RU2014113678A - Способ получения fab фрагментов из единичных клеток, продуцирующих антитела, путем мультиплексной пцр в комбинации с taqman зондами - Google Patents

Способ получения fab фрагментов из единичных клеток, продуцирующих антитела, путем мультиплексной пцр в комбинации с taqman зондами Download PDF

Info

Publication number
RU2014113678A
RU2014113678A RU2014113678/10A RU2014113678A RU2014113678A RU 2014113678 A RU2014113678 A RU 2014113678A RU 2014113678/10 A RU2014113678/10 A RU 2014113678/10A RU 2014113678 A RU2014113678 A RU 2014113678A RU 2014113678 A RU2014113678 A RU 2014113678A
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
immunoglobulin
primer
seq
complementary
nucleotide sequence
Prior art date
Application number
RU2014113678/10A
Other languages
English (en)
Inventor
Ханс-Вилли КРЕЛЛЬ
Александер ЛИФКЕ
Валериа ЛИФКЕ
Кайрат МАДИН
Кристиан ВАЙЛЬКЕ
Original Assignee
Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг filed Critical Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг
Publication of RU2014113678A publication Critical patent/RU2014113678A/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/6851—Quantitative amplification
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/005—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies constructed by phage libraries
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

1. Способ амплификации и количественного определения полученных из единичной клетки нуклеиновых кислот, кодирующих родственные IgG тяжелые и легкие цепи, включающий следующий этап:- выполнение обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в одну стадию с использованием первого и второго 5'-праймера, первого и второго 3'-праймера, а также первого и второго TaqMan зонда.2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что:а) первый 5'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей лидерный пептид тяжелой цепи или первую каркасную область тяжелой цепи, и/илиб) второй 5'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей лидерный пептид легкой цепи или первую каркасную область легкой цепи, и/илив) первый 3'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей С-концевые аминокислотные остатки константного домена СН1 тяжелой цепи, и/илиг) второй 3'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей С-концевые аминокислотные остатки константного домена легкой цепи, и/илид) первый TaqMan зонд комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей N-концевые аминокислотные остатки константного домена СН1 тяжелой цепи, и/илие) второй TaqMan зонд комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей N-концевые аминокислотные остатки константного домена легкой цепи.3. Способ получения моноклонального антитела, включающий следующийэтап:- трансляцию in vitro нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент иммуноглобулина, причем указанная нуклеиновая кислота получена путем специфической амплификации фрагментов кДНК, которые получены из мРНК, выделенной из одной клет

Claims (12)

