RU2015127667A - Улучшенные экспрессия и процессинг трансгена - Google Patents
Улучшенные экспрессия и процессинг трансгена Download PDFInfo
- Publication number
- RU2015127667A RU2015127667A RU2015127667A RU2015127667A RU2015127667A RU 2015127667 A RU2015127667 A RU 2015127667A RU 2015127667 A RU2015127667 A RU 2015127667A RU 2015127667 A RU2015127667 A RU 2015127667A RU 2015127667 A RU2015127667 A RU 2015127667A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- mar
- nucleic acid
- sequence
- transgene
- protein
- Prior art date
Links
- 238000012545 processing Methods 0.000 title claims 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims 51
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims 41
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims 39
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims 39
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 claims 36
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims 28
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 claims 27
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims 23
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims 16
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims 12
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims 10
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 claims 8
- 101000581326 Homo sapiens Mediator of DNA damage checkpoint protein 1 Proteins 0.000 claims 8
- 102100027643 Mediator of DNA damage checkpoint protein 1 Human genes 0.000 claims 8
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 claims 8
- 101150072950 BRCA1 gene Proteins 0.000 claims 7
- -1 BiP Proteins 0.000 claims 7
- 102000053062 Rad52 DNA Repair and Recombination Human genes 0.000 claims 7
- 108700031762 Rad52 DNA Repair and Recombination Proteins 0.000 claims 7
- 101000942941 Arabidopsis thaliana DNA ligase 6 Proteins 0.000 claims 6
- 101150059668 Bard1 gene Proteins 0.000 claims 6
- 101150008921 Brca2 gene Proteins 0.000 claims 6
- 102100033934 DNA repair protein RAD51 homolog 2 Human genes 0.000 claims 6
- 101100300807 Drosophila melanogaster spn-A gene Proteins 0.000 claims 6
- 101150071637 mre11 gene Proteins 0.000 claims 6
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims 6
- 238000001890 transfection Methods 0.000 claims 6
- 101100226013 Mus musculus Ercc1 gene Proteins 0.000 claims 5
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims 5
- 102000008579 Transposases Human genes 0.000 claims 5
- 108010020764 Transposases Proteins 0.000 claims 5
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 claims 5
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 claims 5
- 230000006798 recombination Effects 0.000 claims 5
- 238000005215 recombination Methods 0.000 claims 5
- 108010058546 Cyclin D1 Proteins 0.000 claims 4
- 102100024165 G1/S-specific cyclin-D1 Human genes 0.000 claims 4
- 102000001195 RAD51 Human genes 0.000 claims 4
- 108010068097 Rad51 Recombinase Proteins 0.000 claims 4
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims 4
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 claims 4
- 108091070501 miRNA Proteins 0.000 claims 4
- 239000002679 microRNA Substances 0.000 claims 4
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 claims 3
- 102100031181 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 claims 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims 3
- 108010006519 Molecular Chaperones Proteins 0.000 claims 3
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 claims 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims 3
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 claims 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 claims 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 claims 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 claims 3
- 230000009962 secretion pathway Effects 0.000 claims 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims 2
- 108091005753 BiP proteins Proteins 0.000 claims 2
- 241000699800 Cricetinae Species 0.000 claims 2
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 claims 2
- 101150112743 HSPA5 gene Proteins 0.000 claims 2
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 claims 2
- 101710089523 Signal recognition particle 14 kDa protein Proteins 0.000 claims 2
- 102100037082 Signal recognition particle 14 kDa protein Human genes 0.000 claims 2
- 101710187184 Signal recognition particle 54 kDa protein Proteins 0.000 claims 2
- 102100031877 Signal recognition particle 54 kDa protein Human genes 0.000 claims 2
- 101710150385 Signal recognition particle 54 kDa protein 1 Proteins 0.000 claims 2
- 101710150383 Signal recognition particle 54 kDa protein 2 Proteins 0.000 claims 2
- 101710150391 Signal recognition particle 54 kDa protein 3 Proteins 0.000 claims 2
- 101710128823 Signal recognition particle 54 kDa protein homolog Proteins 0.000 claims 2
- 101710131307 Signal recognition particle 9 kDa protein Proteins 0.000 claims 2
- 102100022055 Signal recognition particle 9 kDa protein Human genes 0.000 claims 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims 2
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims 2
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 claims 2
- 230000020978 protein processing Effects 0.000 claims 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims 2
- 108020005544 Antisense RNA Proteins 0.000 claims 1
- 108700020463 BRCA1 Proteins 0.000 claims 1
- 102000036365 BRCA1 Human genes 0.000 claims 1
- 102100025401 Breast cancer type 1 susceptibility protein Human genes 0.000 claims 1
- 102100025399 Breast cancer type 2 susceptibility protein Human genes 0.000 claims 1
- 102100025064 Cellular tumor antigen p53 Human genes 0.000 claims 1
- 101710150820 Cellular tumor antigen p53 Proteins 0.000 claims 1
- 102000003910 Cyclin D Human genes 0.000 claims 1
- 108090000259 Cyclin D Proteins 0.000 claims 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims 1
- 102100029995 DNA ligase 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101710148291 DNA ligase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 claims 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 claims 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 claims 1
- 102100027421 Heat shock cognate 71 kDa protein Human genes 0.000 claims 1
- 101000894649 Homo sapiens Beclin-1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000934870 Homo sapiens Breast cancer type 1 susceptibility protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000934858 Homo sapiens Breast cancer type 2 susceptibility protein Proteins 0.000 claims 1
- 101000896564 Homo sapiens Glycoprotein-N-acetylgalactosamine 3-beta-galactosyltransferase 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101001080568 Homo sapiens Heat shock cognate 71 kDa protein Proteins 0.000 claims 1
