, 65/320, 65/320/323, 68, 68/69/189/214, 68/69/189/214/215, 68/69/189/214/215/271, 68/69/189/214/215/271/281/282/343/381, 68/69/189/214/271/280, 68/69/189/214/372, 68/69/189/214/377/381, 68/69/189/271, 68/69/189/271/280/372/381, 68/69/189/280/281/282/372/377, 68/69/189/281/282/372/377/381, 68/69/189/343/381, 68/69/189/372, 68/69/189/381, 68/69/214/215/271, 68/69/214/343, 68/69/215, 68/69/271, 68/69/282/287, 68/69/343/372, 68/108/377, 68/184, 68/184/189, 68/189/271/372, 68/189/343, 68/214/215/271/281/282/372, 68/215/271/343/372/381, 68/215/377, 68/271/372, 68/377, 69, 69/70, 69/70/331/372, 69/70/372, 69/70/459, 69/108, 69/108/270/372/377, 69/108/281/285, 69/110/215/281, 69/189, 69/189/214/271/281/282/343, 69/189/214/343/372, 69/189/215/343, 69/189/271, 69/189/271/281/282, 69/189/271/343, 69/189/271/343/381, 69/189/280/282/343/372/381, 69/189/281/373, 69/189/282, 69/189/343/381, 69/189/372, 69/189/372/377, 69/189/377, 69/212/213/215/280/281, 69/214/215/271/372/377/381, 69/214/271/282, 69/214/271/343, 69/215, 69/215/269/270/377, 69/215/271/280/281/282, 69/215/271/282, 69/215/271/372, 69/215/285/317, 69/215/323, 69/215/343, 69/215/343/372/381, 69/271, 69/271/372, 69/282, 69/282/343/372, 69/285/373, 69/372, 70, 70/212, 108, 108/189, 108/189/282/285/320, 108/189/320, 108/189/377, 108/215, 108/215/377, 108/269/270, 108/270, 108/282/285/377, 108/285, 108/320/323, 108/377, 126, 126/184/213/280/281/285/320, 126/184/213/372, 126/189/285/372, 126/215, 126/372, 181/215, 189, 189/214, 189/214/215/271/282, 189/215, 189/215/249/277, 189/215/271/281/282/377, 189/215/343/372, 189/270/285, 189/270/372, 189/280/282, 189/320/377, 189/343, 189/343/377, 189/372/377, 189/377, 189/381, 213/215/320, 214/215/271, 214/215/271/377, 214/271, 214/280/282/343/377/381, 215, 215/249/280/281/285/372, 215/271/372, 215/280/281/285/372, 215/281/285/372, 215/281/285/373, 215/281/373, 215/285, 215/285/317, 215/285/346, 215/285/445, 215/320, 215/320/372, 215/323, 215/372, 215/372/377, 215/373, 215/377, 215/381, 249/377, 269/270/281/372/377, 270/377, 271, 271/343, 271/343/372, 271/343/372/381, 280/285/372, 281/372, 282/285/320/323, 285/323, 320, 343/372, 372, 372/377, 372/381, 373 и 377, причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 8.
5. Сконструированная карбоксиэстераза, включающая полипептидную последовательность, которая по крайней мере на 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или более идентична SEQ ID NO: 138, или ее функциональный фрагмент, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности, и причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 138.
6. Сконструированная карбоксиэстераза, включающая полипептидную последовательность, которая по крайней мере на 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% или более идентична SEQ ID NO: 140, или ее функциональный фрагмент, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности, и причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 140.
7. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 1, которая содержит аминокислотную замену в положении 282, причем указанное положение пронумеровано согласно SEQ ID NO: 2.
8. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 7, в которой указанная аминокислота в положении 282 выбрана из алифатических, неполярных, основных, полярных и ароматических аминокислот.
9. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 7, которая содержит аминокислотную замену, выбранную из X282T, X282G, X282A, X282V, X282M, X282C, X282W, X282Q, X282S, X282T и X282R.
10. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 1, в случае которой указанная полипептидная последовательность выбрана из SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134 и 136.
