RU2019101640A - Модифицированный фиброин - Google Patents

Модифицированный фиброин Download PDF

Info

Publication number
RU2019101640A
RU2019101640A RU2019101640A RU2019101640A RU2019101640A RU 2019101640 A RU2019101640 A RU 2019101640A RU 2019101640 A RU2019101640 A RU 2019101640A RU 2019101640 A RU2019101640 A RU 2019101640A RU 2019101640 A RU2019101640 A RU 2019101640A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
amino acid
acid sequence
sequence
acid residues
rep
Prior art date
Application number
RU2019101640A
Other languages
English (en)
Inventor
Кейсуке МОРИТА
Коити КОТАКА
Original Assignee
Спайбер Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Спайбер Инк. filed Critical Спайбер Инк.
Publication of RU2019101640A publication Critical patent/RU2019101640A/ru

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43513Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae
    • C07K14/43518Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from arachnidae from spiders
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/43504Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates
    • C07K14/43563Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from invertebrates from insects
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K19/00Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09Recombinant DNA-technology
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2319/00Fusion polypeptide
    • C07K2319/20Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K2319/00Fusion polypeptide
    • C07K2319/20Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Insects & Arthropods (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Artificial Filaments (AREA)

Claims (44)

1. Модифицированный фиброин, включающийпоследовательность домена, представленную формулой 1
мотив (A)n-REP]m,
где последовательность домена имеет аминокислотную последовательность, содержащую область с локально высоким гидропатическим индексом, эквивалентную аминокислотной последовательности, в которой один или множество аминокислотных остатков в REP заменены аминокислотными остатками с высоким гидропатическим индексом, и/или один или множество аминокислотных остатков с высоким гидропатическим индексом были встроены в REP по сравнению с природным фиброином;
в формуле 1 мотив (A)n представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 4-20 аминокислотных остатков, а число аланиновых остатков составляет 83% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A)n; REP представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 10-200 аминокислотных остатков, m равно целому числу от 10 до 300, множество мотивов (A)n может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности, а множество REP может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности.
2. Модифицированный фиброин по п. 1, где область с локально высоким гидропатическим индексом состоит из 2-4 следующих друг за другом аминокислотных остатков.
3. Модифицированный фиброин по п. 1 или 2, где аминокислотные остатки с высоким гидропатическим индексом выбраны из изолейцина (I), валина (V), лейцина (L), фенилаланина (F), цистеина (C), метионина (M) и аланина (A).
4. Модифицированный фиброин, включающий последовательность домена, представленную формулой 1:
мотив (A)n-REP]m,
где в случае, когда во всех REP, включенных в последовательность, за исключением последовательности мотива (A)n, расположенного, в основном, с C-концевой стороны по отношению к С-концу последовательности домена, общее число аминокислотных остатков, содержащихся в области, в которой средняя величина гидропатического индекса для четырех следующих друг за другом аминокислотных остатков составляет 2,6 или более, было принято за x, а общее число аминокислотных остатков, содержащихся в последовательности, за исключением последовательности мотива (A)n, расположенного, в основном, с C-концевой стороны по отношению к С-концу последовательности домена, было принято за y, то x/y составляет 6,2% или более;
в формуле 1, мотив (A)n представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 4-20 аминокислотных остатков, а число аланиновых остатков составляет 83% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A)n; REP представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 10-200 аминокислотных остатков, m равно целому числу от 10 до 300, множество мотивов (A)n может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности, а множество REP может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности.
5. Модифицированный фиброин по любому из пп. 1-4, где фиброин, помимо аминокислотной последовательности, в которой один или множество аминокислотных остатков в REP были заменены аминокислотными остатками с высоким гидропатическим индексом, и/или один или множество аминокислотных остатков с высоким гидропатическим индексом были встроены в REP, имеет аминокислотную последовательность с заменой, делецией, инсерцией и/или добавлением одного или множества аминокислотных остатков по сравнению с природным фиброином.
6. Модифицированный фиброин по п. 5, где природным фиброином является фиброин, происходящий от насекомых или пауков.
7. Модифицированный фиброин по п. 5, где природным фиброином является мажорный белок паука, имеющий бутылочнообразную форму (MaSp), или минорный белок паука, имеющий бутылочнообразную форму (MiSp).