- 101001048454 Homo sapiens Protein Hook homolog 1 Proteins 0.000 claims 1
- 101000904868 Homo sapiens Transcriptional regulator ATRX Proteins 0.000 claims 1
- 102000005431 Molecular Chaperones Human genes 0.000 claims 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 claims 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 claims 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 claims 1
- 101100355599 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) mus-11 gene Proteins 0.000 claims 1
- 240000007019 Oxalis corniculata Species 0.000 claims 1
- 102100023602 Protein Hook homolog 1 Human genes 0.000 claims 1
- 101150006234 RAD52 gene Proteins 0.000 claims 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims 1
- 102100023931 Transcriptional regulator ATRX Human genes 0.000 claims 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 claims 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims 1
- 239000003184 complementary RNA Substances 0.000 claims 1
- 230000001973 epigenetic effect Effects 0.000 claims 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 claims 1
- 230000006846 excision repair Effects 0.000 claims 1
- 230000013595 glycosylation Effects 0.000 claims 1
- 238000006206 glycosylation reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims 1
- 102000055800 human BECN1 Human genes 0.000 claims 1
- 102000056308 human C1GALT1 Human genes 0.000 claims 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 claims 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 claims 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 claims 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 claims 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 claims 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000004481 post-translational protein modification Effects 0.000 claims 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 claims 1
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
- C07K16/241—Tumor Necrosis Factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/10—Plasmid DNA
- C12N2800/106—Plasmid DNA for vertebrates
- C12N2800/107—Plasmid DNA for vertebrates for mammalian
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2800/00—Nucleic acids vectors
- C12N2800/90—Vectors containing a transposable element
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/46—Vector systems having a special element relevant for transcription elements influencing chromatin structure, e.g. scaffold/matrix attachment region, methylation free island
Claims (96)
1. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты, содержащая
(a) 5'- и 3'-транспозон-специфичный инвертированный концевой повтор (ITR),
(b) по меньшей мере одну последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок экспрессии/процессинга трансгена (ТЕР) или функциональную РНК ТЕР, расположенную между 5'- и 3'-ITR, и которая находится под контролем промотора, и
(c) возможно по меньшей мере один трансген, также расположенный между 5'- и 3'-ITR, который находится под контролем промотора трансгена, при этом указанная молекула нуклеиновой кислоты необязательно является частью вектора.
2. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 1, дополнительно содержащая по меньшей мере один эпигенетический регуляторный элемент, в особенности, по меньшей мере один элемент MAR (участок прикрепления к матриксу).
3. Рекомбинантная молекула кислоты по п. 2, отличающаяся тем, что указанный элемент MAR расположен между 5'- и 3'-ITR и что необязательно трансген, такой как ген устойчивости к антибиотику или ген, кодирующий иммуноглобулин, возможно находящийся под контролем дополнительного промотора, расположен между 5'- и 3'-ITR, например между 5'-ITR и MAR.
4. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанный белок ТЕР или указанная функциональная РНК ТЕР представляет собой белок или функциональную РНК, которая непосредственно или опосредованно участвует во встраивании последовательностей нуклеиновых кислот в геном, процессинге или трансляции продукта РНК трансгена или участвует в перемещение в ЭР, секреции, процессинге, фолдинге, транспорте ЭР-Гольджи-плазматическая мембрана, гликозилировании и/или другой посттрансляционной модификации белков, таких как продукты экспрессии трансгенов.
5. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанный белок ТЕР представляет собой белок пути секреции белка, белок пути рекомбинации, белок процессинга белка или метаболический белок, включая шапероны, такие как BiP, или белок из комбинации перечисленных путей.
6. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 5, отличающаяся тем, что указанный белок ТЕР представляет собой один или более из следующих белков пути секреции белка: hSRP14, hSec61α1, hSec61β, hSec61γ, hSRP54, hSRP9, hSRPRα, hSRPβ и hCANX, или белок ТЕР соответствует одной или более из следующих последовательностей аминокислот белков пути секреции белка: hSRP14 с последовательностью SEQ ID NO: 13, hSec61α1 с последовательностью SEQ ID NO: 15, hSec61β с последовательностью SEQ ID NO: 17, hSec61γ с последовательностью SEQ ID NO: 19, hSRP54 с последовательностью SEQ ID NO: 21, hSRP9 с последовательностью SEQ ID NO: 23, hSRPRα с последовательностью SEQ ID NO: 25, hSRPβ с последовательностью SEQ ID NO: 27, и hCANX с последовательност% или 98% указанным последовательностям.
7. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанный белок ТЕР представляет собой один или более из следующих белков процессинга белка или метаболических белков: hUCP4, hCMPSAT, rST6Gal1, hCOMSC, Т-синтазу человека, hP4HA1, hP4HB, hGILZ, hCyPB, hNRF2, hHK1, hPDI, hPIN1, hSEPW1, hCALR, hDDOST, hHSP40, hATP5A1, hSERCA2, hPDIA4, hHSC70/HSPA8, hHYOU1, hCMP-SAS, беклин-1 человека, hERdj3, CHO-AGE, hWip1, hRTP4, hREEP2, hDPM1 и hDRiP78.
8. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3, отличающаяся тем, что указанный белок ТЕР представляет собой шаперон, в частности белок BiP, а конкретнее, синтетическое производное белка BiP (DroBiP), последовательность которого на 80, 90, 95 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 60.
9. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 2 или 3, отличающаяся тем, что указанный элемент MAR выбран из последовательностей SEQ ID NO: 1 (MAR 1-68), 2 (MAR 1_6), 3 (MAR X_S29), 4 (MAR S4), 5 (MAR лизоцима цыпленка), представляет собой сконструированный, в частности, перестроенный аналог и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична любой из последовательностей SEQ ID NO: с 1 по 5.
10. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3 или 6, отличающаяся тем, что указанная функциональная РНК ТЕР внутри указанной клетки включает/состоит из последовательности нуклеиновых кислот, кодирующей функциональную РНК, предпочтительно микроРНК или кшРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного белка пути рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.
11. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3 или 6, отличающаяся тем, что длина указанной молекулы нуклеиновой кислоты составляет по меньшей мере 5000, 6000, 7000, 8000, 90000 или 10000 п.о.
12. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3 или 6, отличающаяся тем, что 5'- и 3'-ITR представляют собой 5'- и 3'-ITR транспозона Спящая Красавица или предпочтительно транспозона PiggyBac.
13. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3 или 6, отличающаяся тем, что после первой трансфекции клетки млекопитающего указанной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты и второй последующей трансфекции дополнительной рекомбинантной молекулой нуклеиновой кислоты, содержащей трансген, встраивание и/или экспрессия трансгена оказывается повышенной в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой указанной первой трансфекции.
14. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по любому из пп. 1-3 или 6, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты представляет собой часть вектора.
15. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, отличающаяся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MAR, два или более элементов MAR, при этом указанный элемент(ы) расположен между 5'- и 3'-ITR.
16. Рекомбинантная нуклеиновая кислота по п. 14, отличающаяся тем, что указанный вектор содержит два элемента MAR, при этом первый элемент MAR расположен в 3'-5' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР и второй элемент MAR расположен в 5'-3' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, при этом указанный первый элемент MAR включает элемент MAR 1_6 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, в частности, перестроенные MAR на основе MAR 1-6, а конкретнее, элементы, последовательность которых по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична SEQ ID NO: 8 (MAR 1_6R2), и второй элемент MAR включает элемент MAR 1-68 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.
17. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, отличающаяся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MAR, при этом указанный единичный элемент MAR расположен в 5'-3' направлении от ТЕР или функциональной РНК ТЕР, и при этом единичный элемент MAR представляет собой MAR 1-68, или элемент MAR Х-29, и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, перестроенный MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или 9, и предпочтительно представляет собой элемент MAR Х-29 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3.
18. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, отличающаяся тем, что указанный ТЕР или функциональная РНК ТЕР находится под контролем промотора EF1-альфа, и за ним возможно следует поли(А) сигнал BGH.
19. Рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты по п. 14, отличающаяся тем, что указанный вектор содержит промотор(ы) и/или энхансер(ы) или продукты их слияния, такие как GAPDH, CGAPDH, SV40p, CMVp, СНО EF1-альфа, СНО Actb и/или СНО Hspa5.
20. Способ экспрессии ТЕР или функциональной РНК ТЕР, включающий
обеспечение рекомбинантной клетки млекопитающего, содержащей трансген, и где указанный вектор представляет собой вектор согласно по любому из пп. 14-19, который экспрессирует ТЕР или функциональную РНК ТЕР, при этом ТЕР или функциональная РНК ТЕР, экспрессируемая с помощью указанного вектора, возможно повышает экспрессию трансгена в указанной клетке млекопитающего на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.
21. Способ по п. 20, отличающийся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MAR Х-29 и/или последовательность нуклеиновой кислоты, которая по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, и тем, что через более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель культивирования ТЕР или функциональная РНК ТЕР, экспрессируемая с указанного вектора, повышает экспрессию интересующего гена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.
22. Рекомбинантная клетка млекопитающего, содержащая не более чем 20, 15, 10 или 5 рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот по пп. 1-14, предпочтительно встроенных в геном указанной клетки в виде единичных копий.
23. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 22, отличающаяся тем, что указанная последовательность(и) нуклеиновой кислоты, кодирующая белок ТЕР внутри указанной клетки, включает(ют)/состоит(ят) из последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, по пп. 6, 7 и/или 8.
24. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 23, отличающаяся тем, что указанная последовательность(и) нуклеиновой кислоты, кодирующая функциональную РНК ТЕР внутри указанной клетки, включает(ют)/состоит(ят) из последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональную РНК, предпочтительно микроРНК или кшРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного белка рекомбинации, предпочтительно, гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.
25. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 22-24, отличающаяся тем, что указанная клетка представляет собой первичную стволовую клетку, клетку хомячка, например, СНО (клетку яичника китайского хомячка), или клетку человека, например клетку HEK293.
26. Рекомбинантная клетка млекопитающего, содержащая: а) по меньшей мере одну функциональную РНК ТЕР и/или по меньшей мере одну рекомбинантную последовательность нуклеиновой кислоты, кодирующую белок ТЕР или кодирующую функциональную РНК ТЕР,
и
б) рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую:
(i) по меньшей мере один интересующий трансген, и
(ii) необязательно элемент MAR.
27. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 26, отличающаяся тем, что указанный белок ТЕР представляет собой по меньшей мере один ТЕР по пп. 6, 7 или 8.
28. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 26 или 27, отличающаяся тем, что указанная функциональная РНК представляет собой временно трансфицированную миРНК или кшРНК, которая транскрибируется с указанной по меньшей мере одной изолированной последовательности нуклеиновой кислоты, при этом указанная миРНК или указанная процессированная кшРНК представляет собой антисмысловую РНК длиной 20, 21, 22, 23, 24 или 25 пар оснований, которая полностью комплементарна 20, 21, 22, 23, 24 или 25 последовательным нуклеотидам мРНК по меньшей мере одного целевого гена, который является частью рекомбинантного пути НГСК (негомологичного соединения концов), ГР (гомологичной рекомбинации), ОМСК (опосредованного микрогомологией соединения концов) или представляет собой белок репарации ДНК, такой как MDC1 (медиатор контрольных точек повреждения ДНК 1).