11. Сконструированная карбоксиэстераза по любому из пп. 1-4 и 7-10, которая обладает по крайней мере одним улучшенным свойством по сравнению с карбоксиэстеразой дикого типа T. fusca с SEQ ID NO: 2.
12. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 11, в случае которой указанное улучшенное свойство выбрано из увеличенной способность к амидированию, устойчивости к растворителю, термостойкости, устойчивости к pH, региоизбирательности, стереоизбирательности, объема субстратов и/или уменьшенного ингибирования субстратом или продуктом и пониженной токсичности для бактериальных клеток-хозяев, продуцирующих указанную сконструированную карбоксиэстеразу.
13. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 12, в случае которой указанные бактериальные клетки-хозяева включают E.coli.
14. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 12, в случае которой растворитель выбран из ацетона, ацетонитрила, толуола, тетрагидрофурана, изопропанола, изопропилацетата, диметилсульфоксида и/или метилэтилкетона.
15. Сконструированная карбоксиэстераза по любому из пп. 1-14, которая проявляет большую активность, чем карбоксиэстераза T. fusca дикого типа по крайней мере на одном субстрате, выбранном из анилина, изобутиламина, н-бутиламина, трет-бутиламина, N’-трет-бутоксикарбонилбензгидразида, 4-метилпиперидина О-трет-бутилгидроксиламина, бензиламина, 2,6-диметиланилина, (S)-(-)-α-метилбензиламина, (R)-(+)-α-метилбензиламина, метилфенилацетата, этилацетата, этилбензоата, 2-пиразинил-этилового эфира, эфира 4-этил-1H-индола и N,N-диэтилглицил-метилового эфира.
16. Сконструированная карбоксиэстераза по любому из пп. 1-15, которая проявляет большую активность, чем карбоксиэстераза T. fusca дикого типа по крайней мере на одном субстрате или комбинации субстратов, выбранных из анилина, изобутиламина, н-бутиламина, трет-бутиламина, N’-трет-бутоксикарбонилбензгидразида, 4-метилпиперидина О-трет-бутилгидроксиламина, бензиламина, 2,6-диметиланилина, (S)-(-)-α-метилбензиламина, (R)-(+)-α-метилбензиламина, метилфенилацетата, этилацетата, этилбензоата, 2-пиразинил-этилового эфира, эфира 4-этил-1H-индола и N,N-диэтилглицил-метилового эфира.
17. Сконструированная карбоксиэстераза по любому из пп. 1-16, которая проявляет большую активность, чем карбоксиэстераза T. fusca дикого типа, в продукции по крайней мере одного продукта, выбранного из ацетанилида, N-н-бутилбензилацетамида, N-[(S)-1-фенилэтил]-пиразиниламида, N-[(S)-1-фенилэтил]-бензамида, N-[(R)-1-фенилэтил]-бензамида, N’-трет-бутоксикарбонил-бензгидразида, 1-бензоил-4-метилпиперидина, 2-пиразинил-4-метилпиперидина, N-изобутилбензамида, N-трет-бутилбензамида, N-трет-бутилгидроксилбензамида, N-изобутил-1H-индол-4-амида, N’,N’-(диэтиламино)-N-фенилацетамида, N’,N’-(диэтиламино)-N-бензилацетамида и N’,N’-(диэтиламино)-N-2,6-диметилфенилацетамида.
18. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 1, которая содержит по крайней мере одну замену, выбранную из X343V, X372L, X320W/G, X214R, X282C, X271Y, X65G, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза проявляет большую активность, чем карбоксиэстераза T. fusca дикого типа на стерически затрудненном амине, в отношении образования N’,N’-(диэтиламино)-N-2,6-диметилфенилацетамида из этилбензоата и 2,6-диметиланилина.
19. Сконструированная карбоксиэстераза по п. 1, которая содержит по крайней мере одну замену, выбранную из X268A, X63A/R, X189Q/I/E, X214R, X282G/C, X381L, X69W, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза проявляет большую активность, чем карбоксиэстераза T. fusca дикого типа на вторичном амине, с образованием 1-бензоил-4-метилпиперидина из этилбензоата и 4-метилпиперидина.