8. Модифицированный фиброин, включающий
аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5, или
аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 или SEQ ID NO: 5.
9. Модифицированный фиброин по любому из пп. 1-8, также включающий последовательность метки у N-конца или у C-конца или у обоих концов.
10. Модифицированный фиброин по п. 9, где последовательность метки включает аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 6.
11. Модифицированный фиброин, включающий
аминокислотную последовательность, представленную в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 11, или
аминокислотную последовательность, которая на 90% или более идентична аминокислотной последовательности, представленной в SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 10 или SEQ ID NO: 11.
12. Нуклеиновая кислота, кодирующая модифицированный фиброин по любому из пп. 1-11.
13. Нуклеиновая кислота, которая гибридизуется с комплементарной цепью нуклеиновой кислоты по п. 12 в жестких условиях и кодирует модифицированный фиброин, включающий последовательность домена, представленную формулой 1
[мотив (A)n-REP]m,
в формуле 1 мотив (A)n представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 4-20 аминокислотных остатков, а число аланиновых остатков составляет 83% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A)n; REP представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 10-200 аминокислотных остатков, m равно целому числу от 10 до 300, множество мотивов (A)n может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности, а множество REP может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности.
14. Нуклеиновая кислота, имеющая последовательность, которая на 90% или более идентична нуклеиновой кислоте по п. 13, и кодирующая модифицированный фиброин, включающий последовательность домена, представленную формулой 1
[мотив (A)n-REP]m,
в формуле 1 мотив (A)n представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 4-20 аминокислотных остатков, а число аланиновых остатков составляет 83% или более от общего числа аминокислотных остатков в мотиве (A)n; REP представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из 10-200 аминокислотных остатков, m равно целому числу от 10 до 300, множество мотивов (A)n может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности, а множество REP может представлять собой одну и ту же аминокислотную последовательность или различные аминокислотные последовательности.
15. Экспрессионный вектор, включающий
последовательность нуклеиновой кислоты по любому из пп. 12-14, и
одну или множество регуляторных последовательностей, функционально присоединенных к этой последовательности.
16. Экспрессионный вектор по п. 15, который представляет собой плазмидный вектор или вирусный вектор.
17. Хозяин, трансформированный экспрессионным вектором по п. 15 или 16.
18. Хозяин по п. 17, который является прокариотом.
19. Хозяин по п. 18, где прокариотом является микроорганизм, принадлежащий к роду, выбранному из группы, состоящей из Escherichia, Brevibacillus, Serratia, Bacillus, Microbacterium, Brevibacterium, Corynebacterium и Pseudomonas.
20. Хозяин по п. 17, который является эукариотом.
21. Хозяин по п. 20, где эукариотом являются клетки дрожжей, нитчатых грибов или насекомых.
22. Хозяин по п. 21, где дрожжами являются дрожжи, принадлежащие к роду, выбранному из группы, состоящей из Saccharomyces, Schizosaccharomyces, Kluyveromyces, Trichosporon, Schwanniomyces, Pichia, Candida, Yarrowia и Hansenula.
23. Хозяин по п. 22, где дрожжами, принадлежащими к роду Saccharomyces, являются Saccharomyces cerevisiae; дрожжами, принадлежащими к роду Schizosaccharomyces, являются Schizosaccharomyces pombe; дрожжами, принадлежащими к роду Kluyveromyces, являются Kluyveromyces lactis; дрожжами, принадлежащими к роду Trichosporon, являются Trichosporon pullulans; дрожжами, принадлежащими к роду Schwanniomyces, являются Schwanniomyces alluvius; дрожжами, принадлежащими к роду Pichia, являются Pichia pastoris; дрожжами, принадлежащими к роду Candida, являются Candida albicans; дрожжами, принадлежащими к роду Yarrowia, являются Yarrowia lipolytica, а дрожжами, принадлежащими к роду Hansenula, являются Hansenula polymorpha.
24. Хозяин по п. 21, где нитчатыми грибами являются нитчатые грибы, принадлежащие к роду, выбранному из группы, состоящей из Aspergillus, Penicillium и Muсor.
25. Хозяин по п. 24, где нитчатыми грибами, принадлежащими к роду Aspergillus, являются Aspergillus oryzae; нитчатыми грибами, принадлежащими к роду Penicillium, являются Penicillium chrysogenum, а нитчатыми грибами, принадлежащими к роду Muсor, являются Muсor fragilis.
26. Хозяин по п. 21, где клетками насекомых являются клетки насекомых отряда Жесткокрылых.
27. Хозяин по п. 26, где клетками насекомых являются клетки насекомых, происходящих от Spodoptera frugiperda, или клетки насекомых, происходящих от Trichoplusia ni.
28. Продукт, включающий модифицированный фиброин по любому из пп. 1-11 и выбранный из группы, состоящей из волокна, пряжи, нитей, пленки, пены, сферы, нанофибрилл, гидрогеля, смолы и их эквивалентов.
RU2019101640A 2016-06-23 2017-06-23 Модифицированный фиброин RU2019101640A (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016124674 2016-06-23
JP2016-124674 2016-06-23
PCT/JP2017/023116 WO2017222034A1 (ja) 2016-06-23 2017-06-23 改変フィブロイン