29. Рекомбинантная клетка млекопитающего по п. 28, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один целевой ген, который является частью:
- НГСК, представляет собой 53ВР1 (белок 1, связывающий опухолевый супрессор р53),
- ГР, представляет собой
Rad51 (белок репарации ДНК RAD51), Rad51B (гомолог 2 белка репарации ДНК RAD51), Rad51C (гомолог 3 белка репарации ДНК RAD51),
Rad51D (гомолог 4 белка репарации ДНК RAD51), Rad52 (белок репарации ДНК RAD52), Rad54 (белок репарации и рекомбинации ДНК RAD54),
Xrcc2 (репарация после облучения рентгеновскими лучами, комплементирующая нарушенную репарацию в клетках китайского хомячка 2),
Xrcc3 (репарация после облучения рентгеновскими лучами, комплементирующая нарушенную репарацию в клетках китайского хомячка 3),
Brca1 (рак молочной железы 1, раннее начало),
Brca2 (рак молочной железы 2, раннее начало),
Bard1 (связанный с BRCA1 домен RING 1),
- ОМСК, представляет собой
Ercc1 (эксцизионная репарация, кросс-комплементирующая нарушенную репарацию у грызунов, группа комплементации 1),
Mre11 (мейотическая рекомбинация 11)
лигазу 1 (ДНК-лигаза 1),
и/или
представляет собой белок репарации ДНК MDC1.
30. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 26, 27 или 29, отличающаяся тем, что указанный по меньшей мере один трансген экспрессирует терапевтический белок, такой как иммуноглобулин, гормон, такой как эритропоэтин, или фактор роста, и при этом необязательно встраивание и/или экспрессия трансгена повышена в рекомбинантной клетке млекопитающего по сравнению с клеткой, не содержащей указанную рекомбинантную молекулу(ы) нуклеиновой кислоты.
31. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 26, 27 или 29, отличающаяся тем, что указанная клетка содержит по меньшей мере две функциональные РНК ТЕР, при этом одна или обе РНК ТЕР представляют собой временно трансфицированные миРНК, или экспрессируются с указанной изолированной последовательности(ей) нуклеиновой кислоты, кодирующей функциональную РНК ТЕР.
32. Рекомбинантная клетка млекопитающего по любому из пп. 26, 27 или 29, отличающаяся тем, что указанная рекомбинантная клетка млекопитающего сдержит элемент MAR.
33. Способ трансфекции клеток млекопитающих, в частности, клеток хомячка, включающий:
трансфекцию, возможно при первой трансфекции, указанных клеток млекопитающих
(i) по меньшей мере одной, по меньшей мере двумя, по меньшей мере тремя или по меньшей мере четырьмя из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот по любому из пп. 1-13 и/или
(ii) по меньшей мере одной, по меньшей мере двумя, по меньшей мере тремя или по меньшей мере четырьмя изолированными функциональными РНК ТЕР и по меньшей мере одним трансгеном, который необязательно является частью рекомбинантной молекулы нуклеиновой кислоты, которой возможно трансфицируют при второй, последующей трансфекции, возможно вместе с изолированной нуклеиновой кислотой или мРНК, экспрессирующей транспозазу, которая распознает указанные 5'- и 3'-ITR.
34. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанную клетку трансфицируют более чем одной рекомбинантной молекулой нуклеиновых кислот, включая по меньшей мере две, по меньшей мере три или по меньшей мере четыре из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот, кодирующих один, два или три из белков ТЕР, приведенных в п. 6.
35. Способ по пп. 33 или 34, отличающийся тем, что каждая из указанных молекул нуклеиновых кислот является частью вектора, и тем, что осуществляют котрансфекцию указанными векторами.
36. Способ по п. 35, отличающийся тем, что указанная котрансфекция, предпочтительно котрансфекция рекомбинантными молекулами нуклеиновых кислот, кодирующими белки SRP14, SRP9 и SRP54, повышает встраивание и/или экспрессию трансгена в указанной клетке по сравнению с клеткой, не подвергнутой такой котрансфекции.
37. Способ по п. 33, отличающийся тем, что множество указанных клеток млекопитающих, которые стабильно экспрессируют указанный белок ТЕР или функциональную РНК ТЕР, получают, чтобы получить рекомбинантные клетки млекопитающих, и при этом указанное множество рекомбинантных клеток млекопитающих не зависит от присутствия указанного элемента MAR.
38. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанные клетки млекопитающих трансфицируют второй раз.
39. Способ по п. 33, отличающийся тем, что по меньшей мере 30%, 40% или 45% указанных клеток млекопитающих становятся рекомбинантными клетками млекопитающих и экспрессируют указанный трансген.
40. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанная клетка млекопитающего трансфицирована указанной по меньшей мере одной изолированной функциональной РНК ТЕР и вектором, содержащим указанный по меньшей мере один трансген и необязательно 3'-ITR и 5'-ITR, фланкирующие указанный по меньшей мере один трансген, возможно вместе с изолированной нуклеиновой кислотой или мРНК, экспрессирующей транспозазу, которая распознает указанные 5'- и 3'-ITR.
41. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанный трансген представляет собой терапевтический белок, такой как иммуноглобулин, гормон, цитокин или фактор роста.
42. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанная рекомбинантная молекула нуклеиновой кислоты необязательно содержит маркер отбора и что указанный по меньшей мере один трансген экспрессируется
(a) без отбора по указанному маркеру, или
(b) с отбором по указанному маркеру, например, путем добавления селекционного агента в культуральную среду, и
(c) в отсутствие транспозазы, или
(d) в присутствии транспозазы.
43. Способ по п. 33, отличающийся тем, что указанная функциональная РНК ТЕР кодируется рекомбинантной последовательностью нуклеиновых кислот, кодирующей кшРНК, или включает/состоит из миРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.
44. Способ по п. 33, отличающийся тем, что встраивание и/или экспрессия трансгена повышена в такой клетке по сравнению с клеткой, не трансфицированной указанными изолированными молекулами нуклеиновых кислот и/или по меньшей мере одной из указанных изолированных функциональных РНК ТЕР.
