RU2016115777A - Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических веществ тонкого органического синтеза - Google Patents

Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических веществ тонкого органического синтеза Download PDF

Info

Publication number
RU2016115777A
RU2016115777A RU2016115777A RU2016115777A RU2016115777A RU 2016115777 A RU2016115777 A RU 2016115777A RU 2016115777 A RU2016115777 A RU 2016115777A RU 2016115777 A RU2016115777 A RU 2016115777A RU 2016115777 A RU2016115777 A RU 2016115777A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
acid molecule
nucleic acid
seq
amino acid
recombinant
Prior art date
Application number
RU2016115777A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2712510C2 (ru
RU2016115777A3 (ru
Inventor
Хартвиг ШРЕДЕР
Хольгер ХАРТМАНН
Квингжао ВАНГ
Шакир РАТАНИ
Жейан ГУО
Маркус ПОМПЕЙУС
Original Assignee
Басф Се
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Басф Се filed Critical Басф Се
Publication of RU2016115777A publication Critical patent/RU2016115777A/ru
Publication of RU2016115777A3 publication Critical patent/RU2016115777A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2712510C2 publication Critical patent/RU2712510C2/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0012—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7)
    • C12N9/0036—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on NADH or NADPH (1.6)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/16—Hydrolases (3) acting on ester bonds (3.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/06—Alanine; Leucine; Isoleucine; Serine; Homoserine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/20—Aspartic acid; Asparagine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/44—Polycarboxylic acids
    • C12P7/46—Dicarboxylic acids having four or less carbon atoms, e.g. fumaric acid, maleic acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
    • C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
    • C12P7/56—Lactic acid

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Claims (136)

1. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся последовательностью, выбранной из следующей группы:
(I) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 1, 45 или 49, или
(II) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 1, 45 или 49, или
(III) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 1, 45 или 49, при жестких условиях, или
(IV) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 2, 46 или 50, или
(V) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 2, 46 или 50,
где кодон генов согласно (I)-(v), соответствующий положению 13-15 в SEQ ID NO: 1, не кодирует аминокислоту глутамин и не представляет собой стоп-кодон, или аминокислота белков, кодируемых генами согласно (I)-(v), соответствующая положению 5 в SEQ ID NO: 2, не представляет собой глутамин и не представляет собой стоп-кодон, и
где кодон генов согласно (I)-(v), соответствующий положению 913-915 в SEQ ID NO: 45, не кодирует аминокислоту аргинин и не представляет собой стоп-кодон, или аминокислота белков, кодируемых генами согласно (I)-(v), соответствующая положению 305 в SEQ ID NO: 46, не представляет собой аргинин и не представляет собой стоп-кодон, и
где кодон генов согласно (I)-(v), соответствующий положению 208-210 в SEQ ID NO: 49, не кодирует аминокислоту аланин и не представляет собой стоп-кодон, или аминокислота белков, кодируемых генами согласно (I)-(v), соответствующая положению 70 в SEQ ID NO: 50, не представляет собой аланин и не представляет собой стоп-кодон.
2. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, характеризующаяся последовательностью согласно SEQ ID NO: 1, где кодон, кодирующий аминокислоту глутамин в положении 13-15, замещен кодоном, кодирующим аминокислоту гистидин или сходную с гистидином аминокислоту или другую основную аминокислоту, или кодоном, кодирующим аминокислоту аспарагин или сходную с аспарагином аминокислоту или другую алифатическую аминокислоту, или кодоном, кодирующим аминокислоту аргинин или сходную с аргинином аминокислоту или другую алифатическую аминокислоту, или кодоном, кодирующим аминокислоту тирозин или сходную с тирозином аминокислоту или другую ароматическую аминокислоту.
3. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, характеризующаяся последовательностью согласно SEQ ID NO: 45, причем кодон, кодирующий аминокислоту аргинин в положении 913-915, замещен кодоном, кодирующим аминокислоту глицин или сходную с глицином аминокислоту или другую алифатическую аминокислоту.
4. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, характеризующаяся последовательностью согласно SEQ ID NO: 49, причем кодон, кодирующий аминокислоту аланин в положении 208-210, замещен кодоном, кодирующим аминокислоту пролин.
5. Рекомбинантная молекула аминокислоты по п. 2, причем аминокислота глутамин в положении 5 замещена гистидином или сходной с гистидином аминокислотой или другой основной аминокислотой, или аспарагином или сходной с аспарагином аминокислотой или другой алифатической аминокислотой, или аргинином или сходной с аргинином аминокислотой или другой алифатической аминокислотой, или тирозином или сходной с тирозином аминокислотой или другой ароматической аминокислотой.
6. Рекомбинантная молекула аминокислоты по п. 3, в которой аминокислота аргинин в положении 305 замещена глицином или сходной с глицином аминокислотой или другой алифатической аминокислотой.
7. Рекомбинантная молекула аминокислоты по п. 4, в которой аминокислота аланин в положении 70 замещена пролином.
8. Рекомбинантная молекула аминокислоты, характеризующаяся последовательностью, выбранной из следующей группы:
(VI) молекула аминокислоты, содержащая последовательность согласно SEQ ID NO: 2, или
(VII) молекула аминокислоты, характеризующаяся по меньшей мере 60% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 2, или
где аминокислота белка согласно (VII), соответствующая положению 5 в SEQ ID NO: 2, не представляет собой глутамин.
9. Рекомбинантная молекула аминокислоты, характеризующаяся последовательностью, выбранной из следующей группы:
(VI) молекула аминокислоты, содержащая последовательность согласно SEQ ID NO: 46, или
(VII) молекула аминокислоты, характеризующаяся по меньшей мере 60% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 46, или
где аминокислота белка согласно (VII), соответствующая положению 305 в SEQ ID NO: 46, не представляет собой аргинин.
10. Рекомбинантная молекула аминокислоты, характеризующаяся последовательностью, выбранной из следующей группы:
(VI) молекула аминокислоты, содержащая последовательность согласно SEQ ID NO: 50, или
(VII) молекула аминокислоты, характеризующаяся по меньшей мере 60% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 50, или
где аминокислота белка согласно (VII), соответствующая положению 70 в SEQ ID NO: 50, не представляет собой аланин.
11. Рекомбинантная экспрессионная конструкция, содержащая по меньшей мере один промотор, являющийся функциональным в микроорганизме, функционально связанный по меньшей мере с одной из молекул нуклеиновой кислоты, как определено в одном из пп. 1-4.
12. Рекомбинантный вектор, содержащий по меньшей мере одну из молекул нуклеиновой кислоты как определено в пп. 1-4 или рекомбинантную экспрессионную конструкцию как определено в п. 11.
13. Рекомбинантный микроорганизм, характеризующийся по меньшей мере одним из следующего:
a) введенная, увеличенная, усиленная или измененная активность и/или экспрессия гена lpd или его гомолога или его функционального варианта,
b) введенная, увеличенная, усиленная или измененная активность и/или экспрессия гена zipA или его гомолога или его функционального варианта,
c) (I) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 1, или
(II) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 1, или
(III) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 1, при жестких условиях, или
(IV) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 2, или
(V) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 2,