1. Способ амплификации и количественного определения полученных из единичной клетки нуклеиновых кислот, кодирующих родственные IgG тяжелые и легкие цепи, включающий следующий этап:
- выполнение обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции в одну стадию с использованием первого и второго 5'-праймера, первого и второго 3'-праймера, а также первого и второго TaqMan зонда.
2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что:
а) первый 5'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей лидерный пептид тяжелой цепи или первую каркасную область тяжелой цепи, и/или
б) второй 5'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей лидерный пептид легкой цепи или первую каркасную область легкой цепи, и/или
в) первый 3'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей С-концевые аминокислотные остатки константного домена СН1 тяжелой цепи, и/или
г) второй 3'-праймер комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей С-концевые аминокислотные остатки константного домена легкой цепи, и/или
д) первый TaqMan зонд комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей N-концевые аминокислотные остатки константного домена СН1 тяжелой цепи, и/или
е) второй TaqMan зонд комплементарен нуклеотидной последовательности, кодирующей N-концевые аминокислотные остатки константного домена легкой цепи.
3. Способ получения моноклонального антитела, включающий следующий
этап:
- трансляцию in vitro нуклеиновой кислоты, кодирующей фрагмент иммуноглобулина, причем указанная нуклеиновая кислота получена путем специфической амплификации фрагментов кДНК, которые получены из мРНК, выделенной из одной клетки, продуцирующей
молекулы иммуноглобулина, при помощи способа по любому из п.п. 1 или 2.
4. Способ по п. 3, дополнительно включающий следующий этап:
- последующую транскрипцию ПЦР продукта в мРНК и трансляцию этих мРНК in vitro с использованием лизата Е. coli.
5. Способ по любому из пп. 1-4, отличающийся тем, что в праймере предусмотрены липкие концы, кодирующие трансляционный старт-кодон ATG в случае 5'-праймера и/или трансляционный стол-кодон ТТА в случае 3'-праймера.
6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что он включает дополнительный
этап:
- обеспечение единичной клетки и выделение из нее мРНК.
7. Способ получения Fab фрагмента иммуноглобулина, включающий следующие этапы:
- обеспечение единичной клетки, продуцирующей иммуноглобулин,
- выделение из этой клетки нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные домены легких и тяжелых иммуноглобулиновых цепей, а также необязательно кодирующей часть константного домена легкой цепи и часть домена Сн1 тяжелой цепи, для амплификации и количественного определения нуклеиновых кислот, кодирующих родственные IgG тяжелые и легкие цепи, с помощью мультиплексной ген-специфической полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени в одной пробирке согласно любому из пп. 1 или 2,
- производство матрицы линейной экспрессии, содержащей полученную нуклеиновую кислоту,
- трансляцию нуклеиновой кислоты in vitro и получение посредством этой трансляции Fab фрагмента иммуноглобулина.
8. Способ получения иммуноглобулина, включающий следующие этапы:
- обеспечение единичной клетки, продуцирующей иммуноглобулин,
- выделение из этой клетки нуклеиновой кислоты, кодирующей вариабельные домены легких и тяжелых иммуноглобулиновых цепей, для амплификации и количественного определения нуклеиновых кислот, кодирующих родственные IgG тяжелые и легкие цепи, с помощью мультиплексной ген-специфической полимеразной цепной реакции с обратной транскрипцией в реальном времени в одной пробирке согласно любому из пп. 1 или 2,
- функциональное связывание каждой из нуклеиновых кислот, полученных на предыдущем этапе с нуклеиновой кислотой, кодирующей аминокислотные остатки некодируемого С-концевого константного домена соответствующей легкой или тяжелой цепи иммуноглобулина,
- трансфекцию эукариотической или прокариотической клетки нуклеиновыми кислотами, полученными на предыдущем этапе, культивирование трансфицированной клетки в условиях, пригодных для экспрессии иммуноглобулина,
- выделение иммуноглобулина из клетки или культуральной среды и получение иммуноглобулина посредством этого выделения.
9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что иммуноглобулин представляет собой иммуноглобулин класса G (IgG).
10. Способ по п. 1, 3, 7 или 8, отличающийся тем, что единичная клетка представляет собой единичную В-клетку или единичный плазмабласт или единичную плазматическую клеткуI.
11. Нуклеиновая кислота, имеющая следующие нуклеотидные последовательности: SEQ ID NO:05 или SEQ ID ΝΟ:06, или SEQ ID NO:07, или SEQ ID NO:08, или SEQ ID NO:09, или SEQ ID NO:10.
12. Набор, включающий нуклеиновые кислоты со следующими нуклеотидными последовательностями: SEQ ID NO:05, SEQ ID NO:06, SEQ ID NO:07, SEQ ID NO:08, SEQ ID NO:09, и SEQ ID NO:10.
RU2014113678/10A 2011-09-21 2012-09-20 Способ получения fab фрагментов из единичных клеток, продуцирующих антитела, путем мультиплексной пцр в комбинации с taqman зондами RU2014113678A (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP11182223 2011-09-21
EP11182223.5 2011-09-21
PCT/EP2012/068532 WO2013041617A1 (en) 2011-09-21 2012-09-20 METHOD FOR OBTAINING FAB FRAGMENTS FROM SINGLE ANTIBODY PRODUCING CELLS BY MULTIPLEXED PCR IN COMBINATION WITH TaqMan PROBES

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RU2014113678A true RU2014113678A (ru) 2015-10-27

Family

ID=46852037

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2014113678/10A RU2014113678A (ru) 2011-09-21 2012-09-20 Способ получения fab фрагментов из единичных клеток, продуцирующих антитела, путем мультиплексной пцр в комбинации с taqman зондами

Country Status (11)

Country Link
US (1) US20150024434A1 (ru)
EP (1) EP2758428A1 (ru)
JP (1) JP2014527825A (ru)
KR (1) KR20140064857A (ru)
CN (1) CN103814047A (ru)
BR (1) BR112014004566A2 (ru)
CA (1) CA2844838A1 (ru)
HK (1) HK1198169A1 (ru)
MX (1) MX2014003326A (ru)
RU (1) RU2014113678A (ru)
WO (1) WO2013041617A1 (ru)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021226917A1 (en) * 2020-05-14 2021-11-18 Singleron (Nanjing) Biotechnologies, Ltd. Novel method of one-step whole transcriptome amplification