45. Набор, в одном контейнере содержащий по меньшей мере один вектор, содержащий любую из указанных рекомбинантных молекул нуклеиновых кислот согласно пп. 1-13, и во втором необязательном контейнере содержащий вектор, кодирующий подходящую транспозазу, и в дополнительном контейнере содержащий инструкцию по применению указанного вектора или векторов.
46. Набор по п. 45, отличающийся тем, что более чем один вектор предусмотрен в одном или более контейнерах, и что указанные белки ТЕР представляют собой по меньшей мере два из следующих белков: шаперон, SRP14, SRP9 или SRP54.
47. Набор по п. 45, отличающийся тем, что указанная функциональная(ные) РНК ТЕР внутри указанного вектора(ов) включает(ют)/состоит(ят) из последовательностей нуклеиновых кислот, кодирующих микроРНК, миРНК или кшРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2 циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1, и необязательно в дополнительном контейнере молекулу(ы) миРНК, которая препятствует экспрессии по меньшей мере одного гена гомологичной рекомбинации, такого как, но не ограничиваясь перечисленными: Rad51, Rad51B, Rad51C, Rad51D, Xrcc2, Xrcc3, Rad52, Rad54, Brca1, Brca2, циклин D1, Ercc1, MDC1, Bard1, лигаза 1, Mre11 и/или 53BP1.
48. Применение рекомбинантных нуклеиновых кислот по пп. 1-13 и/или рекомбинантных клеток млекопитающих по пп. 22-31 предпочтительно для повышения встраивания и/или экспрессии трансгена.
49. Вектор экспрессии, содержащий
(a) трансген, который фланкирован в 3'-5' направлении промотором и в 5'-3' направлении сигналом полиаденилирования,
(b) единичный элемент MAR в 5-3' направлении от сигнала полиаденилирования, или
(c) первый элемент MAR в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от места встраивания указанного трансгена.
50. Вектор экспрессии по п. 49, отличающийся тем, что указанный единичный или первый и второй элементы MAR выбраны из элементов MAR 1_68, 1_6, 1_6R2, 1_68R, 1_68R2, X_29R3, или X_29 или элементов, последовательности которых по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 1, 2, 3, 6, 7, 8, 9 или 10.
51. Вектор экспрессии по п. 49, отличающийся тем, что указанный единичный элемент или первый и второй элементы MAR выбран/выбраны из перестроенных элементов MAR 1_6R2, 1_68R, 1_68R2 или X_29R3 или элементов, последовательности которых по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичны последовательностям SEQ ID NO: 6, 7, 8 или 10, при этом необязательно указанный элемент(ы) MAR повышает экспрессию интересующего трансгена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70% по сравнению с их неперестроенными аналогами.
52. Вектор экспрессии по пп. 49-51, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой промотор EF1-альфа и указанный сигнал полиаденилирования представляет собой поли(А) сигнал BGH.
53. Вектор экспрессии по пп. 49-51, отличающийся тем, что указанный вектор содержит промотор(ы), и/или энхансер(ы), или продукты их слияния, такие как GAPDH, CGAPDH, CSV40p, CMVp, СНО Ef1-альфа, СНО Actb или СНО Hspa5.
54. Вектор экспрессии по п. 53, отличающийся тем, что указанный промотор представляет собой промотор GAPDH и содержит энхансер CMV.
55. Вектор экспрессии по пп. 49-51 или п. 54, отличающийся тем, что указанный один или первый и второй MAR, энхансер, промотор, интересующий трансген и сигнал полиаденилирования расположены между 5'- и 3'-ITR.
56. Вектор экспрессии согласно пп. 49-51 или 54, содержащий
(a) единичный элемент MAR в 5-3' направлении от сигнала полиаденилирования, при этом указанный единичный элемент MAR предпочтительно представляет собой элемент MAR 1-68 или MARX-29 и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, перестроенный MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательностям SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или SEQ ID NO: 9, и предпочтительно представляет собой элемент MAR Х-29, и/или его последовательность по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, или
(b) первый элемент MAR в 3'-5' направлении от интересующего трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от указанного интересующего трансгена при этом указанный первый элемент MAR, предпочтительно включает элемент 1_6, и/или его последовательность по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 2, в частности, идентична перестроенным MAR на основе MAR 1-6, в частности элементам, последовательности которых по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентичны последовательности SEQ ID NO: 8 (MAR 1_6R2), и второй элемент MAR, который предпочтительно включает элемент MAR 1-68, и/или последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.
57. Вектор экспрессии согласно п. 56, содержащий единичный элемент MAR, отличающийся тем, что указанный единичный элемент MAR расположен в 5'-3' направлении от сайта полиаденилирования и представляет собой MAR 1-68 или MAR Х-29, и/или его последовательность по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1 или 3, в частности, идентична перестроенным MAR на основе MAR 1-68 или MAR Х-29, в частности, элементам, последовательность которых по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательностям SEQ ID NO: 6, 7 или 10 (элементы MAR 1_68R, 1_68R2 или X_29R3) или 9, и предпочтительно представляет собой элемент, полученый из MAR Х-29, и/или элемент, последовательность которого по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3.
58. Вектор экспрессии согласно п. 56, содержащий первый элемент MAR в 3'-5' направлении от трансгена и второй элемент MAR в 5'-3' направлении от указанного интересующего трансгена, отличающийся тем, что указанный первый элемент MAR включает элемент MAR 1_6, и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO 2, и указанный второй элемент MAR включает элемент MAR 1_68 и/или его последовательность по меньшей мере на 80%, 90%, 95%, 98%, 99% или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 1.
59. Способ экспрессии трансгена, включающий
обеспечение рекомбинантной клетки млекопитающего, содержащей один из векторов по пп. 49-58, содержащих указанный трансген и экспрессирующих указанный трансген, при этом указанный элемент(ы) MAR повышает экспрессию указанного трансгена предпочтительно на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.