где кодон генов согласно с) (I)-(V), соответствующий положению 13-15 в SEQ ID NO: 1, не кодирует аминокислоту глутамин и не представляет собой стоп-кодон, или аминокислота белков, кодируемых генами согласно с) (I)-(V), соответствующий положению 5 в SEQ ID NO: 2, не представляет собой глутамин.
14. Рекомбинантный микроорганизм по п. 13, причем ген lpd выбирается из следующей группы:
(i) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 49, или
(ii) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 49, или
(iii) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 49, при жестких условиях, или
(iv) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 50, или
(v) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 50.
15. Рекомбинантный микроорганизм по п. 13, в котором ген zipA выбирается из следующей группы:
(i) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 45, или
(ii) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 45, или
(iii) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 45, при жестких условиях, или
(iv) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 46, или
(v) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 46.
16. Рекомбинантный микроорганизм, содержащий по меньшей мере одну из рекомбинантных молекул нуклеиновой кислоты, как определено в одном из пп. 1-4, или рекомбинантную экспрессионную конструкцию по п. 11 или рекомбинантный вектор по п. 12.
17. Рекомбинантный микроорганизм по п. 16, дополнительно характеризующийся введенной, увеличенной или усиленной активностью и/или экспрессией гена alaD.
18. Рекомбинантный микроорганизм по п. 16, дополнительно характеризующийся сниженной, репрессированной или удаленной активностью и/или экспрессией гена pflB.
19. Рекомбинантный микроорганизм по п. 16, дополнительно характеризующийся сниженной, репрессированной или удаленной активностью и/или экспрессией гена adhE.
20. Рекомбинантный микроорганизм по п. 16, дополнительно характеризующийся сниженной, репрессированной или удаленной активностью и/или экспрессией гена ldhA.
21. Рекомбинантный микроорганизм по п. 16, дополнительно характеризующийся сниженной, репрессированной или удаленной активностью и/или экспрессией гена pta.
22. Рекомбинантный микроорганизм по п. 16, дополнительно характеризующийся сниженной, репрессированной или удаленной активностью и/или экспрессией frdA.
23. Рекомбинантный микроорганизм по п. 17, причем ген alaD выбирается из группы, состоящей из следующего:
(АА) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 15, или
(ВВ) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 15, или
(СС) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 15, при жестких условиях, или
(DD) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 16, или
(ЕЕ) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 16.
24. Рекомбинантный микроорганизм по п. 17, причем ген alaD функционально связан с промотором, характеризующимся SEQ ID NO 54 или 55 или следующим:
(I) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 54 или 55, или
(II) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с молекулой нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 54 или 55, при условиях средней жесткости, или
(III) фрагмент, составляющий по меньшей мере 10 нуклеотидов молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 54.
25. Рекомбинантный микроорганизм по п. 18, причем ген pflB выбирается из группы, состоящей из следующего:
(A) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 5, или
(B) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 5, или
(C) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 5, при жестких условиях, или
(D) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 6, или
(E) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 6.
26. Рекомбинантный микроорганизм по п. 19, причем ген adhE выбирается из группы, состоящей из следующего:
(F) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 7, или
(G) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 7, или
(H) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 7, при жестких условиях, или
(I) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 8, или
(J) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 8.
27. Рекомбинантный микроорганизм по п. 20, причем ген ldhA выбирается из группы, состоящей из следующего:
(К) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 9, или
(L) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 9, или
(М) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 9, при жестких условиях, или
(N) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 10, или
(О) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 10.
28. Рекомбинантный микроорганизм по п. 21, причем ген pta выбирается из группы, состоящей из следующего:
(Р) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 11, или
(Q) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 11, или
(R) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 11, при жестких условиях, или
(S) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 12, или
(Т) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 12.
29. Рекомбинантный микроорганизм по п. 22, причем ген frdA выбирается из группы, состоящей из следующего:
(U) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 13, или
(V) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 13, или
(W) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 13, при жестких условиях, или
(X) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 14, или
(Y) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 14.
30. Рекомбинантный микроорганизм по одному из пп. 13-29, причем микроорганизм выбирается из рода из группы, состоящей из Corynebacterium, Bacillus, Erwinia, Escherichia, Pantoea, Streptomyces, Zymomonas и Rhodococcus.
31. Композиция, содержащая один или более рекомбинантных микроорганизмов по одному из пп. 13-30.
32. Композиция по п. 31, дополнительно содержащая среду и источник углерода.
33. Способ получения рекомбинантного микроорганизма с усиленным выходом пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина, который предусматривает следующие стадии:
(I) введение по меньшей мере одной из молекул нуклеиновой кислоты, как определено в одном из пп. 1-4, или по меньшей мере одной из молекул аминокислоты, как определено в одном из пп. 5-10, или экспрессионной конструкции по п. 11 или вектора по п. 12 в микроорганизм; и
(II) создание рекомбинантного микроорганизма с усиленным выходом пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина по сравнению с соответствующим микроорганизмом, не содержащим по меньшей мере одну из молекул нуклеиновой кислоты, как определено в одном из пп. 1-4, или по меньшей мере одну из молекул аминокислоты, как определено в одном из пп. 5-10, или экспрессионную конструкцию по п. 11 или вектор по п. 12.
34. Способ по п. 33, в котором применяемый в указанном способе рекомбинантный микроорганизм дополнительно характеризуется увеличенной или усиленной активностью и/или экспрессией гена, как определено в пп. 13, 15 или 17, и/или сниженной, репрессированной или удаленной активностью, и/или экспрессией по меньшей мере одного гена, как определено в одном из пп. 18-22.
35. Способ по одному из п. 33 или 34, в котором микроорганизм выбирается из рода из группы, состоящей из Corynebacterium, Bacillus, Erwinia, Escherichia, Pantoea, Streptomyces, Zymomonas и Rhodococcus.
36. Способ получения пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина, предусматривающий культивирование одного или более рекомбинантных микроорганизмов по одному из пп. 13-30 при условиях, которые обеспечивают возможность получения аланина.
37. Способ по п. 36, в котором микроорганизм культивируют в среде, содержащей 0,5%-30% (масс./объем) сахара.
38. Способ по п. 36, в котором выход пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина составляет по меньшей мере 80%.
39. Способ по любому одному из пп. 36-38, в котором хиральная чистота L-аланина составляет по меньшей мере 98%.
40. Способ культивирования или выращивания генетически модифицированного микроорганизма, предусматривающий инокуляцию среды для культивирования одним или более генетически модифицированными микроорганизмами по одному из пп. 13-30 и культивирование или выращивание указанного генетически модифицированного микроорганизма в указанной среде для культивирования.
41. Применение рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты по одному из пп. 1-4, рекомбинантной молекулы аминокислоты по одному из пп. 5-10, рекомбинантной экспрессионной конструкции по п. 11, рекомбинантного вектора по п. 12, рекомбинантного микроорганизма по одному из пп. 13-30 или композиции по одному из п. 31 или 32 для ферментативного получения пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина.
42. Способ ферментативного получения пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина, предусматривающий следующие стадии:
I) выращивание микроорганизма по одному из пп. 13 - 30 в ферментере и
II) извлечение пирувата, сукцината, аспартата, малата, лактата, валина, лейцина и/или аланина из ферментативного бульона, полученного на стадии I).
43. Рекомбинантная экспрессионная конструкция, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты, характеризующуюся последовательностью, выбранной из следующей группы:
(I) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 15, или
(II) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 15, или
(III) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с комплементом молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 15, при жестких условиях, или
(IV) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид согласно SEQ ID NO: 16, или
(V) молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая полипептид, характеризующийся по меньшей мере 60% гомологией относительно полипептида согласно SEQ ID NO: 16,
функционально связанную с промотором, являющимся функциональным в микроорганизме, характеризующимся следующей последовательностью:
(VI) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 54 или 55, или
(VII) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 54 или 55, или
(VIII) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с молекулой нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 54 или 55 при условиях средней жесткости, или
(IX) фрагмент, составляющий по меньшей мере 10 нуклеотидов молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 54 или 55.
44. Рекомбинантный вектор, содержащий рекомбинантную экспрессионную конструкцию, как определено в п. 43.
45. Промотор, являющийся функциональным в микроорганизме, характеризующийся последовательностью, выбранной из следующей группы:
(I) молекула нуклеиновой кислоты, содержащая последовательность SEQ ID NO: 54 или 55, или
(II) молекула нуклеиновой кислоты, характеризующаяся по меньшей мере 80% идентичностью относительно молекулы нуклеиновой кислоты согласно SEQ ID NO: 54 или 55, или
(III) молекула нуклеиновой кислоты, гибридизующаяся с молекулой нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 54 или 55 при условиях средней жесткости, или
(IV) фрагмент, составляющий по меньшей мере 10 нуклеотидов молекулы нуклеиновой кислоты, характеризующейся SEQ ID NO: 54 или 55.
46. Рекомбинантная экспрессионная конструкция, содержащая промотор по п. 45, функционально связанный с гетерологичной молекулой нуклеиновой кислоты, подлежащей экспрессии.
47. Вектор, содержащий промотор по п. 45 или рекомбинантную экспрессионную конструкцию по п. 46.
48. Рекомбинантный микроорганизм, содержащий промотор по п. 45, рекомбинантную экспрессионную конструкцию по п. 46 или вектор по п. 47.
49. Способ экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты в микроорганизме, включающий стадии функционального связывания промотора по п. 45 с подлежащей экспрессии молекулой нуклеиновой кислоты, тем самым создавая рекомбинантную экспрессионную конструкцию, и введение указанной экспрессионной конструкции в микроорганизм.
50. Применение промотора по п. 45, рекомбинантной экспрессионной конструкции по п. 46 или вектора по п. 47 для экспрессии молекулы нуклеиновой кислоты в микроорганизме.
RU2016115777A 2013-09-25 2014-09-11 Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических веществ тонкого органического синтеза RU2712510C2 (ru)