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1988007089A1 (en) 1987-03-18 1988-09-22 Medical Research Council Altered antibodies
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5478730A (en) 1988-12-21 1995-12-26 Institute Of Protein Research Method of preparing polypeptides in cell-free translation system
US5571690A (en) 1991-05-08 1996-11-05 The University Of Virginia Patents Foundation Method for the cell-free synthesis of proteins
GB9613418D0 (en) 1996-06-26 1996-08-28 Crc Technology Ltd A cell-free system for initiation of DNA replication
EP0953055A1 (en) 1997-01-21 1999-11-03 Daniel Favre Production of biologically active polypeptides
RU2148649C1 (ru) 1998-03-31 2000-05-10 Институт белка РАН Способ получения полипептидов в бесклеточной системе (варианты) и устройство для его осуществления
CA2365668C (en) 1999-03-17 2014-05-20 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University In vitro macromolecule biosynthesis methods using exogenous amino acids and a novel atp regeneration system
RU2169154C2 (ru) 1999-03-25 2001-06-20 Институт белка РАН Способ получения полипептидов в бесклеточной системе
KR20030038693A (ko) 2000-08-11 2003-05-16 파브릴, 인크. Ｂ 세포 매개 병증을 개선시키기 위한 방법 및 조성물
US20050095634A1 (en) * 2003-10-16 2005-05-05 Genomic Health Inc. qRT-PCR assay system for gene expression profiling
NZ578851A (en) 2007-03-01 2011-09-30 Symphogen As Method for cloning cognate antibodies
US9399670B2 (en) * 2009-02-20 2016-07-26 Hoffmann-La Roche Inc. Method for obtaining immunoglobulin encoding nucleic acid
EP2524053A1 (en) * 2010-01-15 2012-11-21 Steffen Mergemeier Method for detecting more than one target in a pcr-based approach applying an unspecific dye which is not interfering with the emission of fluorophore-labeled probes

Also Published As

Publication number Publication date
CN103814047A (zh) 2014-05-21
HK1198169A1 (en) 2015-03-13
WO2013041617A1 (en) 2013-03-28
CA2844838A1 (en) 2013-03-28
KR20140064857A (ko) 2014-05-28
EP2758428A1 (en) 2014-07-30
BR112014004566A2 (pt) 2017-06-13
JP2014527825A (ja) 2014-10-23
MX2014003326A (es) 2014-04-25
US20150024434A1 (en) 2015-01-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP6659888B2 (ja) Ｃｄ４０ｌ発現哺乳動物細胞およびその使用
EP3345991B1 (en) Tale transcriptional activators
RU2612910C2 (ru) Быстрый способ клонирования и экспрессии сегментов гена родственной вариабельной области антитела
WO2017096239A1 (en) Cloning and expression system for t-cell receptors
US20230323304A1 (en) Human innate lymphoid cell precursors: identification, characterization, applications
ATE481483T1 (de) Verfahren zur herstellung eines rekombinanten polyklonalen proteins
RU2014102617A (ru) Выявление аффинно-зрелых человеческих антител
Ahmadian-Elmi et al. Pour, Reza Naghavian, Kamran Ghaedi, et al.
US11834653B2 (en) Methods and compositions for identifying epitopes
CA2561702C (en) Methods for altering protein production rates
CN102325903B (zh) 得到免疫球蛋白编码核酸的方法
RU2014113678A (ru) Способ получения fab фрагментов из единичных клеток, продуцирующих антитела, путем мультиплексной пцр в комбинации с taqman зондами
CN107893085B (zh) 一种可用于孤核受体活性调节剂筛选的双荧光素酶报告基因质粒及其构建与应用
Chang et al. Laboratory production of 100 base pair DNA molecular weight markers
JPWO2006095654A1 (ja) レポータ遺伝子アッセイ法
Aebischer-Gumy et al. SPLICELECT™: an adaptable cell surface display technology based on alternative splicing allowing the qualitative and quantitative prediction of secreted product at a single-cell level
CN116710478A (zh) 冠状病毒感染性细胞及其制备方法
RU2011109883A (ru) Способ диагностики рака мочевого пузыря с помощью онкомаркера kifc1 (варианты) и набор для его осуществления
EP3218478B1 (en) Predicting productivity in early cell line development
Peltret et al. Development of a 10 g/l process for a difficult-to-express multispecific antibody format using a holistic process development approach
Al-Badran et al. Construction of Synthetic Intact Human Parathyroid Hormone Gene and Testing the Transformation Efficiency and Expression of it in E. coli strains
CN107083422B (zh) 一种初始状cd4+t细胞和/或其分化而成的调节性t细胞的特异性生物标志物
CN112961863B (zh) 猪IgA类别转换后转录本α长、短序列
KR101997329B1 (ko) 노로바이러스 복제의 증가 방법
El-Sayed et al. Gene expression analysis of selected candidate genes in camel oocytes (Camelus dromedarius) with different quality based on morphological assessment.

Legal Events

Date Code Title Description
FA92 Acknowledgement of application withdrawn (lack of supplementary materials submitted)

Effective date: 20170120