60. Способ по п. 59, отличающийся тем, что указанный вектор содержит единичный элемент MAR Х_29 и/или нуклеиновую кислоту, последовательность которой по меньшей мере на 80, 90, 95, 98, 99 или 100% идентична последовательности SEQ ID NO: 3, и что через более чем 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 или 14 недель культивирования указанный элемент MAR повышает экспрессию интересующего трансгена на по меньшей мере 10%, по меньшей мере 20%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 40%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 60% или по меньшей мере 70%.
Applications Claiming Priority (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361759802P | 2013-02-01 | 2013-02-01 | |
| US61/759,802 | 2013-02-01 | ||
| US201361800244P | 2013-03-15 | 2013-03-15 | |
| US61/800,244 | 2013-03-15 | ||
| US201361806634P | 2013-03-29 | 2013-03-29 | |
| US61/806,634 | 2013-03-29 | ||
| PCT/IB2014/000100 WO2014118619A2 (en) | 2013-02-01 | 2014-02-01 | Enhanced transgene expression and processing |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019139048A Division RU2808756C1 (ru) | 2013-02-01 | 2014-02-01 | Улучшенные экспрессия и процессинг трансгена |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015127667A true RU2015127667A (ru) | 2017-03-06 |
| RU2711505C2 RU2711505C2 (ru) | 2020-01-17 |
| RU2711505C9 RU2711505C9 (ru) | 2020-08-12 |
Family
ID=50239688
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015127667A RU2711505C9 (ru) | 2013-02-01 | 2014-02-01 | Улучшенные экспрессия и процессинг трансгена |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11898154B2 (ru) |
| EP (2) | EP2951309B1 (ru) |
| JP (1) | JP6563816B2 (ru) |
| KR (1) | KR102235603B1 (ru) |
| CN (1) | CN105073995A (ru) |
| AU (2) | AU2014210856B2 (ru) |
| CA (1) | CA2898878C (ru) |
| DK (2) | DK2951309T3 (ru) |
| ES (2) | ES2717175T3 (ru) |
| FI (1) | FI3536797T3 (ru) |
| HK (1) | HK1216323A1 (ru) |
| HU (2) | HUE061494T2 (ru) |
| IL (1) | IL240198B (ru) |
| LT (1) | LT2951309T (ru) |
| PL (2) | PL2951309T3 (ru) |
| PT (2) | PT3536797T (ru) |
| RU (1) | RU2711505C9 (ru) |
| SG (2) | SG10201803758XA (ru) |
| SI (1) | SI2951309T1 (ru) |
| WO (1) | WO2014118619A2 (ru) |
| ZA (1) | ZA201506419B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2686102C1 (ru) * | 2018-08-07 | 2019-04-24 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Рекомбинантный вектор для создания плазмидных генетических конструкций, обладающих повышенной длительностью экспрессии целевых генов |
Families Citing this family (39)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109576265B (zh) * | 2014-04-01 | 2020-08-28 | 三生国健药业（上海）股份有限公司 | 一种含mar核心片段的动物细胞表达载体 |
| CN105154473B (zh) * | 2015-09-30 | 2019-03-01 | 上海细胞治疗研究院 | 一种高效安全的转座子整合系统及其用途 |
| JP6871679B2 (ja) * | 2016-03-23 | 2021-05-12 | 国立大学法人 岡山大学 | 遺伝子発現用カセット及びその産生物 |
| JP2017070224A (ja) * | 2015-10-06 | 2017-04-13 | 国立大学法人 岡山大学 | 遺伝子発現用カセット及びその産生物 |
| US20180265894A1 (en) * | 2015-10-06 | 2018-09-20 | National University Corporation Okayama University | Gene Expression Cassette And Product Thereof |
| CA3003538A1 (en) | 2015-12-24 | 2017-06-29 | Selexis S.A. | Improved eukaryotic cells for protein manufacturing and methods of making them |
| ITUA20161610A1 (it) * | 2016-03-14 | 2017-09-14 | Angela Anna Messina | Composto peptidico farmacologicamente attivo, procedimento per la sua preparazione e suo uso. |
| EP3219800A1 (en) * | 2016-03-15 | 2017-09-20 | Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin | A transposon-based transfection system for primary cells |
| EP3219803A1 (en) * | 2016-03-15 | 2017-09-20 | Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin | Enhanced sleeping beauty transposons, kits and methods of transposition |
| CA3023038C (en) * | 2016-05-03 | 2023-03-14 | Lonza Ltd | Modulation of lipid metabolism for protein production |
| JP7382138B2 (ja) * | 2016-10-03 | 2023-11-16 | 第一三共株式会社 | Ｈｓｐａ５遺伝子のプロモーター |
| CA3047313A1 (en) | 2016-12-16 | 2018-06-21 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | Enhanced hat family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods |
| US11278570B2 (en) | 2016-12-16 | 2022-03-22 | B-Mogen Biotechnologies, Inc. | Enhanced hAT family transposon-mediated gene transfer and associated compositions, systems, and methods |
| WO2018224162A1 (en) * | 2017-06-09 | 2018-12-13 | Biontech Rna Pharmaceuticals Gmbh | Methods for characterizing loss of antigen presentation |
| US20200239862A1 (en) * | 2017-09-29 | 2020-07-30 | Bethphagen Inc. | Pharmaceutical composition for prevention or treatment of heart failure |
| CN109929839B (zh) * | 2017-12-18 | 2021-02-12 | 华东师范大学 | 拆分型单碱基基因编辑系统及其应用 |