20. Сконструированная карбоксиэстераза по любому из пп. 1-19, которая является очищенной.
21. Сконструированная карбоксиэстераза по любому из пп. 1-20, которая является иммобилизованной.
22. Композиция, содержащая по крайней мере одну сконструированную карбоксиэстеразу по любому из пп. 1-21.
23. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая по крайней мере одну сконструированную карбоксиэстеразу по любому из пп. 1-19.
24. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая по крайней мере одну сконструированную карбоксиэстеразу, включающую полипептидную последовательность, которая по крайней мере на 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентична SEQ ID NO: 2, или ее функциональный фрагмент, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности, причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 2.
25. Полинуклеотидная последовательность по п. 24, кодируемая которой указанная по крайней мере одна сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен, выбранную из 39, 39/323, 62, 62/117, 63, 64, 65, 66, 68, 69, 70, 71, 71/263, 77, 77/184, 103, 103/147, 104, 104/429, 105, 107, 107/185, 108, 109, 109/117, 110, 111, 113, 114, 115, 117, 118, 118/269, 118/349, 119, 126, 147, 153, 153/215, 164, 164/271, 174, 174/282, 183, 184, 184/249, 185, 186, 187, 188, 190, 209, 210, 211, 212, 213, 213/271, 213/345, 214, 215, 215/271, 216, 217, 217/231, 224, 224/268/372, 231, 249, 249/284, 263, 268, 269, 270, 270/470, 271, 271/416, 276, 277, 278, 279, 279/280/282, 280, 281, 281/374, 282, 283, 283/429, 284, 284/438, 285, 286, 311, 317, 320, 320/323, 320/323/372, 320/372/376, 320/376/377, 321, 323, 324, 345, 349, 372, 372/376, 373, 374, 376, 377, 405, 416, 420, 427, 428, 429, 438 и 470, причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 2.
26. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая по крайней мере одну сконструированную карбоксиэстеразу, включающую полипептидную последовательность, которая по крайней мере на 80%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более идентична SEQ ID NO: 8, или ее функциональный фрагмент, причем указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности, причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 8.
27. Полинуклеотидная последовательность по п. 26, кодируемая которой указанная сконструированная карбоксиэстераза содержит по крайней мере одну замену или совокупность замен в указанной полипептидной последовательности в положениях, выбранных из 63, 63/65/108, 63/65/108/189, 63/65/108/377, 63/65/282/285/320/323, 63/65/320/323, 63/108, 63/108/282/285/377, 63/108/285/377, 63/108/320/323, 63/189, 63/212/215, 63/212/215/268/269/343, 63/215, 63/215/269, 63/215/270/271, 63/215/343, 63/268/269/270/429, 63/377, 65/69/70/281/372, 65/69/70/372, 65/69/372, 65/70/372, 65/320, 65/320/323, 68, 68/69/189/214, 68/69/189/214/215, 68/69/189/214/215/271, 68/69/189/214/215/271/281/282/343/381, 68/69/189/214/271/280, 68/69/189/214/372, 68/69/189/214/377/381, 68/69/189/271, 68/69/189/271/280/372/381, 68/69/189/280/281/282/372/377, 68/69/189/281/282/372/377/381, 68/69/189/343/381, 68/69/189/372, 68/69/189/381, 68/69/214/215/271, 68/69/214/343, 68/69/215, 68/69/271, 68/69/282/287, 68/69/343/372, 68/108/377, 68/184, 68/184/189, 