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2019101640A true RU2019101640A (ru) 2020-07-23

Family

ID=60784118

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2019101640A RU2019101640A (ru) 2016-06-23 2017-06-23 Модифицированный фиброин

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20190233481A1 (ru)
EP (1) EP3476859A4 (ru)
JP (1) JP7133810B2 (ru)
KR (1) KR20190019156A (ru)
CN (1) CN109661404A (ru)
AU (1) AU2017282506A1 (ru)
BR (1) BR112018076737A2 (ru)
CA (1) CA3028932A1 (ru)
RU (1) RU2019101640A (ru)
WO (1) WO2017222034A1 (ru)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3071073A1 (en) * 2017-07-26 2019-01-31 Spiber Inc. Modified fibroin
JP2021080168A (ja) * 2018-01-31 2021-05-27 Spiber株式会社 フィブロイン組成物、フィブロイン溶液、及びフィブロイン繊維の製造方法
JP2021119742A (ja) * 2018-03-26 2021-08-19 Spiber株式会社 タンパク質成形体の製造方法及び目的タンパク質成形体
EP3778781A4 (en) 2018-04-03 2022-01-05 Spiber Inc. MOLDED ARTICLES AND METHOD FOR MANUFACTURING THEREOF
WO2019194249A1 (ja) * 2018-04-03 2019-10-10 Spiber株式会社 ドープ液、改変フィブロイン繊維及びその製造方法
JP2021167277A (ja) * 2018-04-03 2021-10-21 Spiber株式会社 人造フィブロイン繊維
CN112218979A (zh) * 2018-04-03 2021-01-12 丝芭博株式会社 复合纤维及其制造方法
AU2019318216A1 (en) * 2018-08-10 2021-03-11 Bolt Threads, Inc. Composition for a molded body
JP7228220B2 (ja) * 2018-09-28 2023-02-24 Spiber株式会社 吸湿発熱性付与剤、及び吸湿発熱性を付与する方法
JP7446578B2 (ja) * 2018-09-28 2024-03-11 Spiber株式会社 人造繊維綿
EP3910096A4 (en) * 2019-01-09 2023-05-24 Spiber Inc. MODIFIED FIBROIN
JPWO2021065769A1 (ru) * 2019-09-30 2021-04-08