Applications Claiming Priority (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361881969P 2013-09-25 2013-09-25
US201361881968P 2013-09-25 2013-09-25
US201361881972P 2013-09-25 2013-09-25
US201361881975P 2013-09-25 2013-09-25
US61/881975 2013-09-25
US61/881968 2013-09-25
US61/881969 2013-09-25
US61/881972 2013-09-25
PCT/IB2014/064426 WO2015044818A1 (en) 2013-09-25 2014-09-11 Recombinant microorganism for improved production of fine chemicals

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2016115777A true RU2016115777A (ru) 2017-10-30
RU2016115777A3 RU2016115777A3 (ru) 2018-09-03
RU2712510C2 RU2712510C2 (ru) 2020-01-29

Family

ID=52742164

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2016115777A RU2712510C2 (ru) 2013-09-25 2014-09-11 Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических веществ тонкого органического синтеза

Country Status (11)

Country Link
US (1) US10047364B2 (ru)
EP (1) EP3052630A4 (ru)
JP (1) JP6572206B2 (ru)
KR (1) KR102400332B1 (ru)
CN (1) CN105683378B (ru)
BR (1) BR112016006606A2 (ru)
CA (1) CA2924088A1 (ru)
MX (1) MX2016003737A (ru)
MY (1) MY181068A (ru)
RU (1) RU2712510C2 (ru)
WO (1) WO2015044818A1 (ru)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9433228B2 (en) 2003-08-01 2016-09-06 Basf Plant Science Gmbh Method for the production of multiple-unsaturated fatty acids in transgenic organisms
US11952581B2 (en) 2003-08-01 2024-04-09 Basf Plant Science Gmbh Process for the production of polyunsaturated fatty acids in transgenic organisms
AR059376A1 (es) 2006-02-21 2008-03-26 Basf Plant Science Gmbh Procedimiento para la produccion de acidos grasos poliinsaturados
CA2924088A1 (en) * 2013-09-25 2015-04-02 Basf Se Recombinant microorganism for improved production of fine chemicals
KR20210133323A (ko) 2013-12-13 2021-11-05 바스프 에스이 정밀 화학물질의 개선된 생산을 위한 재조합 미생물
WO2016146633A1 (en) 2015-03-18 2016-09-22 Basf Se Recombinant microorganism for improved production of fine chemicals
CN104774790B (zh) * 2015-04-03 2020-11-06 江南大学 一种高效发酵生产l-丙氨酸的大肠杆菌
MX2017015668A (es) 2015-06-04 2018-08-15 Basf Se Microorganismos recombinante para la produccion mejorada de quimicos finos.
MY189932A (en) * 2015-06-12 2022-03-22 Basf Se Recombinant microorganism for improved production of alanine
MX2018006535A (es) 2015-12-02 2018-08-15 Basf Se Metodo para producir proteinas en hongos filamentosos con accion clr2 reducida.
WO2017093451A1 (en) 2015-12-02 2017-06-08 Basf Se Method of producing proteins in filamentous fungi with decreased clri activity
CN108660142A (zh) * 2018-05-28 2018-10-16 河北大学 一种高产l-丙氨酸的基因及其工程菌的构建方法
CN110904062B (zh) * 2018-09-18 2022-03-15 安徽华恒生物科技股份有限公司 一株高产l-丙氨酸的菌株

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5948889A (en) 1996-05-21 1999-09-07 Case Western Reserve University Compositions and methods for screening antimicrobials
US6610836B1 (en) * 1999-01-29 2003-08-26 Genome Therapeutics Corporation Nucleic acid amino acid sequences relating to Klebsiella pneumoniae for diagnostics and therapeutics
DE102004026152A1 (de) 2004-05-28 2005-12-15 Basf Ag Fermentative Herstellung von Feinchemikalien
MX301701B (es) 2008-09-23 2012-07-26 Basf Plant Science Gmbh Plantas transgenicas con rendimiento incrementado.
MY195387A (en) 2009-06-04 2023-01-18 Genomatica Inc Microorganisms for the Production of 1,4-Butanediol and Related Methods
RU2460793C2 (ru) * 2010-01-15 2012-09-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
JP2013000064A (ja) 2011-06-17 2013-01-07 Tohoku Univ 組換え微生物、当該組換え微生物を用いたアラニンの製造方法
EP3039121A4 (en) 2013-08-30 2017-05-03 Basf Se Modified microorganism for improved production of alanine
CA2924088A1 (en) 2013-09-25 2015-04-02 Basf Se Recombinant microorganism for improved production of fine chemicals
KR20210133323A (ko) * 2013-12-13 2021-11-05 바스프 에스이 정밀 화학물질의 개선된 생산을 위한 재조합 미생물