68/189/271/372, 68/189/343, 68/214/215/271/281/282/372, 68/215/271/343/372/381, 68/215/377, 68/271/372, 68/377, 69, 69/70, 69/70/331/372, 69/70/372, 69/70/459, 69/108, 69/108/270/372/377, 69/108/281/285, 69/110/215/281, 69/189, 69/189/214/271/281/282/343, 69/189/214/343/372, 69/189/215/343, 69/189/271, 69/189/271/281/282, 69/189/271/343, 69/189/271/343/381, 69/189/280/282/343/372/381, 69/189/281/373, 69/189/282, 69/189/343/381, 69/189/372, 69/189/372/377, 69/189/377, 69/212/213/215/280/281, 69/214/215/271/372/377/381, 69/214/271/282, 69/214/271/343, 69/215, 69/215/269/270/377, 69/215/271/280/281/282, 69/215/271/282, 69/215/271/372, 69/215/285/317, 69/215/323, 69/215/343, 69/215/343/372/381, 69/271, 69/271/372, 69/282, 69/282/343/372, 69/285/373, 69/372, 70, 70/212, 108, 108/189, 108/189/282/285/320, 108/189/320, 108/189/377, 108/215, 108/215/377, 108/269/270, 108/270, 108/282/285/377, 108/285, 108/320/323, 108/377, 126, 126/184/213/280/281/285/320, 126/184/213/372, 126/189/285/372, 126/215, 126/372, 181/215, 189, 189/214, 189/214/215/271/282, 189/215, 189/215/249/277, 189/215/271/281/282/377, 189/215/343/372, 189/270/285, 189/270/372, 189/280/282, 189/320/377, 189/343, 189/343/377, 189/372/377, 189/377, 189/381, 213/215/320, 214/215/271, 214/215/271/377, 214/271, 214/280/282/343/377/381, 215, 215/249/280/281/285/372, 215/271/372, 215/280/281/285/372, 215/281/285/372, 215/281/285/373, 215/281/373, 215/285, 215/285/317, 215/285/346, 215/285/445, 215/320, 215/320/372, 215/323, 215/372, 215/372/377, 215/373, 215/377, 215/381, 249/377, 269/270/281/372/377, 270/377, 271, 271/343, 271/343/372, 271/343/372/381, 280/285/372, 281/372, 282/285/320/323, 285/323, 320, 343/372, 372, 372/377, 372/381, 373 и 377, причем положения аминокислот в указанной полипептидной последовательности пронумерованы согласно SEQ ID NO: 8.
28. Полинуклеотидная последовательность, кодирующая по крайней мере одну сконструированную карбоксиэстеразу или ее функциональный фрагмент, при этом указанная полинуклеотидная последовательность по крайней мере на 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична SEQ ID NO: 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131,133, 135, 137 и/или 139.
29. Полинуклеотидная последовательность по любому из пп. 23-28, которая функционально связана с контролирующей последовательностью.
30. Полинуклеотидная последовательность по любому из пп. 23-29, которая является оптимизированной в отношении частоты использования кодонов.
31. Экспрессионный вектор, содержащий по крайней мере одну полинуклеотидную последовательность по любому из пп. 23-30.
32. Клетка-хозяин, содержащая по крайней мере один экспрессионный вектор по п. 31.
33. Клетка-хозяин, содержащая по крайней мере одну полинуклеотидную последовательность по любому из пп. 23-30.
34. Клетка-хозяин по п. 32 и/или 33, которая представляет собой Е.coli.
35. Способ получения сконструированной карбоксиэстеразы в клетке-хозяине, включающий культивирование клетки-хозяина по любому из пп. 32-34 в подходящих условиях, так что продуцируется по крайней мере одна сконструированная карбоксиэстераза.
36. Способ по п. 35, дополнительно включающий выделение по крайней мере одной сконструированной карбоксиэстеразы из культуры и/или клетки-хозяина.