| CN108504692B (zh) * | 2018-03-26 | 2021-07-23 | 安徽大学 | 一种基因敲除cho细胞株的构建方法及其在治疗性重组蛋白表达中的应用 |
| EP3794128A1 (en) * | 2018-05-18 | 2021-03-24 | Sorbonne Universite | Molecular tools and methods for transgene integration and their transposition dependent expression |
| JP2021527427A (ja) | 2018-06-21 | 2021-10-14 | ビー−モーゲン・バイオテクノロジーズ，インコーポレーテッド | 強化されたｈＡＴファミリーのトランスポゾンが介在する遺伝子導入ならびに関連する組成物、システム、及び方法 |
| JP2021534807A (ja) * | 2018-09-05 | 2021-12-16 | マックス−デルブリュック−ツェントルム フューア モレキュラーレ メディツィン イン デア ヘルムホルツ−ゲマインシャフト | 合成シス調節ｄｎａを操作する方法 |
| WO2020081537A1 (en) * | 2018-10-16 | 2020-04-23 | Texas Tech University System | Method to express, purify, and biotinylate eukaryotic cell-derived major histocompatibility complexes |
| EP3870708A1 (en) | 2018-10-24 | 2021-09-01 | Selexis S.A. | Expression systems, recombinant cells and uses thereof |
| WO2020136149A1 (en) * | 2018-12-24 | 2020-07-02 | Selexis Sa | Characterization and inactivation of endogenous retroviruses in chinese hamster ovary cells |
| WO2020152532A1 (en) | 2019-01-23 | 2020-07-30 | Enzyvant Therapeutics Gmbh | Method of ameliorating a pro-inflammatory immunophenotype in farber disease subjects by repeated administration of a recombinant human acid ceramidase |
| IT201900002321A1 (it) * | 2019-02-18 | 2020-08-18 | Univ Degli Studi Padova | Peptidi con attivita' antitumorale |
| US20220177546A1 (en) * | 2019-03-27 | 2022-06-09 | Phoenix Tissue Repair, Inc. | Systems and methods for producing collagen 7 compositions |
| CN110006866B (zh) * | 2019-04-16 | 2022-04-22 | 杭州迈尔德生物科技有限公司 | 一种阿片类活性物质的通用检测方法及其检测试剂盒 |
| WO2020228721A1 (en) * | 2019-05-13 | 2020-11-19 | Lin Mei Chun | Method and kit for monitoring cancer |
| CA3154452A1 (en) * | 2019-10-10 | 2021-04-15 | The Regents Of The University Of California | Methods to stabilize mammalian cells |
| IL270306A (en) | 2019-10-30 | 2021-05-31 | Yeda Res & Dev | Prevention and treatment of pre-myeloid and myeloid malignancies |
| CN110863008B (zh) * | 2019-11-22 | 2020-10-16 | 昆明学院 | Mar序列调控弱启动子构建高效表达载体的方法 |
| CN115151558A (zh) | 2019-12-24 | 2022-10-04 | 思兰克斯有限公司 | 哺乳动物序列中的靶向整合增强基因表达 |
| EP4107272A2 (en) * | 2020-02-19 | 2022-12-28 | Wuxi Biologics Ireland Limited | Enhanced expression system and methods of use thereof |
| CN111500629B (zh) * | 2020-04-17 | 2021-11-19 | 安徽中盛溯源生物科技有限公司 | 一种高表达层粘连蛋白-511变体的方法及其应用 |
| EP4149966A1 (en) * | 2020-05-14 | 2023-03-22 | Seattle Children's Hospital (DBA Seattle Children's Research Institute) | Dual promoter systems |
| US20220010332A1 (en) * | 2020-07-08 | 2022-01-13 | Neuracle Genetics Inc. | Intron fragments |
| CN113881703B (zh) * | 2021-10-11 | 2022-06-21 | 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 | 一种提高cho细胞同源重组效率的方法及其相关产品和应用 |
| CN116440269B (zh) * | 2022-01-10 | 2024-02-09 | 华中农业大学 | Slc35a1基因作为靶点在防治猪流行性腹泻病中的应用 |
| CN114958914B (zh) * | 2022-06-06 | 2023-09-26 | 新乡医学院 | 一种人类及哺乳动物细胞附着体表达载体、构建方法和应用 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5731178A (en) | 1990-03-21 | 1998-03-24 | Behringwerke Aktiengesellschaft | Attachment-elements for stimulation of eukaryotic expression systems |
| JP3656277B2 (ja) * | 1995-05-17 | 2005-06-08 | 味の素株式会社 | 組換えｄｎａ法によるトランスグルタミナーゼの効率的製造法 |
| CA2435972C (en) | 2001-01-26 | 2011-09-13 | University Of Lausanne | Matrix attachment regions and methods for use thereof |
| US20040235011A1 (en) * | 2002-06-26 | 2004-11-25 | Cooper Richard K. | Production of multimeric proteins |
| US20040203158A1 (en) * | 2003-01-15 | 2004-10-14 | Hackett Perry B. | Transposon-insulator element delivery systems |
| US7244616B2 (en) * | 2003-06-27 | 2007-07-17 | Bayer Pharmaceuticals Corporation | Use of molecular chaperones for the enhanced production of secreted, recombinant proteins in mammalian cells |
| IN2014DN02483A (ru) | 2003-10-24 | 2015-05-15 | Selexis Sa | |
| ES2292271B1 (es) * | 2004-05-20 | 2009-02-16 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Un vector hibrido adenovirus-alfavirus para la administracion eficaz y expresion de genes terapeuticos en celulas tumorales. |
| JP2008543283A (ja) | 2005-06-10 | 2008-12-04 | ジェネンテック・インコーポレーテッド | インスレーターエレメントを含むベクターを使用する抗体発現の改良 |
| KR101541935B1 (ko) | 2007-09-26 | 2015-08-05 | 인트렉손 코포레이션 | 합성 5'ｕｔｒ, 발현 벡터, 및 전이유전자 발현의 증가방법 |
| US20090247609A1 (en) | 2007-12-20 | 2009-10-01 | Hitto Kaufmann | Sm-protein based secretion engineering |
| WO2010008564A2 (en) * | 2008-07-16 | 2010-01-21 | Recombinetics | Plaice dna transposon system |
| WO2010118360A1 (en) * | 2009-04-09 | 2010-10-14 | The Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Production of proteins using transposon-based vectors |
| CA2774470A1 (en) | 2009-09-18 | 2011-03-24 | Selexis S.A. | Products and methods for enhanced transgene expression and processing |