Also Published As

Publication number Publication date
CA2924088A1 (en) 2015-04-02
CN105683378A (zh) 2016-06-15
WO2015044818A1 (en) 2015-04-02
EP3052630A1 (en) 2016-08-10
MY181068A (en) 2020-12-17
CN105683378B (zh) 2021-06-29
RU2712510C2 (ru) 2020-01-29
US10047364B2 (en) 2018-08-14
KR102400332B1 (ko) 2022-05-20
JP2016535977A (ja) 2016-11-24
BR112016006606A2 (pt) 2017-09-19
US20160355829A1 (en) 2016-12-08
MX2016003737A (es) 2017-01-12
EP3052630A4 (en) 2017-08-16
KR20160057478A (ko) 2016-05-23
RU2016115777A3 (ru) 2018-09-03
JP6572206B2 (ja) 2019-09-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2016115777A (ru) Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических веществ тонкого органического синтеза
RU2017146342A (ru) Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических продуктов тонкого органического синтеза
RU2017136561A (ru) Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения химических продуктов тонкого органического синтеза
JP7475434B2 (ja) Ｌ－トリプトファン産生効率を向上させるトランスポーター遺伝子の大腸菌における使用
RU2018100807A (ru) Рекомбинантный микроорганизм для улучшенного получения аланина
KR102183558B1 (ko) L-알라닐-l-글루타민 생합성 효소를 코딩하는 유전자 및 그 용도
CN105899664A (zh) 用于精细化学品的改进生产的重组微生物
RU2012103674A (ru) НОВЫЕ ГИДРОГЕНАЗЫ, ВЫДЕЛЕННЫЕ ИЗ Thermococcus spp., ГЕНЫ, КОДИРУЮЩИЕ ЭТИ ГИДРОГЕНАЗЫ, И СПОСОБЫ ПРОДУЦИРОВАНИЯ ВОДОРОДА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МИКРООРГАНИЗМОВ, СОДЕРЖАЩИХ УКАЗАННЫЕ ГЕНЫ
US10435720B2 (en) Recombinant microorganism having enhanced D(-) 2,3-butanediol producing ability and method for producing D(-) 2,3-butanediol using the same
RU2016111682A (ru) Модифицированный микроорганизм для улучшенного получения аланина
CN109022438B (zh) 一种角蛋白酶异源表达的启动子及其应用
WO2023231547A1 (zh) NCgl2747基因突变体及其在制备L-赖氨酸中的应用
US20160281096A1 (en) Recombinant microorganism having enhanced 2,3-butanediol producing ability and method for producing 2,3-butanediol using the same
CN109593702B (zh) 一种基因工程菌株实现全细胞转化合成l-苯乳酸的方法
JP2015530121A5 (ru)
CN109456987A (zh) 高产l-亮氨酸的相关基因及工程菌构建方法与应用
CN103820417B (zh) 一种酯水解酶、编码基因、载体、工程菌及其应用
CN113061563B (zh) 一种利用重组大肠杆菌全细胞催化合成l-苹果酸的方法
JP2024505807A (ja) 遺伝子ｂｂｄ２９ １４９００を改造した組換え菌株及びその構築方法と応用
KR102481504B1 (ko) 2,3-부탄디올 생산용 메탄자화균 형질전환체
CN107674864A (zh) 一种生产反式‑4‑羟基‑l‑脯氨酸的方法
US10087425B2 (en) Chimeric enzymes for conversion of lignin-derived chemicals
CN108026147A (zh) 生产o-乙酰-高丝氨酸的微生物和使用其生产o-乙酰-高丝氨酸的方法
CN103820416A (zh) 一种高立体选择性酯水解酶、编码基因及其应用
US11781107B2 (en) Microorganisms engineered for muconate production