37. Способ по п. 35 и/или 36, дополнительно включающий стадию очистки указанной по крайней мере одной сконструированной карбоксиэстеразы.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201762598189P | 2017-12-13 | 2017-12-13 | |
| US62/598,189 | 2017-12-13 | ||
| PCT/US2018/065124 WO2019118557A1 (en) | 2017-12-13 | 2018-12-12 | Carboxyesterase polypeptides for amide coupling |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020122888A true RU2020122888A (ru) | 2022-01-13 |
| RU2797285C2 RU2797285C2 (ru) | 2023-06-01 |
Family
ID=
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2019118557A8 (en) | 2020-06-04 |
| CA3081950A1 (en) | 2019-06-20 |
| IL274937A (en) | 2020-07-30 |
| MX2020006222A (es) | 2020-08-31 |
| EP3724325A1 (en) | 2020-10-21 |
| US11015180B2 (en) | 2021-05-25 |
| WO2019118557A1 (en) | 2019-06-20 |
| US20190177707A1 (en) | 2019-06-13 |
| JP2023062167A (ja) | 2023-05-02 |
| EP3724325A4 (en) | 2021-11-24 |
| CN111699250B (zh) | 2024-01-09 |
| SG11202004185PA (en) | 2020-06-29 |
| US20210238565A1 (en) | 2021-08-05 |
| CN111699250A (zh) | 2020-09-22 |
| JP2021506252A (ja) | 2021-02-22 |
| AU2018383752A1 (en) | 2020-05-21 |
| KR20200098564A (ko) | 2020-08-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Jiang et al. | Genome-wide identification and characterization of the Populus WRKY transcription factor family and analysis of their expression in response to biotic and abiotic stresses | |
| KR100190298B1 (ko) | 치환된 발린아미드 유도체 | |
| SE408794B (sv) | Forfarande for framstellning av nya (fenoxi- eller naftyloxi-)propanolamin-derivat med farmakologiska egenskaper | |
| Ayoup et al. | Fluorine containing amino acids: synthesis and peptide coupling of amino acids containing the all-cis tetrafluorocyclohexyl motif | |
| CN109369432A (zh) | （s）-4-氯-2-氨基丁酸酯的制备方法 | |
| Zafar et al. | Genome wide analysis of heat shock transcription factor (HSF) family in chickpea and its comparison with Arabidopsis | |
| RU2020122888A (ru) | Полипептиды карбоксиэстеразы для образования амидов в результате реакций сочетания | |
| JPS62292773A (ja) | トリ置換された１，３，５−トリアジン−２，４，６−トリオン類 | |
| Zhao et al. | Molecular cloning of novel antimicrobial peptide genes from the skin of the Chinese brown frog, Rana chensinensis | |
| DE50212185D1 (de) | Verfahren zur herstellung von isocyanaten | |
| DE60205985T3 (de) | Verfahren zur Herstellung von N-Carboxyanhydriden von Aminosäuren | |
| HU218865B (hu) | Eljárás N-szubsztituált ciklusos imidszármazékok előállítására és alkalmazásuk | |
| SK279217B6 (sk) | Deriváty amidov substituovaných aminokyselín, spôs | |
| JPWO2003024930A1 (ja) | ピペコリン酸アミド誘導体の製造方法 | |
| Zhang et al. | Synthesis, aphicidal activity and conformation of novel insect kinin analogues as potential eco‐friendly insecticides | |
| Liang et al. | Identification of PP2C genes in Tibetan hulless barley (Hordeum vulgare var. nudum) under dehydration stress and initiatory expression and functional analysis of HvPP2C59 | |
| SIMMONDS et al. | Synthesis of disulfide‐bridged fragments of ω‐conotoxins GVIA and MVIIA: Use of Npys as a protecting/activating group for cysteine in Fmoc syntheses | |
| RU2007111137A (ru) | Гонадотропный гормон, полученный из беспозвоночных, и его синтез | |
| Omidvar et al. | Isolation and characterization of an ethylene-responsive element binding protein (EgEREBP) from oil palm (Elaeis guineensis) | |
| SA515370163B1 (ar) | مركبات تجمُعّات زنك واستخدامها كحفازات في تفاعل أمينات مع كربونات ثنائي ألكيل | |
| Li et al. | Nematicidal activities of diamides with diphenylacetylene scaffold against Meloidogyne incognita | |
| Xu et al. | Reaction of CO2 and CS2 with aniline catalyzed by AlCl3 under mild condition | |
| Spetzler et al. | Preparation and application of O‐amino‐serine, Ams, a new building block in chemoselective ligation chemistry | |
| CN1807627A (zh) | 一个麻疯树盐诱导转录因子及其编码基因与应用 | |
| Slocum et al. | Purification and characterization of ornithine transcarbamylase from pea (Pisum sativum L.) |