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1427742A1 (en) * 2001-08-29 2004-06-16 University of Wyoming Spider silk protein encoding nucleic acids, polypeptides, antibodies and method of use thereof
EP1609801A1 (en) 2004-06-25 2005-12-28 Technische Universität München Proteins of natural origin and materials made therefrom
US20090123967A1 (en) 2005-08-29 2009-05-14 Thomas Scheibel Modified spider silk proteins
JP5771833B2 (ja) 2010-09-10 2015-09-02 岡本株式会社 核酸、核酸によりコードされるタンパク質、核酸が導入された組換え生物、及び組換え生物により作られるタンパク質
JP2014502140A (ja) * 2010-09-28 2014-01-30 ザ ユニバーシティー オブ ノートルダム キメラスパイダーシルクおよびその使用
CN103827139B (zh) 2011-11-02 2016-11-09 丝芭博株式会社 多肽溶液和使用了该多肽溶液的人造多肽纤维的制造方法以及多肽的精制方法
ITFI20120213A1 (it) 2012-10-17 2014-04-18 Futura Spa Elemento per il trascinamento di materiali nastriformi.
ES2887366T3 (es) 2013-09-17 2021-12-22 Bolt Threads Inc Métodos y composiciones para sintetizar fibras de seda mejoradas
WO2018164189A1 (ja) * 2017-03-10 2018-09-13 Spiber株式会社 タンパク質成形体及びこれを製造する方法、並びにタンパク質溶液
JP2020097796A (ja) * 2017-03-10 2020-06-25 Spiber株式会社 人造フィブロイン繊維
US20210388557A1 (en) * 2017-03-10 2021-12-16 Spiber Inc. Method for Producing Protein Fiber, and Method for Shrinking Protein Fiber
CN110462118B (zh) * 2017-03-10 2022-10-11 丝芭博株式会社 蛋白质纤维的制造方法和制造装置

Also Published As

Publication number Publication date
KR20190019156A (ko) 2019-02-26
CN109661404A (zh) 2019-04-19
EP3476859A1 (en) 2019-05-01
US20190233481A1 (en) 2019-08-01
WO2017222034A1 (ja) 2017-12-28
BR112018076737A2 (pt) 2019-03-26
JPWO2017222034A1 (ja) 2019-04-18
JP7133810B2 (ja) 2022-09-09
CA3028932A1 (en) 2017-12-28
EP3476859A4 (en) 2019-12-11
AU2017282506A1 (en) 2019-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2019101640A (ru) Модифицированный фиброин
RU2018135565A (ru) Модифицированный фиброин
RU2018135566A (ru) Модифицированный фиброин
JP6959482B2 (ja) 成形体及びその製造方法、並びに成形体のタフネスを向上させる方法
CN111051334A (zh) 改造丝心蛋白
JP6077569B2 (ja) 親水性組換えタンパク質の抽出方法
US11174572B2 (en) Composite molding composition including fibroin-like protein, and method for producing composite molding composition
JPWO2018043698A1 (ja) モールド成形体及びモールド成形体の製造方法
JPWO2019194146A1 (ja) 成形体及びその製造方法
JPWO2018164189A1 (ja) タンパク質成形体及びこれを製造する方法、並びにタンパク質溶液
JP2024012433A (ja) タンパク質成形体の製造方法、タンパク質溶液の製造方法及びタンパク質の製造方法
WO2021187502A1 (ja) 合成高分子及びその製造方法、成形材料、並びに、成形体
WO2018164195A1 (ja) 精製されたタンパク質を製造する方法
JP2021054994A (ja) 繊維強化樹脂成形体及びその製造方法
WO2020067554A1 (ja) 成形体の製造方法および構造タンパク質成形体
WO2019146761A1 (ja) 植毛品及びその製造方法
WO2021201103A1 (ja) 難燃性材料及びその製造方法
JP2020055904A (ja) 吸湿発熱性付与剤、及び吸湿発熱性を付与する方法
TH1801006583A (th) ไฟโบรอินที่ดัดแปลง
JPWO2017131195A1 (ja) 成形体及びその製造方法、並びに成形体の結晶化度を向上させる方法
WO2020067549A1 (ja) 植毛品及び植毛用パイル
JP2021054986A (ja) 難燃性組成物
JP2020121962A (ja) タンパク質フィルム及びタンパク質フィルムの製造方法
JP2021080574A (ja) 紡糸原液、フィブロイン繊維及びその製造方法
JP2021151954A (ja) タンパク質組成物及びその製造方法

Legal Events

Date Code Title Description
FA93 Acknowledgement of application withdrawn (no request for examination)

Effective date: 20200624