-
2014
- 2014-02-01 ES ES14708935T patent/ES2717175T3/es active Active
- 2014-02-01 HU HUE19153376A patent/HUE061494T2/hu unknown
- 2014-02-01 ES ES19153376T patent/ES2940433T3/es active Active
- 2014-02-01 EP EP14708935.3A patent/EP2951309B1/en active Active
- 2014-02-01 DK DK14708935.3T patent/DK2951309T3/en active
- 2014-02-01 LT LTEP14708935.3T patent/LT2951309T/lt unknown
- 2014-02-01 RU RU2015127667A patent/RU2711505C9/ru active
- 2014-02-01 US US14/761,460 patent/US11898154B2/en active Active
- 2014-02-01 HU HUE14708935A patent/HUE043103T2/hu unknown
- 2014-02-01 AU AU2014210856A patent/AU2014210856B2/en active Active
- 2014-02-01 FI FIEP19153376.9T patent/FI3536797T3/fi active
- 2014-02-01 PL PL14708935T patent/PL2951309T3/pl unknown
- 2014-02-01 SG SG10201803758XA patent/SG10201803758XA/en unknown
- 2014-02-01 DK DK19153376.9T patent/DK3536797T3/da active
- 2014-02-01 CA CA2898878A patent/CA2898878C/en active Active
- 2014-02-01 PL PL19153376.9T patent/PL3536797T3/pl unknown
- 2014-02-01 WO PCT/IB2014/000100 patent/WO2014118619A2/en active Application Filing
- 2014-02-01 EP EP19153376.9A patent/EP3536797B1/en active Active
- 2014-02-01 PT PT191533769T patent/PT3536797T/pt unknown
- 2014-02-01 SG SG11201505487UA patent/SG11201505487UA/en unknown
- 2014-02-01 JP JP2015555816A patent/JP6563816B2/ja active Active
- 2014-02-01 SI SI201431115T patent/SI2951309T1/sl unknown
- 2014-02-01 KR KR1020157022393A patent/KR102235603B1/ko active IP Right Grant
- 2014-02-01 PT PT14708935T patent/PT2951309T/pt unknown
- 2014-02-01 CN CN201480010305.9A patent/CN105073995A/zh active Pending
-
2015
- 2015-07-28 IL IL24019815A patent/IL240198B/en active IP Right Grant
- 2015-09-01 ZA ZA2015/06419A patent/ZA201506419B/en unknown
-
2016
- 2016-04-14 HK HK16104299.2A patent/HK1216323A1/zh unknown
-
2019
- 2019-10-18 AU AU2019250224A patent/AU2019250224B2/en active Active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2686102C1 (ru) * | 2018-08-07 | 2019-04-24 | Федеральное Государственное Бюджетное Учреждение Науки Институт Молекулярной Биологии Им. В.А. Энгельгардта Российской Академии Наук (Имб Ран) | Рекомбинантный вектор для создания плазмидных генетических конструкций, обладающих повышенной длительностью экспрессии целевых генов |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2015127667A (ru) | Улучшенные экспрессия и процессинг трансгена | |
| AU2017268458B2 (en) | Methods for breaking immunological tolerance using multiple guide RNAS | |
| JP2022184901A (ja) | モジュラーＡＡＶ送達システムによるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓゲノム編集 | |
| JP2016504922A5 (ru) | ||
| JP2020534812A (ja) | 改良された相同組換えおよびその組成物のための方法 | |
| JP6956416B2 (ja) | トランスポゾン系、それを含むキット及びそれらの使用 | |
| ES2870907T3 (es) | Sistema de transposón, kit que lo comprende y sus usos | |
| EP3219803A1 (en) | Enhanced sleeping beauty transposons, kits and methods of transposition | |
| Ahmadi et al. | Evaluating the efficiency of phiC31 integrase‐mediated monoclonal antibody expression in CHO cells | |
| US20230102342A1 (en) | Non-human animals comprising a humanized ttr locus comprising a v30m mutation and methods of use | |
| CN116867901A (zh) | 功能性核酸分子和方法 | |
| WO2012147370A1 (ja) | ターミネータ配列を含む高発現用リバースプライマー及びリニアｄｎａ | |
| WO2004022741A1 (ja) | 哺乳類人工染色体 | |
| Kent et al. | In vivo nanovector delivery of a heart-specific microRNA-sponge | |
| Zhou et al. | Site-specific transfer of an intact β-globin gene cluster through a new targeting vector | |
| US20170096679A1 (en) | Eukaryotic expression vectors resistant to transgene silencing | |
| Cox et al. | Genetic and Epigenetic Strategies for Promoting Hair Cell Regeneration in the Mature Mammalian Inner Ear | |
| US20230081547A1 (en) | Non-human animals comprising a humanized klkb1 locus and methods of use | |
| EP4141119A2 (en) | Hairpin loop ended self-complementary double-stranded covalently closed linear dna vector, manufacturing system and process, and uses of said resulting dna vector | |
| JP2024056895A (ja) | モジュラーＡＡＶ送達システムによるＣＲＩＳＰＲ－Ｃａｓゲノム編集 | |
| WO2023212677A2 (en) | Identification of tissue-specific extragenic safe harbors for gene therapy approaches | |
| Chia et al. | Current RNA strategies in Treating Cardiovascular Diseases | |
| WO2024040202A1 (en) | Fusion proteins and uses thereof for precision editing | |
| Kitani et al. | Efficient In Vivo Delivery of Plasmids and Oligonucleotides Using Hemagglutinating Virus of Japan Envelope (HVJ‐E) Vector in Immunological Disease Models | |
| JP6273753B2 (ja) | 変異ｒｎａ発現用線状二本鎖ｄｎａ |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| TH4A | Reissue of patent specification |